CN110913833B

CN110913833B - 包含槲皮素类化合物的美白组合物

Info

Publication number: CN110913833B
Application number: CN201880039244.7A
Authority: CN
Inventors: 洪勇德; 金正基
Original assignee: Amorepacific Corp
Current assignee: Amorepacific Corp
Priority date: 2017-06-12
Filing date: 2018-06-11
Publication date: 2023-02-21
Anticipated expiration: 2038-06-11
Also published as: JP2020523291A; WO2018230906A1; US11306117B2; JP7121757B2; KR20180135305A; US20200140474A1; CN110913833A; KR102371419B1

Abstract

本说明书涉及一种美白组合物，其包含从后发酵茶中分离的新槲皮素类化合物、其异构体、其药学上可接受的盐、其水合物、其溶剂化物，其中所述美白组合物可以广泛用于与皮肤美白和皮肤护理相关的领域。

Description

包含槲皮素类化合物的美白组合物

技术领域

本说明书涉及一种包含新槲皮素类化合物的美白组合物。

背景技术

最近，由于环境污染或臭氧层破坏引起的紫外线增加，消费者对美白的兴趣正在增加。然而，由于已经报道了用人工合成物制成的化学合成化妆品的大量副作用和超敏反应，因此为从天然物质获得化妆品原料积极地进行了尝试。迄今已鉴定出的曲酸、熊果苷或其衍生物尚未充分用作化妆品原料，因为它们在安全性或稳定性上有问题，或者当实际上掺混用作化妆品原料时它们的美白效果不足。因此，已经持续地进行了在天然物质中寻找美白活性成分的研究，并且已经发现了显示出抑制酪氨酸酶活性的物质。然而，例如稳定性或适当的有效浓度的问题仍待解决。

另一方面，绿茶可以以叶茶的形式或为感受更深的香味而以发酵茶的形式饮用。发酵绿茶是指对绿茶叶进行氧化处理，包括由茶叶中存在的氧化酶氧化的发酵茶，以及由不是茶叶中存在的酶的分离的微生物发酵的后发酵茶。根据发酵程度，可分为轻发酵茶、半发酵茶和全发酵茶等。例如，根据发酵的类型和程度，发酵绿茶被称为各种名称，例如绿茶、乌龙茶、红茶、普洱茶等。

与叶茶相比，发酵茶可能不仅会表现出香味差异，而且根据特定的发酵过程和微生物种类，有效成分的种类和含量也可能表现出很大差异。由于可以生产和分离各种化合物，因此一直在进行各种努力使用绿茶来分离和鉴定未知新化合物。

[引文清单]

[专利文献]

[专利文献1]韩国专利第10-0975199号

发明内容

[技术问题]

在一方面，本发明的一个目的是将后发酵茶来源的新槲皮素类化合物用于美白。

[技术方案]

根据一种实施方式，本发明提供了一种美白组合物，其包含以下物质作为有效成分：以下式 1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物、其溶剂化物、或包含上述物质的后发酵茶提取物。

[式1]

在式1中，R₁可以为C₁₅H₉O₇，R₂可以为H或C₆H₁₁O₅，并且R₃可以为C₉H₇O₂。另外，在本发明的另一方面，该组合物可以是抑制酪氨酸酶活性和黑色素生成中的一种或多种的组合物。

根据一种实施方式，本发明提供了一种用于皮肤美白的方法，其包括向有需要的对象给药式 1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物、其溶剂化物、或包含上述物质的后发酵茶提取物。

根据一种实施方式，本发明提供了式1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物、其溶剂化物、或包含上述物质的后发酵茶提取物在制备皮肤美白组合物中的用途。根据一种实施方式，本发明提供了用于皮肤美白的式1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物、其溶剂化物、或包含上述物质的后发酵茶提取物。

[发明的有益效果]

在一方面，本发明使得从后发酵茶中分离出的新化合物可用于美白领域，因而可广泛应用于后发酵茶相关产业、皮肤护理相关领域。

附图说明

图1显示了槲皮素3-O-[3-O"-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的MS光谱。

图2显示了槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的¹H-NMR(核磁共振)光谱。

图3显示了槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的¹³C-NMR光谱。

图4显示了槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的¹H-¹³C HSQC(异核单量子相关)光谱。

图5显示了槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的¹H-¹³C HMBC(异核多键相关)光谱。

图6显示了槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷] 的MS光谱。

图7显示了槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷] 的¹H-NMR(核磁共振)光谱。

图8显示了槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷] 的¹³C-NMR光谱。

图9显示了槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷] 的¹H-¹³C HSQC(异核单量子相关)光谱。

图10显示了槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的¹H-¹³C HMBC(异核多键相关)光谱。

具体实施方式

在下文中，将详细解释本发明。

在本说明书中，术语“后发酵”包括由不在茶叶中存在的酶的分离的微生物或物质发酵。后发酵茶包括通过上述方法发酵的绿茶。

在本说明书中，术语“提取物”包括通过提取天然物质内包含的成分而获得的所有物质，无论提取方法或成分如何。该术语具有广泛的概念，包括：例如使用水或有机溶剂从天然物质中提取可溶于溶剂的成分而获得的物质；仅提取特定成分，例如天然物质的特定成分(例如油)所获得的物质；以及通过对如上获得的物质再次用特定溶剂等进行分级而获得的级分等。在本说明书中，术语“级分”包括通过使用特定溶剂对特定物质或提取物进行分级而获得的物质或分级后剩下的物质，以及将这些物质再次用特定溶剂提取而获得的物质。可以使用本领域技术人员已知的任何分级方法和提取方法。

在本说明书中，术语“异构体”不仅特别地包括光学异构体(例如，基本上纯的对映异构体、基本上纯的非对映异构体或其混合物)，而且还包括构象异构体(即，仅在它们的一个或多个化学键的角度上不同的异构体)、位置异构体(特别是互变异构体)或几何异构体(例如顺反异构体)。

在本说明书中，术语“基本上纯的”是指，例如当与对映异构体或非对映异构体一起使用时，特定化合物例如对映异构体或非对映异构体存在的量为约90w/w％或更多、优选约95w/w％或更多、更优选约97w/w％或更多或约98w/w％或更多、甚至更优选约99w/w％或更多、甚至更进一步优选约99.5w/w％或更多。

在本说明书中，术语“药学上可接受的”是指当以常规药物剂量使用时通过避免显著毒性作用而可以被批准或被政府或等效监管机构批准用于动物，更具体地用于人类，或在药典中或在其他一般药典中列出而得到公认。

在本说明书中，术语“药学上可接受的盐”是指根据本发明一方面的药学上可接受的并且具有母体化合物的所需药理活性的盐。该盐可包括(1)由无机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或由有机酸形成的酸加成盐，所述有机酸例如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2,2,2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸；或(2)取代存在于母体化合物中的酸性质子时形成的盐。

在本说明书中，术语“水合物”是指与水键合的化合物，并且具有广泛的概念，包括在水与该化合物之间没有化学键合力的包合化合物。

在本说明书中，术语“溶剂化物”是指在溶质的分子或离子与溶剂的分子或离子之间形成的更高级的化合物。

在一个方面，本发明提供了一种皮肤美白组合物，其包含以下物质作为有效成分：下式1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物、其溶剂化物、或包含上述物质的后发酵茶提取物。

[式1]

在上式1中，R₁可以为C₁₅H₉O₇，R₂可以为H或C₆H₁₁O₅，并且R₃可以为C₉H₇O₂。根据一种实施方式，R₁可以是下式2的化合物。

[式2]

在另一种实施方式中，R₂可以是下式3的化合物。

[式3]

R₃可以是下式4的化合物。

[式4]

根据另一种实施方式，该化合物可以是槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]。槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]可以由下式5 表示。

[式5]

根据另一种实施方式，该化合物可以是槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]。槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]可以由下式6表示。

[式6]

根据本发明的一个方面，一种用于制备化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物或其溶剂化物的方法可以包括合成、从天然物质中分离等。

根据另一种实施方式，发酵后可以通过菌株接种来进行，其中该菌株可以是选自酵母属 (Saccharomyces sp.)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、乳杆菌属(Lactobacillussp.)和明串珠菌属(Leuconostoc mesenteroides sp.)的菌株，并且可以优选地选自啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtlis)，保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgarius)和肠系膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)。根据另一种实施方式，后发酵茶可以是通过绿茶后发酵获得的茶。

在本发明的一方面，作为本发明人不断研究后发酵茶的结果，获得了该化合物，并且发现该化合物有效抑制酪氨酸酶活性和黑色素生成中的一种或多种。因此，本发明人已经证明，使用根据本发明的一方面的化合物，该化合物可以用于皮肤美白或皮肤护理(见测试例1和2)。黑色素见于动物的外皮、羽毛、皮肤、头部、眼睛等中。黑色素过量产生时，可能沉积在皮肤上形成斑和雀斑等，促进皮肤老化，甚至引起皮肤癌。由黑色素过度产生引起的疾病或症状可能是选自斑、雀斑、老年斑、斑痕、表皮黑色素细胞病变、咖啡牛奶斑(cafe'sau lait macules)、胎记、贝克氏痣、斑痣、黑痣(lentigines)、黑斑(lentigos)、真皮黑色素细胞病变、蒙古斑、太田痣、后天性两侧性太田痣样斑、伊藤痣、蓝色痣、黑色素细胞痣、交界痣、复合痣、真皮内痣、晕轮痣、先天性痣细胞痣、斯皮茨痣、发育不良痣、黑色素瘤、恶性黑痣性黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、肢端黑痣性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、色素性基底细胞癌、色素性皮肤纤维瘤、色素性皮样囊肿、色素性瘢痕疙瘩、紫外线辐射诱发的色素沉着(尤其是黑色素)、药物诱发的色素沉着(尤其是黑色素)、炎症后色素沉着(尤其是黑色素)、皮炎引起的色素沉着(尤其是黑色素)和色素性角化棘皮瘤。

根据本发明一方面的化合物有效抑制酪氨酸酶活性和黑色素生成中的一种或多种，因此该化合物还可用于预防、治疗和改善由黑色素沉积和过度产生引起的疾病或症状等(见测试例1 和2)。

根据一种实施方式，提取可以是通过选自热水、C₁至C₆低级醇、及其混合溶剂中的一种或多种溶剂的提取，并且在另一种实施方式中，低级醇可以是单独的醇，也可以是相关领域通常可以使用的混合物，优选可以是乙醇。

根据本发明的另一方面，该提取物可以是提取后通过用酮对提取物分级所获得的级分。

在另一种实施方式中，酮的实例可包括丙酮、香芹酮、长叶薄荷酮、异长叶烷酮、2-庚酮、 2-戊酮、3-己酮、3-庚酮、4-庚酮、2-辛酮、3-辛酮、2-壬酮、3-壬酮、2-十一烷酮、2-十三烷酮、甲基异丙基酮、乙基异戊基酮、丁烯丙酮、甲基庚烯酮、二甲基辛烯酮、香叶基丙酮、法呢基丙酮、2,3-戊二酮、2,3-己二酮、3,4-己二酮、2,3-庚二酮、戊基环戊酮、戊基环戊烯酮、 2-环戊基环戊酮、己基环戊酮、2-正庚基环戊酮、顺式茉莉酮、二氢茉莉酮、二甲基环戊烯醇酮(methyl corylone)、2-叔丁基环己酮、对叔丁基环己酮、2-仲丁基环己酮、芹菜酮、隐酮、对叔戊基环己酮、甲基环柠檬酮、橙花酮、4-环己基-4-甲基-2-戊酮、酮氧化物、emoxyprone、甲基萘酮、α-甲基茴香叉丙酮、茴香基丙酮、对甲氧基苯基丙酮、亚苄基丙酮、对甲氧基苯乙酮、对甲基苯乙酮、丙苯酮、苯乙酮、α-王朝酮、埃里酮、紫罗酮、假紫罗酮、甲基紫罗酮、甲基埃里酮、2,4-二叔丁基环己酮、烯丙基紫罗酮、2-乙酰基-3,3-二甲基降冰片烷、马鞭草烯酮、葑酮、环十五烷酮、环十六烯酮等，可以包括相关领域中通常可以使用的全部酮及其混合物作为溶剂，并且可以优选丙酮。

根据本发明的一方面，相对于组合物的总重量，组合物中的式1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物或其溶剂化物的含量可以为0.00001重量％至10重量％。相对于组合物的总重量，该含量可以为0.00001重量％或更多、0.00005重量％或更多、0.0001 重量％或更多、0.0005重量％或更多、0.001重量％或更多、0.005重量％或更多、0.01重量％或更多、0.05重量％或更多、0.1重量％或更多、0.5重量％或更多、1重量％或更多、2重量％或更多、3重量％或更多、4重量％或更多、5重量％或更多、6重量％或更多、7重量％或更多、8重量％或更多、或9重量％或更多。另外，该含量可以为10重量％或更少、9重量％或更少、8重量％或更少、7重量％或更少、6重量％或更少、5重量％或更少、4重量％或更少、 3重量％或更少、2重量％或更少、1重量％或更少、0.5重量％或更少、0.1重量％或更少、0.05 重量％或更少、0.01重量％或更少、0.005重量％或更少、0.001重量％或更少、0.0005重量％或更少、0.0001重量％或更少、0.00005重量％或更少、或0.00003重量％或更少。

根据本发明的另一方面，相对于组合物的总重量，，组合物中后发酵茶提取物的含量可以为 0.1重量％至90重量％。相对于组合物的总重量，该含量可以为0.1重量％或更多、1重量％或更多、5重量％或更多、10重量％或更多、15重量％或更多、20重量％或更多、25重量％或更多、30重量％或更多、35重量％或更多、40重量％或更多、45重量％或更多、50重量％或更多、55重量％或更多、60重量％或更多、65重量％或更多、70重量％或更多、75重量％或更多、80重量％或更多、或85重量％或更多。另外，该量可以为90重量％或更少、85重量％或更少、80重量％或更少、75重量％或更少、70重量％或更少、65重量％或更少、60重量％或更少、55重量％或更少、50重量％或更少、45重量％或更少、40重量％或更少、35重量％或更少、30重量％或更少、25重量％或更少、20重量％或更少、15重量％或更少、10重量％或更少、5重量％或更少、1重量％或更少、或0.5重量％或更少。

根据本发明的另一方面，基于提取物的总重量，提取物包含的式1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物或其溶剂化物的含量可以为0.00001重量％或更多、0.00005 重量％或更多、0.0001重量％或更多、0.0005重量％或更多、0.001重量％或更多、0.005重量％或更多、0.01重量％或更多、0.05重量％或更多、0.1重量％或更多、0.5重量％或更多、1重量％或更多、3重量％或更多、5重量％或更多、7重量％或更多、10重量％或更多、12重量％或更多、15重量％或更多、或18重量％或更多。在另一方面，提取物包含的式1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物或其溶剂化物的含量可以为20重量％或更少、 15重量％或更少、12重量％或更少、10重量％或更少、7重量％或更少、5重量％或更少、3 重量％或更少、1重量％或更少、0.5重量％或更少、0.1重量％或更少、0.05重量％或更少、 0.01重量％或更少、0.005重量％或更少、0.001重量％或更少、0.0005重量％或更少、0.0003 重量％或更少、0.00005重量％或更少、或0.00003重量％或更少。优选地，基于提取物的总重量，提取物包含的式1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物或其溶剂化物的量可以为0.00001重量％至20重量％。

根据本发明的另一方面，通过给药组合物，式1的化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、其水合物或其溶剂化物的剂量可以为0.00001mg/kg/天至100mg/kg/天。该剂量可以是 0.00001mg/kg/天或更多、0.0001mg/kg/天或更多、0.001mg/kg/天或更多、0.005mg/kg/天或更多、0.01mg/kg/天或更多、0.05mg/kg/天或更多、0.1mg/kg/天或更多、0.5mg/kg/天或更多、 1mg/kg/天或更多、5mg/kg/天或更多、10mg/kg/天或更多、15mg/kg/天或更多、20mg/kg/ 天或更多、25mg/kg/天或更多、30mg/kg/天或更多、35mg/kg/天或更多、40mg/kg/天或更多、 45mg/kg/天或更多、50mg/kg/天或更多、55mg/kg/天或更多、60mg/kg/天或更多、65mg/kg/ 天或更多、7mg/kg/天或更多、75mg/kg/天或更多、80mg/kg/天或更多、85mg/kg/天或更多、 90mg/kg/天或更多、或95mg/kg/天或更多。另外，该剂量可以为100mg/kg/天或更少、95 mg/kg/天或更少、90mg/kg/天或更少、85mg/kg/天或更少、80mg/kg/天或更少、75mg/kg/天或更少、70mg/kg/天或更少、65mg/kg/天或更少、60mg/kg/天或更少、55mg/kg/天或更少、 50mg/kg/天或更少、45mg/kg/天或更少、40mg/kg/天或更少、35mg/kg/天或更少、30mg/kg/ 天或更少、25mg/kg/天或更少、20mg/kg/天或更少、15mg/kg/天或更少、10mg/kg/天或更少、 5mg/kg/天或更少、1mg/kg/天或更少、0.5mg/kg/天或更少、0.1mg/kg/天或更少、0.05mg/kg/ 天或更少、0.01mg/kg/天或更少、0.005mg/kg/天或更少、0.003mg/kg/天或更少、0.001mg/kg/ 天或更少、0.0005mg/kg/天或更少、0.0001mg/kg/天或更少、或0.00005mg/kg/天或更少。根据本发明的另一方面，该组合物可以是食品组合物、化妆品组合物或药物组合物。

根据本发明的一方面的食品组合物可以是保健食品组合物。在保健食品组合物中，化合物的剂量确定在本领域技术人员的水平之内，并且可以根据待给药的对象的年龄、健康状况和并发症等多种因素而变化。

根据本发明的一方面的保健食品组合物可以是保健功能食品，并且也可以包括任何形式的加工食品，例如各种食品(例如口香糖、焦糖产品、糖果、冰淇淋、点心、面包等)和饮料(例如软饮料、矿泉水、酒精饮料等)，并且可以是包含维生素、矿物质等的功能性食品。

除上述之外，根据本发明的一方面的保健食品组合物可以包含各种营养补充剂、维生素、矿物质(电解质)、调味剂(例如合成调味剂和天然调味剂)、着色剂和增强剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇和用于碳酸化饮料的碳酸化剂等。另外，根据本发明的一方面的保健食品组合物可包含天然果汁和用于制备果汁饮料和蔬菜饮料的果肉。这些成分可以单独使用或组合使用。这样的添加剂的比例不是很关键，但是根据本发明的一方面，每100重量份的组合物通常包含量为0至约50重量份的添加剂。

根据本发明的一方面的化妆品组合物可以是用于皮肤、指甲和/或头发的组合物，并且可以具有例如以下的剂型：柔肤乳液、收敛乳液、滋润乳液、滋养霜、按摩霜、眼霜、眼部精华液、精华液、洁面霜、洁面乳、洁面泡沫、洁面水、面膜、粉剂、身体乳液、身体乳霜、身体精华液、沐浴露、染发剂、洗发水、润发素、护发素、生发剂、软膏、凝胶、霜、贴剂、气雾剂和皮肤贴类型等，但不限于此。

另外，在每种制剂中，本领域技术人员可以根据其他外用试剂的种类或使用目的适当地选择并掺混除上述必需成分以外的成分。

化妆品组合物可以以适合局部应用的任何剂型提供。例如，可以以溶液、通过使油相在水相中分散而获得的乳液、通过使水相在油相中分散而获得的乳液、悬浮液、固体、凝胶、粉剂、糊剂、微针、泡沫或气雾剂组合物的形式提供。这些剂型的组合物可以根据相关领域中的常规方法来制备。

除了本说明书的化合物、提取物或级分之外，根据本说明书的化妆品组合物还可包含在一般化妆品组合物中包含的功能性添加剂和成分。功能添加剂的实例可包括选自水溶性维生素、油溶性维生素、聚合物肽、聚合物多糖、鞘脂和海藻提取物的成分。在不损害主要作用的范围内，根据本说明书的化妆品组合物优选可以包含可对主要作用产生协同作用的其他成分。另外，根据本说明书的化妆品组合物还可包含保湿剂、润肤剂、表面活性剂、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、pH调节剂、有机和无机颜料、香料、冷感剂或止汗剂。本领域技术人员可以在不损害本说明书的目的和效果的范围内容易地选择成分的掺混量，基于组合物的总重量，该掺混量可以为0.001至10重量％，特别是0.01至3重量％。

根据另一种实施方式，该组合物可以是皮肤外用剂组合物。皮肤外用剂组合物可以是用于皮肤外用的化妆品、口腔制剂、清洁剂、药物和准药物的组合物，但不限于此。皮肤外用剂的剂型没有特别限制。

另外，本说明书的皮肤外用剂可以进一步包括选自用于特定目的的功能性盐和用于调节pH 的pH调节剂中的一种或多种。在此，该盐可以选自用于离子屏蔽、保湿、防紫外线等的无机盐、有机盐和/或有机-无机盐。作为具体的实例，该盐可以选自氯化钠(NaCl)、磷酸钠 (Na₃PO₄)、氯化钙(CaCl₂)等。所述pH调节剂选自酸或碱，例如可以选自盐酸、硫酸、酒石酸、柠檬酸、磷酸、乙酸、乳酸、乳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、烷基胺、烷醇胺和氨等。

本说明书的皮肤外用剂组合物可以是用于外用的化妆品、药物和准药物的组合物，其中所述用于外用的化妆品、药物或准药物的组合物可以另外包含防腐剂、稳定剂、水合剂或乳化剂、用于控制渗透压的盐和/或缓冲液等助剂和其他治疗上有用的成分。组合物可以为洗剂、霜剂、软膏、凝胶等剂型。皮肤外用剂组合物可优选经皮给药。

用于外用的药物和准药物的组合物的有效成分的剂量可以根据待给药的对象的年龄、性别和体重、待治疗的某种疾病或病理、疾病或病理状态的严重程度、给药途径和处方者的判断而变化。基于这些因素的剂量的确定在本领域技术人员的水平之内。通常，有效成分的剂量可以为0.00001mg/kg/天至15mg/kg/天，但不限于此。

根据本发明的一方面的药物组合物可以经口服、经胃肠外、经直肠、局部、经皮、经静脉内、经肌内、经腹膜内、经皮下等给药。口服给药的剂型可以是但不限于片剂、丸剂、软胶囊和硬胶囊、颗粒剂、粉剂、细颗粒剂、溶液、乳浊剂或小丸剂。肠胃外给药的制剂可以是但不限于溶液、悬浮液、液体、凝胶、注射剂、滴剂、栓剂、贴剂或喷雾剂。该剂型可以根据相关领域的常规方法容易地制备，并且可以另外包含表面活性剂、赋形剂、水合剂、乳化剂、悬浮液、用于控制渗透压的盐或缓冲剂、着色剂、香料、稳定剂、抗微生物剂、防腐剂或其他可商购的助剂。

根据本发明的一方面的药物组合物的量或剂量可以根据待给药的对象的年龄、性别、体重、病理状态及其严重程度、给药途径或处方者的判断而变化。基于这些因素的剂量确定在本领域技术人员的水平之内。

食品组合物的剂型没有特别限制，例如可以制成片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、溶液(如饮料)、焦糖、凝胶、棒、茶袋等。在各剂型的食品组合物中，除了有效成分之外，相关领域中通常使用的成分可以由本领域技术人员在没有困难的情况下根据剂型或使用目的适当地选择和掺混，并且当该组合物与其他原料同时应用时，会产生协同效应。

该组合物可以通过各种方法给药，例如简单的摄入、饮用、注射给药、喷雾给药或挤压给药等。

在下文中，将参考实施例、测试例和剂型例更详细地描述本说明书的配置和效果。然而，提供这些实施例仅出于说明的目的，以促进对本说明书的理解，并且本说明书的范畴和范围不受以下实施例的限制。

[实施例]

[实施例1]后发酵茶样品的制备

将水添加到由绿茶(Camellia sinensis var.Yabukita)叶制成的绿茶中，从而将水含量调节至 40重量％。然后该绿茶接种有5×10⁶cfu/g枯草芽孢杆菌，在50℃下发酵3天，然后在80℃下发酵4天。

将发酵好的茶样品粉碎15秒，并通过网眼尺寸为1mm的不锈钢筛过滤。然后，将50mg的粉碎样品添加到1.5ml的Eppendorf管中，添加1ml去离子水，并在60℃恒温水浴中恒速搅拌30分钟，然后在25℃，13,000rpm下离心15分钟。从离心的发酵绿茶提取物中仅分离出不溶于水的部分。

[实施例2]级分的获得和化合物的分离

将150g的后发酵茶样品用丙酮分级以去除儿茶素衍生物和咖啡因，从而获得其中富集了其他化合物的可溶物。对于40g的丙酮可溶物，主要使用硅胶柱色谱法，通过5:1(v/v)的氯仿: 甲醇混合物作为溶剂获得级分。

使用大容量高效逆流色谱法(HPCCC，Dynamic Extractions Ltd,UK)对去除咖啡因的8.9g 的5:1(v/v)的氯仿:甲醇级分进行分级。在此使用的溶剂是正己烷-TBME(甲基叔丁基醚) -BuOH-MeCN-水(0.25:3:1:1:5，v/v)，流速为25ml/分钟。使用上述条件，总共分出10个子级分，并再次使用小容量HPCCC(Dynamic Extractions Ltd,UK)、HPLC(高效液相色谱)、 Sephadex LH-20色谱柱(GE Healthcare Bio-Sciences,Sweden)等分离各级分中所含的成分。结果，从级分中可以分离出槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]和槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]，它们是以前未知的化合物。通过使用¹H-NMR、¹³C-NMR(核磁共振波谱)、UV(紫外光谱)和ESI-MS(电喷雾电离质谱)鉴定结构，来明确每种化合物的结构。在¹H和¹³C核磁共振(NMR)的情况下，使用甲醇-d3作为溶剂，并使用Bruker Advance DPX-500(BRUKER,USA)作为装置。使用6200SeriesAccurate-Mass Time-of-Flight(TOF)LC/MS(Agilent,US)分析各化合物的MS质谱图。

作为分析结果，每种化合物都是以前未知的新化合物，并被确认为：槲皮素3-O-[3-O”-(E)- 对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷] (“新物质31”)，其是C₄₂H₄₆O₂₃，分子量为918.2430；槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L- 吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷](“新物质32”)，其是C₃₆H₃₆O₁₈，分子量为 756.1902。

槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的化学式和NMR数据如下。

[表1]

槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的MS质谱如图1所示，¹H-NMR谱和¹³C-NMR谱分别如图2 和图3所示，HSQC(异核单量子相关)光谱如图4所示。HMBC(异核多键相关)光谱如图 5所示。

另一方面，槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷] 的化学式和NMR数据如下。

[表2]

槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的MS质谱如图6所示，¹H-NMR谱和¹³C-NMR谱分别如图7和图8所示，HSQC(异核单量子相关) 光谱如图9所示。HMBC(异核多键相关)光谱如图10所示。

[测试例1]酪氨酸酶活性抑制作用的评价

评价了新物质31和32对酪氨酸酶活性的抑制作用。

具体而言，自Sigma Chemical获得来源于蘑菇的酪氨酸酶和酪氨酸。分别用下表3的各浓度的熊果苷和新物质31和32与150μl的0.1M磷酸盐缓冲液(pH 6.5)、8μl的蘑菇酪氨酸酶 (2,100单位/ml)和0.05M浓度的L-酪氨酸一起进行处理。在37℃下进行酶反应20分钟后，使用酶标仪(Bio-Rad 3550,Richnmond,CA,U.S.A.)测量490nm处的吸光度来评估酪氨酸酶活性。

计算新物质31和32对酪氨酸酶活性的抑制作用(IC₅₀)，并示于表3。

[表3]

新物质对酪氨酸酶活性的抑制作用

[测试例2]对黑色素生成的抑制作用的评价比较新物质31和32与已知具有优异的皮肤美白作用的曲酸对黑色素生成的抑制作用并进行测量。

具体来说，通过Dooley方法测量细胞内黑色素生成的程度。使用的细胞系是源自皮肤色素 C57BL/6的Mel-Ab细胞系(Falcon，U.S.A.)。在37℃，5％CO₂的条件下，在含有10％胎盘血清、100nM 12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯和1nM霍乱毒素的DMEM培养基中进行培养。用0.25％胰蛋白酶-EDTA使培养的Mel-Ab细胞脱壁，并以相同数量(1×10⁵细胞/孔)再次接种到24孔培养板中，然后以从第二天开始将培养基用含有测试物质的培养基更换两天的方式处理测试物质。使用作为测试物质的5ppm、10ppm、25ppm和50ppm的新物质31和32， 25ppm、50ppm和100ppm的曲酸和DMSO(对照)。5天后，用1N-NaOH处理以溶解细胞中包含的黑色素，并通过测量400nm处的吸光度来测量黑色素的量。计算使黑色素细胞中的黑色素生成减少一半所需的物质的浓度(IC₅₀)，结果示于下表4中。

[表4]新物质对黑色素生成的抑制作用

测试物质	IC<sub>50</sub>(ppm)
		对照	-
31	23.5
		32	23.5
曲酸	39.36

[测试例3]皮肤蓄积刺激测试

进行了人重复性损伤性斑贴测试(HRIPT)，以确认槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D- 吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]和槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]的皮肤蓄积刺激，并计算可用于皮肤的浓度范围。

具体地，随机选择15名健康的成年人测试者，并且将包含量分别为0.5重量％、1重量％和3 重量％的化合物的测试组合物(除了该化合物之外还包含乳化剂、稳定剂、纯净水等的皮肤组合物)以20μl的量滴加到每个小室(IQ chamber,Epitest Ltd,Finland)中。贴附在被检查者的上背部右侧部位24小时后，用新贴剂替换该贴剂。以此方式，总共进行了9次贴附，每周3次，共3周，每次检查贴附之前和之后的皮肤反应，并观察皮肤反应直到最后的贴剂去除后48小时，观察了平均反应度。

结果显示在下表5中。

[表5]

皮肤反应是根据国际接触性皮肤炎研究小组(ICDRG)的标准确定的。上表中的“新物质31”是指槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]，“新物质32”是指槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]。也就是说，两种物质在该含量范围内均观察到(-) 反应度(没有被检查者表现出±、+、++或+++反应度)，由此发现该物质对皮肤没有蓄积刺激性并且可以在皮肤上安全使用。

在下文中，将解释根据本发明的一个方面的组合物的剂型例，但是本发明的范围不限于此。

[剂型例1]软胶囊

根据常规方法，将10mg槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L- 吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、80至140mg L-肉碱、180mg大豆油、2mg棕榈油、8 mg植物油、4mg黄蜡和6mg卵磷脂混合并填充至一个胶囊中，制备软胶囊。

[剂型例2]片剂

将10mg槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、200mg低聚半乳糖、60mg乳糖和140mg麦芽糖混合并使用流化床干燥机制粒，然后添加6mg糖酯，并用压片机压片以制备片剂。

[剂型例3]颗粒剂

将5mg槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、250mg无水结晶葡萄糖和550mg淀粉混合，使用流化床制粒机模制成颗粒，然后填充到袋中以制备颗粒剂。

[剂型例4]饮料

将2mg槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、10g葡萄糖、0.6g柠檬酸和25g液态低聚糖混合，添加300ml 纯净水，在每个瓶子中装入200ml。装入瓶子后，将瓶子在130℃的温度下灭菌4至5秒以制备饮料。

[剂型例5]注射剂

根据常规方法，使用20mg槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、适量的注射用无菌蒸馏水和适量的pH 调节剂，制备注射剂。

[剂型例6]保健食品

根据下表6所示的组成以常规方法制备保健食品。

[表6]

维生素和无机混合物的组成比只是相对适于保健食品的成分的混合物的例子，可以对混合比进行任意的修改，上述成分可以根据用于制备保健食品的常规方法而混合，然后可以根据常规方法用于制备保健食品组合物。

[剂型例7]保健饮料

[表7]

如上表6所示，添加余量的纯净水以使总体积为900ml，并且根据用于制备保健饮料的常规方法将所述成分混合，搅拌并在85℃下加热约1小时，然后将所得溶液过滤至灭菌的2L容器中，密封并灭菌，储存于冰箱以制备保健饮料。

[剂型例8]柔肤乳液(皮肤乳液)

使用0.2wt％槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、1.00wt％L-抗坏血酸-2-磷酸镁，5.00wt％水溶性胶原蛋白(1％水溶液)、0.10wt％柠檬酸钠、0.05wt％柠檬酸、0.20wt％甘草提取物、3.00wt％的1,3-丁二醇和余量的纯净水，制备柔肤乳液(皮肤乳液)。

[剂型例9]霜剂

使用0.2wt％槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、2.00wt％聚乙二醇单硬脂酸酯、5.00wt％自乳化甘油单硬脂酸酯、4.00wt％丙二醇、6.00wt％角鲨烯、6.00wt％三2-乙基己烷甘油酯、1.00wt％神经鞘氨糖脂、7.00wt％1,3-丁二醇、5.00wt％蜂蜡和余量的纯净水，制备霜剂。

[剂型例10]面膜

使用0.2wt％槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基 -(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、21.00wt％聚乙烯醇、3.00wt％L-抗坏血酸-2-磷酸镁盐，5.00 wt％月桂酰羟脯氨酸，8.00wt％水溶性胶原蛋白(1％水溶液)、7.00wt％1,3-丁二醇、7.00wt％的乙醇和余量的纯净水，制备组合物，然后制备面膜。

根据前述内容，已经参考本说明书的特定实施例等描述了本发明，并且对于本领域技术人员而言显而易见的是，这些特定技术仅仅是优选实施方式，而不旨在限制本说明书的范围。因此，本说明书的实质范围将由所附权利要求及其等同物来限定。

Claims

1.化合物、其光学异构体、其药学上可接受的盐、或包含上述物质的后发酵茶提取物在制备用于皮肤美白的组合物上的用途，所述化合物为槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]，其中所述后发酵茶为通过接种分离的微生物而不接种茶叶中存在的酶来发酵得到的茶。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物抑制酪氨酸酶活性和黑色素生成中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物预防、改善和治疗选自斑、胎记、黑色素瘤、紫外线辐射诱发的色素沉着、药物诱发的色素沉着、炎症后色素沉着。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物预防、改善和治疗皮炎引起的色素沉着。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物预防、改善和治疗选自雀斑或黑斑。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述提取是通过选自热水、C₁至C₆的低级醇及其混合溶剂中的一种或多种溶剂的提取。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述低级醇是乙醇。

8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述提取物是提取后通过用酮对提取物分级所获得的级分。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述酮是丙酮。

10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，相对于所述组合物的总重量，所述组合物中的化合物槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、其光学异构体或其药学上可接受的盐的量为0.00001重量％至10重量％。

11.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，相对于所述组合物的总重量，所述组合物中的所述后发酵茶提取物的量为0.1重量％至90重量％。

12.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，相对于所述提取物的总重量，所述提取物包含量为0.00001重量％至20重量％的化合物槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、其光学异构体或其药学上可接受的盐。

13.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，通过给药所述组合物，所述化合物槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]或槲皮素3-O-[3-O”-(E)-对香豆酰基][α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷]、其光学异构体或其药学上可接受的盐的剂量为0.00001mg/kg/天至100mg/kg/天。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的用途，其特征在于，所述组合物为食品组合物、化妆品组合物或药物组合物。