CN110870513A - 含有酵母细胞壁的异育银鲫配合饲料及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含有酵母细胞壁的异育银鲫配合饲料,其含有白鱼粉、植物蛋白源、鱼油、植物油、氯化胆碱和酵母细胞壁。本发明的异育银鲫配合饲料可以改善异育银鲫生长性能,同时增强异育银鲫机体免疫力,提高抗病能力。通过该饲料在异育银鲫养殖中的应用,可以实现异育银鲫无公害健康养殖技术,达到替代传统化学药物的使用的目的,减少药物残留和环境污染。
Description
技术领域
本发明涉及一种鱼用饲料,具体涉及一种含有酵母细胞壁的异育银鲫配合饲料,属于饲料加工领域。
背景技术
异育银鲫(Carassius auratus gibelio)是中国科学院水生生物研究所的鱼类育种专家于1976~1981年研制成功的一种鲫鱼养殖新对象,是利用天然雌核发育的方正银鲫为母本,以兴国红鲤为父本,经人工授精繁育的子代。由于生长快、饲养周期短,目前在全国范围有广泛养殖。但随着养殖集约化程度越来越高,异育银鲫的疾病频发爆发。以江苏盐城养殖鲫鱼为例,约从2009年开始出现大红鳃,2011年左右开始大规模暴发,同塘其他鱼不发病,发病鲫鱼规格自水花到成鱼都可发病。发病时间自3月底开始,11月后发病减少,冬季有零星死亡。此病死亡率高,一旦发病后处理不当,有全池死亡的可能。
孙琪等人(《江苏射阳县大红鳃病与鳃出血病的案例分析》,科学养鱼,2012(11):64-65)认为应该明确区分大红鳃病和鳃出血病,研究发现大红鳃病为细菌性感染,可发生于任何规格的鲫鱼,而鳃出血可能为病毒性感染,主要发生于规格为0.4千克/尾左右(即将出塘),对于大红鳃病,作者认为需要提前预防,以防后续引发大红鳃病。在水产养殖生产中,由于致病菌抗药性的产生,依靠抗菌素类药物防治养殖鱼类细菌性疾病的效果越来越差。因此,增强养殖鱼类自身免疫系统的功能,提高其抗病能力,已经成为当前国内外研究者探讨水产养殖动物疾病防治方法的重要途径。
酵母细胞壁是酿酒酵母经液体发酵后的得到的菌体,再经过自溶或外源酶催化水解,或机械破碎后,分离获得的细胞壁浓缩干燥得到的产品。产品富含β-葡聚糖,甘露寡糖等免疫增强因子,能够增强机体免疫力,提高抗病能力。
胡兵等人(《酵母细胞壁在异育银鲫饲料中添加效果的研究》,中国饲料,2007(20):28-30.)通过添加酵母细胞壁研究其异育银鲫饲料中的应用效果。结果表明饲料中添加0.10%酵母细胞壁对异育银鲫的非特异性免疫力具有明显的促进作用,对其背肌中RNA/DNA和肠道发育也具有一定的促进作用。
发明内容
目前现有技术中存在的技术问题是,异育银鲫饲养过程中容易被细菌感染,例如被嗜水气单胞杆菌感染引发如大红鳃等疾病,由于致病菌抗药性的产生,依靠抗菌素类药物防治养殖鱼类细菌性疾病的效果越来越差。
以往技术文献向饲料中添加0.10%酵母细胞壁对异育银鲫的非特异性免疫力具有明显的促进作用,但由于大红鳃病可发生于任何规格的鲫鱼,对于异育银鲫幼苗而言,其抵抗细菌能力比成鱼更弱,异育银鲫幼苗的免疫保护作用有待进一步提高。
本发明人为解决上述技术问题发现,在异育银鲫生长过程中,通过喂食含有酵母细胞壁等成分的特定配方的配合饲料,可以改善异育银鲫的生长性能,有效增强异育银鲫免疫力。
具体来说,本发明提出了如下技术方案:
本发明提供了一种异育银鲫配合饲料,所述配合饲料含有白鱼粉、植物蛋白源、鱼油、植物油、氯化胆碱和酵母细胞壁。
优选的是,上述异育银鲫配合饲料,其中,所述配合饲料含有麦麸、面粉、玉米淀粉、维生素预混料和矿物质预混料中的一种或两种以上,优选的是,所述配合饲料含有4-6wt%的麦麸、4-6wt%的面粉、4-6wt%的玉米淀粉、0.3-0.4wt%的维生素预混料和4-6wt%的矿物质预混料中的一种或两种以上,进一步优选的是所述配合饲料含有4-6wt%的麦麸、4-6wt%的面粉、4-6wt%的玉米淀粉、0.3-0.4wt%的维生素预混料和4-6wt%的矿物质预混料。
优选的是,上述的异育银鲫配合饲料,其中,所述配合饲料含有9-12wt%的白鱼粉、53-66wt%的植物蛋白源、1.5-4.5wt%的鱼油、1.5-4.5wt%的植物油、0.05-0.2wt%的氯化胆碱和0.1-1.4wt%的酵母细胞壁,优选的是,所述配合饲料含有0.33-1.0wt%的酵母细胞壁,进一步优选的是,所述配合饲料含有0.67%-1.0wt%的酵母细胞壁。
优选的是,上述的异育银鲫配合饲料,其中,所述植物蛋白源选自大豆、黑大豆、豌豆、蚕豆、豆粕、豆饼、大豆粉、棉粕、菜粕、玉米蛋白粉、玉米胚芽粕、花生粕、亚麻粕和芝麻饼中的一种或两种以上;优选的是,所述植物蛋白源选自豆粕、棉粕和菜粕中的一种或两种以上;进一步优选的是所述植物蛋白源含有豆粕、棉粕和菜粕。
优选的是,上述的异育银鲫配合饲料,其中,所述豆粕在所述配合饲料中的质量百分比为28-32%;所述棉粕在所述配合饲料中的质量百分比为9-14%;所述菜粕在所述配合饲料中的质量百分比为15-20%。
优选的是,上述的异育银鲫配合饲料,其中,所述植物油选自豆油、亚麻油、菜籽油、橄榄油、棕榈油、玉米油和椰子油中的一种或两种以上;优选的是,所述植物油选自豆油、菜籽油和椰子油中的一种或两种以上;进一步优选的是,所述植物油为豆油。
优选的是,上述的异育银鲫配合饲料,其中,所述配合饲料含有9-12wt%白鱼粉、28-32wt%豆粕、15-20wt%菜粕、9-14wt%棉粕、4-6wt%面粉、4-6wt%玉米淀粉、1.5-4.5wt%鱼油、1.5-4.5wt%豆油、0.3-0.4wt%维生素预混料、4-6wt%矿物质预混料、0.05-0.2wt%氯化胆碱、2-4wt%羧甲基纤维素和0.1-1.4wt%酵母细胞壁。
优选的是,上述的异育银鲫配合饲料,其中,所述配合饲料含有10-12wt%白鱼粉、28-32wt%豆粕、15-18wt%菜粕、12-14wt%棉粕、4-6wt%面粉、4-5wt%玉米淀粉、3-4wt%鱼油、3-4wt%豆油、0.3-0.4wt%维生素预混料、4-6wt%矿物质预混料、0.05-0.2wt%氯化胆碱、2-4wt%羧甲基纤维素和0.67-1.0wt%酵母细胞壁。
优选的是,上述的异育银鲫配合饲料,其中,所述白鱼粉中的蛋白质含量为60wt%以上,优选的是,所述白鱼粉中的蛋白质含量为65wt%-68wt%。
优选的是,上述的异育银鲫配合饲料,其中,所述酵母细胞壁含有18wt%以上的β-葡聚糖,17wt%以上的甘露寡糖,优选的是,所述酵母细胞壁含有20-30wt%的β-葡聚糖,20-35wt%的甘露寡糖。
优选的是,上述的异育银鲫配合饲料,其中,所述鱼油和所述植物油的质量比为3:1~1:3,优选的是2:1~1:2。
另一方面,本发明提供了上述的异育银鲫配合饲料的制备方法,通过将含有白鱼粉、植物蛋白源、鱼油、植物油、氯化胆碱和酵母细胞壁的原料混合得到。
另一方面,本发明还提供了上述的异育银鲫配合饲料在饲养异育银鲫或提高异育银鲫免疫力中的应用。
本发明的有益效果包括:
本发明饲料中添加酵母细胞壁,同时含有鱼油和植物油以及鱼粉,能增强异育银鲫的机体免疫力、促进异育银鲫快速生长和提高抗病能力的作用。
下面结合具体实施方式,对本发明及其有益技术效果进行详细说明。
具体实施方式
除非另有定义,本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。本文具体提及的所有出版物和专利的全部内容通过引用并入本文,用于所有目的,包括描述和公开可能与本发明有关的出版物中报道的化学品,仪器,统计分析和方法。本说明书中引用的所有参考文献将被视为本领域技术水平的指示。
鱼粉(fish meal)是由一种或多种鱼类作为生产原料,经过蒸煮、压榨、脱水和粉碎等一系列加工后得到的高蛋白质粉末。鱼粉按其原料所用的鱼类的不同而分为白鱼粉和红鱼粉(褐鱼粉),白鱼粉是指以鲽鱼、鳕鱼、狭鳕等冷水鱼为原料制成的鱼粉,由于这些鱼的肉色较浅,由其加工而成的鱼粉颜色发浅,故称为白鱼粉。白鱼粉的粗蛋白含量一般在60%以上。红鱼粉,又称褐鱼粉,是由沙丁鱼、鲢鱼、凤尾鱼、罗非鱼、鳗鱼等各种小杂鱼为原料及鱼虾食品的下脚料加工而成的鱼粉,由于所用鱼类的肌肉为红褐色,加工而成的鱼粉颜色偏暗,故名红鱼粉,亦称褐鱼粉。红鱼粉的粗蛋白含量一般也在60%以上,与白鱼粉的粗蛋白含量相差甚小。红鱼粉的产量比白鱼粉要高,而且价格也较低廉。然而红鱼粉中不饱和脂肪酸和组胺的含量高,所以比较容易氧化变质,动物摄入大量组胺后会引起中毒,鱼粉中脂肪氧化后会产生大量的低分子化合物和过氧化物,如醛、酮等。这些物质会导致饲料的营养价值和动物的食欲降低,从而导致生长缓慢。
植物蛋白质饲料源包括:大豆、黑大豆、豌豆、蚕豆、大豆粕、大豆饼、大豆粉、棉籽粕、棉籽饼、菜籽粕、菜籽饼、玉米蛋白粉、玉米胚芽粕、花生仁饼(粕)、亚麻仁饼(粕)、向日葵仁饼(粕)和芝麻饼等。其中由于大豆饼(粕)产量高、营养价值丰富、价格低廉而成为最常用的植物蛋白质饲料源。
豆粕是全脂大豆经过压榨提取油后而得到的副产品,其蛋白质含量高达42%~48%,含有丰富的必需氨基酸。
花生仁饼(粕)是花生经过压榨提取花生油后的副产品。花生仁饼(粕)的蛋白质含量为48.68%,与大豆粕近似,但是缺乏蛋氨酸、赖氨酸和苏氨酸,必需氨基酸超过14%,含有32.5%的多糖,5.61%的灰分,维生素含量达0.871mg/100g,并且含有镁、钾、铁、钙、硒、钠、磷、铜等多种微量元素。
棉籽粕(饼)是棉籽经过预压浸提法或螺旋压榨法取油之后的副产物。棉仁饼(粕)是棉籽去壳取油后的副产品,棉籽粕或棉籽饼统称为棉粕。棉粕中含有34%-44%的蛋白质,其蛋白质含量与大豆饼的蛋白质含量近似。
油菜籽经过去油后的副产品为菜籽粕(饼),菜籽粕(饼)含有蛋白质34%-38%,含有丰富的赖氨酸和蛋氨酸,但只含有少量的精氨酸,并含有丰富的磷、钙、硒等微量元素,尤其是硒的含量为植物性蛋白饲料源中最高的。菜籽粕(饼)中也含有抗营养因子如蛋白酶抑制因子、异硫氰酸盐、硫葡萄糖苷(GS)和单宁等,但是通过去除抗营养因子后人们仍然可以把菜籽粕(饼)作为水产饲料的蛋白源。
胆碱是维持鱼类正常生长的重要营养物质,在鱼类神经发育、肝脏脂肪转运以及机体合成代谢等方面起着重要作用。饲料用品为胆碱的盐酸盐,通常称氯化胆碱,水溶液为粘稠液体。用氯化胆碱70%的水溶液加入细麦麸、稻壳粉或二氧化硅等赋形疏散剂,可制成含氯化胆碱50%的粉状产品。按纯品的分子量折算,等量的氯化胆碱只相当于胆碱的87%。
玉米淀粉又称玉蜀黍淀粉,白色微带淡黄色的粉末。将玉米用0.3%亚硫酸浸渍后,通过破碎、过筛、沉淀、干燥、磨细等工序而制成。普通产品中含有少量脂肪、蛋白质和色素(玉米黄素和隐黄素等)等,饲料中添加玉米淀粉不仅可以粘合饲料,还能作为能源物质节约蛋白质,含有的色素在一定程度上还能可改善异育银鲫体色。
脂类对鱼类生长具有很重要的作用,是鱼体重要的能源物质,同时也是必需脂肪酸(EFA)的主要来源,水产动物饲料中常用的油脂主要包括鱼油、大豆油、花生油、菜籽油、棕榈油、葵花籽油和棉籽油等。不同脂肪源的脂肪酸组成差别较大,对异育银鲫的生长和饲料利用有明显影响。
豆油中含有大量的亚油酸,对异育银鲫可能是一种很好的脂肪源。鱼油的主要成分是甘油三脂,此外还含有少量类脂、磷甘油醚、脂溶性维生素以及蛋白质降解物等,其中磷脂主要由磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺组成。鱼油富含ω-3系多不饱和脂肪酸(DHA和EPA),鱼油含有EPA、DHA等高不饱和脂肪酸(HUFA)且被鱼类较好利用,是传统的水产饲料的主要脂肪源,但鱼油中高含量的HUFA极易氧化而引起饲料氧化程度上升。与相应的单一脂肪源相比,鱼油和豆油混合后使用明显改善了生长。这样既保证了HUFA的供给以促进鱼类快速的生长,也可以降低饲料的氧化程度。鱼油和豆油的比例为1:3~3:1的范围时,对于异育银鲫的生长促进作用最好。
麦麸,即麦皮,小麦加工面粉副产品,富含纤维素和维生素。面粉是一种由小麦磨成的粉状物,作为糖源,对异育银鲫提供能量。
如上所述,本发明的目的在于提供一种含有酵母细胞壁的异育银鲫饲料,其中酵母细胞壁不仅能够增强异育银鲫的机体免疫力,还能降低疾病发生率。
本发明优选的一种含有酵母细胞壁的异育银鲫配合饲料,由以下质量份的组分组成:白鱼粉9-12份、豆粕28-32份、菜粕15-20份、棉粕9-14份、面粉4-6份、玉米淀粉4-6份、鱼油3-4份、豆油3-4份、维生素预混料0.3-0.4份、矿物质预混料4-6份、氯化胆碱0.05-0.2份、羧甲基纤维素2-4份、酵母细胞壁0.1-1.4份。
本发明进一步优选的含有酵母细胞壁的异育银鲫配合饲料,白鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.67份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3.3份、豆油3.2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁0.33份。
本发明进一步优选的含有酵母细胞壁的异育银鲫配合饲料,白鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.33份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3.3份、豆油3.2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁0.67份。
本发明进一步优选的含有酵母细胞壁的异育银鲫配合饲料,白鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3.3份、豆油3.2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。
本发明进一步优选的含有酵母细胞壁的异育银鲫配合饲料,白鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉3.67份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3.3份、豆油3.2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.33份。
优选的是,上述异育银鲫配合饲料中,所述白鱼粉中的蛋白含量为65%以上,所述氯化胆碱的含量为60%以上。
优选的是,上述异育银鲫配合饲料中,酵母细胞壁制备自酿酒酵母菌株,主要功能成分β-葡聚糖含量为20-30%,甘露寡糖含量大于等于20%。
为了更好的理解本发明的内容,下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步的说明,但具体的实施方式并不是对本发明所做的限制。在未作说明的情况下,本发明中涉及到的方法均为常规方法,所涉及到的原料均为市售原料。下面实施例中所用到各试剂和仪器来源如下:
表1实施例所用试剂和仪器
以下实施例所用原料的自制方法如下:
0.067mol/L磷酸缓冲液制备方法为:称取磷酸二氢钾(KH2PO4,天津市科密欧化学试剂有限公司)9.08g,用蒸馏水溶解后,倾入1000ml容量瓶内,再稀释至刻度(1000ml)。
FKC菌苗制备方法为:利用甲醛溶液灭活嗜水气单胞菌,4℃条件下灭活72h,制成灭活菌液。用移液枪吸取已灭活的菌液装入灭过菌的离心管中,10,000rpm离心5min,倒去上清液,收集菌体,用无菌生理盐水洗涤菌体4-5次,将菌体中残留的甲醛溶液洗去,最后悬浮于无菌生理盐水中,即制得嗜水气单胞菌AH1全菌灭活疫苗。
F-SA制备方法为:在金黄色葡萄球菌菌液中加入终浓度为0.3%的福尔马林后,摇匀并置于35℃恒温水浴锅中保温24h,取样接种在平皿中培养,证明菌体已经被灭活后,用灭菌生理盐水离心清洗3次,即为F-SA。
嗜水气单胞菌活菌液制备方法为:菌种来源实验室保存室,将保存的菌种先接种于脑心浸液培养基,25℃培养,预培养24h,然后转接种在淡水琼脂培养基中,培养48h,离心法集菌并用灭菌生理盐水清洗3次,稀释菌液至一定浓度,冷藏保存。
鼠抗嗜水气单胞菌菌株血清制备方法为:根据嗜水气单胞菌的测定结果确定注射剂量,腹腔注射小白鼠3次,每次间隔10d,对照组注射生理盐水。第三次注射3d后,断尾取血约20μL,玻片凝集反应测定抗AH1血清的效价.第三次注射7d之后,眼眶取血,处死小白鼠;同时取对照组血液以获得阴性对照血清(命名为对照血清).将装有血液的离心管斜放,摆成最大斜面,放入4℃冰箱中静置过夜,使血清自然析出,经4,000rpm离心15min,取上清液即获得抗AH1血清和对照血清,放入-80℃超低温冰箱保存。
低含量酵母细胞壁制备方法:采用酿酒酵母菌种,碳源为糖蜜,氮源为尿素,pH值4.5,培养温度30℃,发酵周期16小时,得到酵母。将上述酵母自溶处理,控制盐浓度1.8%,pH值5.5,温度55℃,自溶15小时后,离心分离后得到低多糖含量的酵母细胞壁。经检测,β-葡聚糖含量为18.4wt%,甘露寡糖含量为17.5wt%。
实施例1
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:白鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.67份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3.3份、豆油3.2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁0.33份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量为62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例2
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:白鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.33份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3.3份、豆油3.2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁0.67份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例3
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:白鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3.3份、豆油3.2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例4
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:白鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉3.67份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3.3份、豆油3.2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.33份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例5
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:白鱼粉9份、豆粕28份、菜粕20份、棉粕9份、面粉4份、麦麸6份、玉米淀粉6份、鱼油4份、豆油3.4份、维生素预混料0.3份、矿物质预混料6份、氯化胆碱0.2份、羧甲基纤维素4份、酵母细胞壁0.1份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例6
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:白鱼粉12份、豆粕32份、菜粕15份、棉粕14份、面粉4份、麦麸4份、玉米淀粉4份、鱼油3份、豆油3.8份、维生素预混料0.4份、矿物质预混料4份、氯化胆碱0.05份、羧甲基纤维素3.55份、酵母细胞壁0.2份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例7
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油4份、豆油2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例8
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油2份、豆油4份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例9
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油1.5份、豆油4.5份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例10
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油4.5份、豆油1.5份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%;酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
实施例11
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3份、豆油3份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为60wt%,所述氯化胆碱的含量62.3%,酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为18.4wt%,甘露寡糖含量为17.5wt%。
实施例12
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3份、豆油3份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3%,酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为18.4wt%,甘露寡糖含量为17.5wt%。
实施例13
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉4.5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3份、豆油3份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为60wt%,所述氯化胆碱的含量62.3%,酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
对比例1
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉7份、豆粕32份、菜粕18份、棉粕12份、面粉5.5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3份、豆油3份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3wt%,酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
对比例2
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉12份、豆粕32份、菜粕20份、棉粕13份、面粉5.5份、麦麸5份、豆油3份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3%,酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
对比例3
一种含酵母细胞壁的异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉12份、豆粕32份、菜粕20份、棉粕12份、面粉3.5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、豆油3份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份、酵母细胞壁1.0份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3%,酵母细胞壁中β-葡聚糖含量为27.4wt%,甘露寡糖含量为30.2wt%。
对比例4
一种异育银鲫饲料,由以下质量份的组分组成:鱼粉10份、豆粕30份、菜粕18份、棉粕12份、面粉5份、麦麸5份、玉米淀粉5份、鱼油3.3份、豆油3.2份、维生素预混料0.39份、矿物质预混料5份、氯化胆碱0.11份、羧甲基纤维素3份。其中,所述鱼粉中的蛋白含量为66wt%,所述氯化胆碱的含量62.3%。
以下是实施例和对比例的异育银鲫配合饲料的效果验证实验:
将实验鱼均分为18组(编号分别为实施例1组~实施例13组,以及对比例1组~对比例4组,空白组),每组45尾。开始试验前称量各试验组鱼的总体重,记录其平均初始体重。在投喂饲料的前1d,用灭菌生理盐水将FKC菌苗的浓度调整至1.4×107cells/mL,对实施例组和对比例组的每尾试验鱼经胸鳍基部注射0.3mL的FKC菌苗,作为免疫组,而对空白组的试验鱼注射相同剂量的灭菌生理盐水作为对照组。
效果验证实验一异育银鲫生长性能
利用实施例1~实施例13和对比例1~对比例4的异育银鲫饲料投喂试验鱼,空白组投喂对比例4中的饲料,每天投喂相当于鱼体重1.5%的饲料,每天早、晚各一次,连续投喂28d。异育银鲫生长性能如表1所示。
表1异育银鲫的生长性能
由表1可以看出,实施例组的增重量基本大于对比例组,其中,实施例4组的增重量最大,与对比例组相比增重量提高了25-56%。从实施例7-实施例10可以看出,鱼油与豆油的比例对于异育银鲫的增重具有影响,比例为0.3-2时,增重逐渐增加,比例达到3时,增重相对于比例为2时下降。对比例1和对比例2的增重最少,因此鱼粉含量太少会不利于增重,含有鱼油和玉米淀粉也有利于异育银鲫增重。另外,观察养殖异育银鲫的体色方面,发现对比例2组的异育银鲫体色、外观方面均不如其他组,反映了玉米淀粉对于异育银鲫的体色产生了有益作用。
效果验证实验二异育银鲫血清中凝集抗体效价、溶菌酶活性和白细胞吞噬活性
于投喂添加酵母细胞壁饲料后的第29d,从各组中分别随机捞取15尾供试鱼,断尾取血。将每尾鱼的血液分为2份,其中1份以肝素抗凝,制备抗凝血,供检测白细胞吞噬活性;将另一份血液首先在室温下静置1h待其凝固,置4℃冰箱保持4h后,于4℃条件下以4000r/min离心10min,收集上层血清,保存在4℃冰箱中,备用。
一、凝集抗体效价的测定
采用血凝板法进行。反应抗原为甲醛灭活疫苗(FKC菌苗)。具体操作如下:抽取感染异育银鲫血液并离心分离血清,用取样器吸取0.1ml血清加入经灭菌的96孔板的A1孔内,在96孔板A行的其他孔内加入0.05ml无菌PBS,从A1孔内取0.05ml血清加入A2孔内,混匀后再从A2孔内取0.05ml液体加入A3孔内……,如此重复,使96孔板内后1个孔内的血清浓度均比前1个孔低1倍(倍释法),再在96孔板的每个孔内加入0.05ml菌液,37℃孵育过夜后观察(最好在96孔板下垫一张黑纸以增加反差),出现沉淀的最高血清稀释倍数即为血清中所含抗病原菌抗体的效价。比较不同时期内抗体效价的变化情况,确定最高抗体效价值。一般情况下,抗体效价越高,灭活细菌作为疫苗的效果就最好。
二、溶菌酶活性的测定
参照Parry等(2003)的方法进行。用0.067mol/L的磷酸缓冲液(PBS,pH6.4)将溶壁微球菌(Micrococcus lysoleikticus)配制成0.2mg/mL的菌悬液。每个样品取3.0mL菌悬液,吸取血清40μL加入到菌悬液中,混匀后,立刻在540nm下测定A0值。然后在28℃水浴中温育30min,取出后置于4℃冰浴中终止反应,再测定A值。按公式计算溶菌酶的活性:U=(A0-A)/A。
三、白细胞吞噬活性的测定
在0.2mL抗凝血中加入0.1mL F-SA,摇匀,在28℃的恒温水浴锅中孵育45min,每隔10min摇动1次。用吸管吸取血细胞涂片,每个样品涂5张,用甲醇固定10min,Giemsa染色液染1h,水洗风干后,镜检,并依下式计算白细胞吞噬百分比(phagocytic percentage,PP)和吞噬指数(phagocytic index,PI)。
相关免疫指标如表2所示
表2异育银鲫血清中凝集抗体效价、溶菌酶活性和白细胞吞噬活性
*凝集抗体效价为15尾鱼体的几何平均数
由表2可知,采用本发明所述的含有酵母细胞壁的异育银鲫配合饲料饲喂,可极显著提高未接种菌苗的空白组(P<0.05)的凝集抗体效价;大部分实施例组与接种菌苗未投喂酵母细胞壁的对比例4组没有显著差异(P>0.05),但实施例3组和实施例11-13组酵母细胞壁含量为1wt%时,其凝集抗体效价明显高于其他组。实施例组鱼体溶菌酶活性显著高于相应的对比例组(P<0.05)。白细胞吞噬活性的测定结果表明,免疫接种组(实施例和对比例组)鱼体白细胞的PP和PI均极显著地高于未接种菌苗的空白组(P<0.05),而与接种菌苗未投喂酵母细胞壁的对比例4组之间没有显著性差异(P>0.05)。在凝聚抗体效价、溶菌酶活性及吞噬细胞活性方面,实施例13组比实施例11组更好,表明酵母细胞壁中的β-葡聚糖含量和甘露寡糖含量对免疫有正向效应;实施例12组比实施例11组也更好,表明鱼粉蛋白含量会从营养方面影响免疫表现。综合表2中的数据可以看出,对比例1-3的溶菌酶活性显著低于其他组,主要是由于鱼粉含量少、没有摄入鱼油等原因,导致营养不足,异育银鲫的免疫力明显下降。
效果验证实验三攻毒试验
通过以上效果验证试验二可以看出,本发明的饲料有助于提高异育银鲫血清中凝集抗体效价、溶菌酶活性和白细胞吞噬活性,但是由于生物体内反应复杂性,现有评价指标还不足以综合全面地衡量饲料对于异育银鲫免疫力的影响,因此还需要通过免疫保护率来考虑异育银鲫最终获得的免疫力。
攻毒病原菌嗜水气单胞菌来源于具有典型“大红鳃病”的异育银鲫,是异育银鲫“大红鳃病”主要致病菌之一。对各组剩余的30尾供试鱼,经胸鳍基部对每尾鱼注射0.3mL的嗜水气单胞菌活菌液后,饲养观察14d。对死亡的异育银鲫进行解剖并分离致病菌,以鼠抗嗜水气单胞菌菌株血清与分离所得致病菌进行玻片凝集试验,判断是否由嗜水气单胞菌感染致死,统计各组的死亡率,依下面公式计算免疫保护率(Relativepercent survival,RPS)。
免疫保护率(RPS)=[1-(免疫组死亡率/对照组死亡率)]×100%
攻毒后的死亡率和免疫保护率如表3所示。
表3活菌攻毒后异育银鲫的死亡率和免疫保护率
免疫保护率能够反映异育银鲫实质上获得的免疫力,并评判饲料对于异育银鲫免疫力的最终影响。从表3可以看出,经过接种后的异育银鲫均获得了一定的免疫保护率,而在饲料中添加酵母细胞壁的试验组鱼体死亡率明显的低于未添加酵母细胞壁的对比例4组和空白组,实施例5组和实施例6组的免疫保护率明显不如其他实施例组,实施例2-4组和实施例7、8组、实施例11-13组的免疫保护率明显更优,当酵母细胞壁在饲料中的添加量0.67~1.33wt%时,受免异育银鲫的获得了最高的免疫保护率。对比例1-3组虽然都加入了1wt%酵母细胞壁,但是由于鱼粉鱼油等含量太少,导致营养不足而使得免疫力明显下降。
综上所述,本发明的配合饲料含有鱼油、豆油、鱼粉以及酵母细胞壁,营养均衡,能够明显改善异育银鲫的生长性能,提高异育银鲫的免疫力,特别是当酵母细胞壁含量为0.67~1.33wt%,鱼油、豆油和鱼粉等营养供给充足时,异育银鲫的生长性能和免疫保护获得最有效的提高。
Claims (13)
1.一种异育银鲫配合饲料,其特征在于,所述配合饲料含有白鱼粉、植物蛋白源、鱼油、植物油、氯化胆碱和酵母细胞壁。
2.根据权利要求1所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述配合饲料含有麦麸、面粉、玉米淀粉、维生素预混料和矿物质预混料中的一种或两种以上,优选的是,所述配合饲料含有4-6wt%的麦麸、4-6wt%的面粉、4-6wt%的玉米淀粉、0.3-0.4wt%的维生素预混料和4-6wt%的矿物质预混料中的一种或两种以上,进一步优选的是所述配合饲料含有4-6wt%的麦麸、4-6wt%的面粉、4-6wt%的玉米淀粉、0.3-0.4wt%的维生素预混料和4-6wt%的矿物质预混料。
3.根据权利要求1或2所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述配合饲料含有9-12wt%的白鱼粉、53-66wt%的植物蛋白源、1.5-4.5wt%的鱼油、1.5-4.5wt%的植物油、0.05-0.2wt%的氯化胆碱和0.1-1.4wt%的酵母细胞壁,优选的是,所述配合饲料含有0.33-1.0wt%的酵母细胞壁,进一步优选的是,所述配合饲料含有0.67%-1.0wt%的酵母细胞壁。
4.根据权利要求1-3任一项所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述植物蛋白源选自大豆、黑大豆、豌豆、蚕豆、豆粕、豆饼、大豆粉、棉粕、菜粕、玉米蛋白粉、玉米胚芽粕、花生粕、亚麻粕和芝麻饼中的一种或两种以上;优选的是,所述植物蛋白源选自豆粕、棉粕和菜粕中的一种或两种以上;进一步优选的是所述植物蛋白源含有豆粕、棉粕和菜粕。
5.根据权利要求4所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述豆粕在所述配合饲料中的质量百分比为28-32%;所述棉粕在所述配合饲料中的质量百分比为9-14%;所述菜粕在所述配合饲料中的质量百分比为15-20%。
6.根据权利要求1-5任一项所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述植物油选自豆油、亚麻油、菜籽油、橄榄油、棕榈油、玉米油和椰子油中的一种或两种以上;优选的是,所述植物油选自豆油、菜籽油和椰子油中的一种或两种以上;进一步优选的是,所述植物油为豆油。
7.根据权利要求1-6任一项所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述配合饲料含有9-12wt%白鱼粉、28-32wt%豆粕、15-20wt%菜粕、9-14wt%棉粕、4-6wt%面粉、4-6wt%玉米淀粉、1.5-4.5wt%鱼油、1.5-4.5wt%豆油、0.3-0.4wt%维生素预混料、4-6wt%矿物质预混料、0.05-0.2wt%氯化胆碱、2-4wt%羧甲基纤维素和0.1-1.4wt%酵母细胞壁。
8.根据权利要求7所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述配合饲料含有10-12wt%白鱼粉、28-32wt%豆粕、15-18wt%菜粕、12-14wt%棉粕、4-6wt%面粉、4-5wt%玉米淀粉、3-4wt%鱼油、3-4wt%豆油、0.3-0.4wt%维生素预混料、4-6wt%矿物质预混料、0.05-0.2wt%氯化胆碱、2-4wt%羧甲基纤维素和0.67-1.0wt%酵母细胞壁。
9.根据权利要求1-8任一项所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述白鱼粉中的蛋白质含量为60wt%以上,优选的是,所述白鱼粉中的蛋白质含量为65wt%-68wt%。
10.根据权利要求1-9任一项所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述酵母细胞壁含有18wt%以上的β-葡聚糖,17wt%以上的甘露寡糖,优选的是,所述酵母细胞壁含有20-30wt%的β-葡聚糖,20-35wt%的甘露寡糖。
11.根据权利要求1-10任一项所述的异育银鲫配合饲料,其中,所述鱼油和所述植物油的质量比为3:1~1:3,优选的是2:1~1:2。
12.一种权利要求1-11任一项所述的异育银鲫配合饲料的制备方法,通过将含有白鱼粉、植物蛋白源、鱼油、植物油、氯化胆碱和酵母细胞壁的原料混合得到。
13.权利要求1-11任一项所述的异育银鲫配合饲料在饲养异育银鲫或提高异育银鲫免疫力中的应用。
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