CN110672594A - 一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法 - Google Patents

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关丽云
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Abstract

本发明公开了一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法。该方法包括：将反应剂溶液滴加在芯片载体上，得到检测芯片；按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液；将不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在检测芯片的检测区域上，显色，测量透射光，将透射光值与标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线，得出对应的标准曲线方程；将待测样品溶液滴加在检测芯片的检测区域上，显色，测量透射光，数值化读取待测样品的透射光值，将待测样品的透射光值数据代入标准曲线方程中，计算得到所述待测样品的浓度。该方法步骤简单，易于操作，能改善由于颜色强度的饱和问题造成高浓度检测物的分析结果不准确问题，可广泛应用于生物、化学等检测领域。

Description

一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法
技术领域
本发明属于生物化学检测领域，具体涉及一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法。
背景技术
比色法是通过比较或测量有色物质颜色强度来确定待测组分含量的方法。比色法作为一种定量分析的方法，该方法以生成有色化合物的显色反应为基础，在分析芯片上的应用一般包括以下步骤：首先是在分析芯片上使显色试剂与不同浓度的待测物标准溶液反应，形成颜色逐渐递变的标准色，然后将待测组分与显色试剂也在完全相同条件下显色，根据反应产生颜色的强度找出与标准溶液最相近的那一份标准，计算确定试样中待测组分的含量。
在芯片分析检测领域，比色法是应用最广泛的分析方法之一，它由于操作简单和易于直接读取结果，提供了一个直观的方法来快速量化目标分析物。目前，比色法在环境监测、核酸检测、食品分析、法医检测等方面的应用越来越有吸引力，已广泛应用于酶、金属离子、蛋白、核酸、抗体、DNA、病原体、葡萄糖、尿酸、亚硝酸根离子以及其他各种疾病标记物的检测。
比色检测方法在芯片上定量或半定量分析的实际应用主要基于光反射结果分析实现的，通过在芯片上添加指示剂或者底物溶液，然后添加不同浓度的待测物标准溶液使之反应显色或使原芯片的颜色褪色，待反应完成后，通过扫描仪或者手机、相机设备采集结果图片，最后在电脑软件中测量色块的颜色强度，并将结果进行处理，得到颜色强度与待测物浓度相关的标准曲线，或者直接将结果图片作为比色卡，在以同样的方法，待测样品与对应的指示剂和底物反应后，将其反应结果与标准曲线进行比对，或以裸眼法进行比色，从而得到待测样中目标检测物的含量。
公开号为CN 104677896 A公开了“一种用于比色分析的纸基微流控芯片的制备及应用”，该发明制作了用于比色分析的纸基微流控芯片，并将该芯片应用于六价铬的检测，通过对检测区进行反应剂的预处理，然后添加待测铬酸钾溶液，待显色稳定后，用扫描仪扫描显色结果并在Photoshop中获取M值，得到反应后颜色强度和六价铬浓度的变化曲线。
公开号为CN 105044101 A公开了“一种基于裸眼目视比色的农药残留速测卡”，该发明设计的速测卡基于碘化硫代乙酰胆碱被乙酰胆碱酯酶水解的产物可使检测条上色带退色,而某些农药对乙酰胆碱酯酶的活性有抑制作用的原理，通过比较检测条上色带的退色条数,即可半定量的检测残留农药。本发明的速测卡基于比色检测，以裸眼法进行结果比对，从而实现蔬菜、水果、土壤等样品中农药残留的半定量测定。
公开号为CN 105973879 A公开了“一种汞离子检测用的纸芯片比色分析系统及其构建方法和应用”，该发明构建了一种汞离子检测用的纸芯片比色分析系统，通过铂纳米颗粒催化TMB/H2O2显色反应，用数码相机或者智能手机对各纸芯片的颜色结果拍照并记录保存,得到若干份颜色深浅程度呈梯度变化的纸芯片，直接用于肉眼比色分析。或结合可以发射激光和接收反射激光的光纤分析设备,精确读取纸芯片系统的颜色强度，最终实现溶液中汞离子识别和定量。
公开号为CN 106442516 A公开了“一种利用纸芯片比色分析装置检测核酸浓度的方法”，该发明涉及一种利用纸芯片比色分析装置检测核酸浓度的方法,通过在纸芯片上预先滴加TMB/H2O2显色底物溶液；然后滴加核酸铂纳米复合材料至纸芯片上,使之与显色底物溶液混合后发生颜色从无色变化至蓝色的显色反应；最后根据肉眼观察进行判断纸芯片上的蓝色深度变化与核酸浓度之间的关系，或将纸芯片放置于可以发射激光和接收反射激光的光纤分析设备中，进一步数值化精确读取纸芯片的颜色强度，实现对目标核酸浓度的检测。
以上研究均基于芯片比色检测方法，通过光反射结果分析进行判断目标检测物的浓度或含量。该结果分析方法由于其易于操作以及直观的颜色读取等优点使之是芯片检测最广泛使用的方法之一。但是，当目标检测物浓度较高时，芯片反应区域表面生成物增多，由于生成物的堆积会导致光反射不能到达芯片的内部，从而使基于光反射的结果分析方法产生颜色强度的饱和，不能准确地判断高浓度检测物的含量或者浓度。因此，芯片比色检测方法需要一种基于光透射结果分析方法，该方法应当使光通过透射的方式穿过整个芯片检测区域，从而获取透射值与检测物浓度或含量的关系，以此进一步判断目标分析物的浓度或含量。
发明内容
为了克服现有技术存在的上述不足，本发明的目的是提供一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法。
本发明的目的至少通过如下技术方案之一实现。
现有的芯片比色检测方法基于光反射结果分析时可能在目标检测物浓度较高时，芯片反应区域表面生成物增多，由于生成物的堆积会导致光反射不能到达芯片的内部，从而使基于光反射的结果分析方法产生颜色强度的饱和，不能准确地判断高浓度检测物的含量或者浓度的问题，为了解决上述的问题，本发明提供了一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法。
本发明提供的一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，检测物和反应剂或底物在芯片载体的检测区域充分反应显色后，使用仪器使其内置的光源透射到芯片载体的检测区域，通过获取透射值与检测物浓度或含量的关系，进一步判断目标分析物的浓度或含量。该方法基于光透射的原理，可改善基于光反射结果分析的芯片比色检测方法由于颜色强度的饱和问题造成高浓度检测物的分析结果不准确问题，可广泛应用于生物、化学等检测领域。
本发明提供的一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，主要通过使用仪器测量芯片检测区域显色反应后的透射值，从而判断检测物的浓度或含量。
本发明提供的一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，包括如下步骤：
（1）制作检测芯片：将反应剂溶液滴加在芯片载体的检测区域上，干燥得到检测芯片；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液；
（3）将步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，然后进行显色反应，用仪器测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取检测结果的透射光值，得到每一个浓度标准检测物溶液对应的透射光值；
（4）将步骤（3）所述透射光值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线，得出对应的标准曲线方程；
（5）将待测样品溶液滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，进行显色反应，然后用仪器测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取待测样品的透射光值，将所述待测样品的透射光值数据代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算得到所述待测样品的浓度。
进一步地，步骤（1）所述芯片载体的材料为滤纸、打印纸、铜版纸、吸水纸、色谱纸、硝基纤维素膜、聚酯纤维素膜、玻璃纤维膜、布类、PVDF膜材料、PVC膜材料及经化学或生物修饰的上述材料等中的一种。
优选地，步骤（1）所述芯片载体的材料为滤纸。
优选地，步骤（1）所述芯片载体的材料为色谱纸。
进一步优选地，步骤（1）所述芯片载体的材料为Whatman 1号滤纸。
进一步优选地，步骤（1）所述芯片载体的材料为Whatman 102号滤纸。
进一步优选地，步骤（1）所述芯片载体的材料为Whatman 4号滤纸。
进一步优选地，步骤（1）所述芯片载体的材料为1号色谱纸。
进一步地，步骤（1）所述芯片载体的检测区域能够使用光刻法、喷墨打印、喷墨刻蚀、激光打印、印章法、柔性版印刷、丝网印刷、凹版印刷、手绘及仪器绘图法、雕刻法及等离子体处理法中的一种方法划定。
进一步地，步骤（1）所述检测区域为圆形区域，所述检测区域的直径≥1mm。
优选地，步骤（1）所述检测区域的直径为3mm。
优选地，步骤（1）所述检测区域的直径为5mm。
进一步地，步骤（1）所述芯片载体的厚度为0.05mm-0.215mm。
优选地，步骤（1）所述芯片载体的厚度为0.153 mm-0.215 mm。
进一步地，步骤（2）所述标准检测物溶液为能够与反应剂溶液发生比色反应的溶液；所述标准检测物为蛋白、核酸、抗体、DNA、病原体、葡萄糖、尿酸、各种疾病标记物、抗生素、水体中的污染物（例如重金属离子，COD，BOD）以及食品残留的农药等中的一种以上。
进一步地，步骤（3）所述仪器为可以基于光透射原理获取比色结果的仪器。
优选地，步骤（3）所述仪器为光密度计及分光光度计中的一种。
进一步优选地，步骤（3）所述仪器为光密度计。
进一步地，步骤（3）中，进行显色反应前，若该显色反应时需要滴加辅助反应溶液，则需要在显色反应前配制并根据显色反应的要求滴加，若该显色反应不需要滴加辅助反应溶液，则不需要再显色反应前配制；所述辅助反应溶液为调节酸碱度的缓冲液、能够调节纸张亲水能力的溶液、能够调节纸张透光性能的溶液中的一种以上。
进一步地，步骤（3）所述透射光值可以为根据透射率计算得到的光密度值或根据透射光谱计算得到的色度值。
本发明提供了一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法。所述检测方法包括以下步骤：
步骤一、在芯片载体上划定检测区域，滴加反应剂溶液，制作检测芯片；
步骤二、比色检测的溶液的配制：配制反应剂溶液、不同浓度标准检测物溶液、待测检测物溶液以及其他辅助反应溶液；
步骤三、将检测芯片进行预处理或直接在检测芯片上进行标准检测物以及待测检测物与反应剂或底物的显色反应；
步骤四、观测并记录芯片的比色结果，将显色反应后的检测区域进行处理或直接使用仪器测量芯片检测区域的透射光，数值化读取芯片的透射值；
步骤五、将测得的透射值与标准检测物浓度之间的关系建立标准曲线，将测得的待测物溶液透射值代入已建立的透射值-检测物浓度标准曲线方程，求得溶液中待测物的浓度。
本发明提供的方法工艺中，步骤一所述制作检测芯片的基底材料可以为为滤纸、打印纸、铜版纸、吸水纸、色谱纸、硝基纤维素膜、聚酯纤维素膜、玻璃纤维膜、布类、PVDF膜材料、PVC膜材料及经化学或生物修饰的上述材料中的一种。
本发明提供的方法工艺中，步骤一所述划定检测区域的方法可以为光刻法、喷墨打印、喷墨刻蚀、激光打印、印章法、柔性版印刷、丝网印刷、凹版印刷、手绘及仪器绘图法、雕刻法、等离子体处理法中的一种。所述检测区域为在纸张（芯片载体）上限定的一个区域，使滴加的溶液限制在该区域内进行反应。
本发明提供的方法工艺中，步骤一所述检测芯片的检测区域直径尺寸大于等于1mm。
本发明提供的方法工艺中，步骤二所述其他辅助反应溶液可以为反应所需的溶液，例如调节酸碱度的缓冲液等。当所检测的反应中需要用到辅助反应溶液时才配制，当所检测的反应中不需要用到辅助反应溶液时则不需要配制。
本发明提供的方法工艺中，步骤二所述检测物为可以与相应的反应剂或者底物发生比色反应的蛋白、核酸、抗体、DNA、病原体、葡萄糖、尿酸、各种疾病标记物、抗生素、水体中的污染物（重金属离子，COD，BOD）、食品残留的农药以及其他液体中的离子或分子中的一种以上。
本发明提供的方法工艺中，步骤四所述仪器为可以基于光透射原理获取比色结果的光密度计或分光光度计。
本发明提供的方法工艺中，步骤四所述透射值可以为根据透射率计算得到的光密度值或根据透射光谱计算得到的色度值。
本发明涉及一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，属于生物化学检测领域。本发明的目的是为了提供一种新型的芯片比色检测结果分析方法。该方法包括：制作检测芯片载体；将检测芯片进行预处理或直接在检测芯片上进行标准检测物以及待测检测物与反应剂或底物的显色反应；将显色反应后的检测区域进行处理或直接使用仪器测量芯片反应区域的透射光，数值化读取芯片的透射值；将测得的透射值与标准检测物浓度之间的关系建立标准曲线（即透射值-检测物浓度标准曲线），得到透射值-检测物浓度标准曲线对应的方程式，将测得的待测物溶液透射值代入已建立的透射值-检测物浓度标准曲线方程式，求得溶液中待测物的浓度。该方法步骤简单，易于操作，不同于常见的基于光反射的芯片比色检测结果分析方法，可广泛应用于生物、化学等检测领域。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：
（1）本发明提供的一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，该方法不同于常见的基于光反射结果分析的芯片比色检测方法，提出了基于光透射结果分析方法，待检测物和反应剂或底物在芯片检测区域充分反应显色后，使用仪器使其内置的光源透射到芯片检测区域，通过获取透射值与检测物浓度或含量的关系，进一步判断目标分析物的浓度或含量；
（2）本发明提供的一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，该方法在一定程度上可以改善芯片比色检测方法基于光反射结果分析过程中目标检测物浓度较高时，由于颜色强度的饱和问题造成高浓度检测物的分析结果不准确问题，而且本发明提供的方法得到的标准曲线线性范围比现有方法的线性范围扩大了2倍-10倍，更有利于更准确的判断较高浓度检测物的含量或者浓度；
（3）本发明提供的一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，该方法通过使用仪器直接测得、读取芯片检测区域的透射值，减少了芯片检测结果处理的步骤，更简洁、直观的获取显色区域的分析结果；
（4）本发明提供的一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，该方法无需扫描仪、手机、相机以及其他图像采集设备进行芯片检测区域图像的采集，避免了因外界环境因素导致的色彩误差对结果分析造成的影响。
附图说明
图1为对比例1中用扫描仪获取的铁离子显色图片；
图2a为实施例1铁离子检测基于光透射建立的标准曲线示意图；
图2b为实施例1铁离子检测基于光透射建立的标准曲线的线性范围示意图；
图3a为对比例1铁离子检测基于光反射建立的标准曲线示意图；
图3b为对比例1铁离子检测基于光反射建立的标准曲线的线性范围示意图；
图4为对比例2中用扫描仪获取的亚硝酸根离子显色图片；
图5a为实施例2亚硝酸根离子检测基于光透射建立的标准曲线示意图；
图5b为实施例2亚硝酸根离子检测基于光透射建立的标准曲线的线性范围示意图；
图6a为对比例2亚硝酸根离子检测基于光反射建立的标准曲线示意图；
图6b为对比例2亚硝酸根离子检测基于光反射建立的标准曲线的线性范围示意图；
图7为对比例3中用扫描仪获取的葡萄糖显色图片；
图8a为实施例3葡萄糖检测基于光透射建立的标准曲线示意图；
图8b为实施例3葡萄糖检测基于光透射建立的标准曲线的线性范围示意图；
图9a为对比例3葡萄糖检测基于光反射建立的标准曲线示意图；
图9b为对比例3葡萄糖检测基于光反射建立的标准曲线的线性范围示意图；
图10为对比例4中用扫描仪获取的滴加香柏油后的葡萄糖显色图片；
图11a为实施例4滴油后的葡萄糖检测基于光透射建立的标准曲线示意图；
图11b为实施例4滴油后的葡萄糖检测基于光透射建立的标准曲线的线性范围示意图；
图12a为对比例4滴油后的葡萄糖检测基于光反射建立的标准曲线示意图；
图12b为对比例4滴油后的葡萄糖检测基于光反射建立的标准曲线的线性范围示意图。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的具体实施作进一步说明，但本发明的实施和保护不限于此。需指出的是，以下若有未特别详细说明之过程，均是本领域技术人员可参照现有技术实现或理解的。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，视为可以通过市售购买得到的常规产品。
实施例提供的基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，包括：制作检测芯片载体；配制比色检测所需的溶液，所述比色检测所需的溶液包括反应剂溶液、底物溶液、不同浓度标准检测物溶液、待测检测物溶液以及其他辅助反应的溶液；将检测芯片进行预处理或直接在检测芯片上进行标准检测物以及待测检测物与反应剂或底物的显色反应；观测并记录芯片的比色结果，将显色反应后的检测区域进行处理或直接使用仪器测量芯片检测区域的透射光，仪器通过内置的光源发射光线，光线透过检测区域经过反射、折射、散射以及吸收后经仪器接收，数值化读取芯片的透射值；将测得的透射值与标准检测物浓度之间的关系建立标准曲线，将测得的待测物溶液透射值代入已建立的透射值-检测物浓度标准曲线方程，求得溶液中待测物的浓度。本发明提供的方法可广泛应用于生物、化学等检测领域。
实施例1
为了验证本发明提供的芯片比色检测方法，实施例1选用浓度为8 mg/mL的邻二氮菲（Phen）的乙醇溶液及0.1 g/mL的盐酸羟胺醋酸钠缓冲液（6.3mol/L、pH值为4.5）作为反应剂溶液；选用浓度分别为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、25 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50mg/L、100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L、400 mg/L、500 mg/L、750 mg/L、1000 mg/L的Fe(Ⅱ)离子溶液（即Fe2+溶液，实施例1选用的是(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O的溶液）作为按浓度梯度配制的不同浓度标准检测物溶液；选用浓度为200 mg/L的Fe(Ⅱ)离子溶液（(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O的溶液）作为待测样品溶液，若用实施例1提供的方法检测出待测样品溶液浓度为200± 20 mg/L，则说明实施例1提供的方法能够准确、客观地检测出待测样品溶液浓度，若用实施例1提供的方法检测出待测样品溶液浓度不在200 ± 20 mg/L范围内，则说明实施例1提供的方法不能准确、客观地检测出待测样品溶液浓度。
一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，包括如下步骤：
（1）将1.2 μL反应剂溶液（浓度为8 mg/mL的邻二氮菲的乙醇溶液）滴加在芯片载体的检测区域中心上，使反应剂溶液从芯片载体的检测区域中心往外扩散，待干燥后，在同一区域添加1.2 μL浓度为0.1 g/mL的盐酸羟胺醋酸钠缓冲液（6.3mol/L、pH值为4.5），自然风干，干燥后得到检测芯片；所述芯片载体的检测区域是通过丝网印刷的方法制作疏水边界划定的，所述芯片载体为圆形Whatman 102号定性滤纸，所述芯片载体的直径为5mm，厚度为0.153mm；所述检测区域的直径为3mm；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液（(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O的溶液），得到浓度分别为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、25 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、100mg/L、200 mg/L、300 mg/L、400 mg/L、500 mg/L、750 mg/L及1000 mg/L的Fe(Ⅱ)离子溶液（(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O的溶液）；
（3）将1.2 μL步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，进行显色反应，然后用仪器（光密度计）测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取检测结果的光密度值（透射光值），得到每一个浓度标准检测物溶液对应的透射光值；
（4）将步骤（3）所述透射光值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线（如图2a所示），得出对应的标准曲线方程（y=0.0007x+0.0309, R2=0.9825），如图2b所示，其中，x表示为铁离子的浓度，y为光密度值，其线性范围为0 mg/L-500 mg/L；
（5）将1.2 μL待测样品溶液（浓度为200 mg/L的Fe(Ⅱ)离子溶液）滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，进行显色反应，然后用仪器（光密度计）测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取待测样品的光密度值（透射光值），将所述待测样品的光密度值数据代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算得到所述待测样品的浓度。
经计算，所述待测样品的浓度为208.6 mg/L，回收率（recovery rate）为104.3%。
对比例1
对比例1选用浓度为8 mg/mL的邻二氮菲（Phen）的乙醇溶液及浓度为0.1 g/mL的盐酸羟胺醋酸钠缓冲液（6.3mol/L、pH值为4.5）作为反应剂溶液；选用浓度分别为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、25 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L、400 mg/L、500 mg/L、750 mg/L、1000 mg/L的Fe(Ⅱ)离子溶液（即Fe2+溶液，实施例1选用的是（(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O的溶液）作为按浓度梯度配制的不同浓度标准检测物溶液；选用浓度为200 mg/L的Fe(Ⅱ)离子溶液（(NH4)2Fe(SO4)2· 6H2O的溶液）作为待测样品溶液。
一种基于光反射结果分析的检测方法，包括如下步骤：
（1）将1.2 μL反应剂溶液（浓度为8 mg/mL的邻二氮菲的乙醇溶液）滴加在芯片载体的检测区域中心上，使反应剂溶液从芯片载体的检测区域中心往外扩散，待干燥后，在同一区域添加1.2 μL浓度为0.1 g/mL的盐酸羟胺醋酸钠缓冲液（6.3mol/L、pH值为4.5），自然风干，干燥后得到检测芯片；所述芯片载体的检测区域是通过丝网印刷的方法制作疏水边界划定的，所述芯片载体为圆形Whatman 102号定性滤纸，所述芯片载体的直径为5mm，厚度为0.153mm；所述检测区域的直径为3mm；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液（(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O溶液），得到浓度分别为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、25 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L、400 mg/L、500 mg/L、750 mg/L及1000 mg/L的Fe(Ⅱ)离子溶液（(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O的溶液）；
（3）将1.2 μL步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，进行显色反应，然后用仪器（扫描仪）获取所述检测芯片的检测区域的显色图片（如图1所示），测量显色区域的颜色强度值，得到每一个浓度标准检测物溶液对应的颜色强度值；
（4）将步骤（3）所述颜色强度值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线（如图3a所示），得出对应的标准曲线方程y=0.0205x+0.0942，R2=0.9785（如图3b所示），其中x表示为铁离子浓度，y表示为颜色强度值，其线性范围仅为0 mg/L-50mg/L；
（5）将1.2 μL待测样品溶液（浓度为200 mg/L的Fe(Ⅱ)离子溶液）滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，进行显色反应，然后用仪器（扫描仪）获取所述检测芯片的检测区域的显色图片，测量显色区域的颜色强度值，将所述待测样品的颜色强度值数据代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算得到所述待测样品的浓度。
对比例1检测的待测样品浓度为245.32 mg/L，回收率（recovery rate）为122.66%。实施例1与对比例1相比较，实施例1中的铁离子的光密度值和浓度之间的线性范围可达0-500 mg/L。而对比例1中的铁离子的颜色强度和浓度之间的线性范围只能达到0-50 mg/L，由此可以发现，通过实施例1提供的方法测得的结果相比于常用的基于光反射的结果处理方法，线性范围扩大了10倍，因此有利于更准确的判断较高浓度检测物的含量或者浓度。
实施例2
为了验证本发明提供的芯片比色检测方法，实施例2选用Griess试剂作为反应剂溶液；所述Griess试剂的配制包括：将0.5 mL H3PO4、 0.2 g对氨基苯磺酸（PABS）及0.01 g a-萘胺（NED）加入到5 mL 去离子水中，混合均匀，得到所述Griess试剂；选用浓度分别为0 μM、10 μM、50 μM、100 μM、200 μM、500 μM、1000 μM的亚硝酸根离子溶液（实施例2选用的是NaNO2溶液）作为按浓度梯度配制的不同浓度标准检测物溶液。选用浓度为150 μM的亚硝酸根离子溶液（NaNO2溶液）作为待测样品溶液，若用实施例2提供的方法检测出待测样品溶液浓度为150 μM ± 15 μM，则说明实施例2提供的方法能够准确、客观地检测出待测样品溶液浓度，若用实施例2提供的方法检测出待测样品溶液浓度不在150 μM ± 15 μM范围内，则说明实施例2提供的方法不能准确、客观地检测出待测样品溶液浓度。
一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，包括如下步骤：
（1）将2 μL反应剂溶液（Griess试剂）滴加在芯片载体的检测区域中心上，使反应剂溶液从芯片载体的检测区域中心往外扩散，干燥后得到检测芯片；所述芯片载体的检测区域是通过印章印制的方法制作疏水边界划定的，所述芯片载体为圆形Whatman 4滤纸，所述芯片载体的直径为8mm，厚度为0.215 mm；所述检测区域的直径为5mm；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液（亚硝酸根离子溶液），得到浓度分别为0 μM、10 μM、50 μM、100 μM、200 μM、500 μM、1000 μM的亚硝酸根离子溶液（NaNO2溶液）；
（3）将2 μL步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，进行显色反应，然后用仪器（光密度计）测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取检测结果的透射光值，得到每一个浓度标准检测物溶液对应的透射值；
（4）将步骤（3）所述透射光值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线（如图5a所示），得出对应的标准曲线方程（y=0.0023x+0.0325, R2=0.9756），如图5b所示，其中x表示为亚硝酸根离子的浓度，y为光密度值，其线性范围为0 μM - 200 μM；
（5）将2 μL待测样品溶液（浓度为150 μM的NaNO2溶液）滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，进行显色反应，然后用仪器（光密度计）测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取待测样品的透射光值，将所述待测样品的透射光值数据代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算得到所述待测样品的浓度。
经计算，所述待测样品的浓度为155.4 μM，回收率（recovery rate）为103.6%。
对比例2
对比例2选用Griess试剂作为反应剂溶液；所述Griess试剂的配制包括：将0.5 mLH3PO4、 0.2 g 对氨基苯磺酸（PABS）及 0.01 g a-萘胺（NED）加入到5 mL 去离子水中，混合均匀，得到所述Griess试剂；选用浓度分别为0 μM、10 μM、50 μM、100 μM、200 μM、500 μM、1000 μM的亚硝酸根离子溶液（对比例2选用的是NaNO2溶液）作为按浓度梯度配制的不同浓度标准检测物溶液。选用浓度为150 μM的亚硝酸根离子溶液（浓度为150 μM的NaNO2溶液）作为待测样品溶液，
一种基于光反射结果分析的检测方法，包括如下步骤：
（1）将2 μL反应剂溶液（Griess试剂）滴加在芯片载体的检测区域中心上，使反应剂溶液从芯片载体的检测区域中心往外扩散，干燥后得到检测芯片；所述芯片载体的检测区域是通过印章印制的方法制作疏水边界划定的，所述芯片载体为圆形Whatman 4号滤纸，所述芯片载体的直径为8mm，厚度为0.215 mm；所述检测区域的直径为5mm；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液（亚硝酸根离子溶液），得到浓度分别为0 μM、10 μM、50 μM、100 μM、200 μM、500 μM、1000 μM的亚硝酸根离子溶液（NaNO2溶液）；
（3）将2 μL步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，进行显色反应，然后用仪器（扫描仪）获取所述检测芯片的检测区域的显色图片（如图4所示），测量显色区域的颜色强度值，得到每一个浓度标准检测物溶液对应的颜色强度值；
（4）将步骤（3）所述反射值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线（如图6a所示），得出对应的标准曲线方程（y=0.0011x+0.0092, R2=0.9722），如图6b所示，其中x表示为亚硝酸根离子的浓度，y为颜色强度值，其线性范围为0 μM - 100 μM。
（5）将2 μL待测样品溶液（浓度为150 μM的NaNO2溶液）滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，进行显色反应，然后用仪器（扫描仪）获取所述检测芯片的检测区域的显色图片，测量显色区域的颜色强度值，将所述待测样品的颜色强度值数据代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算所述待测样品的浓度。
经计算，对比例2所述待测样品的浓度为172.3 μM，回收率（recovery rate）为114.9%。实施例2与对比例2相比较，实施例2中的亚硝酸根离子的光密度值和浓度之间的线性范围为0-200 μM。而对比例2中的亚硝酸根离子的颜色强度和浓度之间的线性范围为0-100 μM，由此可以发现，通过实施例2提供的方法测得的结果相比于常用的基于光反射的结果处理方法，线性范围扩大了2倍，因此有利于更准确的判断较高浓度检测物的含量或者浓度。
实施例3
为了验证本发明提供的芯片比色检测方法，实施例3选用GOD/HRP酶溶液作为反应剂溶液；所述GOD/HRP酶溶液为GOD酶（葡萄糖氧化酶）与HRP酶（辣根过氧化物酶）在PBS缓冲液混合均匀得到的溶液；所述GOD/HRP酶溶液的配制包括：将GOD酶及HRP酶加入浓度为0.01mol/L的PBS缓冲液（pH值为6.0）中，混合均匀，得到所述GOD/HRP酶溶液，在所述GOD/HRP酶溶液中，GOD酶的浓度为120U/mL，HRP酶的浓度为300 U/mL；
选用TBHBA/4-AAP混合溶液作为显色剂溶液；所述TBHBA/4-AAP混合溶液的配制包括：将2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸（TBHBA）与4-氨基安替比林（4-AAP）加入浓度为0.01 M的PBS缓冲液（pH=7.0）中，混合均匀，得到所述TBHBA/4-AAP混合溶液，在所述TBHBA/4-AAP混合溶液中，2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸（TBHBA）的浓度为5 mg/mL，4-氨基安替比林（4-AAP）的浓度为20 mg/mL。
选用浓度分别为0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM、20 mM的葡萄糖溶液作为按浓度梯度配制的不同浓度标准检测物溶液。选用浓度为5 mM的葡萄糖溶液作为待测样品溶液，若用实施例3提供的方法检测出待测样品溶液浓度为5 mM ± 0.5 mM，则说明实施例3提供的方法能够准确、客观地检测出待测样品溶液浓度，若用实施例3提供的方法检测出待测样品溶液浓度在5 mM ± 0.5 mM范围内，则说明实施例3提供的方法不能准确、客观地检测出待测样品溶液浓度。
一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，包括如下步骤：
（1）将2 μL反应剂溶液（GOD/HRP酶溶液）滴加在芯片载体的检测区域中心上，使反应剂溶液从芯片载体的检测区域中心往外扩散，干燥后得到检测芯片；所述芯片载体的检测区域是通过丝网印刷的方法制作疏水边界划定的，所述芯片载体为1号色谱纸，所述芯片载体的直径为10mm，厚度为0.18 mm；所述检测区域的直径为5mm；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液（葡萄糖溶液），得到浓度分别为0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM及20 mM的葡萄糖溶液；
（3）将2μL所述TBHBA/4-AAP混合溶液滴加在检测芯片的检测区域的中心上，干燥后，将2 μL步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，进行显色反应，然后用仪器（光密度计）测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取检测结果的透射光值，得到每一个浓度标准检测物溶液对应的透射光值；
（4）将步骤（3）所述透射光值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线（如图8a所示）；得出对应的标准曲线方程（y=0.0745x+0.0506, R2=0.9581），如图8a所示，其中x表示为葡萄糖的浓度，y为光密度值，其线性范围为0 mM - 10 mM；
（5）将2μL所述TBHBA/4-AAP混合溶液滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域中心上，干燥后，将2 μL待测葡萄糖溶液（浓度为5 mM）滴加在步骤（1）所述检测芯片上，进行显色反应，然后用仪器（光密度计）测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取待测样品的透射光值，将所述待测样品的透射光值代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算得到所述待测样品的浓度。
经计算，所述待测样品的浓度为5.22 mM，回收率（recovery rate）为104.4%。
对比例3
对比例3选用GOD/HRP酶溶液作为反应剂溶液；所述GOD/HRP酶溶液为GOD酶（葡萄糖氧化酶）与HRP酶（辣根过氧化物酶）在PBS缓冲液混合均匀得到的溶液；所述GOD/HRP酶溶液的配制包括：将GOD酶及HRP酶加入浓度为0.01mol/L的PBS缓冲液（pH值为6.0）中，混合均匀，得到所述GOD/HRP酶溶液，在所述GOD/HRP酶溶液中，GOD酶的浓度为120U/mL，HRP酶的浓度为300 U/mL；
选用TBHBA/4-AAP混合溶液作为显色剂溶液，所述TBHBA/4-AAP混合溶液的配制包括：将2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸（TBHBA）与4-氨基安替比林（4-AAP）加入浓度为0.01 M的PBS缓冲液（pH=7.0）中，混合均匀，得到所述TBHBA/4-AAP混合溶液，在所述TBHBA/4-AAP混合溶液中，2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸（TBHBA）的浓度为5 mg/mL，4-氨基安替比林（4-AAP）的浓度为20 mg/mL；选用浓度分别为0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM、20 mM的葡萄糖溶液作为按浓度梯度配制的不同浓度标准检测物溶液；
一种基于光反射结果分析的检测方法，包括如下步骤：
（1）将2 μL反应剂溶液（GOD/HRP酶溶液）滴加在芯片载体的检测区域中心上，使反应剂溶液从芯片载体的检测区域中心往外扩散，干燥得到检测芯片；所述芯片载体的检测区域是通过丝网印刷的方法制作疏水边界划定的，所述芯片载体为1号色谱纸，所述芯片载体的直径为10mm，厚度为0.18 mm；所述检测区域的直径为5mm；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液（葡萄糖溶液），得到浓度分别为0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM及20 mM的葡萄糖溶液；
（3）将2μL所述TBHBA/4-AAP混合溶液滴加在检测芯片的检测区域中心上，干燥后，将2μL步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，进行显色反应，然后用仪器（扫描仪）获取所述检测芯片的检测区域的显色图片（如图7所示），在软件中测量显色区域的颜色强度值，得到每一个浓度标准检测物溶液对应的颜色强度值；
（4）将步骤（3）所述颜色强度值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线（如图9a所示）；得出对应的标准曲线方程（y=0.1855x+0.0088, R2=0.9811），如图9b所示，其中x表示为葡萄糖的浓度，y为颜色强度值，其线性范围为0 mM - 1 mM；
（5）将2μL所述TBHBA/4-AAP混合溶液滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域中心上，干燥后，将2 μL待测葡萄糖溶液（浓度为5 mM）滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，进行显色反应，然后用仪器（扫描仪）获取所述检测芯片的检测区域的显色图片，测量显色区域的颜色强度值，将所述待测样品的颜色强度值数据代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算所述待测样品的浓度；
经计算，对比例3所述待测样品的浓度为6.31 mM，回收率（recovery rate）为126.2%。实施例3与对比例3相比较，实施例3中的葡萄糖的光密度值和浓度之间的线性范围为0 mM- 10 mM。而对比例2中的葡萄糖的颜色强度和浓度之间的线性范围为0 mM - 1 mM，由此可以发现，通过本发明方法测得的结果相比于常用的基于光反射的结果处理方法，线性范围扩大了10倍，因此有利于更准确的判断较高浓度检测物的含量或者浓度。
实施例4
为了验证本发明提供的芯片比色检测方法，实施例4选用GOD/HRP酶溶液作为反应剂溶液；所述GOD/HRP酶溶液为GOD酶（葡萄糖氧化酶）与HRP酶（辣根过氧化物酶）在PBS缓冲液混合均匀得到的溶液；所述GOD/HRP酶溶液的配制包括：将GOD酶及HRP酶加入浓度为0.01mol/L的PBS缓冲液（pH值为6.0）中，混合均匀，得到所述GOD/HRP酶溶液，在所述GOD/HRP酶溶液中，GOD酶的浓度为120U/mL，HRP酶的浓度为300 U/mL；
选用TBHBA/4-AAP混合溶液作为显色反应剂，香柏油作为辅助反应溶液；所述TBHBA/4-AAP混合溶液的配制包括：将2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸（TBHBA）与4-氨基安替比林（4-AAP）加入浓度为0.01 M的PBS缓冲液（pH=7.0）中，混合均匀，得到所述TBHBA/4-AAP混合溶液；在所述TBHBA/4-AAP混合溶液中，2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸（TBHBA）的浓度为5 mg/mL，4-氨基安替比林（4-AAP）的浓度为20 mg/mL；所述香柏油的作用是对检测区域的填充以减少光的散射；选用浓度分别为0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM、20 mM的葡萄糖溶液作为按浓度梯度配制的不同浓度标准检测物溶液。
选用浓度为5 mM的葡萄糖溶液作为待测样品溶液，若用实施例4提供的方法检测出待测样品溶液浓度为5 mM ± 0.5 mM；若用实施例4提供的方法检测出待测样品溶液浓度为5 mM ± 0.5 mM，则说明实施例4提供的方法能够准确、客观地检测出待测样品溶液浓度，若用实施例4提供的方法检测出待测样品溶液浓度不在5 mM ± 0.5 mM范围内，则说明实施例4提供的方法不能准确、客观地检测出待测样品溶液浓度。
一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，包括如下步骤：
（1）将2 μL反应剂溶液（GOD/HRP酶溶液）滴加在芯片载体的检测区域中心上，使反应剂溶液从芯片载体的检测区域中心往外扩散，干燥后得到检测芯片；所述芯片载体的检测区域是通过丝网印刷的方法制作疏水边界划定的，所述芯片载体为1号色谱纸，所述芯片载体的直径为10mm，厚度为0.18 mm；所述检测区域的直径为5mm；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液（葡萄糖溶液），得到浓度分别为0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM及20 mM的葡萄糖溶液；
（3）将2μL所述TBHBA/4-AAP混合溶液滴加在检测芯片的检测区域中心上，干燥后，再添加2μL的香柏油进行检测区域的填充以减少光的散射，干燥后将2 μL步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域中心上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，进行显色反应，然后用仪器（光密度计）测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取检测结果的透射光值，得到每一个浓度标准检测物溶液对应的透射光值；
（4）将步骤（3）所述透射光值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线（如图11a所示）；得出对应的标准曲线方程（y=0.0392x+0.0331, R2=0.975），如图11b所示，其中x表示为葡萄糖的浓度，y为光密度值，线性范围0 mM - 10 mM；
（5）将2μL所述TBHBA/4-AAP混合溶液滴加在检测芯片的检测区域中心上，干燥后，再添加2μL的香柏油进行检测区域的填充以减少光的散射，干燥后将2 μL待测葡萄糖溶液（浓度为5 mM）滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，进行显色反应，然后用仪器（光密度计）测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取待测样品的透射光值，将所述待测样品的透射光值数据代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算得到所述待测样品的浓度。
经计算，所述待测样品的浓度为5.35mM，回收率（recovery rate）为107%。
对比例4
对比例4选用GOD/HRP酶溶液作为反应剂溶液；所述GOD/HRP酶溶液为GOD酶（葡萄糖氧化酶）与HRP酶（辣根过氧化物酶）在PBS缓冲液混合均匀得到的溶液；所述GOD/HRP酶溶液的配制包括：将GOD酶及HRP酶加入浓度为0.01mol/L的PBS缓冲液（pH值为6.0）中，混合均匀，得到所述GOD/HRP酶溶液，在所述GOD/HRP酶溶液中，GOD酶的浓度为120U/mL，HRP酶的浓度为300 U/mL；
选用TBHBA/4-AAP混合溶液作为显色反应剂，香柏油作为辅助反应溶液；所述TBHBA/4-AAP混合溶液的配制包括：将2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸（TBHBA）与4-氨基安替比林（4-AAP）加入浓度为0.01 M的PBS缓冲液（pH=7.0）中，混合均匀，得到所述TBHBA/4-AAP混合溶液，在所述TBHBA/4-AAP混合溶液中，2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸（TBHBA）的浓度为5 mg/mL，4-氨基安替比林（4-AAP）的浓度为20 mg/mL；所述香柏油用于进行检测区域的填充以减少光的散射；
选用浓度分别为0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM、20 mM的葡萄糖溶液作为按浓度梯度配制的不同浓度标准检测物溶液；
一种基于光反射结果分析的检测方法，包括如下步骤：
（1）将2 μL反应剂溶液（GOD/HRP酶溶液）滴加在芯片载体的检测区域中心上，使反应剂溶液从芯片载体的检测区域中心往外扩散，干燥后得到检测芯片；所述芯片载体的检测区域是通过丝网印刷的方法制作疏水边界划定的，所述芯片载体为1号色谱纸，所述芯片载体的直径为10mm，厚度为0.18 mm；所述检测区域的直径为5mm；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液（葡萄糖溶液），得到浓度分别为0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM及20 mM的葡萄糖溶液；
（3）将2μL所述TBHBA/4-AAP混合溶液滴加在检测芯片的检测区域中心上，干燥后，再添加2μL的香柏油进行检测区域的填充以减少光的散射，干燥后将2 μL步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域中心上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，进行显色反应，然后用仪器（扫描仪）获取所述检测芯片的检测区域的显色图片（如图10所示），测量显色区域的颜色强度值，得到每一个浓度标准检测物溶液对应的颜色强度值；
（4）将步骤（3）所述反射光值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线（如图12a所示）；得出对应的标准曲线方程（y=0.2084x+0.0076, R2=0.9854），如图12b所示，其中x表示为葡萄糖的浓度，y为颜色强度值，线性范围为0 mM - 1 mM；
（5）将2μL所述TBHBA/4-AAP混合溶液滴加在检测芯片的检测区域中心上，干燥后，再添加2μL的香柏油进行检测区域的填充以减少光的散射，干燥后将2 μL待测葡萄糖溶液滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域中心上，进行显色反应，然后用仪器（扫描仪）获取所述检测芯片的检测区域的显色图片，测量显色区域的颜色强度值，将所述待测样品的颜色强度值数据代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算所述待测样品的浓度。
经计算，对比例4所述待测样品的浓度为6.27 mM，回收率（recovery rate）为125.4%。实施例4与对比例4相比较，实施例4中的葡萄糖的光密度值和浓度之间的线性范围为0-10 mM。而对比例4中的葡萄糖的颜色强度和浓度之间的线性范围为0-1 mM，由此可以发现，通过实施例4提供的方法测得的结果相比于常用的基于光反射的结果处理方法，线性范围扩大了10倍，因此有利于更准确的判断较高浓度检测物的含量或者浓度。
以上实施例仅为本发明较优的实施方式，仅用于解释本发明，而非限制本发明，本领域技术人员在未脱离本发明精神实质下所作的改变、替换、修饰等均应属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将反应剂溶液滴加在芯片载体的检测区域上，干燥得到检测芯片；
（2）按浓度梯度配制不同浓度的标准检测物溶液；
（3）将步骤（2）所述不同浓度的标准检测物溶液分别滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，一份检测芯片滴加一种浓度的标准检测物溶液，然后进行显色反应，用仪器测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取检测结果的透射光值，得到每一个浓度标准检测物溶液对应的透射光值；
（4）将步骤（3）所述透射光值与所述标准检测物溶液的浓度值之间的关系建立标准曲线，得出对应的标准曲线方程；
（5）将待测样品溶液滴加在步骤（1）所述检测芯片的检测区域上，进行显色反应，然后用仪器测量所述检测芯片的检测区域的透射光，数值化读取待测样品的透射光值，将所述待测样品的透射光值数据代入步骤（4）所述标准曲线方程中，计算得到所述待测样品溶液的浓度。
2.根据权利要求1所述的基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，其特征在于，步骤（1）所述芯片载体的材料为滤纸、打印纸、铜版纸、吸水纸、色谱纸、硝基纤维素膜、聚酯纤维素膜、玻璃纤维膜、布类、PVDF膜材料、PVC膜材料及经化学或生物修饰的上述材料中的一种。
3.根据权利要求1所述的基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，其特征在于，步骤（1）所述芯片载体的检测区域能够使用光刻法、喷墨打印、喷墨刻蚀、激光打印、印章法、柔性版印刷、丝网印刷、凹版印刷、手绘及仪器绘图法、雕刻法及等离子体处理法中的一种方法划定。
4.根据权利要求1所述的基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，其特征在于，步骤（1）所述检测区域为圆形区域，所述检测区域的直径≥1mm。
5.根据权利要求1所述的基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，其特征在于，步骤（1）所述芯片载体的厚度为0.05mm-0.215mm。
6.根据权利要求1所述的基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，其特征在于，步骤（2）所述标准检测物溶液为能够与反应剂溶液发生比色反应的溶液；所述标准检测物为蛋白、核酸、抗体、DNA、病原体、葡萄糖、尿酸、各种疾病标记物、抗生素、水体中的污染物以及食品残留的农药中的一种以上。
7.根据权利要求1所述的基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，其特征在于，步骤（3）所述仪器为光密度计及分光光度计中的一种。
8.根据权利要求1所述的基于光透射结果分析的芯片比色检测方法，其特征在于，步骤（3）中，进行显色反应前，若该显色反应时需要滴加辅助反应溶液，则需要在显色反应前配制并根据显色反应的要求滴加，若该显色反应不需要滴加辅助反应溶液，则不需要再显色反应前配制；所述辅助反应溶液为调节酸碱度的缓冲液、能够调节纸张亲水能力的溶液及能够调节纸张透光性能的溶液中的一种以上。
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