CN110862971A - 用于储存细菌噬菌体的组合物或基质 - Google Patents

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Abstract

公开了包含细菌噬菌体和纳米原纤纤维素或其衍生物的湿态或干态组合物或基质。

Description

用于储存细菌噬菌体的组合物或基质
技术领域
本公开涉及组合物或基质，组合物或基质的装置、方法和用途。
背景
人们越来越关注细菌噬菌体作为生物控制的研究对象和潜在药剂。例如，细菌噬菌体的使用是一种新兴的治疗领域，旨在取代或补充抗生素的使用。有效的细菌噬菌体处理需要使用能够感染目标细菌菌株的合适细菌噬菌体。细菌噬菌体文库可用于筛选合适的细菌噬菌体。
对于这样的用途，重要的是能够在长时间内储存细菌噬菌体，同时保持其活力，并且能够将它们从一个地点运输(例如船运)到另一个地点。细菌噬菌体在储存和运输过程中应该存活并保持活力。
包括氯化钠、硫酸镁、Tris和明胶的SM缓冲液已用于储存细菌噬菌体。需要用于储存、维持和递送细菌噬菌体，甚至是长时间储存、维持和递送细菌噬菌体的改进方法。
发明内容
公开了包含细菌噬菌体和纳米原纤纤维素或其衍生物的湿态或干态组合物或基质。
附图简要说明
所附附图提供了对说明书的实施方式的进一步理解并构成说明书的一部分，其例示了各种实施方式。在附图中：
图1显示了在
Figure BDA0002182564330000021
存在下大肠杆菌123789(#5507)生长的示例性结果；
图2显示了储存在
Figure BDA0002182564330000022
中的ΦEBHT在金黄色葡萄球菌菌株19A2(#6433)中的示例性结果；
图3显示了实验装置的示意图；
图4说明了在湿1％GrowDex和SM缓冲液中的储存对不同细菌噬菌体活力的影响；
图5显示了感染金黄色葡萄球菌菌株19A2的ΦEBHT储存在干
Figure BDA0002182564330000023
中的示例性结果；
图6显示了fRuSau02在1％和0.5％NFC和SM缓冲液中储存24小时和8周的示例性结果；
图7显示了对于在大肠杆菌123738(#5521)中的fHoEco02和在金黄色葡萄球菌19A2(#6433)中的ΦEBHT进行的运输试验的结果；
图8显示了其他市售水凝胶对细菌生长的影响；和
图9显示了感染金黄色葡萄球菌菌株13KP的fRuSau02储存在其他市售水凝胶和
Figure BDA0002182564330000024
中的示例性结果。
发明详述
公开了包含细菌噬菌体和纳米原纤纤维素或其衍生物的湿态或干态组合物或基质。
纳米原纤纤维素或其衍生物的存在似乎允许储存各种细菌噬菌体，甚至长时间储存各种细菌噬菌体。因此，可以例如从中央噬菌体文库实验室储存和运送细菌噬菌体到临床实验室以用于筛查和治疗目的。
该组合物或基质的操作也相对容易，并且可以降低污染和交叉污染的风险，例如当操作、储存或运输组合物或基质时。
该组合物或基质和方法可适用于各种不同类型的细菌噬菌体。
此外，该组合物或基质可用于将细菌噬菌体递送至对象以用于医学和治疗目的。该组合物或基质可以基于植物衍生的材料或源自微生物的材料，因此它不一定必然含有任何可从动物中获得的物质。
已发现该组合物或基质的效果明显优于例如某些其他凝胶状物质，如含有羧甲基纤维素钠和其他成分(例如藻酸钙或丙二醇)的水凝胶。
纳米原纤纤维素似乎对细菌在组合物或基质上或在组合物或基质中的生长没有明显影响。因此，所述组合物或基质可以用作培养基，其中加入原核细胞，诸如细菌，例如以原核细胞悬液的形式，诸如以细菌悬液的形式，然后使其生长和/或繁殖。通过观察原核细胞在组合物或基质上或在组合物或基质中的生长，可以确定细菌噬菌体是否能够感染原核细胞。
术语“细菌噬菌体”和“噬菌体”可互换使用。它们可以指能够感染原核细胞(例如细菌和/或古生菌)的病毒。细菌噬菌体的形状和遗传物质可能不同。例如，细菌噬菌体可具有二十面体、八面体或丝状的衣壳。细菌噬菌体也可以具有头尾结构，包括例如二十面体衣壳(头部)、尾部和任选的其他部分，例如颈部。术语“一种细菌噬菌体”或“该细菌噬菌体”可以指一种或多种细菌噬菌体物种，和/或一种或多种细菌噬菌体颗粒。
在本说明书的上下文中，原核细胞可以包含细菌和/或古生菌，或者是细菌和/或古生菌。可以选择原核细胞，使得它们能够作为细菌噬菌体的宿主细胞起作用。
本组合物或基质可能适合的细菌噬菌体的实例包括有尾噬菌体目(Caudovirales)(包括肌尾噬菌体科(Myoviridae)，长尾噬菌体科(Siphoviridae)，短尾噬菌体科(Podoviridae)和线状病毒目(Ligamenvirales)(脂毛噬菌体科(Lipothrixviridae)，古噬菌体科(Rudiviridae))；和瓶形噬菌体科(Ampullaviridae)，双尾病毒科(Bicaudaviridae)，卡氏噬菌体科(Clavaviridae)，覆盖噬菌体科(Corticoviridae)，囊状噬菌体科(Cystoviridae)，微小纺锤形噬菌体科(Fuselloviridae)，球状病毒科(Globuloviridae)，微滴形噬菌体科(Guttaviridae)，丝状噬菌体科(Inoviridae)，轻小噬菌体科(Leviviridae)，微小噬茵体科(Microviridae)，芽生噬菌体科(Plasmaviridae)和/或复层噬菌体科(Tectiviridae)。组合物或基质，方法和用途不特别限于任何目、科或属的细菌噬菌体。然而，相比于其他细菌噬菌体，它们可能更适合某些细菌噬菌体。
如果细菌噬菌体能够感染原核细胞并随后在其中繁殖，则可以认为该细菌噬菌体是有活力的。可以测试细菌噬菌体的活力，例如如实施例中所述。
通常可以由植物来源的纤维素原料制备纳米原纤纤维素。该原料可以基于含纤维素的任何植物材料。所述植物材料可以是例如木材。木材可以来自软木树如云杉、松树、冷杉、落叶松、花旗松或铁杉，或来自硬木树如桦树、白杨、杨树、桤木、桉树、橡树、山毛榉或刺槐，或者来自软木和硬木的混合物。在一个实施方式中，纳米原纤纤维素从木浆获得。在一个实施方式中，纳米原纤纤维素从硬木浆获得。在一个实例中，硬木是桦木。在一个实施方式中，纳米原纤纤维素从软木浆获得。
纳米原纤纤维素可以由植物材料制备。在一个例子中，原纤是从非薄壁(non-parenchymal)植物材料获得的。在这种情况下，原纤可以从次生细胞壁获得。这种纤维素原纤的一种丰富来源是木纤维。植物来源(例如木材)的纤维素浆料的最小纤维素实体包括纤维素分子、初级原纤和微原纤。微原纤单元是物理条件下聚结导致的初级原纤的束，而物理条件下聚结的原理是表面自由能降低。
纳米原纤纤维素是通过对来自木材的纤维原料进行均质化制得，所述纤维原料可以是化学浆料。纤维素纤维可以崩解产生直径在纳米范围内的原纤，该直径可以最高达200nm，或最高达50nm，例如在1-200nm或1-100nm的范围内，并且能够提供原纤在水中的分散体。原纤的尺寸可以减小到大部分原纤的直径仅在2-20纳米的范围内。来源于次生细胞壁的原纤可以基本为晶体，其结晶度至少为55％。这种原纤可以具有与源自初生细胞壁的原纤不同的性质；例如源自次生细胞壁的原纤的脱水可能更具挑战性。
如本说明书的上下文中，术语“纳米原纤纤维素”可以指从基于纤维素的纤维原料分离的纤维素原纤或原纤束。这些原纤的特征在于具有高纵横比(长度/直径)：它们的长度可以超过1μm，而直径通常保持小于200nm。最小的原纤具有所谓的初级原纤的规格，它们的直径通常为2至12nm。原纤的尺度和尺寸分布可以取决于精制方法和效率。纳米原纤纤维素可表征为基于纤维素的材料，其中颗粒(原纤或原纤束)的中值长度不超过50μm，例如在1至50μm的范围内，并且颗粒直径小于1μm，例如在2至500nm的范围内。在天然纳米原纤纤维素的情况中，在一个实施方式中原纤的平均直径在5至100nm的范围内，例如在10至50nm的范围内。在纳米原纤纤维素中可能存在完整的未原纤化的微原纤单元。如本说明书的上下文中，术语“纳米原纤纤维素”不旨在包括非原纤的棒形纤维素纳晶或须晶。
目前关于纳米原纤纤维素的命名并不统一，在文献中使用的术语可能不一致。例如，以下术语已经用作纳米原纤纤维素的同义词：纤维素纳米纤维(CNF)、纳米原纤纤维素、纳米原纤化的纤维素(NFC)、纳米纤维素、纳米级原纤化的纤维素、微原纤纤维素、纤维素微原纤、微原纤化的纤维素(MFC)和原纤纤维素。
纳米原纤纤维素的特征在于具有大的比表面积和强的形成氢键的能力。在水分散体中，纳米原纤纤维素通常呈现为浅色或混浊的凝胶状材料。根据纤维原料，纳米原纤纤维素也可含有少量的其它木质组分，如半纤维素或木质素。该量取决于植物来源。
不同级别的纳米原纤纤维素可基于三个主要特性分类：(i)尺寸分布、长度和直径；(ii)化学组成；和(iii)流变性质。要充分描述一个级别，可以综合使用这些性质。不同级别的实例可以包括天然(或未改性的)NFC、氧化NFC(高粘度)、氧化NFC(低粘度)、羧甲基化NFC和阳离子化NFC。在这些主要级别中，还可以存在亚级别，例如：极佳原纤化相比于中度原纤化、高度取代相比于低度取代、低粘度相比于高粘度，等等。原纤化技术和化学预改性可能对原纤尺寸分布有影响。通常，非离子级别可能具有更宽的原纤直径(例如10-100nm，或10-50nm)，而化学改性级别可能更细(例如2-20nm)。对于改性级别，原纤尺寸的分布可能也更窄。某些改性，尤其是TEMPO氧化，可以产生更短的原纤。
在本说明书的上下文中，术语“纳米原纤纤维素”也可以理解为是指纳米原纤纤维素的衍生物。
根据原料来源，例如硬木(HW)相比于软木(SW)浆料，最终纳米原纤纤维素产品中可能存在不同的多糖组成。通常，从漂白的桦木浆料制备非离子级别，其可能产生高二甲苯含量(25重量％)。从HW或SW浆料制备改性级别。在这些改性级别中，半纤维素也可以与纤维素域一起被改性。改性可以不是均匀的，即，一些部分相比其他部分可以被改性到更高的程度。因此，不可能进行详细的化学分析——改性产物通常是不同多糖结构的复杂混合物。
原纤或原纤束的尺寸可以取决于原料和崩解方法。可采用任何合适的设备，如精制机、研磨机、分散器、均质机、磨碎机(colloider)、摩擦研磨机、销棒粉碎机(pin mill)、转子-转子解胶机、超声波破碎器、流化器(如微流化器、大流化器(macrofluidizer)或流化器型均质机)来对纤维素原料进行机械崩解。可以在存在足够的水的条件下进行崩解处理，以防止纤维之间形成键。
在一个实例中，通过使用具有至少一个转子、桨叶或类似移动机械构件的分散器进行崩解，所述分散器例如是转子-转子解胶机(rotor-rotor dispergator)。转子-转子解胶机的一个实例是Atrex设备。
适于崩解的设备的另一实例是销棒粉碎机，例如多重外周销棒粉碎机。在US6202946 B1中描述了这种设备的一个例子。
在一个实施方式中，通过使用均质机进行崩解。
在本说明书的上下文中，术语"原纤化"一般指通过向颗粒施加的功来机械崩解纤维材料，由此使纤维素原纤从纤维或纤维片段中脱离。该功可基于各种作用，例如研磨、压碎或剪切、或它们的组合，或者能够减小颗粒尺寸的其他相应的作用。精制工作所消耗的能量通常以能量/(处理的原料量)表示，单位例如是kWh/kg，MWh/吨，或者与这些成比例的单位。表述“崩解”或“崩解处理”可与“原纤化”互换使用。经历原纤化的纤维材料分散体可以是纤维材料和水(或水溶液)的混合物，在本文中也被称为“浆料(pulp)”。纤维材料分散体一般可指整个纤维、从中分离的部分(片段)、原纤束或与水混合的原纤，并且一般地，水性纤维材料分散体是这类物质的混合物，其中组分之间的比例取决于加工程度或处理阶段，例如取决于同一批次纤维材料在处理过程中的运行次数或“通过”次数。
在水性环境中，纳米原纤纤维素或其衍生物的分散体可形成粘弹性水凝胶网络。例如，该凝胶可由分散和水合的缠结原纤在相对低浓度(例如0.05至0.2％(w/w))下形成。NFC水凝胶的粘弹性可用例如动态振动流变学测量来表征。纳米原纤纤维素水凝胶可表现出特有的流变性质。例如，它们是剪切稀化或假塑性材料，这意味着其粘度取决于使材料变形的速度(或力)。当在旋转流变仪中测量粘度时，观察到以下剪切稀化特性：随着剪切速率增加而粘度降低。水凝胶显示出塑性行为，这意味着在材料开始容易流动之前需要一定的剪切应力(力)。该临界剪切应力经常被称作屈服应力。屈服应力可由用应力控制流变仪测定的稳态流动曲线确定。当将所述粘度相对于施加的剪切应力作图时，可看到在超过临界剪切应力后粘度急剧下降。零剪切粘度和屈服应力可以是描述材料悬浮能力的最重要的流变参数。这两种参数可以非常清楚地区分不同的级别，从而能对级别进行分类。
纳米原纤纤维素还可以通过平均直径(或宽度)或平均直径与粘度一起来表征，所述粘度例如是布氏粘度或零剪切粘度。在一个实施方式中，所述纳米原纤纤维素具有在1-100nm范围内的原纤的数均直径。在一个实施方式中，所述纳米原纤纤维素具有在1-50nm范围内的原纤的数均直径。在一个实施方式中，所述纳米原纤纤维素具有在2-15nm范围内的原纤的数均直径，例如TEMPO氧化的纳米原纤纤维素。可用多种技术，例如使用显微镜确定原纤的直径。可通过对场发射扫描电子显微镜(FE-SEM)、透射电子显微镜(TEM)(例如低温透射电子显微镜(cryo-TEM))或原子力显微镜(AFM)获得的图像进行图像分析来测定原纤厚度和宽度分布。通常，AFM和TEM可以很好地适用于具有窄原纤直径分布的纳米原纤纤维素级别。
可以使用流变仪测量纳米原纤纤维素的粘度。在一个实例中，在22℃，用装配有窄间隙叶片几何结构(叶片的直径为28mm，且长度为42mm)的应力控制旋转流变仪(AR-G2，英国TA仪器公司(TA Instruments,UK))，在直径为30mm的圆筒形样品杯中对纳米原纤纤维素分散体的流变粘度进行测量。在将样品装载到流变仪之后，使它们静止5分钟，之后开始测量。用逐渐增加的剪切应力(其与施加的扭矩成比例)来测量稳态粘度，并测量剪切速率(其与角速度成比例)。在达到恒定剪切速率之后或者在2分钟的最大时间之后，记录某一剪切应力下的报道粘度(＝剪切应力/剪切速率)。当超过1000s-1的剪切速率时，停止测量。该方法可用于确定零剪切粘度。
在一个实例中，纳米原纤纤维素当分散在水中时提供在1000–100000Pa·s范围内、例如在5000-50000Pa·s范围内的零剪切粘度(在小剪切应力下恒定粘度的“平台”)，和在1–50Pa范围内、例如在3–15Pa范围内的屈服应力(开始剪切稀化时的剪切应力)，这些测量结果是通过旋转流变仪在稠度为0.5重量％(w/w)的条件下在水性介质中确定的。
当以0.5重量％的浓度分散在水中时，该纳米原纤纤维素可以具有0.3–50Pa的储存模量。例如，当以0.5重量％的浓度分散在水中时，储存模量可以在1-20Pa的范围内，或在2-10Pa的范围内。
浊度是通常为肉眼不可见的个体颗粒(所有的悬浮或溶解固体)导致的流体的混浊或模糊。有几种测量浊度的实用方式，最直接的是测量光穿过水样品柱时的衰减(即，强度的降低)。备选使用的杰克逊蜡烛法(单位：杰克逊浊度单位或JTU)本质上是反过来测量完全遮蔽穿过水柱所见的蜡烛火焰所需的水柱长度。
可以采用光学浊度测量仪器来定量测定浊度。存在一些市售用于定量测量浊度的浊度计。在本发明中，采用基于比浊法的方法。来自校准比浊计的浊度单位称作比浊法浊度单位(NTU)。用标准校准样品对测量设备(浊度计)进行校准和控制，之后对经稀释的NFC样品的浊度进行测量。在一种浊度测量方法中，可以将纳米原纤纤维素样品在水中稀释至低于所述纳米原纤纤维素的凝胶点的浓度，可以测量稀释样品的浊度。测得纳米原纤纤维素样品的浊度的所述浓度可以为0.1％。具有50ml测量容器的HACH P2100浊度计可用于浊度测量。确定纳米原纤纤维素样品的干物质，可以将0.5g样品(以干物质计算)装载到测量容器中，其可以用自来水填充至500g，并通过振荡剧烈混合约30秒。立即将水性混合物分入5个测量容器中，将它们插入浊度计中。可以对每个容器进行3次测量。可以从所获得的结果计算平均值和标准偏差，最终结果可以以NTU单位给出。
表征纳米原纤纤维素的一种方式是既限定粘度又限定浊度。低浊度与原纤的小尺寸(例如小直径)相关，因为小原纤对光的散射很差。一般而言，随着原纤化程度增加，粘度增加并且同时浊度降低。然而，这可能发生在某个点之前。当继续进行原纤化时，原纤可能最终开始破裂并且不能再形成牢固的网络。因此，在此点之后，浊度和粘度都可能开始下降。
在一个实例中，阴离子纳米原纤纤维素的浊度低于90NTU，例如3-90NTU，诸如5-60NTU，例如8-40NTU，这些数值是通过比浊法在0.1％(w/w)稠度下在水性介质中测得。在一个实例中，天然纳米原纤纤维素的浊度甚至可以高于200NTU，例如10-220NTU，诸如20-200NTU，例如50–200NTU，这些数值是通过比浊法在0.1％(w/w)稠度下在水性介质中测得。为了表征纳米原纤纤维素，这些范围可以与纳米原纤纤维素的粘度范围组合。
用于制备组合物或基质的原料可以是由上述一些纤维原料的崩解得到的或者能够直接由上述一些纤维原料的崩解得到的纳米原纤纤维素，它们由于崩解条件以较低浓度均匀地分布在水中。原料可以是浓度为0.2-10％(w/w)的水性凝胶。
组合物或基质可以包含0.1–99.9％(w/w)的纳米原纤纤维素或其衍生物。组合物或基质的稠度或纳米原纤纤维素含量可以取决于例如其是湿态还是干态。当处于干态时，组合物或基质可包含例如96-98％(w/w)的纳米原纤纤维素。组合物或基质的稠度或纳米原纤纤维素含量可另外或替代地取决于其预期用途。例如，出于运输目的，约0.8％或更高，或约1％或更高的稠度可能非常适合于湿态(例如水凝胶形式)或干态。这种组合物或基质可具有足够的粘度，使得其可以很好地粘附于例如固体载体。
在一个实施方式中，组合物或基质处于湿态。在本说明书的上下文中，术语“湿态”可以指其中组合物或基质包含水和/或水溶液的状态，使得纳米原纤纤维素或其衍生物与水或水溶液混合或分散于水或水溶液中。例如，组合物或基质可包含大于10％(w/w)的水和/或水溶液。另选或者另外地，组合物或基质可包含大于20％(w/w)，或大于30％(w/w)，或大于40％(w/w)，或大于50％(w/w)的水和/或水溶液。水/水溶液含量可取决于随后使用的组合物或基质的润湿程度和/或其他条件。水溶液可以是与细菌噬菌体相容的任何水溶液，例如缓冲溶液或盐水(NaCl溶液)。与细菌噬菌体相容的缓冲溶液的实例包括SM缓冲液(100mM NaCl，10mM MgSO4，50mM Tris-HCl，pH 7.5，0.002％(w/v)明胶)和噬菌体缓冲液(10mM Tris-HCl，pH 7.5，10mM MgCl2，68mM NaCl)。例如，缓冲液中的细菌噬菌体可以与纳米原纤纤维素水凝胶混合或悬浮，使得除了源自纳米原纤纤维素水凝胶的水或水溶液之外，所得组合物或基质还含有一定量的缓冲溶液。在一个实例中，缓冲液中的细菌噬菌体可以与纳米原纤纤维素水凝胶以1:2的体积比(即缓冲液中1体积的噬菌体和2体积的水凝胶)混合或悬浮。在另一个实例中，Mg2+离子可以包含在组合物或基质中；其可以增强噬菌体的稳定性。
在湿态下，组合物或基质的稠度不受特别限制。例如，0.1至1.5％(w/w)范围内的稠度非常适合，但也可以考虑更高的稠度。
在湿态下，纳米原纤纤维素水凝胶或其衍生物可以是分散体的形式。因此，组合物或基质可以是纳米原纤纤维素水凝胶或其衍生物在水或水溶液中的水分散体，并且任选地包含其他成分。
如已经提到的，在水性环境中，纳米原纤纤维素的分散体可以形成粘弹性水凝胶网络。因此，组合物或基质可以是水凝胶的形式。在这样的实施方式中，细菌噬菌体可以简单地与水凝胶混合或悬浮。
在一个实施方式中，组合物或基质可以处于湿态并且为水凝胶或膜的形式。
在一个实施方式中，湿态的组合物或基质是层、涂层、薄膜、片或隔膜的形式。
例如，组合物或基质可以是包含湿态组合物或基质的产品。这样的产品可以是医疗组合物或产品，其可以用于例如向对象递送细菌噬菌体。
这种组合物、基质或产品可以是可喷射的；为此，组合物、基质或产品可具有使其适于喷射的稠度。例如，最高达1.5％(w/w)，或0.1至1.5％(w/w)，或0.2至1％(w/w)范围内的稠度可能是合适的。纳米原纤纤维素水凝胶是高度剪切稀化的，因此即使在相对高的稠度下它们也可以是可喷射的。例如，这种组合物、基质或产品可适用于局部治疗。这种组合物、基质或产品可以喷射到对象上和喷射到含有细菌噬菌体的薄层中。将组合物或基质喷射到对象上可能对对象而言比例如施用贴片或绷带痛苦更少。在其他实施方式中，组合物或基质可以是例如用于局部、口服、舌下、眼内、肠、直肠，皮下，胃肠外或粘膜粘附施用的水凝胶。
在一个实施方式中，组合物或基质可以是膜的形式。
这种膜可以通过在细菌噬菌体和缓冲液(例如盐水)的混合物中润湿包含纳米原纤纤维素的膜来制备。这种膜也可以例如通过将细菌噬菌体与纳米原纤纤维素(例如一种纳米原纤纤维素)混合或悬浮形成混合物的膜来形成。如果需要或必要，可以从混合物中除去水。
膜可含有例如1-50％(w/w)的纳米原纤纤维素。膜的厚度可以根据例如预期用途而变化。例如，膜的厚度可以是1μm至5mm，1至1000μm，5至500μm，或50至300μm。形成例如用于伤口愈合目的的医疗产品或部分医疗产品的膜的厚度可以是约10-100μm。即使在没有固体载体的情况下，这种膜也可适用于操作、储存、运输等。膜可以例如作为涂层或层布置在固体载体上而作为多层医疗产品的一部分，或者可以布置在诸如多孔板的固体载体上，在这些实施方式中，膜的厚度可以只有1-5微米厚。然而，也可以考虑其他厚度。
在一个实施方式中，组合物或基质处于干态。
在本说明书的上下文中，术语“干态”可以指其中组合物或基质包含的水和/或水溶液小于10％(w/w)的状态。换句话说，干态下的组合物或基质的水分含量可低于10％(w/w)。然而，干组合物或基质可能仍含有一定量的水分，例如1-10％(w/w)，或5-10％(w/w)，或1-5％(w/w)。
干态可以简单地通过例如空气干燥细菌噬菌体和纳米原纤纤维素的混合物来实现。可以替代地或另外地使用各种干燥方法和/或装置。干燥期间的温度和其他条件可以变化，但是可以选择条件使得细菌噬菌体的活力不会降低或者不会明显降低。
然而，相比于其他细菌噬菌体，干燥可能对某些细菌噬菌体效果更好。例如，相对较小的噬菌体可以比大的噬菌体更好地耐受干燥。
在干态下，组合物或基质可以更容易操作、储存、运输等。组合物或基质的体积可以减少，并且可以降低组合物或基质污染的风险。
干态的这种组合物或基质可以是例如膜的形式。这种膜可以例如通过以膜的形式干燥湿态的组合物或基质来获得。即使在没有固体载体的情况下，这种膜也可适用于操作、储存、运输等。
在一个实施方式中，干态的组合物或基质是层、涂层、薄膜、片或隔膜的形式。
在一个实施方式中，组合物或基质是喷雾干燥的颗粒形式。
附加地或替代地，组合物或基质可以是可喷射产品、组合产品、植入物、透皮贴剂或用于口服、舌下、局部、眼内、肠、直肠，皮下，胃肠外或粘膜粘附施用的制剂。
纳米原纤纤维素可以形成在组合物或基质内具有互连孔的NFC基质。细菌噬菌体可以至少部分地作为以二维或三维排列在基质中的细菌噬菌体颗粒存在。细菌噬菌体颗粒可以均匀或非均匀地分布在基质中。细菌噬菌体颗粒的分布可以取决于例如细菌噬菌体颗粒在组合物或基质中悬浮或混合的程度。细菌噬菌体颗粒具有相对小的物理尺寸，并且明显小于例如哺乳动物细胞，因此它们可以相对容易地分布在基质内。类似地，它们可以相对容易地从基质中释放。可能不需要使用任何特定的过程来分解基质以释放细菌噬菌体颗粒，但是在一些实施方式中可以使用该特定的过程。
崩解的纤维状纤维素原料可以是改性的或未改性的纤维原料。改性的纤维原料是指纤维受改性处理影响的原料，从而纤维素纳米原纤更易于从纤维上脱离。可以对液体中悬浮物形式(例如浆料)存在的纤维状纤维素原料进行改性。
对纤维的改性处理可以是化学性或物理性的。在化学改性中，纤维素分子的化学结构通过化学反应(纤维素的“衍生化”)改变，例如使得纤维素分子的长度不受影响但官能团添加至聚合物的β-D-吡喃葡萄糖单元。纤维素的化学改性以某一转化度发生，该转化度取决于反应物的剂量和反应条件，通常化学改性不完全，这样纤维素将作为原纤保持固体形式并且不溶于水。在物理改性中，阴离子型或非离子型物质或其任意组合可以物理性地吸附在纤维素表面上。改性处理也可以是酶促的。特别地，在改性之后纤维中的纤维素可以是带离子电荷的，这是因为纤维素的离子电荷可以减弱纤维的内部键，之后可以有助于崩解至纳米原纤纤维素。可以通过纤维素的化学改性或物理改性来实现离子电荷。与起始原料相比，改性之后的纤维可具有较高的阴离子电荷。最普遍使用的用于制备阴离子电荷的化学改性方法可以包括氧化(其中羟基被氧化为醛和羧基)、磺化以及羧甲基化。
纤维素可以被氧化。在纤维素的氧化中，纤维素的伯羟基可以被杂环硝酰基化合物(例如2,2,6,6-四甲基哌啶基-1-氧基自由基，通常称为“TEMPO”)催化氧化。纤维素β-D-吡喃葡萄糖单元的至少一些伯羟基(C6-羟基)可以被选择性地氧化为羧基。还可以从伯羟基形成一些醛基。纤维素可以被氧化至氧化的纤维素中羧酸含量为0.6-1.4mmol COOH/g浆料，或0.8-1.2mmol COOH/g浆料，例如1.0-1.2mmol COOH/g浆料的水平，该含量由电导滴定确定。当以这种方式得到的氧化纤维素的纤维在水中崩解时，它们可以提供个体化纤维素原纤的稳定透明分散体，该个体化纤维素原纤的宽度可以例如为3-5nm。
在一个实施方式中，纳米原纤纤维素或其衍生物包含天然纳米原纤纤维素或者是天然纳米原纤纤维素。天然纳米原纤纤维素似乎非常适合细菌噬菌体。
纳米原纤纤维素或其衍生物也可以是天然纳米原纤纤维素和一种或多种其他纳米原纤纤维素类型或级别的混合物。
在一个实施方式中，纳米原纤纤维素包含化学改性的纳米原纤纤维素，例如阴离子改性的纳米原纤纤维素。在一个实施方式中，纳米原纤纤维素是阴离子改性的纳米原纤纤维素。在一个实施方式中，阴离子改性的纳米原纤纤维素是氧化的纳米原纤纤维素。在一个实施方式中，阴离子改性的纳米原纤纤维素是磺化的纳米原纤纤维素。在一个实施方式中，阴离子改性的纳米原纤纤维素是羧甲基化的纳米原纤纤维素。
组合物或基质还可以包含其他组分，例如生物活性剂或药物。这些组分可以与组合物或基质混合或掺入基质中。生物活性剂可以是例如WO2013/072563(例如，第13页第5行到第20页第2行)中公开的任何一种生物活性剂，该文献的全部内容并入本文。
如果组合物或基质不含任何抗感染剂或抗生素，则可能是有益的。在一个实施方式中，组合物或基质是中性的。在一个实施方式中，组合物或基质的pH在5至9，或6至8的范围内。
公开了一种用于储存、培养、运输和/或递送细菌噬菌体的装置。该装置包括固体载体和布置在固体载体上包含纳米原纤纤维素或其衍生物的湿态或干态组合物或基质。
在该装置的情况中，组合物或基质可以是包含本说明书中描述的纳米原纤纤维素或其衍生物的任何组合物或基质。然而，在该情况中，组合物或基质不一定需要包括细菌噬菌体，细菌噬菌体可以稍后添加用于储存、培养、运输和/或递送。
还公开了一种装置，该装置包括固体载体和布置在该固体载体上的根据本说明书中公开的一个或多个实施方式的组合物或基质。
以下描述的任何特征可以被理解为涉及上述装置中的任何一种。
所述装置的固体载体可以使组合物或基质的操作、运输等更容易。该固体载体还可以促进组合物或基质的进一步操作。例如，可以将原核细胞悬液添加到固体载体上的组合物或基质中。然后可以允许该装置上的原核细胞生长和繁殖，并且可以观察该装置以确定组合物或基质中的细菌噬菌体是否能够感染原核细胞。
固体载体的形状、尺寸和/或体积不受特别限制。例如，它可以是容器，诸如管、小瓶、器皿、注射器或瓶子。这种管和小瓶的实例可以是可商购的各种形状和尺寸的小瓶和塑料管。例如，这样的管和小瓶可以具有螺旋盖或扣盖。实例可包括15和50ml离心管，艾本德(Eppendorf)管，0.5至2ml微量离心管等。容器的其他实例可包括例如板，诸如多孔板，生物反应器，支架或3-D微流体培养芯片。
固体载体(例如容器)可具有一个凹槽或多个凹槽，用于接收和/或容纳组合物或基质。
在其他实施方式中，固体载体可以简单地具有可以在其上布置组合物或基质的区域。
在其他实施方式中，组合物或基质可以浸渍在固体载体中，例如浸渍到纱布中，如下文所述。
多孔板，例如6-、12-、24-、48-、96、384-和1536-孔板，可以是市售的并且可以很好地适合作为固体载体。这种多孔板可以由各种材料制成，例如塑料，诸如聚苯乙烯。孔可以具有各种不同的形状，例如它们可以具有圆形或平底或V形底部。
在一个实施方式中，组合物或基质被布置在固体载体上的多个位置上。可以将不同的细菌噬菌体添加到各个位置上的组合物或基质中。或者，在另一个实施方式中，包含不同细菌噬菌体的多种组合物或基质可以被布置在固体载体上的各个位置。在一个实施方式中，固体载体是多孔板，组合物或基质布置在多孔板的一个或多个孔中。在这样的布置中，可以在多孔板的孔中布置多种组合物或基质，每种组合物或基质含有细菌噬菌体，使得各个孔可以含有不同的细菌噬菌体。
因此，这种装置可以包括例如细菌噬菌体文库。因此，该装置可以很好地适合于例如用于运输和输送细菌噬菌体文库，和/或用于将一种原核细胞悬液或多种不同的原核细胞悬液添加到各组合物或基质中，例如用于筛选哪种或哪些细菌噬菌体能够感染悬液中的原核细胞。
固体载体(例如容器)可具有一个凹槽或多个凹槽，用于接收和/或容纳组合物或基质，随后用于接收和/或容纳一种原核细胞悬液和/或多种不同的原核细胞悬液。在这样的实施方式中，原核细胞悬液可以直接添加到固体载体和组合物或者基质中，使得组合物或基质中的细菌噬菌体可感染原核细胞。
该装置可以是可关闭的并且任选地也可以是可密封的，以防止细菌噬菌体的扩散和/或污染。例如，多孔板可以是可关闭的并且任选地是可密封的，以便将细菌噬菌体保留在多孔板的孔中并防止其污染多孔板的其他孔(交叉污染)。该装置还可包括用于固体载体的盖子。例如，多孔板可以设置有盖子或遮盖物；这样的盖子或遮盖物可以适当地成形，以便适合孔的边缘，例如以防止交叉污染。各种容器，例如管、瓶、器皿或生物反应器可以具有例如盖子、遮盖物、木栓、塞子、帽或其他合适的用于封闭容器的装置。
在一些实施方式中，组合物可以是膜或层的形式，可以是湿态或干态。
组合物、基质或装置可以是医疗产品。
在一个实施方式中，所述装置是医用多层产品，所述固体载体为层的形式，并且所述组合物或基质作为层布置在所述固体载体上或浸渍在所述固体载体中。
本说明书中描述的医疗产品可用于多种应用中。一个具体领域是医学应用，其中医疗产品被施用到活组织上，例如施用到皮肤上。医疗产品可以是例如贴剂、敷料、绷带或过滤器，或如上所述，其可以是可喷射的水凝胶的形式。医疗产品也可以是治疗产品，例如含有药物的治疗贴剂。包含组合物或基质的医疗产品的表面可以用于在其使用期间与皮肤接触。此外，作为用于将细菌噬菌体递送至对象(例如对象的皮肤)的非常适合的产品，包含纳米原纤纤维素或其衍生物的组合物或基质的表面可在其与对象的皮肤直接接触时提供能够有益的效果。例如，可以促进伤口或皮肤上的其他损伤的愈合；可以促进细菌噬菌体和/或其他物质从医疗产品到皮肤的递送；或者可以治疗或控制细菌感染。
固体载体可以例如包括纱布层或者是纱布层。
可以通过将细菌噬菌体与纳米原纤纤维素或其衍生物混合来制备组合物或基质。然后可以用组合物或基质处理(例如浸渍)纱布层。这可以通过在盆等中提供组合物或基质并将纱布浸没或浸入到组合物或基质来进行。可以将纱布保持在组合物或基质中一段时间，该时间段适于使组合物或基质浸渍纱布，然后从组合物或基质中取出纱布。在本说明书的上下文中，术语“浸渍”是指纱布整个或基本上全部被包含纳米原纤纤维素的组合物或基质填充或浸泡的方法。在浸渍中，纱布可以部分或完全地被组合物或基质填充、浸润、渗透或饱和。然后，可以压制湿纱布以除去过量的组合物或基质和液体，以促进组合物或基质渗透到纱布的结构中。纱布可以是任何合适的纱布，例如包含纤维的织物、布或类似材料。纱布可以是织造的或无纺的，无菌的或非无菌的，平纹的或浸渍的，或有孔的(穿孔的或带狭缝的)，或它们的组合。纱布可以作为纱布片或织物提供，或作为类似结构提供。例如，在WO2017/174874中描述了这种医疗产品及其制备方法，其全部内容并入本文。
可以考虑各种其他固体载体和用于固体载体的材料。各种合成聚合物、生物化合物和天然聚合物可以是合适的。合适材料的例子可以是例如WO 2013/072563(第25页第12行到第26页第19行)中描述的载体材料，其全部内容并入本文。
如果组合物或基质或装置不含任何抗感染剂或抗生素，则可能是有益的。在一个实施方式中，组合物或基质是中性的。在一个实施方式中，组合物或基质的pH在5至9，或6至8的范围内。
附加地或替代地，组合物、基质或装置可以是医疗装置、组合产品、植入物、透皮贴剂或用于口服、舌下、局部、眼内、肠、直肠，皮下，胃肠外或粘膜粘附施用的制剂。
公开了一种用于储存、培养、运输和/或递送细菌噬菌体的方法。该方法可包括将细菌噬菌体与纳米原纤纤维素或其衍生物混合，从而得到包含细菌噬菌体和纳米原纤纤维素或其衍生物的组合物或基质。
为了培养细菌噬菌体，可以将适合于细菌噬菌体的原核细胞添加到组合物或基质中。合适的原核细胞可以是细菌噬菌体能够感染的原核细胞，并且在原核细胞中细菌噬菌体能够繁殖。
组合物或基质可以被布置在固体载体上。固体载体可以是本说明书中描述的任何固体载体。
在一个实施方式中，组合物或基质被布置在固体载体上的多个位置上。可以将不同的细菌噬菌体添加到各个位置上的组合物或基质中。或者，在另一个实施方式中，包含不同细菌噬菌体的多种组合物或基质可以被布置在各个位置中。在一个实施方式中，固体载体是多孔板，组合物或基质布置在多孔板的一个或多个孔中。在这样的装置中，可以在多孔板的孔中布置多种组合物或基质，每种组合物或基质含有细菌噬菌体，使得各个孔可以含有不同的细菌噬菌体。因此，该方法适用于储存、培养、运输和/或递送细菌噬菌体文库。
因此，这种装置可以包括例如细菌噬菌体文库。
该方法可以进一步包括将原核细胞悬液或多种不同的细菌悬液添加到各组合物或基质中。这可以允许筛选哪一种细菌噬菌体能够感染悬液中的原核细胞。
该方法可以进一步包括干燥组合物或基质。干燥可以例如通过空气干燥进行，即，使组合物或基质空气干燥。干燥期间的温度和其他条件可以变化，但是可以选择条件使得细菌噬菌体的活力不会降低或者不会明显降低。例如，干燥可以在室温下进行，但也可以例如取决于细菌噬菌体而使用更低或更高的温度。干燥所需的时间可以取决于例如组合物或基质的稠度，其体积，条件等。对于相对小的体积，例如10μl，在室温下干燥2小时或更长时间可能就足够了。
所述方法还可以包括以下的一个或多个操作：
储存组合物或基质；
培养细菌噬菌体；
运输组合物或基质；和/或
将细菌噬菌体从组合物或基质递送至目标或对象。目标可以是例如原核细胞培养。
组合物或基质可以例如在室温或环境温度，0至10℃或2至8℃下储存。在低于室温的温度下储存，例如在4℃储存，可以比在较高温度(例如室温)下储存更好地保持噬菌体活力。在本说明书的上下文中，“室温”可以指18至25℃范围内的温度，例如20至22℃。
公开了制备根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的组合物或基质或根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的装置的方法。该方法可包括将细菌噬菌体与纳米原纤纤维素或其衍生物混合。由此可以获得包含细菌噬菌体和纳米原纤纤维素或其衍生物的组合物或基质。
组合物或基质可以被布置在固体载体上。固体载体可以是本说明书中描述的任何固体载体。
在一个实施方式中，组合物或基质被布置在固体载体上的多个位置上。可以将不同的细菌噬菌体添加到各个位置上的组合物或基质中。或者，在另一个实施方式中，包含不同细菌噬菌体的多种组合物或基质可以被布置在各个位置中。在一个实施方式中，固体载体是多孔板，组合物或基质布置在多孔板的一个或多个孔中。在这样的装置中，可以在多孔板的孔中布置多种组合物或基质，每种组合物或基质含有细菌噬菌体，使得各个孔可以含有不同的细菌噬菌体。因此，这种装置可以包括例如细菌噬菌体文库。
该方法可以进一步包括干燥组合物或基质。
还公开了一种用于繁殖细菌噬菌体和/或测试细菌噬菌体感染原核细胞的能力的方法。该方法可包括：
将原核细胞添加到根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的组合物或基质中或者添加到根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的装置的组合物或基质中，和
在适于培养原核细胞的条件下维持组合物、基质或装置，从而使细菌噬菌体感染原核细胞。
原核细胞可以包含细菌和/或古生菌，或者是细菌和/或古生菌。
公开了在湿或干状态下的包含纳米原纤纤维素或其衍生物的组合物或基质用于储存、培养、运输和/或递送细菌噬菌体。
公开了根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的组合物或基质或根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的装置的组合物或基质用于治疗。
公开了根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的组合物或基质或根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的装置的组合物或基质用于治疗组织(例如皮肤)的损伤、伤害、疾病或病症。这类皮肤损害或伤害可以包括例如开放性或闭合性伤口。
公开了根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的组合物或基质或根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的装置的组合物或基质用于治疗细菌感染。
公开了根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的组合物或基质或根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的装置的组合物或基质用于治疗的用途。
公开了根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的组合物或基质或根据本说明书中描述的一个或多个实施方式的装置的组合物或基质用于治疗组织的损伤、伤害、疾病或病症或细菌感染的用途。
应理解，在上述任何一种方法和用途的情况中，组合物或基质、装置和细菌噬菌体可以是说明书中描述的任何组合物或基质、装置或细菌噬菌体，包括本说明书中描述的任何具体实施方式。
实施例
下面详细参考各种实施方式，这些实施方式的例子在附图中示出。
下文详细揭示了一些实施方式，使得本领域技术人员基于这些说明能够使用这些实施方式。没有对实施方式的所有步骤或特征进行详细讨论，因为许多步骤或特征对于本领域技术人员来说基于本说明书是显而易见的。
实施例1–材料
在以下实施例中，术语“GrowDex”或
Figure BDA0002182564330000201
是指纳米原纤纤维素水凝胶。在这些实施例中使用的GrowDex是天然纳米原纤纤维素水凝胶。
使用工业流化器进行原纤化，由漂白纤维素浆料通过高压均质化来制备天然NFC
Figure BDA0002182564330000202
从制浆厂无菌收集原料并在均化之前用灭菌机器进行彻底纯化。因此，在整个生产过程中维持微生物纯度。在原纤化之前，用无菌的超高质量水稀释纯化的浆纤维。在原纤化后直接对纳米纤维水凝胶进行高压灭菌(121℃/20分钟)。实验中使用的GrowDex的稠度为1.5％(w/w)。
实验中使用的细菌噬菌体如下：
fRuSau02(全名vB_SauM_fRuSau02；描述于Leskinen等人，Viruses 2017,9,258；doi:10.3390/v9090258)
ΦEBHT.来源:DSMZ,德国(莱布尼兹研究所DSMZ-德国微生物和细胞培养物保藏中心(Leibniz Institute DSMZ-German Collection of Microorganisms and CellCultures))
fHoEco02(全名vB_EcoM_fHoEco02；Kiljunen等人2018,Genome Announc 6:e00401-18；https://doi.org/10.1128/genomeA.00401-18)
fTu-Eco01(从污水中分离出来)
必要时，将实验中使用的细菌噬菌体和组合物或基质在SM缓冲液或0.9％NaCl中稀释。以下细菌噬菌体用于以下细菌：
金黄色葡萄球菌13KP(#5676)：fRuSau02的宿主
金黄色葡萄球菌19A2(#6433)；ΦEBHT的宿主
大肠杆菌123738(#5521)，fHoEco02的宿主
大肠杆菌123789(#5507)，fTu-Eco01的宿主
从患者中分离出其他细菌菌株，来源HUSLab，但是19A2是赫尔辛基大学兽医学院的安娜玛丽·海金海莫(Annamari Heikinheimo)从健康猪中分离出的。
本发明使用的所有噬菌体、细菌和细菌菌株都是商业可得的。
实施例2-NFC水凝胶对细菌生长的影响
用SM缓冲液或0.9％NaCl稀释NFC水凝胶至0(对照)、0.1、0.5、1.0和1.5％(w/w)的稠度。将10μl稀释液滴等分到96孔板的孔中。将200μl稀释的细菌过夜培养物(大肠杆菌菌株123738(#5521)和123789(#5507)以及金黄色葡萄球菌菌株13KP(#5675)和19A2(#6433))添加到孔上。通过跟踪OD600 5小时来监测细菌生长。
图1显示了大肠杆菌123789(#5507)的示例性结果。
发现所有测试的细菌在所有GrowDex稠度和用作NFC稀释剂的两种缓冲液中均生长良好。这说明所用稠度的NCF水凝胶不抑制细菌生长。
实施例3-NFC水凝胶对斑点试验中细菌噬菌体活力的影响
用SM缓冲液或0.9％NaCl以1:100稀释细菌噬菌体，将两种噬菌体稀释液与稠度为0.1，0.5，1.0和1.5％(w/w)的GrowDex水凝胶混合。储存在SM缓冲液和0.9％NaCl中的噬菌体用作对照。将得到的组合物在4℃储存约2小时。将组合物分别在SM缓冲液或0.9％NaCl中稀释，作为系列稀释液(10-4，10-5，10-6和10-7)。使稀释的组合物液滴落到在培养皿中的琼脂上生长的细菌的菌苔上。观察噬菌体感染细菌的能力。
发现含有GrowDex的组合物的稀释液与储存在SM缓冲液或0.9％NaCl中的噬菌体的稀释液一样具有活力。图2显示了金黄色葡萄球菌菌株19A2(#6433)中ΦEBHT的示例性结果。因此，发现噬菌体在稀释后从GrowDex基质中很好地释放并且能够感染细菌。噬菌体对细菌的特异性不受GrowDex存在的影响。此外，噬菌体活力与用作稀释剂的是SM缓冲液还是0.9％NaCl无关。
实施例4-NFC水凝胶对液体试验中细菌噬菌体活力的影响
实验装置的示意图如图3所示。
将噬菌体稀释液(1:100)与GrowDex(1％，0.5％或0.1％)或与SM缓冲液(对照)以1:2的体积比混合。将10μl每种混合物(组合物/基质)移液至多孔板的孔中，并如此(湿GrowDex)储存或在室温下在层流中空气干燥2-3小时。具有湿组合物/基质的板或干燥的板在4℃储存约2小时后，将200μl稀释的细菌液体培养物加入到每个孔中的组合物/基质中。通过在37℃温育板并通过在0-5小时期间测量每个孔中的OD600来观察噬菌体对细菌培养物的影响。
湿的1％GrowDex和SM缓冲液的结果显示在图4中。没有噬菌体的细菌生长良好并且在5小时内达到～0.5–0.7的OD600，但是在添加细菌噬菌体的孔中没有可见的细菌生长。这说明噬菌体在所用条件下保持其感染性，并且在添加细菌培养物时从NFC水凝胶中释放。
在不同稠度的湿GrowDex中观察到类似的结果。
实施例5-干燥噬菌体-NFC水凝胶混合物对细菌噬菌体活力的影响
以与实施例4中类似的方式在多孔板上测试对噬菌体-NFC水凝胶混合物进行干燥的效果，但是将10μl液滴在室温下在生物安全柜中空气干燥2小时，然后将板在4℃保存。图5显示了感染金黄色葡萄球菌菌株19A2的ΦEBHT的示例性结果。储存24小时后，噬菌体能够完全抑制细菌生长。在储存1周和8周后，用1％NFC中储存的噬菌体提供的生长抑制不那么明显，但在0.5％组合物和SM缓冲液中的噬菌体提供的生长抑制仍然明显。然而，不同的噬菌体耐受不同的干燥，并且一些噬菌体可能在该过程中失活。
实施例6-长期储存对细菌噬菌体活力的影响
以与实施例4中类似的方式在多孔板上测试长期储存的效果。
使用的GrowDex浓度为1.0％，0.5％和0％，并在SM缓冲液中进行稀释。组合物/基质按照以下形式储存：
-湿颗粒(96孔板中10μl，覆盖有箔/塑料罩)
-液体形式(储存在2毫升微量离心管中)
每个装置储存24小时，1周，2周，4周，8周或6个月。再次向其中加入细菌培养物，测量0-5小时的OD600。
所有测试的噬菌体在GrowDex中均保持良好的活力。在6个月的时间点，储存在板上的10μl液滴已经干燥，大肌病毒(fHoEco02和fRuSau02)失去了其感染性。然而，即使在这个时间点，储存在2ml管中的所有噬菌体都是完全感染性的。图6显示了fRuSau02在1％和0.5％NFC中和在SM缓冲液中储存24小时和8周的示例性结果。作为对照，显示了没有噬菌体的宿主细菌金黄色葡萄球菌13KP的生长。
实施例7-运输试验
如上所述制备的多孔板(1％GrowDex，4种测试噬菌体(2种对金黄色葡萄球菌具有特异性的噬菌体，2种对大肠杆菌具有特异性的噬菌体)通过邮件发送，使得运输花费约3天。7天后进行测量。在运输和储存期间，将多孔板部分储存在室温，+4℃和-15℃下。
如上所述测试噬菌体的活力。发现所有测试噬菌体都是完全感染性的。大肠杆菌123738(#5521)中的fHoEco02和金黄色葡萄球菌19A2(#6433)中的ΦEBHT的结果显示在图7中。
实施例8-商购水凝胶对细菌生长和细菌噬菌体活力的影响
以与实施例2中类似的方式在多孔板上测试三种不同水凝胶(
Figure BDA0002182564330000232
Intrasite和
Figure BDA0002182564330000231
)的效果。图8显示了金黄色葡萄球菌菌株13KP的示例性结果。GrowDex和Intrasite没有影响细菌生长，但Purilon显示出明显的生长抑制作用。用所有四种测试的细菌菌株获得了类似的结果。
以与实施例4中类似的方式，测试水凝胶对液体试验中细菌噬菌体活力的影响。将具有噬菌体和GrowDex的多孔板在4℃储存，并将具有噬菌体和其他两种凝胶(Intrasite和Purilon)的多孔板在室温下储存，如它们的制造商所推荐的。噬菌体活力测试前的储存时间为一周。图9显示了感染金黄色葡萄球菌菌株19A2的fRuSau02的示例性结果。储存1周后，在4℃下在NFC(1％和0.5％)中储存的噬菌体是完全感染性的并且完全抑制细菌生长。然而，在室温下储存在其他凝胶中的噬菌体已失去其感染性。该图显示Purilon凝胶对13KP的生长抑制，但这种抑制可能是由于凝胶本身而不是如上所述的噬菌体。
对本领域技术人员显而易见的是，随着科技的发展，基本理念可以以各种方式实施。因此，实施方式不限于上文所述实施例；相反，它们可以在权利要求的范围内变化。
上文所述的实施方式相互间可以任意组合使用。几个实施方式可组合在一起形成又一实施方式。本文公开的方法、产品、系统或用途可包含至少一个上文所述的实施方式。应当理解，上述益处和优点可以涉及一个实施方式，或者可以涉及多个实施方式。实施方式不限于解决任何或所有所述问题的那些实施方式或具有任何或所有所述益处和优点的那些实施方式。将进一步理解，“一个”项目的表述是指一个或多个所述项目。术语“包括”在本说明书中用于表示包括其后的特征或动作，而不排除一个或多个其他特征或动作的存在。

Claims (15)

1.一种包含细菌噬菌体和纳米原纤纤维素或其衍生物的湿态或干态组合物或基质。
2.如权利要求1所述的组合物或基质，其中，所述组合物或基质处于湿态并且为水凝胶或膜的形式。
3.如权利要求1或2所述的组合物或基质，其中，所述组合物或基质处于干态，任选地为膜的形式。
4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物或基质，其中，细菌噬菌体至少部分地作为以二维或三维排列在基质中的细菌噬菌体颗粒存在。
5.如权利要求1-4中任一项所述的组合物或基质，其特征在于，所述纳米原纤纤维素或其衍生物包含天然纳米原纤纤维素或者是天然纳米原纤纤维素。
6.一种用于储存、培养、运输和/或递送细菌噬菌体的装置，所述装置包括固体载体和布置在固体载体上包含纳米原纤纤维素或其衍生物的湿态或干态组合物或基质。
7.一种包含固体载体和布置在固体载体上的如权利要求1-5中任一项所述的组合物或基质的装置。
8.如权利要求6或7所述的装置，其中，所述固体载体是多孔板，所述组合物或基质布置在多孔板的一个或多个孔中。
9.如权利要求6或7所述的装置，其中，所述装置是医用多层产品，所述固体载体为层的形式，并且所述组合物或基质作为层布置在所述固体载体上或浸渍在所述固体载体中。
10.一种用于储存、培养、运输和/或递送细菌噬菌体的方法，其中，所述方法包括将细菌噬菌体与纳米原纤纤维素或其衍生物混合。
11.如权利要求10所述的方法，其中，所述方法还包括将组合物或基质干燥。
12.一种用于制备如权利要求1-5中任一项所述的组合物或基质或如权利要求7-9中任一项所述的装置的方法，其中，所述方法包括将细菌噬菌体与纳米原纤纤维素或其衍生物混合。
13.一种用于繁殖细菌噬菌体和/或测试细菌噬菌体感染原核细胞的能力的方法，所述方法包括：
将原核细胞添加到如权利要求1-5中任一项所述的组合物或基质中或者添加到如权利要求7-9中任一项所述的装置的组合物或基质中，和
在适于培养原核细胞的条件下维持组合物、基质或装置，从而使细菌噬菌体感染原核细胞。
14.包含纳米原纤纤维素或其衍生物的湿态或干态组合物或基质用于储存、培养、运输和/或递送细菌噬菌体的用途。
15.如权利要求1-5中任一项所述的组合物或基质或如权利要求7-9中任一项所述的装置的组合物或基质用于治疗的用途。
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