CN110836932A - 一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺，工艺步骤如下，指定成分的HPLC测定；草珊瑚叶的工艺优化；草珊瑚茎的单因素试验考察；草珊瑚茎切制设计方案；AHP模型建立；综合评分方法；CCD‑RSM优选草珊瑚茎切制工艺和验证试验。本申请通过单因素试验，以新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸含量的综合评分为评价指标，采用星点设计‑效应面法对草珊瑚软化切制工艺进行筛选，草珊瑚茎和叶选择不同处理方式进行工艺优选，并采用多指标层次分析法（AHP）结合星点设计‑响应面法优化草珊瑚炮制工艺，本研究将有利于草珊瑚的进一步开发，有望为制定草珊瑚相关炮制规范及质量标准提供实验依据。

Description

一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺
技术领域
本发明涉及草珊瑚加工技术领域，具体为一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺。
背景技术
草珊瑚，又名肿节风，系金粟兰科植物草珊瑚的干燥全草，味苦、辛，性平，归心、肝经，具清热凉血、活血消斑、祛风通络等功效，现代药理研究表明草珊瑚具有抗菌消炎、保肝、抗肿瘤等药理作用其主要活性成分有黄酮类、苯丙素类、香豆素类等，《中国药典》2015年版项下草珊瑚饮片的炮制方法为“除去杂质，洗净，润透，切断，干燥”，并无具体炮制参数标准，饮片质量难以控制，中药切制工艺若仅以单一化学指标性成分的含量高低来评价工艺的优劣，则会忽略多组分之间的综合效用，多指标成分含量有助于综合评价草珊瑚切制工艺，针对上述情况，我们在现有技术的基础上提出一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺，解决了上述背景技术中提出的《中国药典》2015年版项下草珊瑚饮片的炮制方法为“除去杂质，洗净，润透，切断，干燥”，并无具体炮制参数标准，饮片质量难以控制，中药切制工艺若仅以单一化学指标性成分的含量高低来评价工艺的优劣，则会忽略多组分之间的综合效用的问题。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺，工艺步骤如下：
S1.指定成分的HPLC测定；
S2. 草珊瑚叶的工艺优化，干燥温度的选择：取草珊瑚叶5份，抢水洗净后分别于30、40、50、60、70 ℃下烘至水分达标，HPLC测得以上7种成分的含量；对不同干燥温度进行评价，OD值分别为3.20、5.32、7.62、4.30、6.25，结果表明50 ℃烘干最佳；干燥时间的选择：取草珊瑚叶5份，抢水洗净后分别于50 ℃烘箱下烘1、2、3、4、5 h；1 h时间水分还未烘干，2 h后OD值分别为5.80、7.30、8.51、8.15，结果表明烘干4 h含量最佳；
S3. 草珊瑚茎的单因素试验考察，浸泡时间的选择：取草珊瑚茎5份，用12倍量水分别浸泡0、0.5、1.0、1.5、2.0 h，切1～2 cm短段，50 ℃烘干，HPLC测得以上7种成分的含量，OD值分别为5.83、5.99、8.90、8.60、4.22，选择后续实验优化浸泡时间范围为0.5～1.5 h；闷润时间的选择：取草珊瑚茎4份，用12倍量水分别闷润1、2、3、4、5、6 h，切1～2 cm短段，50℃烘干，HPLC测得以上7种成分的含量，OD值分别为7.82、8.90、8.14、7.95、5.65、4.50，选择后续实验优化闷润时间为2～4 h；取草珊瑚茎适量，抢水洗净杂质，用12倍量水闷润2 h，分别切制为约5 mm、10～20 mm、30 mm的段，50 ℃干燥至水分达标，考察不同切制规格对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸7种成分的影响，OD值分别为7.85、9.35、8.69，选择后续实验优化切制长度为10～20 mm；干燥温度的选择，取草珊瑚茎5份，用12倍量水闷润2 h，切1.0 cm短段，分别在30、40、50、60、70 ℃的温度下烘干，HPLC测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸7种成分的含量，对不同干燥温度进行评价，OD值分别为6.99、9.71、7.86、7.77、7.39，选择后续实验优化干燥温度为40～60 ℃；
S4. 草珊瑚茎切制设计方案，选取对切制过程中影响显著的4个因素：浸泡时间为A、闷润时间为B、切制长度为C、干燥温度为D作为自变量，以有效成分新绿原酸为Y 1、绿原酸为Y 2、隐绿原酸为Y 3、咖啡酸为Y 4、异嗪皮啶为Y 5、落新妇苷为Y 6、迷迭香酸为Y 7含量为指标，对草珊瑚茎进行4因素3水平试验，每个因素选取低、中、高3水平，分别记作−1、0、+1，结合AHP法，以有效成分增量最大为最优目的，预测草珊瑚茎最优切制工艺；
S5. AHP模型建立，根据7个指标性成分来建立层次结构模型，基于异嗪皮啶和迷迭香酸作为草珊瑚质量控制的指标性成分，绿原酸含量较大，落新妇苷为黄酮类成分代表，咖啡酸含量最少，将这7项指标分为5个层次，确定指标的重要性，异嗪皮啶＝迷迭香酸＞绿原酸＞落新妇苷＞新绿原酸＝隐绿原酸＞咖啡酸，以YAAHP 12.1层次分析软件设计并比较两两之间重要性；
S6. 综合评分方法,以OD值为评价指标，总分为10分，OD＝(0.0654 Y 1/Y 1max＋0.1717Y 2/Y 2max＋0.0654 Y 3/Y 3max＋0.0413 Y 4/ Y 4max＋0.2745 Y 5/Y 5max＋0.1072 Y 6/Y 6max＋0.2745Y 7/Y 7max)×10，Y 1max、Y 2max、Y 3max、Y 4max、Y 5max、Y 6max、Y 7max分别为各成分对应的最大测定值；
S7. CCD-RSM优选草珊瑚茎切制工艺，试验数据运用Design-Expert 8.0.6软件进行响应面分析，以各OD值（Y）对各因素进行多元线性回归和2项式拟合，得回归方程Y＝8.39＋0.033×10−3 A＋0.24 B＋0.14 C－0.49 D＋0.38 AB－0.020 AC－0.18 AD＋0.10 BC－0.46 BD－0.094 CD－0.64 A2－1.38 B2－0.92 C2－0.87 D2，r 2＝0.945 1，对模型采用F检验进行方差分析，结果显示各因素对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷和迷迭香酸含量的影响顺序为D＞B＞C＞A，二项式模型P＜0.05，当P＞0.05失拟项显著，表明该实验模型拟合良好，具有统计学意义，实验误差小；工艺优化与预测：根据星点试验结果应用Design-Expert V8.0.6软件绘制OD的三维效应面图，对2项式回归模型进行预测分析，得最优切制工艺为0.12、0.16、0.11、−0.35，结合实际操作的可行性，得草珊瑚茎最优切制工艺为浸泡时间1 h，闷润时间3 h，切制长度15 mm，干燥温度50 ℃
S8. 验证试验，取3份草珊瑚药材，照上述已确定的最佳切制工艺条件炮制，分别测定每份饮片中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸的含量，最终综合评分OD平均值为8.17，与OD预测值（8.50）的偏差较小，RSD为2.85%，其稳定可行。
优选的，所述指定成分的HPLC测定方法步骤如下：
a、色谱条件，色谱柱；流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱：0～5 min，6%～10%乙腈；5～32 min，10%～12%乙腈；32～45 min，12%～20%乙腈；45～78 min，20%～35%乙腈；78～80 min，35%～6%乙腈；体积流量0.8 mL/min；柱温35 ℃；检测波长330 nm，落新妇苷290nm；
b、供试品溶液制备，精密量取药材粉末2.0 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇25 mL，密塞，称定质量，在200 W、40 kHz条件下进行超声30 min，放冷，30%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.22 μm微孔滤膜，即得供试品溶液；
c、对照品溶液制备，精密称取对照品适量，分别置于5 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，作为储备液，然后分别吸取适量于10 mL量瓶中，用30%甲醇定容至刻度，摇匀，配制得质量浓度分别为新绿原酸74.7 μg/mL、绿原酸156.0 μg/mL、隐绿原酸59.0 μg/mL、咖啡酸51.3 μg/mL、异嗪皮啶110.4 μg/mL、落新妇苷86.0 μg/mL、迷迭香酸75.6 μg/mL的对照品溶液；
d、线性关系考察，分别精密吸取步骤b中对照品溶液适量，配制成6种质量浓度系列的混合对照品溶液，30%甲醇定容至刻度，摇匀，在步骤b中色谱条件下进样10 μL测定，以质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程分别为新绿原酸Y＝26500 X－3180，r＝0.9995，线性范围0.747～37.350 μg/mL；绿原酸Y＝33800 X－7040，r＝0.9999，线性范围1.560～156.000 μg/mL；隐绿原酸Y＝43700 X－2820，r＝0.999 8，线性范围0.590～29500 μg/mL；咖啡酸Y＝61200 X－11400，r＝0.9997，线性范围0.513～25.650 μg/mL；异嗪皮啶Y＝103000 X－43500，r＝0.9998，线性范围1.104～55.200 μg/mL；落新妇苷Y＝26500 X＋129，r＝0.9997，线性范围0.860～43.000 μg/mL；迷迭香酸Y＝47900 X－7290，r＝0.9998，线性范围0.756～37.800 μg/mL；
e、精密度试验，精密吸取供试品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续测定6次，记录峰面积，测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸峰面积RSD分别为2.68%、1.01%、1.52%、2.16%、1.59%、0.66%、2.28%；
f、重复性试验，取同一药材，按步骤b中方法平行制备6份供试品溶液，在步骤b色谱条件下进样测定，测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸含量RSD分别为2.64%、2.50%、2.37%、2.42%、2.81%、2.25%、2.46%；
g、稳定性试验，取同一供试品溶液，于0、2、4、8、12、24 h在步骤b色谱条件下进样测定，测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸峰面积RSD分别为0.34%、1.05%、0.30%、0.66%、0.88%、0.86%、0.86%；
h、加样回收率试验，分别精密称取成分量已知的药材2 g，共9份，随机分为3组，分别精密加入各对照品溶液，加入量分别为供试品中各成分量的80%、100%、120%，在步骤b色谱条件下进样测定，计算回收率，结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸平均加样回收率分别为94.71%、92.82%、95.11%、100.01%、93.71%、95.30%、95.93%，RSD分别为1.12%、2.26%、2.10%、1.60%、2.27%、1.78%、2.18%。
优选的，所述草珊瑚炮制工艺优选：将验证后的草珊瑚茎饮片，与优选的草珊瑚叶饮片按茎-叶按照比例2∶1、4∶1混合，HPLC测得7个有效成分的含量，按OD值按综合评分高低为2∶1＞4∶1，根据草珊瑚原药材茎与叶的质量比约为2∶1，优选出草珊瑚炮制工艺为将草珊瑚茎与叶分开，抢水洗净1次，茎12倍量水浸泡1 h，闷润3 h，50 ℃烘干2 h；叶50 ℃烘干4h，再将茎与叶按2∶1混合。
本发明提供了一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺，具备以下有益效果：本申请通过单因素试验，以新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸含量的综合评分为评价指标，采用星点设计-效应面法（central composite design-response surface methodology，CCD-RSM）对草珊瑚软化切制工艺进行筛选，由于草珊瑚茎与叶质地相差甚多，且对热敏感程度不同，所以草珊瑚茎和叶选择不同处理方式进行工艺优选，并采用多指标层次分析法（AHP）结合星点设计-响应面法优化草珊瑚炮制工艺，本研究将有利于草珊瑚的进一步开发，有望为制定草珊瑚相关炮制规范及质量标准提供实验依据。
附图说明
图1为本发明草珊瑚茎切制工艺优化的星点设计方案及结果示意图；
图2为本发明评分标准示意图；
图3为本发明指标成分成对比较优先判断矩阵及权重系数示意图；
图4为本发明多种模型拟合分析示意图；
图5为本发明回归模型方差分析示意图；
图6、7、8均为本发明OD的三维效应面示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上；术语“上”、“下”、“左”、“右”、“内”、“外”、“前端”、“后端”、“头部”、“尾部”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
请参阅图1-8，本发明提供一种技术方案：一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺，基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺步骤如下：
S1.指定成分的HPLC测定；
S2. 草珊瑚叶的工艺优化，干燥温度的选择：取草珊瑚叶5份，抢水洗净后分别于30、40、50、60、70 ℃下烘至水分达标，HPLC测得以上7种成分的含量；对不同干燥温度进行评价，OD值分别为3.20、5.32、7.62、4.30、6.25，结果表明50 ℃烘干最佳；干燥时间的选择：取草珊瑚叶5份，抢水洗净后分别于50 ℃烘箱下烘1、2、3、4、5 h；1 h时间水分还未烘干，2 h后OD值分别为5.80、7.30、8.51、8.15，结果表明烘干4 h含量最佳；
S3. 草珊瑚茎的单因素试验考察，浸泡时间的选择：取草珊瑚茎5份，用12倍量水分别浸泡0、0.5、1.0、1.5、2.0 h，切1～2 cm短段，50 ℃烘干，HPLC测得以上7种成分的含量，OD值分别为5.83、5.99、8.90、8.60、4.22，选择后续实验优化浸泡时间范围为0.5～1.5 h；闷润时间的选择：取草珊瑚茎4份，用12倍量水分别闷润1、2、3、4、5、6 h，切1～2 cm短段，50℃烘干，HPLC测得以上7种成分的含量，OD值分别为7.82、8.90、8.14、7.95、5.65、4.50，选择后续实验优化闷润时间为2～4 h；取草珊瑚茎适量，抢水洗净杂质，用12倍量水闷润2 h，分别切制为约5 mm、10～20 mm、30 mm的段，50 ℃干燥至水分达标，考察不同切制规格对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸7种成分的影响，OD值分别为7.85、9.35、8.69，选择后续实验优化切制长度为10～20 mm；干燥温度的选择，取草珊瑚茎5份，用12倍量水闷润2 h，切1.0 cm短段，分别在30、40、50、60、70 ℃的温度下烘干，HPLC测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸7种成分的含量，对不同干燥温度进行评价，OD值分别为6.99、9.71、7.86、7.77、7.39，选择后续实验优化干燥温度为40～60 ℃；
S4. 草珊瑚茎切制设计方案，选取对切制过程中影响显著的4个因素：浸泡时间为A、闷润时间为B、切制长度为C、干燥温度为D作为自变量，以有效成分新绿原酸为Y 1、绿原酸为Y 2、隐绿原酸为Y 3、咖啡酸为Y 4、异嗪皮啶为Y 5、落新妇苷为Y 6、迷迭香酸为Y 7含量为指标，对草珊瑚茎进行4因素3水平试验，每个因素选取低、中、高3水平，分别记作−1、0、+1，结合AHP法，以有效成分增量最大为最优目的，预测草珊瑚茎最优切制工艺；
S5. AHP模型建立，根据7个指标性成分来建立层次结构模型，基于异嗪皮啶和迷迭香酸作为草珊瑚质量控制的指标性成分，绿原酸含量较大，落新妇苷为黄酮类成分代表，咖啡酸含量最少，将这7项指标分为5个层次，确定指标的重要性，异嗪皮啶＝迷迭香酸＞绿原酸＞落新妇苷＞新绿原酸＝隐绿原酸＞咖啡酸，以YAAHP 12.1层次分析软件设计并比较两两之间重要性；
S6. 综合评分方法,以OD值为评价指标，总分为10分，OD＝(0.0654 Y 1/Y 1max＋0.1717Y 2/Y 2max＋0.0654 Y 3/Y 3max＋0.0413 Y 4/ Y 4max＋0.2745 Y 5/Y 5max＋0.1072 Y 6/Y 6max＋0.2745Y 7/Y 7max)×10，Y 1max、Y 2max、Y 3max、Y 4max、Y 5max、Y 6max、Y 7max分别为各成分对应的最大测定值；
S7. CCD-RSM优选草珊瑚茎切制工艺，试验数据运用Design-Expert 8.0.6软件进行响应面分析，以各OD值（Y）对各因素进行多元线性回归和2项式拟合，得回归方程Y＝8.39＋0.033×10−3 A＋0.24 B＋0.14 C－0.49 D＋0.38 AB－0.020 AC－0.18 AD＋0.10 BC－0.46 BD－0.094 CD－0.64 A2－1.38 B2－0.92 C2－0.87 D2，r 2＝0.945 1，对模型采用F检验进行方差分析，结果显示各因素对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷和迷迭香酸含量的影响顺序为D＞B＞C＞A，二项式模型P＜0.05，当P＞0.05失拟项显著，表明该实验模型拟合良好，具有统计学意义，实验误差小；工艺优化与预测：根据星点试验结果应用Design-Expert V8.0.6软件绘制OD的三维效应面图，对2项式回归模型进行预测分析，得最优切制工艺为0.12、0.16、0.11、−0.35，结合实际操作的可行性，得草珊瑚茎最优切制工艺为浸泡时间1 h，闷润时间3 h，切制长度15 mm，干燥温度50 ℃
S8. 验证试验，取3份草珊瑚药材，照上述已确定的最佳切制工艺条件炮制，分别测定每份饮片中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸的含量，最终综合评分OD平均值为8.17，与OD预测值（8.50）的偏差较小，RSD为2.85%，其稳定可行。
指定成分的HPLC测定方法步骤如下：
a、色谱条件，色谱柱；流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱：0～5 min，6%～10%乙腈；5～32 min，10%～12%乙腈；32～45 min，12%～20%乙腈；45～78 min，20%～35%乙腈；78～80 min，35%～6%乙腈；体积流量0.8 mL/min；柱温35 ℃；检测波长330 nm，落新妇苷290nm；
b、供试品溶液制备，精密量取药材粉末2.0 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇25 mL，密塞，称定质量，在200 W、40 kHz条件下进行超声30 min，放冷，30%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.22 μm微孔滤膜，即得供试品溶液；
c、对照品溶液制备，精密称取对照品适量，分别置于5 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，作为储备液，然后分别吸取适量于10 mL量瓶中，用30%甲醇定容至刻度，摇匀，配制得质量浓度分别为新绿原酸74.7 μg/mL、绿原酸156.0 μg/mL、隐绿原酸59.0 μg/mL、咖啡酸51.3 μg/mL、异嗪皮啶110.4 μg/mL、落新妇苷86.0 μg/mL、迷迭香酸75.6 μg/mL的对照品溶液；
d、线性关系考察，分别精密吸取步骤b中对照品溶液适量，配制成6种质量浓度系列的混合对照品溶液，30%甲醇定容至刻度，摇匀，在步骤b中色谱条件下进样10 μL测定，以质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程分别为新绿原酸Y＝26500 X－3180，r＝0.9995，线性范围0.747～37.350 μg/mL；绿原酸Y＝33800 X－7040，r＝0.9999，线性范围1.560～156.000 μg/mL；隐绿原酸Y＝43700 X－2820，r＝0.999 8，线性范围0.590～29500 μg/mL；咖啡酸Y＝61200 X－11400，r＝0.9997，线性范围0.513～25.650 μg/mL；异嗪皮啶Y＝103000 X－43500，r＝0.9998，线性范围1.104～55.200 μg/mL；落新妇苷Y＝26500 X＋129，r＝0.9997，线性范围0.860～43.000 μg/mL；迷迭香酸Y＝47900 X－7290，r＝0.9998，线性范围0.756～37.800 μg/mL；
e、精密度试验，精密吸取供试品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续测定6次，记录峰面积，测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸峰面积RSD分别为2.68%、1.01%、1.52%、2.16%、1.59%、0.66%、2.28%；
f、重复性试验，取同一药材，按步骤b中方法平行制备6份供试品溶液，在步骤b色谱条件下进样测定，测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸含量RSD分别为2.64%、2.50%、2.37%、2.42%、2.81%、2.25%、2.46%；
g、稳定性试验，取同一供试品溶液，于0、2、4、8、12、24 h在步骤b色谱条件下进样测定，测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸峰面积RSD分别为0.34%、1.05%、0.30%、0.66%、0.88%、0.86%、0.86%；
h、加样回收率试验，分别精密称取成分量已知的药材2 g，共9份，随机分为3组，分别精密加入各对照品溶液，加入量分别为供试品中各成分量的80%、100%、120%，在步骤b色谱条件下进样测定，计算回收率，结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸平均加样回收率分别为94.71%、92.82%、95.11%、100.01%、93.71%、95.30%、95.93%，RSD分别为1.12%、2.26%、2.10%、1.60%、2.27%、1.78%、2.18%。
草珊瑚炮制工艺优选：将验证后的草珊瑚茎饮片，与优选的草珊瑚叶饮片按茎-叶按照比例2∶1、4∶1混合，HPLC测得7个有效成分的含量，按OD值按综合评分高低为2∶1＞4∶1，根据草珊瑚原药材茎与叶的质量比约为2∶1，优选出草珊瑚炮制工艺为将草珊瑚茎与叶分开，抢水洗净1次，茎12倍量水浸泡1 h，闷润3 h，50 ℃烘干2 h；叶50 ℃烘干4 h，再将茎与叶按2∶1混合。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺,其特征在于,工艺步骤如下：
S1.指定成分的HPLC测定；
S2. 草珊瑚叶的工艺优化，干燥温度的选择：取草珊瑚叶5份，抢水洗净后分别于30、40、50、60、70 ℃下烘至水分达标，HPLC测得以上7种成分的含量；对不同干燥温度进行评价，OD值分别为3.20、5.32、7.62、4.30、6.25，结果表明50 ℃烘干最佳；干燥时间的选择：取草珊瑚叶5份，抢水洗净后分别于50 ℃烘箱下烘1、2、3、4、5 h；1 h时间水分还未烘干，2 h后OD值分别为5.80、7.30、8.51、8.15，结果表明烘干4 h含量最佳；
S3. 草珊瑚茎的单因素试验考察，浸泡时间的选择：取草珊瑚茎5份，用12倍量水分别浸泡0、0.5、1.0、1.5、2.0 h，切1～2 cm短段，50 ℃烘干，HPLC测得以上7种成分的含量，OD值分别为5.83、5.99、8.90、8.60、4.22，选择后续实验优化浸泡时间范围为0.5～1.5 h；闷润时间的选择：取草珊瑚茎4份，用12倍量水分别闷润1、2、3、4、5、6 h，切1～2 cm短段，50℃烘干，HPLC测得以上7种成分的含量，OD值分别为7.82、8.90、8.14、7.95、5.65、4.50，选择后续实验优化闷润时间为2～4 h；取草珊瑚茎适量，抢水洗净杂质，用12倍量水闷润2 h，分别切制为约5 mm、10～20 mm、30 mm的段，50 ℃干燥至水分达标，考察不同切制规格对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸7种成分的影响，OD值分别为7.85、9.35、8.69，选择后续实验优化切制长度为10～20 mm；干燥温度的选择，取草珊瑚茎5份，用12倍量水闷润2 h，切1.0 cm短段，分别在30、40、50、60、70 ℃的温度下烘干，HPLC测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸7种成分的含量，对不同干燥温度进行评价，OD值分别为6.99、9.71、7.86、7.77、7.39，选择后续实验优化干燥温度为40～60 ℃；
S4. 草珊瑚茎切制设计方案，选取对切制过程中影响显著的4个因素：浸泡时间为A、闷润时间为B、切制长度为C、干燥温度为D作为自变量，以有效成分新绿原酸为Y 1、绿原酸为Y 2、隐绿原酸为Y 3、咖啡酸为Y 4、异嗪皮啶为Y 5、落新妇苷为Y 6、迷迭香酸为Y 7含量为指标，对草珊瑚茎进行4因素3水平试验，每个因素选取低、中、高3水平，分别记作−1、0、+1，结合AHP法，以有效成分增量最大为最优目的，预测草珊瑚茎最优切制工艺；
S5. AHP模型建立，根据7个指标性成分来建立层次结构模型，基于异嗪皮啶和迷迭香酸作为草珊瑚质量控制的指标性成分，绿原酸含量较大，落新妇苷为黄酮类成分代表，咖啡酸含量最少，将这7项指标分为5个层次，确定指标的重要性，异嗪皮啶＝迷迭香酸＞绿原酸＞落新妇苷＞新绿原酸＝隐绿原酸＞咖啡酸，以YAAHP 12.1层次分析软件设计并比较两两之间重要性；
S6. 综合评分方法,以OD值为评价指标，总分为10分，OD＝(0.0654 Y 1/Y 1max＋0.1717Y 2/Y 2max＋0.0654 Y 3/Y 3max＋0.0413 Y 4/ Y 4max＋0.2745 Y 5/Y 5max＋0.1072 Y 6/Y 6max＋0.2745Y 7/Y 7max)×10，Y 1max、Y 2max、Y 3max、Y 4max、Y 5max、Y 6max、Y 7max分别为各成分对应的最大测定值；
S7. CCD-RSM优选草珊瑚茎切制工艺，试验数据运用Design-Expert 8.0.6软件进行响应面分析，以各OD值（Y）对各因素进行多元线性回归和2项式拟合，得回归方程Y＝8.39＋0.033×10−3 A＋0.24 B＋0.14 C－0.49 D＋0.38 AB－0.020 AC－0.18 AD＋0.10 BC－0.46 BD－0.094 CD－0.64 A2－1.38 B2－0.92 C2－0.87 D2，r 2＝0.945 1，对模型采用F检验进行方差分析，结果显示各因素对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷和迷迭香酸含量的影响顺序为D＞B＞C＞A，二项式模型P＜0.05，当P＞0.05失拟项显著，表明该实验模型拟合良好，具有统计学意义，实验误差小；工艺优化与预测：根据星点试验结果应用Design-Expert V8.0.6软件绘制OD的三维效应面图，对2项式回归模型进行预测分析，得最优切制工艺为0.12、0.16、0.11、−0.35，结合实际操作的可行性，得草珊瑚茎最优切制工艺为浸泡时间1 h，闷润时间3 h，切制长度15 mm，干燥温度50 ℃
S8. 验证试验，取3份草珊瑚药材，照上述已确定的最佳切制工艺条件炮制，分别测定每份饮片中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸的含量，最终综合评分OD平均值为8.17，与OD预测值（8.50）的偏差较小，RSD为2.85%，其稳定可行。
2.根据权利要求1所述的一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺，其特征在于：所述指定成分的HPLC测定方法步骤如下：
a、色谱条件，色谱柱；流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱：0～5 min，6%～10%乙腈；5～32 min，10%～12%乙腈；32～45 min，12%～20%乙腈；45～78 min，20%～35%乙腈；78～80 min，35%～6%乙腈；体积流量0.8 mL/min；柱温35 ℃；检测波长330 nm，落新妇苷290nm；
b、供试品溶液制备，精密量取药材粉末2.0 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇25 mL，密塞，称定质量，在200 W、40 kHz条件下进行超声30 min，放冷，30%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.22 μm微孔滤膜，即得供试品溶液；
c、对照品溶液制备，精密称取对照品适量，分别置于5 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，作为储备液，然后分别吸取适量于10 mL量瓶中，用30%甲醇定容至刻度，摇匀，配制得质量浓度分别为新绿原酸74.7 μg/mL、绿原酸156.0 μg/mL、隐绿原酸59.0 μg/mL、咖啡酸51.3 μg/mL、异嗪皮啶110.4 μg/mL、落新妇苷86.0 μg/mL、迷迭香酸75.6 μg/mL的对照品溶液；
d、线性关系考察，分别精密吸取步骤b中对照品溶液适量，配制成6种质量浓度系列的混合对照品溶液，30%甲醇定容至刻度，摇匀，在步骤b中色谱条件下进样10 μL测定，以质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程分别为新绿原酸Y＝26500 X－3180，r＝0.9995，线性范围0.747～37.350 μg/mL；绿原酸Y＝33800 X－7040，r＝0.9999，线性范围1.560～156.000 μg/mL；隐绿原酸Y＝43700 X－2820，r＝0.999 8，线性范围0.590～29500 μg/mL；咖啡酸Y＝61200 X－11400，r＝0.9997，线性范围0.513～25.650 μg/mL；异嗪皮啶Y＝103000 X－43500，r＝0.9998，线性范围1.104～55.200 μg/mL；落新妇苷Y＝26500 X＋129，r＝0.9997，线性范围0.860～43.000 μg/mL；迷迭香酸Y＝47900 X－7290，r＝0.9998，线性范围0.756～37.800 μg/mL；
e、精密度试验，精密吸取供试品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续测定6次，记录峰面积，测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸峰面积RSD分别为2.68%、1.01%、1.52%、2.16%、1.59%、0.66%、2.28%；
f、重复性试验，取同一药材，按步骤b中方法平行制备6份供试品溶液，在步骤b色谱条件下进样测定，测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸含量RSD分别为2.64%、2.50%、2.37%、2.42%、2.81%、2.25%、2.46%；
g、稳定性试验，取同一供试品溶液，于0、2、4、8、12、24 h在步骤b色谱条件下进样测定，测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸峰面积RSD分别为0.34%、1.05%、0.30%、0.66%、0.88%、0.86%、0.86%；
h、加样回收率试验，分别精密称取成分量已知的药材2 g，共9份，随机分为3组，分别精密加入各对照品溶液，加入量分别为供试品中各成分量的80%、100%、120%，在步骤b色谱条件下进样测定，计算回收率，结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸平均加样回收率分别为94.71%、92.82%、95.11%、100.01%、93.71%、95.30%、95.93%，RSD分别为1.12%、2.26%、2.10%、1.60%、2.27%、1.78%、2.18%。
3.根据权利要求1所述的一种基于多指标评价优选草珊瑚炮制工艺，其特征在于：所述草珊瑚炮制工艺优选：将验证后的草珊瑚茎饮片，与优选的草珊瑚叶饮片按茎-叶按照比例2∶1、4∶1混合，HPLC测得7个有效成分的含量，按OD值按综合评分高低为2∶1＞4∶1，根据草珊瑚原药材茎与叶的质量比约为2∶1，优选出草珊瑚炮制工艺为将草珊瑚茎与叶分开，抢水洗净1次，茎12倍量水浸泡1 h，闷润3 h，50 ℃烘干2 h；叶50 ℃烘干4 h，再将茎与叶按2∶1混合。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN111402989A (zh) * 2020-06-08 2020-07-10 江西汇仁药业股份有限公司 一种中药综合品质评价方法
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