CN110720937A - 一种快速的活体无损检测和评价贝类肌肉量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种快速的活体无损检测和评价贝类肌肉量的方法，包括：X光放射源及数字成像参数的设定、肌肉活体识别和横截面积的测定，涉及贝类肌肉研究和育种技术领域。该方法可在无损条件下获得贝类肌肉横截面的清晰图像及准确测量数据，并进行肌肉量评价，解决了传统贝类肌肉性状测定方法必须解剖，导致测定个体不能存活、无法用作育种亲本的难题，使开展贝类活体肌肉性状研究成为可能，极大提升了高肌肉量贝类良种培育的效率。
Description
技术领域
本发明涉及贝类肌肉研究和育种技术领域，具体涉及一种采用X射线检测闭壳肌横截面积进而表征贝类肌肉量的方法。
背景技术
我国海水养殖产量居世界首位，其中贝类养殖产量占70％以上，贝类养殖对提高农民收入和促进出口创汇具有重要意义。养殖业的健康发展有赖于种质的持续创新和改良，贝类良种培育一直是产业关注的热点。许多贝类如扇贝、江珧等具有发达的肌肉(闭壳肌)，且味道鲜美、营养丰富，广受各国消费者喜爱。同时，这些贝类闭壳肌的干制品，俗称"干贝"，被列入海产八珍，也具有很高的经济价值。因此，闭壳肌的生长和品质一直是开展扇贝等贝类遗传研究和良种培育的首选性状。公开号为CN107873592A的专利围绕虾夷扇贝高出柱率高品质脂肪酸闭壳肌展开选育工作，以闭壳肌的重量作为虾夷扇贝选育的标准之一。重量是目前公认的衡量闭壳肌大小标准。
贝类的闭壳肌形状规则，如扇贝闭壳肌近似圆柱形，有利于开展肌肉性状测定。但闭壳肌被包裹在坚硬的外壳中，相较于体重、体尺等可以无损测量的性状，闭壳肌的测定需要解剖，工作量大，更为重要的是测量后的贝类不能存活，造成高肌肉量个体无法留作种用，这成为贝类肌肉生长、品质研究和高肌肉量贝类良种培育的主要技术瓶颈。如何实现贝类肌肉性状的无损检测，使测定后的个体能够正常存活生长、可用作亲本进行苗种繁育和遗传评价，已成为贝类遗传研究和育种领域急需解决的问题。
X射线因具有很高的穿透能力，能透过许多对可见光不透明的物质，被广泛应用于医学、安检等领域。例如，公开号为CN105223216A的专利通过改变X射线发射器与X射线探测器间的夹角，从而实现各种角度的X射线照射和探测，实现了对材料微结构的探测。公告号为CN105358062B的专利公开了一种医用小型X射线拍摄装置，在低辐射条件下，同时获得清晰的X射线图像。随着数字成像技术的发展，X光线信息可转化为数字信号，通过重建图像及图像后处理，使得低剂量的射线仍能产出高质量的成像。X光透视成像技术的上述特点使得其应用于无损获取贝类闭壳肌性状数据成为可能。
发明内容
本发明的目的是建立一种快速的活体无损检测和评价贝类肌肉量的方法，通过低剂量X射线无损伤检测，获取清晰的贝类闭壳肌横截面图像，并准确获取闭壳肌横截面积，用于肌肉重量的活体评价，通过比较亲本间肌肉横截面积完成针对肌肉量性状的贝类选种，实现了闭壳肌检测从有损到无损的跨越。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种快速的活体无损检测和评价贝类肌肉量的方法，具体包括以下步骤：
(1)收集和挑选待测活体贝；
(2)安装好X光射线采集装置,设置检测参数，将待测活体贝，左壳朝上平放于X射线面板采集仪中心位置，将面积为A的标准比例尺放置于扇贝一侧，确保标准比例尺与活体贝成像不重叠；
检测参数为：X光发射源与采集仪面板间距为1.2m-1.5m；
X光放射源参数设置：高压值120(KV)，电流为800uA；X射线面板采集仪参数设置：照射时间1500s，延迟时间1000s，整合时间100ms，二次曝光；
(3)触发X射线放射源进行拍摄，得到待测活体贝和标准比例尺的X射线图像，调整对比度及亮度以获得清晰的闭壳肌和标准比例尺的轮廓，然后确定闭壳肌的面积。
进一步地，勾勒X射线图像中闭壳肌、标准比例尺外轮廓，并测量闭壳肌、标准比例尺的面积Area1和Area2，计算闭壳肌横截面积：
进一步地，通过图像处理软件(如，ImageJ软件)计算勾选出的闭壳肌、标准比例尺的面积Area1和Area2。
通过上述方法实现对贝类闭壳肌横截面积的检测。由于横截面积与闭壳肌重量呈显著相关性，可以将横截面积作为选种的标准。另外，通过对闭壳肌横截面积进行活体检测，可了解贝类的肌肉生长状况。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)能够实现对贝类闭壳肌横截面积的快速检测，通过闭壳肌横截面积对贝类进行选种，找到一种快速对贝类进行选种的无创伤方法；(2)通过对贝类闭壳肌横截面积进行活体检测，可在养殖过程中实时监测肌肉生长状况；(3)通过对检测过程中检测参数的设置，得到清晰的闭壳肌图像，避免壳体呈像对闭壳肌成像的影响；(4)装置结构简单，检测速度快。
附图说明
图1为本发明实施例1中X射线图像采集装置结构示意图。
图2为本发明实施例1中X射线面板采集仪与待测样品的摆放位置示意图(前为X射线面板采集仪，后为扇贝)。
图3为本发明实施例1中X射线拍摄扇贝闭壳肌效果图。
图4为本发明实施例2中扇贝闭壳肌面积测量示意图。
图5为本发明实施例3中不同参数条件X射线拍摄虾夷扇贝闭壳肌效果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种活体无损检测贝类肌肉的方法，步骤如下：
(1)取活性较好(外套膜自然舒展，软体部未大幅度收缩)的扇贝，清除壳表面污损生物后，将待测个体置于装有海水(4℃～15℃为宜)的容器中；
(2)安装X射线图像采集装置(厂家：深圳天和时代电子设备有限公司AT2310)，具体是将X光射线源、X射线面板采集仪(包含X射线控制盒)分别与安装有X射线采集系统软件的PC端连接在一起，如图1所示；
(3)将X光射线源发射源口对准X射线面板采集仪“+”位置(中心位置)，X光发射源与采集仪面板间距在1.2m-1.5m；
(4)PC端打开数据采集系统软件，进行探点矫正设置：点击默认值，读取系统配置默认值；
(5)X光放射源参数设置：设定高压：手动输入值高压值120(KV)，点击获取设定高压确定设置成功；同理设定电流为800uA；
(6)X射线面板采集仪参数设置：选择软件出发模式，按照如下参数设置：ExposureTime 1500ms(照射时间1500s)，Delay Time 1000ms(延迟时间1000s)，Integrate Time100ms(整合时间100ms)，double exposure(二次曝光)；点击应用，确认执行此参数；(7)将待测扇贝从容器中捞出，擦干壳表水分，左壳朝上平放于X射线面板采集仪“+”位置(中心位置)，如图2所示；将标准比例尺放置于扇贝绞合部左侧2cm处，确保标准比例尺与扇贝成像不重叠；
(8)确保安全防护无误后，在X射线采集系统中点击打开光源，打开串口触发X射线放射源进行拍摄；
(9)获取X射线图像，手动调整对比度及亮度以获得清晰的闭壳肌轮廓，如图3所示，保存拍摄图像于默认文件夹中；
(10)PC端打开ImageJ软件(图像处理软件)，打开步骤9保存的图像，选中Freehandselections勾勒闭壳肌、标准比例尺外轮廓(图4中标记出的区域)，使用ROI manager测量并记录数据，Area1为闭壳肌面积，Area2为标准比例尺面积
(11)闭壳肌与标准比例尺的面积比值即为被测样品的闭壳肌面积真实值，即此例中闭壳肌面积S＝Area1/Area2＝14319/1482＝9.66cm2，所用标准比例尺的面积为1cm2。
实施例2
分别按照以下两种设置，采用X射线图像采集装置采集同一枚扇贝的X射线图像，结果如图5所示(左边为第一种设置，右边为第二种设置)。从图中可以看出，在外壳成像效果接近的情况下，第一种设置得到的图像中闭壳肌成像清晰，其可以更准确的检测到闭壳肌的尺寸信息。
第一种设置：
放射源参数设置：高压值120(KV)，电流为800uA；
X射线面板采集仪参数设置：选择软件出发模式，按照如下参数设置：ExposureTime 1500ms(照射时间1500s)，Delay Time 1000ms(延迟时间1000s)，Integrate Time100ms(整合时间100ms)，double exposure(二次曝光)；点击应用，确认执行此参数。
第二种设置：
放射源参数设置：高压值40(KV)，电流为300uA；
X射线面板采集仪参数设置：选择软件出发模式，按照如下参数设置：ExposureTime 500ms(照射时间500s)，Delay Time 500ms(延迟时间500s)，Integrate Time 50ms(整合时间50ms)，double exposure(二次曝光)；点击应用，确认执行此参数。
实施例3
特选取不同年龄、不同大小(一龄壳高约3cm，三龄壳高约9cm)的虾夷扇贝共计232枚，采用实施例1所述方法对其闭壳肌横截面积进行测量统计，同时解剖相关虾夷扇贝测量闭壳肌重量，计算虾夷扇贝横截面积与真实肉柱重量的相关性(表1)，结果表明，不同年龄扇贝的闭壳肌横截面与闭壳肌重量呈极显著相关，说明使用本发明在无损条件下所获得扇贝闭壳肌的面积数据可以用来反映真实重量，进而表明横截面积可以用来作为贝类选种的标准。
表1不同年龄扇贝闭壳肌重量相关性
| 一龄贝 | 三龄贝 | |
| R：闭壳肌面积与重量 | 0.937** | 0.855** |
| P value | 2.84E-21 | 1.58E-22 |
**相关性在0.01水平上显著(双尾)
本实施例在验证方法准确性的同时，也关注短暂的X射线是否会对扇贝的活性造成影响，经过X光射线透视后的个体在暂养过程中并未出现活性降低或者死亡现象，测定后的个体也可正常繁殖，其后代发育正常。
本发明旨在突破传统方法中必须通过解剖待测贝类个体来获取闭壳肌重量，因而无法实现活体检测的技术瓶颈，通过光学无损的检测方式获取到清晰的闭壳肌图像并准确测定其横截面积，为贝类闭壳肌性状的测定、评价及品种选育提供了全新的平台。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (4)
1.一种快速的活体无损检测和评价贝类肌肉量的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)收集和挑选待测活体贝；
(2)安装好X光射线采集装置,设置检测参数，将待测活体贝，左壳朝上平放于X射线面板采集仪中心位置，将面积为A的标准比例尺放置于扇贝一侧，确保标准比例尺与活体贝成像不重叠；
(3)触发X射线放射源进行拍摄，得到待测活体贝和标准比例尺的X射线图像，调整对比度及亮度以获得清晰的闭壳肌和标准比例尺的轮廓，然后确定闭壳肌的面积。
2.根据权利要求1所述的快速的活体无损检测和评价贝类肌肉量的方法，其特征在于，勾勒X射线图像中闭壳肌、标准比例尺外轮廓，并测量闭壳肌、标准比例尺的面积Area1和Area2，计算闭壳肌横截面积：
3.根据权利要求2所述的快速的活体无损检测和评价贝类肌肉量的方法，其特征在于，通过图像处理软件计算勾选出的闭壳肌、标准比例尺的面积Area1和Area2。
4.根据权利要求2或3所述的活体无损检测贝类肌肉的方法，其特征在于，所述检测参数为：X光发射源与采集仪面板间距为1.2m-1.5m；X光放射源参数设置：高压值120(KV)，电流为800uA；X射线面板采集仪参数设置：照射时间1500s，延迟时间1000s，整合时间100ms，二次曝光。
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