CN110833536B - 一种可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统及其构建和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统及其构建方法，将羧基化的DNA(SI)与EDC和NHS加入到PBS中进行孵育，得到羧基活化的SI；然后加入氨基化的介孔二氧化硅(MSNP)进行孵育，得到SI绑定的MSNP(MSNP‑SI)；然后加入SM1、SM2K并进行孵育，得到线性聚合的MSNP；最后加入SM3、SM4进行孵育，得到DNA包裹的MSNP。本发明所述构建方法简易方便，原料来源丰富，生产成本低廉。所述药物递送系统用于癌症治疗显示了优良的生物相容性，避免了药物泄露、生物毒性等问题，增强了药物的递送效率，增加了细胞摄取率，调控药物的精准释放，实现癌症的精准治疗。本发明所述药物递送系统不含任何刺激性成分，无毒副作用，在癌症治疗方面具有潜在的应用价值。

Description

一种可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系 统及其构建和应用
技术领域
本发明属于药物递送领域，涉及一种可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统及其构建和应用。
背景技术
纳米药物是一种新型药物制剂，由于增强渗透与阻留效应，纳米药物可聚集至肿瘤部位。通过对纳米载药递送系统修饰靶向配体，优化纳米载体的尺寸和表面特性，可延长纳米载药递送系统在体内的血液循环时间，改善其生物分布，促进在肿瘤部位的聚集，增加细胞的摄取，从而增强药效。
由于其具有众多的优良特性，如可直接合成、可调节的孔径、易表面功能化、可生物降解及可同时负载多种药物，介孔二氧化硅纳米颗粒在药物递送方面引起了众多关注。据报道，介孔二氧化硅表面含有硅烷醇，与细胞膜相互作用具有潜在的生物毒性。在介孔二氧化硅表面包覆一层聚合物外壳，可降低其生物毒性。此外，聚合物外壳可以促进载体稳定性，防止药物泄漏，延长血液循环寿命，有利于药物在体内的高效递送。为进一步增强载药系统的生物降解，提高药物在肿瘤细胞释放的选择性，开发针对肿瘤微环境的刺激-响应的聚合物包被介孔二氧化硅用于药物的可控释放变得十分重要，尤其是能精准调控药物释放的药物递送系统。
已存在的基于介孔二氧化硅的药物递送系统主要还存在以下几个问题：I.系统构建方面，药物递送系统的构建还存在制备复杂、耗时长等不足。II.药物递送方面，药物递送系统存在药物泄露、生物毒性等问题。III药物释放方面，药物递送系统难以实现药物的精准释放。因此，构建简便而有效的基于介孔二氧化硅的药物递送系统用于调控药物在胞内的精准释放，使释放的药物保持在治疗窗口内，改善癌症的精准治疗，将具有重要的研究意义和应用价值。
发明内容
针对现有技术存在的上述不足，本发明提出了一种可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统，选用可降解的、生物相容性好的DNA和介孔二氧化硅作为原料，制备得到具有氧化还原-响应的DNA包裹介孔二氧化硅作为药物递送系统，该系统具有良好的生物响应性能，可有效防止药物的泄露，增强药物的递送效率，增加细胞的摄取率，调控药物的精准释放，实现癌症的精准治疗。
本发明构建可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统的反应机理如图1所示，具体内容如下：
氨基化的介孔二氧化硅(MSNP)与羧基化的DNA(SI)发生缩合酰化反应，SI修饰在二氧化硅上；SI作为引发剂，驱动SM1与SM2K发生杂合链式反应，实现线性聚合；SM2K的侧链作为引发剂，驱动SM3与SM4发生杂合链式反应，实现支链聚合。两步的聚合使得在MSNP表面形成DNA壳层(MSNP@DNA)。DNA中嵌入双硫键(-S-S-)可使MSNP@DNA具有氧化还原-响应特性；在谷胱甘肽(GSH)的作用下，双硫键被打断，进而实现对药物的可控释放。调节DNA壳层中的双硫键密度可实现对药物的精准调控。通过合理设计，最终构建一种可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统。
根据上述原理，本发明采用如下的技术方案：
一种可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统的构建方法，包括以下步骤：
(1)将SI、EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)、NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)加入至PBS溶液中进行孵育，活化SI末端羧基；
(2)待步骤(1)中的SI末端羧基活化后，加入MSNP，孵育；
(3)待步骤(2)中的SI连接至MSNP后，加入SM1与SM2K，孵育。
(4)待步骤(3)中对MSNP进行线性聚合后，加入SM3与SM4，孵育，得到所述的可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统。
步骤(1)中，所述SI的核苷酸序列从5′至3′为
AAAAACCAAATCCATCCTCACCCTACTCC。
其中，羧基修饰在SI的5′端且有5个A残基，这样有利于MSNP与SI发生缩合酰化反应。
步骤(1)中，所述SI的浓度为4～10μM L-1；优选地，为7μM L-1。
步骤(1)中，所述EDC与NHS的摩尔比为1～3：1；优选地，为1：1。
步骤(1)中，所述PBS为pH＝7.4-7.8的PBS；优选地，为7.4。
步骤(1)中，所述孵育的温度为25～40℃；优选地，为37℃。
步骤(1)中，所述孵育时间为10～25分钟；优选地，为15～20分钟。
步骤(2)中，所述MSNP的浓度为0.2～1mg mL-1；优选地，为0.5mg mL-1。
步骤(2)中，所述孵育的温度为35～40℃；优选地，为37℃。
步骤(2)中，所述孵育的时间为4～10h；优选地，为6h。
步骤(3)中，所述SM1与SM2K均为具有发夹结构的DNA，SI可打开SM1的发夹结构，呈直链的SM1可打开SM2K的发夹结构，SM2K的主链可进一步打开另一条SM1的发夹结构，如此循环发生线性聚合。
步骤(3)中，加入SM1与SM2K的目的为在MSNP表面发生线性聚合，形成DNA壳层。
步骤(3)中，所述SM1的核苷酸序列为
CATCCTCACCCTACTCCTAAACCGGAGTAGGGTGAGGATGGATTTGG或
CCATCCTCACCCTACTCCTAA(S-S)ACCGGAGTAGGGTGAGGATGGATTTGG。
步骤(3)中，所述SM2K的核苷酸序列为
GGTTTAGGAGTAGGGTGAGGATGGCCAAATCCATCCTCACCCTACTCCACTTCCAACTTCCACTCCACTCACTCACC或
GGTTTAGGAGTAGGGTGAGGATGGCCA(S-S)AATCCATCCTCACCCTACTCCACTTCCAACTTCCACTCCACTCACTCACC。
步骤(3)中，所述SM1的浓度为5～10μM L-1；优选地，为8μM L-1。
步骤(3)中，所述SM2K的浓度为5～10μM L-1；优选地，为8μM L-1。
步骤(3)中，所述孵育的温度为35～40℃；优选地，为37℃。
步骤(3)中，所述孵育的时间为2～5h；优选地，为4h。
步骤(4)中，所述SM3与SM4均为具有发夹结构的DNA，SM2K侧链打开SM3的发夹结构，呈直链的SM3可打开SM4的发夹结构，呈直链的SM4可进一步打开另一条SM3的发夹结构，如此循环发生侧链性聚合。
步骤(4)中，加入SM3与SM4的目的为发生侧链聚合，形成致密DNA壳层。
步骤(4)中，所述SM3的核苷酸序列为
CCACTCCACTCACTCACCTTCACCGGTGAGTGAGTGGAGTGGAAGTTG或
CCACTCCACTCACTCACCTTC(S-S)ACCGGTGAGTGAGTGGAGTGGAAGTTG。
步骤(4)中，所述SM4的核苷酸序列为
GGTGAAGGTGAGTGAGTGGAGTGGCAACTTCCACTCCACTCACTCACC或
GGTGAAGGTGAGTGAGTGGAGTGGCAA(S-S)CTTCCACTCCACTCACTCACC。
步骤(4)中，所述SM3的浓度为5～10μM L-1；优选地，为8μM L-1。
步骤(4)中，所述SM4的浓度为5～10μM L-1；优选地，为8μM L-1。
步骤(4)中，所述孵育的温度为35～40℃；优选地，为37℃。
步骤(4)中，所述孵育的时间为5～15h；优选地，为10h。
具体地，所述步骤包括：
(1)将4～10μM L-1的SI与摩尔比为1～3：1的EDC和NHS加入到PBS中，在25～40℃温度下孵育10～25分钟。
(2)将上述步骤(1)的活化的SI与0.2～1mg mL-1氨基化的MSNP在35～40℃温度下振荡孵育4～10h。
(3)将上述步骤(2)中得到的MSNP-SI与5～10μM L-1SM1、5～10μM L-1SM2K，在35～40℃温度下孵育2～5h。
(4)将上述步骤(3)中线性聚合的MSNP与5～10μM L-1SM3、5～10μM L-1SM4，在35～40℃温度下孵育5～15h。
其中，步骤(1)中，SI的浓度优选为7μM L-1，EDC与NHS的摩尔比优选为1：1，PBS的pH＝7.4，孵育的温度优选为37℃，孵育的时间为15～20分钟条件最佳，这样有助于SI中羧基的活化。
其中，步骤(2)中，氨基化的MSNP的浓度优选为0.5mg mL-1，孵育的温度优选为37℃，孵育时间优选为6h条件最佳，这样SI与MSNP连接效果最好。
其中，步骤(3)中，SM1的浓度为8μM L-1，SM2K的浓度为8μM L-1；孵育的温度为37℃，孵育时间为4h条件最佳，这样有利于线性聚合。
其中，步骤(4)中，SM3的浓度为8μM L-1，SM4的浓度为8μM L-1；孵育的温度为37℃，孵育时间为10h条件最佳，这样有利于支链聚合。
本发明还提出了由上述构建方法制备得到的可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统。
本发明构建的药物递送系统具有氧化-还原响应特性，所述药物递送系统中的DNA壳层中的双硫键可被还原型物质打断，可实现药物的可控释放。
本发明构建的药物递送系统通过调控DNA壳层中双硫键的密度，调节DNA壳层的降解速率，进而调控药物释放动力学，有利于疾病的精准治疗。
所述疾病包括癌症、糖尿病等。
本发明所述的可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统的构建简易方便，原料来源丰富，生产成本低廉。
本发明所述的可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统显示了良好的生物相容性，解决了药物泄露、生物毒性等问题。
本发明还提出了所述可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统在药物的递送、药物的精准释放中的应用。
本发明还提出了所述可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统在癌症的精准治疗中的应用。
本发明所述的基于可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统可以用于小分子药物的递送。
本发明所述的基于可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统可以精准调控药物的释放。
本发明所述的基于可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统可调控其药物释放半衰期在8.34～4.44h之间。
本发明所述的基于可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统可以用于癌症治疗。
所述癌症包括宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌等。
本发明所述的基于可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统可以用于癌症治疗，具有如下特征：①优良的生物相容性；②低的药物泄露及生物毒性，高药物递送效率及细胞摄取率；③精准调控药物释放，增强癌症的精准治疗。
本发明所述的基于可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统，包括但不限于用于癌症治疗。
本发明所述的基于可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统，包括但不限于用于药物递送。
本发明所述的基于可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统，包括但不限于用于药物释放。
本发明所提供的可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的药物递送系统，构建方法简易方便，原料来源丰富，生产成本低廉。本发明所提供的可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统用于癌症治疗显示了优良的生物相容性，避免了药物泄露、生物毒性等问题，增强了药物的递送效率，增加了细胞摄取率，调控药物的精准释放，实现癌症的精准治疗。本发明所提供的可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的药物递送系统用于癌症的精准治疗，具有潜在的应用价值。
附图说明
图1是构建可调控药物精准释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统的机理图。
图2是本发明实施例2中介孔二氧化硅载药系统的透射电镜图。
图3是(实施例2中制备的凝胶)MSNP负载药物DOX的紫外-可见光谱图。
图4是(实施例2中制备的凝胶)介孔二氧化硅载药系统调控药物释放。
图5是介孔二氧化硅的细胞毒性实验。
图6是介孔二氧化硅载药系统负载DOX的细胞毒性实验。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
实施例1
(1)将7μM L-1的SI与摩尔比为1：1的EDC和NHS加入到pH＝7.4PBS中，在37℃温度下孵育20分钟，得到羧基的活化的SI。
(2)将上述活化的SI与0.5mgmL-1氨基化的MSNP在37℃温度下振荡孵育6h，得到MSNP-SI。
(3)将上述得到的MSNP-SI与8μM L-1SM1、8μM L-1SM2K，在37℃温度下孵育4h，得到线性聚合的MSNP。
(4)将上述线性聚合的MSNP与8μM L-1SM3、8μM L-1SM4，在37℃温度下孵育10h，制备得到DNA包裹的MSNP(MSNP@DNA)。
实施例2
对本发明实验例1中构建的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统进行透射电镜表征。
(1)吸取10μL实施例1制备的MSNP@DNA样品滴加至碳支持膜铜网，静止10分钟，用滤纸吸走溶液，使用红外灯将铜网烘干。
(2)将上述制备的样品进行透射电镜观测，观察其形貌特征。如图2所示，未包裹前，MSNP具有多孔结构，可负载小分子药物；DNA包裹后，MSNP表面具有～10nm厚度的壳层，说明DNA成功包裹MSNP。使用10mM的谷胱甘肽(GSH)与MSNP@DNA进行孵育5h，发现MSNP表面壳层消失，这说明GSH可打断双硫键，使DNA壳层裂解。这种氧化还原-响应特性赋予基于介孔二氧化硅的药物递送系统对药物的可控释放。
实施例3
本实验采用紫外-可见光光谱评估MSNP对化疗药物DOX负载情况。
(1)药物负载
将10mL0.5 mgmL-1的MSNP与20μM L-1的DOX在37℃温度下振荡孵育10h，离心洗涤三次，得到负载上DOX的MSNP。
(2)紫外-可见光光谱测定
使用紫外-可见光谱对MSNP、DOX及MSNP-DOX@DNA在300-700nm范围内扫描，观测其吸收特征峰。
(3)结果
如图3所示，MSNP-DOX@DNA及DOX在485nm处有DOX的特征峰，说明MSNP成功负载上化疗药物DOX。
实施例4
本实验采用荧光光谱评估MSNP的化疗药物DOX释放情况。
(1)合成四种含不同双硫键密度的MSNP@DNA
将实施例3中负载上DOX的MSNP进行DNA包裹，在SM1、SM2K、SM3及SM4插入双硫键，制备得到四种含双硫键密度的MSNP@DNA(双硫键密度增加的MSNP@DNA，依次命名为MSNP1，MSNP2，MSNP3和MSNP4)。
(2)DOX释放量的测定
0.5mgmL-1的MSNP1(或MSNP2，MSNP3和MSNP4)与含8mM L-1GSH的pH＝7.4PBS孵育，在不同时刻点(1，2，4，8，12，24，36，48h)，用荧光光谱监测释放的DOX在560nm处的荧光强度，从而测定DOX的释放量。
如图4所示，同一组别，随着时间的延长，DOX的释放量增加；在同一时间内，随着双硫键密度的增加，DOX的释放量增加，DOX释放量半衰期由8.336h缩短至4.442h。这说明通过调节DNA壳层中的双硫键密度，基于介孔二氧化硅的药物递送系统可调控药物的释放。
实施例5MSNP的生物相容性实验
用0.22μm无菌滤膜对MSNP进行过滤，除去凝胶中的细菌。将除菌的MSNP用于HeLa细胞毒性实验。
本实验采用MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)法测定细胞的活力。通过测定MSNP对细胞的毒性，进而评价MSNP的生物相容性。
(1)用无菌PBS充填96孔板的边缘孔；收集对数期HeLa细胞，调整HeLa细胞悬浮浓度为50000个/mL，每孔加入100μL细胞悬液。
(2)5％CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底，加入MSNP，终浓度为0.01，0.02，0.05，0.1，0.2及0.5mg L-1。
(3)将细胞放入培养箱中，在5％CO2，37℃孵育24h，倒置显微镜下观察。
(4)每孔加入20μL 5mg/mL MTT，继续培养4h。
(5)终止培养，吸去孔内培养液；每孔加入150μL二甲基亚砜，摇床低速振荡10分钟，之后用酶标仪检测OD490 nm各孔的吸光值。
(6)同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、培养基、MTT、二甲基亚砜)。
(7)计算细胞存活率(cell viability)：
细胞存活率＝(实验孔A值-调零孔A值)/(对照孔A值-调零孔A值)×100％
如图5所示，用HeLa细胞进行细胞毒性实验。实验结果显示：各组的细胞存活率都接近于100％。这说明MSNP对HeLa细胞的毒性非常小，也就是说明MSNP的生物相容性良好。
实施例6细胞毒性实验
用0.22μm无菌滤膜对四种含不同双硫键密度的MSNP1，MSNP2，MSNP3和MSNP4进行过滤，除去溶液中的细菌。将除菌的MSNP1，MSNP2，MSNP3和MSNP4用于HeLa细胞毒性实验。
本实验采用MTT法测定HeLa细胞的活力。通过测定MSNP-DOX对HeLa细胞的毒性，进而评价MSNP-DOX对肿瘤细胞HeLa的杀伤作用。
(1)用无菌PBS充填96孔板的边缘孔；收集对数期HeLa细胞，调整细胞悬浮浓度为50000个/mL，每孔加入100μL细胞悬液。
(2)5％CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底，加入MSNP1(或MSNP2，MSNP3和MSNP4)，DOX终浓度为0.6，1.25，2.5，5，10及20μg mL-1。
(3)将细胞放入培养箱中，在5％CO2，37℃下孵育24h，倒置显微镜下观察。
(4)每孔加入20μL 5mg/mL MTT，继续培养4h。
(5)终止培养，吸去孔内培养液；每孔加入150μL二甲基亚砜，摇床低速振荡10分钟，之后用酶标仪检测OD490 nm各孔的吸光值。
(6)同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、同浓度的MSNP、培养基、MTT、二甲基亚砜)。
(7)计算细胞存活率(cell viability)：
细胞存活率＝(实验孔A值-调零孔A值)/(对照孔A值-调零孔A值)×100％
如图6所示，用HeLa细胞进行细胞毒性实验。实验结果显示：四个组别的细胞存活率都是DOX浓度依赖性的，DOX浓度增加，细胞毒性增强；在DOX相同浓度情况下，MSNP裂解速率越快，即DOX释放越快，细胞毒性越强。四个组别的细胞半致死量依次为9.564，7.459，5.961及5.052μg mL-1，这说明通过基于介孔二氧化硅的药物递送系统调控药物的释放快慢来调控对肿瘤细胞的杀伤作用。
如上所述仅为本发明的几个具体实施例，并不用于限制本发明。凡在本发明的精神和原则之内，采用与其相同或相似方法所得到的可调控药物精准释放的基于介孔二氧化硅的药物递送系统用于癌症治疗，均在本发明保护范围内。
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ccatcctcac cctactccta assaccggag tagggtgagg atggatttgg 50
<210> 4
<211> 77
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ggtttaggag tagggtgagg atggccaaat ccatcctcac cctactccac ttccaacttc 60
cactccactc actcacc 77
<210> 5
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ggtttaggag tagggtgagg atggccassa atccatcctc accctactcc acttccaact 60
tccactccac tcactcacc 79
<210> 6
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ccactccact cactcacctt caccggtgag tgagtggagt ggaagttg 48
<210> 7
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
ccactccact cactcacctt cssaccggtg agtgagtgga gtggaagttg 50
<210> 8
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
ggtgaaggtg agtgagtgga gtggcaactt ccactccact cactcacc 48
<210> 9
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
ggtgaaggtg agtgagtgga gtggcaassc ttccactcca ctcactcacc 50

Claims (7)

1.一种可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统的构建方法，其特征在于，该方法的具体步骤为：
(1)将羧基化的DNA SI、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC、N-羟基琥珀酰亚胺NHS加入至PBS溶液中进行孵育，活化SI末端羧基；
其中，所述SI的浓度为4～10μM L-1；
所述EDC和NHS的摩尔比为1～3：1；
所述孵育的温度为25～40℃；
所述SI的核苷酸序列从5′至3′为AAAAACCAAATCCATCCTCACCCTACTCC；
(2)待所述步骤(1)中的SI末端羧基活化后，加入氨基化的介孔二氧化硅纳米颗粒MSNP，孵育；
其中，所述MSNP的浓度为0.2～1mg mL-1；
所述孵育的温度为35～40℃；
(3)待所述步骤(2)中的SI连接至MSNP后，加入SM1与SM2K，孵育；
其中，所述SM1的浓度为5～10μM L-1；
所述SM2K的浓度为5～10μM L-1；
所述孵育的温度为35～40℃；
所述SM1的核苷酸序列为
CCATCCTCACCCTACTCCTAA(S-S)ACCGGAGTAGGGTGAGGATGGATTTGG；
所述SM2K的核苷酸序列为
GGTTTAGGAGTAGGGTGAGGATGGCCA(S-S)AATCCATCCTCACCCTACTCCACTTCCAACTTCCACTCCACTCACTCACC；
(4)待所述步骤(3)中对MSNP进行线性聚合后，加入SM3与SM4，孵育，得到所述的可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统；
其中，所述SM3的浓度为5～10μM L-1；
所述SM4的浓度为5～10μM L-1；
所述孵育的温度为35～40℃；
所述SM3的核苷酸序列为
CCACTCCACTCACTCACCTTC(S-S)ACCGGTGAGTGAGTGGAGTGGAAGTTG；
所述SM4的核苷酸序列为
GGTGAAGGTGAGTGAGTGGAGTGGCAA(S-S)CTTCCACTCCACTCACTCACC。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述PBS的pH＝7.4-7.8。
3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述孵育的时间为10-25分钟。
4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述孵育的时间为4～10h。
5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述孵育的时间为2～5h。
6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述孵育的时间为5～15h。
7.如权利要求1-6之任一项所述方法构建得到的可调控药物释放的基于介孔二氧化硅的纳米药物递送系统。
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