CN110819679A - 一种评估cart细胞体内代谢的方法 - Google Patents

一种评估cart细胞体内代谢的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110819679A
CN110819679A CN201810889028.3A CN201810889028A CN110819679A CN 110819679 A CN110819679 A CN 110819679A CN 201810889028 A CN201810889028 A CN 201810889028A CN 110819679 A CN110819679 A CN 110819679A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
mouse
tumor
car
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810889028.3A
Other languages
English (en)
Inventor
刘雅容
史子啸
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Hrain Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Hrain Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Hrain Biotechnology Co Ltd filed Critical Shanghai Hrain Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201810889028.3A priority Critical patent/CN110819679A/zh
Publication of CN110819679A publication Critical patent/CN110819679A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
    • A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure

Abstract

本发明提供了一种评估CART细胞临床前药代的方法。具体发明为体内实验评估，系统的阐述了CART细胞进入临床前的药代学检测指标。

Description

一种评估CART细胞体内代谢的方法
技术领域
本发明涉及医药生物领域，具体涉及一种CART细胞制备方法。
背景技术
嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)T细胞是指经基因修饰后，能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段。CAR-T细胞回输治疗是当前肿瘤治疗中最明确有效的免疫治疗形式。大量研究表明，CAR-T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，显著改善患者的生存状况。
嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件，赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen，TAA)结合区(通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFV段)，一个胞外铰链区，一个跨膜区和一个胞内信号区。目标抗原的选择对于CAR的特异性、有效性以及基因改造T细胞自身的安全性来讲都是关键的决定因素。
CART细胞在做临床实验之前要系统的做药效、药代、药动、药理、毒理的评估，全面摸清CART细胞的安全性有效性。本发明系统阐述CART临床前药物代谢评估方法。
发明内容
本发明的一个方面提供一种评估CD19-CART细胞体内代谢方法包括体内实验评估方法。
本发明的第二方面提供了体内实验评估方法，包括：
(Ⅰ)抗人CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠给药模型；
(Ⅱ)抗人CD19 CART细胞液注射非荷瘤鼠给药模型；
(Ⅲ)抗鼠CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠模型。
本发明的第三方面提供了抗人CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠给药模型具体造模方法，包括小鼠尾静脉注射Raji淋巴瘤细胞建立疾病模型，24小时后尾静脉注射CAR阳性T细胞或相同细胞总数的对照细胞，分别于CAR-T/NT细胞注射后固定时间点采集小鼠外周血，流式细胞计数法检测T细胞百分比、CAR+细胞比例及CD19+肿瘤细胞比例，研究CAR-T细胞在NOG小鼠血液中的增殖、存续及与肿瘤生长的相关性。
本发明的第四方面提供了抗人CD19 CART细胞液注射非荷瘤鼠给药模型具体造模方法，包括每只小鼠尾静脉注射CAR阳性T细胞。注射CAR-T细胞后于固定时间点进行解剖。解剖取血液、骨髓、脾脏组织利用流式细胞仪检测其中T细胞含量和CAR的表达。
本发明的第五方面提供了抗鼠CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠模型具体造模方法为小鼠皮下注射A20肿瘤细胞建立疾病模型，待肿瘤体积达到100mm3左右时，模拟临床预处理方式采用环磷酰胺注射液腹腔注射对小鼠进行预处理。24h后尾静脉注射鼠源CAR-T细胞。观察期为给药后60天，评估内容包括：定期测量小鼠肿瘤大小；取各组织样品，流式检测T细胞比例和肿瘤细胞负荷。
本发明具有以下有益效果：本发明全面的评估CD19 CART细胞临床前体内代谢方法。
附图说明
图1抗人CD19CART细胞注射液药代学实验模型图
具体实施方式
实施例
本发明通过参考以下实验实施例进一步详细地进行描述。这些实施例仅出于说明性的目的提供，并不意欲为限制性的，除非另有规定。因此，本发明决不应被解释为限于以下实施例，而是应被解释为包括由于本文提供的教导变得显而易见的任何和全部的变化。本发明体外检测方法为常规实验方法即高通量测序、克隆形成实验、细胞增殖检测实验在本实施例里不介绍。实施例里介绍体内评估实验。
实施例1.抗人CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠给药模型
1.NOG小鼠，雌性，6周龄。分为NT细胞对照组、CAR-T组。每组10只小鼠。
2.尾静脉注射相应溶剂或CAR-T注射液，每只小鼠给药体积200μl。每只小鼠注射的细胞数量为3×106个CAR+细胞/kg。给药当天标记为0D。
3.分别于CAR-T/NT细胞注射后的3天、7天、10天、14天、17天、21天和24天采集小鼠外周血。
4.流式细胞计数法检测T细胞百分比、CAR+细胞比例及Raji(CD19+)肿瘤细胞比例，研究CAR-T细胞在NOG小鼠血液中的增殖、存续及与肿瘤生长的相关性。
本实施例结果显示CAR-T组中，CAR+比例随着T细胞比例的降低而降低，3天时为50％，于第14天降至20％，结果表明CAR-T细胞在体内不发生增殖，随着时间的延长，CAR-T细胞的含量降低。两组均在第14天检测到负荷的CD19+肿瘤细胞，在第14、17天时NT组肿瘤负荷均高于CAR-T组，说明CAR-T细胞可抑制外周血中肿瘤细胞生长。
实施例2.抗人CD19 CART细胞液注射非荷瘤鼠给药模型；
1.NOG小鼠，雌性，6周龄。分为溶媒细胞对照组1、CAR-T组，每组30只小鼠。
2.尾静脉注射相应溶剂或CAR-T注射液，每只小鼠给药体积200μl。细胞总数6.6×106个/只。
3.注射CAR-T细胞后于2周和4周，解剖取血液、骨髓、脾脏组织利用流式细胞仪检测其中T细胞含量和CAR的表达。
本实施例结果显示给药后2周和4周，小鼠的脾脏和血液中均能够检测到CAR-T细胞的存在。NOG鼠在无肿瘤负荷的情况下，CAR-T细胞主要分布在外周血及脾脏，很少浸润到骨髓中。
实施例3.抗鼠CD19 CART细胞液注射荷瘤鼠模型
1. 6周龄Balb/c雄性小鼠20只
2.对小鼠皮下注射5×106个细胞量的A20肿瘤细胞建立疾病模型，待肿瘤体积达到100mm3左右时，模拟临床预处理方式采用环磷酰胺注射液腹腔注射对小鼠进行预处理，剂量为100mg/kg。
3. 24h后尾静脉注射4×106个鼠源CAR-T细胞，总细胞数为3×107个/只。
4.观察期为给药后60天，评估内容包括：定期测量小鼠肿瘤大小；取各组织样品，流式检测T细胞比例和肿瘤细胞负荷。
本实施例结果显示CAR-T给药后，各组织中B细胞比例均下降，至给药后30天，各组织中B细胞比例仍维持在较低水平，说明CAR-T仍在体内发挥对B细胞的靶向作用。

Claims (8)

1.一种评估CD19-CART细胞体内代谢方法包括体内实验评估方法。
2.权利要求1所述体内实验评估包括抗人CD19CART细胞液注射荷瘤鼠给药模型、抗人CD19CART细胞液注射非荷瘤鼠给药模型。
3.权利要求1所述体内实验评估包括抗鼠CD19CART细胞液注射荷瘤鼠模型。
4.权利要求2所述的鼠为NOG小鼠。
5.权利要求2所述抗人CD19CART细胞液注射荷瘤鼠给药模型具体造模方法为小鼠尾静脉注射Raji淋巴瘤细胞建立疾病模型，24小时后尾静脉注射CAR阳性T细胞或相同细胞总数的对照细胞，分别于CAR-T/NT细胞注射后固定时间点采集小鼠外周血，流式细胞计数法检测T细胞百分比、CAR+细胞比例及CD19+肿瘤细胞比例，研究CAR-T细胞在NOG小鼠血液中的增殖、存续及与肿瘤生长的相关性。
6.权利要求2所述抗人CD19CART细胞液注射非荷瘤鼠给药模型具体造模方法为每只小鼠尾静脉注射CAR阳性T细胞。注射CAR-T细胞后于固定时间点进行解剖。解剖取血液、骨髓、脾脏组织利用流式细胞仪检测其中T细胞含量和CAR的表达。
7.权利要求3所述抗鼠CD19CART细胞液注射荷瘤鼠模型具体造模方法为小鼠皮下注射A20肿瘤细胞建立疾病模型，待肿瘤体积达到100mm3左右时，模拟临床预处理方式采用环磷酰胺注射液腹腔注射对小鼠进行预处理。24h后尾静脉注射鼠源CAR-T细胞。观察期为给药后60天，评估内容包括：定期测量小鼠肿瘤大小；取各组织样品，流式检测T细胞比例和肿瘤细胞负荷。
8.权利要求3所述的抗鼠CD19CART细胞注射液给药模型，注射的是免疫正常Balb/c小鼠。
CN201810889028.3A 2018-08-07 2018-08-07 一种评估cart细胞体内代谢的方法 Pending CN110819679A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810889028.3A CN110819679A (zh) 2018-08-07 2018-08-07 一种评估cart细胞体内代谢的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810889028.3A CN110819679A (zh) 2018-08-07 2018-08-07 一种评估cart细胞体内代谢的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110819679A true CN110819679A (zh) 2020-02-21

Family

ID=69533716

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810889028.3A Pending CN110819679A (zh) 2018-08-07 2018-08-07 一种评估cart细胞体内代谢的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110819679A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105392888A (zh) * 2013-03-16 2016-03-09 诺华股份有限公司 使用人源化抗cd19嵌合抗原受体治疗癌症
CN106619719A (zh) * 2016-12-27 2017-05-10 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种检测嵌合抗原受体t细胞对肝癌细胞抑制作用的模型和方法
CN107567461A (zh) * 2014-12-29 2018-01-09 诺华股份有限公司 制备嵌合抗原受体表达细胞的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105392888A (zh) * 2013-03-16 2016-03-09 诺华股份有限公司 使用人源化抗cd19嵌合抗原受体治疗癌症
CN107567461A (zh) * 2014-12-29 2018-01-09 诺华股份有限公司 制备嵌合抗原受体表达细胞的方法
CN106619719A (zh) * 2016-12-27 2017-05-10 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种检测嵌合抗原受体t细胞对肝癌细胞抑制作用的模型和方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
D SOMMERMEYER 等: "Chimeric antigen receptor-modified T cells derived from defined CD8+ and CD4+ subsets confer superior antitumor reactivity in vivo", LEUKEMIA, vol. 30, pages 492 - 500, XP037784520, DOI: 10.1038/leu.2015.247 *
孟淑芳 等: ""CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点"", 中国药事, vol. 32, no. 6, pages 847 - 848 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7451627B2 (ja) キメラ受容体及びその使用方法
Kuhn et al. Therapeutic anti-CD3 monoclonal antibodies: from bench to bedside
KR102595561B1 (ko) Pd-1 억제제를 투여함으로써 피부암을 치료하는 방법
CN109069539A (zh) 用于癌症治疗的联合免疫疗法和细胞因子控制疗法
US20220273722A1 (en) Anti-egfr/high affinity nk-cells compositions and methods for chordoma treatment
CN104884095A (zh) Cart19用于耗减正常b细胞以诱导耐受的用途
JP2018524981A (ja) 患者由来異種移植片を用いた非ｈｌａマッチヒト化ｎｓｇマウスモデル
JP2020528744A (ja) がん細胞を標的化するキメラ抗原受容体のための方法および組成物
CN103619882A (zh) 对hla-a2呈递的wt1肽特异的t细胞受体样抗体
EP3016683B1 (en) Soluble mic neutralizing monoclonal antibody for treating cancer
US20220143085A1 (en) Car t-cells for the treatment of cd1a-positive cancer
JP2022025136A (ja) 幹細胞増強治療法
Qi et al. Cellular kinetics: A clinical and computational review of CAR-T cell pharmacology
Schmidts et al. Tandem chimeric antigen receptor (CAR) T cells targeting EGFRvIII and IL-13Rα2 are effective against heterogeneous glioblastoma
WO2019081591A1 (en) NK CELLS AND LYMPHOCYTES AND USES THEREOF
KR20230121114A (ko) 암의 치료를 위한 다중특이적 항체
CN109937051A (zh) 治疗tim-3升高的方法
CN110819679A (zh) 一种评估cart细胞体内代谢的方法
Saito et al. Clinical relevance of recipient leukocyte infusion as antitumor therapy following nonmyeloablative allogeneic hematopoietic cell transplantation
JP2022530541A (ja) Ｂｃｍａを標的とするｃａｒ ｔ細胞及びその使用
Zeven et al. Development and evaluation of nanobody tracers for noninvasive nuclear imaging of the immune-checkpoint TIGIT
EP4349368A1 (en) Therapy using combination of anti-cd26 antibody and immune checkpoint inhibitor
Criado-Moronati et al. P06. 14 Characterization of tumor-infiltrating T cells by highly multiplexed immunofluorescence imaging
Xu et al. Sensitization to minor antigens is a significant barrier in bone marrow transplantation and is prevented by CD154: CD40 blockade
Boyiadzis et al. NK cells in cancer immunotherapy: three decades of discovery

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 201210 9th floor, building 1, Lane 1238, Zhangjiang Road, Pudong New Area, Shanghai

Applicant after: Shanghai Hengrun Dasheng Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 201210 9th floor, building 1, Lane 1238, Zhangjiang Road, Pudong New Area, Shanghai

Applicant before: SHANGHAI HRAIN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination