CN110904101B - miR395基因及其调控位点与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于植物基因工程领域，具体涉及miR395基因及其调控位点与应用，从水稻中克隆得到miR395基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。miR395基因的调控位点为Os03g53230，Os03g09930和Os03g09940。miR395基因及其调控位点可用于增强抗白叶枯病和细菌性条斑病的水稻品种中应用。通过miR395超量表达，发现miR395能够影响水稻抗白叶枯病和细菌性条斑病的能力。即超量表达miR395可提高水稻对白叶枯病和细菌性条斑病的抵抗能力，而超量表达miR395可以增加水稻内源的硫酸盐浓度。本发明的基因及其调控位点可用于水稻抗病育种和硫酸盐介导的抗性研究与开发。

Description

miR395基因及其调控位点与应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及miR395基因及其调控位点与应用，所述的基因为水稻miR395基因，所述的miR395基因的调控位点为Os03g53230，Os03g09930和Os03g09940。该基因及其调控位点可用于增强抗白叶枯病和细菌性条斑病的水稻品种中应用。

背景技术

植物在生长过程中会受到多种病原菌的侵染。植物病原菌种类繁多，主要指细菌、真菌、卵菌、病毒和线虫等。在长期的进化过程中，植物进化出了一些抗病基因，以应对各种病原菌的侵染。发掘并利用这些基因来改良植物的抗病性，是在保护环境的前提下防治病害的根本出路。

很多基因参与植物抗病反应的调控，它们可以简单的被分为两类：(1)受体基因，它分为抗病基因和模式识别受体基因；(2)抗病相关基因，它包括除受体基因外，其他参与抗病反应调控的所有基因。受体基因编码的蛋白质启动抗病信号的传导，而抗病相关基因编码的蛋白则是抗病信号传导路径上的成分。抗病相关基因编码产物功能多样，有的参与合成植物体内抗病信号分子，有的参与抗病信号传导，有的阻止信号传导或参与防卫反应等。它们的共同之处在于其表达量受病原菌诱导后升高或降低，因此可以根据病原诱导前后基因表达量的差异大规模地鉴定植物抗病相关基因。由于绝大多数抗病相关基因的产物不直接与病原蛋白相互作用，且其参与的抗病反应没有病原特异性，因此它们所介导的抗性具有持久性和广谱性。尽管水稻中已经鉴定了很多抗病相关基因，人们对部分水稻抗病相关基因的机理也进行了深入研究，但是对大多数抗病相关基因在水稻抗病反应中的作用机理、以及单个抗病相关基因是否会引起水稻抗病表型的改变还不清楚。

小RNA在生命活动中的作用研究是科学界近年兴起的热点，其可通过转录水平或转录后水平的基因沉默来行使自己的功能，植物小RNA包括small interfering RNA(siRNA)和microRNA(miRNA)两种。siRNA长度为21-24个核苷酸，由在RNA依赖性RNA聚合酶作用下形成的双链RNA被RNAse III DICER-LIKE蛋白切割产生；而miRNA是由内源MIR基因转录形成的含双链茎环结构的单链RNA被DCL蛋白切割产生，长度为20-22个核苷酸。两类小RNA进而结合到含有AGO蛋白的RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)中，通过序列互补配对引导RISC识别靶基因mRNA，并在RISC中的核酸内切酶作用下对靶标mRNA进行切割。

大量的实验证据表明miRNA在动植物的生长、发育、环境适应等各个生物学过程中具有重要的调控作用。在植物体内，miRNA通过序列互补的方式识别靶标mRNA，进而指导靶标mRNA的降解或抑制其蛋白质的翻译，从而负调控靶位点的表达。虽然小分子RNA在理论上的研究已经取得了巨大的进步，但是如何在生产上利用miRNA，为现代农业服务，产生经济价值是现代生物领域的一大难题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺陷，通过对miR395基因的生物学功能的研究，发现其在水稻抗白叶枯病和细菌性条斑病上具有重要调控作用，通过调节miR395表达水平能够影响水稻对白叶枯病和细菌性条斑病的广谱抗病性。因此，开发上述基因的应用，对于重要粮食作物例如水稻抗白叶枯病和细菌性条斑病的改良上具有重要的意义。

本发明的技术方案如下所述：

1、本发明证实了miR395基因能够同时调控多个靶标mRNA表达而发挥生物学功能。通过在水稻中过量表达miR395基因可使水稻对多种不同白叶枯病菌和细菌性条斑病菌表现出抗性增强的能力。通过系统研究，申请人发现miR395基因在水稻抗白叶枯病和细菌性条斑病方面有着重要调控功能。

2、本发明分析了miR395基因能够影响水稻体内硫酸根离子浓度变化。通过在水稻中过量表达miR395使水稻体内的硫酸盐含量升高，调控水稻对硫酸盐的累积。

经过生物学功能验证证明，本发明所提供的水稻miR395基因具有以下特性：

1、miR395基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列由水稻miR395基因及其上下游非编码序列共984个脱氧核糖核苷酸组成。在SEQ ID NO:1所示序列中第327位至412位的脱氧核糖核苷酸为miR395基因转录序列；第337位至357位脱氧核糖核苷酸为miR395基因的成熟序列。其余部分序列是上下游非编码序列。

2、miR395基因的调控位点如序列表中的SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4所示。

SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列由Os03g53230基因及其上下游非编码序列共3470个脱氧核糖核苷酸组成。在SEQ ID NO:2所示序列中第595位至615位脱氧核糖核苷酸为miR395基因调控的靶位点。

SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列由Os03g09930基因及其上下游非编码序列共7628个脱氧核糖核苷酸组成。在SEQ ID NO:3所示序列中第3120位至3140位脱氧核糖核苷酸为miR395基因调控的靶位点。

SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列由Os03g09940基因及其上下游非编码序列共5348个脱氧核糖核苷酸组成。在SEQ ID NO:4所示序列中第318位至338位脱氧核糖核苷酸为miR395基因调控的靶位点。

3、本发明涉及的miR395基因序列以及受到成熟miR395调控的靶位点序列可用于在作物，特别是水稻抗病育种、转基因株系、转基因新品种培育中的应用。

更详细的技术方案参见《具体实施方式》。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、本发明发现并开发了miR395基因的调控位点为Os03g53230基因的第595位至615位脱氧核糖核苷酸、Os03g09930基因的第3120位至3140位脱氧核糖核苷酸和Os03g09940基因的第318位至338位脱氧核糖核苷酸，这些新的调控位点，为抗病水稻和特定性状育种的水稻提供了新的基因资源。

2、miR395基因能够增强水稻对白叶枯病菌和细菌性条斑病菌的广谱抗病性。

3、miR395基因能够增强影响水稻体内硫酸根离子的积累。

附图说明

序列表SEQ ID NO:1是miR395基因的核苷酸序列。序列长度为984bp。

序列表SEQ ID NO:2是miR395基因的调控位点Os03g52530的核苷酸片段(该片段的第595位至615位序列是miR395基因的识别位点)。序列长度为3470bp。

序列表SEQ ID NO:3是miR395基因的调控位点Os03g09930的核苷酸片段(该片段的第3120位至3140位序列是miR395基因的识别位点)。序列长度为7628bp。

序列表SEQ ID NO:4是miR395基因的调控位点Os03g09940的核苷酸片段(该片段的第318位至338位序列是miR395基因的识别位点)。序列长度为5348bp。

图1：本发明鉴定和分离克隆水稻抗病相关基因miR395以及验证miR395基因功能的流程图。

图2：miR395基因在水稻中的调控位点。miR395基因在水稻中有3个靶标mRNA，分别由基因Os03g53230、Os03g09930、Os03g09940转录而成。miR395的识别位点是长度为21nt的核苷酸序列，图中显示了miR395与靶标mRNA在对应的识别位点存在序列的反向互补。

图3：本发明起始转化载体pU1301的图谱。

图4：本发明所用的遗传转化超量表达载体pU1301-pUBIQUITIN-miR395的结构示意图。附图标记说明：RB和LB分别表示T-DNA的右边界和左边界，GUS-表示β-葡糖苷酸酶基因，Hpt表示潮霉素磷酸转移酶基因，PUbi-表示玉米泛素基因启动子，TEVL-表示烟草蚀刻病毒的5′非翻译区，NOS-表示胭脂碱合成酶基因的多聚腺苷酸化信号。miR395基因序列在组成型启动子PUbi的驱动下，连入到超量表达载体pU1301。利用该载体转化野生型水稻，进而在水稻中过量表达miR395基因。

图5：miR395过量表达水稻株系中成熟miR395表达量鉴定。图5中的A图表示小RNANorthern杂交显示miR395过量表达家系1阳性单株的条带亮度明显高于野生型和阴性；图5中的B图表示小RNA Northern杂交显示miR395过量表达家系10阳性单株的条带亮度明显高于野生型和阴性。miR156和5s RNA作为内参。结果显示miR395过量表达水稻株系中成熟miR395的表达量显著升高。

图6：三个靶标基因在miR395过量表达水稻株系中的表达量。附图标记说明：图6中的A图表示Os03g53230基因在miR395过量表达水稻株系家系1和家系10中的表达量相对于野生型(即非转基因水稻材料，下同)显著性降低；图6中的B图表示Os03g09930基因在miR395过量表达水稻株系家系1和家系10中的表达量相对于野生型显著性降低；图6中的C图表示Os03g09940基因在miR395过量表达水稻株系家系1和家系10中的表达量相对于野生型显著性降低；图6中的D图表示miR395基因在miR395过量表达水稻株系家系1和家系10中的表达量相对于野生型显著性升高。结果显示三个靶标基因在miR395过量表达水稻中的表达量都显著低于它们在野生型对照中的表达水平。

图7：miR395过量表达水稻株系接种白叶枯病菌PXO347后的病斑长度。附图标记说明：图7中的A图表示miR395过量表达水稻株系家系1接种白叶枯病菌PXO347后的发病病斑长度与野生型植株和转基因阴性植株相比显著性变短；图7中的B图表示miR395过量表达水稻株系家系10接种白叶枯病菌PXO347后的发病病斑长度与野生型植株和转基因阴性植株相比显著性变短。结果显示miR395过量表达水稻株系对白叶枯病菌PXO347表现出抗病性增强的表型。

图8：miR395过量表达水稻株系相对于野生型对不同白叶枯病菌(如PXO99、PXO61、PXO86、PXO112、PXO341、PXO347、FuJ23)具有广谱抗病性。

图9：miR395过量表达水稻株系相对于野生型对不同细菌性条斑病菌(如RH3、RS85、RS105、JSB224、HNB8-47、GX01)具有广谱抗病性。

图10：所示是miR395过量表达水稻株系接种白叶枯病菌PXO347后叶片中白叶枯病菌生长量。相对于野生型对照，miR395过量表达水稻中白叶枯病菌数量显著降低。

图11：miR395过量表达水稻株系接种细菌性条斑病菌RH3后叶片中细菌性条斑病菌生长量。相对于野生型对照，miR395过量表达水稻中细菌性条斑病菌数量显著降低。

图12：miR395过量表达水稻株系成熟期剑叶中硫酸根离子的浓度检测结果。

图13：miR395过量表达水稻株系孕穗期茎秆伤流液中硫酸根离子的浓度检测结果。

具体实施方式

下面结合具体的实施例进一步阐述本发明。图1描述了鉴定和分离克隆miR395基因以及验证miR395基因功能的流程。需要说明的是，这些实施例仅仅是为了说明本发明，而不能以任何方式构成对本发明权利要求范围的限制。

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，具体步骤可参考：《Molecular Cloning:A Laborato；ry Manual》(Sambrook，J.，Russell,David W.，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，3rd edition，2001，NY，Cold Spring Harbor)或相关产品。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市场采购的常规产品。

实施例1：miR395靶基因和过量表达材料的获得

(1)miR395基因识别位点的获得

利用植物miRNA与靶标mRNA存在序列互补的原理，通过水稻全基因组扫描(Dai等，2018；Warthmann等，2008)，申请人获得了水稻中miR395基因的识别位点。在水稻中miR395基因的靶标基因mRNA有三个，分别由Os03g53230、Os03g09930、Os03g09940基因转录而成。miR395基因的识别位点是长度为21nt的核苷酸序列，miR395基因与靶标基因mRNA在对应的识别位点存在很好的序列匹配，结果见图2。

(2)miR395基因过量表达载体的构建

本实施例是关于pU1301-pUBIQUITIN-miR395载体构建方法。

首先以水稻品种中花11水稻DNA为模板，设计如下正反向序列，如下所述

正向引物miR395F 5’-CAAGGATCCATAGTAGGCATTGAGATAG-3’，

反向引物miR395R 5’-AGAGGTACCAGTCCACAGGAGACAGATA-3’；

利用高保真DNA聚合酶PCR扩增miR395基因序列。电泳回收PCR产物，用KpnI和BamHI酶切，回收miR395基因片段。同时，将载体pU1301(见图3)用KpnI和BamHI酶切过夜并回收。将回收的miR395基因片段与载体片段以摩尔比约3：1的量进行连接(T4Ligase

)过夜。第二天将连接产物转化大肠杆菌DH5α，并于37℃培养过夜，可获得单克隆。选取单克隆进行培养，同时对其进行PCR验证，从验证正确的克隆中提取质粒，并进一步测序验证，从而获得植物转化载体(pU1301-pUBIQUITIN-miR395)。植物转化载体的图谱见图4。

(3)miR395基因过量表达水稻株系的获得和鉴定

申请人将含有强启动子UBIQUITIN(JX947345)驱动miR395基因序列的pU1301载体(载体命名为：pU1301-pUBIQUITIN-miR395)通过农杆菌介导的遗传转化方法(Lin和Zhang，2005)导入水稻品种中花11，获得了多个独立的转基因家系，选取家系1和家系10，利用小RNA Northern技术(Qi等，2005)来检测miR395基因的表达水平。小RNA Northern杂交结果显示，转基因家系中阳性单株中miR395基因的表达水平显著高于阴性单株和野生型对照中的表达水平，结果见图5。

(4)miR395基因过量表达水稻株系中三个靶标基因表达量分析

申请人对miR395基因过量表达水稻株系孕穗期叶片中三个靶标基因Os03g53230、Os03g09930、Os03g09940的表达量进行检测。具体步骤为：取1～5g总RNA用DNaseI(美国Invitrogen公司)处理15分钟以去除基因组DNA污染，然后使用oligo(dT)₁₅寡聚引物和M-MLV反转录酶(美国Promega公司)进行反转录。采用实时定量PCR分析试剂盒

GreenPCR Master Mix(宝生物工程大连有限公司)，根据试剂盒使用说明书操作，在ABI7500Real-Time PCR system(美国Applied Biosystems公司)仪器上进行实时定量PCR反应。用水稻内源肌动蛋白基因的表达量衡量、并均一化样品RNA含量。qRT-PCR分析中的Os03g53230基因特异PCR引物是Os03g53230realF(5′-AGTTTGCCAGACGCAATGCT-3′)和Os03g53230realR(5′-AAGGCGTTTGCGTGTATCAGT-3′)，Os03g09930基因特异PCR引物是Os03g09930realF(5′-CAGAAATCTTCTGTAACGTCAAGCA-3′)和Os03g09930realR(5′-TGGAGTTGACGAAGCAAAGGA-3′)Os03g09940基因特异PCR引物是Os03g09940realF(5′-GCTGGCATCTCTTAGCATACA-3′)和Os03g09940realR(5′-CCGCTTCACCTACTGTCAAA-3′)，肌动蛋白基因PCR引物是actin F(5′-TGCTATGTACGTCGCCATCCAG-3′)和actin R(5′-AATGAGTAACCACGCTCCGTCA-3′)。qRT-PCR结果显示，miR395过量表达水稻株系中三个靶标基因Os03g53230、Os03g09930、Os03g09940的表达量显著低于他们在野生型中的表达水平，结果见图6。

实施例2：miR395基因过量表达水稻株系的相关分析与功能验证

(1)miR395基因过量表达水稻株系孕穗期抗白叶枯病表型分析

在中国，湖北，武汉的夏季田间对miR395基因过量表达水稻株系及野生型对照进行白叶枯病菌接种试验。结果显示，本部发明的miR395基因过量表达水稻株系在孕穗期接种白叶枯病菌致病小种PXO347，与野生型(非转基因，下同)相比，miR395基因过量表达水稻家系1和家系10的阳性单株发病长度均显著性短于阴性单株和野生型对照(p<0.01)，见图7。以上结果表明，过量表达miR395基因能增强水稻对白叶枯病菌致病小种PXO347的抗性。

(2)miR395基因过量表达水稻株系对不同白叶枯病菌的广谱抗性分析

在中国，湖北，武汉的夏季田间对miR395基因过量表达水稻株系及野生型对照进行白叶枯病菌接种试验。结果显示，miR395基因过量表达水稻株系在孕穗期接种不同白叶枯病菌致病小种(PXO99、PXO61、PXO86、PXO112、PXO341、PXO347、FuJ23，所有白叶枯病菌由国际水稻所赠送)，与野生型相比，miR395基因过量表达水稻家系1和家系10阳性单株发病长度均显著性变短(p<0.01)。见图8。以上结果表明，过量表达miR395基因增强水稻对不同白叶枯病菌的广谱抗病性。

(3)miR395基因过量表达水稻株系对不同细菌性条斑病的广谱抗性分析

在中国，湖北，武汉的夏季田间对miR395基因过量表达水稻株系及野生型对照进行细菌性条斑病菌接种试验。结果显示，miR395基因过量表达水稻株系在分蘖期接种不同细菌性条斑病菌致病小种(RH3、RS85、RS105、JSB224、HNB8-47、GX01，所有细菌性条斑病菌由上海交通大学陈功友教授赠送)，与野生型相比，miR395基因过量表达水稻家系1和家系10阳性单株发病长度均显著性变短(p<0.01)(见图9)。以上结果表明，过量表达miR395基因增强水稻对不同细菌性条斑病菌的广谱抗病性。

(4)miR395基因过量表达水稻株系中白叶枯病菌数量分析

在中国，湖北，武的夏季田间对miR395基因过量表达水稻株系在孕穗期接种白叶枯病菌致病小种PXO347后分析叶片中白叶枯病菌生长情况。在孕穗期于田间对miR395基因过量表达水稻株系和野生型对照分别接种白叶枯病菌致病小种PXO347(由国际水稻所赠送)，接种后在不同时间取叶片材料(接种剪口下6cm的叶片)，同一份材料取三片叶(代表三个实验重复)。根据已报道的方法处理叶片材料，分析细菌的生长数量。主要分析步骤如下：用75％酒精消毒叶片表面1分钟，晾干，置于研钵中加1ml灭菌蒸馏水研磨成匀浆，然后加倍灭菌水稀释成不同浓度梯队，每个浓度梯度重复涂三个PSA培养皿(马铃薯200g，琼脂20g，蔗糖20g，去离子水定容至1000ml)上，22～25℃黑暗下生长2-3天后统计细菌菌落数。以每片叶上白叶枯病菌菌落数的LOG值绘制细菌生长曲线。白叶枯病菌生长分析表明，在接种白叶枯病菌致病小种PXO347后，miR395过量表达水稻株系叶片中白叶枯病菌数量显著低于野生型对照(见图10)

(5)miR395基因过量表达水稻株系中细菌性条斑病菌数量分析

在中国，湖北，武汉的夏季田间对miR395基因过量表达水稻株系在分蘖期接种细菌性条斑病菌致病小种RH3(由上海交通大学陈功友教授赠送)后分析叶片中细菌性条斑病菌生长情况。在分蘖期于田间对miR395基因过量表达水稻株系和野生型对照分别接种细菌性条斑病菌致病小种RH3，接种后在不同时间取叶片材料(接种剪口下6cm的叶片)，同一份材料取三片叶(代表三个实验重复)。根据已报道的方法处理叶片材料，分析细菌性条斑病菌的生长数量。主要分析步骤如下：用75％酒精消毒叶片表面1分钟，晾干，置于研钵中加1ml灭菌蒸馏水研磨成匀浆，然后加倍灭菌水稀释成不同浓度梯队，每个浓度梯度重复涂三个PSA培养皿，在22～25℃黑暗下生长2-3天后统计细菌性条斑病菌菌落数。以每片叶上细菌菌落数的LOG值绘制细菌生长曲线。细菌性条斑病菌生长分析表明，在接种细菌性条斑病菌致病小种RH3后，miR395基因过量表达水稻株系叶片中细菌性条斑病菌数量显著低于野生型对照(见图11)。

实施例3：miR395基因过量表达水稻株系中硫酸根离子含量分析

(1)miR395基因过量表达水稻株系叶片中硫酸根离子含量分析

在中国，湖北，武汉的大田夏季种植miR395基因过量表达水稻株系，在孕穗期测定剑叶中硫酸根离子含量。主要分析步骤如下：用液氮将叶片粉碎，去离子水溶解，于80℃水浴孵育3小时，离心后的上清液用0.22微米滤膜过滤，在离子色谱仪上测定过滤液中硫酸根离子含量。与野生型相比，miR395基因过量表达水稻株系剑叶中硫酸根离子含量更高(见图12)。这一结果表明，miR395基因对于水稻叶片中硫酸根离子积累具有正调控作用。

(2)miR395基因过量表达水稻株系茎秆伤流液中硫酸根离子含量分析

在中国，湖北，武汉的大田夏季种植miR395基因过量表达水稻株系，在孕穗期测定茎秆伤流液中硫酸根离子的含量。主要分析步骤如下：水稻孕穗期剪掉地上部分，收集茎秆中伤流液，用0.22微米滤膜过滤，在离子色谱仪上测定过滤液中硫酸根离子含量。与野生型相比，miR395基因过量表达水稻株系茎秆伤流液中硫酸根离子含量更高(见图13)。这一结果表明，miR395基因对于水稻茎秆伤流液中硫酸根离子积累具有正调控作用。

参考文献

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序列表

<110> 华中农业大学

<120> miR395基因及其调控位点与应用

<141> 2018-09-12

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 984

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<220>

<221> gene

<222> (1)..(984)

<400> 1

gctcccatct caatctcgtg gtttaaacac tatatgttga atgtttggtg atatcgagag 60

ttcccccaaa cacttcacat agtaggcatt gagatagtgc cacgtgaagt gcttgaaggg 120

aactcacgac aataccaaac gtggctctca gtcttgtggt ttaaacacta tctactaatt 180

gtttgatgac accgagagtt cctccaaaca cttcacaaca accctataaa taatggtgtc 240

gtatgaagtg cttaaagaga actcttgata ataccaaacg tttctctcat ttcttgtagt 300

ttaaacacta tctacttaaa tgcttggcga cactaagagt tcccccaaac acttcacgac 360

aactctcaat acagtgtgtc gtaaagtgct tgaaaggaac tcctagggac tccaaaccta 420

atcattctct gtcacttaca aattcataaa gtacaagcac ttacatacct aacttgaaaa 480

tgctgagtgt caactggagt tcccccaagc acttcactat acatagctag cttttggccc 540

catgatcaca gttatgtaac agtgcaatgc aatgaggcct agccatagct atctactgaa 600

gtggattgag gagaactcca gtggacaacc aaccaaattt tgactcccta gacctgatta 660

cttcattttt gatgtggacc acttcacttg tttaatctgc cttgctgatg agcacagagc 720

cggtggctat ttataagtgt atgtatgact aaagagtaag ctagctagct atctgtctcc 780

tgtggactgt ggtgtgtgtg tgtgcatatg gtcgtccttg caatgcggtt ggcatatatt 840

ggatgaactt ggcaacggat gcacctagcc gtgatgcaga ctaggttaga agatggagtg 900

tagtgaggag aatccaatgt gatctttggg ctgcactgat ctccgaatcg tagaaagcat 960

gcatatgtgg agcaaaaaag tgcc 984

<210> 2

<211> 3470

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<220>

<221> gene

<222> (1)..(3470)

<220>

<221> 3'-UTR

<222> (3153)..(3470)

<220>

<221> exon

<222> (3012)..(3152)

<220>

<221> Intron

<222> (2914)..(3011)

<220>

<221> exton

<222> (2827)..(2913)

<220>

<221> Intron

<222> (2651)..(2826)

<220>

<221> exon

<222> (2390)..(2650)

<220>

<221> Intron

<222> (2245)..(2389)

<220>

<221> exon

<222> (1839)..(2244)

<220>

<221> Intron

<222> (774)..(1838)

<220>

<221> exon

<222> (235)..(773)

<220>

<221> 5'UTR

<222> (1)..(234)

<400> 2

tattaatcct cttccccttc cccccgctct ccgtccatgt tcaccccgcc cccatgcccc 60

gcaatcccat ccaggttcat ccgcctcccg tcttcttttt ttttaattca tccgcaacca 120

ctgcgaactt gcgaaggccg cgggtacaag aaaagaagag aaaaataaaa aggagccgca 180

ttataagtag gtagtggtgg tggtggagga ggaggagagc aaatcgaggt agccatggcg 240

atgcaggccg ccttcgccgc ctcgatgttc ccgcagctgg cgcagcggag gggaagcgat 300

cgcgcggtgg tggtggcgcc gccggcgccg gcgccggtga gggtggcgat gaggagcggt 360

ggggcggcgg cggcggcggc gagaggggtg aggtgcaggg cgagcctgat cgagcccgac 420

ggggggaggc tggtggagct ggtggtgccg gaggagggag ggcggcggga ggcggcgcgg 480

cgggaggcgg cggcgctggc gcaccgggtg aggctggggc gggtggagac ggagtggctg 540

cacgtgctga gcgaagggtg ggcgagcccg ctgcgagggt tcatgcgcga ggccgagttc 600

ctccaagcac ttcatttcaa cgccatccgc ggcggagacg gggccatggt caacatgtcc 660

gtgcccatcg tcctccccct cggtgacgcc cagcgccgcg ccatcgaggc gtccggcgcc 720

cgccgcgtcg cgctcgtcga cgccgccgac cgccccctcg ccgtcctcag cgagtgagac 780

atccccccta ccccacctct tcttgtttcc cttgtttagt tagttgcatt tccctgttca 840

gacgcttaat tgcaattatt tggttactag gagtgcttgc tagaagagta aaattactaa 900

ttacatgagt ggatggaatg tagatatatt gattgttcgt gttggttggt tgattctcac 960

agttgtggga tgcctttgga cctccaaaag ccgtaatttt tgtgcttggg ttggaaattg 1020

gaattgtggg ggttgtagcc tgaatggttc agagaagttc ataggtggtt tcttcaattg 1080

gaaacataat atgcagaaat acagattatg agtgtttctg tgcagttccc acatttcgtg 1140

agcttatccc tcacaaactt gtgctctggt tatattttag actttaatgc tagtaaacaa 1200

tttgtttcac agcaacctgg tcaatgatat atcattcatg gcggaggttt tatcttgggc 1260

gttaaactaa ttttaaggtt gtggcattcc tcttttgtcg attagactac aatatcgtca 1320

tgcggataac ctttgtcatg ctatatcagg aactcaggac atctttatac atctcggtcg 1380

ttttcaggtc atattttttt gagtcgtata tatataatac gatgatcggt aataccattg 1440

gtagtcctta taaatacatg ttccgtagtt cttttgccgt gttctctagg tattttagtt 1500

ttatctatat taaactgaca agtgatatta tatttgtttc gttgtttttt cgccgcgttc 1560

tatgggtatt ttagtttaag caactgacac atgatatgat ttacatcaga aagattattt 1620

tttattcacc atttgtttat aaggttttgt acacatccag ctattgtaag atgttgttat 1680

agaggtgacg taacaacgtc aaccgtttac atctgtgtct aggaactcct caagtcatgt 1740

gtgttcaaaa caatccgact tgatttagca tggttttagt tctttttaat tagttatacc 1800

atggcattcc ctgacatatt tttcttcttt gttgtcagca ttgagatcta caagcataac 1860

aaagaagaaa ggattgcacg gacatgggga acaactgcac ctgggctgcc ttatgttgat 1920

gaggcgatta caaatgctgg tgattggtta attggtggtg acttggaggt tatagaacca 1980

atcaagtaca atgatggtct tgatcagtat cgcttgtctc cagcccagct gcgtgaagag 2040

tttgccagac gcaatgctga tgcggtattc gcgtttcagc ttcgcaatcc tgtacacaat 2100

ggacatgctt tgctcatgac tgatacacgc aaacgccttc ttgagatggg ttacaaaaat 2160

cctgttcttc tgcttcatcc attgggagga ttcacaaaag cagatgatgt gcctcttagt 2220

tggagaatga agcagcatga aaaggtacgc tttaagagta gcaatcgtac tgtcaaatct 2280

ttttagcaaa tgcatgttgg tgccttgttg ttgatgaaac catttgattt aattacacta 2340

ctgtaaggcc caattcatgc acaattttga tgcgtgttta ttttggtagg ttcttgagga 2400

aggtgtcctc aacccagaat caactgtcgt tgcaatcttc ccctctccaa tgcattatgc 2460

agggccaact gaagtgcaat ggcatgctaa ggctcgtata aatgctggtg caaacttcta 2520

catagttgga agagatcctg ctggtatggg ccacccaact gaaaagaggg acctgtatga 2580

tgctgatcat gggaaaaagg tgttgagcat ggctcctggg cttgagaagc tcaatatcct 2640

tcctttcaag gtatgtcatc ctaccagacc agatatcaca ttttttggat gcactagatt 2700

gtgtagttcg ctagcttact gtccatcttg tacatttgaa tttggatgtc aagcaacata 2760

ttttagtttt cagataaacc ttgttgtatt ctttttcttg gcatgactcc tgatttgttt 2820

tatcaggtgg ctgcatatga cacaaagcaa aagaaaatgg actttttcga tccatcaagg 2880

aaagatgatt tcctgttcat ctctggcaca aaggtaacat ccatttcaat cctgttttgg 2940

tacaccagtt aattttgagc accaatgttt ttttccagcc cagtcctaac aacattgcct 3000

gtgttatata gatgcgtact cttgccaaga actgccagag cccccctgac ggattcatgt 3060

gcccgggtgg ctggaaggtc cttgttgaat actacgacag cttgacgcca tcagcggaca 3120

gcagcaaact gcgcgaggcg gttgcggcct agaaagctga aactacctca aataagcaag 3180

aacattgcat cttgcaactg taaaatggtt ctttcagaga gagaaccaat ggtatatgtg 3240

tatactactg gtcgcaaggc ctaaacattt gggtttgatt ggaagcgcat tctggtgtga 3300

tttgtatgtg ccctatcatc tggtaatgct acattggaag ctcatcatgt tgttggtgtt 3360

aataaggatg agcctttgtg tgctctgcta gatatgtaca tatacaatgt ggtggtattt 3420

atatagtgct tggtgtgttt gctattatag aagagcaggt ttcatcttct 3470

<210> 3

<211> 7628

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<220>

<221> 5'UTR

<222> (1)..(3094)

<220>

<221> exon

<222> (3095)..(3433)

<220>

<221> Intron

<222> (3434)..(3655)

<220>

<221> exon

<222> (3656)..(3704)

<220>

<221> Intron

<222> (3705)..(3780)

<220>

<221> exon

<222> (3781)..(3988)

<220>

<221> Intron

<222> (3989)..(4064)

<220>

<221> exon

<222> (4065)..(4239)

<220>

<221> Intron

<222> (4240)..(4833)

<220>

<221> extron

<222> (4834)..(4900)

<220>

<221> Intron

<222> (4901)..(5003)

<220>

<221> exon

<222> (5004)..(5233)

<220>

<221> Intron

<222> (5234)..(5803)

<220>

<221> exon

<222> (5804)..(5929)

<220>

<221> Intron

<222> (5930)..(6009)

<220>

<221> exon

<222> (6010)..(6296)

<220>

<221> Intron

<222> (6297)..(6429)

<220>

<221> exon

<222> (6430)..(6624)

<220>

<221> Intron

<222> (6625)..(6716)

<220>

<221> exon

<222> (6717)..(6777)

<220>

<221> Intron

<222> (6778)..(6862)

<220>

<221> exon

<222> (6863)..(6938)

<220>

<221> Intron

<222> (6939)..(7070)

<220>

<221> exon

<222> (7071)..(7226)

<220>

<221> 3'UTR

<222> (7227)..(7628)

<400> 3

tcgcctccct tccggcgacg gcgacggcgc cgtcgtgcga acccatcggt gcgaacacgg 60

agaagttgat ggggttcctt cgtctagttc ccggcgacgg ccgccgatcc cgcgccgccc 120

tagttcggcg aacccatcgg tgcaggggta gtagtatcat tgtatcaagc catgcggcaa 180

atggcgagcg agcgagaggg ggaagaagag gcggcgggag gaggatgagg ggcaaagaag 240

gcggcggaag gccgctatgg ggaacgaggt gcttttccaa ttccagattg atctcgtact 300

caggttcgtt tccgatttcc tcgagaaaca agtgctgttt ttactgcagc gaagttacgt 360

tttttttttt aaagcagaaa ttcgcaccct gatgaatggg gaaagcagcc tatgggtgct 420

atatcaataa tacattttat gcatactttt cccccttttt tgggagttga ctctgaaatc 480

aaacgtgaga aaggtacatc tcgaccaagg gcaatcttca ctccataata ctccatataa 540

tagtggtcac accacttcca agtgtctaat tcctttttga tacacgcaga gtactgtttt 600

gtttgttgta tgatggattt tgtgcagtag ctcgttatgc atccagatct gggttggaat 660

tggtgtgatg ctcattatgt cccctctaaa ttaaaggaga atagaccagg aatgtggtta 720

ccatggttgc caagctccat ttgttccttt cacgcgtttg attggtaggg tcaacttaat 780

tcaaaacata ggtcggacca tttaatttgc gataagtgtc ggggcacttg caagctccat 840

atactttagg atcttatacg tcagatcttg cataaaggaa ggacgagagg tcgataaatg 900

ctttggattt gtggtgtcaa gcatctgact actgcagatt cagcaatcat tgcttatatt 960

atatgcaggc aaggttggag gcacttttca gttataagcc ccctgccgtg tgtgtgctac 1020

agatcagagt ttctgttatc cacttatcaa ttattatgct gttgctacag taaagtttac 1080

ctaatttgtt ctttgaaagt caatggaggt caaagttgaa tacaaacaag aatcagctgt 1140

gaactaactc gacttatgaa aaattgtcca aagttctaat acaatttaac tccctttttg 1200

ttgatctttc gtaaaagaga aaaatatttg gctgttattt tgtgtgtaat attcttctct 1260

gtccatggat gttgtatctt tagtttcttg gttggcaaat ggtgttgaag ttccaccaac 1320

ttaagctttt aaatgaactg gccattgcat gcaactcagt atgttattag agcccaaagg 1380

ttccaagttc gaaccctagc tagcgcagtt tcagtttaat gatttatgcc cacttatatt 1440

caacatctga agccaaaggg acctagacat gagggagagt attgaagtat aagtgaattg 1500

tctacccttt ctcgtataag tgaattgtct acttttctcc atcaagctaa gaagattttg 1560

agtgaaacaa ctggtgcatg caccccaata agggaagtag cccaggacat ctttattgct 1620

aatccagaac ccagattatt gtagccttac agaatgcttg gaggaaaggc ttcaaccaga 1680

aactacaaag aggttttgat tccatagtga tcctagtggc ttgggttcta tggaaagagt 1740

gcaacaatcg ggtcctcaat atcaaatccc gaaactgggt gcaactaatc aactctattg 1800

ccgaagaagc gcggccctgg ggtcactgca gggatcaaac tgccccaact ggtagtttga 1860

gcgcggtagc tctgttaggt cgcaaaagtt gttgggagaa acccatgtaa tttttctgtg 1920

gcctgctagt tagcacggcc ggatgttgaa ctatctcctt gatacaaaga tgtgcaagcc 1980

tttgcgtatt ccctaaaaag agtgctaggg tgatctattg ttttagccca ctaatcagaa 2040

agttgcacat gctattttag tgaataatta atctcattct atttaagttt aactattttc 2100

gcgaacacgc aaaaggattg cacgtcaata tattagaaga aagcaaaaaa gtttttgtta 2160

cacaacgcaa tcagccagac agccaattta actatttaag tttaactagc ttgtactaga 2220

gaattctctc cttggatttt aaaacatttt caagtgctgc ctgcttctcc cttggagaag 2280

gttggcatga caattctcac tacttggact aacagttcaa gttctgacct ctgtgggcaa 2340

tgttgctgtg agcagctcca gcatggtcca tcacaaacaa taatgcacca gaataatttt 2400

tatgcattca tacaagttgc ttttctagaa gcaaaggtga aaggtccaag tttcagtgag 2460

atgagaatgg accagttaag ttactctaag caaacatgat gtgcccttta ttcacaacat 2520

ttaacaattg ttacttgagc agttttgccc ttagcctaaa taccaaatca tgaataaaca 2580

ttcataaaaa ggaatttggg cccgcttatt gttctgcaaa tgcactgcta gaggtttata 2640

gcatggatat ctatccaaag tcttgagtgt aaagttcata taacaaaccc caagtaatta 2700

actgcaggac tactggaaag tacaagagga gaacaaacca gggattggat cattcgtttc 2760

tgtcagaaaa aaaaaaactt tgcaaagcag tcacgatcat taggctagta gaagcacact 2820

tgcatagcca aagaaaactc atcattatca attcaattat cggaatgaaa ggagcttcat 2880

ttttgcaaac tgaatatgac cttagaacag caggcacatg ccctttagga tgtgttgcct 2940

tcactcttca ataggtggca gcataaacca tagcactata aatggcacct tgtatggcca 3000

ccttagagca atcaaattca cctgaagcac ctaaggttca catggacttg ccatcctcac 3060

agctcaccaa tcttggaggc accgatacat tgtgatggaa tttcagccat ttcctcaggg 3120

agttcaccca aacacttcag aaccagccat ggagcccatg gcaagtgagt catctgtgcc 3180

catagggaca gcttttgcag acttgctgct gcaagggcca gagcacccaa gcctgtggaa 3240

tgatctcacc ggcatgttca ggaaggcatt ccgttggcaa ggtgcagaca agcgcttcac 3300

actgtctgtg tatgtgatgt ctgttctaca gggtctgttt ccaatacttg actggtggaa 3360

aacctacaat ctgaaattct ttcgaagtga cctcatggct ggcctaactc ttgcaagcct 3420

tagcattcca caggtaattg tttgtttttt gagatgactg gaactattgt tatcatatat 3480

gcacaaattg tgtatgaatc ttgtctgaat cgagcaaact cctgggattt ctctatcaat 3540

tccttgatgc atttcctcaa gtcgtcagta gtgactgact tctttactta gaaggttgga 3600

attcgcctag attattcaga tatttctgac ttgttttatt gtcctgttat tatagagcat 3660

tggatatgca actctggcaa aactggatcc tcagtatggt ctttgtaagt cattgcagat 3720

ttaacttggt tttatgtgtt ctaaatgttc ttttgacata tggttttatt ttgtggtaag 3780

atacaagtgt tgtgccacct cttgtatatg ctgtgacggg gtcctctagg gagatagcca 3840

ttggaccagt tgccattgtg tcattattgc tttcatcaat gattcagaag atagttgacc 3900

catctgttga tccagcgttc taccgaaaaa tggtctttac cgtgacattc cttactggtg 3960

tctttcagtt tgcatttggt ctgttcaggt agtgtctctg ccgtcttttg atcaaaatgc 4020

gcttacttac attccctaac tgacttttgc attgattctt gtagactggg atttcttgtg 4080

gattttctat cacatgctgc tatcgtcggg ttcatgggag gagctgctat tgtgattgga 4140

ttacagcagc tgaaggggct gcttggactt agtcatttta caaatagaac tgatgtcgtc 4200

tctgtcacca aggcagtctg ggtttcagtt cacgaaacag taagtatttg cccttatatt 4260

caatctgaac ctgtgcatgc gcaggcatat gcctggaagt tatgataaca cataatatga 4320

tcactaaaac aaaatattaa aattataagc tttaacacat atgaaattaa ctagtccaaa 4380

gtatcaagcc aaaaaatagg tacaagttcc cttcgacaca aaaagagata aagctgtatg 4440

aatgaaatta gctactcaat tcagcatgca tgacaacagc aaaaaaactg ctagctcatc 4500

agtatagttc ttagtatttc ttactactta atagtatgag ctaattgctt cttcagttgc 4560

tgaggttttc agtaatcatg aggagagaag tgctgatgca tgcataaaac tacaattctt 4620

tagacatata cttagccagt acacttacta tagccttgca aatttattct ctacagattt 4680

tgtaacaaag caatcatgag tatatactat atataagtaa ttgtaacttt agttctcact 4740

tgtcaggatg ttacctaagc gtgcttttgc cccattaatc cttatatttg agctgccttt 4800

gtatgcaatt ttatatctgg catgtaacga cagtggcatc cggagaacgt cttcattgga 4860

tgttcctttt tcatgttcat tcttgccatg agattcattg taagatctct ctctctctct 4920

ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctcgatct tgatcttgat 4980

cttggagaac gaatactttc agggaaggaa gtacaagaaa ctcttttggg tctctgccat 5040

tgcacctgta ctatcagttg cactatctac tctgtttgtc tatgcgacaa gagcggataa 5100

gcacggcgtg aagattatac aaaaagtgaa ttcaggtatt aatgcaagtt ctgtcgagca 5160

gatagatctc aaaggaggct atgctgccga atgtgcaaag attgctcttg tttgtgctgt 5220

gattgctctg acggtacgtg tttacccttc aaagatagtc ctgcactcct gctcctctcc 5280

ctgtaaaacg agaagaagaa gaagataatc ctgttgtttc ttcattctta taatttatta 5340

ggccttttgt acaaattaga ctcaggttgt tgtatcaaaa ctttgcttcc ttgctaaaaa 5400

taatgcactt caaaagaaat aatgtgactt actcctatac tcctagtgct gcagcgtatt 5460

tgtcaagaga gtagtgcgta tatactttta caaacagaaa cgtgtgcggc ctaaaatctc 5520

atcaggcatt aattagagaa aattgactcc tccactattt ttattttata taaagctatg 5580

aagtgaacta ctcattttaa acaaaaaaaa gtgagtaggc ataagcttaa atgaacttct 5640

gcagaaatta ttaaaagtat aaataagtct agcctaaagg agtattcaga gttcagacag 5700

ctattagtag aaactcacta agcatttcag aatcactcaa taggaggtcc atatgaaaac 5760

tgagtttcag aaaactattc tggtctgtgt tgtttatgac aggaagctgt tgctgttggc 5820

cgctcttttt cagcgatcaa tggatatcgg ttggacggaa ataaggaaat ggtagcaatg 5880

ggcttcatga atatagcagg atccttatca tcatgctatg tagcaacagg tgaataaaaa 5940

atctgcagat cgtatgtaca ttcctagatt cgttcaacca tcaaacttta ctttggtaat 6000

tatctgcagg ttcattctcg cgcacagctg tgaacttcgc tgctggttgc aagacaaccg 6060

tttcaaacat tatcatggct gccactgtga tggttgcctt ggagcttctc acaaagctcc 6120

tgtactacac acctgtgtcc atccttgcat caatcattct gtcagctctt ccaggattga 6180

tcaatgtgca ggaagtctgc ttcctgtgga aagtcgacaa gatggacttc ctcacatgca 6240

tgggatcatt ccttggtgtt ctattcggat cagtggagat tggtctttca gttgcagtac 6300

tgatccctca tttgatctga agtttactac tgtatttttt ttttcatttt gattcatcag 6360

aagtatgttg aagtttcatt tcttgcatgc atgcttatgc aattctgatt tggtggagct 6420

cttcttgcag cttcttgttt cctttgcaaa gatcattata cagtcgattt ggcctcaagt 6480

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caactccagt tccatcaaag aaaagtacag acactaatca caagcaattg ggatcacaaa 6660

agggaatacc tgaatgctgg atgactcggt attaattcac ttttccctgt ttccaggatc 6720

atgggatggg taaccgatga gcgcgaggca ttttgctcgg tcgttcttga catgtcaagt 6780

atatgaaatt tacacaagtt ggctattgtc agagtgatct ctacctagca ttatcctgac 6840

atgtgagttc ctatcttgca gatgtggtaa acatggatac ttcaggtctt gtggcgctgg 6900

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ggtttccaac atatgtatag agtttgcact gcatattttc ctccgaaaag ctggccgatg 7020

ctgtggtgaa atgctctcgc ccttgtcctg aaaaacaacc ccacttgcag atggctatag 7080

ccaagcctgg atggcaggtg atccacaaga tgaaactggc acggctcgtc gacggaatcg 7140

gagaaggatg gttcttcctc acggtgggcg aagccgtgga agcttgcctg gcaaacaagg 7200

cgggaaacgc cctggaatgc tgctgaatcg aatccaccgt gtgcatggtc tctccggtgg 7260

ttgaataaag agagacacta gtgcttcgtg gtacgctaca aaaggattgt gttgtgtgct 7320

agtgctgcac gatgatgcag cttcagctgt agtgtggtgc ttcatggatt gtgcgacgtg 7380

caactgttgg gggaagacga actgtgtctg tctgaactta gtatgccgag ttcgtctaaa 7440

ttccccacta tagctgtagg tttgtgatgt atcggatgca tttgtgaaga gcaaatgcca 7500

ggttttaagt gttggaactg atgattgtgt aatattatta tattaatcga gtttgtataa 7560

ttaatttgta ctcgagtttg tgcgttttgg caaaatccga gctactatgc tgcaaaattc 7620

atttgtcc 7628

<210> 4

<211> 5348

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<220>

<221> gene

<222> (1)..(5348)

<220>

<221> 3'UTR

<222> (5023)..(5348)

<220>

<221> exon

<222> (4870)..(5022)

<220>

<221> Intron

<222> (4772)..(4869)

<220>

<221> exon

<222> (4695)..(4771)

<220>

<221> Intron

<222> (4587)..(4694)

<220>

<221> exon

<222> (4503)..(4586)

<220>

<221> Intron

<222> (4421)..(4502)

<220>

<221> exon

<222> (4227)..(4420)

<220>

<221> Intron

<222> (4119)..(4226)

<220>

<221> exon

<222> (3832)..(4118)

<220>

<221> Intron

<222> (3729)..(3831)

<220>

<221> exon

<222> (3602)..(3728)

<220>

<221> Intron

<222> (3362)..(3601)

<220>

<221> exon

<222> (3131)..(3361)

<220>

<221> Intron

<222> (2966)..(3130)

<220>

<221> exon

<222> (2900)..(2965)

<220>

<221> Intron

<222> (1648)..(2899)

<220>

<221> exon

<222> (1473)..(1647)

<220>

<221> Intron

<222> (1385)..(1472)

<220>

<221> exon

<222> (1177)..(1384)

<220>

<221> Intron

<222> (1062)..(1176)

<220>

<221> exon

<222> (1013)..(1061)

<220>

<221> Intron

<222> (699)..(1012)

<220>

<221> exon

<222> (369)..(698)

<220>

<221> 5'UTR

<222> (1)..(368)

<400> 4

acacctgcag cgctgcccct tcctctcagt ggagaggaga gcgaaacgag acgagacgag 60

aattcctctc tcctcctgtg tgcatccgtc catccacgcg ttcccgagaa tcgcatcgcg 120

atcgggggca tacatttgat gcttacacga gaggaattct aagctctcgc tcgctcgctc 180

gcaacctctc gtgcgatcgt cgtcgcgtgc cagtgtcacc tcgccttcaa gagattctcc 240

cctccaagac gcgcccggcc agacgccagg agtcgtggtc gccgagacta cggctttaaa 300

gccagcgagg cgaggaggag ttcccccaaa cacttcagta gctgctactg tagccagcag 360

cggcggccat ggaggacacg gcggcggcgg tcgagacgcc ggtgacggtg tccacattcg 420

gtgtatccag gcacccggac acggccaggc tcgtgctgag cagccccaag ccgccaggcg 480

tgcgcgagga gttcgtcggc gtcgtccgca aggcgttccg gccgcgggcg agcggcggcg 540

gaggagcagg ccgtacgccg ccggcgcggt gggggtgggc cctcacggcg ctgcagaccg 600

tgttccccgt gctgcagtgg gggaggacct acaacttcaa gttgttcagg agtgacgtca 660

tggcaggcct cactcttgcc agccttggaa ttcctcaggt acgtagtaac ttttattatt 720

ttttttatac ccttcccata atactgtagc agtaaccagc ataacagaaa agcaactgca 780

aacagatttt gtcttgacac cattaatgat ttctacagca tcaaaaactt ggagtctgaa 840

aaatcatgat agatgtagac gatttgtaaa gaaaaaaaag aagtaaaaaa cagaagaaca 900

ttggagcaga gcatgcatag tttttgccta gaaatagtga gatggggatt ggggagagct 960

gtctcgttct tatctgacat atgctatccc ttggatatga tccatcctgc agagcattgg 1020

atacgccaat ttggccaagc tggaccctca gtatggtctt tgtaagcatc aatacttcag 1080

cttcgttgca caaaaacaac tcaattttct cctcattttt cctgaacgat tcttgcatca 1140

tttttttttg ctatttgcta tgtggccatc gtcaagacac gagcgtggta ccgccgctga 1200

tctacgccgt catggggacg tcgcgggaga tcgccatcgg ccccgtcgcc gtcgtctcgc 1260

tgctgctgtc gtccatggtc tccaagatcg tcgacccggc cgtcgatccg gtcacctacc 1320

gcgccctcgt cttcaccgtc accttcctcg ccggcgtctt ccaggtctcc ttcggcttgt 1380

tcaggtacaa cgacgaacac caacctctct gtataccact ccagttgcta tacttgttca 1440

ggctaccaac gatcgttttt gctacgccgc aggttgggtt tcctggtgga tttcctgtcg 1500

cacgcggcga tcgttgggtt catggcagga gcggcgatcg tgatcgggct gcagcagctg 1560

aagggattgc ttgggctgag ccatttcacc aacagcaccg acgtcgtctc cgtcatcaag 1620

gctgtctgct ctgcactccg agacccggtg agcctccaga ctccagtaga acagaatcat 1680

ttactacagt taagccgaac aagaacaaag acaaatagat gcacagtgat gaaataatcg 1740

tccatggaga atgaacgatc gactaaagtg tagggacata caacgacggc atggacatgc 1800

acacatcgct ctcgacatta tttgtctgct tatttttgtc atgactcggt tgttagtttc 1860

ttctcatctg catttcaaag gctcctagaa aattaacctg tttactgaat gctacctgaa 1920

aagaaatggc gtccctttcg ttgttacaac cgatatgatt ggacaaaaga ctcggggctt 1980

attagttgtt cttttgtgca ttattatagt ctggatattg gttgggaggg acaagttggt 2040

tttcagtagt ctccccgtga tatgcaggga ggtcagaggt gcacgcatca caaacgagca 2100

accctttctg ggttggatat ttttttgtcg aatccttaaa ccaattttgt agttttcagt 2160

gcctggattg actgaacata gtaaaatgag ataaataaag acaacaatta gcacctaatc 2220

ccagctcaat caatttggtg tatcgtcctg aactactact aatagttata tattatataa 2280

tgatcctaga aaagatcgtt ggatgttgca taggttgttg gtattcagta gtcggtacca 2340

aggtttacct taccgcgcgg ttaccggcgg ttaccgtggt taccacgctt accgcggggg 2400

tacggtaata taaataccgc ggtaaccttc tcaaattcaa ataaatttaa aaaataattt 2460

gaatttttga taaattttgc acggtttttc acggttacca cggttaccgc gcggtaaccg 2520

tgcttaccgc cggggcgcga taaccctggc cccggtggtt tgggaaaccc tggtcggtac 2580

acgattgagc aaagagaatt tatgagcaaa accagaagcc tataaacaat caaaatcgag 2640

tacttggaat gaatatgcaa cttgacagta cagaataatc aggcttcagt ggatgaagaa 2700

caagaccaca tgcgtgcact gtttactatt tggatactac ttaatggaca aacatagcgc 2760

gtgcctttat gtcaaccccc caccgcttat gctcggctca actgttgtct gaatatattc 2820

agacaaagaa gaaaataaaa gatgaactgc tgtatctaat attctaatgt gctctctctt 2880

ttatctaatg gcattgcagt ggcaccccgg caacttcttg atcggatgct cattcctcat 2940

cttcatcctc gccacgcgat tcattgtaag aacaatcaat taatcaaacc aaatatctct 3000

tccgatccaa ttgctgttta agagaaaaga aacatatctt aatcttccca tgatctgatg 3060

atcatcagag gatcgagcac acatgcatgt tagttaacac atgaaacggg tttgcaaaat 3120

gtggccacag gggaggaggt acaagaagct gttctggctg tcggccatct cgccgctgct 3180

gtccgtcatc ctgtccaccg ccgccgtgta cgcgacgagg gccgacaagc acggcgtcaa 3240

gatcatccag cgggtgcacg ccggcctcaa cccgagctcc gccagccagc ttcgcctcag 3300

cgggccgtac accgtcgact gcgccaagac cgccatcatc tgcgccgtca tcgccctcac 3360

ggtaagtagc agtaaaattc ttcagttacc atcagggcgt tctatgggcc tgttcgtggg 3420

cttatctggg cctgaaaaga cttcagccca aaatgtaagc ccaaggtcca aaaaaatttt 3480

gggcctcaga tgggcctgct ggcccatgaa caggtcatta tagtaaagag aagaaaaaaa 3540

aattgaaaag aagagatgaa gatgcagtga tttattgaca ttcttgtgtt accttttgca 3600

ggaagccatt gctgttggac gatcattcgc gtcgataaga gggtacaaac tcgacgggaa 3660

caaggagatg atcgccatgg gatgctcaaa tgtggccgga tctctctcct cgtgctacgt 3720

tgcaacaggt gatcacaatt acagctacct atatgcagtc ttctgaagaa gaatcaaatc 3780

aaatcaaata aatactgctg gtgtctgaca gacgtcaaca aaatttttca ggctcatttt 3840

cacgaacagc cgtcaacttc agcgccggcg cgaggtcaac cgtgtccaac atcgtcatgt 3900

ccatcacggt gttcatcgcg ctggagctgc tcatgaagtc gctctactac acacccatag 3960

ccgtgctggc ctccatcatt ttgtcggcac ttccaggcct gatcgacatc aaggaggctc 4020

tcagcatctg gaaggtcgac aagatggatt tcctcacatg cctcggcgcg ttcgtcggcg 4080

tgctcttcgg atcagtcgag atcggcctcg ccgtagcggt aagatcaatg ccggatggat 4140

catagatgca gcttggtttc gagtcgaaat ttgtgcaaat tttatgtcag ttgtatgact 4200

tggtatggat cgatcgctca atgcagctcg ccatctcctt tgccaagatc atcatacagt 4260

caatccggcc tcaggtagag gttcttggta ggcttcaggg gacaaacatc ttctgcagca 4320

tcagacagta ccctgttgct tgccggattc cgagtgtatt gacaattcgg attgatacat 4380

cattcctgtg ctttatcaac tccactttca tcaaagaaag gtaggaatgg tcaatctcat 4440

aaaatttata tgagtttgta atgtttgagt aggaatgctc aaatatgtgt tcttcattca 4500

ggatcatcga atggatacga gaagaagtcg agacgtctga tgagaaggcc agggagaggg 4560

tgcaatctgt tgtccttgac atgtcaagtc agtacaaatt acaaaacaca aataacttca 4620

ccattttcta acgaaaactg gtgctactga acaattcaga aaaagaaaat ctgacccatc 4680

tttctgattt gcagatgtgg taaacattga cacttcaggg atttcggcct tggaagagat 4740

acacaaggag ctggcatctc ttagcataca ggtgaagtag ttgactgatg gatataagta 4800

ctagctccca aaatttccta gtaaaatgct ctcgttcttg tgctgaaaca cctctctgct 4860

gctctgcaga tggccattgc cggcccagga tggcaagcga tccagaagat gaaattggca 4920

ggtgtggttg accaggtagg aggagactgg atatttttga cagtaggtga agcggttgaa 4980

gcctgtgtaa ctatgcaaaa gggcactgct ctggaatgct gaggtgtgtg tgttagtagt 5040

acttagtagg attaacacca tattaagaca taagtgatgc tgcttagtgc tttgcatcca 5100

gccattcaat attccagagt gaacaatgtc tatagaagtt agaaaaatgc tttgcaggca 5160

gtaagcatcg aagaaatgtt actgcgataa caactgcagt gtgatggttc cgtagtaacc 5220

aatgcgctca ctaataaatg tgttgttgcc actgtaattt gtagtaaata ctttgtgatg 5280

gttaatgcca ctaactatat tggatcagtg tactcgaaca cagatgattg tttttccttt 5340

tcttcgta 5348

Claims (3)

1.来源于水稻miR395基因在增强水稻对白叶枯病和细菌性条斑病抗性的应用，其特征在于所述miR395基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，将miR395基因构建在过量表达载体上转化到水稻体内，获得具有增强水稻对白叶枯病和细菌性条斑病抗性的转基因株系。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，将miR395基因构建在过量表达载体上转化到水稻体内，增加水稻叶片和木质部中硫酸根离子的积累。

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