CN110951813B - 一种金枪鱼蛋白肽提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及蛋白肽提取技术领域，尤其属于一种金枪鱼蛋白肽提取方法，包括：预处理、酶解反应、提取蛋白肽、过滤和纯化。首先，采用胃蛋白酶，中性蛋白酶、碱性蛋白酶进行酶解，然后采用碱性溶液溶解金枪鱼蛋白肽，再利用添加剂提取金枪鱼蛋白肽，利用预涂活性炭和硅藻土除菌过滤，再采用超滤模块‑纳滤模块联用进行纯化。本发明易于提取低分子量金枪鱼蛋白肽，回收率高，纯度高，操作简便。

Description

一种金枪鱼蛋白肽提取方法
技术领域
本发明涉及一种蛋白肽提取方法，尤其属于一种金枪鱼蛋白肽提取方法。
背景技术
金枪鱼在全球中的鱼类供应量稳居前位，全球每年捕获超过700万吨的金枪鱼。目前，世界上金枪鱼加工业的利用率仅有30%至50%，且会造成大量污染。枪鱼含有丰富的DHA、EPA、蛋白质、维生素A、D、B6、B12、脂肪酸、牛磺酸等多种营养活性成分，含量居各种食物之首。金枪鱼蛋白肽具有很多生理性功能，包括免疫调节、降胆固醇、抗菌、抗血栓形成，抗高血压和抗氧化等方面，而酶水解是从鱼类产品中回收这些有价值成分的最佳选择。
根据大多数研究，低分子蛋白肽，尤其是5kD以下的金枪鱼蛋白肽更具有营养和药用价值，也更容易被身体吸收。目前，对于金枪鱼低分子蛋白肽的提取方法很少，主要困难来源的提高蛋白肽回收率的同时，还需要保留了多肽的功能性质和营养价值。
发明内容
由于现有技术中存在上述不足，本发明提供了一种金枪鱼蛋白肽提取方法。本发明可以提高金枪鱼蛋白肽的回收率及纯度，尤其是更利于分级收获人更易吸收的、更具有药用和营养价值的低分子蛋白肽，简单易行。
具体地，本发明是通过下述技术方案实现的：
一种金枪鱼蛋白肽提取方法，包括以下步骤：
S1、原料预处理：将新鲜金枪鱼去头去内脏清洗干净，然后采肉，再加纯水打浆，得金枪鱼鱼浆。
S2、酶解反应：往金枪鱼鱼浆中依次加入胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶进行酶解反应。
S3、提取蛋白肽：用碱性溶液将步骤S2所得物料的pH调至11-12，反应10-20min，在3-5℃，300-500g转速下离心10-30min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，并将溶液pH调至6-8，加入添加剂后，反应1-2h，在3-5℃，5000-10000g转速下离心10-30min，收集上清液。其中，添加剂为氯化钾、硫酸钙、赖氨酸的混合物。在一定浓度的盐溶液中，可以增加多肽的溶解度，加入氯化钾可以适当增加多肽溶解度。硫酸钙中的钙离子和赖氨酸有利于蛋白质的降解，使蛋白质解折叠形成多肽，同时使疏水基团暴露，形成疏水效应，从而利于多肽的溶解。因此，加入添加剂后再进行离心有利于沉淀大分子物质，溶解小分子多肽，达到一定的分离纯化作用。
S4、过滤：将步骤S3所得上清液加热至50-60℃后，然后用滤布预涂硅藻土和活性炭进行过滤，重复1-3次，得滤液。活性炭具有脱色的作用，硅藻土具有除菌的作用，500-1000目的滤布可以过滤大颗粒物质以及菌体，在滤布上涂布硅藻土以及活性炭，一举两得。预涂硅藻土和活性炭的滤布过滤料液这一操作既达到了突出的效果，又摆脱了传统工艺中必须往物料中加入活性炭后续又需要除去的冗余步骤，节约时间以及人力。
S5、纯化：将步骤S4所得滤液在4-8℃温度下使用超滤模块-纳滤模块联用进行分离纯化，最后进行喷雾干燥，得到金枪鱼蛋白肽粉；超滤模块在3~5 bar之间运行，纳滤模块在8~10 bar之间运行。
优选地，步骤S1中金枪鱼肉与纯水的质量体积比为1:(3-5)，单位为g/mL。
优选地，步骤S2中胃蛋白酶与鱼肉比为100-300IU/g，反应条件为：pH为1-3，温度为40-50℃，酶解时间为5-7小时，然后100℃灭活；中性蛋白酶与鱼肉比为300-500IU/g，反应条件为：pH为6-7，温度为40-50℃，酶解时间为5-7小时，然后100℃灭活；碱性蛋白酶与鱼肉比为300-500IU/g，反应条件为：pH为9-10，温度为40-50℃，酶解时间为5-7小时，然后100℃灭活。本发明采用的胃蛋白酶的主要作用部位是芳香族氨基酸或酸性氨基酸的氨基所组成的肽键，中性蛋白酶的作用部位较为广谱，碱性蛋白酶的主要作用部位是芳香族或疏水性氨基酸残基的肽键，三种酶之间因协同作用效果增强。另外，蛋白质分子上带有多个酸性、碱性氨基酸残基，pH值的变化直接影响到这些残基侧链基团的解离状态，本发明的酶解环境涉及酸性、中性、碱性环境则更有利于金枪鱼鱼浆的蛋白质水解，并且将水解从酸性环境逐步改变成碱性情况，可以有效连接步骤S3的蛋白肽提取环境，节约试剂的使用。
优选地，步骤S3中添加剂与溶液的比值为0.005-0.02g/mL。
优选地，步骤S3中添加剂中氯化钾、硫酸钙、赖氨酸的重量比为(10-15):(1-5):2。
优选地，步骤S4中滤布单位面积内活性炭为0.5-1kg/m2，单位面积内硅藻土为0.5-1kg/m2，过滤速度为100-300L/(h·m2)。
优选地，步骤S5中超滤膜为1-5kDa的陶瓷膜，纳滤膜为0.3-0.5kDa的聚酰胺膜。
优选地，步骤S5中超滤模块-纳滤模块联用中超滤次数为1-3次，纳滤次数为1-3次；其中，物料进入超滤模块的流速为5-10L/(h·m2)，之后进入纳滤模块的流速为4-6 L/(h·m2)。
本发明的有益之处在于：本发明提供的金枪鱼蛋白肽提取方法，先将鱼浆酶解再进行后续操作，可以最大程度地将蛋白质酶解，增加了最后多肽的得率。本发明采用的添加剂可以更有效降解蛋白，增加小分子蛋白肽的含量。本发明采用超滤模块-纳滤模块联用分层纯化，根据膜的孔径大小，分级分离各种分子量大小的蛋白肽，本发明选用了1-5kD的超滤膜孔径和0.3-0.5kD的纳滤膜孔径，方便后续商业加工，具有极佳的商业价值。整个制备流程操作方便，避免资源浪费。
具体实施方式
下面结合具体方式来对本发明进行进一步详细阐述，下述实施例仅用来解释本发明，并不能视为对本发明的进一步限定。
下述实施例中的原料来源如下：
胃蛋白酶，CAS号：9001-75-6。
中性蛋白酶，CAS号：9001-92-7。
碱性蛋白酶，CAS号：9014-01-1。
1KDa，5kDa的陶瓷膜，购自南京米格过滤材料有限公司。
0.3 KDa，0.5kDa的聚酰胺膜，购自德国赛多利斯公司。
实施例1
一种金枪鱼蛋白肽提取方法，包括以下步骤：
S1、原料预处理：将净重1.6kg金枪鱼去头去内脏清洗干净，然后采肉（得1kg金枪鱼肉），加入3L纯水进行混合打浆，得金枪鱼鱼浆；
S2、酶解反应：利用0.1M盐酸将金枪鱼鱼浆的pH调至1，加入1×105 IU胃蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至7，加入3×105 IU中性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至9，加入3×105 IU碱性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活。
S3、提取蛋白肽：用1M氢氧化钠将步骤S2所得物料的pH调至11，反应20min，在4℃，500g转速下离心10min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，用0.5M盐酸将溶液pH调至7，加入15g添加剂(75%氯化钾、15%硫酸钙、10%赖氨酸)，反应1h，在4℃，10000g转速下离心10min，取上清液。
S4、过滤：将步骤S3所得上清液加热至50℃后，用500目滤布每平方米预涂布0.5kg活性炭和0.5kg硅藻土过滤，过滤速度为100L/(h·m2)，过滤3次，得滤液。
S5、纯化：将步骤S4所得滤液在4℃温度下使用超滤模块-纳滤模块联用进行分离纯化，其中，超滤模块在5bar下运行，选用5kD陶瓷膜进行1次超滤，流速为10L/(h·m2)，纳滤模块在10bar下运行，选用0.5kDa的聚酰胺膜进行一次纳滤，流速为6L/(h·m2)，收集各阶段样品，最后进行喷雾干燥，得到金枪鱼蛋白肽粉。
实施例2
一种金枪鱼蛋白肽提取方法，包括以下步骤：
S1、原料预处理：将净重1.6kg金枪鱼去头去内脏清洗干净，然后采肉（得1kg金枪鱼肉），加入3L纯水进行混合打浆，得金枪鱼鱼浆；
S2、酶解反应：利用0.1M盐酸将金枪鱼鱼浆的pH调至3，加入3×105 IU胃蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为5小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至7，加入5×105 IU中性蛋白酶，温度控制为50℃，酶解时间为5小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至10，加入5×105 IU碱性蛋白酶，温度控制为50℃，酶解时间为5小时，然后100℃灭活。
S3、提取蛋白肽：用1M氢氧化钠将步骤S2所得物料的pH调至12，反应20min，在4℃，500g转速下离心30min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，用0.5M盐酸将溶液pH调至7，加入60g添加剂(65%氯化钾、25%硫酸钙、10%赖氨酸)，反应1h，在4℃，10000g转速下离心30min，取上清液。
S4、过滤：将步骤S3所得上清液加热至50℃后，用1000目滤布每平方米预涂布0.5kg活性炭和0.5kg硅藻土过滤，过滤速度为100L/(h·m2)，过滤3次，得滤液。
S5、纯化：将步骤S4所得滤液在4℃温度下使用超滤模块-纳滤模块联用进行分离纯化，其中，超滤模块在5bar下运行，选用5kD陶瓷膜进行2次超滤，流速为10L/(h·m2)，纳滤模块在10bar下运行，选用0.5kDa的聚酰胺膜进行1次纳滤，流速为6L/(h·m2)，收集各阶段样品，最后进行喷雾干燥，得到金枪鱼蛋白肽粉。
实施例3
一种金枪鱼蛋白肽提取方法，包括以下步骤：
S1、原料预处理：将净重1.6kg金枪鱼去头去内脏清洗干净，然后采肉（得1kg金枪鱼肉），加入5L纯水进行混合打浆，得金枪鱼鱼浆；
S2、酶解反应：利用0.1M盐酸将金枪鱼鱼浆的pH调至2，加入1×105 IU胃蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至6，加入3×105 IU中性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至9，加入3×105 IU碱性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活。
S3、提取蛋白肽：用1M氢氧化钠将步骤S2所得物料的pH调至12，反应20min，在4℃，500g转速下离心10min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，用0.5M盐酸将溶液pH调至7，加入25g添加剂(75%氯化钾、15%硫酸钙、10%赖氨酸)，反应1h，在4℃，5000g转速下离心10min，取上清液。
S4、过滤：将步骤S3所得上清液加热至50℃后，用1000目滤布每平方米预涂布1kg活性炭和1kg硅藻土过滤，过滤速度为100L/(h·m2)，过滤3次，得滤液。
S5、纯化：将步骤S4所得滤液在4℃温度下使用超滤模块-纳滤模块联用进行分离纯化，其中，超滤模块在3bar下运行，选用5kD陶瓷膜进行2次超滤，流速为5L/(h·m2)，纳滤模块在8bar下运行，选用0.5kDa的聚酰胺膜进行2次纳滤，流速为4L/(h·m2)，收集各阶段样品，最后进行喷雾干燥，得到金枪鱼蛋白肽粉。
实施例4
一种金枪鱼蛋白肽提取方法，包括以下步骤：
S1、原料预处理：将净重1.6kg金枪鱼去头去内脏清洗干净，然后采肉（得1kg金枪鱼肉），加入5L纯水进行混合打浆，得金枪鱼鱼浆；
S2、酶解反应：利用0.1M盐酸将金枪鱼鱼浆的pH调至3，加入3×105 IU胃蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为5小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至7，加入3×105 IU中性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至9，加入3×105 IU碱性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活。
S3、提取蛋白肽：用1M氢氧化钠将步骤S2所得物料的pH调至12，反应20min，在4℃，300g转速下离心30min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，用0.5M盐酸将溶液pH调至7，加入100g添加剂(65%氯化钾、25%硫酸钙、10%赖氨酸)，反应1h，在4℃，10000g转速下离心30min，取上清液。
S4、过滤：将步骤S3所得上清液加热至50℃后，用500目滤布每平方米预涂布0.5kg活性炭和0.5kg硅藻土过滤，过滤速度为300L/(h·m2)，过滤3次，得滤液。
S5、纯化：将步骤S4所得滤液在4℃温度下使用超滤模块-纳滤模块联用进行分离纯化，其中，超滤模块在3bar下运行，选用5kD陶瓷膜进行3次超滤，流速为5L/(h·m2)，纳滤模块在8bar下运行，选用0.5kDa的聚酰胺膜进行3次纳滤，流速为4L/(h·m2)，收集各阶段样品，最后进行喷雾干燥，得到金枪鱼蛋白肽粉。
实施例5
一种金枪鱼蛋白肽提取方法，包括以下步骤：
S1、原料预处理：将净重1.6kg金枪鱼去头去内脏清洗干净，然后采肉（得1kg金枪鱼肉），加入3L纯水进行混合打浆，得金枪鱼鱼浆；
S2、酶解反应：利用0.1M盐酸将金枪鱼鱼浆的pH调至1，加入1×105 IU胃蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至7，加入3×105 IU中性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至9，加入3×105 IU碱性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活。
S3、提取蛋白肽：用1M氢氧化钠将步骤S2所得物料的pH调至11，反应20min，在4℃，500g转速下离心10min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，用0.5M盐酸将溶液pH调至7，加入15g添加剂(75%氯化钾、15%硫酸钙、10%赖氨酸)，反应1h，在4℃，10000g转速下离心10min，取上清液。
S4、过滤：将步骤S3所得上清液加热至50℃后，用500目滤布每平方米预涂布0.5kg活性炭和0.5kg硅藻土过滤，过滤速度为300L/(h·m2)，过滤3次，得滤液。
S5、纯化：将步骤S4所得滤液在4℃温度下使用超滤模块-纳滤模块联用进行分离纯化，其中，超滤模块在5bar下运行，选用1kD陶瓷膜进行1次超滤，流速为10L/(h·m2)，纳滤模块在10bar下运行，选用0.3kDa的聚酰胺膜进行一次纳滤，流速为6L/(h·m2)，收集各阶段样品，最后进行喷雾干燥，得到金枪鱼蛋白肽粉。
实施例6
一种金枪鱼蛋白肽提取方法，包括以下步骤：
S1、原料预处理：将净重1.6kg金枪鱼去头去内脏清洗干净，然后采肉（得1kg金枪鱼肉），加入5L纯水进行混合打浆，得金枪鱼鱼浆；
S2、酶解反应：利用0.1M盐酸将金枪鱼鱼浆的pH调至3，加入3×105 IU胃蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为5小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至7，加入3×105 IU中性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活；利用0.1M的氢氧化钠溶液将金枪鱼鱼浆的pH调至9，加入3×105 IU碱性蛋白酶，温度控制为40℃，酶解时间为7小时，然后100℃灭活。
S3、提取蛋白肽：用1M氢氧化钠将步骤S2所得物料的pH调至12，反应20min，在4℃，300g转速下离心30min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，用0.5M盐酸将溶液pH调至7，加入100g添加剂(65%氯化钾、25%硫酸钙、10%赖氨酸)，反应1h，在4℃，5000g转速下离心30min，取上清液。
S4、过滤：将步骤S3所得上清液加热至50℃后，用500目滤布每平方米预涂布1kg活性炭和1kg硅藻土过滤，过滤速度为100L/(h·m2)，过滤3次，得滤液。
S5、纯化：将步骤S4所得滤液在4℃温度下使用超滤模块-纳滤模块联用进行分离纯化，其中，超滤模块在3bar下运行，选用1kD陶瓷膜进行3次超滤，流速为5L/(h·m2)，纳滤模块在8bar下运行，选用0.3kDa的聚酰胺膜进行3次纳滤，流速为4L/(h·m2)，收集各阶段样品，最后进行喷雾干燥，得到金枪鱼蛋白肽粉。
测试例1
分别取上述实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6得到的各阶段的金枪鱼蛋白肽粉样品，并测定其蛋白含量；同时，采用反相高效液相色谱仪，往样品中加入贝克曼5kD、1 kD、0.5 kD、0.3 kD 蛋白内部标准品做参照，进行各组所制得蛋白肽分子量的分布检测，检测收集的各阶段中蛋白肽的纯度。
对照组：采取实施例1的提取方案，其中步骤S3为仅将酶解液调节为中性后，在4℃，500g转速下离心10min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液。
举例：纯度=HPLC测得的5kD以上蛋白含量/收获的 5kD以上蛋白组分中的蛋白总含量*100%
结果如下表1、2所示:
表1实施例1-4和对照组的各阶段蛋白肽含量测定
Figure 292257DEST_PATH_IMAGE002
表2 实施例5-6的各阶段蛋白肽含量测定
Figure 110302DEST_PATH_IMAGE004
从表1中的测试试验数据可知，由本发明方法所制得的金枪鱼蛋白肽粉中：蛋白质的含量达到80％以上；其中，当采用5kD、0.5kD作为膜孔径时，分子量小于0.5kD的组分有70％以上， 随着纳滤次数的增加，纯度越高。分子量在0.5～5kD的寡肽占15％以上，随着纳滤、超滤次数的增加，该组分的纯度越高。分子量大于5kD的蛋白肽占6％以下。
从表2中的测试试验数据可以知，当采用1kD、0.3kD作为膜孔径时，收获的分子量小于0.3kD的组分占45％以上，随着纳滤次数的增加，纯度越高。分子量在0.3～1kD的组分占30.1％以上，随着纳滤、超滤次数的增加，该组分的纯度越高，分子量大于1kD的组分占15.8%以下。
将实施例1与对照组比较，碱性环境更有利于酶解液中蛋白的溶解，通过离心后，有效分离蛋白和非蛋白物质，提高最终蛋白质总得率。将实施例1、2、3、4进行对比，将实施例5、6进行对比，都可以得出随着实施例中添加剂含量的增加，更利于小分子多肽的积累。
根据实际需要，本发明采用的超滤、纳滤膜大小可根据实际工艺情况选择。
测试例2
水解测试：取3L金枪鱼鱼浆（含有1kg金枪鱼鱼肉），具体方案如下表：
表3 不同酶水解方案
Figure 986991DEST_PATH_IMAGE006
采用邻苯二甲醛法测定酶解液的水解度，准确称取0.1g酶解液，去离子水定容至100 mL后，吸取 400μL 样品于离心管中，加入 3 mL 邻苯二甲醛溶液混匀，反应 2 min 后于 340 nm处测定其吸光值。标准曲线采用亮氨酸制作。利用凯氏定氮法测定氮含量，结果见表4。
水解度=水解液游离氨基浓度/水解液含氮量*100%
表4 不同蛋白酶对金枪鱼鱼浆酶解液水解度影响
实验1 实验2 实验3 实验4
水解度（%） 15.61 17.85 21.05 32.54
由表3-4可以看出，三种蛋白酶单独作用的水解度明显小于三种酶的共同作用下的水解度。三种酶共同作用使得金枪鱼鱼浆水解更彻底。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (5)

1.一种金枪鱼蛋白肽提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、原料预处理：将新鲜金枪鱼去头去内脏清洗干净，然后采肉，再加纯水打浆，得金枪鱼鱼浆；
S2、酶解反应：往金枪鱼鱼浆中依次加入胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶进行酶解反应；其中，胃蛋白酶与鱼肉比为100-300IU/g，反应条件为：pH为1-3，温度为40-50℃，酶解时间为5-7小时，然后100℃灭活；中性蛋白酶与鱼肉比为300-500IU/g，反应条件为：pH为6-7，温度为40-50℃，酶解时间为5-7小时，然后100℃灭活；碱性蛋白酶与鱼肉比为300-500IU/g，反应条件为：pH为9-10，温度为40-50℃，酶解时间为5-7小时，然后100℃灭活；
S3、提取蛋白肽：用碱性溶液将步骤S2所得物料的pH调至11-12，反应10-20min，在3-5℃，300-500g转速下离心10-30min，除去下层沉淀和上层鱼油，取中层溶液，并将溶液pH调至6-8，加入添加剂后，反应1-2h，在3-5℃，5000-10000g转速下离心10-30min，收集上清液；其中，所述添加剂为氯化钾、硫酸钙、赖氨酸的混合物，所述步骤S3中添加剂与溶液的比值为0.005-0.02g/mL，所述添加剂中氯化钾、硫酸钙、赖氨酸的重量比为(10-15):(1-5):2；
S4、过滤：将步骤S3所得上清液加热至50-60℃后，然后用500-1000目滤布预涂硅藻土和活性炭进行过滤，重复1-3次，得滤液；
S5、纯化：将步骤S4所得滤液在4-8℃温度下使用超滤模块-纳滤模块联用进行分离纯化，最后进行喷雾干燥，得到金枪鱼蛋白肽粉；其中，所述超滤模块在3~5 bar之间运行，纳滤模块在8~10 bar之间运行。
2.根据权利要求1所述的金枪鱼蛋白肽提取方法，其特征在于，所述步骤S1中金枪鱼肉与纯水的质量体积比为1:(3-5)，单位为g/mL。
3.根据权利要求1所述的金枪鱼蛋白肽提取方法，其特征在于，所述步骤S4中滤布单位面积内活性炭为0.5-1kg/m2，单位面积内硅藻土为0.5-1kg/m2，过滤速度为100-300L/(h·m2)。
4.根据权利要求1所述的金枪鱼蛋白肽提取方法，其特征在于，所述步骤S5中超滤膜为1-5kDa的陶瓷膜，纳滤膜为0.3-0.5kDa的聚酰胺膜。
5.根据权利要求1所述的金枪鱼蛋白肽提取方法，其特征在于，所述步骤S5中超滤模块-纳滤模块联用中超滤次数为1-3次，纳滤次数为1-3次；其中，物料进入超滤模块的流速为5-10L/(h·m2)，之后进入纳滤模块的流速为4-6 L/(h·m2)。
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