CN110850083B

CN110850083B - 一种批量外泌体浓度检测试剂盒及操作方法

Info

Publication number: CN110850083B
Application number: CN201911054514.4A
Authority: CN
Inventors: 陈锦阳; 李静静; 乔博超
Original assignee: Zhejiang Healthfuture Biomedical Technology Co ltd
Current assignee: Zhejiang Healthfuture Biomedical Technology Co ltd
Priority date: 2019-10-31
Filing date: 2019-10-31
Publication date: 2023-06-02
Anticipated expiration: 2039-10-31
Also published as: CN110850083A

Abstract

本发明涉及样品检测设备技术领域，具体为一种批量外泌体浓度检测试剂盒及其操作方法，所述试剂盒包括一个恒温箱，所述恒温箱内设有分层测定板，所述分层测定板从上到下分为三层依次为试剂板、样品底板和酶标板底板，所述试剂板、样品底板和酶标板底板一角均设有支架孔，所述试剂板、样品底板和酶标板底板的侧面正对着支架孔处设有固定螺栓，所述支架孔内设有测定板支架并将试剂板、样品底板和酶标板底板依次串联。本发明可快速进行外泌体的整体浓度测量，利用BCA测量原理，掌握了样品整体的外泌体蛋白的浓度参数。

Description

一种批量外泌体浓度检测试剂盒及操作方法

技术领域

本发明涉及样品检测设备技术领域，具体为一种批量外泌体浓度检测试剂盒及操作方法。

背景技术

外泌体本质为由细胞分泌而来的细小囊泡，直径约为30-200nm，现如今特指直径在40-100nm的盘状囊泡；一般而言，所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。

一段时间以来，外泌体的研究是一项新兴的热点，原因在于其本身携带着大量的生物来源，细胞构成、运输等等细胞信号，其纷繁的功能性来源于所来源的细胞的类型，因此外泌体的研究可具有针对性。

目前，外泌体的浓度测定习惯采用仪器检测包括通过Zeta电位检测，通过使用经典微电泳技术和布朗运动成为现代的分析手段，颗粒浓度可以通过视频计数分析得到。这些方法需利用试剂盒对原血清等载体物质进行处理，可获得特定的外泌体的详细数据；然而目前实验室进行外泌体的浓度测量和粒径分布一般只能单操作，不能进行批量操作，操作周期长，对比数据小；另一方面，对于宏观的外泌体浓度参数，由于外泌体的本质是复杂RNA和蛋白质，因此宏观的外泌体浓度测量无需采用复杂的针对性分离手段，相反的，此番操作会丢失整体浓度信息。

发明内容

本发明的目的在于提供一种批量外泌体浓度检测试剂盒及操作方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种批量外泌体浓度检测试剂盒，所述试剂盒包括一个恒温箱，所述恒温箱内设有分层测定板，所述分层测定板从上到下分为三层依次为试剂板、样品底板和酶标板底板，所述试剂板、样品底板和酶标板底板一角均设有支架孔，所述试剂板、样品底板和酶标板底板的侧面正对着支架孔处设有固定螺栓，所述支架孔内设有测定板支架并将试剂板、样品底板和酶标板底板依次串联，所述试剂板上设有多排单位试剂容量，所述每排单位试剂容量各个单位格之间通过溢流槽相连，所述每格单位试剂容量内均设有贯穿整个试剂板的试剂通孔，所述每格单位试剂容量的容量数为200ul，所述试剂通孔的横截面上横贯有排放阀，所述排放阀的阀门把手设置在试剂板左侧端面上，所述样品底板上设有间隔与单位试剂容量格相同的单位样品容量，所述每格单位样品容量的容量数为220ul。

进一步的：所述恒温箱的箱盖上设有定时器，所述恒温箱的正面还设有温度设定模块和提示模块。

进一步：所述酶标板底板上设有酶标板限定区域，所述酶标板限定区域内设有酶标板。

进一步的：根据上述的一种批量外泌体浓度检测试剂盒所得到的操作方法，所述操作方法包括以下步骤：

一、取一块酶标板，放置在酶标板底板上的酶标板限定区域，并按BCA试剂A比BCA试剂B的比例为50：1的体积比例，配置BCA工作液；

二、在测定板支架上安装并固定好酶标板底板和样品底板，将样品稀释合适的倍数，使其为单样品位容量即20ul；

三、对应酶标板和样品底板上的样品数量，在最上层的试剂板内加入步骤一配置好的BCA工作液，加满即为200ul，通过试剂通孔放出，批量注入酶标板和样品底板；

四、把酶标板放在震荡器上震荡30sec，随即将酶标板和样品底板的整个装置放入恒温箱，温度设定37度，时间为30分钟；

五、30分钟后，以酶标板为标准参照，分别在562nm波长下比色，记录吸光值，绘制曲线，查询外泌体中蛋白含量并计算浓度。

进一步的：所测浓度除以样品稀释液的总体积即20ul，再乘以样品稀释倍数即为外泌体蛋白的实际浓度。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：对于外泌体的整体浓度测量，利用BCA测量原理，掌握了样品整体的外泌体浓度参数，操作简单快速，45分钟内可完成测量；准确灵敏，试剂稳定性好，测量精度可达0.5-10ug/ml；整个试剂盒及其方法经济使用，上位的试剂板可批量注入试剂，整个过程可按需要进行大批量的测试，便于快速掌握外泌体浓度的宏观数值。

附图说明

图1为本发明中的整体结构示意图；

图2为本发明中的分层测定板的结构示意图；

图3为本发明中的试剂板的整体结构示意图；

图4为本发明中的样品底板的结构示意图；

图5为本发明中的酶标板底板的结构示意图；

图6为本发明中的试剂板的剖视图；

图7为本发明中的测定步骤的流程图。

图中：1、恒温箱；11、定时器；12、温度设定模块；13、提示模块；2、分层测定板；21、试剂板；211、支架孔；212、固定螺栓；213、单位试剂容量；214、溢流槽；215、试剂通孔；216、排放阀；22、样品底板；221、单位样品容量；23、酶标板底板；231、酶标板限定区域；232、酶标板；24、测定板支架。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、 “右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“ 顺时针”、“逆时针”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的设备或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

此外，术语“第一”、 “第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

请参阅图1-7，本发明提供一种技术方案：

一种批量外泌体浓度检测试剂盒，试剂盒包括一个恒温箱1，恒温箱1内设有分层测定板2，分层测定板2从上到下分为三层依次为试剂板21、样品底板22和酶标板底板23，试剂板21、样品底板22和酶标板底板23一角均设有支架孔211，试剂板21、样品底板22和酶标板底板23的侧面正对着支架孔211处设有固定螺栓212，支架孔211内设有测定板支架24并将试剂板21、样品底板22和酶标板底板23依次串联。

试剂板21上设有多排单位试剂容量213，每排单位试剂容量213各个单位格之间通过溢流槽214相连，每格单位试剂容量213内均设有贯穿整个试剂板21的试剂通孔215，每格单位试剂容量213的容量数为200ul。

试剂通孔215的横截面上横贯有排放阀216，排放阀216的阀门把手设置在试剂板21左侧端面上。

恒温箱1的箱盖上设有定时器11，恒温箱1的正面还设有温度设定模块12和提示模块13。

样品底板22上设有间隔与单位试剂容量213格相同的单位样品容量221，每格单位样品容量221的容量数为220ul。

酶标板底板23上设有酶标板限定区域231，酶标板限定区域231内设有酶标板232。

根据上述的一种批量外泌体浓度检测试剂盒所得到的操作方法，操作方法包括以下步骤：

一、取一块酶标板232，放置在酶标板底板23上的酶标板限定区域231，并按BCA试剂A比BCA试剂B的比例为50：1的体积比例，配置BCA工作液；

二、在测定板支架24上安装并固定好酶标板底板23和样品底板22，将样品稀释合适的倍数，使其为单样品位容量即20ul；

三、对应酶标板232和样品底板22上的样品数量，在最上层的试剂板21内加入步骤一配置好的BCA工作液，加满即为200ul，通过试剂通孔215放出，批量注入酶标板232和样品底板22；

四、把酶标板232放在震荡器上震荡30sec，随即将酶标板232和样品底板22的整个装置放入恒温箱1，温度设定37度，时间为30分钟；

五、30分钟后，以酶标板232为标准参照，分别在562nm波长下比色，记录吸光值，绘制曲线，查询外泌体中蛋白含量并计算浓度。

进一步的，所测浓度除以样品稀释液的总体积即20ul，再乘以样品稀释倍数即为外泌体蛋白的实际浓度。

值得说明的是，本设计公开涉及到的电气电子类元件的型号和使用方法，所述定时器11采用的是XH-M172型间歇工作模块，所述温度设定模块12采用的是TELESKY品牌的W1209数字温控器，所述提示模块13采用的是TELESKY品牌下的ISD1820语音模块。以上所述均属于现有技术，本设计不涉及对其的电路改进和使用方法的改进，本行业内的工作人员可完全掌握和操作，这里不再赘述。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例，并不用来限制本发明，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims

1.一种批量外泌体浓度检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括一个恒温箱（1），所述恒温箱（1）内设有分层测定板（2），所述分层测定板（2）从上到下分为三层依次为试剂板（21）、样品底板（22）和酶标板底板（23），所述试剂板（21）、样品底板（22）和酶标板底板（23）一角均设有支架孔（211），所述试剂板（21）、样品底板（22）和酶标板底板（23）的侧面正对着支架孔（211）处设有固定螺栓（212），所述支架孔（211）内设有测定板支架（24）并将试剂板（21）、样品底板（22）和酶标板底板（23）依次串联，所述试剂板（21）上设有多排单位试剂容量（213），每排所述单位试剂容量（213）各个单位格之间通过溢流槽（214）相连，每格单位试剂容量（213）内均设有贯穿整个试剂板（21）的试剂通孔（215），每格单位试剂容量（213）的容量数为200ul，所述试剂通孔（215）的横截面上横贯有排放阀（216），所述排放阀（216）的阀门把手设置在试剂板（21）左侧端面上，所述样品底板（22）上设有间隔与单位试剂容量（213）格相同的单位样品容量（221），每格所述单位样品容量（221）的容量数为220ul。

2.根据权利要求1所述的一种批量外泌体浓度检测试剂盒，其特征在于：所述恒温箱（1）的箱盖上设有定时器（11），所述恒温箱（1）的正面还设有温度设定模块（12）和提示模块（13）。

3.根据权利要求1所述的一种批量外泌体浓度检测试剂盒，其特征在于：所述酶标板底板（23）上设有酶标板限定区域（231），所述酶标板限定区域（231）内设有酶标板（232）。

4.根据权利要求1所述的一种批量外泌体浓度检测试剂盒所得到的操作方法，其特征在于：所述操作方法包括以下步骤：

一、取一块酶标板（232），放置在酶标板底板（23）上的酶标板限定区域（231），并按BCA试剂A比BCA试剂B的比例为50：1的体积比例，配置BCA工作液；

二、在测定板支架（24）上安装并固定好酶标板底板（23）和样品底板（22），将样品稀释合适的倍数，使其为单样品位容量即20ul；

三、对应酶标板（232）和样品底板（22）上的样品数量，在最上层的试剂板（21）内加入步骤一配置好的BCA工作液，加满即为200ul，通过试剂通孔（215）放出，批量注入酶标板（232）和样品底板（22）；

四、把酶标板（232）放在震荡器上震荡30sec，随即将酶标板（232）和样品底板（22）的整个装置放入恒温箱（1），温度设定37度，时间为30分钟；

五、30分钟后，以酶标板（232）为标准参照，分别在562nm波长下比色，记录吸光值，绘制曲线，查询外泌体中蛋白含量并计算浓度。

5.根据权利要求4所述的一种批量外泌体浓度检测试剂盒所得到的操作方法，其特征在于：所测浓度除以样品稀释液的总体积即20ul，再乘以样品稀释倍数即为外泌体蛋白的实际浓度。