CN110850005A - 一种快速检测果酒中组胺含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速检测果酒中组胺含量的方法，现如今，在检测果酒中含有的组胺含量时，一般选择采用酶联免疫法、气相色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳色谱法，不仅操作过程复杂，价格高，操作难度大，而且检测灵敏度较低；针对这个技术问题，我们设计了一种快速检测果酒中组胺含量的方法，利用荧光分析法来检测果酒中含有的组胺的含量；但由于组胺没有荧光发色基团，不具有荧光性，为了保证荧光分析法的顺利进行，我们对组胺进行前处理，利用丹磺酰氯溶液与组胺上的活泼氢反应，生成具有荧光的组胺‑丹磺酰氯衍生物，再利用具有荧光的组胺‑丹磺酰氯衍生物的检测来检测果酒中的组胺含量，具有较高的实用性。

Description

一种快速检测果酒中组胺含量的方法
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，具体是一种快速检测果酒中组胺含量的方法。
背景技术
组胺(Histamine)是组氨酸在组胺脱羧酶催化作用下形成的单胺类物质。在人体中，组胺可以进行多种生理反应，它不仅是炎症反应和免疫损伤的重要介质之一，而且还有降压作用，对肿瘤治疗也有一定的促进作用。目前检测组胺的常用方法有酶联免疫法、气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳色谱法等。
酶联免疫法是用酶-底物反应来检测的，所用的酶需有产生易测定的有色或荧光物质。酶偶联物的量由其合适的底物颜色变化决定的，该方法不能同时分析多种成分，对结构类似的化合物有一定交叉反应，对结果判定有一定影响。
气相色谱法利用物质的挥发性进行分离检测，此方法虽然能够准确定量，但是样品前处理复杂，必须进行衍生化反应使其挥发性增加，检测的难度大。另外，测定成本过高，限制了该方法的推广使用。
高效液相色谱法采用高压输出的液体为流动相，以小粒径填料为固定相。同时，在柱后有高灵敏度检测器，从而实现对样品的连续分析，有良好的特异性和灵敏性，但是前处理过程复杂，仪器耗材十分昂贵。
毛细管电泳色谱法结合了高效液相色谱法的高选择性、毛细管电泳法的高效性进行组胺的检测，分离速度快，无环境污染，但是检测灵敏度较低。
针对上述问题，我们需要设计一种快速检测果酒中组胺含量的方法，这是我们亟待解决的问题之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测果酒中组胺含量的方法，以解决现有技术中的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种快速检测果酒中组胺含量的方法，包括以下步骤：
1)准备物料；
2)取果酒，加入丹磺酰氯溶液，生成组胺-丹磺酰氯衍生物；
3)进行荧光检测，得到组胺含量。
较优化的方案，包括以下步骤：
1)准备物料：
2)取步骤1)准备的丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液；
3)取步骤1)准备的果酒，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH；
4)再在果酒中添加步骤1)制备的丹磺酰氯溶液，置于水浴中加热，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物；
5)再在果酒中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；
6)将步骤5)处理后的果酒置于荧光光谱仪下进行荧光检测，计算，得到组胺含量数据。
较优化的方案，包括以下步骤：
1)准备物料：步骤1)中进行物料的准备，便于操作人员进行后续试验；
2)取步骤1)准备的丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液，所述丹磺酰氯溶液的浓度为1-15mg/mL；由于丹酰氯溶于丙酮等有机溶剂，不溶于水，因此步骤2)中利用丙酮配制丹磺酰氯溶液；
3)取步骤1)准备的果酒，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH至7.5-13.5；步骤3)中添加NaOH溶液，营造碱性环境，保证组胺、丹磺酰氯能够在碱性条件下进行衍生；
4)再在果酒中添加步骤1)制备的丹磺酰氯溶液，置于10-60℃的水浴中，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物，加热反应时间为10-50min；步骤4)中进行将丹磺酰氯溶液加入果酒中，水浴加热，使得组胺与丹磺酰氯在加热条件下发生衍生，生成组胺-丹磺酰氯衍生物；
5)再在果酒中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；衍生结束后，通过添加氨水中断反应，同时除去残留的丹磺酰氯，便于后续进行荧光检测；
6)将步骤5)处理后的果酒置于荧光光谱仪下进行荧光检测，计算，得到组胺含量数据。步骤6)中将生成组胺-丹磺酰氯衍生物的果酒置于荧光光谱仪下，并进行荧光检测，测定组胺的工作曲线回归方程为F＝17.57c+7.44，相关系数R2＝0.9998，线性范围为2.5μg/mL-2.5mg/mL，检出限为2.0μg/mL，计算得到组胺含量。
较优化的方案，所述步骤6)中，荧光检测时的发射波长为521nm。
较优化的方案，所述步骤2)中，所述丹磺酰氯溶液的浓度为10mg/mL。
较优化的方案，所述步骤3)，pH调节为10.5。
较优化的方案，所述步骤4)中，水浴加热温度为40℃，加热反应时间为30min。
较优化的方案，所述果酒为水蜜桃酒、蓝莓酒、芒果酒、火龙果酒、荔枝酒、葡萄酒中的任意一种。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
现如今，在检测果酒中含有的组胺含量时，一般选择采用酶联免疫法、气相色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳色谱法，不仅操作过程复杂，价格高，操作难度大，而且检测灵敏度较低；针对这个技术问题，我们设计了一种快速检测果酒中组胺含量的方法，利用荧光分析法来检测果酒中含有的组胺的含量；荧光分析法具有快速、灵敏、操作简单等优点，但由于组胺没有荧光发色基团，不具有荧光性，为了保证荧光分析法的顺利进行，我们对组胺进行前处理，利用丹磺酰氯溶液与组胺上的活泼氢反应，生成具有荧光的组胺-丹磺酰氯衍生物，再利用具有荧光的组胺-丹磺酰氯衍生物的检测来检测果酒中的组胺含量。
本发明不仅确立了利用组胺-丹磺酰氯衍生物荧光性快速检测果酒中组胺含量的方案，同时为了提高衍生物的荧光灵敏度，本发明对组胺与丹磺酰氯衍生物反应条件进行了优化，确保检测结果的准确度；通过多组实验后得到最优化的测试条件，即丹磺酰氯溶液为10mg/mL、pH＝10.5、在40℃水浴中反应30min，制得组胺浓度与荧光强度的标准曲线，衍生物荧光强度与组胺浓度呈F＝17.57c+7.44线性关系。
本发明公开了一种快速检测果酒中组胺含量的检测方法，该方法操作简单，参数设计合理，不仅快速有效实现了果酒中组胺含量的测定，而且成本低，可靠性高，具有较高的实用性。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明实施例1中，组胺溶液、丹磺酰氯溶液、组胺-丹磺酰氯衍生物进行荧光检测后，得到的荧光光谱图；其中曲线1为组胺溶液，曲线2为丹磺酰氯溶液，曲线3为组胺-丹磺酰氯溶液；
图2为本发明实施例2-3操作中，在不同浓度的丹磺酰氯溶液条件下衍生，组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度示意图；
图3为本发明实施例4-5操作中，在pH条件下进行衍生，组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度示意图；
图4为本发明实施例6-7操作中，在不同的水浴温度下进行衍生，组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度示意图；
图5为本发明实施例8-9操作中，在不同的衍生时间条件下进行衍生，组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度示意图；
图6为本发明实施例10操作中，不同浓度的组胺溶液进行衍生时，得到的组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度示意图；
其中曲线1为5ug/mL组胺溶液与10mg/mL丹磺酰氯衍生物溶液；曲线2为15ug/mL组胺溶液与10mg/mL丹磺酰氯衍生物溶液；曲线3为25ug/mL组胺溶液与10mg/mL丹磺酰氯衍生物溶液；曲线4为35ug/mL组胺溶液与10mg/mL丹磺酰氯衍生物溶液；
图7为本发明组胺浓度与荧光强度的标准曲线图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
分别取组胺溶液、丹磺酰氯溶液、组胺-丹磺酰氯衍生物，利用荧光光谱仪进行检测，得到3种物质的荧光光谱图(附图1所示)。
结论：观察荧光光谱图可知，相比较组胺溶液和丹磺酰氯溶液，组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光性更强，且最大发射波长为521nm。
实施例2：
准备物料，取丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液，所述丹磺酰氯溶液的浓度为1mg/mL；再取1mL果酒，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH至7.5。
再在果酒中添加丹磺酰氯溶液，置于10℃的水浴中，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物，加热反应时间为10min；再在果酒中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；将处理后的果酒置于荧光光谱仪下进行荧光检测，测量得到荧光强度。
实施例2中，果酒为水蜜桃酒。
实施例3：
配制丹磺酰氯溶液时，分别配制浓度为2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL……15mg/mL，浓度依次间隔1mg/mL，分别进行14组对照实验，每组对照实验的其余步骤参数与实施例2相同。
再将实施例2、实施例3得到的15组数据进行统计，测定不同溶度下组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度，比较丹磺酰氯浓度对荧光强度影响(如附图2所示)。
结论：当丹磺酰氯溶液浓度为10mg/mL，组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度最高。
实施例4：
准备物料，取丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液，所述丹磺酰氯溶液的浓度为10mg/mL；再取1mL果酒，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH至7.5。
再在果酒中添加丹磺酰氯溶液，置于10℃的水浴中，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物，加热反应时间为10min；再在果酒中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；将处理后的果酒置于荧光光谱仪下进行荧光检测，测量得到荧光强度。
实施例4中，果酒为蓝莓酒。
实施例5：
根据实施例4公开的技术方案，在调节pH时，将pH分别调节至8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5，其余步骤参数不变，进行12组对照实验。
再将实施例4、实施例5得到的13组数据进行统计，测定不同pH下组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度，比较pH对荧光强度的影响(如附图3所示)。
结论：当pH为10.5时，组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度最高。
实施例6：
准备物料，取丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液，所述丹磺酰氯溶液的浓度为10mg/mL；再取1mL果酒，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH至10.5。
再在果酒中添加丹磺酰氯溶液，置于10℃的水浴中，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物，加热反应时间为10min；再在果酒中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；将处理后的果酒置于荧光光谱仪下进行荧光检测，测量得到荧光强度。
实施例6中，果酒为芒果酒。
实施例7：
根据实施例6公开的技术方案，在水浴反应衍生时，分别将水浴温度调整为5℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，其余步骤参数不变，进行11组对照实验。
再将实施例6、实施例7得到的12组数据进行统计，测定不同水浴温度下组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度，比较不同水浴温度对荧光强度的影响(如附图4所示)。
结论：当水浴温度为40℃时，组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度最高。
实施例8：
准备物料，取丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液，所述丹磺酰氯溶液的浓度为10mg/mL；再取1mL果酒，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH至10.5。
再在果酒中添加丹磺酰氯溶液，置于40℃的水浴中，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物，加热反应时间为10min；再在果酒中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；将处理后的果酒置于荧光光谱仪下进行荧光检测，测量得到荧光强度。
实施例8中，果酒为火龙果酒。
实施例9：
根据实施例8公开的技术方案，在水浴温度为40℃下反应衍生时，分别将衍生时间调整为5min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min，其余步骤参数不变，进行9组对照实验。
再将实施例8、实施例9得到的10组数据进行统计，测定水浴温度为40℃，不同衍生时间下组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度，比较不同衍生时间对荧光强度的影响(如附图5所示)。
结论：当水浴温度为40℃，衍生时间为30min时，组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度最高。
实施例10：
准备物料，取丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液，所述丹磺酰氯溶液的浓度为10mg/mL；再取5mg/mL的组胺溶液，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH至10.5。
再在组胺溶液中添加丹磺酰氯溶液，置于40℃的水浴中，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物，加热反应时间为30min；再在组胺溶液中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；将处理后的组胺溶液置于荧光光谱仪下进行荧光检测，测量得到荧光强度。
再分别取10ug/mL、15ug/mL、20ug/mL、25ug/mL、30ug/mL g/mL、35ug/mL、40ug/mL的组胺溶液，其余步骤参数与上述相同，分别进行荧光检测(具体数据如附图6、附图7所示)。
实施例11：
准备物料，取丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液，所述丹磺酰氯溶液的浓度为10mg/mL；再取1mL果酒，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH至10.5。
再在果酒中添加丹磺酰氯溶液，置于40℃的水浴中，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物，加热反应时间为10min；再在果酒中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；将处理后的果酒置于荧光光谱仪下进行荧光检测，测量得到荧光强度。
依照上述步骤，分别取果酒为水蜜桃酒，蓝莓酒，芒果酒，火龙果酒，荔枝酒，葡萄酒，进行6组实验，其余实验参数均相同。
检测得到荧光强度后，由于组胺-丹磺酰氯衍生物的荧光强度与组胺浓度呈F＝17.57c+7.44线性关系，计算得到各个样品中含有的组胺含量，具体数值如下表所示：
果酒 芒果酒 葡萄酒 蓝莓酒
组胺含量(mg/L) 25.67±0.02 18.44±0.05 26.08±0.02
果酒 火龙果酒 荔枝酒 水蜜桃酒
组胺含量(mg/L) 48.11±0.02 48.94±0.02 42.82±0.05
结论：本发明公开了一种快速检测果酒中组胺含量的检测方法，该方法操作简单，参数设计合理，不仅快速有效实现了果酒中组胺含量的测定，而且成本低，可靠性高，具有较高的实用性。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

Claims (8)

1.一种快速检测果酒中组胺含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)准备物料；
2)取果酒，加入丹磺酰氯溶液，生成组胺-丹磺酰氯衍生物；
3)进行荧光检测，计算得到组胺含量。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测果酒中组胺含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)准备物料：
2)取步骤1)准备的丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液；
3)取步骤1)准备的果酒，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH；
4)再在果酒中添加步骤1)制备的丹磺酰氯溶液，置于水浴中加热，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物；
5)再在果酒中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；
6)将步骤5)处理后的果酒置于荧光光谱仪下进行荧光检测，计算，得到组胺含量数据。
3.根据权利要求2所述的一种快速检测果酒中组胺含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)准备物料：
2)取步骤1)准备的丹磺酰氯，以丙酮溶解，制备得到丹磺酰氯溶液，所述丹磺酰氯溶液的浓度为1-15mg/mL；
3)取步骤1)准备的果酒，加入2mol/L的NaOH溶液，搅拌，再加入饱和NaHCO3溶液，调节pH至7.5-13.5；
4)再在果酒中添加步骤1)制备的丹磺酰氯溶液，置于10-60℃的水浴中，反应生成组胺-丹磺酰氯衍生物，加热反应时间为10-50min；
5)再在果酒中添加0.1mL氨水中断反应，除去残留的丹磺酰氯，用0.45μm的有机膜过滤除去果酒中的杂质；
6)将步骤5)处理后的果酒置于荧光光谱仪下进行荧光检测，计算，得到组胺含量数据。
4.根据权利要求3所述的一种快速检测果酒中组胺含量的方法，其特征在于：所述步骤6)中，荧光检测时的发射波长为521nm。
5.根据权利要求3所述的一种快速检测果酒中组胺含量的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述丹磺酰氯溶液的浓度为10mg/mL。
6.根据权利要求3所述的一种快速检测果酒中组胺含量的方法，其特征在于：所述步骤3)，pH调节为10.5。
7.根据权利要求3所述的一种快速检测果酒中组胺含量的方法，其特征在于：所述步骤4)中，水浴加热温度为40℃，加热反应时间为30min。
8.根据权利要求1所述的一种快速检测果酒中组胺含量的方法，其特征在于：所述果酒为水蜜桃酒、蓝莓酒、芒果酒、火龙果酒、荔枝酒、葡萄酒中的任意一种。
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Title
魏雷等: "果酒中组胺含量快速检测方法研究", 《食品科技》 *

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