CN110818713A - 苦参碱α-酮胺类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一类具有式I所示结构的苦参碱α‑酮胺类化合物及其制备方法，试验表明该类化合物能有效抑制TNF‑α和激活NK细胞免疫功能的活性，可用于治疗由TNF‑α水平异常及NK细胞免疫功能紊乱介导的自身免疫性疾病、炎性疾病、神经退行性疾病和肿瘤。

Description

苦参碱α-酮胺类化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一类具有抑制TNF-α过表达和或调节NK细胞免疫活性的苦参碱类化合物及其药学上可接受的盐。本发明还涉及这些化合物的制备方法，以及这些化合物在人类或其它哺乳动物的与TNF-α通路和或NK细胞免疫相关的自身免疫性疾病、肿瘤、骨髓纤维化症以及急/慢性移植物抗宿主反应疾病的用途。
背景技术
TNF-α（肿瘤坏死因子）是上世纪70年代发现的一类具有多种生物效应的细胞因子，主要由活化的单核细胞/巨噬细胞/T细胞分泌，通过和细胞膜上的特异性受体结合，如通过激活Caspase蛋白酶、JNK和转录因子NF-κB三条信号通路，从而引起多个不同的生物进程，并最终实现其调控细胞的生长凋亡、肿瘤形成、免疫、炎症以及应激反应等生物学功能。而不适当的TNF-α产生以及TNF-α信号的持续激活将导致系统性人类病理进程，包括全身炎症反应综合征、炎性肠病、风湿性关节炎、神经退行性疾病、脑型疟疾、糖尿病、肿瘤、骨质疏松症、同种异体移植排斥、多发性硬化症、HBV、HCV和HIV等 (Brenner D. et. al.Regulation of tumor necrosis factor signaling: live or let die. Nat Rev Immunol. 2015, 15, 362)。因此，开发TNF-α调节剂一直以来备受人们世界各国药物研究工作者的关注。
NK细胞是具有多种免疫学功能的淋巴样细胞，其形态与T 细胞和B 细胞不同，体积较大，约占外周血淋巴细胞的10%～15%。人的NK细胞一般指CD3－CD56 + 淋巴细胞，根据CD56在NK 细胞表面表达密度的差异，可将NK细胞分为CD56dim和CD56bright 两个亚群。CD56dim亚群主要存在于外周血和脾脏中，可以通过表达穿孔素的方式来杀伤肿瘤，CD56bright亚群主要存在于淋巴结、扁桃体中，可以分泌干扰素γ、白细胞介素(IL) 12、15、18 等细胞因子来实现免疫功能，杀伤肿瘤。NK 细胞对靶细胞的识别无MHC 限制性，不依赖于抗体，无需致敏就可以发挥杀伤肿瘤和病毒的功能，具有较广的抗瘤谱。尽管NK细胞并不需要肿瘤相关抗原识别来调整抗肿瘤的响应，但NK细胞同样存在免疫检查点的激活或抑制机制。而肿瘤细胞表达的针对NK细胞免疫检查点的配体如杀伤细胞免疫球蛋白类似受体（KIRs）、c型凝集素受体（NKG2A/CD94）、白细胞免疫球蛋白类似受体（LILRs）、常见的免疫检查点受体（PD-1、TIM-3、LAG-3、TIGIT），可以帮助肿瘤细胞逃避NK细胞的杀伤。因此，利用特定手段激活NK细胞使其重新识别肿瘤细胞，将是有效的抗肿瘤策略。
苦参碱类成分是从中药苦参、苦豆根及山豆根中发现喹诺里西啶类生物碱，主要包括苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱和槐胺碱等。研究发现，苦参碱具有激活NK细胞杀伤肿瘤细胞的作用(Xuzhang Lu. et. al. Matrine increases NKG2D ligand ULBP2 inK562 cells via inhibiting JAK/STAT3 pathway: a potential mechanism underlyingthe immunotherapy of matrine in leukemia. Am J Transl Res. 2015, 7, 1838)。然而，苦参碱类成分的有效性和成药性仍然不足，如有效干预疾病模型TNF-α、IL-2、IL-γ等炎症细胞因子水平的剂量达到了0.5 M，而其毒性剂量也在1~2 M的水平，导致临床治疗安全窗口较窄，从而极大限制了它们在临床上的广泛有效应用。因此，如何提高苦参碱类成分的有效性、安全性、扩大其治疗窗口，具有重要研究意义。
发明内容
本发明的目的是提供一类新型苦参碱α-酮胺类化合物。
本发明的另一目的是提供该类化合物的制备方法。
本发明的再一目的是提供苦参碱α-酮胺类化合物的用途，该类化合物对TNF-α水平异常和或NK细胞免疫抑制有明显的干预作用，可用于预防和/或治疗TNF-α水平异常和或NK细胞抑制引起相关疾病。
本发明提供一类新型结构的苦参碱α-酮胺类化合物或其可药用的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物，这些化合物具有通式(I)所示的结构：
Figure 826138DEST_PATH_IMAGE002
式中，
R1、R2、R3和R4分别独立地选自下组基团：H、D、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、巯基、C0~C8烷氧甲酰基C1~C8烷氧基、C1~C8烷磺酰基、C1~C8烷磺酰胺基、C0~C8烷胺基磺酰基、C1~C8烷基、卤代C1~C8烷基、卤代C1~C8烷氧基、C0~C8烷乙炔基、C1~C8烷氧基、C1~C8烷酰氧基、C1~C8烷氧C1~C8烷氧基、C1~C8烷氧C1~C8烷基、C1~C8烷胺基、C0~C8烷胺C1~C8烷基、芳基、芳C1~C8烷胺C1~C8烷基、脒基、胍基、芳磺酰胺基、芳胺基磺酰基、芳甲酰基、芳C1~C8烷胺基、芳C1~C8烷酰胺基、C1~C8烷氧甲酰基、C1~C8烷酰胺基、C1~C8烷胺基、C0~C8烷胺甲酰硒基、C0~C8烷胺甲酰胺基、C0~C8烷胺基甲酰基、C1~C8烷胺基甲酰氧基、芳胺基甲酰胺基、芳胺基甲酰基、芳C1~C8烷胺基甲酰基、芳胺基甲酰氧基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、喹啉基、嘧啶基、嘧啶氨基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡咯基或不存在；其中，R1、R2、R3和R4所述芳基为苯基或者被1-4个选自卤素、羟基、硝基、氰基、氨基、三氟甲基、羧基、C0~C8烷胺磺酰基、N-亚甲基吗啉、C1~C8烷磺酰胺基、C1~C8烷基、卤代C1~C8烷氧基、C1~C8烷氧基中的基团所取代的苯基；
X为：S或O；
Y为：O或不存在；
Z1和Z2分别独立地选自下组基团：SO2、C=O、C=S、C=NR5、N=CR6、COCO、CH2CO、CH(CH3)CO、CH2、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、H、D或不存在；其中，R5选自H、C1~C8烷氧基；R6选自H、C1~C8烷基；
W1和W2分别独立地选自：N或C；其中，W1和W2为N时，R1、R3为不存在；
虚线为：化学键或不存在。
优选的，本发明提供通式(I-a)和(I-b)结构化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物：
Figure 212120DEST_PATH_IMAGE004
式(I-a)和(I-b)中，
R1、R2、R3和R4分别独立地为选自下组基团：H、D、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、巯基、C0~C8烷氧甲酰基C1~C8烷氧基、C1~C8烷磺酰基、C1~C8烷磺酰胺基、C0~C8烷胺基磺酰基、C1~C8烷基、卤代C1~C8烷基、卤代C1~C8烷氧基、C0~C8烷乙炔基、C1~C8烷氧基、C1~C8烷酰氧基、C1~C8烷氧C1~C8烷氧基、C1~C8烷氧C1~C8烷基、C1~C8烷胺基、C0~C8烷胺C1~C8烷基、芳基、芳C1~C8烷胺C1~C8烷基、脒基、胍基、芳磺酰胺基、芳胺基磺酰基、芳甲酰基、芳C1~C8烷胺基、芳C1~C8烷酰胺基、C1~C8烷氧甲酰基、C1~C8烷酰胺基、C1~C8烷胺基、C0~C8烷胺甲酰硒基、C0~C8烷胺甲酰胺基、C0~C8烷胺基甲酰基、C1~C8烷胺基甲酰氧基、芳胺基甲酰胺基、芳胺基甲酰基、芳C1~C8烷胺基甲酰基、芳胺基甲酰氧基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、喹啉基、嘧啶基、嘧啶氨基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡咯基或不存在；其中，R1、R2、R3和R4所述芳基为苯基或者被1-4个选自卤素、羟基、硝基、氰基、氨基、三氟甲基、羧基、C0~C8烷胺磺酰基、N-亚甲基吗啉、C1~C8烷磺酰胺基、C1~C8烷基、卤代C1~C8烷氧基、C1~C8烷氧基中的基团所取代的苯基；
X为：S或O；
Y为：O或不存在；
Z1和Z2分别独立地选自下组基团：SO2、C=O、COCO、CH2CO、CH(CH3)CO、CH2、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、H、D或不存在；
W1和W2分别独立地选自：N或C；其中，W1和W2为N时，R1、R3为不存在；
虚线为：化学键或不存在。
如本文所用，术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
如本文所用，术语“卤代”可以是单卤代，也可以是多卤代。
如本文所用，术语“烷磺酰基”是指直链或支链或环状饱和烃磺酰基，所述环状饱和烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷磺酰胺基”是指直链或支链或环状饱和烷烃磺酰胺基，所述环状饱和烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷胺基磺酰基”是指N-单取代或者二取代的直链或支链或环状饱和烷烃胺基磺酰基，所述环状饱和烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷胺基甲酰基”是指N-单取代或者二取代的直链或支链或环状饱和烷烃胺基甲酰基，所述环状饱和烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷基”是指直链或支链直链或支链或环状饱和烃基，所述环状饱和烷烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷氧基”是指直链或支链或环状饱和烃氧基，所述环状饱和烷烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷乙炔基”是指直链或支链或环状饱和烃乙炔基，所述环状饱和烷烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷酰氧基”是指直链或支链或环状饱和烃酰氧基，所述环状饱和烷烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷胺基”是指N-单取代或者二取代的直链或支链或环状饱和烃胺基，所述环状饱和烷烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷氧甲酰基”是指直链或支链或环状饱和烃氧甲酰基，所述环状饱和烷烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷酰胺基”是指直链或支链或环状饱和烃酰胺基，所述环状饱和烷烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“烷胺基甲酰胺基、”是N-单取代或者二取代指直链或支链或环状饱和烃胺基甲酰胺基，所述环状饱和烷烃为3~8碳原子。
如本文所用，术语“立体异构体”是指一个或多个立体中心的手性不同的化合物。立体异构体包括对映异构体和非对映异构体。
如本文所用，所述“哌嗪基、吗啉基、吡咯基、吡唑基、吡咯基、咪唑基、嘧啶氨基”如无特殊说明，取代连接位点均在N上。
如本文所用，所述“吡啶基、嘧啶基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡嗪基、喹啉基”如无特殊说明，取代连接位点均在C上。
本发明所述的化合物有立体异构体存在的情况下，本发明包括化合物的所有立体异构体。
本发明还包括所述化合物中的任何一个或多个氢原子被其稳定同位素氘取代而产生的氘代化合物。
如本文所用，术语“代谢物”是指药物分子在体内所经历的化学结构的变化后产生的活性物质，该活性物质一般为前述药物分子的衍生物，其还可被化学修饰。
如本文所用并且除非另有规定，术语“晶型（polymorph）”是指在结晶时，分子在晶格空间的排列不同而形成的一种或多种晶体结构。
如本文所用，术语“溶剂化物”是指通式(I)化合物、其药学上可接受的盐、晶型、立体异构体、同位素化合物、代谢物或前药的一种晶体形式，它还包含一种或多种融入晶体结构中的溶剂分子。溶剂化物可包括化学计量量或非化学计量量的溶剂，并且溶剂中的溶剂分子可能以有序或非有序排列的形式存在。含有非化学计量量溶剂分子的溶剂化物可能是溶剂化物至少丢失一个（但并非全部）溶剂分子得到的。在一个特定实施例中，一种溶剂化物是一种水合物，意味着化合物的结晶形式进一步包括水分子，以水分子作为溶剂。
本发明的通式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物可以含有一个或多个不对称中心(“立体异构体”)。如本文所用，术语“立体异构体”是指对映异构体、非对映异构体、差向异构体（epimers）、内向-外向异构体（endo-exo isomers）、阻转异构体（atropisomers）、位向异构体（regioisomers）、顺式-和反式-异构体等在内的所有立体异构体。本文的“立体异构体”也包括前述各种立体异构体的“纯立体异构体”及“富集立体异构体”或“消旋体”。这些立体异构体可以通过不对称合成方法或手性分离法（包括但不限于薄层色谱、旋转色谱、柱色谱、气相色谱、高压液相色谱等）分离、纯化及富集，还可以通过与其它手性化合物成键（化学结合等）或成盐（物理结合等）等方式进行手性拆分获得。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指通式I化合物的非毒性酸盐。这些盐可在最终分离和纯化通式I化合物时原位制得、或分别将合适的有机或无机酸与碱性官能团反应制得。代表性的盐包括，但不限于：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘基磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、硫氰酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。
如本文所用，式“S=O、SO2、C=O、C=S、C=NR5、NR6=C、CH=CH、CH2CO、COCO、CH2、H、N”在本发明通式I和/或II结构中的化学键连接方式满足八隅体规则连接，例如S=O连接方式为
Figure 460698DEST_PATH_IMAGE005
、C=O连接方式为、CH=CH连接方式为
Figure 811225DEST_PATH_IMAGE007
、NR6=C连接方式为
Figure 601065DEST_PATH_IMAGE008
或
Figure 540202DEST_PATH_IMAGE009
。
本发明的部分优选的新型苦参碱α-酮胺类化合物如下所示。这些实施例举只对本发明做进一步说明，并不对本发明的范围构成任何限制。
Figure 207943DEST_PATH_IMAGE010
Figure 345664DEST_PATH_IMAGE011
Figure 807869DEST_PATH_IMAGE012
Figure 31040DEST_PATH_IMAGE013
其中众所周知任意上述列举的化合物的任意立构中心在未明示时可以是绝对(R)-或(S)-构型，也可以是二者的外消旋体混合物。本发明涉及：这些化合物的外消旋混合物，富集任一种对映体的混合物，以及任一种分离的对映体。对于本发明的范围，应当理解为，所述外消旋混合物指两种R和S对映体50%:50%的混合物，所述分离的对映体应理解为纯的对映体（即100%）或者高度富集某种对映体（纯度≥98%、≥95%、≥90%、≥88%、≥85%、≥80%）的混合物。
本发明还提供上述新型苦参碱α-酮胺类化合物可药用的盐。本发明可药用的盐可使用本领域熟知的标准程序获得，即由苦参碱α-酮胺类化合物与合适的酸反应得到的盐。所述酸可为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、扁桃酸、抗坏血酸、马来酸、酒石酸、苯磺酸、甲磺酸或羟乙磺酸。
根据本发明的第二方面，提供上述苦参碱类化合物或其可药用的盐的制备方法，该方法包括下列方法制备。
以下缩写应用于整个说明书和实施例中：
Ac 乙酰基；AcOH 乙酸；Base 有机碱或无机碱；DMF N,N-二甲基甲酰胺；DBU 1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯；DDQ 二氯二氰基苯醌；EA 乙酸乙酯；EtOH 乙醇；HA 有机酸或者无机酸，如盐酸、硫酸、马来酸、酒石酸等；H2O2 双氧水；I2 碘；LC-MS 液相色谱-质谱；NaN3 叠氮化钠；NMR 核磁；TLC 薄层层析；TMSI 三甲基碘硅烷；TMEDA N,N,N,N-四甲基乙二胺；V 溶液体积。
本发明式(I)化合物可按照如下通用方法制备：
Figure 502473DEST_PATH_IMAGE014
式I-a结构类型化合物合成是以苦参碱或槐定碱为原料，经步骤1在其羰基α位（苦参碱或槐定碱的14位）卤代后分别得到关键中间体M-1和M-1’，然后分别经步骤2叠氮取代反应得到M-2和M-2’，之后再经步骤3叠氮还原分别得到关键中间体M-3和M-3’；M-3和M-3’ 经步骤4分别与N-甲酰甲酯基取代邻苯二甲酰亚胺或取代邻苯二甲酸酐反应得到取代邻苯二甲酰亚胺苦参碱类化合物和取代邻苯二甲酰亚胺槐定碱类化合物；M-3和M-3’ 经步骤5分别与取代邻甲酸甲酯基苄溴反应得到取代异吲哚啉-1-酮苦参碱和取代异吲哚啉-1-酮槐定碱类化合物；M-3和M-3’ 经步骤6分别与取代芳甲酸或取代芳磺酸反应得到取代芳甲（磺）酰苦参碱和取代芳甲（磺）酰槐定碱类化合物；M-3和M-3’经步骤7分别与取代邻溴苯乙酸缩合后再经分子内关环反应得到取代吲哚酮苦参碱和取代吲哚酮槐定碱类化合物。
在步骤1中，所用溶剂包括但不限于四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、甲苯、乙醚或上述溶剂的混合溶剂；反应加入有机碱如三乙胺、二异丙基乙胺或TMEDA作碱；反应加入三甲基卤硅烷如三甲基碘硅烷(TMSI)、三甲基氯硅烷(TMSCl)等，反应温度从-20 oC～室温；反应时间约需0.5～1小时；然后再加入I2或N-碘代丁二酰亚胺，继续反应时间约需0.5～6小时；反应完成后10%的硫代硫酸钠淬灭，经常规处理得到M-1。
在步骤2中，所用溶剂包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈或水与C1～C18羧酸、芳基酸、芳烷基酸、C1～C6烷基磺酸或无机酸的混合溶剂；加入叠氮化物如NaN3，反应温度0 oC～80 oC；反应完成后经常规处理得到关键中间体M-2。
在步骤3中，还原体系为PPh3、Pd/C-H2或Pd/C-HCOONH4体系；所用溶剂包括但不限于C1～C6烷基醇，N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、四氢呋喃、水或上述溶剂的混合溶剂；还原反应温度从0 oC～100 oC；反应完成后经常规处理得到中间体M-3。
在步骤4中，与N-甲酰甲酯基取代邻苯二甲酰亚胺或取代邻苯二甲酸酐反应；所用溶剂包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃或上述溶剂的混合溶剂；所用碱为：三乙胺、二异丙基乙胺、TMEDA；取代反应温度从0 oC～150 oC；反应时间约需1～24小时；反应完成后经常规处理得到目标产物I-a和I-b。
在步骤5中，与取代邻甲酸甲酯基苄溴反应；所用溶剂包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃或上述溶剂的混合溶剂；所用碱为：三乙胺、二异丙基乙胺、N,N,N,N-四甲基乙二胺；取代反应温度从0 oC～150 oC；反应时间约需1～24小时；反应完成后经常规处理得到目标产物I-a和I-b。
在步骤6中，所用溶剂包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃或上述溶剂的混合溶剂；与取代芳甲酰氯或取代芳磺酰氯反应；所用碱为：三乙胺、二异丙基乙胺、N,N,N,N-四甲基乙二胺；取代反应温度从0 oC～150 oC；反应时间约需1～24小时；反应完成后经常规处理得到目标产物I-a。
在步骤7中，所述分子内关环反应为Ullman偶联反应机理，即在铜试剂如CuI、CuBr和配体如氨基酸、邻苯二胺及糖胺以及无机碱如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯的作用下，得到目标产物I-a。所用溶剂包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃或上述溶剂的混合溶剂。
式I-a和I-b结构中含有氨基取代基化合物合成是以其硝基取代类化合物为原料经[H]还原体系反应得到。在Pd/C-[H]体系中，所用溶剂包括但不限于C1～C6烷基醇，N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、四氢呋喃、水或上述溶剂的混合溶剂；还原体系为Pd/C-H2或Pd/C-HCOONH4或NaBH4或KBH4或LiBH4体系；还原反应温度从0 oC～100 oC；反应时间约需1～24小时；反应完成后经常规处理得到M-3。
式I-a和I-b结构类型化合物中的氮氧化合物的合成分别是以I-a或I-b结构类型化合物为起始原料，经过氧化反应得到。在该氧化反应中，溶剂为：N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、二氯甲烷、水、四氢呋喃或上述溶剂的混合溶剂；氧化化试剂可以为双氧水(H2O2)、间氯过氧化苯甲酸（m-CPBA）；反应温度从0 oC～150 oC；反应时间约需1～4小时；反应完成后经常规处理得到目标产物。
式I-a和I-b结构中13,14-去氢苦参碱类化合物合成分别是以I-a或I-b结构类型化合物为起始原料，经DDQ脱氢氧化反应得到。
式I-a和I-b结构类型化合物与HA成盐后得到苦参碱类化合物可药用的盐。HA为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、酒石酸、苯磺酸、甲磺酸或羟乙磺酸。
具体地，根据本发明的方法，以苦参碱为原料，经反应式a)、b)、c)和d)所示方法，得到系列不同结构类型的苦参碱类化合物。反应过程通常用TLC和LC-MS来检测反应完成程度，反应完毕后一般用甲基叔丁基醚、乙酸乙酯或二氯甲烷等溶剂萃取，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水洗，经无水硫酸钠或者硫酸镁干燥，低温减压下除去溶剂。关键中间产物及最终产物用核磁共振NMR及质谱MS-ESI或HRMS- ESI确认。
根据本发明的第三方面，式(I)的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物可用于多种用途，包括但不限于用于制备治疗或预防由TNF-α水平异常和或NK细胞免疫抑制导致相关的疾病、病症或病况的药物。相应地，它们可作为TNF-α抑制剂和或NK细胞免疫抑制引起相关疾病，如自身免疫性疾病、神经退行性疾病、血液肿瘤、实体肿瘤、骨髓纤维化症以及急/慢性移植物抗宿主反应疾病的药物中的应用。所述自身免疫性疾病包括：风湿性关节炎、炎性肠道疾病、糖尿病、银屑病、强制性脊柱炎、麻风结节性红斑、红斑狼疮以及包括HBV、HCV、HIV在内的其他一些传染疾病；所述神经系统退行性疾病指的是阿尔茨海默症、老年痴呆、帕金森、多发性硬化症、亨廷顿病、肌萎缩性侧索硬化（ALS）、不同类型脊髓小脑共济失调（SCA）、Pick病；所述血液肿瘤指的是骨髓增生异常综合征、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、慢性粒单核细胞白血病、T 细胞淋巴瘤、红系淋巴瘤、成单核细胞和单核细胞白血病、髓性白血病、骨髓纤维化、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性大B 细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、中枢神经系统淋巴瘤；所述实体肿瘤指的是肝癌、肾癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、乳头状和滤泡状甲状腺癌、成胶质细胞瘤、胶质肉瘤、恶性胶质瘤、难治性浆细胞瘤、睫状体和慢性黑色素瘤、虹膜黑色素瘤、复发性两眼间黑色素瘤、眼外延伸黑色素瘤、脑肿瘤、脑膜瘤、脊髓肿瘤、甲状腺癌、非小细胞肺癌、皮肤癌、星状细胞瘤。
有益效果
本发明设计并合成了一类新型结构的苦参碱α-酮胺类化合物，进一步药理研究发现，相对于苦参碱，该类化合物有着更优的抑制TNF-α过表达和NK细胞免疫激活作用，显示出作为一种新型小分子TNF-α抑制剂和或NK细胞免疫激活剂的应用前景。
附图
图1是A549移植瘤裸小鼠模型给药期间体重的变化情况。
图2是A549移植瘤裸小鼠模型给药组的体内肿瘤抑瘤率。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐释，但不限制本发明。本发明的实验操作具有通用性，不限于以下实施例中提到的具体化合物。
下述制备例中，1H-NMR用Varian Mercury AMX300型仪测定。MS用VG ZAB-HS或VG-7070型以及Esquire 3000Plus-01005测定。所有反应溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按照标准方法干燥处理获得。除说明外，所有反应均是在氩气保护下进行并用TLC跟踪，后处理时均经饱和食盐水和无水硫酸钠干燥过程。产品的纯化除另有说明外均使用硅胶（200-300目）的柱色谱纯化。
实施例1 化合物M-3的合成
Figure 993235DEST_PATH_IMAGE015
制备步骤1：关键中间体M-1合成
在冰浴搅拌的条件下，向含有苦参碱（4.96 g, 20 mmol）和三乙胺（4.04 g, 40 mmol）的二氯甲烷溶液（200 mL）中慢慢加入三甲基氯硅烷（2.60 g, 24 mmol）反应1 h后加入碘（6.10 g，24 mmol）并继续反应3~5 h至完全。TLC检测反应完成后，加水200 ml 10%的硫代硫酸钠溶液淬灭，然后加入二氯甲烷 (200 mL×3) 萃取，有机相依次用饱和碳酸氢钠、食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压蒸干后经硅胶柱色谱纯化（V氯仿:V甲醇=30:1~10:1），得到M-1（6.88 g，收率92%）。MS-ESI [M+H]+ 375.1 (375.1)。
制备步骤2：关键中间体M-2合成
在0 oC搅拌的条件下，向含有M-1（3.74 g, 10 mmol）和0.67 mL的乙酸的DMF溶液（38mL）中慢慢加入含有叠氮化钠（1.62 g, 25 mmol）的水溶液6.7 mL并继续反应至完全。反应完成后，然后于-10 oC下加入碘（3.05 g，12 mmol）并继续反应5 h至完全。反应完成后，加水100 ml 冰水溶液，然后加入二氯甲烷 (30 mL×2) 萃取，有机相依次用饱和碳酸氢钠、食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压蒸干后经硅胶柱色谱纯化（V氯仿:V甲醇=60:1~20:1），得到M-2（1.88 g，收率65%）。HRMS-ESI: m/z calcd for C15H23N5O: 289.1903,found [M+H]+ 290.1981；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.28 (dd, J = 12.9, 4.4 Hz,1H), 3.86 (dd, J = 11.1, 5.3 Hz, 1H), 3.76 (td, J = 10.9, 5.4 Hz, 1H), 3.07(t, J = 12.8 Hz, 1H), 2.81–2.69 (m, 2H), 2.17–2.10 (m, 1H), 2.05–1.97 (m,2H), 1.96–1.78 (m, 3H), 1.73–1.47 (m, 6H), 1.43–1.34 (m, 5H)。
制备步骤3：M-3的合成
向含有M-2（1.44 g, 5 mmol）的25 mL甲醇溶液中加入10%的Pd/C，然后置于H2（50Psi）氛围中反应过夜。反应完成后，过滤，所得滤液减压蒸干后得到M-3（1.33 g）。HRMS-ESI: m/z calcd for C15H25N3O: 263.1998, found [M+H]+ 264.2072；1H NMR (400 MHz,CD3OD) δ 4.29 (dd, J = 12.9, 4.4 Hz, 1H), 3.89–3.76 (m, 1H), 3.46–3.35 (m,1H), 3.15–3.05 (m, 1H), 2.90–2.83 (m, 2H), 2.37–1.97 (m, 6H), 1.71–1.60 (m,6H), 1.58–1.37 (m, 5H)。
实施例2 化合物M-3’的合成
Figure 891920DEST_PATH_IMAGE016
制备步骤1：关键中间体M-1’合成
在冰浴搅拌的条件下，向含有槐定碱（4.96 g, 20 mmol）和三乙胺（4.04 g, 40 mmol）的二氯甲烷溶液（400 mL）中慢慢加入三甲基碘硅烷（2.00 g, 10 mmol）反应1 h后加入碘（6.10 g，24 mmol）并继续反应3~5 h至完全。TLC检测反应完成后，加水200 mL 10%的硫代硫酸钠溶液淬灭，然后加入二氯甲烷 (200 mL×3) 萃取，有机相依次用饱和碳酸氢钠、食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压蒸干后经硅胶柱色谱纯化（V氯仿:V甲醇=30:1~10:1），得到M-1’（6.72 g，收率90%）。MS-ESI [M+H]+ 375.1 (375.1)。
制备步骤2：关键中间体M-2’合成
在0 oC搅拌的条件下，向含有M-1’（3.74 g, 10 mmol）和0.67 mL的乙酸的DMF溶液（38mL）中慢慢加入含有叠氮化钠（1.62 g, 25 mmol）的水溶液6.7 mL并继续反应至完全。TLC检测反应完成后，加水100 ml 冰水溶液，然后加入二氯甲烷 (30 mL×2) 萃取，有机相依次用饱和碳酸氢钠、食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压蒸干后经硅胶柱色谱纯化（V氯仿:V甲醇=30:1~10:1），得到M-2’（2.02 g，收率70%）。HRMS-ESI: m/z calcd forC15H23N5O: 289.1903, found [M+H]+ 290.1981。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ3.87–3.66(m, 2H), 3.51–3.43 (m, 1H), 3.31–3.15 (m, 1H), 2.96–2.87 (m, 2H), 2.89–2.80(m, 1H), 2.63–2.05 (m, 4H), 2.01–1.65 (m, 4H), 1.62–1.47 (m, 6H), 1.35–1.03(m, 2H)。
制备步骤3：M-3’的合成
向含有M-2’（1.44 g, 5 mmol）的甲醇溶液（25 mL）中加入10%的Pd/C，然后置于H2（50Psi）氛围中反应48小时至完全。TLC检测反应完成后，过滤，所得滤液减压蒸干后得到M-3’（1.33 g，定量）。HRMS-ESI: m/z calcd for C15H25N3O: 263.1998, found [M+H]+264.2072；1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.92–3.79 (m, 2H), 3.58–3.45 (m, 1H), 3.30–3.12 (m, 1H), 2.96–2.89 (m, 2H), 2.89–2.80 (m, 1H),2.63–2.05 (m, 4H), 2.01–1.65 (m, 4H), 1.62–1.48 (m, 6H), 1.35–1.04 (m, 2H)。
实施例3 化合物GJD-1的合成
Figure 867967DEST_PATH_IMAGE017
将N-甲酰甲酯基取代邻苯二甲酰亚胺（45 mg, 0.22 mmol）加入到含有M-3（53 mg，0.2mmol）和三乙胺（30 mg，0.3 mmol）的1 mL四氢呋喃液中，并于60 oC下搅拌反应至完全。反应完成后，过滤，所得滤液减压蒸干后经硅胶柱色谱纯化（V氯仿:V甲醇=40:1~20:1），得到实施例3化合物GJD01（68 mg，收率76%）。HRMS-ESI: m/z calcd for C23H27N3O3: 393.2052,found [M+H]+ 394.2126; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ7.90–7.74 (m, 2H), 7.73–7.59(m, 2H), 4.70 (dd, J = 12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 13.0, 4.4 Hz, 1H),3.98 (td, J = 10.6, 5.4 Hz, 1H), 3.22 (t, J = 12.9 Hz, 1H), 2.92–2.73 (m,2H), 2.60–2.46 (m, 1H), 2.38–2.30 (m, 1H), 2.07–1.88 (m, 5H), 1.77–1.38 (m,10H)。13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 168.0 (2C), 165.7, 133.9 (2C), 132.2 (2C),123.4 (2C), 63.2, 57.2, 57.1, 53.3, 50.3, 43.9, 41.7, 34.9, 27.7, 27.1, 26.2,24.2, 21.1, 20.7 。
实施例4至实施例21的制备参考实施例3的操作，其中合成片段N-甲酸甲酯基取代邻苯二甲酰亚胺可参考文献Bioorg Med Chem Lett. 2017, 27, 4075、US6335349B1、US9821068B2所述相关方法制备得到；然后与M-3反应制备得到。
编号 收率 化合物 (HR)MS-ESI和<sup>1</sup>H NMR
实施例4 93% GJD03 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>23</sub>H<sub>26</sub>FN<sub>3</sub>O<sub>3</sub>:411.1958, found [M+H]<sup>+</sup> 412.2035; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>7.80–7.49 (m, 3H), 4.68 (dd, <i>J</i> =12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.33–3.95(m, 2H), 3.21 (t, <i>J</i> = 13.0 Hz, 1H), 2.92–2.73 (m, 2H), 2.55–2.42 (m,1H), 2.35–1.33 (m, 16H)。
实施例5 82% GJD04 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>23</sub>H<sub>26</sub>ClN<sub>3</sub>O<sub>3</sub>:427.1663, found [M+H]<sup>+</sup> 428.1742; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>7.97–7.71 (m, 3H), 4.71 (dd, <i>J</i> =12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.35 (dd,<i>J</i> = 13.0, 4.5 Hz, 1H), 4.06–3.95 (m, 1H), 3.22 (t, <i>J</i> = 13.0 Hz,1H), 2.91–2.74 (m, 2H), 2.54–2.43(m, 1H), 2.36–1.32 (m, 16H)。
实施例6 81% GJD05 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>23</sub>H<sub>26</sub>N<sub>4</sub>O<sub>5</sub>:438.1903, found [M+H]<sup>+</sup> 439.1782; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>8.15–8.09 (m, 2H), 7.92–7.86 (m,1H), 4.81 (dd, <i>J</i> = 12.9, 5.4Hz, 1H), 4.33–4.10 (m, 2H), 3.21 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H), 2.92–2.75 (m,2H), 2.56–2.43 (m, 1H), 2.35–1.88 (m, 6H), 1.77–1.38 (m, 10H)。
实施例7 87% GJD06 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>23</sub>H<sub>26</sub>N<sub>4</sub>O<sub>5</sub>:438.1903, found [M+H]<sup>+</sup> 439.1782; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>8.16–7.74 (m, 3H), 4.75 (dd, <i>J</i> =12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.33–4.06(m, 2H), 3.22 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H), 2.91–2.73 (m, 2H), 2.56–2.42 (m, 1H),2.34–1.85 (m, 6H), 1.78–1.36 (m, 10H)。
实施例8 75% GJD07 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>24</sub>H<sub>26</sub>F<sub>3</sub>N<sub>3</sub>O<sub>3</sub>:461.1926, found [M+H]<sup>+</sup> 462.2002; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>8.06–7.78 (m, 3H), 4.72 (dd, <i>J</i> =12.9, 5.3 Hz, 1H), 4.35–3.96(m, 2H), 3.20 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H), 2.93–2.73 (m, 2H), 2.56–2.41 (m,1H), 2.36–1.86 (m, 6H), 1.77–1.34 (m, 10H)。
实施例9 69% GJD08 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>24</sub>H<sub>29</sub>N<sub>3</sub>O<sub>3</sub>:407.2209, found [M+H]<sup>+</sup> 408.2280; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>7.98–7.45 (m, 3H), 4.68 (dd, <i>J</i> =12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.33–3.80(m, 2H), 3.21 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H), 2.91–2.74 (m, 2H), 2.65–2.53 (m,1H), 2.35–1.87 (m, 9H), 1.77–1.33 (m, 10H)。
实施例10 90% GJD09 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>24</sub>H<sub>29</sub>N<sub>3</sub>O<sub>4</sub>:423.2158, found [M+H]<sup>+</sup> 424.2230; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>8.07–7.94 (m, 1H), 7.73–7.46 (m,2H), 4.69 (dd, <i>J</i> = 12.9, 5.4Hz, 1H), 4.34–3.83 (m, 5H), 3.21 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H), 2.93–2.71 (m,2H), 2.65–2.52 (m, 1H), 2.37–1.88 (m, 6H), 1.76–1.34 (m, 10H)。
实施例11 61% GJD10 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>23</sub>H<sub>27</sub>N<sub>3</sub>O<sub>4</sub>:417.2052, found [M+H]<sup>+</sup> 418.2130; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>7.90–7.49 (m, 3H), 4.72–4.68 (m,1H), 4.34–3.92 (m, 2H), 3.23 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H), 2.91–2.73 (m, 2H), 2.63–2.44 (m, 1H), 2.38–2.31 (m, 1H),2.07–1.89 (m, 5H),1.78–1.36 (m, 10H)。
实施例12 92% GJD11 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>25</sub>H<sub>27</sub>N<sub>3</sub>O<sub>3</sub>:409.2002, found [M+H]<sup>+</sup> 410.2080; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>7.65 (t, <i>J</i>=7.8 Hz 1H), 7.20–7.15 (m, 2H), 6.51(t, <i>J</i>=5.8Hz, 1H), 4.71–4.66 (m, 1H), 4.34–3.94 (m, 2H), 3.22 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz,1H), 2.91–2.73 (m, 2H), 2.63–2.44 (m, 1H), 2.38–2.31 (m, 1H), 2.07–1.86 (m,5H), 1.78–1.37 (m, 10H), 1.01–0.83 (m, 6H)。
实施例13 93% GJD12 MS-ESI [M+H]<sup>+</sup> 451.2 (451.2); <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>) <i>δ </i>9.51 (brs, 1H), 8.76 (d, <i>J</i> =8.5 Hz, 1H), 7.70–7.62 (m, 1H), 7.51 (d, <i>J</i> =7.4 Hz, 1H), 4.68 (dd, <i>J</i> = 13.0, 5.4 Hz, 1H), 4.36 (dd, <i>J</i> = 13.0, 4.5 Hz, 1H), 4.02–3.95 (m, 1H), 3.24 (t, <i>J</i> = 13.0 Hz, 1H),2.90–2.74 (m, 2H), 2.52–2.42 (m, 1H), 2.36–2.30 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.09–1.36 (m, 15H)。
实施例14 86% GJD13 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>25</sub>H<sub>30</sub>N<sub>4</sub>O<sub>4</sub>: 450.2267, found [M+H]<sup>+</sup> 451.2347; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>) <i>δ </i>9.91–7.52 (m, 4H), 4.68 (dd, <i>J</i> =13.0, 5.4 Hz, 1H), 4.34 (dd, <i>J</i> = 12.9, 4.5 Hz, 1H), 4.02–3.95 (m, 1H), 3.23 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H), 2.98–2.73 (m, 5H), 2.55–1.34(m, 17H)。
实施例15 71% GJD14 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>24</sub>H<sub>30</sub>N<sub>4</sub>O<sub>5</sub>S: 486.1937, found [M+H]<sup>+</sup> 487.2017; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>) <i>δ </i>8.45–8.26 (m, 2H), 8.03–7.92 (m,1H), 4.83 (dd, <i>J</i> = 12.9, 5.4 Hz, 1H), 4.37–4.12 (m, 2H), 3.24 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H), 2.94–2.77 (m, 2H), 2.58–1.38 (m, 17H)。
实施例16 82% GJD15 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>22</sub>H<sub>26</sub>N<sub>4</sub>O<sub>3</sub>:394.2005, found [M+H]<sup>+</sup> 395.2080; MS-ESI [M+H]<sup>+</sup> 395.2(395.2); <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>) <i>δ </i>9.16–8.06 (m,3H), 4.87–4.72 (m, 1H), 4.38–4.10 (m, 2H), 3.22 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H),2.94–2.77 (m, 2H), 2.58–1.37 (m, 17H)。
实施例17 64% GJD16 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>24</sub>H<sub>29</sub>N<sub>3</sub>O<sub>4</sub>:423.2158, found [M+H]<sup>+</sup> 424.2230。
实施例18 89% GJD17 MS-ESI [M+H]<sup>+</sup> 527.3 (527.3); <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>) <i>δ </i>8.34 (s, 1H),7.65–7.18 (m, 7H),4.76–4.67 (m, 1H), 4.34–3.93 (m, 2H),3.22 (t, <i>J</i> = 12.9 Hz, 1H),2.91–2.73 (m, 2H), 2.63–2.44 (m, 1H), 2.38–2.32 (m, 1H), 2.10–1.85 (m, 6H),1.78–1.36 (m, 10H), 1.24–1.20 (m, 6H), 1.01–0.83 (m, 6H)。
实施例19 82% GJD19 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>25</sub>H<sub>31</sub>N<sub>3</sub>O<sub>5</sub>:453.2264, found [M+H]<sup>+</sup> 454.2240。
实施例20 83% GJD20 MS-ESI [M+H]<sup>+</sup> 412.2 (412.2); <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>) <i>δ </i>7.81–7.37 (m, 3H), 4.75 –4.68 (m, 1H),, 4.35–3.97 (m, 2H), 3.22 (t, <i>J</i> =13.0 Hz, 1H), 2.92–2.73 (m, 2H), 2.55–2.42 (m, 1H), 2.36–1.32 (m, 16H)。
实施例21 81% GJD21 MS-ESI [M+H]<sup>+</sup> 410.2 (410.2); <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>) <i>δ </i>7.91–7.38 (m, 3H), 4.72–4.65 (m, 1H), 4.34–3.93 (m, 2H), 3.23 (t, <i>J</i> =12.9 Hz, 1H), 2.91–2.72 (m, 2H),2.63–2.44 (m, 1H), 2.38–2.30 (m, 1H), 2.07–1.86 (m, 5H), 1.78–1.33 (m, 10H)。
实施例22至实施例23的制备参考实施例3的操作，以M-3’为原料与N-甲酸甲酯基取代邻苯二甲酰亚胺反应制备得到，所得实施例结果如下：
编号 收率 化合物 (HR)MS-ESI和<sup>1</sup>H NMR
实施例22 83% GJD28 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>23</sub>H<sub>27</sub>N<sub>3</sub>O<sub>3</sub>:393.2052, found [M+H]<sup>+</sup> 394.2126; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>7.91–7.58 (m, 4H), 4.72–4.63 (m,1H), 3.80–3.61 (m, 1H), 3.58–3.45(m, 1H), 3.30–3.12 (m, 1H), 2.96–2.89 (m, 2H), 2.89–2.80 (m, 1H),2.63–2.05 (m, 4H), 2.01–1.65(m, 4H), 1.62–1.48 (m, 6H), 1.35–1.04 (m,2H)。
实施例23 72% GJD29 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>24</sub>H<sub>29</sub>N<sub>3</sub>O<sub>3</sub>: 407.2209, found [M+H]<sup>+</sup> 408.2280; <sup>1</sup>H NMR (300 MHz, CDCl<sub>3</sub>)<i>δ </i>7.98–7.45 (m, 3H), 4.72–4.63 (m,1H), 3.80–3.61 (m, 1H), 3.58–3.45(m, 1H), 3.30–3.12 (m, 1H), 2.93–2.79 (m, 3H),2.63–1.45 (m, 17H),1.36–1.03 (m, 2H)。
实施例24化合物GJD30的合成
Figure 611932DEST_PATH_IMAGE018
将M-3 (53 mg，0.2 mmol) 和2-溴甲基-苯甲酸甲酯 (46 mg，0.2 mmol) 和KHCO3 (40mg，0.4 mmol) 加入CH3CN (1 mL) 中，95℃浴温反应过夜。反应完成后，过滤，所得滤液减压蒸干后经硅胶柱色谱纯化（V氯仿:V甲醇=80:1~40:1），干燥后得到实施例24化合物GJD30 （67mg，收率89%）。HRMS-ESI: m/z calcd for C23H29N3O2: 379.2260, found [M+H]+380.2335。
实施例25至实施例36的制备参考实施例24的操作，其中合成片段2-溴甲基-苯甲酸甲酯可参考文献S. Hu et al. Bioorg Med Chem Lett. 2017, 27, 4075，US 2003/0028028，C. Contino-Pépin et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.2009, 19, 878，A. L.Ruchelman et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.2013, 23, 360所述相关方法制备得到，所得实施例结果如下：
Figure 724244DEST_PATH_IMAGE019
实施例37 化合物GJD22的合成
Figure 991595DEST_PATH_IMAGE021
氮气保护下，将GJD01 (79 mg，0.2 mmol) 和DDQ (46 mg，0.2 mmol) 加入氯苯溶液(2 mL) 中，120℃浴温反应24 h。反应完成后，冷却至室温，加入亚硫酸钠（63 mg, 0.5mmol）并继续搅拌1小时，过滤，所得滤液减压蒸干后经碱性氧化铝色谱柱纯化（V氯仿:V甲醇=40:1~20:1）后得到实施例37化合物GJD22 （32 mg，收率40%）。HRMS-ESI: m/z calcd forC23H25N3O3: 391.1896, found [M+H]+ 392.1977。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.92 – 7.94(m, 2H), 7.80 – 7.83 (m, 2H), 6.07 – 5.92 (m, 1H), 4.47 (dd, J = 12.7, 4.3Hz, 1H), 4.21 – 3.82 (m, 3H), 3.32 – 3.04 (m, 2H), 2.99 –1.30 (m, 14H)。
实施例38至实施例39的制备参考实施例37的操作，分别以GJD23和GJD24为原料，经氧化脱氢得到目标产物。所得实施例结果如下：
编号 收率 化合物 MS-ESI和<sup>1</sup>H NMR
实施例38 20% GJD23 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>23</sub>H<sub>26</sub>N<sub>4</sub>O<sub>3</sub>: 406.2205, found [M+H]<sup>+</sup> 407.2085。
实施例39 34% GJD24 HRMS-ESI: m/z calcd for C<sub>24</sub>H<sub>27</sub>N<sub>3</sub>O<sub>3</sub>: 405.2052, found [M+H]<sup>+</sup> 406.2130。
实施例40 化合物GJD46的合成
Figure 539251DEST_PATH_IMAGE023
制备步骤1：中间体46合成
在冰浴搅拌的条件下，向含有化合物14-氨基-苦参碱（131 mg, 0.5 mmol）和三乙胺（75 mg, 0.75 mmol）的二氯甲烷溶液（10 mL）中慢慢加入对硝基苯磺酰氯（110 mg, 0.5mmol）并继续反应1~2 h至完全。TLC检测反应完成后，加水25 ml，然后加入二氯甲烷 (25mL×2) 萃取，有机相依次用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压蒸干后经碱性氧化铝柱色谱纯化（V乙酸乙酯:V石油醚=1:2~1:1），得到化合物46（170 mg，收率76%）。MS-ESI [M+H]+ 449.2。
制备步骤2：GJD46的合成
向含有46（45 mg, 0.1 mmol）的甲醇溶液（1 mL）中加入10%的Pd/C，然后置于H2（50Psi）氛围中加热至70 oC反应48小时至完全。TLC检测反应完成后，过滤，所得滤液减压蒸干后得到GJD46（32 mg，78%）。HRMS-ESI: m/z calcd for C21H30N4O3: 418.2039, found [M+H]+ 419.2116。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ7.59–7.52 (m, 1H), 7.45 (d, J＝8.7Hz,2H), 6.55 (d, J＝8.7Hz, 2H), 5.91 (s, 2H), 4.70–4.53 (m, 1H), 4.27 (dd, J =13.0, 4.4 Hz, 1H), 3.95 (td, J = 10.6, 5.4 Hz, 1H), 3.21 (t, J = 12.9 Hz,1H), 2.92–2.72 (m, 2H), 2.60–2.46 (m, 1H), 2.38–2.30 (m, 1H), 2.05–1.87 (m,5H), 1.78–1.37 (m, 10H)。
实施例41～46硝基还原产物的制备参考实施例40操作，所得实施例结果如下：
Figure 771649DEST_PATH_IMAGE024
实施例47 化合物GJD47和GJD48的合成
氮气保护下，将GJD46 (210 mg，0.5 mmol) 和DDQ (230 mg，1 mmol) 加入氯苯溶液(10 mL) 中，120℃浴温反应48 h。反应完成后，冷却至室温，加入亚硫酸钠（252 mg, 2mmol）并继续搅拌1小时，过滤，所得滤液减压蒸干后经碱性氧化铝色谱柱纯化（V氯仿:V甲醇=60:1~20:1）后得到化合物GJD47 和GJD48。GJD47，58 mg，收率28%。HRMS-ESI: m/z calcdfor C21H28N4O3S: 416.1882, found [M+H]+ 417.1960。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ7.92-7.83 (m, 1H), 7.49 (d, J＝8.7Hz, 2H), 6.59 (d, J＝8 .7Hz, 2H), 6.09–5.93(m, 3H), 4.45 (dd, J = 12.7, 4.3 Hz, 1H), 4.21–3.83 (m, 3H), 3.32–3.05 (m,2H), 2.99–1.31 (m, 14H)。GJD47，33 mg，收率16%。HRMS-ESI: m/z calcd forC21H26N4O3S: 414.1726, found [M+H]+ 415.1790。
实施例48 化合物GJD49的合成
氮气保护下，将2-氨基苯甲酸甲酯（15 mg，0.1 mmol）加入到含有14-氨基苦参碱（26mg, 0.1 mmol）的1,4-二氧六环溶液（1 mL）中，然后于回流条件下反应过夜。反应完成后，加入乙酸乙酯（2ⅹ50 ml）和水50 mL萃取，有机相依次经饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩至干及常规硅胶柱层析（V乙酸乙酯:V石油醚=1:4~1:1），得到GJD49（27 mg，收率71%）。HRMS-ESI: m/z calcd for C22H30N4O2: 382.2369, found [M+H]+ 383.2445。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ8.49–8.41 (m, 1H), 7.49 (dd, J = 8.2, 1.3 Hz, 1H), 7.14 (ddd,J = 8.2, 7.1, 1.3 Hz, 1H), 6.68 (dd, J = 8.2, 1.3 Hz, 1H), 6.50 (ddd, J =8.2, 7.1, 1.3 Hz, 1H), 6.42 (s, 2H), 4.70–4.53 (m, 1H), 4.27 (dd, J = 13.0,4.4 Hz, 1H), 3.95 (td, J = 10.6, 5.4 Hz, 1H), 3.22 (t, J = 12.9 Hz, 1H),2.91–2.72 (m, 2H), 2.60–2.31 (m, 2H), 2.04–1.87 (m, 5H), 1.77–1.36 (m, 10H)。
实施例49 化合物GJD51的合成
在冰浴搅拌的条件下，向含有乙酰水杨酸（18 mg，0.1 mmol）、EDCI（38 mg，0.2 mmol）、DMAP（24 mg，0.2 mmol）的DMF溶液（1 mL）中加入14-氨基苦参碱（26 mg, 0.1 mmol），然后于室温下反应过夜。反应完成后，加入乙酸乙酯（2ⅹ5 ml）和水5 mL萃取，有机相依次经饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩至干及常规硅胶柱层析（V乙酸乙酯:V石油醚=1:4~1:1），得到GJD51（32 mg，收率71%）。HRMS-ESI: m/z calcd for C24H31N3O4: 425.2315, found [M+H]+ 426.2390。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ8.49–8.42 (m, 1H), 7.67 –7.62 (m,1H), 7.55–7.50 (m, 1H), 7.38–7.32 (m, 1H), 7.22–7.18 (m, 1H), 4.70–4.53 (m,1H), 4.29 (dd, J = 13.0, 4.4 Hz, 1H), 3.95 (td, J = 10.6, 5.4 Hz, 1H), 3.21(t, J = 12.9 Hz, 1H), 2.90–2.72 (m, 2H), 2.61–2.46 (m, 1H), 2.39–1.87 (m,9H), 1.76–1.34 (m, 10H)。
实施例50～56的制备参考实施例49操作，以市售的各种取代羧酸为底物，与14-氨基苦参碱反应得到GJD50～GJD57，所得实施例结果如下：
Figure 930152DEST_PATH_IMAGE026
实施例57化合物GJD58的合成
Figure 281499DEST_PATH_IMAGE027
制备方法步骤1
在冰浴搅拌的条件下，向含有2-溴苯乙酸（215mg，1 mmol）、EDCI（380 mg，2 mmol）、DMAP（242 mg，2 mmol）的DMF溶液（5 mL）中加入14-氨基苦参碱（263 mg, 1 mmol），然后于室温下反应过夜。反应完成后，加入乙酸乙酯（2ⅹ20 ml）和水20 mL萃取，有机相依次经饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩至干及常规硅胶柱层析（V乙酸乙酯:V石油醚=1:4~1:1），得到中间体58。HRMS-ESI: m/z calcd for C23H30BrN3O2: 459.1521, found [M+H]+460.1598。
制备方法步骤2
将含有化合物58（46 mg，0.1 mmol）、CuI（2 mg，0.01 mmol）、甘氨酸（7 mg，0.1 mmol）和碳酸铯（65 mg，0.2 mmol）的DMF溶液置于氮气氛围中于130 oC反应过夜。反应完成后，加入乙酸乙酯（2ⅹ5 ml）和水5 mL萃取，有机相依次经饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩至干及常规硅胶柱层析（V乙酸乙酯:V石油醚=1:4~1:1），得到GJD58。HRMS-ESI: m/z calcdfor C23H29N3O2: 379.2260, found [M+H]+ 380.2338。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.26–7.21 (m, 2H), 7.07–6.98 (m, 2H), 4.68–4.34 (m, 2H), 3.98–3.58 (m, 3H), 3.22(t, J = 12.9 Hz, 1H), 2.92–2.73 (m, 2H), 2.60–2.46 (m, 1H), 2.38–2.31 (m,1H), 2.07–1.86 (m, 5H), 1.75–1.36 (m, 10H)。
实施例58～60的制备参考实施例57操作，以市售的各种取代邻溴苯乙酸为底物，与14-氨基苦参碱或14-氨基槐定碱反应，分别得到化合物GJD59～GJD61，所得实施例结果如下：
Figure 368404DEST_PATH_IMAGE028
实施例61化合物GJD62的合成
Figure 779794DEST_PATH_IMAGE029
向含有79 mg (0.1 momol)苦参碱2 mL四氢呋喃溶液加入0.2 mL质量分数30%的H2O2，于50～60℃下搅拌反应1 h，TLC跟踪。反应完成后，加5% NaOH溶液3 mL常温搅拌2 h，1 N稀盐酸中和反应液。减压浓缩反应液，加入适量丙酮溶解，过滤除去无机盐，所得滤液减压蒸干后经碱性氧化铝纯化（V氯仿:V甲醇=80:1~40:1），得到实施例81化合物GJD62（52 mg，收率63%）。MS-ESI [M+H]+ 410.2 (410.2); 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ8.09–7.52 (m, 4H),4.70–3.92 (m, 4H), 3.38–2.86 (m, 5H), 2.72–1.26 (m, 14H)。
实施例62至实施例68的制备参考实施例61的操作，所得结果如下：
Figure 686570DEST_PATH_IMAGE030
实施例69化合物GJD63的合成
Figure 576029DEST_PATH_IMAGE031
冰浴条件下，向含有GJD66 （91 mg，0.2 mmol）的6 N盐酸水溶液5 mL中缓慢加入氯化亚锡（190 mg，1 mmol），N2保护，升温至60℃，保温搅拌反应过夜。反应完成后，经饱和碳酸钠溶液碱化pH至8左右，正丁醇萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，所得有机相经减压浓缩后蒸干，然后经氧化铝柱分离（V氯仿:V甲醇=40:1~20:1），得到目标化合物GJD63（39 mg，收率46%）。HRMS-ESI: m/z calcd for C23H28N4O4: 424.2111, found [M+H]+ 425.2180。1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.72–6.90 (m, 3H), 4.70–3.91 (m, 4H), 3.35–2.83 (m, 5H), 2.73–1.25 (m, 14H)。
实施例70至实施例72的制备参考实施例69的操作，所得结果如下：
Figure 517440DEST_PATH_IMAGE032
实施例73 本发明代表性化合物GJD01盐酸盐的制备
将溶有化合物GJD02 (40 mg, 0.1 mmol) 的乙醇溶液，于室温下缓慢加入1.2 mL的盐酸乙醇（0.1 N）溶液，并搅拌反应1小时；反应完成后，于冰浴下，向上述溶液中加入乙醚至有固体析出，打浆，过滤，所得固体经减压干燥得到GJD02盐酸盐固体（43 mg，收率100%）。MS-ESI [M+H]+ 394.2 (394.2)。
实施例74 本发明代表性化合物对TNF-α 活性抑制实验研究
采集健康志愿者的外周血并用EDTA 抗凝管收集。将血液用1640培养基(Gibco，产品目录号11875-093，USA) 稀释5倍后加入到96孔细胞培养板中(Costar，产品目录号3599，USA)，然后用10 μl本发明通式(I)化合物的DMSO (Sigma，产品目录号D2650，USA)溶液处理，化合物的终浓度为20 μM，DMSO 的终浓度为0.2％。在37℃，5％ CO2培养箱中孵育60min后，于反应体系中加入10 μl LPS (Sigma，产品目录号L-2880，USA)，终浓度10 ng/ml，再在37℃，5％ CO2条件下继续培养6 小时后。收集上清液，TNF-α含量通过ELISA方法(BDBiosciences，产品目录号555212，USA) 测定。用读板仪器检测吸收光强度，检测OD450 nm值，以OD650 nm值作为参考，以含0.2％ DMSO 培养基的溶液对照组作为0％抑制。记录原始数据和标准曲线。通过XL-fit 软件，绘制四参数药物抑制曲线并计算每个化合物的抑制率，具体见表1。
表1. TNF-α 抑制活性实验结果
Figure DEST_PATH_IMAGE033
实施例75 本发明部分化合物对肿瘤细胞的生长抑制活性研究
采用MTT 法，测定该类化合物对Lovo，MGC-803，Mia-paca2，HpeG-2，A549，k562，Panc-1细胞的体外生长抑制活性。分别取处于对数生长期Lovo，MGC-803，Mia-paca2，HpeG-2，A549，k562，Panc-1细胞接种于96孔板（购自中科院生化细胞所，按常规肿瘤细胞培养方法及培养基培养），接种密度为4×104 /ml，180 μl/孔；待细胞贴壁后，每孔加入20 μl的药液，使药物终浓度分别为0.1 μM，1 μM，10 μM，50 μM，100 μM，作用48 h后，加入5 mg/ml的MTT溶液(20 μl/孔)，放入CO2孵箱培养3～4 h后，小心弃上清，待残留液体风干后，加入DMSO，200 μl/孔，于摇床上振摇0.5～1 h，待结晶完全溶解后，于酶标仪492 nm处测吸光度OD值。用GraphPad Prism 5软件，允许变斜率制作量效曲线并计算IC50值。实验结果见表2。
表2. 不同肿瘤细胞株抑制活性实验结果
Figure DEST_PATH_IMAGE034
实施例76 本发明代表性化合物对NK细胞杀伤不同肿瘤细胞的影响
收集对数生长期的Lovo，HpeG-2，A549，k562，Panc-1细胞，接种于6孔板，调整细胞密度为5×105 /ml，每孔2 mL。实验组加入GJDx化合物，使其终浓度为20 μM，阴性对照组加人等体积RPMI 1640培养基，正常对照组不作特殊处理。各组细胞置于37 ℃、饱和湿度、5% CO2培养箱中培养48 h。收集各组细胞，离心去上清后重悬于PBS，调整细胞密度为1ⅹ106/mL。每毫升细胞悬液中加入2 μl CFSE贮存液（终浓度为10 μM）。轻轻吹打混匀，置于5% CO2、37℃ 培养箱中孵育30 min后加入5~10倍体积４℃预冷的RPMI 1640完全培养基，终止染色。冰上继续孵育5 min，4℃离心弃上清，新鲜培养基洗涤细胞3次。将标记好的肿瘤细胞与NK细胞（NK细胞培养基为含1.5 g/L碳酸氢钠、12.5%胎牛血清和12.5%马血清的α-MEM）按效靶比（5∶1）轻轻混匀，培养箱中孵育4 h后收集细胞，流式缓冲液洗涤细胞2次并重悬，加入50 μg/ml PI，室温避光孵育15 min，流式细胞仪上机检测CFSE+PI+肿瘤细胞百分率。
表3. 代表性化合物对NK细胞杀伤肿瘤细胞效应影响
Figure DEST_PATH_IMAGE035
实施例77 本发明代表性化合物GJD01体内抗肿瘤活性评价
实验动物KM小鼠，雄性，42±2日龄，体重23~27 g（购自上海实验动物中心，饲养环境SPF级）。取生长良好的7~11天第一代A549瘤种，制成约2~5×106 /ml的悬浮液，接种于裸小鼠右侧腋部皮下。接种24小时后将动物随机分组，空白组6只，给药组每组5只。化合物GJD01和苦参碱按照30 mg/kg腹腔注射给药，每天1次，连续给药15天；阳性对照硫酸长春碱2 mg/kg 尾静脉注射给药，每隔1天给药，连续给药15天。
停药后24小时处死动物，称体重，瘤重，计算各组平均瘤重，按照下列公式求出肿瘤抑制率并进行T检验。肿瘤抑制率IR(%)=(空白对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/空白对照组平均瘤重ⅹ100%。疗效评价主要标准：肿瘤抑制率<40%为无效；肿瘤抑制率≥40%，并经统计学处理p<0.05为有效（可接受错误的边界水平）。实验结果见图1、2。

Claims (10)

1.一种通式(I)所示结构的苦参碱α-酮胺类化合物或其可药用的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
式(I)中，
R1、R2、R3和R4分别独立地选自下组基团：H、D、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、巯基、C0~C8烷氧甲酰基C1~C8烷氧基、C1~C8烷磺酰基、C1~C8烷磺酰胺基、C0~C8烷胺基磺酰基、C1~C8烷基、卤代C1~C8烷基、卤代C1~C8烷氧基、C0~C8烷乙炔基、C1~C8烷氧基、C1~C8烷酰氧基、C1~C8烷氧C1~C8烷氧基、C1~C8烷氧C1~C8烷基、C1~C8烷胺基、C0~C8烷胺C1~C8烷基、芳基、芳C1~C8烷胺C1~C8烷基、脒基、胍基、芳磺酰胺基、芳胺基磺酰基、芳甲酰基、芳C1~C8烷胺基、芳C1~C8烷酰胺基、C1~C8烷氧甲酰基、C1~C8烷酰胺基、C1~C8烷胺基、C0~C8烷胺甲酰胺基、C0~C8烷胺基甲酰基、C1~C8烷胺基甲酰氧基、芳胺基甲酰胺基、芳胺基甲酰基、芳C1~C8烷胺甲酰基、芳胺基甲酰氧基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、喹啉基、嘧啶基、嘧啶氨基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡咯基或不存在；其中，R1、R2、R3和R4所述芳基为苯基或者被1-4个选自卤素、羟基、硝基、氰基、氨基、三氟甲基、羧基、C0~C8烷胺磺酰基、N-亚甲基吗啉、C1~C8烷磺酰胺基、C1~C8烷基、卤代C1~C8烷氧基、C1~C8烷氧基中的基团所取代的苯基；
X为：S或O；
Y为：O或不存在；
Z1和Z2分别独立地选自下组基团：SO2、C=O、C=S、C=NR5、N=CR6、COCO、CH2CO、CH(CH3)CO、CH2、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、H、D或不存在；其中，R5选自H、C1~C8烷氧基；R6选自H、C1~C8烷基；
W1和W2分别独立地选自：N或C；其中，W1和W2为N时，R1、R3为不存在；
虚线为：化学键或不存在。
2.根据权利要求1所述的通式(I)化合物或其可药用的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物，其特征在于，所述化合物如通式(I-a)和(I-b)所示：
式(I-a)和(I-b)中，
R1、R2、R3和R4分别独立地为选自下组基团：H、D、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、巯基、C0~C8烷氧甲酰基C1~C8烷氧基、C1~C8烷磺酰基、C1~C8烷磺酰胺基、C0~C8烷胺基磺酰基、C1~C8烷基、卤代C1~C8烷基、卤代C1~C8烷氧基、C0~C8烷乙炔基、C1~C8烷氧基、C1~C8烷酰氧基、C1~C8烷氧C1~C8烷氧基、C1~C8烷氧C1~C8烷基、C1~C8烷胺基、C0~C8烷胺C1~C8烷基、芳基、芳C1~C8烷胺C1~C8烷基、脒基、胍基、芳磺酰胺基、芳胺基磺酰基、芳甲酰基、芳C1~C8烷胺基、芳C1~C8烷酰胺基、C1~C8烷氧甲酰基、C1~C8烷酰胺基、C1~C8烷胺基、C0~C8烷胺甲酰胺基、C0~C8烷胺基甲酰基、C1~C8烷胺基甲酰氧基、芳胺基甲酰胺基、芳胺基甲酰基、芳C1~C8烷胺甲酰基、芳胺基甲酰氧基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、喹啉基、嘧啶基、嘧啶氨基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡咯基或不存在；其中，R1、R2、R3和R4所述芳基为苯基或者被1-4个选自卤素、羟基、硝基、氰基、氨基、三氟甲基、羧基、C0~C8烷胺磺酰基、N-亚甲基吗啉、C1~C8烷磺酰胺基、C1~C8烷基、卤代C1~C8烷氧基、C1~C8烷氧基中的基团所取代的苯基；
X为：S或O；
Y为：O或不存在；
Z1和Z2分别独立地选自下组基团：SO2、C=O、COCO、CH2CO、CH(CH3)CO、CH2、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、H、D或不存在；
W1和W2分别独立地选自：N或C；其中，W1和W2为N时，R1、R3为不存在；
虚线为：化学键或不存在。
3.根据权利要求1所述的苦参碱α-酮胺类化合物或其可药用的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物，其特征在于，所述化合物选自下组：
Figure DEST_PATH_IMAGE006
。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的苦参碱α-酮胺类化合物或其可药用的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物，其中所述可药用的盐为所述苦参碱类化合物与酸加成得到的盐，所述酸为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、扁桃酸、抗坏血酸、马来酸、酒石酸、苯磺酸、甲磺酸或羟乙磺酸。
5.一种根据权利要求1-4中任意一项所述的苦参碱类化合物或其可药用的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物的制备方法，通过下述方法得到：
式I-a和I-b结构类型化合物合成分别是以苦参碱和槐定碱为原料，在它们的羰基α位（14位）卤代后分别得到关键中间体M-1和M-1’，然后分别经叠氮取代反应得到M-2和M-2’，再经叠氮还原后分别得到关键中间体M-3和M-3’；M-3和M-3’分别与N-甲酰甲酯基取代邻苯二甲酰亚胺或取代邻苯二甲酸酐反应得到取代邻苯二甲酰亚胺苦参碱类化合物和取代邻苯二甲酰亚胺槐定碱类化合物；M-3和M-3’分别与取代邻甲酸甲酯基苄溴反应得到取代异吲哚啉-1-酮苦参碱和取代异吲哚啉-1-酮槐定碱类化合物；M-3和M-3’分别与取代芳甲酰氯或取代芳磺酰氯反应得到取代芳甲（磺）酰苦参碱和取代芳甲（磺）酰槐定碱类化合物；M-3和M-3’分别与取代邻溴苯乙酸缩合后再经分子内关环反应得到取代吲哚酮苦参碱和取代吲哚酮槐定碱类化合物；
式I-a和I-b结构中含有氨基取代基类型化合物合成是以其硝基取代类化合物为原料直接经[H]还原体系还原胺化体系还原反应得到；
式I-a和I-b结构类型化合物中的氮氧化物合成是I-a或I-b结构类型化合物为起始原料，经[O]过氧化反应得到；
式I-a和I-b结构类型化合物中的13,14-去氢苦参碱类化物合成分别是以I-a或I-b结构类型化合物为起始原料，经氧化脱氢反应得到；
式I-a和I-b结构类型化合物与HA成盐后得到可药用的盐；HA为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、扁桃酸、抗坏血酸、马来酸、酒石酸、苯磺酸、甲磺酸或羟乙磺酸。
6.权利要求1-4中任意一项所述的苦参碱α-酮胺类化合物或其可药用的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物，在制备治疗或预防由TNF-α产生的、或由TNF-α活性调节异常引起的自身免疫性疾病、神经系统退行性疾病、血液肿瘤、实体肿瘤、骨髓纤维化症以及急/慢性移植物抗宿主反应疾病的药物中的应用。
7.权利要求1-4中任意一项所述的苦参碱α-酮胺类化合物或其可药用的盐、溶剂化物、晶型、立体异构体、同位素化合物或代谢物，在制备预防或治疗机体NK细胞免疫系统紊乱导致的肿瘤以及衰老疾病的药物中的应用。
8.一种治疗TNF-α过表达和或NK细胞免疫系统紊乱导致相关疾病患者的方法，包括给于患者治疗有效量的根据权利要求1-4任一项的苦参碱α-酮胺类化合物化合物或其药学可接受的盐。
9.作为TNF-α抑制剂和或NK细胞免疫激活剂的权利要求1-4任一项的含苦参碱α-酮胺类化合物或其药学可接受的盐。
10.根据权利要求6、7、8、9的用途、方法或苦参碱α-酮胺类化合物或其药学可接受的盐，其中所述自身免疫性疾病包括：风湿性关节炎、炎性肠道疾病、糖尿病、银屑病、强制性脊柱炎、麻风结节性红斑、红斑狼疮以及包括HBV、HCV、HIV在内的其他一些传染疾病；所述神经系统退行性疾病指的是阿尔茨海默症、老年痴呆、帕金森、多发性硬化症、亨廷顿病、肌萎缩性侧索硬化（ALS）、不同类型脊髓小脑共济失调（SCA）、Pick病；所述血液肿瘤指的是骨髓增生异常综合征、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、慢性粒单核细胞白血病、T 细胞淋巴瘤、红系淋巴瘤、成单核细胞和单核细胞白血病、髓性白血病、骨髓纤维化、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性大B 细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、中枢神经系统淋巴瘤；所述实体肿瘤指的是肝癌、肾癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、乳头状和滤泡状甲状腺癌、成胶质细胞瘤、胶质肉瘤、恶性胶质瘤、难治性浆细胞瘤、睫状体和慢性黑色素瘤、虹膜黑色素瘤、复发性两眼间黑色素瘤、眼外延伸黑色素瘤、脑肿瘤、脑膜瘤、脊髓肿瘤、甲状腺癌、非小细胞肺癌、皮肤癌、星状细胞瘤。
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