CN110950867A

CN110950867A - 一种fgfr4激酶抑制剂及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN110950867A
Application number: CN201811145114.XA
Authority: CN
Inventors: 王静晗; 姚金锁; 段小伟; 袁保昆; 孙莹; 路畅
Original assignee: Centaurus Biopharma Co Ltd
Current assignee: Centaurus Biopharma Co Ltd; Shouyao Holdings Beijing Co Ltd
Priority date: 2018-09-27
Filing date: 2018-09-27
Publication date: 2020-04-03

Abstract

本发明涉及式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或异构体，及其在制备用来治疗FGFR4介导的疾病的药物中的用途。

Description

一种FGFR4激酶抑制剂及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及式(I)和式(II)化合物及其药物组合物作为FGFR4激酶抑制剂，以及所述化合物和组合物在FGFR4介导的疾病的治疗中的用途。

背景技术

FGFR(fibroblast growth factor receptor)酪氨酸激酶家族包括FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4。其由胞外变异区、结合硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的保守区、FGF结合区、单次跨膜区及胞内酪氨酸激酶区组成。大部分FGFs在共同受体Klotho的帮助下与FGFRs和肝素形成复合物，导致构象改变的FGFR胞内激酶区自磷酸化而活化STAT3信号通路。自磷酸化的FGFR也可以磷酸化其适配体蛋白FRS2α，活化Grb2/Sos1复合物而启动下游MAPK和PI3K/AKT信号通路。此外，FGFR以FRS2α非依赖的方式活化磷脂酶C-γ(PLC-γ)，磷酸化RAF，加强MAPK信号，发挥其调节细胞增殖、分化和转移的功能。MAPK信号通路主要跟FGFR介导的细胞增殖和转移相关，而PI3K/AKT信号通路主要跟细胞的运动性和存活相关。在生理状态下，FGFR4信号通路被严格控制，而FGFR4信号失调导致癌症的发生发展、增殖、存活及转移。

肝细胞癌患者中有约30％的人的肿瘤有异常激活的FGFR4。FGFR4抑制剂在临床前试验和临床试验中都显示出优越的治疗HCC的潜力，而且安全性良好，具有足够的毒性/有效性窗口。

小分子酪氨酸激酶抑制剂通过阻断胞内激酶与ATP结合的活性，阻断细胞增殖信号。FGFR4的小分子抑制剂可分为泛FGFR和FGFR4特异性小分子抑制剂。由于FGFR1、FGFR2、FGFR3激酶域的结构相似，现阶段研发的针对这三个激酶的抑制剂效果相差不大。然而，FGFR4激酶域与FGFR1-3激酶域存在一定差异，因此许多能有效抑制FGFR1-3的抑制剂对FGFR4效果不佳。如CH5183284、BGJ398和AZD4547等进入临床I期或者II期小分子抑制剂对FGFR1-3的选择性(IC₅₀＜10nmol/L)远高于FGFR4。而JNJ-42756493和LY2874455是少数对FGFR1-4具有同等高效抑制效果的泛FGFR小分子抑制剂，其IC50均达到个位数纳摩尔级别。JNJ-42756493和LY2874455在细胞中均通过抑制FGF/FGFR信号通路，表现出FGFR依赖性抗增殖作用，对FGFR异常的移植瘤具有极强的抑制作用，且呈剂量效应抑制肿瘤生长。JNJ-42756493的临床I期试验(NCT01962532)结果确定其指导临床II期的用药剂量(RP2D)为10毫克/日(用药7天，停药7天)。LY2874455的临床I期试验(NCT01212107)确定其RP2D为16毫克/日，1日2次。在AZD4547的临床I期试验中(NCT00979134)，AZD4547对FGFR基因扩增的鳞状非小细胞肺癌患者显示强肿瘤杀伤活性，且在80mg的剂量下有很好的耐受性。而Ponatinib治疗FGFR异常的晚期肺鳞癌患者的临床II/III期试验(NCT01761747)因不良反应而终止。

缺乏选择性的FGFR激酶抑制剂因脱靶而导致高磷酸盐血症、指甲脱离、脱发、黏膜炎、味觉障碍和黏膜干燥、结膜炎、角膜炎、眼睛干燥、无症状视网膜色素层剥离、骨关节疼痛、肌痛等不良反应，限制其临床应用。

本发明所属化合物，是拥有自主知识产权的FGFR4蛋白激酶抑制剂。其可以高选择性的抑制FGFR4酪氨酸激酶，而对FGFR1-3抑制效果较弱，以期安全，有效的治疗FGFR4高表达的肝癌患者。

发明概述

在一个方面，本发明提供了式I化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或异构体，

其中

Ar为5-10元芳基或杂芳基，所述芳基或杂芳基被1-2个R₁₁以及0-3个R₁₂取代，其中R₁₁各自独立地选自卤素，R₁₂各自独立地选自C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；

a键和b键各自独立地为单键或双键；

当a键为单键时，X为N，a键为双键时，X为C；

当b键为单键时，Y和Z各自独立地为CR₄R₅或NR₅，当b键为双键时，Y和Z各自独立地为CR₄或N；

A环为苯环或者5-6元杂环，所述杂环含有1-3个选自N、O和S的杂原子；

R₁为

或者

其中R₆选自H和C_1-6烷基，所述烷基可任选地被C_1-6烷氧基取代；

R₂选自H、卤素和5-6元杂环基，所述杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子，并且可任选地被C_1-6烷基、卤素、C_3-8环烷基取代，所述C_1-6烷基可任选地被C_1-6烷氧基取代；

R₃选自H、C_1-6烷基和卤素；

R₄和R₅各自独立地选自H、C_1-6烷基、卤素、-CN、-CF₃和-C(O)NR₇R₈，其中R₇和R₈各自独立地选自H和C_1-6烷基；

在另一方面，本发明提供了式II化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或异构体，

其中

m为1或2；

n为0、1、2或3；

其它基团如以上所定义；

在一些实施方式中，a键为双键，X为C；

在一些实施方式中，b键为双键，Y和Z各自独立地为CR₄或N，优选地，Y和Z各自独立地为CR₄，其中R₄选自H、C_1-6烷基、卤素、-CN、-CF₃和-C(O)NR₇R₈，其中R₇和R₈各自独立地选自H和C_1-6烷基；

在一些实施方式中，

为

在一些实施方式中，本发明的化合物选自：

或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或异构体；

本发明的式(I)或式(II)化合物可以用于治疗FGFR4介导的疾病；在一些实施方式中，所述FGFR4介导的疾病为非小细胞肺癌、胃癌、多发性骨髓瘤、肝癌、胆管癌、前列腺癌、皮肤癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、胶质瘤、以及横纹肌肉瘤，优选为肝癌和胆管癌；

本发明另一方面还涉及药物组合物，其包含本发明的式(I)或式(II)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或异构体，以及药学上可接受的载体；

在另一方面，本发明提供了治疗FGFR4介导的疾病的方法，所述方法包含给对象施用有效量的式(I)或式(II)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或异构体、或者上述组合物；在一些实施方式中，所述FGFR4介导的疾病为非小细胞肺癌、胃癌、多发性骨髓瘤、肝癌、胆管癌、前列腺癌、皮肤癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、胶质瘤、以及横纹肌肉瘤，优选为肝癌和胆管癌；

在本发明的一些实施方式中，本发明涉及的所述对象为包括人类的哺乳动物。

在另一方面，本发明提供了式(I)或式(II)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或异构体在制备用来治疗FGFR4介导的疾病的药物中的用途；在一些实施方式中，所述FGFR4介导的疾病为非小细胞肺癌、胃癌、多发性骨髓瘤、肝癌、胆管癌、前列腺癌、皮肤癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、胶质瘤、以及横纹肌肉瘤，优选为肝癌和胆管癌；

发明详述

在下文的发明详述中陈述了利用本发明原理的示例性实施方式。通过参考以下发明内容可更好地理解本发明的特征和优点。

应理解本发明各个方面的保护范围由权利要求书决定，并且这些权利要求范围内的方法和结构以及其等价的方法和结构均在本权利要求书涵盖的范围之内。

除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。

应理解，上述简述和下文的详述都是示例性的、解释性的，而不是对任何本发明主题的限制。除非另有具体说明，否则使用单数形式时也包括复数。除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。

某些化学术语

术语“任选”、“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生也可能不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，“任选取代的烷基”表示“未取代的烷基”或“取代的烷基”。并且，任选取代的基团可以是未取代的(例如：-CH₂CH₃)、完全取代的(例如：-CF₂CF₃)、单取代的(例如：-CH₂CH₂F)或者介于单取代和完全取代之间的任意层级(例如：-CH₂CHF₂、-CF₂CH₃、-CFHCHF₂等)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。

除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、核磁、高效液相色谱、红外和紫外/可见光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和医药化学的有关术语以及实验步骤和技术是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送、以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。

当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，-CH₂O-等同于-OCH₂-。

本文所用术语“基团”、“化学基团”是指分子的一个特定的部分或官能团。化学基团经常被认作为嵌入或附加到一个分子中的化学实体。

一些在此命名的化学基团可以用简略记号表示碳原子的总个数。例如，C₁-C₆烷基描述了一个烷基基团，如下定义的那样，具有总共1到6个碳原子。简略记号所示碳原子总个数不包括可能的取代基上的碳原子。

术语“卤素”、“卤代”或“卤化物”是指溴、氯、氟或碘。

本文使用的术语“芳香”、“芳香环”、“芳香的”、“芳香性的”、“芳香环的”是指平面的一个环或多个环的环部分，其具有含4n+2个电子的离域化电子共扼体系，其中n为整数。芳环可由5、6、7、8、9或9个以上的原子形成。芳族化合物可被任选地取代，并可为单环或稠合环的多环。术语芳族化合物包括所有碳环(如苯环)和含一个或多个杂原子的环(如吡啶)。

本文单独或作为其它成分的一部分使用的术语“杂原子”或“杂”是指除碳和氢之外的原子。杂原子独立地选自氧、氮、硫、磷、硅、硒和锡，但不限于这些原子。在出现两个或更多杂原子的实施方案中，所述两个或更多杂原子可彼此相同，或者所述两个或更多杂原子中的一些或全部彼此不同。

本文单独或组合使用的术语“稠”或“稠环”是指两个或更多个环共享一个或更多个键的环状结构。

本文单独或组合使用的术语“螺”或“螺环”是指两个或更多个环共享一个或更多个原子的环状结构。

本文单独或作为其它组分的一部分(比如：单烷基氨基)使用的术语“烷基”是指任选取代的直链或任选取代的支链的一价饱和烃，其具有1-12个碳原子，优选1-8个碳原子，更优选1-6个碳原子，通过单键与分子的其它部分相连，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、2-甲基己基、3甲基己基、正辛基，正壬基、正癸基等。

本文使用的术语“烷氧基”是指-OR_a基团，其中R_a是以上定义的烷基。烷氧基的非限定性实例包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基等。

本文单独或作为其它成分的一部分使用的术语“环烷基”是指稳定的单价非芳香单环或多环碳氢基团，只包含碳原子和氢原子，可能包括稠环、螺环或桥环系统，包含3-15个成环碳原子，优选包含3-10个成环碳原子，更优选包含3-8个成环碳原子，可饱和也可不饱和，通过单键与分子的其它部分相连。“环烷基”的非限制性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基等。

本文单独或作为其它成分的一部分使用的术语“杂环基”、“杂环烷基”、“杂环”是指稳定的3-18元单价非芳香环，包括2-12个碳原子，1-6个选自氮、氧和硫的杂原子。除非另作说明，杂环基基团可以是单环、双环、三环或四环系统，其可能包含稠环、螺环或桥环系统，杂环基上的氮、碳或硫可选择性的被氧化，氮原子可选择性的被季铵化，杂环基可以部分或完全饱和。杂环基可以通过环上的碳原子或杂原子与分子的其余部分通过一个单键连接。包含稠环的杂环基中可以包含一个或多个芳环或杂芳环，只要与分子的其余部分连接的是非芳香环上的原子。为了本申请，杂环基优选的是一个稳定的4-11元单价非芳香单环或二环，其包含1-3个选自氮、氧和硫的杂原子，更优选的是一个稳定的4-8元单价非芳香单环，其包含1-3个选自氮、氧和硫的杂原子。杂环基的的非限制性实例包括氮杂环庚烷基、氮杂环丁基、十氢异喹啉基、二氢呋喃基、二氢吲哚基、二氧戊烷基、1，1-二氧-硫代吗啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、异噻唑烷基、异恶唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、恶嗪基、哌嗪基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡喃基、吡唑烷基、吡咯烷基、喹嗪基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢吡喃基等。

本文单独或作为其它成分的一部分使用的术语“芳环”、“芳环基”、“芳香基”、“芳基”或前缀“芳”(比如在“芳烷基”中)是指碳氢环状系统，其含有氢，6-18个成环碳原子，优选6-10个成环碳原子，和至少一个芳香性的环。为本发明考虑，芳环基可以是单环、双环、三环或四环系统，其可能包含稠环或桥环系统。芳基碳原子可以通过单键跟分子的其它部分连接。芳基的非限定性实例包括苯基、奈基、蒽基、菲基、芴基等。本发明中，芳基优选的为C₆-C₁₀的芳基，更优选的为苯基。

本文单独或作为其它成分的一部分使用的术语“杂芳基”是指5-16元环状系统，其包含1-15个碳原子，优选的1-10个碳原子，1-4个选自氮、氧和硫的杂原子，至少一个芳香环。除非另作说明，杂芳基可以是单环、双环、三环或四环系统，其可能包含稠环或桥环系统，只要与分子其它部分的连接点为芳环原子。杂芳环上的氮原子、碳原子和硫原子可以选择性的被氧化，氮原子可选择性的被季铵化。为了本发明，杂芳基优选的为稳定的4-11元单芳香环，其包含1-3个选自选自氮、氧和硫的杂原子，更优选的为稳定的5-8元单芳香环，其包含1-3个选自选自氮、氧和硫的杂原子。杂芳基的非限定性实例包括吖啶基、氮杂卓基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、苯并二氧芑基、苯并二噁茂基、苯并呋喃酮基、苯并呋喃基、苯并萘并呋喃基、苯并吡喃酮基、苯并吡喃基、苯并吡唑基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、呋喃基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、恶唑基、嘌呤基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、奎宁基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基等。本申请中，杂芳基优选为5-8元杂芳基，其包含1-3个选自选自氮、氧和硫的杂原子，更优选为吡啶基、嘧啶基、噻唑基。

本发明使用的术语“多晶型物”或“多晶型(现象)”是指本发明的化合物具有多种晶格形态。本发明的一些化合物可能有一个以上的晶体形式，本发明涵盖所有的多晶型态或其混合物。

本发明化合物的中间体化合物及其多晶形物也在本发明的范围内。

除非另有指定，本发明化合物所含有的烯烃双键包括E和Z异构体。

应理解，本发明化合物可能含有不对称中心。这些不对称中心可以独立的为R或S构型。一些本发明化合物也可显示出顺-反异构现象，这对于本领域技术人员而言是显而易见的。应理解，本发明化合物包括它们的单独的几何异构体和立体异构体以及它们的混合物，包括外消旋混合物。通过实施或修改已知方法，例如层析技术和重结晶技术可以从它们的混合物中分离这些异构体，或者可以由它们的中间体的合适的异构体分别制备它们。

本文所用术语“药学上可接受的盐”既包括加酸盐，也包括加碱盐。

“药学上可接受的加酸盐”是指那些保留了化合物的游离碱的生物效力和特性、在生物学上或其它方面并非不合需要、跟无机酸，例如但是不限于，氢氯酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或有机酸，例如但不限于，乙酸、2，2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、癸酸、己酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸等形成的盐。“药学上可接受的加碱盐”是指那些保留了化合物的游离酸的生物效力和特性、在生物学上或其它方面并非不合需要的盐。这些盐通过游离酸跟无机碱或有机碱反应制备。通过跟无机碱反应生成的盐包括，但不限于，钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐、和锰盐。

形成盐的有机碱包括，但不限于，伯胺、仲胺、叔胺、环胺等，例如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、乙醇胺、二环己胺、乙二胺、嘌呤、哌嗪、哌啶、胆碱和咖啡因等。特别优选的有机碱为异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己胺、胆碱和咖啡因。

结晶经常产生本发明化合物的溶剂化物。本文所用术语“溶剂化物”是指由一个或多个本发明化合物分子和一个或多个溶剂分子组合而成的合体。

溶剂可以是水，这种情况下，溶剂化物是水合物。另外还可以是有机溶剂。因此，本发明化合物可作为水合物存在，包括一水合物、二水合物、半水合物、三水合物、四水合物等，以及相应的溶剂化形态。本发明化合物可以是真溶剂化物，但在其它一些情况下，本发明化合物也可能只是偶然保留了水或水跟一些其它溶剂的混合物。本发明化合物可在一种溶剂中反应或在一种溶剂中沉淀或结晶。本发明化合物的溶剂化物也包括在本发明的范围内。

本文所用术语“药物组合物”是指混合有本发明化合物和通常在本领域被接受的用来将具有生物活性的化合物传送给哺乳动物(比如人类)的介质的制剂。这种介质包含所有药学上可接受的载体。

本文所用的跟制剂、组合物或成分相关的术语“可接受的”是指对治疗主体的总体健康没有持续的有害影响。

本文所用术语“药学上可接受的”是指不影响本发明化合物的生物活性或性质的物质(如载体或稀释剂)，并且相对无毒，即该物质可施用于个体而不造成不良的生物反应或以不良方式与组合物中包含的任意组分相互作用。

“药学上可接受的载体”包括但不限于已经被相关政府行政部门批准的可以被用于人类和驯养动物的佐剂、载体、赋形剂、助剂、脱臭剂、稀释剂、保鲜剂、染料/着色剂、风味增强剂、表面活性剂和润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂、或乳化剂。

本文所用术语“主体”、“患者”、“对象”或“个体”是指患有疾病、紊乱或病症等的个体，包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人，非人的灵长类动物(例如黑猩猩和其它猿类和猴)；家畜，例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，例如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿类动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非人哺乳动物的实例包括但不限于鸟类和鱼类等。在本文提供的一个有关方法和组合物的实施方案中，所述哺乳动物为人。

本文所用术语“治疗”是指对哺乳动物特别是人类的相关疾病或病症的治疗，包括

(i)预防哺乳动物，特别是之前已经暴漏在某个疾病或病症下但尚未被诊断患有该疾病或病症的哺乳动物，产生相应的疾病或病症；

(ii)抑制疾病或病症，即，控制其发展；

(iii)缓解疾病或病症，即，使疾病或病症消退；

(iv)缓解疾病或病症引起的症状。

本文所用术语“疾病”和“病症”可以互相替代，也可以是不同意思，因为某些特定疾病或病症还没有已知的致病因子(所以发病原因尚不清楚)，所以还不能被认作疾病而只能被看做不想要的状况或综合症，所述综合症或多或少有一些具体症状已经被临床研究人员证实。

本文所使用术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”是指服用后足以在某种程度上缓解所治疗的疾病或病症的一个或多个症状的至少一种药剂或化合物的量。其结果可以为迹象、症状或病因的消减和/或缓解，或生物系统的任何其它所需变化。例如，用于治疗的“有效量”是在临床上提供显著的病症缓解效果所需的包含本文公开化合物的组合物的量。可使用诸如剂量递增试验的技术测定适合于任意个体病例中的有效量。

本文所用术语“服用”、“施用”、“给药”等是指能够将化合物或组合物递送到进行生物作用的所需位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、经十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、动脉内注射或输注)、局部给药和经直肠给药。在优选的实施方案中，本文讨论的化合物和组合物通过口服施用。

本发明化合物的制备

下述非限制性实施例仅仅是说明性的，不以任何方式限制本发明。

除非另有说明，温度是摄氏温度。试剂购自国药集团化学试剂北京有限公司，阿法埃莎(Alfa Aesar)，或北京百灵威科技有限公司等商业供应商，并且这些试剂可直接使用无需进一步纯化，除非另有说明。

除非另有说明，下列反应在室温、无水溶剂中、氮气或氩气的正压下或使用干燥管进行；玻璃器皿烘干和/或加热干燥。

除非另有说明，柱色谱纯化使用青岛海洋化工厂的200-300目硅胶；制备薄层色谱使用烟台市化学工业研究所生产的薄层色谱硅胶预制板(HSGF254)；MS的测定用ThermoLCQ Fleet型(ESI)液相色谱-质谱联用仪。

核磁数据(¹H NMR)使用Varian设备于400MHz运行。核磁数据使用的溶剂有CDCl₃、CD₃OD、D₂O、DMSO-d6等，以四甲基硅烷(0.00ppm)为基准或以残留溶剂为基准(CDCl₃：7.26ppm；CD₃OD：3.31ppm；D₂O：4.79ppm；d6-DMSO：2.50ppm)。当标明峰形多样性时，以下简写表示不同峰形：s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)、dd(双双重峰)、dt(双三重峰)。如果给出了耦合常数，则以Hertz(Hz)为单位。

实施例1：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物3的合成

在室温下，向化合物2(3.0g)的四氢呋喃溶液(20mL)中加入氢化钠(774mg)，将混合物于室温下搅拌1.5小时，随后向混合物中加入化合物1(2.86g)，将混合物于室温下搅拌过夜。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用二氯甲烷稀释，有机相用饱和氯化铵水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析纯化(DCM/MeOH＝100/1)，获得化合物3(5.2g)。

步骤2：化合物4的合成

在-20℃下，向化合物3(5.2g)的四氢呋喃(100mL)溶液中缓慢滴加磺酰氯(2.81g)。滴加完毕后，将混合物于-20℃下搅拌2小时。随后，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应。混合物用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/2)纯化，获得化合物4(4.7g)。

步骤3：化合物5的合成

向化合物4(2.0g)的乙醇溶液(20mL)中加入40％氯乙醛水溶液(8mL)，将混合物于80℃下加热过夜。将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，搅拌并过滤，干燥获得淡黄色固体5(2.1g)。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤4：化合物6的合成

向化合物5(2.1g)的二氯甲烷/甲醇/水(20mL/20mL/20mL)混合体系中加入过硫酸氢钾复合盐(18.4g)，将混合物加热至40℃搅拌过夜。加入水稀释混合物，并用二氯甲烷萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得淡黄色固体6不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤5：化合物8的合成

在室温下，向化合物6(146mg)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(3mL)中加入化合物7(98mg)和叔丁醇钾(108mg)。将混合物于室温下搅拌2小时。随后用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/3)进行分离，获得化合物8(92mg)。

步骤6：化合物9的合成

向化合物8(85mg)的乙酸乙酯(5mL)溶液中加入氯化亚锡(183mg)，将混合物于80℃下搅拌2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应。混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤滤饼。所得滤液静置分层，有机层分离，用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。所得淡黄色固体9(70mg)不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤7：化合物10的合成

在0℃下，向化合物9(70mg)的四氢呋喃(3mL)溶液中缓慢滴加丙烯酰氯(11.3mg)四氢呋喃溶液(0.5mL)。混合物于0℃下搅拌2小时。用甲醇淬灭反应并浓缩。残留物用制备薄层色谱(DCM/MeOH＝40/1)纯化，获得化合物10(32mg)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.89(1H，s)，8.02-8.19(1H，brs)，7.76(1H，d，J＝8.0Hz)，7.51(1H，s)，7.31(1H，t，J＝8.0Hz)，7.28(1H，s)，7.20(1H，d，J＝8.0Hz)，6.72(1H，s)，6.39(1H，dd，J＝17.2Hz，1.6Hz)，6.23(1H，dd，J＝17.2Hz，10.0Hz)，5.71(1H，dd，J＝10.0Hz，1.6Hz)，3.98(6H，s)，2.33(3H，s)。

实施例2：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-4a，10a-咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物12的合成

在室温下，向化合物6(110mg)的N，N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液中加入化合物11(120mg)和叔丁醇钾(81mg)。将混合物于室温下搅拌2小时。随后用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/3)进行分离，获得深红色固体12(40mg)。

步骤2：化合物13的合成

向化合物12(40mg)的四氢呋喃/甲醇(4mL，V/V＝1/1)溶液中加入雷尼镍(10mg)，并用氢气置换体系中的空气。将混合物于室温下搅拌过夜。过滤，滤液减压浓缩，获得黄色固体13(38mg)。

步骤3：化合物14的合成

在0℃下，向化合物13(38mg)的四氢呋喃(3mL)溶液中缓慢滴加丙烯酰氯(6.4mg)的四氢呋喃(0.5mL)溶液。混合物于0℃下搅拌2小时。用甲醇淬灭反应并浓缩。残留物用制备薄层色谱(DCM/MeOH＝20/1)纯化，获得化合物14(13mg)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.86(1H，s)，8.10(1H，s)，7.58(1H，d，J＝8.4Hz)，7.34(1H，s)，7.31(1H，s)，7.21(1H，s)，6.88(1H，dd，J＝8.4Hz，1.6Hz)，6.83(1H，s)，6.33(1H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，6.22(1H，dd，J＝16.8Hz，1.6Hz)，5.60(1H，dd，J＝10.0Hz，1.6Hz)，3.87(6H，s)，3.26-3.37(4H，m)，2.98-3.08(4H，m)，2.86(2H，q，J＝7.2Hz)，1.20(3H，t，J＝7.2Hz)。

实施例3：N-(2-((9-氰基-6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物16的合成

在0℃下，向化合物15(314mg)的二氧六环/水(8mL，V/V＝3/1)溶液中加入NBS(673mg)，将混合物于室温下搅拌30分钟。随后，向混合物中加入化合物4(500mg)，并加热至100℃，加热过夜。将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/1)纯化，获得淡黄色固体16(170mg)。

步骤2：化合物17的合成

向化合物16(50mg)在二氯甲烷/甲醇/水(2mL/2mL/2mL)中的溶液中加入过硫酸氢钾复合盐(411mg)，将混合物于40℃下搅拌过夜。加入水稀释混合物，并用二氯甲烷萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得淡黄色固体17(35mg)不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤3：化合物18的合成

在室温下，向化合物17(35mg)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入化合物7(22mg)和叔丁醇钾(24.6mg)。将混合物于室温下搅拌2小时。随后用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/2)进行分离，获得化合物18(29mg)。

步骤4：化合物19的合成

向化合物18(30mg)的乙酸乙酯(5mL)溶液中加入氯化亚锡(61mg)，将混合物于80℃下搅拌2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应。混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤滤饼。所得滤液静置分层，所获得的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。所得淡黄色固体19(24mg)不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤5：化合物20的合成

在0℃下，向化合物19(24mg)的四氢呋喃(3mL)溶液中缓慢滴加丙烯酰氯四氢呋喃溶液(0.1M，0.51mL)。混合物于0℃下搅拌2小时。用甲醇淬灭反应并浓缩。残留物用制备薄层色谱(DCM/MeOH＝20/1)纯化，获得化合物20(11mg)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.34-9.58(2H，m)，9.27(1H，s)，8.28(1H，s)，7.84(1H，s)，7.58(1H，d，J＝7.6Hz，7.19(1H，t，J＝7.6Hz)，7.11(1H，d，J＝7.6Hz)，7.06(1H，s)，6.50(1H，dd，J＝17.6Hz，10.0Hz)，6.22(1H，dd，J＝17.6Hz，2.0Hz)，5.69(1H，dd，J＝10.0Hz，1.6Hz)，3.97(6H，s)，2.24(3H，s)。

实施例4：N-(2-((9-氰基-6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物21的合成

在室温下，向化合物17(157mg)的N，N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入化合物11(165mg)和叔丁醇钾(111mg)。将混合物于室温下搅拌2小时。随后用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/1)进行分离，获得化合物21(105mg)。

步骤4：化合物22的合成

向化合物21(70mg)的乙酸乙酯(5mL)溶液中加入氯化亚锡(122mg)，将混合物于80℃下搅拌2小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应。混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤滤饼。所得滤液静置分层，所获得的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。所得淡黄色固体19(61mg)不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤5：化合物23的合成

在0℃下，向化合物22(61mg)的四氢呋喃(5mL)溶液中缓慢滴加丙烯酰氯四氢呋喃(0.011M，9μL)溶液。混合物于0℃下搅拌2小时。用甲醇淬灭反应并浓缩。残留物用制备薄层色谱(DCM/MeOH＝20/1)纯化，获得化合物23(27mg)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.92-10.15(1H，brs)，9.41-9.71(1H，brs)，9.30(1H，s)，8.47(1H，s)，7.86-8.10(2H，m)，7.21-7.38(1H，m)，7.14(1H，s)，6.97(1H，dd.J＝8.8Hz，2.4Hz)，6.62(1H，dd，J＝17.2Hz，10.0Hz)，6.35(1H，d，J＝17.2Hz)，5.84(1H，d，J＝10.0Hz)，4.05(6H，s)，2.90-3.80(1H，m)，1.29(3H，t，J＝6.8Hz)。

实施例5：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-8-甲基咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物24的合成

向化合物4(370mg)的乙醇(10mL)溶液中加入溴丙酮(0.3mL)。将混合物在80℃下加热过夜。将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/1)进行分离，获得黄色固体24(195mg)。

步骤2：化合物25的合成

在室温下，向化合物24(170mg)的二氯甲烷溶液(10mL)中加入间氯过氧苯甲酸(350mg)。将混合物于室温下搅拌2小时，随后向混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应。混合物用二氯甲烷萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。获得淡黄色固体25(150mg)，不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤3：化合物26的合成

在室温下，向化合物6(170mg)的N，N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入化合物11(310mg)和叔丁醇钾(209mg)。将混合物于室温下搅拌2小时。随后用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/3)进行分离，获得深红色固体26(61mg)。

步骤4：化合物27的合成

向化合物26(60mg)的四氢呋喃/甲醇(4mL，V/V＝1/1)溶液中加入雷尼镍(10mg)，并用氢气置换体系中的空气。将混合物于室温下搅拌过夜。过滤，滤液减压浓缩，获得黄色固体27(59mg)。

步骤5：化合物28的合成

在0℃下，向化合物27(57mg)的四氢呋喃(4mL)溶液中缓慢滴加丙烯酰氯四氢呋喃溶液(9.2μL，0.011M)。将混合物于0℃下搅拌2小时。用甲醇淬灭反应并浓缩。浓缩物用制备薄层色谱纯化(DCM/MeOH＝20/1)，获得化合物28(23mg)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.92(1H，s)，7.89(1H，s)，7.70(1H，d，J＝8.8Hz)，7.31-7.36(2H，m)，6.98(1H，dd，J＝8.8Hz，2.4Hz)，6.93(1H，s)，6.43(1H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，6.32(1H，dd，J＝16.8Hz，2.0Hz)，5.71(1H，dd，J＝10.0Hz，1，6Hz)，3.97(6H，s)，3.41-3.52(4H，m)，3.13(2H，q，J＝7.6Hz)，2.30(1H，s)，1.36(3H，t，J＝7.6Hz)。

实施例6：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-9-甲基咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物30的合成

向化合物29(1g)中加入三氯氧磷(5mL)，将混合物于110℃下加热过夜。将混合物浓缩至5mL，然后小心倒入冰水混合物中，并搅拌。过滤，滤饼用蒸馏水洗涤，并干燥。获得白色固体30(1g)。

步骤2：化合物31的合成

向化合物30(1g)的DMSO(10mL)溶液中加入丙炔胺(379mg)及碳酸钾(1.4g)。随后将混合物在室温下搅拌30分钟。将混合物倒入水中，过滤，所得固体用蒸馏水洗涤并干燥，获得化合物31(1.1g)。

步骤3：化合物32的合成

向化合物31(1.1g)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入三乙胺(1.06g)、DMAP(42.7mg)及Boc₂O(1.5g)，并于室温下搅拌过夜。将混合物减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝200/1)纯化，获得化合物32(1.5g)。

步骤4：化合物33的合成

在封管中向磷酸钾(1.14g)的水(50mL)溶液中加入化合物32(1.1g)。随后将混合物加热至120℃并搅拌过夜。用二氯甲烷萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝20/1)纯化，获得白色固体33(670mg)。

步骤5：化合物35的合成

在氮气保护下，向化合物33(310mg)的二氧六环/水(20mL，V/V＝1/1)溶液中加入化合物34(344.5mg)、Pd(dppf)Cl₂(73.2mg)及磷酸钾(424mg)。随后将混合物加热至100℃并搅拌4小时。用水稀释混合物并用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/1)纯化，获得淡黄色化合物35(395mg)。

步骤6：化合物36的合成

在-20℃下，向化合物35(395mg)的四氢呋喃(25mL)溶液中缓慢滴加磺酰氯(320mg)。滴加完毕后，将混合物于-20℃下搅拌2小时。随后，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应。用乙酸乙酯萃取混合物，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/2)纯化，获得化合物36(369mg)。

步骤7：化合物37的合成

在室温下，向化合物36(369mg)的二氯甲烷(15mL)中加入间氯过氧苯甲酸(505mg)。将混合物于室温下搅拌2小时，随后向混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应。混合物用二氯甲烷萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。获得淡黄色固体37(130mg)，不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤8：化合物38的合成

在室温下，向化合物37(130mg)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入化合物11(139mg)和叔丁醇钾(94mg)。将混合物于室温下搅拌2小时。随后用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/3)进行分离，获得深红色固体38(120mg)。

步骤9：化合物39的合成

向化合物38(120mg)的四氢呋喃/甲醇(6mL，V/V＝1/1)溶液中加入雷尼镍(20mg)，并用氢气置换体系中的空气。将混合物于室温下搅拌过夜。过滤，滤液减压浓缩，获得黄色固体39(128mg)。

步骤10：化合物40的合成

在0℃下，向化合物39(128mg)的四氢呋喃(5mL)溶液中缓慢滴加丙烯酰氯(20.6mg)的四氢呋喃(0.5mL)溶液。混合物于0℃下搅拌2小时。用甲醇淬灭反应并浓缩。残留物用制备薄层色谱(DCM/MeOH＝20/1)纯化，获得化合物40(50mg)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.75(1H，s)，9.15(1H，s)，9.06(1H，s)，7.56(1H，d，J＝8.4Hz)，7.45(1H，s)，7.39(1H，s)，7.14(1H，s)，7.04(1H，s)，6.95(1H，d，J＝7.6Hz)，6.55(1H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，6.26(1H，dd，J＝18.0Hz，2.0Hz)，5.75(1H，dd，J＝10.0Hz，2.0Hz)，3.98(6H，s)，3.76-3.88(2H，m)，3.56-3.65(2H，m)，2.98-3.88(10H，m)，2.61(3H，s)，1.28(3H，t，J＝7.2Hz)。

实施例7：N-(2-((2-((2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)氨基)-5，6-二氢-4H-[1，4′-联嘧啶]-6′-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物43的合成

向化合物41(2.5g)的二氧六环(100mL)溶液中加入化合物42(5g)，将混合物加热至回流，并搅拌过夜。浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(PE/EtOAc＝1/1)进行分离，获得白色固体43(3.1g)。

步骤2：化合物44的合成

将化合物43(2.7g)加入4N HCl二氧六环溶液(100mL)中，并于室温下搅拌12小时，减压浓缩获得化合物44的盐酸盐(1.5g)。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤3：化合物46的合成

向化合物44的盐酸盐(418mg)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入DIEA(1mL)和化合物45(500mg)，并于室温下搅拌8小时。减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(PE/EtOAc＝1/1)进行分离，获得白色固体46(622mg)。

步骤4：化合物47的合成

向化合物46(622mg)的四氢呋喃溶液(10mL)中加入DCC(854mg)，并加热至回流过夜。冷却至室温后，将混合物减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(PE/EtOAc＝1/1)进行分离，获得白色固体47(594mg)。

步骤5：化合物48的合成

在室温下，向化合物47(450mg)的四氢呋喃(15mL)溶液中加入Boc2O(355mg)和DMAP(199mg)。随后将混合物加热至回流并回流过夜。冷却至室温后，将混合物减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(PE/EtOAc＝1/1)进行分离，获得白色固体48(280mg)。

步骤6：化合物49的合成

在氩气保护下，向化合物48(278mg)的甲苯(10mL)溶液中加入醋酸钯(11mg)、X-Phos(48mg)、碳酸铯(352mg)及化合物11(203mg)。然后将混合物加热至110℃，并保持回流过夜。混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/3)进行分离，获得深红色固体49(280mg)。

步骤7：化合物50的合成

向化合物49(34mg)的乙酸乙酯(3mL)溶液中加入氯化亚锡(90mg)，并将混合物加热至80℃。搅拌2小时后冷却至室温，并将混合物通过硅藻土过滤，所得滤液减压浓缩后获得淡黄色固体50(31mg)。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步反应中。

步骤8：化合物51的合成

在0℃下，向化合物50(31mg)的氯仿(3mL)溶液中缓慢滴加丙烯酰氯(6.9μL)的氯仿(0.5mL)溶液。混合物于0℃下搅拌2小时，并减压浓缩，残留物通过制备薄层色谱(DCM/MeOH＝20/1)进行分离，获得淡黄色化合物51(17mg)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.28(1H，s)，7.24(1H，d，J＝9.2Hz)，7.22(1H，d，J＝2.4Hz)，6.84(1H，dd，J＝9.2Hz)，6.71(1H，s)，6.59(1H，s)，6.32(1H，dd，J＝16.8Hz，9.6Hz)，6.23(1H，dd，J＝16.8Hz，1.6Hz)，5.65(1H，dd，J＝10.0Hz，2.0Hz)，3.85(6H，s)，3.80(2H，t，J＝6.0Hz)，3.30-3.44(4H，m)，3.11-3.26(6H，m)，3.02(2H，q，J＝7.2Hz)，1.99-2.08(2H，m)，1.26(3H，t，J＝7.2Hz)。

实施例8：N-(2-((6-(2-((2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)氨基)-4，5-二氢-1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物53的合成

向化合物41(500mg)的二氧六环(5mL)溶液中加入化合物52(1.0g)，将混合物加热至回流，并搅拌过夜。浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(PE/EtOAc＝1/1)进行分离，获得白色固体53(340mg)。

步骤2：化合物54的合成

将化合物53(364mg)加入4N HCl二氧六环溶液(5mL)中，并于室温下搅拌12小时，减压浓缩获得化合物54盐酸盐(210mg)。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤3：化合物55的合成

向化合物54(184mg)盐酸盐的二氯甲烷溶液(5mL)中加入DIEA(1mL)和化合物45(178mg)，并于室温下搅拌8小时。减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(PE/EtOAc＝1/1)进行分离，获得白色固体55(234mg)。

步骤4：化合物56的合成

向化合物55(234mg)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入DCC(332mg)，并加热至回流。将混合物保持回流过夜。冷却至室温后，将混合物减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析进行分离纯化(PE/EtOAc＝1/1)，获得白色固体56(280mg)。

步骤5：化合物57的合成

在室温下，向化合物56(280mg)的四氢呋喃溶液(5mL)中加入Boc₂O(227mg)和DMAP(127mg)。随后将混合物加热至回流并回流过夜。冷却至室温后，将混合物减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析进行分离(PE/EtOAc＝1/1)，获得白色固体57(220mg)。

步骤6：化合物58的合成

在氩气保护下，向化合物57(213mg)的甲苯(5mL)溶液中加入醋酸钯(9mg)，X-Phos(38mg)、碳酸铯(274mg)及化合物11(160mg)。所后将混合物加热至回流，并保持回流过夜。混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/3)进行分离，获得深红色固体58(120mg)。

步骤7：化合物59的合成

向化合物58(50mg)的乙酸乙酯(3mL)溶液中加入氯化亚锡(80mg)，并将混合物加热至80℃。搅拌2小时后冷却至室温，将混合物通过硅藻土过滤，所得滤液减压浓缩后获得淡黄色固体59(50mg)。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步反应中。

步骤8：化合物60的合成

在0℃下，向化合物59(50mg)的氯仿(4mL)溶液中缓慢滴加丙烯酰氯(8.34μL)的氯仿(0.5mL)溶液。混合物于0℃下继续搅拌2小时，并减压浓缩，残留物通过制备薄层色谱(DCM/MeOH＝10/1)进行分离，获得淡黄色化合物60(16mg)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.23(1H，s)，7.30(1H，d，J＝8.8Hz)，7.24(1H，s)，6.87(1H，d，J＝8.8Hz)，6.60-6.80(1H，m)，6.23-6.45(3H，m)，6.57(1H，d，J＝10.8Hz)，4.03-4.16(2H，m)，3.88(6H，s)，3.84(2H，t，J＝4.4Hz)，3.20-3.55(8H，m)，3.16(2H，q，J＝7.2Hz)，1.31(3H，t，J＝7.2Hz)。

实施例9：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-5-羟基-8-甲基-7-氧-7，8-二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物62的合成

室温下，向化合物61(4.7g)的二氯甲烷(200mL)溶液中滴加甲胺甲醇溶液(40mL)，一小时反应完，减压浓缩得化合物62(5g)。

步骤2：化合物63的合成

在0℃下，向3，5-二甲氧基-1-苯乙酸(1.0g)的二氯甲烷(25mL)溶液中，滴加草酰氯(1.9g)，并加入一滴DMF引发反应，一小时后反应完，除去溶剂直接下一步。

步骤3：化合物64的合成

在0℃下，化合物62(1.27g)的DMF(20mL)溶液加入氢化钠(609mg)，升至室温搅拌15分钟，冷却至0℃，滴加化合物63(1.09g)的DMF(5mL)溶液，升至室温搅拌一小时，加入水和乙酸乙酯，水相分离，加入1N盐酸调节至pH＜5，乙酸乙酯萃取，萃取液用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤，浓缩得化合物64(1.6g)。

步骤4：化合物65的合成

在0℃下，向化合物64(1.6g)的DMF(15mL)溶液中滴加乙酰氯(592mg)和DIEA(2.5mL)，搅拌30分钟，加入水，过滤，滤饼用水洗涤，得产物65(730mg)。

步骤5：化合物66的合成

室温下，向化合物65(730mg)的甲醇和二氯甲烷(15mL，1/1，V/V)混合溶液中加入过硫酸氢钾复合盐(6.7g)的水溶液(7mL)，加热至40℃搅拌过夜，加入二氯甲烷和水，水相以二氯甲烷萃取，萃取液用硫酸钠干燥，减压浓缩获得化合物66(745mg)。

步骤6：化合物67的合成

在-20℃下，向化合物66(745mg)的四氢呋喃(15mL)溶液中滴加磺酰氯(575mg)，保持该温度搅拌2小时，向混合物加水有固体析出，过滤水洗干燥得到化合物67(676mg)。

步骤7：化合物68的合成

在0℃下，向化合物67(576mg)的DMF(5mL)溶液中，加入化合物7(348mg)和叔丁醇钾(385mg)，升至室温搅拌30分钟，加入水，用二氯甲烷萃取，萃取液减压浓缩，残留物经快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/3)纯化得化合物68(400mg)。

步骤8：化合物69的合成

向化合物68(400mg)的乙酸乙酯(10mL)溶液中加入氯化亚锡(848mg)，将混合物加热至80℃，并在该温度下搅拌2小时。随后，加入水，用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物直接用于下一步(554mg)。

步骤9：化合物70的合成

0℃下，向上述化合物(100mg)的二氯甲烷(7mL)溶液中滴加丙烯酰氯(10mg)，升至室温搅拌3小时，减压浓缩，残留物通过制备薄层色谱(DCM/MeOH＝30/1)纯化获得化合物70(20mg)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.84(1H，s)，7.60(1H，d，J＝7.6Hz)，7.26(1H，t，J＝7.6Hz)，7.20(1H，d，J＝7.6Hz)，6.87(1H，s)，6.41(1H，dd，J＝17.2Hz，10.0Hz)，6.30(1H，dd，J＝17.2Hz，2.0Hz)，5.70(1H，dd，J＝10.0Hz，2.0Hz)，3.95(6H，s)，2.30(3H，s)。

实施例10：N-(2-((5-氨基-6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-8-甲基-7-氧-7，8-二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物72的合成

化合物72的合成参照专利US2009270389。

步骤2：化合物74的合成

室温下向化合物72(300mg)的二氧六环水(10mL，V/V＝4/1)溶液中加入化合物73(200mg)、Pd(PPh₃)₂Cl₂(60mg)和碳酸铯(630mg)。将混合物加热至100℃并在该温度下搅拌过夜。冷却至室温，将混合物减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/2)进行分离，得到化合物73(210mg)。

步骤3：化合物75的合成

0℃下，向化合物74(150mg)的四氢呋喃(3mL)溶液中加入Boc酸酐(228mg)和DMAP(25mg)，搅拌30分钟。将混合物减压浓缩，残留物经柱层析分离(DCM/MeOH＝100/1)得目标产物(230mg)。

步骤4：化合物76的合成

室温下，向上述化合物(230mg)的丙酮和水(5mL，1/1，V/V)混合溶液中加入过氧单磺酸钾(1.5g)的水溶液(2mL)，加热至40℃搅拌过夜。加入碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取，萃取液用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得目标产物，直接下一步(193mg)。

步骤5：化合物77的合成

0℃下，向化合物76(193mg)的DMF(5mL)溶液中加入化合物7(127mg)和叔丁醇钾(141mg)，升至室温搅拌1小时，加入水，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，残留物经柱层析分离得到目标产物(150mg)。

步骤6：化合物78的合成

-20℃下，向化合物77(150mg)的四氢呋喃溶液(10mL)中滴加磺酰氯(70mg)，保持该温度搅拌2小时，向混合物中加入水，有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤并干燥，得目标产物78(68mg)。

步骤7：化合物79的合成

向化合物78(68mg)的乙酸乙酯(5mL)溶液中加入二水合氯化锡(105mg)，2小时反应完，加入水，用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物直接用于下一步(50mg)。

步骤8：化合物80的合成

0℃下，向化合物79(50mg)的二氯甲烷(2mL)溶液中滴加丙烯酰氯(10mg)，升至室温搅拌3小时，除去溶剂，残留物经薄层层析(DCM/MeOH＝40/1)分离得目标产物(20mg)。

步骤9：化合物81的合成

向化合物80(20mg)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)，加热至50℃搅拌1小时，除去溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液，二氯甲烷萃取，萃取液浓缩，残留物经薄层层析分离(DCM/MeOH＝40/1)，得到目标产物(10mg)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.81(1H，s)，7.54(1H，d，J＝8.0Hz)，7.20(1H，t，J＝8.0Hz)，7.14(1H，d，J＝8.0Hz)，6.80(1H，s)，6.36(1H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，6.25(1H，dd，J＝16.8Hz，2.0Hz)，5.65(1H，dd，J＝10.0Hz，2.0Hz)，3.89(6H，s)，2.25(3H，s)。

实施例11：4-((2-丙烯酰胺基-6-甲基苯基)氨基)-N-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-6，7-二氢-8H-嘧啶并[5，4-b][1，4]噁嗪-8-甲酰胺

步骤1：化合物83的合成

室温下，向化合物82(3.8g)的四氢呋喃(100mL)溶液中加入对甲氧基苄胺(4.37g)和碳酸钾(2.96g)，加热至70℃搅拌3小时，加入水，用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(PE/EtOAc＝1/1)获得化合物83(4.1g)。

步骤2：化合物84的合成

在室温下，向化合物83(4.1g)的二氯甲烷(100mL)溶液中滴加三溴化硼(6.9g)，加热至50℃搅拌过夜，减压除去大部分溶剂，冷却至0℃并滴加甲醇，减压除去溶剂，残留物直接用于下一步。

步骤3：化合物85的合成

向化合物84(20mmol)的DMF溶液中加入1-氯-2-溴乙烷(3.36g)和碳酸钾(8.37g)，加热至80℃搅拌过夜，加入水，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，残留物经快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/1)纯化得化合物85(1.54g)。

步骤4：化合物86的合成

在0℃下，向化合物85(1.0g)的四氢呋喃(50mL)溶液中加入氢化钠(560mg)，升至室温搅拌30分钟，再冷却至0℃，加入SEMCl(2.3mL)，升至室温搅拌1小时，冷却至0℃，加入饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝100/1)纯化得化合物85(800mg)。

步骤5：化合物87的合成

氮气保护下，将化合物86(800mg)、化合物7(381mg)、Pd2(dba)3(367mg)、Xantphos(465mg)和碳酸铯(1.9g)溶于甲苯(30mL)中，加热至110℃搅拌过夜。冷却至室温，加入水，用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物通过快速硅胶柱层析(DCM/MeOH＝200/1)纯化，获得化合物87(800mg)。

步骤6：化合物88的合成

将化合物87(700mg)加入三氟乙酸(5mL)中，加热至50℃搅拌3小时，除去溶剂后加入饱和碳酸氢钠溶液，乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，获得化合物88(300mg)。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步反应。

步骤7：化合物90的合成

0℃下，向步骤6的产物(67mg)的DMF(3mL)溶液中加入氢化钠(18.6mg)，升至室温搅拌30分钟，加入化合物89(57mg)，室温搅拌过夜，加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，残留物经柱层析(DCM/MeOH＝100/1)分离，得目标产物(124mg)，直接下一步。

步骤8：化合物90的合成

向步骤7的产物(124mg)的乙酸乙酯(5mL)溶液中加入二水合氯化锡(261mg)，搅拌2小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液，乙酸乙酯萃取，萃取液用饱和氯化钠水溶液洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物直接用于下一步(96mg)。

步骤9：化合物91的合成

0℃下，向步骤8化合物(96mg)的二氯甲烷(3mL)溶液中滴加丙烯酰氯(16mg)，升至室温搅拌3小时，除去溶剂，残留物经薄层层析(DCM/MeOH＝40/1)分离，得目标产物(20mg)。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ11.97(1H，s)，8.17(1H，s)，8.07(1H，s)，7.76(1H，d，J＝7.2Hz)，7.26(1H，t，J＝7.2Hz)，7.13(1H，d，J＝7.2Hz)，6.77(1H，s)，6.55(1H，s)，6.36(1H，dd，J＝16.8Hz，2.0Hz)，6.18(1H，dd，J＝16.8Hz，10.4Hz)，5.72(1H，dd，J＝10.4Hz，1.2Hz)，4.43(2H，t，J＝4.0Hz)，4.26(2H，t，J＝4.0Hz)，3.93(6H，s)，2.29(3H，s)。

实施例12：N-((3S，4S)-3-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-yl)氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)丙烯酰胺

化合物93通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.81(1H，s)，7.71-8.13(1H，m)，7.40(1H，s)，7.24(1H，s)，6.67(1H，s)，6.51-6.65(1H，m)，6.29-6.48(1H，m)，6.08-6.22(1H，m)，5.85-6.06(1H，m)，5.48(1H，s)，4.58-4.68(1H，m)，4.22-4.35(1H，m)，4.06(1H，dd，J＝12.0Hz，4.4Hz)，3.88-4.03(7H，m)，3.69-3.80(1H，m)，3.06(1H，td，J＝12.0Hz，2.0Hz)，1.93-2.12(1H，m)，1.74-1.90(1H，m)。

实施例13：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-8-(三氟甲基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺

化合物94通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.89-10.05(1H，brs)，9.76(1H，s)，9.49-9.74(1H，brs)，9.18(1H，s)，8.54(1H，s)，7.73(1H，s)，7.55-7.64(1H，m)，7.26-7.40(1H，m)，7.09(1H，s)，6.91-6.98(1H，m)，6.44(1H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，6.16(1H，d，J＝16.8Hz)，5.63(1H，d，J＝10.0Hz)，3.99(6H，s)，3.71-3.81(2H，m)，3.51-3.70(2H，m)，3.02-3.34(6H，m)，1.26(3H，t，J＝7.2Hz)。

实施例14：N-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺

化合物94通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.89(1H，s)，8.01-8.20(2H，m)，7.61(1H，s)，7.53(1H，s)，7.35-7.48(2H，m)，6.81(1H，d，J＝8.0Hz)，6.68(1H，s)，6.42(1H，d，J＝17.2Hz)，6.24(1H，dd，J＝17.2Hz，10.8Hz)，5.72(1H，d，J＝10.8Hz)，3.96(6H，s)，3.20-3.38(4H，m)，2.75-2.92(4H，m)，1.58-1.68(1H，m)，0.82-0.91(2H，m)，0.50-0.61(2H，m)。

实施例15：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉)苯基)丙烯酰胺

化合物96通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.87(1H，s)，8.31-8.54(1H，m)，7.98(1H，s)，7.73(1H，s)，7.35-7.62(3H，m)，7.28(1H，s)，6.78(1H，d，J＝8.0Hz)，6.65(1H，s)，6.40(1H，d，J＝16.8Hz)，6.31(1H，dd，J＝16.8Hz，9.6Hz)，5.69(1H，d，J＝9.6Hz)，3.94(6H，s)，3.77-3.85(2H，m)，3.52(2H，d，J＝10.8Hz)，2.48(2H，t，J＝10.8Hz)，1.27(6H，d，J＝6.4Hz)。

实施例16：2-((2-丙烯酰胺基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-((2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)乙炔基)嘧啶-4-甲酰胺

步骤1：化合物99的合成

室温下向化合物97(6.78g)、化合物98(10.0g)、碘化亚铜(340mg)、双三苯基膦二氯化钯(1.25g)和三乙胺(14.7mL)的混合物中加入DMF，氮气置换三次，升至80℃搅拌过夜，加入水，用乙酸乙酯萃取，萃取液以饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，除去溶剂，残留物经柱层析分离，得目标产物(10.5g)。

步骤2：化合物100的合成

将化合物99(1.0g)溶于THF(30mL)中，冷却至-20℃，加入磺酰氯(0.98g)，保持该温度搅拌2小时，加入水，有固体析出，过滤，滤饼用水洗并干燥，即得目标产物(1.1g)。

步骤3：化合物101的合成

将化合物100(200mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，冷却至0℃，加入m-CPBA(100mg)，升至室温搅拌过夜，加入饱和碳酸氢钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，除去溶剂，残留物直接用于下一步。

步骤4：化合物102的合成

0℃下，将化合物101(110mg)和化合物11(140mg)溶于DMF(3mL)中，加入叔丁醇钾(200mg)，升至室温搅拌30分钟，加入水，用乙酸乙酯萃取，萃取液水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物经柱层析分离(DCM/MeOH＝100/3)，得目标产物(250mg)。

步骤5：化合物103的合成

将化合物102(250mg)溶于甲醇(10mL)中，冷却至0℃，滴加氢氧化锂(51mg)和水(5mL)的混悬液，升至室温搅拌2小时，加入1N盐酸调节至pH＜7，用乙酸乙酯萃取，萃取液用硫酸钠干燥，除去溶剂，残留物直接用于下一步。

步骤6：化合物104的合成

0℃下，将化合物103溶于DMF中，加入HATU(113.0mg)，再加入氯化铵(110.0mg)和DIEA(123.0mg)，室温搅拌2小时，加入水，用乙酸乙酯萃取，萃取液水洗，硫酸钠干燥，柱层析得目标产物(75.0mg)。

步骤7：化合物105的合成

将化合物104(75mg)溶于乙酸乙酯中，加入一水合氯化亚锡(296.0mg)，加热至60℃并搅拌2小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，除去溶剂，残留物直接用于下一步。

步骤8：化合物106的合成

将化合物107溶于二氯甲烷(3mL)中，冷却至0℃，加入丙烯酰氯(17.5mg)，升至室温搅拌2小时，加入甲醇，除去溶剂，残留物通过薄层层析(DCM/MeOH＝20/1)分离得目标产物(10.0mg)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.63(1H，s)，7.51(1H，d，J＝8.8Hz)，7.28(1H，d，J＝2.8Hz)，6.93(1H，dd，J＝8.8Hz，2.8Hz)，6.81(1H，s)，6.45(1H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，6.36(1H，dd，J＝16.8Hz，2.4Hz)，5.77(1H，dd，J＝10.0Hz，2.4Hz)，3.92(6H，s)，3.33-3.42(4H，m)，3.03-3.13(4H，m)，2.92(2H，q，J＝7.2Hz)，1.29(3H，t，J＝7.2Hz)。

实施例17：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-吗啉苯基)丙烯酰胺

化合物107通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.93(1H，s)，8.25(1H，s)，7.72-7.80(1H，m)，7.56(1H，s)，7.49(1H，s)，7.26(1H，s)，6.94(1H，d，J＝8.8Hz)，6.82(1H，s)，6.41-6.43(2H，m)，5.76-5.79(1H，m)，3.99(6H，s)，3.88-3.92(m，4H)，3.22-3.25(m，4H)。

实施例18：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺

化合物108通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.88(1H，s)，8.25-8.42(1H，brs)，8.06(1H，s)，7.40-7.68(4H，m)，6.79(1H，d，J＝6.8Hz)，6.67(1H，s)，6.41(1H，d，J＝16.8Hz)，6.28(1H，dd，J＝16.8Hz，10.4Hz)，5.71(1H，d，J＝10.4Hz)，3.95(6H，s)，3.65-3.73(2H，m)，3.34-3.46(7H，m)，2.76-2.96(6H，m)。

实施例19：N-(3-氯-2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-氟苯基)丙烯酰胺

化合物109通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.61-9.78(1H，m)，9.40-9.58(1H，m)，8.98-9.28(1H，m)，8.28-8.41(0.5H)，7.98-8.16(1H，m)，7.70-7.85(0.5H，m)，7.21-7.65(3H，m)，7.07(1H，s)，6.50-6.70(1H，m)，6.18-6.31(1H，m)，5.68-5.78(1H，m)，3.99(6H，s)。

实施例20：(E)-N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-4-甲氧基丁-2-烯酰胺

化合物110通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.91(1H，s)，8.22(1H，s)，8.16(1H，s)，7.62-7.72(1H，brs)，7.51-7.61(3H，m)，6.99(1H，dt，J＝15.2Hz，4.0Hz)，6.79(1H，dd，J＝8.8Hz，2.4Hz)，6.68(1H，s)，6.21(1H，d，J＝15.2Hz)，4.08(2H，dd，J＝4.0Hz)，3.96(6H，s)，3.58-3.68(4H，m)，3.35(3H，s)，2.95-3.30(6H，m)，1.46(3H，t，J＝7.6Hz)。

实施例21：N-((3S，4S)-3-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，2]吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)丙烯酰胺

步骤1：化合物117的合成

化合物117和合成采用专利WO2018113584A1中的方法进行。

步骤2：化合物118的合成

室温下，将步骤1的化合物117(210mg)和(3S，4S)-4-叠氮-四氢-2H-吡喃-3-胺(87.0mg)溶于叔丁醇和1，2-二氯乙烷的混合溶剂中(5mL，4/1，V/V)，加入DIEA(188.0mg)，加热至90℃搅拌5小时。冷却至室温，除去溶剂，残留物通过柱层析分离获得目标产物(200mg)。

步骤3：化合物119的合成

将化合物118(100.0mg)溶于乙醇(2mL)中，加入浓氨水(3mL)，封管并于90℃下反应两天。冷却至室温，减压浓缩，残留物通过薄层层析(DCM/MeOH＝20/1)分离获得目标产物(30.0mg)。

步骤4：化合物120的合成

室温下，将步骤3的化合物119(30mg)溶于乙醇中(1mL)，加入氯乙醛水溶液(40％，1mL)，加热至80℃搅拌过夜。冷却至室温，除去溶剂，残留物通过薄层层析(DCM/MeOH＝40/1)分离获得目标产物(11mg)。

步骤5：化合物121的合成

将化合物120(11mg)溶于甲醇(2mL)中，加入钯碳(15mg)，在氢气中反应过夜，过滤，滤液减压浓缩，残留物直接用于下一步。

步骤6：化合物122的合成

将化合物121溶于二氯甲烷(2mL)中，冷却至0℃，加入丙烯酰氯(2.4mg)，升至室温搅拌2小时，加入甲醇，减压浓缩，残留物通过薄层层析(DCM/MeOH＝20/1)分离获得目标产物(0.6mg)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ9.23(1H，s)，8.14(1H，s)，7.88(1H，s)，7.58-7.72(3H，m)，7.13(1H，s)，5.96-6.05(1H，m)，4.38-4.46(1H，m)，4.29(1H，t，J＝6.8Hz)，4.20-4.22(1H，m)，4.04(6H，s)，3.98-4.02(1H，m)，3.81-3.86(1H，m)，3.66-3.71(1H，m)，1.73-1.80(1H，m)，1.58-1.64(1H，m)。

实施例22：2-氰基-N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)乙酰胺

化合物123通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.20-10.41(1H，brs)，9.78(1H，s)，9.44(1H，s)，9.12(1H，s)，8.14(1H，s)，7.60-7.72(1H，m)，7.52(2H，s)，7.30-7.38(1H，m)，7.07(1H，s)，6.95(1H，d，J＝7.6Hz)，3.99(6H，s)，3.89(2H，s)，3.70-3.88(2H，m)，3.50-3.66(2H，m)，2.98-3.28(6H，m)，1.28(3H，t，J＝7.6Hz)。

实施例23：(±)-N-((3，4-顺)-4-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-yl)氨基)四氢呋喃-3-基)丙烯酰胺

化合物124通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.93(1H，s)，8.44(1H，s)，7.49(1H，s)，7.39(1H，s)，6.94(1H，s)，5.83-6.36(2H，m)，5.31-5.42(1H，m)，5.03(q，J＝5.2Hz，1H)，4.85-4.98(1H，m)，4.20-4.30(1H，m)，4.14(1H，dd，J＝9.2Hz，6.8Hz)，3.98(6H，s)，3.73-3.97(1H，m)，3.78(1H，dd，J＝9.2Hz，6.0Hz)。

实施例24：N-(2-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-8，9-二氢咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)-5-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺

步骤1：化合物126的合成

室温下，将化合物125(1.19g)溶于无水乙酸(20mL)中，然后加入亚硝酸钠(1.04g)。将此混合物加热至60℃搅拌3小时。冷却至室温后，加入200mL水，过滤产生的黄色固体并真空干燥得到化合物126(0.956g)。

步骤2：化合物127的合成

0℃下，将上述所得固体溶于30mL三氯氧磷，然后将此混合物加热至100℃搅拌2小时。冷却至室温，减压浓缩混合物，然后向残余物中加入100mL冷水，剧烈搅拌。过滤产生的淡黄色固体并真空干燥得到化合物127(0.85g)。

步骤3：化合物128的合成

将化合物127(0.208mg)溶于1，4-二氧六环(5mL)中，冷却至在0℃加入氨基乙醇(0.5mL)。将此混合物加热至50℃搅拌21小时，将混合物倒入冰水(50mL)中。混合物用二氯甲烷萃取，萃取液用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得标题化合物(0.22g)。

步骤4：化合物129的合成

在0℃下，向化合物128(0.22g)的二氯甲烷溶液(30mL)中缓慢加入间氯过氧化苯甲酸(0.2g)，加完后在0℃下继续搅拌2小时。然后滴加10mL饱和亚硫酸钠水溶液搅拌10分钟后分层，有机相分离，用饱和碳酸钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，将残留物用硅胶柱色谱法(DCM/MeOH＝100/1)纯化得化合物129(0.15g)。

步骤5：化合物130的合成

在20℃下，将化合物129(0.15g)溶于10mL三氯氧磷，加入一滴DMF后加热至70℃搅拌3小时，减压浓缩混合物，然后向残余物中加入50mL冷水，搅拌下继续加入饱和碳酸氢钠水溶液使其呈中性。过滤产生的淡黄色固体并真空干燥得到化合物130(0.1g)。

步骤6：化合物131的合成

在0℃下，向化合物130(46mg)的DMF(10mL)溶液中依次加入化合物11(50mg)和固体叔丁醇钾(40mg)，并升至室温搅拌1小时。将混合物倒入50mL冷水中，乙酸乙酯萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，将残留物用硅胶柱色谱法(DCM/MeOH＝100/3)纯化得化合物131(50mg)。

步骤7：化合物132的合成

在0℃下，向化合物131(50mg)的DMF(5mL)溶液中加入固体氯化亚锡(50mg)，并于室温下搅拌2小时。将混合物倒入20mL水中，用饱和碳酸氢钠水溶液调节混合物至pH＝7。过滤除去固体，滤液用乙酸乙酯萃取，萃取液用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后得化合物132(40mg)。

步骤8：化合物133的合成

在0℃下，向化合物132(30mg)的二氯甲烷(5mL)溶液中依次加入DIEA(50mg)和丙烯酰氯(5mg)并搅拌1小时。将混合物真空浓缩，所得残余物经柱色谱纯化(DCM/MeOH＝100/2)后得化合物133(20mg)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.92(1H，s)，9.30-9.51(1H，brs)，8.71(1H，s)，7.72-7.88(1H，m)，7.51-7.64(1H，m)，7.30(1H，s)，7.06(1H，s)，6.89(1H，dd，J＝8.8Hz，2.4Hz)，6.53(1H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，6.26(1H，dd，J＝16.8Hz，1.6Hz)，5.75(1H，dd，J＝10.0Hz，1.6Hz)，4.28-4.42(2H，m)，3.91-4.05(8H，m)，2.88-3.35(10H，m)，1.24(3H，t，J＝7.6Hz)。

实施例25：N-((3S，4S)-3-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-5-氧-5，6-二氢咪唑并[1，2-a]嘧啶并[5，4-e]嘧啶-2-基)氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)丙烯酰胺

步骤1：化合物136的合成

在0℃下，将氢化钠(0.23g)分批加入化合物134(0.94g)的DMF(20mL)溶液中并搅拌10分钟，然后加入化合物135(0.81g)，然后升至室温搅拌6小时，将混合物倒入水中，乙酸乙酯萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经硅胶柱色谱(DCM/MeOH＝100/5)分离得化合物136(0.77g)。

步骤2：化合物137的合成

将化合物136(0.77g)加入DIEA(2mL)的三氯氧磷(10mL)溶液中，然后加热至100℃搅拌4小时，将混合物缓慢倒入冰水中，二氯甲烷萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经硅胶柱色谱(DCM/MeOH＝100/2)分离得化合物137(0.56g)。

步骤3：化合物138的合成

将化合物137(0.56g)加入2，2-二甲氧基乙烷-1-胺(0.29mL)的乙腈(20mL)溶液中，然后加热至80℃搅拌1小时，将混合物缓慢倒入冰水中，二氯甲烷萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经硅胶柱色谱(DCM/MeOH＝20/1)分离得化合物138(0.65g)。

步骤4：化合物139的合成

将浓盐酸(0.1mL)加入化合物138(0.65g)的乙腈(20mL)溶液中，然后加热至180℃微波反应15分钟，将混合物缓慢倒入冰水中，二氯甲烷萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经硅胶柱色谱(DCM/MeOH＝100/1)分离得化合物139(0.48g)。

步骤5：化合物141的合成

将m-CPBA(0.25g，1.44mmol)加入化合物139(0.27g)的甲苯(10mL)溶液中并搅拌30分钟，然后先后加入DIEA(0.5mL)和化合物140(0.16g)，室温搅拌2小时，将混合物缓慢倒入冰水中，二氯甲烷萃取，萃取液先后用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经硅胶柱色谱(DCM/MeOH＝100/1)分离得化合物141(0.14g)。

步骤6：化合物142的合成

将三苯基膦(0.18g)加入到化合物141(0.14g)的THF/H₂O(3/1，4mL)溶液中，室温搅拌20小时，将混合物倒入水中，二氯甲烷萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经硅胶柱色谱(DCM/MeOH＝10/1)分离得化合物142(80mg)。

步骤7：化合物143的合成

在0℃下，将丙烯酰氯(9mg)滴加入化合物142(40mg)和DIEA(10mg)的氯仿(5mL)溶液中，并在0℃下搅拌30分钟，将混合物缓慢倒入冰水中，二氯甲烷萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经薄层色谱法(DCM/MeOH＝20/1)分离得化合物143(20mg)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.14(1H，s)，7.70(0.7H，s)，7.65(0.3H，s)，7.06(0.3H，s)，7.02(0.7H，s)，6.72(1H，s)，6.58(1H，d，J＝7.6Hz)，6.45(0.3H，d，J＝7.6Hz)，6.25(0.3H，d，J＝16.8Hz)，6.15(0.7H，d，J＝16.8Hz)，6.98(0.3H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，5.87(0.7H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，5.74(0.7H，d，J＝8.4Hz)，5.64(0.3H，d，J＝10.4Hz)，5.47(0.7H，d，J＝10.4Hz)，4.82(0.7H，d，J＝8.4Hz)，4.60(0.3H，d，J＝8.4Hz)，4.26-4.42(1H，m)，4.06-4.14(1H，m)，3.99(1H，d，J＝10.8Hz)，3.97(6H，s)，3.78(1H，d，J＝10.8Hz)，3.58-3.68(1H，m)，2.10-2.18(0.3H，m)，1.80-1.92(1.7H，m)。

实施例26：N-((3S，4S)-3-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-8，9-二氢咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)丙烯酰胺

化合物144通过实施例24描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.09(1H，s)，8.86(1H，s)，8.05-8.50(1H，brs)，7.99-8.05(1H，m)，7.09(1H，s)，6.26(0.3H，dd，J＝17.2Hz，10.0Hz)，6.14(0.7H，dd，J＝17.2Hz，10.0Hz)，6.02-6.08(1H，m)，5.57(0.3H，dd，J＝10.0Hz，2.0Hz)，5.48(0.7H，dd，J＝10.0Hz，2.0Hz)，4.41-4.52(1H，m)，4.23-4.34(1H，m)，3.86-4.06(8H，m)，3.48-3.69(2H，m)，1.94-2.06(1H，m)，1.58-1.70(1H，m)。

实施例27：2-(((3S，4S)-4-丙烯酰胺基四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-9-甲酸乙酯

步骤1：化合物147的合成

将化合物145(650mg)和化合物146(616.0mg)混合于醋酸(15mL)中，加热至100℃搅拌过夜，除去溶剂，加入碳酸钠饱和溶液，乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，残留物通过柱层析分离得目标产物(187.0mg)。

步骤2：化合物148的合成

将步化合物147(187mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入m-CPBA(133mg)，搅拌2小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，残留物直接用于下一步。

步骤3：化合物149的合成

将化合物148(170mg)和化合物140(70mg)溶于叔丁醇和1，2-二氯乙烷的混合溶剂中(5mL，4/1，V/V)，加入DIEA，加热至90℃搅拌过夜，除去溶剂，残留物通过柱层析(DCM/MeOH＝100/2)纯化，得目标产物(106mg)。

步骤4：化合物150的合成

将化合物149(50mg)溶于甲醇(3mL)中，加入钯碳(50mg)，在氢气氛中反应过夜，过滤除去钯碳，滤液减压浓缩，残留物直接用于下一步。

步骤5：化合物151的合成

将化合物150溶于二氯甲烷(2mL)中，冷却至0℃，加入丙烯酰氯(10mg)，升至室温搅拌2小时，加入甲醇，减压浓缩，残留物通过薄层层析(DCM/MeOH＝30/1)纯化，得化合物151(10mg)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.90(1H，s)，8.04(1H，s)，7.42(1H，s)，6.70(1H，s)，6.64(1H，d，J＝6.0Hz)，6.30-6.45(1H，brs)，6.18(1H，d，J＝16.8Hz)，5.93(1H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，5.50(1H，d，J＝8.8Hz)，4.58(1H，d，J＝8.0Hz)，4.24-4.46(3H，m)，4.01-4.09(2H，m)，3.97(3H，s)，3.97(3H，s)，3.79(1H，d，J＝12.8Hz)，3.64(1H，t，J＝12.8Hz)，2.18-2.30(1H，m)，1.78-1.90(1H，m)，1.39(3H，t，J＝7.2Hz)。

实施例28：2-(((3S，4S)-4-丙烯酰胺基四氢-2H-吡喃-3-基)氨基)-6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-9-甲酰胺

步骤1：化合物152的合成

将化合物149(50mg)溶于1，4-二氧六环中(1mL)，加入浓氨水(2mL)，加热至90℃搅拌过夜。冷却至室温，减压浓缩，残留物直接用于下一步。

步骤B：化合物153的合成

化合物153的合成方法同实施例27中步骤4和步骤5相同。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.90(1H，s)，8.05-8.32(1H，brs)，7.36(1H，s)，6.89(1H，s)，6.40(1H，d，J＝8.4Hz)，6.25(1H，d，J＝16.8Hz)，6.01-6.18(1H，brs)，6.97(1H，dd，J＝16.8Hz，10.4Hz)，5.59(1H，d，J＝10.4Hz)，4.41-4.66(2H，m)，4.02-4.09(1H，m)，3.92-3.99(7H，m)，3.81(1H，d，J＝11.2Hz)，3.65(1H，t，J＝11.2Hz)。

实施例29：2-氰基-N-((3S，4S)-3-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基)氨基)四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺

化合物154通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.90(1H，s)，8.33(1H，s)，7.54(1H，s)，7.32(1H，s)，6.80(1H，s)，4.78-4.85(1H，m)，4.27-4.31(1H，m)，4.07-4.13(1H，m)，3.98-4.03(7H，m)，3.79(1H.，dd，J＝12.0Hz，1.6Hz)，3.64(1H，td，J＝12.0Hz，2.4Hz)，3.13-3.33(2H，m)，1.95-2.06(1H，m)，1.82(1H，d，J＝12.0Hz)。

实施例30：(1R，3R，4S)-4-丙烯酰胺基-3-((6-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)咪唑并[1′，2′：1，6]吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基)-N，N-二甲基环己基-1-甲酰胺

化合物155通过实施例2描述的方法合成。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.01(1H，s)，8.44(1H，s)，8.17(1H，d，J＝7.2Hz)，7.99(1H，d，J＝7.2Hz)，7.53(1H，s)，7.44(1H，s)，7.06(1H，s)，6.36(1H，dd，J＝16.8Hz，10.0Hz)，6.11(1H，d，J＝16.8Hz)，5.55(1H，d，J＝10.0Hz)，4.38-4.45(1H，m)，4.07-4.18(1H，m)，3.99(6H，m)，3.12-3.23(1H，m)，3.03(3H，s)，2.89(3H，s)，2.17-2.27(1H，m)，1.52-1.95(5H，m)。

生物活性实验：

1.化合物的体外蛋白活性测定：

采取匀相时间分辨荧光(HTRF)方法建立了FGFR-4激酶活性检测平台，进行化合物活性的测定。将化合物从1000μM用100％DMSO进行3倍的梯度稀释11次(共12个浓度)，每个浓度取4μL加入到96μL的反应缓冲液中(50mM HEPES，pH 7.4，5mM MnCl₂，0.1mM NaVO₃，0.001％Tween-20，0.01％BAS，1mM DTT)混匀，作为4*化合物(终浓度0.017nM～1000nM)待用。使用反应缓冲液配制2*FGFR-4激酶(终浓度为1nM)，用反应缓冲液配制4*底物(ATP+TKpeptide)(TK peptide，

KinEASE^TM-TK，购买于Cisbio，TK肽，终浓度为1μM，ATP终浓度为25μM)。取2.5μL的4*化合物加入到384孔板(OptiPlate-384，购买于PerkinElmer)，然后加入5μL的2*FGFR-4激酶，离心混匀，再加入2.5μL的4*底物混合物启动反应(总反应体积为10μL)。将384孔板放于孵育箱中23℃下搅拌60分钟，然后加入5μL的Eu³⁺ cryptate-labled anti-phosphotyrosine antibody(

KinEASE^TM-TK，购买于Cisbio)，5μL的Streptavidin-XL-665(

KinEASE^TM-TK，购买于Cisbio)停止反应。在孵育箱中孵育1小时后，在Envision(购买于PerkinElmer)上读取荧光值(320nm激发，检测665nm与620nm的发射光，二者比值为酶活性)。每个化合物分别在12个浓度下测定酶的活性，数据使用GraphPad prism 5.0软件计算得到该化合物的IC₅₀值。

表2.实施例化合物对FGFR4抑制作用

2.化合物的细胞增殖活性测定：

采用Promega公司的Cell Titer-Glo

检测试剂建立了悬浮细胞增殖抑制筛选方法。人肝癌细胞Hep3b(协和细胞研究中心)用补充有10％胎牛血清

的MEM

培养基进行培养，培养条件是37℃，95％空气和5％的CO₂，培养于25cm²或75cm²塑料组织培养瓶

中，一周传代培养2～3次。

将Hep3b细胞以3×10³细胞/孔的密度接种在96-孔细胞培养板

中，195Ml/孔，并在37℃，95％空气和5％的CO₂中进行培养。24小时后加入待测化合物：将化合物从10Mm(溶于DMSO中)开始用DMSO进行3倍梯度稀释，每个浓度取4Ml加入到96Ml的无血清培养基中，最后取5Ml培养基稀释后的化合物加入到接种有细胞的培养版中。细胞培养液中DMSO的终浓度为0.1％，所试化合物的终浓度是0.3Nm～10Mm。将上述细胞37℃温育3天。

3天后，通过Cell Titer-Glo(Promega)试剂盒进行细胞活力测定，最后通过GraphPad Prism 5.0程序计算化合物对细胞增殖的半抑制浓度，即IC₅₀值。

表3.化合物对Hep3b细胞系的抑制作用