CN110714050A - 一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒 - Google Patents

一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN110714050A
CN110714050A CN201810767015.9A CN201810767015A CN110714050A CN 110714050 A CN110714050 A CN 110714050A CN 201810767015 A CN201810767015 A CN 201810767015A CN 110714050 A CN110714050 A CN 110714050A
Authority
CN
China
Prior art keywords
strain
bacteria
strains
yeast
acute toxicity
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810767015.9A
Other languages
English (en)
Inventor
唐小标
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
YONGZHOU VOCATIONAL TECHNICAL COLLEGE
Original Assignee
YONGZHOU VOCATIONAL TECHNICAL COLLEGE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by YONGZHOU VOCATIONAL TECHNICAL COLLEGE filed Critical YONGZHOU VOCATIONAL TECHNICAL COLLEGE
Priority to CN201810767015.9A priority Critical patent/CN110714050A/zh
Publication of CN110714050A publication Critical patent/CN110714050A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，包括：从国家环境微生物专业菌种库中获取30‑40个不同种属的菌株为材料，备用；然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5‑三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10‑15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。本发明选取最合适的菌种进行培养成受试菌，然后与多种微生物反应，最终快速的测试出微生物的毒性，相对灵敏度更高，效果更好，速度更快。本发明还公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒。

Description

一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒
技术领域
本发明涉及一种对急性毒性的测试及其试剂盒的技术领域，尤其是一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒。
背景技术
微生物包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。涵盖了有益跟有害的众多种类，广泛涉及食品、医药、工农业、环保等诸多领域。在中国大陆地区的教科书中，均将微生物划分为以下8大类：细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体。微生物试验相对于其他生物试验方法，在毒性检测中具有不可比拟的优势。微生物发展时间短，可以大大缩短试验时间；操作容量小而受试生物量大，能够反映整个群体的染毒效应，而非个别效应；微生物适应力强，能用于各种灵敏度要求不同的环境样品的测定；没有道德上的争议存在。目前用于水质检测的微生物检测法主要有以下几种：生物发光法、生长抑制法、呼吸计量法、酶活法及硝化速率法等等。但是目前的方法只能对单一微生物进行检测，导致检测效率低，时间长。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述现有技术的不足而提供一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒。
为了实现上述目的，本发明所设计的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，具体包括以下步骤：
步骤1、从国家环境微生物专业菌种库中获取30-40个不同种属的菌株为材料，备用；
步骤2、然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10-15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；
步骤3、然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。
进一步，在步骤2中的用于培养受试菌的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。
进一步，在步骤1中，从国家环境微生物专业菌种库中获取35不同种属的菌株为材料；备用。
进一步，在步骤2中。然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了12株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；其中所述的12株细菌和1株酵母菌的选择方式是选择每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系差距按顺序排列、系统发育优良情况按顺序排列、对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性差异值从大到小进行排列，最终选取前12位的细菌和1株酵母菌。
本发明还还公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒，包括受试菌株、培养受试菌株的培养液、培养受试菌株的器皿和2，3，5-三苯基四氮唑，其特征在于，还包括壳体、显示器和控制器，在壳体内设有多个检测通道和对照通道，每一个检测通道和对照通道内均设有一个观察窗口，在每一个检测通道内设有光电检测装置和探测器，所述光电检测装置、探测器和显示器均与控制器连接。
进一步，所述培养受试菌株的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。
本发明得到的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒，本发明选取最合适的菌种进行培养成受试菌，然后与多种微生物反应，最终快速的测试出微生物的毒性，相对灵敏度更高，效果更好，速度更快。
附图说明：
图1是实施例1中一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒的结构示意图。
附图标记中：1.壳体；2.显示器；3.控制器；4.检测通道；5.对照通道；6.观察窗口；7.光电检测装置；8.探测器。
具体实施方式
下面结合实施例对发明创造作进一步说明。
实施例1：
如图1所示，本实施例提供的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，具体包括以下步骤：
步骤1、从国家环境微生物专业菌种库中获取30-40个不同种属的菌株为材料，备用；
步骤2、然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10-15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；
步骤3、然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。
进一步，在步骤2中的用于培养受试菌的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。
进一步，在步骤1中，从国家环境微生物专业菌种库中获取35不同种属的菌株为材料；备用。
进一步，在步骤2中。然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了12株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；其中所述的12株细菌和1株酵母菌的选择方式是选择每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系差距按顺序排列、系统发育优良情况按顺序排列、对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性差异值从大到小进行排列，最终选取前12位的细菌和1株酵母菌。
本实施例还还公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒，包括受试菌株、培养受试菌株的培养液、培养受试菌株的器皿和2，3，5-三苯基四氮唑，其特征在于，还包括壳体1、显示器2和控制器3，在壳体1内设有多个检测通道4和对照通道5，每一个检测通道4和对照通道5内均设有一个观察窗口6，在每一个检测通道4内设有光电检测装置7和探测器8，所述光电检测装置7、探测器8和显示器2均与控制器3连接。
进一步，所述培养受试菌株的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。
本发明选取最合适的菌种进行培养成受试菌，然后与多种微生物反应，最终快速的测试出微生物的毒性，相对灵敏度更高，效果更好，速度更快。
实施例2：
本实施例提供的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，具体包括以下步骤：
步骤1、从国家环境微生物专业菌种库中获取30个不同种属的菌株为材料，备用；
步骤2、然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；
步骤3、然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。
进一步，在步骤2中的用于培养受试菌的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。
进一步，在步骤1中，从国家环境微生物专业菌种库中获取35不同种属的菌株为材料；备用。
其中所述的10株细菌和1株酵母菌的选择方式是选择每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系差距按顺序排列、系统发育优良情况按顺序排列、对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性差异值从大到小进行排列，最终选取前10位的细菌和1株酵母菌。
实施例3：
本实施例提供的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，具体包括以下步骤：
步骤1、从国家环境微生物专业菌种库中获取40个不同种属的菌株为材料，备用；
步骤2、然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；
步骤3、然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。
进一步，在步骤2中的用于培养受试菌的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。
其中所述的15株细菌和1株酵母菌的选择方式是选择每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系差距按顺序排列、系统发育优良情况按顺序排列、对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性差异值从大到小进行排列，最终选取前15位的细菌和1株酵母菌。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤1、从国家环境微生物专业菌种库中获取30-40个不同种属的菌株为材料，备用；
步骤2、然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10-15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；
步骤3、然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。
2.根据权利要求1所述的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，其特征在于，在步骤2中的用于培养受试菌的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。
3.根据权利要求1或2所述的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，其特征在于，在步骤1中，从国家环境微生物专业菌种库中获取35不同种属的菌株为材料；备用。
4.根据权利要求1或2所述的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，其特征在于，在步骤2中。然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了12株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；其中所述的12株细菌和1株酵母菌的选择方式是选择每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系差距按顺序排列、系统发育优良情况按顺序排列、对2，3，5-三苯基四氮唑的响应稳定性差异值从大到小进行排列，最终选取前12位的细菌和1株酵母菌。
5.一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒，包括受试菌株、培养受试菌株的培养液、培养受试菌株的器皿和2，3，5-三苯基四氮唑，其特征在于，还包括壳体(1)、显示器(2)和控制器(3)，在壳体(1)内设有多个检测通道(4)和对照通道(5)，每一个检测通道(4)和对照通道(5)内均设有一个观察窗口(6)，在每一个检测通道(4)内设有光电检测装置(7)和探测器(8)，所述光电检测装置(7)、探测器(8)和显示器(2)均与控制器(3)连接。
6.根据权利要求5所述的一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒，其特征在于，所述培养受试菌株的器皿为上下分布构成双层的96孔板，且96孔板的上下层均为一端铰接形式。
CN201810767015.9A 2018-07-13 2018-07-13 一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒 Pending CN110714050A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810767015.9A CN110714050A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810767015.9A CN110714050A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110714050A true CN110714050A (zh) 2020-01-21

Family

ID=69209163

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810767015.9A Pending CN110714050A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110714050A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996011681A1 (fr) * 1994-10-14 1996-04-25 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Antidiarrheique therapeutique et preventif
CN102277409A (zh) * 2011-08-12 2011-12-14 广东省微生物研究所 一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒
CN103014116A (zh) * 2012-11-22 2013-04-03 同济大学 一种建立Hormesis剂量-效应拟合模型的方法
CN107365827A (zh) * 2016-05-11 2017-11-21 杭州健昵福生物科技有限公司 一种将单磺酸四氮唑盐用于检测细胞活力的用途及方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996011681A1 (fr) * 1994-10-14 1996-04-25 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Antidiarrheique therapeutique et preventif
US5952380A (en) * 1994-10-14 1999-09-14 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Method for treating diarrhea
CN102277409A (zh) * 2011-08-12 2011-12-14 广东省微生物研究所 一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒
CN103014116A (zh) * 2012-11-22 2013-04-03 同济大学 一种建立Hormesis剂量-效应拟合模型的方法
CN107365827A (zh) * 2016-05-11 2017-11-21 杭州健昵福生物科技有限公司 一种将单磺酸四氮唑盐用于检测细胞活力的用途及方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李建伟: "污染物的微生物毒性检测方法的比较研究", 《化学世界》 *
等: "污染物的微生物毒性检验", 《上海环境科学》 *
钟才高等: "用细菌脱氢酶活性抑制试验评价环境毒物毒性", 《中华预防医学杂质》 *
陈莉等: "细菌脱氢酶活性生物测试法用于水质毒性检测的改进", 《中国环境监测》 *
陈莉等: "脱氢酶活性检测水质毒性方法改进", 《中国环境科学学会学术年会论文集（2009）》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Jasson et al. Alternative microbial methods: An overview and selection criteria
Luo et al. Disposable bioluminescence-based biosensor for detection of bacterial count in food
Price et al. E. coli as an indicator of contamination and health risk in environmental waters
AU2017393714B2 (en) Genotoxic substance detection vector and detection method thereof
CN106755287B (zh) 一种微生物相对含量检测计数方法
Greetham Phenotype microarray technology and its application in industrial biotechnology
Ogram et al. Methods of soil microbial community analysis
Ren et al. Rapid detection of antibiotic resistance in Salmonella with screen printed carbon electrodes
Fung Predictions for rapid methods and automation in food microbiology
Marathe et al. Utility of CHROMagar™ Candida Plus for presumptive identification of Candida auris from surveillance samples
Vasavada et al. Conventional and novel rapid methods for detection and enumeration of microorganisms
Singh et al. Evaluation of biomass
CN101633952A (zh) 水产品中5种致病性弧菌检测试剂盒及其检测方法
CN111635929A (zh) 一种双酶放大系统以及基于该系统的细菌活性检测方法
CN110714050A (zh) 一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒
Goldschmidt et al. New methods for microbiological analysis of food
Fung Overview of rapid methods of microbiological analysis
Chien et al. Comparison of three automated urinalysis systems—Bayer Clinitek Atlas, Roche Urisys 2400 and Arkray Aution Max for testing urine chemistry and detection of bacteriuria
White Chemical characterization of films
Chai et al. A portable optical sensor based on a one-off test strip for fast evaluation of bacterial contamination in raw tofu
Chapman et al. Detection methods for faecal contamination events: The gap for Australia
Banerjee et al. Novel microbial diagnostic methods for clinical, environmental, and food samples
Fung Rapid methods and automation in microbiology: A review
Efthymiopoulos et al. A critical review of analysis techniques for the assessment of the indoor fungal burden
Fung Rapid methods and automation in food microbiology: 25 years of development and predictions

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200121

RJ01 Rejection of invention patent application after publication