CN110885825B - 一种花器官特异性启动子 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种来源于红花的新的花器官特异性启动子，属于基因工程领域。本发明的花器官特异性启动子pCtFSG2序列如SEQ ID NO.1所示，其截短形式也具有一定的启动子活性。本发明的启动子丰富了当前花器官特异性启动子，为植物的基因工程改造，尤其是红花的定向改造提供了新的工具。

Description

一种花器官特异性启动子
技术领域
本发明属于基因工程领域，尤其涉及一种花器官特异性启动子。
背景技术
启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA，它含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需的保守序列，多数位于结构基因转录起始点的上游。
不同基因的启动子序列有所不同，但通常包括核心启动子元件(core promoterelement，CPE)和上游启动子元件(upstream promoter element，UPE)两类元件。其中CPE是指RNA聚合酶起始转录所必需的最小的DNA序列，通常包括转录起始点(transcriptioninitiation site，TIS)和TATA框(TATA box)。转录起始点也称帽子位点，通常位于翻译起始密码子(ATG)上游-70～-40bp处，是与新生RNA链第一个核苷酸相对应DNA链上的碱基，通常为腺嘌呤(A)，而TATA框位于5’端转录起始位点上游约20～30个核苷酸的地方，为一个短的核苷酸序列，其保守序列为TATAATAA，为RNA聚合酶重要的接触点，控制转录起始点的识别以及转录起始。UPE则通常包括位于-70bp附近的CAAT盒和GC盒以及距离转录起始点更远的上游元件，CAAT盒是位于5’端转录起始点上游约70～80个核苷酸的地方，其保守序列为GGCTCAATCT，是RNA聚合酶的另一结合点，一般控制转录起始频率；GC盒通常位于转录起始点上游约-90bp处，出于TATA盒与CAAT盒之间，或CAAT盒上游，其保守序列通常为GGGCGG，以单拷贝或多拷贝形式存在。
有些启动子只在特定组织中控制基因表达，被称为“组织特异性启动子”，它们除了前述元件以外，还包括一些特异性的序列，有些特异性的序列被人们总结归纳出来，比如：马铃薯有“TAAAG”保守序列，是基因在块茎中特异表达所需的(马铃薯块茎组织特异性启动子的克隆及序列分析，生物技术通讯，2011)。
需要注意的是，保守序列并非绝对一成不变，它只能反映对应位置碱基分布的倾向性，因此，启动子预测/挖掘软件很难正确找到某一基因组区域的大多数启动子；加上每个基因的启动子元件和位置各不相同，启动子区域变得更加难以预测。这也是为什么美国国立生物技术信息中心(NCBI)官方网站有注释基因编码区、保守结构域在基因组中位置的数据库，但没有注释启动子位置的数据库。
花(器官)特异性启动子，对研究相关基因在花卉发育中的功能，改良花卉观赏性，增强药用花卉的药用价值等具有重要作用。例如，可将三花龙胆中克隆得到的CHS基因启动子连接某些花色相关基因，转入到矮牵牛的花瓣唇部进行特异性表达，提高矮牵牛的观赏性(Flower-specific gene expression directed by the promoter of a chalconesynthase gene from Getianatriflora in Petunia hybrida，Pant Sci，1998)；亦可在药用植物红花中转入花器官内特异启动子连接的某些关键基因，来优化红花合成药用活性成分的代谢流，提高红花的药用价值。
目前花器官特异性启动子报道较少，应用于植物基因工程改造的更是鲜有报道。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种新的花特异性启动子，以及该启动子在转基因植物新品种中的用途。
本发明的技术方案包括：
一种启动子，它是序列包括SEQ ID NO.7和/或SEQ ID NO.8的启动子。
进一步地，所述启动子包括SEQ ID NO.5所示的序列。
进一步地，所述启动子包括SEQ ID NO.4所示的序列。
进一步地，所述启动子包括SEQ ID NO.3所示的序列。
进一步地，所述启动子包括SEQ ID NO.1所示的序列。
进一步地，所述启动子的序列如SEQ ID NO.1所示。
一种重组质粒，它包括前述的启动子。
如前述的重组质粒，所述质粒是将前述的启动子插入pRI201-AN-GUS载体得到的重组质粒。。
前述启动子或前述重组质粒在构建转基因植物品种中的用途。
进一步地，所述转基因植物为转基因红花或拟南芥。
发明人通过对名贵药用植物红花的研究，发现本发明所述的花器官特异性启动子。所述启动子活性高，特异性好，可用于各种对植物花器官进行基因工程改造的应用，尤其有望应用于定向修饰红花基因组，以增加特定产物的合成，提升红花的药用价值。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1：启动子活性分析。a：启动子构建构造示意图。b：活性分析。测定GUS和LUC活性。启动子活性以GUS活性为内参，LUC/GUS为启动子活性。pCtCHS2活性为单位1。
图2：拟南芥不同部位的GUS染色。用pCtFSG2：：GUS转化的拟南芥。Col-0作为对照。
图3：片段缺失分析。a：4个缺失片段(P1、P2、P3和P4)的克隆。b：四个片段构建载体示意图。c：启动子活性分析(*，P＜0.05；**，P＜0.01)。
具体实施方式
注：
Luc：荧光素酶Luciferase。被检材料若表达Luc，在外加Luc底物的情况下会产生荧光。
Gus：β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuronidase)。组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸(X-Gluc)作为反应底物，将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。若组织细胞发生了gus基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物。
实施例1本发明启动子pCtFSG2的活性分析
1.方法
本实施例在红花原生质体中以荧光素酶(Luc)作为标记基因，检测本发明花器官特异性启动子的活性。具体步骤如下：
1)原生质体制备
取红花花期中期的花切成小段；立即转移到0.6M甘露醇溶液中，并在黑暗中放置10分钟；将花段转移至酶溶液[1.5％纤维素酶-RS(Yakult，Japan)；0.75％果胶酶R-10(Yakult，Japan)；0.6M甘露醇；10mM MES；10mM CaCl2 and 0.1％BSA]中处理4h；；水平离心收集原生质体，在MMG溶液(15mmol·L-1MgCl 2，0.4mol·L-1甘露醇，4mmol·L-1MES)中重悬。
2)瞬时表达
pCtCHS2在Chen的文章中(Cloning and Analysis ofPromoter Regions ofFlavonoid Biosynthesis Genes in Safflower，Plant Molecular Biology Reporter(2018)36：239-246)，被证明是一个红花花特异启动子，具有较好活性，本实验通过该启动子作为对比，验证是否pCtFSG2启动子活性较pCtCHS2启动子活性更好。
取含有pCtFSG2：：LuC(：：表示前后片段融合，下同)和pUbi-Gus(1∶1)的质粒(共10μg)与100μl原生质体悬液混合；另取含有pCtCHS2：：Luc的质粒5μg与100μl原生质体悬液混合。然后，加入110μl新制PEG溶液(PEG4000，Sigma，4g/mL)，黑暗环境放置15分钟，加入W5溶液(154mMNaCl，125mM CaCl2，5MM KCl，2mM MES)。轻柔地来回颠倒离心管，混合溶液，离心。将原生质体轻柔地重悬于MMG溶液中，转移到多孔板中并在光照下培养。
含有pCtFSG2：：Luc、pCtCHS2：：Luc的质粒的构建方法如下：
克隆含酶切位点SmaI和Sac I的Luc基因，替换pBI221(TAKARA，Dalian，Beijing)中的GUS基因，构建35S：：Luc载体，克隆含HindIII和BamHI酶切位点的pCtFSG2和pCtCHS2片段，将片段插入并替换35S启动子，即得。
其中pCtFSG2(SEQ ID NO.1)和pCtCHS2(SEQ ID NO.2)的序列如下：
pCtFSG2序列：
GGTCCCTGTGGTTTGGTGTTTTTAACACTTTGGGTCCCTAAAATGAAATATCTACGACTTAGGTCCTCATGGTTTGCATTCTATAACGTCTTAAGTCCCTAGAATTAACTCCGTTAAACAGTCTCTGTTAAGTATAAGGATATTTTAGTCATTTTATATATAATAAAATTTTATTATAAAAACAGGGACCATATATGTAATTTATGCAAATACCATATTTTTCAATCTTACCAGGTGAAACCTCATCTTTCAAAACAGAATTTGTGAAATCTAAACCCTTATCCTCGGCCTTCATCACCGGTAGCCTCCGCCTTTAAGCCAACCGGTAGCCTCCGCCTTTCTTCACCACCATCTGCACCAACGCCGCCTCCACCTTCAGTCAACACCGTCTGCAGCACCATCGCTTCCTCTACTAACGCAACTCCACCTACTCTCCACCACAACTTCACCCCCGTAGTCATCTCGGCTCAACCCACCTGTTTTCGGCACTACTCTTAAACCGACGAGTTTTCTGGCACGGGTCTGCTGATGATGAACATTGATTATCTTCTGGATTAAAAACCCACCAAACCAAAAAAACCCTACGCAGCCACCGGCCGTCTCCAACACGGCCGCCTTCACACCGGCCGCCTCCACCATCAGTTACCGCTTTCCGAGACCACCATCATCGTCGTCTCCGACGAAATCCCTAAACAACAGGCCGAGAGCACCACCACCGTCCGAGAGCAACGCCACCTTCCGCCACCGTTATCTCAGGAAACGACCCTAAACAACAGTCGTCACCGTCATCTCAACTTCTCACCTAAACAACAAGCCCCTGATTTTTTTTGAAGATCCATGTGTTTGAGTTTCAAACGATTTTAGATTCAGATTCAAATGTAGGGTTTCAGTTTCAAACGATTTCGAAACGTGCATTCATATTTGATTAGTTTCTTAAAAGTCCATATTCATATGTAAGAAATTTAGGGTTTTGTTTAGGGCTTTTTCTTGTTCTTTTCTGGATCGATTTTTCAGGTTTTGTTTTTTCGGATTCTTTATTGGAATCAGATTTGATTATTCGTCATCTTCATCTTCAAATGATTTTGGTTGATGAATCAAGTTTGTTTTTTTAAAGTGTATGTGTGTCAGATTTTAGGTATTTTATAAATTAGATTTTGGTTCATCTTCATCTTTGGGCATATTTATGTATGGCATATTTATGTATGTGTGGTGGTTGTGGATCATATGGGGTGTTTTCTTGTTCAATTTCTTTGATTTCTTTAAATCTTAATTTTTGATTCTATGATTCATATGGATTTATGGTTTTTATGAATGGATTAATGAATTAATTATAATTTTTTAATGGTGGTGATGGTAGCAGCGGCAGGTGATGGTGGCGGCGGCGGCACGTGATTGTAGCGGCAGCGGCTGGCGGCGGCGGCGGCGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGCTGGTGGTGGTGGTTTGGTTAAATGGAGAAGATGAAGTCATGTGGGGATAAAGATTATGATAAATTACATGTATGGTCCCTGGTTTTTAAATAGAAAACAAAAGGAAATATAAAATGACTAAAATATCCGTGTTTTTAATTTATTTAACCGAAATATTTTACAGAGTTAGAAGGCAGGGACCCAACACGTTATAAAATGCAAACCACGAGGACCCAATCTATAGATATTAGATTTTAGGGACCCAAAGTGTTAAAACCACCAAAACATAGGGACAAAATATGTAATTCACTCTTAAATTAATTTAGGAACGAAAAGGTACACTGAGGGTCTAATAAATTTTAAAATTTTGATAGGACAAAATTGATAAAAGACCACGTGGGGAAATTCTGATATTTTACTGATTTGTATTGTTATATATACATTTTCGTGAAACTCCTTCAAATCCTATAAATACCCTCCATTGTTATCATCACCTTCTCTTCATGGAGCTCAAAATGGCAAAAATTTCACTTGTATTCTTTCTACTTGTCTTCATTCTTGCTATCTCAGGATTGACG
pCtCHS2序列：
AATCATCAACCCAGCAACAACTCTATCGGTGTCGGCAACCTGATTTCAATCGCAACCCGCCGAACCCGCTGGGGCCATAGCGGAAGCCACCGAACCCGCTGACCCGGTGGGTTCGAGCCCGCTGAACCCCCACTCCCGTTACACATAGCCTTAAAGTGACTTTTATAGTCGGTTATATATAACTTTTTTTTATTAAAAGGAAATAGGTAACCAACTTTTACAAGTTCAATTGTTACTTATTAAAAAATTCACTTAATTATTAAAAACAAATTAGTTACTAAGAGGGTGTTTGGGATAGCTTTTAAAAAGTGTTTATTGACTTATTGGCTTTTCAAAAAGCCGATAAGTTAAAAATATTATTTGACAACCGGAGAAGCACTTTTCAAAAGTGCTTTTGGAGTAAGAAGGAAAATCTGTTTTTAAAAAGTCAGAAAAATGTGGCTTTTTGATTTTTGCTTTTGGCTTTTAGCTTTTCTCTCTCACATAACCCTACTTTTTAACCCAAACATTTTTTAACTTATTGACTTTTACCACTATAAAAGCTAATCCAAACACTTTTTTAAAAACTCATTTTCCCACCACCATAAGTCAATAAGCGCTTTTGACCAAAAGCACTTTTGGACCTCAAAAAACAATCCCGAACACCCTCTAACTTATTAAAAATAAGAAAATTCAATAGCTTATTTATTTAAAAATAATTAAAGATTGTTCCATTGAAAGCTCCTTATTTTTTAAACTTTTCCCTTATAAAAGTATAATTTGTTCTTCTGTTCTCCCTCCTCCCTATTTTGGTTATTAACTTACATATTGTACATGTTGAAGCTTTAACTATCATCATCTATCAATCTCAAAAATCTTTAGTTTTTCTTTTTCCTTTTTCCTTTTTATTAAAAACATATAGTTATGACCAGATTGAATTTGGTGGGAGTCTTCTAAAGTAAATACAATAACAAATAAAAAAAAAATAAATAAATATATACCAATAGTCTCATTTAATCTTCTCATCTACTTCCATCCTCACCCTATCATTATTACTAATTAAATCTTCACCTTCCCTTTCTTACATTACATATACCCCCTTTCACACCTCTCTTCATCCACACCACCTTCTTCTTCTTCTTCTTCTTCTTCACCCTCAAAACTCTTGCAAAATGCTCAACTTTGCAAACCAACTATATGACTTCTTTCCAATCTCCATTCCACCACTTCACAACTTCAATCATCTTTCTTTCATTCATGCACTCATTTTCTCTTTACTCACCATCACCCCCATTCTCATAACCTTCTACCTCTTAAACAAACCGAAAACCGTCTACCTTCTCGACTTCGCGTGCTTCAGACCCCCGTCCGTCCTCCGAGTCCCCTACGCCACCGCGGCCGAGCACGGCCGCATCATCTTGGCCTCGCAGCCGAAAAGCATAGCCTTCCAGGTTAAGATCTTCGAGAGATCCGGTTTGGGTGAAGAAACATGCTTACCACACCCACTACACTATCTACCACCAAACCCTAACATGATGGATGCAAGAGATGAGTCCCAATTGGTGATTTTCTCGGCCATGGATTCGTTGTTCCGAAAAACCGGACTTAGCCCTAAAGACATCGACATCTTAATCGTGAATTGCAGCTTGTTTTCGCCCACCCCTTCCATTTCAGCCATGGTGGTTAACAAGTACAAGATGAGAAGTAATGTCAAGAGTTTTAACTTGTCCGGAATGGGGTGTAGTGCCGGATTGATCTC
含有pUbi-Gus的质粒的构建方法如下：
克隆含有HindIII和BamHI的Ubi启动子序列，将序列替换pBI221中的35S序列，即得。
3)Gus和Luc活性检测
使用GUS活性检测试剂盒(荧光法)(百思禾，南京，中国)检测Gus活性。
使用Promega的荧光素酶测定系统测定Luc活性，发射光子时间为10s，使用Luminoskan Ascent仪器(Thermo)进行相关荧光测量。
在计算启动子活性时，以GUS活性为内参，计算启动子活性。
2.结果
以pUbi-Gus为阳性对照，以pCtCHS2启动子为对照，检测Gus和Luc活性，发现pCtFSG2活性为pCtCHS2的2倍以上(图1)。
本实施例表明，pCtFSG2是一种活性很强的启动子。
实施例2pCtFSG2：：Gus载体在拟南芥中的表达分析
1.方法
将pCtFSG2：：GUS载体转染拟南芥，得转基因植物。通过Gus特异性引物鉴定阳性T2代植物。再用Gus染色检测拟南芥不同器官。
2.结果
结果如图2所示，只有花器官带有GUS染色信号。
本实施例表明，pCtFSG2是一种花器官特异性启动子。
实施例3片段删除分析
1.方法
设计四个缺失片段(P1，P2，P3和P4；如图3所示)，P1大小为2029bp，P2为大小1610bp，P3大小为1056bp，P4大小为566bp；缺失片段分别与Luc基因融合，构建到pBI221载体上的多克隆位点上，得到四种重组质粒。将重组质粒分别转入红花原生质体，并检测Luc活性(方法同实施例1)。
P1(SEQ ID NO.3)、P2(SEQ ID NO.4)、P3(SEQ ID NO.5)和P4(SEQ ID NO.6)的序列分别如下所示：
P1：GGTCCCTGTGGTTTGGTGTTTTTAACACTTTGGGTCCCTAAAATGAAATATCTACGACTTAGGTCCTCATGGTTTGCATTCTATAACGTCTTAAGTCCCTAGAATTAACTCCGTTAAACAGTCTCTGTTAAGTATAAGGATATTTTAGTCATTTTATATATAATAAAATTTTATTATAAAAACAGGGACCATATATGTAATTTATGCAAATACCATATTTTTCAATCTTACCAGGTGAAACCTCATCTTTCAAAACAGAATTTGTGAAATCTAAACCCTTATCCTCGGCCTTCATCACCGGTAGCCTCCGCCTTTAAGCCAACCGGTAGCCTCCGCCTTTCTTCACCACCATCTGCACCAACGCCGCCTCCACCTTCAGTCAACACCGTCTGCAGCACCATCGCTTCCTCTACTAACGCAACTCCACCTACTCTCCACCACAACTTCACCCCCGTAGTCATCTCGGCTCAACCCACCTGTTTTCGGCACTACTCTTAAACCGACGAGTTTTCTGGCACGGGTCTGCTGATGATGAACATTGATTATCTTCTGGATTAAAAACCCACCAAACCAAAAAAACCCTACGCAGCCACCGGCCGTCTCCAACACGGCCGCCTTCACACCGGCCGCCTCCACCATCAGTTACCGCTTTCCGAGACCACCATCATCGTCGTCTCCGACGAAATCCCTAAACAACAGGCCGAGAGCACCACCACCGTCCGAGAGCAACGCCACCTTCCGCCACCGTTATCTCAGGAAACGACCCTAAACAACAGTCGTCACCGTCATCTCAACTTCTCACCTAAACAACAAGCCCCTGATTTTTTTTGAAGATCCATGTGTTTGAGTTTCAAACGATTTTAGATTCAGATTCAAATGTAGGGTTTCAGTTTCAAACGATTTCGAAACGTGCATTCATATTTGATTAGTTTCTTAAAAGTCCATATTCATATGTAAGAAATTTAGGGTTTTGTTTAGGGCTTTTTCTTGTTCTTTTCTGGATCGATTTTTCAGGTTTTGTTTTTTCGGATTCTTTATTGGAATCAGATTTGATTATTCGTCATCTTCATCTTCAAATGATTTTGGTTGATGAATCAAGTTTGTTTTTTTAAAGTGTATGTGTGTCAGATTTTAGGTATTTTATAAATTAGATTTTGGTTCATCTTCATCTTTGGGCATATTTATGTATGGCATATTTATGTATGTGTGGTGGTTGTGGATCATATGGGGTGTTTTCTTGTTCAATTTCTTTGATTTCTTTAAATCTTAATTTTTGATTCTATGATTCATATGGATTTATGGTTTTTATGAATGGATTAATGAATTAATTATAATTTTTTAATGGTGGTGATGGTAGCAGCGGCAGGTGATGGTGGCGGCGGCGGCACGTGATTGTAGCGGCAGCGGCTGGCGGCGGCGGCGGCGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGCTGGTGGTGGTGGTTTGGTTAAATGGAGAAGATGAAGTCATGTGGGGATAAAGATTATGATAAATTACATGTATGGTCCCTGGTTTTTAAATAGAAAACAAAAGGAAATATAAAATGACTAAAATATCCGTGTTTTTAATTTATTTAACCGAAATATTTTACAGAGTTAGAAGGCAGGGACCCAACACGTTATAAAATGCAAACCACGAGGACCCAATCTATAGATATTAGATTTTAGGGACCCAAAGTGTTAAAACCACCAAAACATAGGGACAAAATATGTAATTCACTCTTAAATTAATTTAGGAACGAAAAGGTACACTGAGGGTCTAATAAATTTTAAAATTTTGATAGGACAAAATTGATAAAAGACCACGTGGGGAAATTCTGATATTTTACTGATTTGTATTGTTATATATACATTTTCGTGAAACTCCTTCAAATCCTATAAATACCCTCCATTGTTATCATCACCTTCTCTTCATGGAGCTCAAAATGGCAAAAATTTCACTTGTATTCTTTCTACTTGTCTTCATTCTTGCTATCTCAGGATTGACG
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P3：TTTAGGGCTTTTTCTTGTTCTTTTCTGGATCGATTTTTCAGGTTTTGTTTTTTCGGATTCTTTATTGGAATCAGATTTGATTATTCGTCATCTTCATCTTCAAATGATTTTGGTTGATGAATCAAGTTTGTTTTTTTAAAGTGTATGTGTGTCAGATTTTAGGTATTTTATAAATTAGATTTTGGTTCATCTTCATCTTTGGGCATATTTATGTATGGCATATTTATGTATGTGTGGTGGTTGTGGATCATATGGGGTGTTTTCTTGTTCAATTTCTTTGATTTCTTTAAATCTTAATTTTTGATTCTATGATTCATATGGATTTATGGTTTTTATGAATGGATTAATGAATTAATTATAATTTTTTAATGGTGGTGATGGTAGCAGCGGCAGGTGATGGTGGCGGCGGCGGCACGTGATTGTAGCGGCAGCGGCTGGCGGCGGCGGCGGCGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGCTGGTGGTGGTGGTTTGGTTAAATGGAGAAGATGAAGTCATGTGGGGATAAAGATTATGATAAATTACATGTATGGTCCCTGGTTTTTAAATAGAAAACAAAAGGAAATATAAAATGACTAAAATATCCGTGTTTTTAATTTATTTAACCGAAATATTTTACAGAGTTAGAAGGCAGGGACCCAACACGTTATAAAATGCAAACCACGAGGACCCAATCTATAGATATTAGATTTTAGGGACCCAAAGTGTTAAAACCACCAAAACATAGGGACAAAATATGTAATTCACTCTTAAATTAATTTAGGAACGAAAAGGTACACTGAGGGTCTAATAAATTTTAAAATTTTGATAGGACAAAATTGATAAAAGACCACGTGGGGAAATTCTGATATTTTACTGATTTGTATTGTTATATATACATTTTCGTGAAACTCCTTCAAATCCTATAAATACCCTCCATTGTTATCATCACCTTCTCTTCATGGAGCTCAAAATGGCAAAAATTTCACTTGTATTCTTTCTACTTGTCTTCATTCTTGCTATCTCAGGATTGACG
P4：GGTGGTGGCTGGTGGTGGTGGTTTGGTTAAATGGAGAAGATGAAGTCATGTGGGGATAAAGATTATGATAAATTACATGTATGGTCCCTGGTTTTTAAATAGAAAACAAAAGGAAATATAAAATGACTAAAATATCCGTGTTTTTAATTTATTTAACCGAAATATTTTACAGAGTTAGAAGGCAGGGACCCAACACGTTATAAAATGCAAACCACGAGGACCCAATCTATAGATATTAGATTTTAGGGACCCAAAGTGTTAAAACCACCAAAACATAGGGACAAAATATGTAATTCACTCTTAAATTAATTTAGGAACGAAAAGGTACACTGAGGGTCTAATAAATTTTAAAATTTTGATAGGACAAAATTGATAAAAGACCACGTGGGGAAATTCTGATATTTTACTGATTTGTATTGTTATATATACATTTTCGTGAAACTCCTTCAAATCCTATAAATACCCTCCATTGTTATCATCACCTTCTCTTCATGGAGCTCAAAATGGCAAAAATTTCACTTGTATTCTTTCTACTTGTCTTCATTCTTGCTATCTCAGGATTGACG
上述序列中，下划线标记的ATG序列是转录起始点。
2.结果
如图3所示，P2启动子的活性明显低于P1启动子；P4启动子的活性显着低于P3启动子。
结果表明，从-1953到-1534(SEQ ID NO.7)和-980到-490(SEQ ID NO.8)的DNA区段是pCtFSG2的关键区域，包含与转录相关的重要顺式作用元件。
SEQ ID NO.7为：
GGTCCCTGTGGTTTGGTGTTTTTAACACTTTGGGTCCCTAAAATGAAATATCTACGACTTAGGTCCTCATGGTTTGCATTCTATAACGTCTTAAGTCCCTAGAATTAACTCCGTTAAACAGTCTCTGTTAAGTATAAGGATATTTTAGTCATTTTATATATAATAAAATTTTATTATAAAAACAGGGACCATATATGTAATTTATGCAAATACCATATTTTTCAATCTTACCAGGTGAAACCTCATCTTTCAAAACAGAATTTGTGAAATCTAAACCCTTATCCTCGGCCTTCATCACCGGTAGCCTCCGCCTTTAAGCCAACCGGTAGCCTCCGCCTTTCTTCACCACCATCTGCACCAACGCCGCCTCCACCTTCAGTCAACACCGTCTGCAGCACCATCGCTTCCTCTACTAACGC
SEQ ID NO.8为：
TTTAGGGCTTTTTCTTGTTCTTTTCTGGATCGATTTTTCAGGTTTTGTTTTTTCGGATTCTTTATTGGAATCAGATTTGATTATTCGTCATCTTCATCTTCAAATGATTTTGGTTGATGAATCAAGTTTGTTTTTTTAAAGTGTATGTGTGTCAGATTTTAGGTATTTTATAAATTAGATTTTGGTTCATCTTCATCTTTGGGCATATTTATGTATGGCATATTTATGTATGTGTGGTGGTTGTGGATCATATGGGGTGTTTTCTTGTTCAATTTCTTTGATTTCTTTAAATCTTAATTTTTGATTCTATGATTCATATGGATTTATGGTTTTTATGAATGGATTAATGAATTAATTATAATTTTTTAATGGTGGTGATGGTAGCAGCGGCAGGTGATGGTGGCGGCGGCGGCACGTGATTGTAGCGGCAGCGGCTGGCGGCGGCGGCGGCGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGT
综上，本发明提供了一种新的花器官特异性启动子pCtFSG2，其在花器官中活性高，可用于各种对植物花器官进行基因工程改造的应用，前景良好。
SEQUENCE LISTING
<110> 成都中医药大学
<120> 一种花器官特异性启动子
<130> GY041-2019P018414CC
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2029
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 1
ggtccctgtg gtttggtgtt tttaacactt tgggtcccta aaatgaaata tctacgactt 60
aggtcctcat ggtttgcatt ctataacgtc ttaagtccct agaattaact ccgttaaaca 120
gtctctgtta agtataagga tattttagtc attttatata taataaaatt ttattataaa 180
aacagggacc atatatgtaa tttatgcaaa taccatattt ttcaatctta ccaggtgaaa 240
cctcatcttt caaaacagaa tttgtgaaat ctaaaccctt atcctcggcc ttcatcaccg 300
gtagcctccg cctttaagcc aaccggtagc ctccgccttt cttcaccacc atctgcacca 360
acgccgcctc caccttcagt caacaccgtc tgcagcacca tcgcttcctc tactaacgca 420
actccaccta ctctccacca caacttcacc cccgtagtca tctcggctca acccacctgt 480
tttcggcact actcttaaac cgacgagttt tctggcacgg gtctgctgat gatgaacatt 540
gattatcttc tggattaaaa acccaccaaa ccaaaaaaac cctacgcagc caccggccgt 600
ctccaacacg gccgccttca caccggccgc ctccaccatc agttaccgct ttccgagacc 660
accatcatcg tcgtctccga cgaaatccct aaacaacagg ccgagagcac caccaccgtc 720
cgagagcaac gccaccttcc gccaccgtta tctcaggaaa cgaccctaaa caacagtcgt 780
caccgtcatc tcaacttctc acctaaacaa caagcccctg attttttttg aagatccatg 840
tgtttgagtt tcaaacgatt ttagattcag attcaaatgt agggtttcag tttcaaacga 900
tttcgaaacg tgcattcata tttgattagt ttcttaaaag tccatattca tatgtaagaa 960
atttagggtt ttgtttaggg ctttttcttg ttcttttctg gatcgatttt tcaggttttg 1020
ttttttcgga ttctttattg gaatcagatt tgattattcg tcatcttcat cttcaaatga 1080
ttttggttga tgaatcaagt ttgttttttt aaagtgtatg tgtgtcagat tttaggtatt 1140
ttataaatta gattttggtt catcttcatc tttgggcata tttatgtatg gcatatttat 1200
gtatgtgtgg tggttgtgga tcatatgggg tgttttcttg ttcaatttct ttgatttctt 1260
taaatcttaa tttttgattc tatgattcat atggatttat ggtttttatg aatggattaa 1320
tgaattaatt ataatttttt aatggtggtg atggtagcag cggcaggtga tggtggcggc 1380
ggcggcacgt gattgtagcg gcagcggctg gcggcggcgg cggcggtggt ggtggtggtg 1440
gtggtggtgg tggtggtggt ggtggtggtg gctggtggtg gtggtttggt taaatggaga 1500
agatgaagtc atgtggggat aaagattatg ataaattaca tgtatggtcc ctggttttta 1560
aatagaaaac aaaaggaaat ataaaatgac taaaatatcc gtgtttttaa tttatttaac 1620
cgaaatattt tacagagtta gaaggcaggg acccaacacg ttataaaatg caaaccacga 1680
ggacccaatc tatagatatt agattttagg gacccaaagt gttaaaacca ccaaaacata 1740
gggacaaaat atgtaattca ctcttaaatt aatttaggaa cgaaaaggta cactgagggt 1800
ctaataaatt ttaaaatttt gataggacaa aattgataaa agaccacgtg gggaaattct 1860
gatattttac tgatttgtat tgttatatat acattttcgt gaaactcctt caaatcctat 1920
aaataccctc cattgttatc atcaccttct cttcatggag ctcaaaatgg caaaaatttc 1980
acttgtattc tttctacttg tcttcattct tgctatctca ggattgacg 2029
<210> 2
<211> 1738
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 2
aatcatcaac ccagcaacaa ctctatcggt gtcggcaacc tgatttcaat cgcaacccgc 60
cgaacccgct ggggccatag cggaagccac cgaacccgct gacccggtgg gttcgagccc 120
gctgaacccc cactcccgtt acacatagcc ttaaagtgac ttttatagtc ggttatatat 180
aacttttttt tattaaaagg aaataggtaa ccaactttta caagttcaat tgttacttat 240
taaaaaattc acttaattat taaaaacaaa ttagttacta agagggtgtt tgggatagct 300
tttaaaaagt gtttattgac ttattggctt ttcaaaaagc cgataagtta aaaatattat 360
ttgacaaccg gagaagcact tttcaaaagt gcttttggag taagaaggaa aatctgtttt 420
taaaaagtca gaaaaatgtg gctttttgat ttttgctttt ggcttttagc ttttctctct 480
cacataaccc tactttttaa cccaaacatt ttttaactta ttgactttta ccactataaa 540
agctaatcca aacacttttt taaaaactca ttttcccacc accataagtc aataagcgct 600
tttgaccaaa agcacttttg gacctcaaaa aacaatcccg aacaccctct aacttattaa 660
aaataagaaa attcaatagc ttatttattt aaaaataatt aaagattgtt ccattgaaag 720
ctccttattt tttaaacttt tcccttataa aagtataatt tgttcttctg ttctccctcc 780
tccctatttt ggttattaac ttacatattg tacatgttga agctttaact atcatcatct 840
atcaatctca aaaatcttta gtttttcttt ttcctttttc ctttttatta aaaacatata 900
gttatgacca gattgaattt ggtgggagtc ttctaaagta aatacaataa caaataaaaa 960
aaaaataaat aaatatatac caatagtctc atttaatctt ctcatctact tccatcctca 1020
ccctatcatt attactaatt aaatcttcac cttccctttc ttacattaca tataccccct 1080
ttcacacctc tcttcatcca caccaccttc ttcttcttct tcttcttctt caccctcaaa 1140
actcttgcaa aatgctcaac tttgcaaacc aactatatga cttctttcca atctccattc 1200
caccacttca caacttcaat catctttctt tcattcatgc actcattttc tctttactca 1260
ccatcacccc cattctcata accttctacc tcttaaacaa accgaaaacc gtctaccttc 1320
tcgacttcgc gtgcttcaga cccccgtccg tcctccgagt cccctacgcc accgcggccg 1380
agcacggccg catcatcttg gcctcgcagc cgaaaagcat agccttccag gttaagatct 1440
tcgagagatc cggtttgggt gaagaaacat gcttaccaca cccactacac tatctaccac 1500
caaaccctaa catgatggat gcaagagatg agtcccaatt ggtgattttc tcggccatgg 1560
attcgttgtt ccgaaaaacc ggacttagcc ctaaagacat cgacatctta atcgtgaatt 1620
gcagcttgtt ttcgcccacc ccttccattt cagccatggt ggttaacaag tacaagatga 1680
gaagtaatgt caagagtttt aacttgtccg gaatggggtg tagtgccgga ttgatctc 1738
<210> 3
<211> 2029
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 3
ggtccctgtg gtttggtgtt tttaacactt tgggtcccta aaatgaaata tctacgactt 60
aggtcctcat ggtttgcatt ctataacgtc ttaagtccct agaattaact ccgttaaaca 120
gtctctgtta agtataagga tattttagtc attttatata taataaaatt ttattataaa 180
aacagggacc atatatgtaa tttatgcaaa taccatattt ttcaatctta ccaggtgaaa 240
cctcatcttt caaaacagaa tttgtgaaat ctaaaccctt atcctcggcc ttcatcaccg 300
gtagcctccg cctttaagcc aaccggtagc ctccgccttt cttcaccacc atctgcacca 360
acgccgcctc caccttcagt caacaccgtc tgcagcacca tcgcttcctc tactaacgca 420
actccaccta ctctccacca caacttcacc cccgtagtca tctcggctca acccacctgt 480
tttcggcact actcttaaac cgacgagttt tctggcacgg gtctgctgat gatgaacatt 540
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ctccaacacg gccgccttca caccggccgc ctccaccatc agttaccgct ttccgagacc 660
accatcatcg tcgtctccga cgaaatccct aaacaacagg ccgagagcac caccaccgtc 720
cgagagcaac gccaccttcc gccaccgtta tctcaggaaa cgaccctaaa caacagtcgt 780
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tgtttgagtt tcaaacgatt ttagattcag attcaaatgt agggtttcag tttcaaacga 900
tttcgaaacg tgcattcata tttgattagt ttcttaaaag tccatattca tatgtaagaa 960
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ttttttcgga ttctttattg gaatcagatt tgattattcg tcatcttcat cttcaaatga 1080
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ttataaatta gattttggtt catcttcatc tttgggcata tttatgtatg gcatatttat 1200
gtatgtgtgg tggttgtgga tcatatgggg tgttttcttg ttcaatttct ttgatttctt 1260
taaatcttaa tttttgattc tatgattcat atggatttat ggtttttatg aatggattaa 1320
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agatgaagtc atgtggggat aaagattatg ataaattaca tgtatggtcc ctggttttta 1560
aatagaaaac aaaaggaaat ataaaatgac taaaatatcc gtgtttttaa tttatttaac 1620
cgaaatattt tacagagtta gaaggcaggg acccaacacg ttataaaatg caaaccacga 1680
ggacccaatc tatagatatt agattttagg gacccaaagt gttaaaacca ccaaaacata 1740
gggacaaaat atgtaattca ctcttaaatt aatttaggaa cgaaaaggta cactgagggt 1800
ctaataaatt ttaaaatttt gataggacaa aattgataaa agaccacgtg gggaaattct 1860
gatattttac tgatttgtat tgttatatat acattttcgt gaaactcctt caaatcctat 1920
aaataccctc cattgttatc atcaccttct cttcatggag ctcaaaatgg caaaaatttc 1980
acttgtattc tttctacttg tcttcattct tgctatctca ggattgacg 2029
<210> 4
<211> 1610
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 4
aactccacct actctccacc acaacttcac ccccgtagtc atctcggctc aacccacctg 60
ttttcggcac tactcttaaa ccgacgagtt ttctggcacg ggtctgctga tgatgaacat 120
tgattatctt ctggattaaa aacccaccaa accaaaaaaa ccctacgcag ccaccggccg 180
tctccaacac ggccgccttc acaccggccg cctccaccat cagttaccgc tttccgagac 240
caccatcatc gtcgtctccg acgaaatccc taaacaacag gccgagagca ccaccaccgt 300
ccgagagcaa cgccaccttc cgccaccgtt atctcaggaa acgaccctaa acaacagtcg 360
tcaccgtcat ctcaacttct cacctaaaca acaagcccct gatttttttt gaagatccat 420
gtgtttgagt ttcaaacgat tttagattca gattcaaatg tagggtttca gtttcaaacg 480
atttcgaaac gtgcattcat atttgattag tttcttaaaa gtccatattc atatgtaaga 540
aatttagggt tttgtttagg gctttttctt gttcttttct ggatcgattt ttcaggtttt 600
gttttttcgg attctttatt ggaatcagat ttgattattc gtcatcttca tcttcaaatg 660
attttggttg atgaatcaag tttgtttttt taaagtgtat gtgtgtcaga ttttaggtat 720
tttataaatt agattttggt tcatcttcat ctttgggcat atttatgtat ggcatattta 780
tgtatgtgtg gtggttgtgg atcatatggg gtgttttctt gttcaatttc tttgatttct 840
ttaaatctta atttttgatt ctatgattca tatggattta tggtttttat gaatggatta 900
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cggcggcacg tgattgtagc ggcagcggct ggcggcggcg gcggcggtgg tggtggtggt 1020
ggtggtggtg gtggtggtgg tggtggtggt ggctggtggt ggtggtttgg ttaaatggag 1080
aagatgaagt catgtgggga taaagattat gataaattac atgtatggtc cctggttttt 1140
aaatagaaaa caaaaggaaa tataaaatga ctaaaatatc cgtgttttta atttatttaa 1200
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aggacccaat ctatagatat tagattttag ggacccaaag tgttaaaacc accaaaacat 1320
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<210> 5
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<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 5
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tttattggaa tcagatttga ttattcgtca tcttcatctt caaatgattt tggttgatga 120
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ttgtggatca tatggggtgt tttcttgttc aatttctttg atttctttaa atcttaattt 300
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attttttaat ggtggtgatg gtagcagcgg caggtgatgg tggcggcggc ggcacgtgat 420
tgtagcggca gcggctggcg gcggcggcgg cggtggtggt ggtggtggtg gtggtggtgg 480
tggtggtggt ggtggtggct ggtggtggtg gtttggttaa atggagaaga tgaagtcatg 540
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aggaaatata aaatgactaa aatatccgtg tttttaattt atttaaccga aatattttac 660
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agatattaga ttttagggac ccaaagtgtt aaaaccacca aaacataggg acaaaatatg 780
taattcactc ttaaattaat ttaggaacga aaaggtacac tgagggtcta ataaatttta 840
aaattttgat aggacaaaat tgataaaaga ccacgtgggg aaattctgat attttactga 900
tttgtattgt tatatataca ttttcgtgaa actccttcaa atcctataaa taccctccat 960
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<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 6
ggtggtggct ggtggtggtg gtttggttaa atggagaaga tgaagtcatg tggggataaa 60
gattatgata aattacatgt atggtccctg gtttttaaat agaaaacaaa aggaaatata 120
aaatgactaa aatatccgtg tttttaattt atttaaccga aatattttac agagttagaa 180
ggcagggacc caacacgtta taaaatgcaa accacgagga cccaatctat agatattaga 240
ttttagggac ccaaagtgtt aaaaccacca aaacataggg acaaaatatg taattcactc 300
ttaaattaat ttaggaacga aaaggtacac tgagggtcta ataaatttta aaattttgat 360
aggacaaaat tgataaaaga ccacgtgggg aaattctgat attttactga tttgtattgt 420
tatatataca ttttcgtgaa actccttcaa atcctataaa taccctccat tgttatcatc 480
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tcattcttgc tatctcagga ttgacg 566
<210> 7
<211> 419
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 7
ggtccctgtg gtttggtgtt tttaacactt tgggtcccta aaatgaaata tctacgactt 60
aggtcctcat ggtttgcatt ctataacgtc ttaagtccct agaattaact ccgttaaaca 120
gtctctgtta agtataagga tattttagtc attttatata taataaaatt ttattataaa 180
aacagggacc atatatgtaa tttatgcaaa taccatattt ttcaatctta ccaggtgaaa 240
cctcatcttt caaaacagaa tttgtgaaat ctaaaccctt atcctcggcc ttcatcaccg 300
gtagcctccg cctttaagcc aaccggtagc ctccgccttt cttcaccacc atctgcacca 360
acgccgcctc caccttcagt caacaccgtc tgcagcacca tcgcttcctc tactaacgc 419
<210> 8
<211> 490
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 8
tttagggctt tttcttgttc ttttctggat cgatttttca ggttttgttt tttcggattc 60
tttattggaa tcagatttga ttattcgtca tcttcatctt caaatgattt tggttgatga 120
atcaagtttg tttttttaaa gtgtatgtgt gtcagatttt aggtatttta taaattagat 180
tttggttcat cttcatcttt gggcatattt atgtatggca tatttatgta tgtgtggtgg 240
ttgtggatca tatggggtgt tttcttgttc aatttctttg atttctttaa atcttaattt 300
ttgattctat gattcatatg gatttatggt ttttatgaat ggattaatga attaattata 360
attttttaat ggtggtgatg gtagcagcgg caggtgatgg tggcggcggc ggcacgtgat 420
tgtagcggca gcggctggcg gcggcggcgg cggtggtggt ggtggtggtg gtggtggtgg 480
tggtggtggt 490

Claims (5)

1.一种启动子，其特征在于：其序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种重组质粒，其特征在于：它包括权利要求1所述的启动子。
3.如权利要求2所述的重组质粒，其特征在于：所述质粒是将权利要求1所述的启动子插入pRI201-AN-GUS载体得到的重组质粒。
4.权利要求1所述启动子或权利要求2～3任一所述的重组质粒在构建转基因植物品种中的用途。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于：所述转基因植物为转基因红花或拟南芥。
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Non-Patent Citations (3)

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Title
Carthamus tinctorius cultivar AC SUNSET scaffold40040, whole genome shotgun sequence;GenBank;《GenBank》;20160427;LUCG01040017 *
Cloning and Analysis of Promoter Regions of Flavonoid Biosynthesis Genes in Safflower;Chaoxiang Ren等;《Plant Molecular Biology Reporter》;20180312(第36期);第239-246页 *
红花查尔酮异构酶基因的克隆及表达分析;任超翔等;《天然产物研究与开发》;20180307;第30卷(第9期);第1521-1525页 *

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