CN110862442A - 拟南芥myc3和myc4基因在调控种子大小中的应用 - Google Patents

拟南芥myc3和myc4基因在调控种子大小中的应用 Download PDF

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    • C12N15/8262—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield involving plant development
    • C12N15/8267—Seed dormancy, germination or sprouting

Abstract

本发明公开了拟南芥MYC3和/或MYC4基因在调控种子大小中的应用。本发明提供了如下1)‑3)中任一种物质在调控植物种子大小中的应用；1)蛋白MYC3和/或MYC4；2)编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子；3)含有编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌；本发明的实验证明了拟南芥MYC3和/或MYC4基因对种子大小具有重要调节作用，MYC3和/或MYC4基因功能缺失突变体产生大种子，而过表达MYC3和/或MYC4基因植株(35S:GFP‑MYC3或MYC4)可产生小种子，该基因可用于调控植物种子产量，对于植物育种具有重要启示意义。

Description

拟南芥MYC3和MYC4基因在调控种子大小中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及拟南芥MYC3和MYC4基因在调控种子大小中的应用。
背景技术
人类的主食主要来源于作物的种子，例如水稻与小麦。决定水稻和小麦的产量具有三要素：穗数、粒重和分蘖数。种子粒重与种子大小密切相关，因此种子大小是重要的农艺性状，也是决定植物种子产量的重要因子。随着当今人口的快速增长、人均耕地面积不断减少及全球气候变化对环境的影响，导致人类粮食面临短缺，如何增加人类粮食成为一个亟待解决的重大问题，因此挖掘影响植株种子大小的基因、开发高产基因资源和提高粮食产量对保证我国粮食安全具有十分重要的价值。
多数二倍体植物种子由种皮、胚乳和胚三部分组成。胚乳和胚由受精后的合子发育而来，而种皮由母体成分发育而来，因此最终种子大小由母体组分与合子组分共同协同调控。目前一些影响植物种子母体组分与合子组分的信号通路已被报道，它们包括：泛素化蛋白途径，例如AtDA1、AtSAMBA、OsGW2和OsWTG1基因等；G蛋白途径，例如OsRGB1、GS3、OsMADS1和OsRGA1基因等；MAPK途径(mitogen-activated protein kinase(MAPK)signaling)，例如OsMKKK10、OsMKK4、OsMAPK6和OsMKP1基因等；植物激素途径，例如OsGSK2、OsGSE5、OsBG1和OsARF4基因等；转录因子调节途径，例如OsGRF4、OsGW6、AtAP2和MtBS1基因等。然而种子发育过程复杂，最终决定种子大小的分子机理目前仍不清楚。进一步挖掘影响植物种子大小的基因，对人类进一步了解植物种子发育过程及提高作物产量具有重要的意义。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种蛋白MYC3和/或MYC4及其相关生物材料在调控植物种子大小中的应用。
本发明提供了如下1)-3)中任一种物质在调控植物种子大小中的应用；
1)蛋白MYC3和/或MYC4；
2)编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子；
3)含有编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌；
所述蛋白MYC3为如下(1)或(2)或(3)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)由序列表中序列2所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(3)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)或(2)衍生的蛋白质；
所述蛋白MYC4为如下(4)或(5)或(6)：
(4)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(5)由序列表中序列4所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(6)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(4)或(5)衍生的蛋白质。
上述中，一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。
上述标签具体如表1所示。
表1标签的序列
标签 残基 序列
Poly-Arg 5-6(通常为5个) RRRRR
Poly-His 2-10(通常为6个) HHHHHH
FLAG 8 DYKDDDDK
Strep-tag II 8 WSHPQFEK
c-myc 10 EQKLISEEDL
HA 9 YPYDVPDYA
上述应用中，本发明实施例中标记蛋白为GFP；(2)所示的蛋白MYC3的氨基酸序列为序列7；(5)所示的蛋白MYC4的氨基酸序列为序列8。
上述应用中，所述编码蛋白MYC3的核酸分子是如下1)-4)中任一种的DNA分子：
1)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；
2)编码区为序列表中序列5所示的DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
4)与1)或2)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
所述编码蛋白MYC4的核酸分子是如下5)-8)中任一种的DNA分子：
5)编码区为序列表中序列3所示的DNA分子；
6)编码区为序列表中序列6所示的DNA分子；
7)在严格条件下与5)或6)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
8)与5)或6)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。
上述严格条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。
上述应用中，所述调控植物种子大小为缩小植物种子大小。
上述物质在培育种子缩小的植物或小种子植物中的应用也是本发明保护的范围。
上述降低植物中蛋白MYC3和/或MYC4的含量和/或活性的物质，或，降低植物中编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的表达的物质，在培育种子大小增加的植物或大种子植物中的应用也是本发明保护的范围。
本发明另一个目的是提供一种培育种子大小缩小的转基因植物的方法。
本发明提供的方法，为如下1)或2)：
1)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中蛋白MYC3和/或MYC4的含量和/或活性，得到转基因植物；
2)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的表达，得到转基因植物；
所述转基因植物的种子小于所述目的植物；
所述蛋白MYC3为如下(1)或(2)或(3)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)由序列表中序列2所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(3)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)或(2)衍生的蛋白质；
所述蛋白MYC4为如下(4)或(5)或(6)：
(4)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(5)由序列表中序列4所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(6)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(4)或(5)衍生的蛋白质。
上述方法中，所述提高目的植物中蛋白MYC3和/或MYC4的含量和/或活性，或，所述提高目的植物中编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的表达，均是将所述编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子导入所述目的植物中。具体是通过含有编码蛋白MYC3的核酸分子的重组载体和/或含有编码蛋白MYC4的核酸分子的重组载体导入，
所述含有编码蛋白MYC3的核酸分子的重组载体为pMDC43-MYC3，该重组载体表达GFP-MYC3融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列见序列7，第1-238为GFP蛋白(载体骨架上)，第239-830为MYC3蛋白。
所述含有编码蛋白MYC4的核酸分子的重组载体为pMDC43-MYC4，该重组载体表达GFP-MYC4融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列见序列8，第1-238为GFP蛋白，第239-827为MYC4蛋白。
本发明第3个目的是提供一种培育种子大小增加的目的植物的方法。
本发明提供的方法，为如下3)或4)：
3)所述的方法包括如下步骤：降低受体植物中蛋白MYC3和/或MYC4的含量和/或活性，得到目的植物；
4)所述的方法包括如下步骤：降低受体植物中编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的表达，得到目的植物；
所述目的植物的种子大于所述受体植物；
所述蛋白MYC3为如下(1)或(2)或(3)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)由序列表中序列2所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(3)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)或(2)衍生的蛋白质；
所述蛋白MYC4为如下(4)或(5)或(6)：
(4)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(5)由序列表中序列4所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(6)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(4)或(5)衍生的蛋白质。
在本目的的方法中，受体植物为野生型拟南芥，目的植物为突变体myc3、myc4或myc3 myc4。
上述中，所述植物为双子叶植物或单子叶植物。
本发明的实验证明了拟南芥MYC3和MYC4基因对种子大小具有重要调节作用，MYC3基因体变体MYC3(GK_445B11)、MYC4基因突变体myc4(GK_491E10)和myc3myc4双突突变体产生大种子，而过表达MYC3基因植株(35S:GFP-MYC3)和过表达MYC4基因植株(35S:GFP-MYC4)可产生小种子，该基因可用于调控植物种子产量，对于植物育种具有重要启示意义。
附图说明
图1为T3代35S:GFP-MYC3植株中MYC3基因的表达量分析(n＝3)。通过qPCR法分析第9天T3代35S:GFP-MYC3植株中MYC3基因的表达量。ACTIN2基因用于数据校正。误差性代表标准误差。*代表与野生型植株值相比存在显著性差异。one-way ANOVA P-values用于显著性差异分析:**P<0.01。
图2为T3代35S:GFP-MYC4植株中MYC4基因的表达量分析(n＝3)。通过qPCR法分析第9天T3代35S:GFP-MYC4植株中MYC4基因的表达量。ACTIN2基因用于数据校正。误差性代表标准误差。*代表与野生型植株值相比存在显著性差异。one-way ANOVA P-values用于显著性差异分析:**P<0.01。
图3为myc3植株中MYC3基因的表达量分析(n＝3)。通过qPCR法分析第9天myc3植株中MYC3基因的表达量。ACTIN2基因用于数据校正。误差性代表标准误差。*代表与野生型植株值相比存在显著性差异。one-way ANOVA P-values用于显著性差异分析:**P<0.01。
图4为myc4植株中MYC4基因的表达量分析(n＝3)。通过qPCR法分析第9天myc4植株中MYC4基因的表达量。ACTIN2基因用于数据校正。误差性代表标准误差。*代表与野生型植株值相比存在显著性差异。one-way ANOVA P-values用于显著性差异分析:**P<0.01。
图5为野生型植株(Col-0)、myc3、myc4、myc3 myc4、35S:GFP-MYC3和35S:GFP-MYC4植株的种子照片，比例尺为0.5毫米。
图6为野生型植株(Col-0)、myc3、myc4、myc3 myc4、35S:GFP-MYC3和35S:GFP-MYC4植株的种子大小(n＝100)。误差性代表标准误差。*代表与野生型植株值相比存在显著性差异。one-way ANOVA P-values用于显著性差异分析:*P<0.05和**P<0.01。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中m/v如无特殊说明均为g:mL。
MYC3基因体变体myc3，购自NASC(Nottingham Arabidopsis Stock Centre)种子中心，产品目录号为GK_445B11；
MYC4基因体变体myc4，购自NASC(Nottingham Arabidopsis Stock Centre)种子中心，产品目录号为GK_491E10；
myc3 myc4双突突变体为myc3与myc4杂交而得。具体过程如下：以myc3突变体为母本，myc4突变体为父本，进行杂交获得F1代种子，F1代种子自交获得F2代种子，对F2代植株进行MYC3和MYC4基因型鉴定获得纯合myc3 myc4突变体。
野生型拟南芥Col-0记载在如下文献中：Li,N.,Liu,Z.,Wang,Z.,Ru,L.,Gonzalez,N.,Baekelandt,A.,Pauwels,L.,Goossens,A.,Xu,R.,Zhu,Z.,Inze,D.,Li,Y.(2018).STERILE APETALA modulates the stability of a repressor protein complexto control organ size in Arabidopsis thaliana.PLoS Genet.14,e1007218。
MYC3基因体变体myc3(GK_445B11)和野生型拟南芥Col-0的基因组中仅MYC3基因存在T-DNA插入突变，其余基因均相同。
MYC4基因体变体myc4(GK_491E10)和野生型拟南芥Col-0的基因组中仅MYC4基因存在T-DNA插入突变，其余基因均相同。
MYC3基因的核苷酸序列为序列表中序列1，其编码的蛋白MYC3的氨基酸序列为序列表中序列2。
MYC4基因的核苷酸序列为序列表中序列3，其编码的蛋白MYC4的氨基酸序列为序列表中序列4。
实施例1、拟南芥MYC3和MYC4基因在调控植物种子大小中的应用
一、过表达转MYC3基因拟南芥和过表达转MYC4基因拟南芥的制备
1、MYC3基因和MYC3基因的扩增
以1/2MS培养基上生长9天的野生型拟南芥Col-0幼苗为材料，用植物总RNA提取试剂盒(TIANGEN，DP432)提取幼苗中总RNA；以总RNA为模板，用lnRcute lncRNA cDNA第一链合成试剂盒(TIANGEN，KR202)合成cDNA序列；以cDNA作为模板，MYC3F与MYC3R序列为引物，进行PCR扩增，得到1823bp的PCR扩增产物MYC3。
经过测序，该PCR产物的核苷酸序列为序列5。
序列5中，第26-1804为MYC3基因，第1-25位为pMDC43质粒接头序列，第1805-1823位为pMDC43质粒接头序列。
以1/2MS培养基上生长9天的野生型拟南芥Col-0幼苗为材料，用植物总RNA提取试剂盒(TIANGEN，DP432)提取幼苗中总RNA；以总RNA为模板，用lnRcute lncRNA cDNA第一链合成试剂盒(TIANGEN，KR202)合成cDNA序列；以cDNA作为模板，MYC4F与MYC4R序列为引物，进行PCR扩增，得到1814bp的PCR扩增产物MYC4。
经过测序，该PCR产物的核苷酸序列为序列6。
序列6中，第26-1795为MYC4基因，第1-25位为pMDC43质粒接头序列，第1796-1814位为pMDC43质粒接头序列。
引物名称序列
MYC3-F：
GGATGAACTATACAAAGGCGCGCCAATGAACGGCACAACATCATCAATC
MYC3-R：
ATCGGGGAAATTCGAGCTC TCAATAGTTTTCTCCGACTTTC
MYC4-F：
GGATGAACTATACAAAGGCGCGCCAATGTCTCCGACGAATGTTCAAG
MYC4-R：
ATCGGGGAAATTCGAGCTC TCATGGACATTCTCCAACTTTC
2、重组质粒的构建
用Asc I和Sac I限制性内切酶酶切pMDC43质粒(科瑞思博，VT10269)，并胶回收酶切产物，得到线性化pMDC43质粒。
用同源重组试剂盒(北京博迈德基因技术有限公司，CL116-01)将上述1得到的MYC3和MYC4分别与线性化pMDC43质粒连接，得到重组载体pMDC43-MYC3和pMDC43-MYC4。
重组载体pMDC43-MYC3表达GFP-MYC3融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列见序列7，第1-238为GFP蛋白(载体骨架上)，第239-830为MYC3蛋白。
重组载体pMDC43-MYC4表达GFP-MYC4融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列见序列8，第1-238为GFP蛋白，第239-827为MYC4蛋白。
3、重组菌的制备
将上述制备的重组载体pMDC43-MYC3和pMDC43-MYC4分别转入GV3101农杆菌感受态中，用含50μg/mL卡那霉素、10μg/mL利福平和40μg/mL庆大霉素的固体LB培养基筛选，得到重组菌1和重组菌2。
重组菌1经过PCR鉴定，MYC3F和MYC3R扩增，得到1823bp的为阳性重组菌GV3101/pMDC43-MYC3。
重组菌2经过PCR鉴定，MYC4F和MYC4R扩增，得到1814bp的为阳性重组菌GV3101/pMDC43-MYC4。
4、35S:GFP-MYC3与35S:GFP-MYC4植株的创建流程。
将阳性重组菌GV3101/pMDC43-MYC3和GV3101/pMDC43-MYC4与转化液(0.22％(m/v)MS、0.5％(m/v)MES、5％(m/v)Sucrose、40ul/100ml Silwett L-77，水为溶剂)混合，使菌液浓度为OD600＝0.6。将含目的菌的转化液侵染生长5周的野生型拟南芥(Col-0)花序(Zhang,X.,Henriques,R.,Lin,S.S.,Niu,Q.W.,and Chua,N.H.(2006).Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana using the floral dipmethod.Nat.Protoc.1:641–646.)，待种子成熟后，收集T1代种子。
将转pMDC43-MYC3载体的T1代种子播种在含30μg/mL潮霉素的1/2MS培养基中筛选，阳性苗命名为T1代转MYC3拟南芥(35S:GFP-MYC3)；将转pMDC43-MYC4载体的T1代种子播种在含30μg/mL潮霉素的1/2MS培养基中筛选，阳性苗命名为T1代转MYC4拟南芥(35S:GFP-MYC4)。
培育各株系，得到T3代植株。
5、转基因植株中目的基因表达量分析
以1/2MS培养基上生长9天的T3代35S:GFP-MYC3、T3代35S:GFP-MYC4和Col-0幼苗为材料，用植物总RNA提取试剂盒(TIANGEN，DP432)提取幼苗中总RNA；以总RNA为模板，MYC3-qF/MYC3-qR、MYC4-qF/MYC4-qR和ACTIN2-qF/ACTIN2-qR序列为引物，用Quant one stepqRT-PCR试剂盒(TIANGEN,FP303)，对MYC3和MYC4基因的RNA表达量进行qPCR分析，实验重复3次。
引物：
MYC3-qF：GATGATTCAACAAGCTACGG
MYC3-qR：ATAGTTTTCTCCGACTTTCG
MYC4-qF：GATCTTATGATCCAACAAGC
MYC4-qR：ATGGACATTCTCCAACTTTC
ACTIN2-qF:GAAATCACAGCACTTGCACC
ACTIN2-qR:AAGCCTTTGATCTTGAGAGC
T3代35S:GFP-MYC3如图1所示，T3代35S:GFP-MYC3幼苗中MYC3的RNA表达量显著高于Col-0幼苗的相应值，以此说明T3代35S:GFP-MYC3植株为MYC3基因的过表达植株；
T3代35S:GFP-MYC4如图2所示，T3代35S:GFP-MYC4幼苗中MYC4的RNA表达量显著高于Col-0幼苗的相应值，以此说明T3代35S:GFP-MYC4植株为MYC4基因的过表达植株。
6、突变体中目的基因的表达量分析
以1/2MS培养基上生长9天的myc3、myc4、myc3myc4和Col-0幼苗为材料，用植物总RNA提取试剂盒(TIANGEN，DP432)提取幼苗中总RNA；以总RNA为模板，MYC3-qF/MYC3-qR、MYC4-qF/MYC4-qR和ACTIN2-qF/ACTIN2-qR序列为引物，用Quant one step qRT-PCR试剂盒(TIANGEN,FP303)，对MYC3和MYC4基因的RNA表达量进行qPCR分析，实验重复3次。
引物：
MYC3-qF：GATGATTCAACAAGCTACGG
MYC3-qR：ATAGTTTTCTCCGACTTTCG
MYC4-qF：GATCTTATGATCCAACAAGC
MYC4-qR：ATGGACATTCTCCAACTTTC
ACTIN2-qF:GAAATCACAGCACTTGCACC
ACTIN2-qR:AAGCCTTTGATCTTGAGAGC
myc3结果如图3所示，myc3幼苗中MYC3的RNA表达量几乎为零，以此说明myc3突变体为MYC3基因功能完全丧失突变体；
myc4结果如图4所示，myc4幼苗中MYC4的RNA表达量几乎为零，以此说明myc4突变体为MYC4基因功能完全丧失突变体。
myc3 myc4为MYC3基因和MYC4基因功能完全丧失突变体。
二、过表达转基因拟南芥和突变体的表型
将T3代35S:GFP-MYC3拟南芥、T3代35S:GFP-MYC4拟南芥、MYC3基因体变体myc3、MYC4基因体变体myc4、myc3 myc4双突突变体和野生型拟南芥Col-0种子播种。待种子成熟后，收集主茎上第3-7个角果的种子，混合。种子用放大2倍的体视镜(Leica,DM2500)拍照后，用Image J软件测量每粒种子面积(表面积，设置1116像素点为0.5厘米)。每株系的100个种子用于测量，实验重复3次，平均值用于比较分析。
种子用照相机拍照结果如图5所示，MYC3基因体变体myc3、MYC4基因体变体myc4、myc3 myc4双突突变体的种子大于野生型拟南芥Col-0的种子，T3代转MYC3拟南芥、T3代转MYC4拟南芥种子均小于野生型拟南芥Col-0的种子。
种子面积检测结果如图6所示，MYC3基因体变体myc3、MYC4基因体变体myc4、myc3myc4双突突变体的种子相对面积显著大于野生型拟南芥Col-0种子的相应值；T3代转MYC3拟南芥、T3代转MYC4拟南芥的种子相对面积均小于野生型拟南芥Col-0种子的相应值。
上述结果表明，过表达MYC4或MYC3基因可以降低种子面积，而MYC4和MYC3基因功能缺失可以增大种子面积。
SEQUENCE LISTING
<110>中国科学院遗传与发育生物学研究所
<120> 拟南芥MYC3和MYC4基因在调控种子大小中的应用
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1779
<212> DNA
<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana）
<400> 1
atgaacggca caacatcatc aatcaacttc ttgacctccg acgatgacgc gtcggcggcg 60
gctatggaag ctttcattgg aacaaaccac cactcatctc tctttcctcc accaccacaa 120
caaccacctc agcctcagtt caacgaagat actcttcaac aacgtctcca agctttaata 180
gaatccgccg gagaaaactg gacttacgct atcttctggc agatctcaca cgacttcgat 240
tcatccaccg gagataacac agtgatcctc ggctggggag atggttacta caaaggagag 300
gaagataaag agaagaagaa gaacaacacc aacacggcgg agcaagagca tcggaaaaga 360
gtaatacgtg agcttaactc gttaatctcc ggcggaattg gggtttccga tgaatcaaac 420
gatgaagaag taacagatac tgaatggttc ttcttagttt cgatgactca aagcttcgtt 480
aacggtgttg gtctccccgg agaatctttc ttaaactctc gtgtgatttg gttatccggg 540
tctggtgctt taaccgggtc gggttgtgaa agagcgggtc aaggtcagat ttacgggtta 600
aagacgatgg tgtgtatcgc gactcaaaac ggcgtcgttg agcttggttc gtcggaggtt 660
ataagtcaaa gctcagatct gatgcataaa gttaacaact tgtttaattt caacaacggt 720
ggtggaaaca atggtgttga agcttcttcg tggggtttta atctgaatcc agatcaagga 780
gagaatgatc cagctttgtg gattagtgaa ccgacgaaca ccggaatcga atctccggcg 840
agggttaata atggtaataa ctcgaattct aattctaagt ctgattctca tcaaatttct 900
aagcttgaga agaatgatat tagctctgta gagaatcaga atcgtcaaag ttcgtgtctt 960
gtcgagaaag atttgacctt tcaaggtggg ttgttgaaat ctaatgagac tttgagtttc 1020
tgtggtaatg agagtagtaa gaagagaact tcggtatcta aagggagtaa taatgatgaa 1080
gggatgcttt cgtttagtac tgtggttaga tcagctgcga atgattcgga tcattctgat 1140
cttgaagcat ctgttgttaa ggaagcgatt gttgttgagc caccggagaa gaagccgagg 1200
aaacggggga ggaaaccggc gaatgggaga gaagagccgt tgaatcatgt tgaagcagag 1260
aggcagagaa gagagaagtt aaaccagaga ttctactctt tgagagctgt tgttcctaac 1320
gtttcgaaga tggataaagc ttcgcttctc ggagacgcga tttcgtatat caatgagctt 1380
aagtcgaagc tgcagcaagc ggagtctgat aaagaggaga ttcagaagaa gctagatggg 1440
atgagtaagg aagggaataa tgggaaaggt tgcgggtcaa gggcaaaaga acggaaaagt 1500
tcgaatcaag attctacggc gagttctata gaaatggaga ttgatgttaa gatcataggt 1560
tgggatgtga tgatacgtgt acaatgcggc aagaaagatc atcccggtgc taggttcatg 1620
gaagcactta aggaattgga tttggaagtg aatcatgcga gtttatccgt tgtgaatgat 1680
ttgatgattc aacaagctac ggtgaagatg gggagccaat ttttcaatca tgaccagctc 1740
aaagttgctt tgatgacgaa agtcggagaa aactattga 1779
<210> 2
<211> 592
<212> PRT
<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana）
<400> 2
Met Asn Gly Thr Thr Ser Ser Ile Asn Phe Leu Thr Ser Asp Asp Asp
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ala Ala Met Glu Ala Phe Ile Gly Thr Asn His His Ser
20 25 30
Ser Leu Phe Pro Pro Pro Pro Gln Gln Pro Pro Gln Pro Gln Phe Asn
35 40 45
Glu Asp Thr Leu Gln Gln Arg Leu Gln Ala Leu Ile Glu Ser Ala Gly
50 55 60
Glu Asn Trp Thr Tyr Ala Ile Phe Trp Gln Ile Ser His Asp Phe Asp
65 70 75 80
Ser Ser Thr Gly Asp Asn Thr Val Ile Leu Gly Trp Gly Asp Gly Tyr
85 90 95
Tyr Lys Gly Glu Glu Asp Lys Glu Lys Lys Lys Asn Asn Thr Asn Thr
100 105 110
Ala Glu Gln Glu His Arg Lys Arg Val Ile Arg Glu Leu Asn Ser Leu
115 120 125
Ile Ser Gly Gly Ile Gly Val Ser Asp Glu Ser Asn Asp Glu Glu Val
130 135 140
Thr Asp Thr Glu Trp Phe Phe Leu Val Ser Met Thr Gln Ser Phe Val
145 150 155 160
Asn Gly Val Gly Leu Pro Gly Glu Ser Phe Leu Asn Ser Arg Val Ile
165 170 175
Trp Leu Ser Gly Ser Gly Ala Leu Thr Gly Ser Gly Cys Glu Arg Ala
180 185 190
Gly Gln Gly Gln Ile Tyr Gly Leu Lys Thr Met Val Cys Ile Ala Thr
195 200 205
Gln Asn Gly Val Val Glu Leu Gly Ser Ser Glu Val Ile Ser Gln Ser
210 215 220
Ser Asp Leu Met His Lys Val Asn Asn Leu Phe Asn Phe Asn Asn Gly
225 230 235 240
Gly Gly Asn Asn Gly Val Glu Ala Ser Ser Trp Gly Phe Asn Leu Asn
245 250 255
Pro Asp Gln Gly Glu Asn Asp Pro Ala Leu Trp Ile Ser Glu Pro Thr
260 265 270
Asn Thr Gly Ile Glu Ser Pro Ala Arg Val Asn Asn Gly Asn Asn Ser
275 280 285
Asn Ser Asn Ser Lys Ser Asp Ser His Gln Ile Ser Lys Leu Glu Lys
290 295 300
Asn Asp Ile Ser Ser Val Glu Asn Gln Asn Arg Gln Ser Ser Cys Leu
305 310 315 320
Val Glu Lys Asp Leu Thr Phe Gln Gly Gly Leu Leu Lys Ser Asn Glu
325 330 335
Thr Leu Ser Phe Cys Gly Asn Glu Ser Ser Lys Lys Arg Thr Ser Val
340 345 350
Ser Lys Gly Ser Asn Asn Asp Glu Gly Met Leu Ser Phe Ser Thr Val
355 360 365
Val Arg Ser Ala Ala Asn Asp Ser Asp His Ser Asp Leu Glu Ala Ser
370 375 380
Val Val Lys Glu Ala Ile Val Val Glu Pro Pro Glu Lys Lys Pro Arg
385 390 395 400
Lys Arg Gly Arg Lys Pro Ala Asn Gly Arg Glu Glu Pro Leu Asn His
405 410 415
Val Glu Ala Glu Arg Gln Arg Arg Glu Lys Leu Asn Gln Arg Phe Tyr
420 425 430
Ser Leu Arg Ala Val Val Pro Asn Val Ser Lys Met Asp Lys Ala Ser
435 440 445
Leu Leu Gly Asp Ala Ile Ser Tyr Ile Asn Glu Leu Lys Ser Lys Leu
450 455 460
Gln Gln Ala Glu Ser Asp Lys Glu Glu Ile Gln Lys Lys Leu Asp Gly
465 470 475 480
Met Ser Lys Glu Gly Asn Asn Gly Lys Gly Cys Gly Ser Arg Ala Lys
485 490 495
Glu Arg Lys Ser Ser Asn Gln Asp Ser Thr Ala Ser Ser Ile Glu Met
500 505 510
Glu Ile Asp Val Lys Ile Ile Gly Trp Asp Val Met Ile Arg Val Gln
515 520 525
Cys Gly Lys Lys Asp His Pro Gly Ala Arg Phe Met Glu Ala Leu Lys
530 535 540
Glu Leu Asp Leu Glu Val Asn His Ala Ser Leu Ser Val Val Asn Asp
545 550 555 560
Leu Met Ile Gln Gln Ala Thr Val Lys Met Gly Ser Gln Phe Phe Asn
565 570 575
His Asp Gln Leu Lys Val Ala Leu Met Thr Lys Val Gly Glu Asn Tyr
580 585 590
<210> 3
<211> 1770
<212> DNA
<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana）
<400> 3
atgtctccga cgaatgttca agtaaccgat taccatctca accaatcaaa aacggataca 60
acaaatctct ggtcaaccga cgacgatgca tcggtaatgg aagctttcat cggcggcggc 120
tccgatcatt cttctctttt tcctccactt cctcctcctc ctcttcctca agtcaacgaa 180
gataatctcc agcaacgtct ccaagcttta atcgaaggag caaacgagaa ctggacttac 240
gccgtgttct ggcaatcatc tcacggtttc gccggagaag acaacaacaa caacaacaca 300
gtgttgttag gttggggaga tggttattac aaaggagaag aagagaagtc tagaaagaag 360
aaatcaaatc cagctagtgc agctgaacaa gagcatcgta agagagtgat tagagagctc 420
aactctttaa tctccggtgg tgtaggagga ggagatgaag ctggagatga agaagttaca 480
gatactgaat ggttcttctt agtttcaatg acacagagct ttgtcaaggg tactggttta 540
cctggtcaag ctttctcaaa ttcagacacg atttggttat ctggttctaa tgctttagct 600
ggatcaagtt gtgagagagc tcgtcaaggt cagatttatg ggttacaaac aatggtgtgt 660
gtagcgacag agaatggtgt cgttgagctt ggttcgtcgg agattattca tcaaagttca 720
gatcttgttg ataaagttga cacctttttc aattttaaca atggtggtgg tgaatttggt 780
tcttgggcgt ttaatttgaa tccagatcaa ggagagaatg atccaggttt gtggattagt 840
gaacctaatg gtgttgactc tggtcttgta gctgctccgg tgatgaataa tggtggaaat 900
gactcaactt ctaattctga ttctcaacca atttctaagc tttgtaatgg aagctctgtt 960
gaaaacccta accctaaagt tctgaaatct tgtgaaatgg tgaatttcaa gaatgggatt 1020
gagaatggtc aagaagaaga tagtagtaat aagaagagat caccggtttc gaataatgaa 1080
gaagggatgc tttcttttac ctctgttctt ccatgtgact cgaatcactc tgatcttgaa 1140
gcttcagtgg ctaaagaagc tgagagtaac agagttgtgg ttgaaccgga gaagaaaccg 1200
aggaaacgag ggagaaaacc ggcgaatgga agagaagagc ctttgaatca tgtagaggca 1260
gagagacaga gaagagagaa gttgaatcag agattctatt ctttaagagc tgtggttcct 1320
aatgtgtcta agatggataa agcttctcta ttaggagatg ctatttcgta tatcagtgag 1380
cttaagtcta agttgcaaaa ggctgaatct gataaagaag agttgcagaa gcagattgat 1440
gtgatgaata aagaagcggg aaatgcgaaa agttcggtaa aagatcgaaa atgtttgaat 1500
caagaatcga gtgtgttgat agagatggag gttgatgtga agattattgg ttgggatgca 1560
atgataagga ttcaatgtag taagaggaat catcctggtg ctaagttcat ggaagcactt 1620
aaggagttgg atttggaagt gaatcatgcg agtttatcgg tagtgaatga tcttatgatc 1680
caacaagcga ctgtgaaaat ggggaatcag tttttcacgc aagatcaact caaggttgct 1740
ctaacggaga aagttggaga atgtccatga 1770
<210> 4
<211> 589
<212> PRT
<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana）
<400> 4
Met Ser Pro Thr Asn Val Gln Val Thr Asp Tyr His Leu Asn Gln Ser
1 5 10 15
Lys Thr Asp Thr Thr Asn Leu Trp Ser Thr Asp Asp Asp Ala Ser Val
20 25 30
Met Glu Ala Phe Ile Gly Gly Gly Ser Asp His Ser Ser Leu Phe Pro
35 40 45
Pro Leu Pro Pro Pro Pro Leu Pro Gln Val Asn Glu Asp Asn Leu Gln
50 55 60
Gln Arg Leu Gln Ala Leu Ile Glu Gly Ala Asn Glu Asn Trp Thr Tyr
65 70 75 80
Ala Val Phe Trp Gln Ser Ser His Gly Phe Ala Gly Glu Asp Asn Asn
85 90 95
Asn Asn Asn Thr Val Leu Leu Gly Trp Gly Asp Gly Tyr Tyr Lys Gly
100 105 110
Glu Glu Glu Lys Ser Arg Lys Lys Lys Ser Asn Pro Ala Ser Ala Ala
115 120 125
Glu Gln Glu His Arg Lys Arg Val Ile Arg Glu Leu Asn Ser Leu Ile
130 135 140
Ser Gly Gly Val Gly Gly Gly Asp Glu Ala Gly Asp Glu Glu Val Thr
145 150 155 160
Asp Thr Glu Trp Phe Phe Leu Val Ser Met Thr Gln Ser Phe Val Lys
165 170 175
Gly Thr Gly Leu Pro Gly Gln Ala Phe Ser Asn Ser Asp Thr Ile Trp
180 185 190
Leu Ser Gly Ser Asn Ala Leu Ala Gly Ser Ser Cys Glu Arg Ala Arg
195 200 205
Gln Gly Gln Ile Tyr Gly Leu Gln Thr Met Val Cys Val Ala Thr Glu
210 215 220
Asn Gly Val Val Glu Leu Gly Ser Ser Glu Ile Ile His Gln Ser Ser
225 230 235 240
Asp Leu Val Asp Lys Val Asp Thr Phe Phe Asn Phe Asn Asn Gly Gly
245 250 255
Gly Glu Phe Gly Ser Trp Ala Phe Asn Leu Asn Pro Asp Gln Gly Glu
260 265 270
Asn Asp Pro Gly Leu Trp Ile Ser Glu Pro Asn Gly Val Asp Ser Gly
275 280 285
Leu Val Ala Ala Pro Val Met Asn Asn Gly Gly Asn Asp Ser Thr Ser
290 295 300
Asn Ser Asp Ser Gln Pro Ile Ser Lys Leu Cys Asn Gly Ser Ser Val
305 310 315 320
Glu Asn Pro Asn Pro Lys Val Leu Lys Ser Cys Glu Met Val Asn Phe
325 330 335
Lys Asn Gly Ile Glu Asn Gly Gln Glu Glu Asp Ser Ser Asn Lys Lys
340 345 350
Arg Ser Pro Val Ser Asn Asn Glu Glu Gly Met Leu Ser Phe Thr Ser
355 360 365
Val Leu Pro Cys Asp Ser Asn His Ser Asp Leu Glu Ala Ser Val Ala
370 375 380
Lys Glu Ala Glu Ser Asn Arg Val Val Val Glu Pro Glu Lys Lys Pro
385 390 395 400
Arg Lys Arg Gly Arg Lys Pro Ala Asn Gly Arg Glu Glu Pro Leu Asn
405 410 415
His Val Glu Ala Glu Arg Gln Arg Arg Glu Lys Leu Asn Gln Arg Phe
420 425 430
Tyr Ser Leu Arg Ala Val Val Pro Asn Val Ser Lys Met Asp Lys Ala
435 440 445
Ser Leu Leu Gly Asp Ala Ile Ser Tyr Ile Ser Glu Leu Lys Ser Lys
450 455 460
Leu Gln Lys Ala Glu Ser Asp Lys Glu Glu Leu Gln Lys Gln Ile Asp
465 470 475 480
Val Met Asn Lys Glu Ala Gly Asn Ala Lys Ser Ser Val Lys Asp Arg
485 490 495
Lys Cys Leu Asn Gln Glu Ser Ser Val Leu Ile Glu Met Glu Val Asp
500 505 510
Val Lys Ile Ile Gly Trp Asp Ala Met Ile Arg Ile Gln Cys Ser Lys
515 520 525
Arg Asn His Pro Gly Ala Lys Phe Met Glu Ala Leu Lys Glu Leu Asp
530 535 540
Leu Glu Val Asn His Ala Ser Leu Ser Val Val Asn Asp Leu Met Ile
545 550 555 560
Gln Gln Ala Thr Val Lys Met Gly Asn Gln Phe Phe Thr Gln Asp Gln
565 570 575
Leu Lys Val Ala Leu Thr Glu Lys Val Gly Glu Cys Pro
580 585
<210> 5
<211> 1823
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 5
ggatgaacta tacaaaggcg cgccaatgaa cggcacaaca tcatcaatca acttcttgac 60
ctccgacgat gacgcgtcgg cggcggctat ggaagctttc attggaacaa accaccactc 120
atctctcttt cctccaccac cacaacaacc acctcagcct cagttcaacg aagatactct 180
tcaacaacgt ctccaagctt taatagaatc cgccggagaa aactggactt acgctatctt 240
ctggcagatc tcacacgact tcgattcatc caccggagat aacacagtga tcctcggctg 300
gggagatggt tactacaaag gagaggaaga taaagagaag aagaagaaca acaccaacac 360
ggcggagcaa gagcatcgga aaagagtaat acgtgagctt aactcgttaa tctccggcgg 420
aattggggtt tccgatgaat caaacgatga agaagtaaca gatactgaat ggttcttctt 480
agtttcgatg actcaaagct tcgttaacgg tgttggtctc cccggagaat ctttcttaaa 540
ctctcgtgtg atttggttat ccgggtctgg tgctttaacc gggtcgggtt gtgaaagagc 600
gggtcaaggt cagatttacg ggttaaagac gatggtgtgt atcgcgactc aaaacggcgt 660
cgttgagctt ggttcgtcgg aggttataag tcaaagctca gatctgatgc ataaagttaa 720
caacttgttt aatttcaaca acggtggtgg aaacaatggt gttgaagctt cttcgtgggg 780
ttttaatctg aatccagatc aaggagagaa tgatccagct ttgtggatta gtgaaccgac 840
gaacaccgga atcgaatctc cggcgagggt taataatggt aataactcga attctaattc 900
taagtctgat tctcatcaaa tttctaagct tgagaagaat gatattagct ctgtagagaa 960
tcagaatcgt caaagttcgt gtcttgtcga gaaagatttg acctttcaag gtgggttgtt 1020
gaaatctaat gagactttga gtttctgtgg taatgagagt agtaagaaga gaacttcggt 1080
atctaaaggg agtaataatg atgaagggat gctttcgttt agtactgtgg ttagatcagc 1140
tgcgaatgat tcggatcatt ctgatcttga agcatctgtt gttaaggaag cgattgttgt 1200
tgagccaccg gagaagaagc cgaggaaacg ggggaggaaa ccggcgaatg ggagagaaga 1260
gccgttgaat catgttgaag cagagaggca gagaagagag aagttaaacc agagattcta 1320
ctctttgaga gctgttgttc ctaacgtttc gaagatggat aaagcttcgc ttctcggaga 1380
cgcgatttcg tatatcaatg agcttaagtc gaagctgcag caagcggagt ctgataaaga 1440
ggagattcag aagaagctag atgggatgag taaggaaggg aataatggga aaggttgcgg 1500
gtcaagggca aaagaacgga aaagttcgaa tcaagattct acggcgagtt ctatagaaat 1560
ggagattgat gttaagatca taggttggga tgtgatgata cgtgtacaat gcggcaagaa 1620
agatcatccc ggtgctaggt tcatggaagc acttaaggaa ttggatttgg aagtgaatca 1680
tgcgagttta tccgttgtga atgatttgat gattcaacaa gctacggtga agatggggag 1740
ccaatttttc aatcatgacc agctcaaagt tgctttgatg acgaaagtcg gagaaaacta 1800
ttgagagctc gaatttcccc gat 1823
<210> 6
<211> 1814
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 6
ggatgaacta tacaaaggcg cgccaatgtc tccgacgaat gttcaagtaa ccgattacca 60
tctcaaccaa tcaaaaacgg atacaacaaa tctctggtca accgacgacg atgcatcggt 120
aatggaagct ttcatcggcg gcggctccga tcattcttct ctttttcctc cacttcctcc 180
tcctcctctt cctcaagtca acgaagataa tctccagcaa cgtctccaag ctttaatcga 240
aggagcaaac gagaactgga cttacgccgt gttctggcaa tcatctcacg gtttcgccgg 300
agaagacaac aacaacaaca acacagtgtt gttaggttgg ggagatggtt attacaaagg 360
agaagaagag aagtctagaa agaagaaatc aaatccagct agtgcagctg aacaagagca 420
tcgtaagaga gtgattagag agctcaactc tttaatctcc ggtggtgtag gaggaggaga 480
tgaagctgga gatgaagaag ttacagatac tgaatggttc ttcttagttt caatgacaca 540
gagctttgtc aagggtactg gtttacctgg tcaagctttc tcaaattcag acacgatttg 600
gttatctggt tctaatgctt tagctggatc aagttgtgag agagctcgtc aaggtcagat 660
ttatgggtta caaacaatgg tgtgtgtagc gacagagaat ggtgtcgttg agcttggttc 720
gtcggagatt attcatcaaa gttcagatct tgttgataaa gttgacacct ttttcaattt 780
taacaatggt ggtggtgaat ttggttcttg ggcgtttaat ttgaatccag atcaaggaga 840
gaatgatcca ggtttgtgga ttagtgaacc taatggtgtt gactctggtc ttgtagctgc 900
tccggtgatg aataatggtg gaaatgactc aacttctaat tctgattctc aaccaatttc 960
taagctttgt aatggaagct ctgttgaaaa ccctaaccct aaagttctga aatcttgtga 1020
aatggtgaat ttcaagaatg ggattgagaa tggtcaagaa gaagatagta gtaataagaa 1080
gagatcaccg gtttcgaata atgaagaagg gatgctttct tttacctctg ttcttccatg 1140
tgactcgaat cactctgatc ttgaagcttc agtggctaaa gaagctgaga gtaacagagt 1200
tgtggttgaa ccggagaaga aaccgaggaa acgagggaga aaaccggcga atggaagaga 1260
agagcctttg aatcatgtag aggcagagag acagagaaga gagaagttga atcagagatt 1320
ctattcttta agagctgtgg ttcctaatgt gtctaagatg gataaagctt ctctattagg 1380
agatgctatt tcgtatatca gtgagcttaa gtctaagttg caaaaggctg aatctgataa 1440
agaagagttg cagaagcaga ttgatgtgat gaataaagaa gcgggaaatg cgaaaagttc 1500
ggtaaaagat cgaaaatgtt tgaatcaaga atcgagtgtg ttgatagaga tggaggttga 1560
tgtgaagatt attggttggg atgcaatgat aaggattcaa tgtagtaaga ggaatcatcc 1620
tggtgctaag ttcatggaag cacttaagga gttggatttg gaagtgaatc atgcgagttt 1680
atcggtagtg aatgatctta tgatccaaca agcgactgtg aaaatgggga atcagttttt 1740
cacgcaagat caactcaagg ttgctctaac ggagaaagtt ggagaatgtc catgagagct 1800
cgaatttccc cgat 1814
<210> 7
<211> 830
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 7
Met Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu Val
1 5 10 15
Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu
20 25 30
Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys
35 40 45
Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu
50 55 60
Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Arg
65 70 75 80
His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg
85 90 95
Thr Ile Ser Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val
100 105 110
Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile
115 120 125
Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn
130 135 140
Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Thr Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly
145 150 155 160
Ile Lys Ala Asn Phe Lys Thr Arg His Asn Ile Glu Asp Gly Gly Val
165 170 175
Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro
180 185 190
Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser
195 200 205
Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe Val
210 215 220
Thr Ala Ala Gly Ile Thr His Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys Met Asn
225 230 235 240
Gly Thr Thr Ser Ser Ile Asn Phe Leu Thr Ser Asp Asp Asp Ala Ser
245 250 255
Ala Ala Ala Met Glu Ala Phe Ile Gly Thr Asn His His Ser Ser Leu
260 265 270
Phe Pro Pro Pro Pro Gln Gln Pro Pro Gln Pro Gln Phe Asn Glu Asp
275 280 285
Thr Leu Gln Gln Arg Leu Gln Ala Leu Ile Glu Ser Ala Gly Glu Asn
290 295 300
Trp Thr Tyr Ala Ile Phe Trp Gln Ile Ser His Asp Phe Asp Ser Ser
305 310 315 320
Thr Gly Asp Asn Thr Val Ile Leu Gly Trp Gly Asp Gly Tyr Tyr Lys
325 330 335
Gly Glu Glu Asp Lys Glu Lys Lys Lys Asn Asn Thr Asn Thr Ala Glu
340 345 350
Gln Glu His Arg Lys Arg Val Ile Arg Glu Leu Asn Ser Leu Ile Ser
355 360 365
Gly Gly Ile Gly Val Ser Asp Glu Ser Asn Asp Glu Glu Val Thr Asp
370 375 380
Thr Glu Trp Phe Phe Leu Val Ser Met Thr Gln Ser Phe Val Asn Gly
385 390 395 400
Val Gly Leu Pro Gly Glu Ser Phe Leu Asn Ser Arg Val Ile Trp Leu
405 410 415
Ser Gly Ser Gly Ala Leu Thr Gly Ser Gly Cys Glu Arg Ala Gly Gln
420 425 430
Gly Gln Ile Tyr Gly Leu Lys Thr Met Val Cys Ile Ala Thr Gln Asn
435 440 445
Gly Val Val Glu Leu Gly Ser Ser Glu Val Ile Ser Gln Ser Ser Asp
450 455 460
Leu Met His Lys Val Asn Asn Leu Phe Asn Phe Asn Asn Gly Gly Gly
465 470 475 480
Asn Asn Gly Val Glu Ala Ser Ser Trp Gly Phe Asn Leu Asn Pro Asp
485 490 495
Gln Gly Glu Asn Asp Pro Ala Leu Trp Ile Ser Glu Pro Thr Asn Thr
500 505 510
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530 535 540
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545 550 555 560
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565 570 575
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580 585 590
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610 615 620
Lys Glu Ala Ile Val Val Glu Pro Pro Glu Lys Lys Pro Arg Lys Arg
625 630 635 640
Gly Arg Lys Pro Ala Asn Gly Arg Glu Glu Pro Leu Asn His Val Glu
645 650 655
Ala Glu Arg Gln Arg Arg Glu Lys Leu Asn Gln Arg Phe Tyr Ser Leu
660 665 670
Arg Ala Val Val Pro Asn Val Ser Lys Met Asp Lys Ala Ser Leu Leu
675 680 685
Gly Asp Ala Ile Ser Tyr Ile Asn Glu Leu Lys Ser Lys Leu Gln Gln
690 695 700
Ala Glu Ser Asp Lys Glu Glu Ile Gln Lys Lys Leu Asp Gly Met Ser
705 710 715 720
Lys Glu Gly Asn Asn Gly Lys Gly Cys Gly Ser Arg Ala Lys Glu Arg
725 730 735
Lys Ser Ser Asn Gln Asp Ser Thr Ala Ser Ser Ile Glu Met Glu Ile
740 745 750
Asp Val Lys Ile Ile Gly Trp Asp Val Met Ile Arg Val Gln Cys Gly
755 760 765
Lys Lys Asp His Pro Gly Ala Arg Phe Met Glu Ala Leu Lys Glu Leu
770 775 780
Asp Leu Glu Val Asn His Ala Ser Leu Ser Val Val Asn Asp Leu Met
785 790 795 800
Ile Gln Gln Ala Thr Val Lys Met Gly Ser Gln Phe Phe Asn His Asp
805 810 815
Gln Leu Lys Val Ala Leu Met Thr Lys Val Gly Glu Asn Tyr
820 825 830
<210> 8
<211> 827
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 8
Met Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu Val
1 5 10 15
Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu
20 25 30
Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys
35 40 45
Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu
50 55 60
Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Arg
65 70 75 80
His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg
85 90 95
Thr Ile Ser Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val
100 105 110
Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile
115 120 125
Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn
130 135 140
Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Thr Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly
145 150 155 160
Ile Lys Ala Asn Phe Lys Thr Arg His Asn Ile Glu Asp Gly Gly Val
165 170 175
Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro
180 185 190
Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser
195 200 205
Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe Val
210 215 220
Thr Ala Ala Gly Ile Thr His Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys Met Ser
225 230 235 240
Pro Thr Asn Val Gln Val Thr Asp Tyr His Leu Asn Gln Ser Lys Thr
245 250 255
Asp Thr Thr Asn Leu Trp Ser Thr Asp Asp Asp Ala Ser Val Met Glu
260 265 270
Ala Phe Ile Gly Gly Gly Ser Asp His Ser Ser Leu Phe Pro Pro Leu
275 280 285
Pro Pro Pro Pro Leu Pro Gln Val Asn Glu Asp Asn Leu Gln Gln Arg
290 295 300
Leu Gln Ala Leu Ile Glu Gly Ala Asn Glu Asn Trp Thr Tyr Ala Val
305 310 315 320
Phe Trp Gln Ser Ser His Gly Phe Ala Gly Glu Asp Asn Asn Asn Asn
325 330 335
Asn Thr Val Leu Leu Gly Trp Gly Asp Gly Tyr Tyr Lys Gly Glu Glu
340 345 350
Glu Lys Ser Arg Lys Lys Lys Ser Asn Pro Ala Ser Ala Ala Glu Gln
355 360 365
Glu His Arg Lys Arg Val Ile Arg Glu Leu Asn Ser Leu Ile Ser Gly
370 375 380
Gly Val Gly Gly Gly Asp Glu Ala Gly Asp Glu Glu Val Thr Asp Thr
385 390 395 400
Glu Trp Phe Phe Leu Val Ser Met Thr Gln Ser Phe Val Lys Gly Thr
405 410 415
Gly Leu Pro Gly Gln Ala Phe Ser Asn Ser Asp Thr Ile Trp Leu Ser
420 425 430
Gly Ser Asn Ala Leu Ala Gly Ser Ser Cys Glu Arg Ala Arg Gln Gly
435 440 445
Gln Ile Tyr Gly Leu Gln Thr Met Val Cys Val Ala Thr Glu Asn Gly
450 455 460
Val Val Glu Leu Gly Ser Ser Glu Ile Ile His Gln Ser Ser Asp Leu
465 470 475 480
Val Asp Lys Val Asp Thr Phe Phe Asn Phe Asn Asn Gly Gly Gly Glu
485 490 495
Phe Gly Ser Trp Ala Phe Asn Leu Asn Pro Asp Gln Gly Glu Asn Asp
500 505 510
Pro Gly Leu Trp Ile Ser Glu Pro Asn Gly Val Asp Ser Gly Leu Val
515 520 525
Ala Ala Pro Val Met Asn Asn Gly Gly Asn Asp Ser Thr Ser Asn Ser
530 535 540
Asp Ser Gln Pro Ile Ser Lys Leu Cys Asn Gly Ser Ser Val Glu Asn
545 550 555 560
Pro Asn Pro Lys Val Leu Lys Ser Cys Glu Met Val Asn Phe Lys Asn
565 570 575
Gly Ile Glu Asn Gly Gln Glu Glu Asp Ser Ser Asn Lys Lys Arg Ser
580 585 590
Pro Val Ser Asn Asn Glu Glu Gly Met Leu Ser Phe Thr Ser Val Leu
595 600 605
Pro Cys Asp Ser Asn His Ser Asp Leu Glu Ala Ser Val Ala Lys Glu
610 615 620
Ala Glu Ser Asn Arg Val Val Val Glu Pro Glu Lys Lys Pro Arg Lys
625 630 635 640
Arg Gly Arg Lys Pro Ala Asn Gly Arg Glu Glu Pro Leu Asn His Val
645 650 655
Glu Ala Glu Arg Gln Arg Arg Glu Lys Leu Asn Gln Arg Phe Tyr Ser
660 665 670
Leu Arg Ala Val Val Pro Asn Val Ser Lys Met Asp Lys Ala Ser Leu
675 680 685
Leu Gly Asp Ala Ile Ser Tyr Ile Ser Glu Leu Lys Ser Lys Leu Gln
690 695 700
Lys Ala Glu Ser Asp Lys Glu Glu Leu Gln Lys Gln Ile Asp Val Met
705 710 715 720
Asn Lys Glu Ala Gly Asn Ala Lys Ser Ser Val Lys Asp Arg Lys Cys
725 730 735
Leu Asn Gln Glu Ser Ser Val Leu Ile Glu Met Glu Val Asp Val Lys
740 745 750
Ile Ile Gly Trp Asp Ala Met Ile Arg Ile Gln Cys Ser Lys Arg Asn
755 760 765
His Pro Gly Ala Lys Phe Met Glu Ala Leu Lys Glu Leu Asp Leu Glu
770 775 780
Val Asn His Ala Ser Leu Ser Val Val Asn Asp Leu Met Ile Gln Gln
785 790 795 800
Ala Thr Val Lys Met Gly Asn Gln Phe Phe Thr Gln Asp Gln Leu Lys
805 810 815
Val Ala Leu Thr Glu Lys Val Gly Glu Cys Pro
820 825

Claims (10)

1.如下1)-3)中任一种物质在调控植物种子大小中的应用；
1)蛋白MYC3和/或MYC4；
2)编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子；
3)含有编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌；
所述蛋白MYC3为如下(1)或(2)或(3)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)由序列表中序列2所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(3)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)或(2)衍生的蛋白质；
所述蛋白MYC4为如下(4)或(5)或(6)：
(4)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(5)由序列表中序列4所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(6)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(4)或(5)衍生的蛋白质。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：
(2)所示的蛋白MYC3的氨基酸序列为序列7；
(5)所示的蛋白MYC4的氨基酸序列为序列8。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：
所述编码蛋白MYC3的核酸分子是如下1)-4)中任一种的DNA分子：
1)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；
2)编码区为序列表中序列5所示的DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
4)与1)或2)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
所述编码蛋白MYC4的核酸分子是如下5)-8)中任一种的DNA分子：
5)编码区为序列表中序列3所示的DNA分子；
6)编码区为序列表中序列6所示的DNA分子；
7)在严格条件下与5)或6)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；
8)与5)或6)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。
4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于：所述调控植物种子大小为缩小植物种子大小。
5.权利要求1-4任一项中的所述物质在培育种子缩小的植物或小种子植物中的应用。
6.降低植物中蛋白MYC3和/或MYC4的含量和/或活性的物质，或，降低植物中编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的表达的物质，在培育种子大小增加的植物或大种子植物中的应用。
7.一种培育种子大小缩小的转基因植物的方法，为如下1)或2)：
1)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中蛋白MYC3和/或MYC4的含量和/或活性，得到转基因植物；
2)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的表达，得到转基因植物；
所述转基因植物的种子小于所述目的植物；
所述蛋白MYC3为如下(1)或(2)或(3)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)由序列表中序列2所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(3)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)或(2)衍生的蛋白质；
所述蛋白MYC4为如下(4)或(5)或(6)：
(4)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(5)由序列表中序列4所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(6)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(4)或(5)衍生的蛋白质。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：
所述提高目的植物中蛋白MYC3和/或MYC4的含量和/或活性，或，所述提高目的植物中编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的表达，均是将所述编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子导入所述目的植物中。
9.一种培育种子大小增加的目的植物的方法，为如下3)或4)：
3)所述的方法包括如下步骤：降低受体植物中蛋白MYC3和/或MYC4的含量和/或活性，得到目的植物；
4)所述的方法包括如下步骤：降低受体植物中编码蛋白MYC3和/或MYC4的核酸分子的表达，得到目的植物；
所述目的植物的种子大于所述受体植物；
所述蛋白MYC3为如下(1)或(2)或(3)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)由序列表中序列2所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(3)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)或(2)衍生的蛋白质；
所述蛋白MYC4为如下(4)或(5)或(6)：
(4)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(5)由序列表中序列4所示的氨基酸序列的末端添加标签序列或其他标记蛋白序列组成的蛋白质；
(6)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(4)或(5)衍生的蛋白质。
10.根据权利要求1-6任一所述应用或权利要求7-9任一所述的方法，其特征在于：所述植物为双子叶植物或单子叶植物。
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