CN110603054A - 抗c5抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及使用C5抗体抑制补体信号转导。具体地，本发明涉及通过使个体与抗C5抗体接触来治疗个体中补体介导的疾病或补体介导的病症的方法。

Description

抗C5抗体及其用途
相关申请的引用
本申请主张2017年3月6日提交的美国临时专利申请No.62/467,498的优先权，该专利申请的内容以其全部内容作为参考并入本文。
有关联邦政府资助的研究或开发的声明
本发明是在国立卫生研究院(NIH)提供的NIH AI44970的政府支持下进行的。政府具有本发明中的某些的权利。
背景技术
补体系统是在宿主防御中起关键作用的先天免疫的一部分。然而，激活的补体还具有引起明显组织损伤和破坏的潜能，并且已发现失调的补体活性与一些罕见和常见疾病有关，疾病如阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型性溶血尿毒症综合征、类风湿性关节炎、年龄相关性黄斑变性等。因此，抗补体疗法是治疗这些人类病症的有希望的方法。
补体C5是补体激活的末端途径中的关键蛋白并且是用于产生有效促炎介体C5a以及溶胞性膜攻击复合物(MAC)的前体蛋白。
由C5a和/或MAC介导了一些人炎症性和自体免疫性疾病，并且阻断C5激活应当防止C5a和MAC的产生并且具有治疗价值。已将人源化小鼠抗人C5 mAb依库珠单抗用于治疗两种补体介导的疾病：阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)和非典型性溶血尿毒症综合征(aHUS)。然而，并非所有的PNH患者对依库珠单抗治疗起反应，并且无反应的原因之一为人C5的遗传多态性，其丧失了与依库珠单抗结合的表位。
因此，在本领域中需要可以通过不同机制和C5上的接触位点抑制末端补体活性的抗人C5 mAb，并借此更有效地治疗补体依赖性病变。本发明解决并满足了这些及其他需要。
发明内容
在一个实施方式中，本发明包括特异性结合至C5的抗体。在一个实施方式中，C5为人C5。在一个实施方式中，抗体为单克隆抗体。在一个实施方式中，抗体为人源化抗体。在一个实施方式中，抗体为嵌合抗体。在一些实施方式中，抗体为全长抗体。在一些实施方式中，抗体为抗体片段，其包括但不限于Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2和scFv。在一些实施方式中，抗体是构建体的一部分，例如，包含抗体和靶向部分或效应子部分的融合构建体。在一些实施方式中，抗体是缀合构建体，如抗体药物缀合构建体的一部分。
在一个实施方式中，抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ IDNO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:13；VH-CDR2：SEQ ID NO:14；VH-CDR3：SEQ ID NO:15；VL-CDR1：SEQ IDNO:18；VL-CDR2：SEQ ID NO:19；和VL-CDR3：SEQ ID NO:20，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:13；VH-CDR2：SEQ ID NO:14；VH-CDR3：SEQ ID NO:15；VL-CDR1：SEQ ID NO:18；VL-CDR2：SEQ ID NO:19；和VL-CDR3：SEQ ID NO:20，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的轻链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的轻链，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:23；VH-CDR2：SEQ ID NO:24；VH-CDR3：SEQ ID NO:25；VL-CDR1：SEQ IDNO:28；和VL-CDR2：SEQ ID NO:29，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:23；VH-CDR2：SEQ ID NO:24；VH-CDR3：SEQ ID NO:25；VL-CDR1：SEQ ID NO:28；和VL-CDR2：SEQ ID NO:29，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:32；VH-CDR2：SEQ ID NO:33；VH-CDR3：SEQ ID NO:34；VL-CDR1：SEQ IDNO:37；VL-CDR2：SEQ ID NO:38，VL-CDR3：SEQ ID NO:39，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:32；VH-CDR2：SEQ ID NO:33；VH-CDR3：SEQ ID NO:34；VL-CDR1：SEQ ID NO:37；VL-CDR2：SEQ ID NO:38，VL-CDR3：SEQ ID NO:39，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ IDNO:47；VL-CDR2：SEQ ID NO:48，VL-CDR3：SEQ ID NO:49，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:47；VL-CDR2：SEQ ID NO:48，VL-CDR3：SEQ ID NO:49，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ IDNO:57；VL-CDR2：SEQ ID NO:58，VL-CDR3：SEQ ID NO:59，或其变体。在一个实施方式中，抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:57；VL-CDR2：SEQ ID NO:58，VL-CDR3：SEQ ID NO:59，或其变体。
在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链，或它的一个或多个变体。在一个实施方式中，抗体包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链，或其变体。
在一个实施方式中，抗体是选自由2G1、8E1、4E7、9G6、11C5和11D6组成的组中的至少一种。
在一个实施方式中，本发明涉及治疗个体中补体途径介导的疾病或病症的方法，包括向所述个体施用根据权利要求所述的抗C5抗体的步骤。在一个实施方式中，疾病或病症至少选自由以下各项组成的组：黄斑变性(MD)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、缺血性再灌注损伤、关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、变应性哮喘、狼疮、溃疡性结肠炎、中风、术后全身性炎症综合征、哮喘、变应性哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎(NMO)、多发性硬化、移植功能延迟、抗体介导的排斥反应、非典型性溶血性尿毒(aHUS)综合征、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、视网膜中央动脉阻塞(CRAO)、大疱性表皮松解、败血病、器官移植、炎症(包括但不限于与心肺分流术和肾透析有关的炎症)、C3肾小球病、膜性肾病、IgA肾病、血管球性肾炎(包括但不限于抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)介导的血管球性肾炎、狼疮肾炎和它们的组合)、ANCA介导的血管炎、志贺毒素引起的HUS和抗磷脂抗体引起的妊娠丢失，或它们的任何组合。在一些实施方式中，AP介导的疾病为C3肾小球病。在一些实施方式中，AP介导的疾病为黄斑变性，如年龄相关性黄斑变性。在一个实施方式中，抗C5抗体的施用抑制C5a或C5b蛋白的产生。
在一个实施方式中，本发明涉及降低个体的补体系统活性的方法，其中所述方法包括经由选自由肠内施用、肠胃外施用和它们的组合组成的组的施用途径向个体施用抗体，并且其中抗体包含具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10，或其变体。在一个实施方式中，抗体是选自由以下各项组成的组的抗体片段：Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv，和它们的组合。
在一个实施方式中，本发明涉及降低个体的补体系统活性的方法，其中方法包括经由选自由肠内施用、肠胃外施用和它们的组合组成的组的施用途径向个体施用抗体，并且其中抗体包含具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20，或其变体。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一个实施方式中，本发明涉及降低个体的补体系统活性的方法，其中方法包括经由选自由肠内施用、肠胃外施用和它们的组合组成的组的施用途径向个体施用抗体，并且其中抗体包含具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29，或其变体。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一个实施方式中，本发明涉及降低个体的补体系统活性的方法，其中方法包括经由选自由肠内施用、肠胃外施用和它们的组合组成的组的施用途径向个体施用抗体，并且其中抗体包含具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQID NO:34、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39，或其变体。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一个实施方式中，本发明涉及降低个体的补体系统活性的方法，其中方法包括经由选自由肠内施用、肠胃外施用和它们的组合组成的组的施用途径向个体施用抗体，并且其中抗体包含具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49，或其变体。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一个实施方式中，本发明涉及降低个体的补体系统活性的方法，其中方法包括经由选自由肠内施用、肠胃外施用和它们的组合组成的组的施用途径向个体施用抗体，并且其中抗体包含具有以下氨基酸序列的6个互补决定区：SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59，或其变体。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明是抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区，所述重链可变(vH)区具有与SEQ ID NO:2具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明是抗人C5抗体，其中抗体具有轻链可变(vL)区，所述轻链可变(vL)区具有与SEQ ID NO:7具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，或其变体。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区和轻链可变(vL)区，其中所述vH区具有与SEQ ID NO:2具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述vL区具有与SEQ ID NO:7具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区，所述重链可变(vH)区具有与SEQ ID NO:12具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有轻链可变(vL)区，所述轻链可变(vL)区具有与SEQ ID NO:17具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区和轻链可变(vL)区，其中所述vH区具有与SEQ ID NO:12具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述vL区具有与SEQ ID NO:17具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区，所述重链可变(vH)区具有与SEQ ID NO:22具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有轻链可变(vL)区，所述轻链可变(vL)区具有与SEQ ID NO:27具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区和轻链可变(vL)区，其中所述vH区具有与SEQ ID NO:22具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述vL区具有与SEQ ID NO:27具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区，所述重链可变(vH)区具有与SEQ ID NO:31具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一个实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有轻链可变(vL)区，所述轻链可变(vL)区具有与SEQ ID NO:36具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区和轻链可变(vL)区，其中所述vH区具有与SEQ ID NO:31具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述vL区具有与SEQ ID NO:36具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区，所述重链可变(vH)区具有与SEQ ID NO:41具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有轻链可变(vL)区，所述轻链可变(vL)区具有与SEQ ID NO:46具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区和轻链可变(vL)区，其中所述vH区具有与SEQ ID NO:41具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述vL区具有与SEQ ID NO:46具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区，所述重链可变(vH)区具有与SEQ ID NO:51具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一个实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有轻链可变(vL)区，所述轻链可变(vL)区具有与SEQ ID NO:56具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一些实施方式中，本发明涉及抗人C5抗体，其中抗体具有重链可变(vH)区和轻链可变(vL)区，其中所述vH区具有与SEQ ID NO:51具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中所述vL区具有与SEQ ID NO:56具有大于约90％(如大于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者99％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
在一个实施方式中，本发明涉及包含在本文其他地方所描述的至少一种抗体的细胞。在一些实施方式中，细胞产生了在本文其他地方所描述的抗体中的至少一种的抗体。在一个实施方式中，细胞为杂交瘤。
在一个实施方式中，本发明为包含在本文其他地方所描述的至少一种抗体的细胞系。在一些实施方式中，细胞系产生了在本文其他地方所描述的至少一种抗体。在一些实施方式中，细胞系为杂交瘤细胞系。
附图说明
当结合附图阅读时，将会更好地理解本发明以上的发明内容和以下的示例性实施方案的详细说明。然而，应理解本发明不局限于附图中所示的实施方式的确切方案和工具。在附图中：
图1显示了ELISA测定的结果，其表明了抗人C5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1与人C5的结合。直接抗原结合ELISA，其中将mAb在用纯化的人C5涂覆的微量滴定板上连续稀释。所有6种mAb显示出与人C5的高反应性。
图2-图7显示了测量抗C5 mAb 2G1、8E1、4E7、9G6、11C5和11D9与C5的结合亲合力的实验结果。使用胺偶联法，将纯化的αmRabbit IgG(RAMFc)mAb偶联至CM4芯片。然后，在固定化的RAMFc上捕获抗C5 mAb。在Biacore-2000仪上进行Biacore分析。
图8显示了通过抗人C5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1的LPS诱导的C5a产生的剂量依赖性抑制。为了评价抗人C5 mAb对LPS诱导的C5a产生的影响，使用了两种测定的组合：LPS诱导的C5a产生和人C5a夹心ELISA。当以12.5μg/ml的最终浓度加入至10％正常人血清(NHS)时，所有6种mAb有效地抑制了LPS诱导的C5a产生。
图9，包括图9A和图9B，显示了抗人C5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1对补体介导的溶血的影响。图9A显示了在将抗体致敏的绵羊RBC与含有各种抗C5 mAb的连续稀释的50％的NHS在37℃培育1小时后，通过测量OD405的吸光值所确定的红细胞(RBC)溶胞。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。在120μg/ml，所有mAb抑制了50％的NHS介导的绵羊红细胞溶胞。在较低剂量(例如，30-60μg/ml)，9G6在防止溶血方面不如其他mAb有效。图9B显示在30μg/ml，mAb 2G1和8E1在抑制补体介导的溶血方面比4E7、9G6、11C5和11D9更有效。
图10显示了使用来自不同动物种的血清，评价抗人C5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9、8E1对补体介导的溶血的影响的实验结果。将抗体致敏的鸡RBC与含有各种抗C5 mAb(最终浓度：50μg/ml)的50％NHS、正常家兔血清、恒河猴血清或食蟹猴血清在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值确定了RBC溶胞，并将其对作为阴性对照的血清加EDTA(0％)和对作为阳性对照的血清加无抗体(100％)归一化。在使用NHS的溶血测定中，6种抗人C5mAb中的5种显著抑制溶血，即，大于50％。特别是，含有2G1的NHS样品显示出对溶血几乎完全抑制。当用mAb 9G6或2G1处理时，兔血清中的溶血活性显著降低。另一方面，使用猴(恒河猴和食蟹猴)血清时，所有mAb不显著抑制补体介导的溶血。
图11显示了评价抗人C5 mAb 2G1和8E1对补体介导的溶血的影响的实验结果。将抗体致敏的鸡RBC与含有2G1或8E1或对照mAb(MOPC，鼠标IgGl)的连续稀释的50％NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。在该测定中，mAb 2G1和8E1具有类似的活性。
图12显示了评价抗人C5 mAb 2G1对PNH RBC的溶血的影响的实验结果。在存在或不存在mAb 2G1的情况下，对来自阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)患者的RBC进行Ham酸化血清试验。将RBC与含有2G1的连续稀释的50％NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。在不存在mAb的情况下，通过酸化血清使约35％的RBC裂解，而mAb 2G1在25μg/ml的处理导致溶血活性降低70％，在40μg/ml的处理导致降低85％
图13显示了mAb 2Gl的重链和轻链的可变区序列。
图14显示了mAb 8E1的重链和轻链的可变区序列。
图15显示了mAb 4E7的重链和轻链的可变区序列。
图16显示了mAb 9G6的重链和轻链的可变区序列。
图17显示了mAb 11C5的重链和轻链的可变区序列。
图18显示了mAb 11D9的重链和轻链的可变区序列。
图19显示了具有丝氨酸228向脯氨酸的突变(即S228P)的人IgG4重链恒定区和人κ轻链恒定区的氨基酸序列。这些序列用于构建嵌合(小鼠可变区+人恒定区)和人源化(人源化小鼠可变区+人恒定区)抗人C5抗体(2G1)。
图20显示了评价2G1人IgG4嵌合mAb与人C5的反应性的实验结果。通过将mAb 2G1的可变区与具有S228P突变的人IgG4重链恒定区和人κ轻链恒定区连接制备了嵌合2G1。用人C5涂覆板。在与连续稀释的嵌合2G1 mAb培育之后，通过HRP缀合的抗人IgG4检测结合的嵌合mAb。嵌合2G1以剂量依赖性方式结合至人C5。
图21显示了评价人IgG4-2Gl嵌合mAb对经典途径补体介导的溶血的影响的实验结果。将致敏的绵羊RBC与含有连续稀释的嵌合2G1的50％NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。结果显示在30μg/ml和更高的浓度，嵌合2G1 mAb有效抑制NHS介导的绵羊红细胞溶胞。
图22显示了mAb 2G1的人源化可变重链(VH)(人源化2G1 VH-11801)的核苷酸和氨基酸序列。通过来自鼠科mAb 2G1 VH的CDR向种系编码的人VH框架(11801)的移植实现了人源化。对信号肽的氨基酸序列加下划线，并且对CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列加粗和加阴影。
图23显示了mAb 2G1的另一种人源化VH(人源化2G1 VH-16901)的核苷酸和氨基酸序列。通过来自鼠科mAb 2G1 VH的CDR向种系编码的人VH框架(16901)的移植实现了人源化。对信号肽的氨基酸序列加下划线，并且对CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列加粗和加阴影。
图24显示了mAb 2G1的人源化可变轻链(VL)(人源化2G1 VL-1901)的核苷酸和氨基酸序列。通过来自鼠科mAb 2G1 VL的CDR向种系编码的人VL框架(1901)的移植实现了人源化。对信号肽的氨基酸序列加下划线，并且对CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列加粗和加阴影。
图25显示了评价人源化2G1(VH-11801/VL-1901)与人C5的反应性的实验结果。作为在Fc域中具有S228P突变的人IgG4 mAb表达人源化2G1(VH-11801/VL-1901)。用人C5涂覆板。在与连续稀释的人源化2G1(VH-11801/VL-1901)培育之后，通过HRP缀合的抗人IgG4检测结合的mAb。人源化2G1(VH-11801/VL-1901)以剂量依赖性方式结合人C5。
图26显示了评价人源化2G1(VH-16901/VL-1901)与人C5的反应性的实验结果。作为在Fc域中具有S228P突变的人IgG4 mAb表达人源化2G1(VH-16901/VL-1901)。用人C5涂覆板。在与连续稀释的人源化2G1(VH-16901/VL-1901)培育之后，通过HRP缀合的抗人IgG4检测结合的Ab。人源化2G1(VH-16901/VL-1901)以剂量依赖性方式结合人C5。
图27显示了评价人源化2G1(VH-11801/VL-1901)对经典途径补体介导的溶血的影响的实验结果。作为在Fc域中具有S228P突变的人IgG4 mAb表达人源化2G1(VH-11801/VL-1901)。将抗体致敏的绵羊RBC与含有连续稀释的人源化2G1(VH-11801/VL-1901)的10％NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。在10μg/ml和更高的mAb浓度，人源化2G1(VH-11801/VL-1901)显著抑制10％NHS介导的绵羊红细胞溶胞。
图28显示了评价人源化2G1(VH-16901/VL-1901)对经典途径补体介导的溶血的影响的实验结果。作为在Fc域中具有S228P突变的人IgG4 mAb表达人源化2G1(VH-16901/VL-1901)。将抗体致敏的绵羊RBC与含有连续稀释的人源化2G1(VH-16901/VL-1901)的10％NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。在10μg/ml和更高的mAb浓度，人源化2G1(VH-16901/VL-1901)显著抑制10％NHS介导的绵羊红细胞溶胞。
图29，包括图29A和图29B，显示了使用mAb 2G1-3(图29A)和对照mAb QDC5(图29B)，使用免疫印迹检测人C5的实验结果，结果显示mAb 2G1-3结合至人C5的β链。将人C5(每泳道使用1μg，来自Comptech，cat#A120)在非还原性(NR)或还原性(R)条件下在SDS-PAGE上运行。对照mAb QDC5是具有人源化小鼠抗人C5 mAb的VH和VL序列的重组人IgG4mAb，如Thomas等人(Mol Immunol.1996Dec；33(17-18):1389-401)中所述。已知该mAb结合至人C5的α链中的表位。如所期望的，mAb 2G1-3和QDC5两者类似地结合至非还原性人C5。在还原性条件下，如所期望的，QDC5结合至人C5的α链，而mAb 2G1-3结合至对应于人C5的β链的不同条带。在SDS-PAGE之后，将蛋白转移至PVDF膜并用5％脱脂奶粉在TBS中的溶液在室温下封闭1h。将膜与10μg/ml的2G1-3或者QDC5在室温下培育1h。用具有0.1％吐温-20的TBS(TBST)清洗6×5min后，将兔α-小鼠IgG-HRP或者α-人IgG-HRP的1:4000稀释液加入至膜并在室温下培育1h。在最终清洗后，根据生产商的说明，使用PierceTMECL 2免疫印迹底物检测蛋白。
图30，包括图30A和图30B，显示了人C5的域结构和序列。人C5由一旦C5激活则释放的小C5a片段所分隔的α和β链组成(图30A)。反过来，人C5β链由具有如所列的氨基酸序列的6个MG域组成(图30B)。
图31，包括图31A和图31B，显示了人C5β链和缺少各个MG域的人C5β链缺失突变体的免疫印迹检测。(图31A)。使用山羊抗人C5多克隆抗体的免疫印迹检测到在HEK细胞中瞬时表达的完整β链和6个MG域缺失突变体。将转染的HEK细胞的上清液用于分析。数字1、2、3、4、5、6表示MG1、MG2、MG3、MG4、MG5和MG6缺失突变体。将来自非转染的HEK细胞的上清液(空白)用作阴性对照。这些结果表明表达了所有缺失突变体。(图31B)。人C5β链和6个MG缺失突变体以kDa表示的计算分子量与免疫印迹上所检测的条带一致。
图32显示了评价对于mAb 2G1-3的结合来说具有人C5β链的关键MG域的夹心ELISA测定结果。将mAb 2G1-3涂覆至96孔板上，并且添加来自非转染或转染的HEK细胞的上清液。在培育和清洗后，通过第二抗人C5 mAb SKY59检测结合的β链或缺失突变体蛋白(Fukuzawa等人,Sci Rep.2017Apr 24；7(1):1080.doi:10.1038/s41598-017-01087-7)，所述第二抗人C5 mAb SKY59已知结合人C5的MG1域内的序列。数据表明仍检测到MG2、MG3、MG5和MG6缺失突变体的信号，说明这些域未参与2G1-3或SKY59中任一个的结合。另一方面，MG1和MG4缺失突变体失去结合，表明它们对于通过2G1-3或SKY59或两者的人C5结合是至关重要的。将正常人血清(NHS)和完整β链转染的细胞上清液用作阳性对照，并且将非转染的HEK细胞上清液(空白)用作阴性对照。
图32显示了用于表明人C5β链内的MG4域对于mAb 2G1-3结合至关重要的检测的使用多克隆抗C5抗体的夹心ELISA测定结果。将2G1-3涂覆至96孔板上，并且添加来自非转染或转染的HEK细胞的上清液。在培育和清洗后，通过山羊抗人C5多克隆抗体检测转染上清液中结合的β链或缺失突变体e蛋白。在正常人血清(NHS)以及完整人β链和MG1缺失突变体的上清液中检测到信号，但是在MG4缺失突变体中未检测到，表明β链内的MG4对于2G1-3结合至关重要，但MG1不是。
具体实施方式
本发明涉及使用抗C5抗体抑制补体信号转导。在多个实施方式中，本发明涉及通过使个体与抗C5抗体接触用于治疗所述个体中补体介导的疾病或补体介导的病症的组合物和方法。可以使用本发明所述的组合物和方法治疗的补体介导的病变和病况包括但不限于黄斑变性(MD)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、缺血性再灌注损伤、关节炎、类风湿性关节炎、狼疮、溃疡性结肠炎、中风、术后全身性炎症综合征、哮喘、变应性哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎(NMO)、多发性硬化、移植功能延迟、抗体介导的排斥反应、非典型性溶血性尿毒(aHUS)综合征、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、视网膜中央动脉阻塞(CRAO)、大疱性表皮松解、败血病、器官移植、炎症(包括但不限于与心肺分流术和肾透析有关的炎症)、C3肾小球病、膜性肾病、IgA肾病、血管球性肾炎(包括但不限于抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)介导的血管球性肾炎、狼疮肾炎和它们的组合)、ANCA介导的血管炎、志贺毒素引起的HUS和抗磷脂抗体引起的妊娠丢失，或它们的任何组合。
定义
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管可以在本发明的实践或测试中使用与本文所描述的那些类似或等价的任何方法和材料，但是描述了示例性方法和材料。
如本文所使用的，以下术语中的每一个具有在该部分中与之有关的含义。
冠词“一个”和“一种”在本文中用于表示一个或大于一个(即至少一个)所述冠词的语法对象。举例来说，“一个元素”表示一个元素或大于一个元素。
如本文所使用的，术语“抑制”表示相对于对照值，将活性或功能减低、抑制、减弱或阻断至少约10％。在一些实施方式中，与对照值相比，将活性抑制或阻断至少约50％。在一些实施方式中，将活性抑制或阻断至少约75％。在一些实施方式中，将活性抑制或阻断至少约95％。
术语“有效量”和“药物有效量”表示对于提供所期望的生物学结果，足够的试剂的量。该结果可以是疾病或病症的病征、症状或病因的减少和/或减轻，或者生物系统的任何其他所期望的变化。本领域的技术人员可以使用常规实验确定任何个体病例中的适当的有效量。
术语“患者”、“受试者”、“个体”等在本文中是可互换使用的并且表示具有补体系统的任何动物，在一些实施方式中，哺乳动物，并且在一些实施方式中，人，其包括需要用于病况或其后遗症的疗法或对病况或其后遗症易感的人。个体可以包括(例如)狗、猫、猪、牛、绵羊、山羊、马、大鼠、猴和小鼠以及人。
当在生物、组织、细胞或其组分的背景中使用时，术语“异常的”是指至少一个可观察或可检测的特征(例如，年龄、治疗、时间等)不同于显示出“正常”(预期的/自我平衡的)各个特征的那些生物、组织、细胞或其组分的那些生物、组织、细胞或其组分。对于一种细胞、组织类型或受试者正常或预期的特征可以对于不同的细胞或组织类型是异常的。
“疾病”是其中受试者不可以维持体内平衡，并且其中如果疾病未得到改善则受试者的健康继续变差的受试者的健康状态：。
相反，受试者中的“病症”是其中受试者能够维持体内平衡，但是其中受试者的健康状态不如不存在所述病症的情况下的状态良好的健康状态。如果保持不治疗，病症不必需导致受试者的健康状态进一步降低。
如果疾病或病症的病征或症状的严重程度、患者经历这种病征或症状的频率或两者降低，则疾病或病症“减轻”。
化合物的“有效量”或“治疗有效量”是足以为施用所述化合物的受试者提供有益作用的化合物的量。
如本文所使用的，“说明材料”包括可以用于传递试剂盒中的本发明的化合物、组合物、载体或递送系统对于产生减轻本文所列举的多种疾病或病症的作用的有用性的出版物、记录、图表或任何其他表达媒介。可选地或者替代地，说明材料可以描述一种或多种减轻哺乳动物细胞或组织中的疾病或病症的方法。本发明所述的试剂盒的说明材料可以(例如)粘贴在包含本发明所识别的化合物、组合物、载体或递送系统的容器上，或者可以与包含所识别的化合物、组合物、载体或递送系统的容器一起运输。作为另外一种选择，说明材料可以与容器分开运输，其目的在于通过接受者协作使用说明材料和所述化合物。
如本文所使用的，“可操作地连接的”或者“操作性连接的”可以表示基因的表达受其空间上所连接的启动子的控制。启动子可以位于受其控制的基因的5'(上游)或3'(下游)端。启动子和基因之间的距离可以与启动子所来源的基因中该启动子和它所控制的基因之间的距离大致相同。如本领域中已知的，该距离的变化是可以接受的而不会损失启动子功能。
“治疗性治疗”是出于减轻或消除那些病征的目的，施用于显示出疾病或病症的病征的受试者的治疗。
如本文所使用的，“治疗疾病或病症”表示降低患者所经历的疾病或病症的病征和/或症状的频率和/或严重程度。
如本文所使用的，短语“生物样品”、“样品”或“样本”旨在包括包含其中可以检测到核酸的表达或多肽的细胞、组织或体液的任何样品。生物样品可以含有适合于检测所期望的生物标志物的任何生物材料，并且可以包括得自所述个体的细胞和/或非细胞材料。这些生物样品的实例包括但不限于血液、淋巴、骨髓、活组织检查和涂片。本质上为液体的样品在本文中称为“体液”。可以通过多种技术，包括(例如)通过刮研或擦拭区域或者通过使用针获得体液，从患者获得生物样品。
用于收集多种身体样品的方法在本领域中是熟知的。
如本文所使用的，术语“抗体”是指能够特异性结合至抗原的特异性表位的免疫球蛋白分子。抗体可以是来源于天然来源或来源于重组来源的完整免疫球蛋白，并且可以是完整免疫球蛋白的免疫活性部分。本发明中所述的抗体可以以多种形式存在，其包括(例如)多克隆抗体、单克隆抗体、胞内抗体(intracellular antibodies)(“胞内体(intrabodies)”)、Fv、Fab、Fab'、F(ab)2和F(ab')2，以及单链抗体(scFv)、重链抗体，如骆驼科动物抗体和人源化抗体(Harlow等人,1999,Using Antibodies:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY；Harlow等人,1989,Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor,New York；Houston等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；Bird等人,1988,Science 242:423-426)。
如本文所使用的，术语“合成抗体”表示使用DNA重组技术所产生的抗体，如(例如)通过噬菌体所表达的抗体。还应将该术语视为表示已通过编码抗体的DNA分子的合成产生并且所述DNA分子表达指明抗体的抗体蛋白质或氨基酸序列的抗体，其中已使用在本领域中可用的并且熟知的合成DNA或氨基酸序列技术获得了所述DNA或氨基酸序列。
如本文所使用的，术语“重链抗体”包含通过用肽免疫和后续血清分离，或者通过编码这些抗体的核酸序列的克隆和表达，来源于骆驼科动物的免疫球蛋白分子。术语“重链抗体”还涵盖了分离自患有重链病的受试者或者通过来自受试者的VH(可变重链免疫球蛋白)基因的克隆和表达制备的免疫球蛋白分子。
“嵌合抗体”是指一类工程抗体，其包含来源于供体抗体的天然存在的可变区(轻链和重链)以及来源于受体抗体的轻链和重链恒定区。
“人源化抗体”是指一类工程抗体，其具有来源于非人供体免疫球蛋白的CDR，所述分子剩余的免疫球蛋白来源的部分来源于一种(或以上)的人免疫球蛋白。另外，可以改变框架支持残基以保持结合亲合力(参见，例如，1989,Queen等人,Proc.Natl.Acad Sci USA,86:10029-10032；1991,Hodgson等人,Bio/Technology,9:421)。适合的人受体抗体可以是通过与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性选自常规数据库，例如，KABAT数据库、LosAlamos数据库和Swiss蛋白数据库的抗体。其特征为与供体抗体的框架区的同源性(基于氨基酸)的人抗体可以适合于提供用于供体CDR插入的重链恒定区和/或重链可变框架区。可以以类似的方式选择能够提供轻链恒定或可变框架区的适合的受体抗体。应注意所述受体抗体重链和轻链不需要来源于相同受体抗体。现有技术描述了产生这些人源化抗体的几种方法(参见，例如，EP-A-0239400和EP-A-054951)。
术语“供体抗体”是指为第一免疫球蛋白伴侣(first immunoglobulin partner)贡献其可变区、CDR或其其他功能性片段或类似物的氨基酸序列的抗体(单克隆和/或重组)，从而提供了改变的免疫球蛋白编码区和具有供体抗体的抗原专一性和中和活性特征的所得的表达的改变的抗体。
术语“受体抗体”是指与供体抗体异源的抗体(单克隆和/或重组)，其为第一免疫球蛋白伴侣贡献了编码其重链和/或轻链框架区和/或其重链和/或轻链恒定区的氨基酸序列的全部(或者任何部分，但是在一些实施方式中，全部)。在某些实施方式中，人抗体是受体抗体。
“CDR”的定义为抗体的互补决定区氨基酸序列，它是免疫球蛋白重链和轻链的高变区。参见，例如，Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第4版,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)。在免疫球蛋白的可变部分中存在三个重链和三个轻链CDR(或者CDR区)。因此，如本文所使用的，“CDR”是指所有三个重链CDR，或者所有三个轻链CDR(或者如果有的话，所有重链和所有轻链CDR两者)。抗体的结构和蛋白折叠可以表示将其他残基考虑为抗原结合区的一部分并且技术人员也将这样理解。参见，例如，Chothia等人,(1989)Conformations ofimmunoglobulin hypervariable regions；Nature 342,p 877-883。
如本文所使用的，“免疫测定”是指使用能够特异性结合至靶标分子以检测和定量该靶标分子的抗体的任何结合测定。
对于抗体来说，如本文所使用的，术语“特异性结合”表示识别并结合至特异性靶标分子，但是基本不识别和结合样品中的其他分子的抗体。在一些情况下，术语“特异性结合”用于表示识别和结合取决于靶标分子上的特定结构(例如，抗原决定簇或表位)的存在。如果(例如)抗体特异性结合至表位“A”，则在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A的未标记的分子(或者游离的未标记的A)的存在将降低结合至抗体的标记的A的量。
基因的“编码区”由基因的编码链的核苷酸残基以及基因的非编码链的核苷酸组成，它们分别与通过基因的转录所产生的mRNA分子的编码区同源或互补。
mRNA分子的“编码区”还由mRNA分子的核苷酸残基组成，其与mRNA分子翻译期间的转运RNA分子的反密码子区相匹配或者其编码了终止密码子。因此，编码区可以包括包含在mRNA分子所编码的成熟蛋白中不存在的氨基酸残基(例如，蛋白外运信号序列中的氨基酸残基)的密码子的核苷酸残基。
“差异降低的表达”或“下调”是指与对照相比，生物标志物产物水平低至少10％或以上，例如，20％、30％、40％、或50％、60％、70％、80％、90％或更低，和/或低2.0倍、1.8倍、1.6倍、1.4倍、1.2倍、1.1倍或更低，和它们之间的任何和所有的全部或部分的增量。
“差异提高的表达”或“上调”是指与对照相比，生物标志物产物水平高至少10％或以上，例如，20％、30％、40％、或50％、60％、70％、80％、90％或更高，和/或高1.1倍、1.2倍、1.4倍、1.6倍、1.8倍、2.0倍或更高，和它们之间的任何和所有的全部或部分的增量。
如本文用于表示核酸的“互补的”是指两条核酸链的区域之间或者相同核酸链的两个区域之间的序列互补性的广泛概念。已知第一核酸区的腺嘌呤残基能够与反向平行于所述第一区的第二核酸区的残基(如果所述残基为胸腺嘧啶或尿嘧啶)形成特异性氢键(“碱基配对”)。类似地，已知第一核酸链的胞嘧啶残基能够用反向平行于所述第一链的第二核酸链的残基(如果残基是鸟嘌呤)碱基配对。如果当以反向平行的方式布置所述两个区，并且第一区的至少一个核苷酸残基能够与第二区的残基碱基配对，则核酸的第一区与具有相同或不同核酸的第二区互补。在一些实施方式中，第一区包含第一部分，第二区包含第二部分，其中当以反向平行方式布置所述第一和第二部分时，第一部分的核苷酸残基的至少约50％、和/或至少约75％、或至少约90％、或至少约95％能够与第二部分中的核苷酸残基碱基配对。在一些实施方式中，第一部分的所有核苷酸残基能够与第二部分中的核苷酸残基碱基配对。
如本文所使用的，术语“DNA”的定义为脱氧核糖核酸。
“编码”是指多核苷酸中的特定核苷酸序列，如基因、cDNA或mRNA用作生物过程中用于具有限定的核苷酸序列(即，rRNA、tRNA和mRNA)或者具有限定的氨基酸序列和从中所获得的生物学性质的其他聚合物和大分子的合成的模板的固有性质。因此，如果对应于基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生了蛋白，则基因编码蛋白。其核苷酸序列与mRNA序列相同并且通常在序列表中提供的编码链以及用作基因或cDNA转录的模板的非编码链两者可以称为编码该基因或cDNA的蛋白或其他产物。
除非另作说明，否则“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括作为彼此的简并形式并且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。短语编码蛋白或RNA的核苷酸序列还可以包括内含子，从而在一些形式中，编码蛋白的核苷酸序列可以含有内含子。
“分离的”表示相对于天然状态改变或从天然状态中除去。例如，在其正常背景中天然存在于活体受试者中的核酸或肽不是“分离的”，但是与其天然背景中共存的材料部分或完全分离的相同的核酸或肽是“分离的”。分离的核酸或蛋白可以处于基本纯化的形式，或者可以存在于非天然环境中，如(例如)宿主细胞。
如本文所使用的，术语“杂交瘤”是指由B-淋巴细胞和融合伴侣，如骨髓瘤细胞的融合所产生的细胞。杂交瘤可以克隆并在细胞培养中无限期维持，并且能够产生单克隆抗体。杂交瘤还可以被认为是杂交细胞。
“分离的核酸”是指已与在天然存在的状态中对其侧接的序列分离的核酸段或片段，即已从通常邻近于所述片段的序列(即在其天然存在的基因组中邻近于所述片段的序列)中除去的DNA片段。所述术语还适用于已基本从天然伴随核酸的其他组分(即，在细胞中天然伴随所述核酸的RNA或DNA或蛋白)中纯化的核酸。因此，所述术语包括(例如)引入到载体中，引入到自主复制质粒或病毒中，或者引入到原核生物或真核生物的基因组DNA中，或者作为独立于其他序列的单独的分子(即，作为通过PCR或限制性内切酶消化所产的cDNA或者基因组或cDNA片段)存在的重组DNA。它还包括作为编码其他多肽序列的杂交基因的一部分的重组DNA。
在本发明的背景中，使用了以下常见核酸碱基的缩写。“A”是指腺苷酸，“C”是指胞嘧啶，“G”是指鸟嘌呤核苷，“T”是指胸腺嘧啶核苷，并且“U”是指尿嘧啶核苷。
如本文所使用的，术语“多核苷酸”的定义为核苷酸链。此外，核酸是核苷酸的聚合物。因此，如本文所使用的，核酸和多核苷酸是可互换的。本领域技术人员具有以下常识：核酸是多核苷酸，其可以水解为单体“核苷酸”。所述单体核苷酸可以水解为核苷。如本文所使用的，多核苷酸包括但不限于通过本领域中可用的任何方式获得的所有核酸序列，所述方式无限制地包括重组方式，即使用常规克隆技术和PCR等从重组文库或细胞基因组中对核酸序列的克隆，和通过合成方式。
如本文所使用的，术语“肽”、“多肽”和“蛋白”是可互换使用的，并且表示由通过肽键共价连接的氨基酸残基组成的化合物。蛋白或肽必须含有至少两个氨基酸，并且不限制蛋白或肽序列可以包含的最大氨基酸数目。多肽包括包含通过肽键彼此连接在一起的两个或更多个氨基酸的任何的肽或蛋白。如本文所使用的，该术语是指短链和长链两者，所述短链在本领域中通常称为(例如)肽、寡肽和寡聚物，并且长链在本领域中通常称为蛋白，其存在多种类型。“多肽”包括(例如)生物学活性片段、基本同源的多肽、寡肽、同型二聚体、杂二聚物、多肽的变体、修饰的多肽、衍生物、类拟物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽或它们的组合。
如本文所使用的，术语“子代”是指后代或子代，并且包括哺乳动物的子代，并且还包括来源于母细胞的分化或未分化的后代细胞。在一种用法中，术语子代是指与亲代遗传相同的后代细胞。在另一种使用中，术语子代是指与亲代遗传和表型相同的后代细胞。在另一种使用中，术语子代是指从亲代细胞分化的后代细胞。
如本文所使用的，术语“RNA”的定义为核糖核酸。
如本文所使用的，术语“重组DNA”的定义为通过连接来自不同来源的DNA碎片所产生的DNA。
如本文所使用的，术语“重组多肽”的定义为通过使用重组DNA方法所产生的多肽。
如本文所使用的，“缀合的”是指一个分子与第二分子的共价连接。
作为在本文中使用的术语，“变体”是分别与参考核酸序列或肽序列在序列方面不同的核酸序列或肽序列，但是它们保留了参考分子的基本生物性质。核酸变体的序列变化可以不改变通过参考核酸所编码的肽的氨基酸序列，或者可以导致氨基酸替换、添加、缺失、融合和截短。肽变体的序列变化通常是有限的或保守的，从而参考肽和变体的序列在整体上是非常类似的，并且在多个区域是相同的。变体和参考肽可以在氨基酸序列方面以任何组合相差一个或多个替换、添加、缺失。核酸或肽的变体可以是天然存在的，如等位变体，或者可以是已知不是天然存在的变体。可以通过突变技术或者通过直接合成制备核酸和肽的非天然存在的变体。在多个实施方式中，变体序列与所述参考序列具有至少99％、至少98％、至少97％、至少96％、至少95％、至少94％、至少93％、至少92％、至少91％、至少90％、至少89％、至少88％、至少87％、至少86％、至少85％的同一性。
如本文所使用的，术语“调控”可以表示任何改变底物水平或活性的方法。对于蛋白来说，调控的非限制性实例包括影响表达(包括转录和/或翻译)，影响折叠，影响降解或蛋白质周转和影响蛋白定位。对于酶来说，调控的非限制性实例还包括影响酶活力。“调控子”是指其活性包括影响底物的水平或活性的分子。调控子可以是直接的或间接的。调控子可以起作用以激活或抑制或另外调节其底物。
如本文所使用的，“扫描窗”是指其中可以独立于任何侧接序列来评价序列的一些邻接位置的片段。扫描窗通常沿要评价的序列长度增量改变，其中每个新片段是独立评价的。增量改变可以是1或大于1个位置。
如本文所使用的，“载体”可以表示含有复制起点的核酸序列。载体可以是质粒、噬菌体、细菌人工染色体或酵母人工染色体。载体可以是DNA或RNA载体。载体可以是自复制染色体外载体或者整合到宿主基因组中的载体。
范围：在整个发明公开中，本发明的多个方面可以以范围格式存在。应理解以范围格式的描述仅是为了方便和简洁，并且不应将其视为对本发明范围的刻板限制。因此，对范围的描述应认为具有具体公开的所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，对范围，如1至6的描述应认为具有具体公开的子范围，如1至3，1至4，1至5，2至4，2至6，3至6等，以及该范围内的各个数值，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。这是适用的，而无需考虑范围的宽度。
描述
本发明涉及使用抗人C5抗体对补体信号转导和补体相关病症的抑制。在一个实施方式中，本发明涉及通过特异性靶向补体组分C5蛋白或者蛋白C5a或C5b的片段对补体信号转导级联的抑制。在一个实施方式中，本发明涉及治疗和预防通过不希望的、不受控制的、过度的补体激活所介导的炎症和自体免疫疾病的方法。在一个实施方式中，本发明涉及通过使个体与抗C5抗体接触对所述个体中补体介导的疾病或补体介导的病症的治疗。
在一个实施方式中，本发明是治疗个体中补体介导的疾病或病症的方法，包括向所述个体施用抗C5抗体的步骤，借此抑制C5a或C5b蛋白的产生和MAC的形成。可以使用本发明的方法治疗的补体介导的病变的实例包括但不限于黄斑变性(MD)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、缺血性再灌注损伤、关节炎、类风湿性关节炎、狼疮、溃疡性结肠炎、中风、术后全身性炎症综合征、哮喘、变应性哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎(NMO)、多发性硬化、移植功能延迟、抗体介导的排斥反应、非典型性溶血性尿毒(aHUS)综合征、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、视网膜中央动脉阻塞(CRAO)、大疱性表皮松解、败血病、器官移植、炎症(包括但不限于与心肺分流术和肾透析有关的炎症)、C3肾小球病、膜性肾病、IgA肾病、血管球性肾炎(包括但不限于抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)介导的血管球性肾炎、狼疮肾炎和它们的组合)、ANCA介导的血管炎、志贺毒素引起的HUS和抗磷脂抗体引起的妊娠丢失，或它们的任何组合。在一些实施方式中，本发明的组合物和方法对于治疗对使用依库珠单抗的治疗不起反应的受试者，包括患有PNH的受试者是有用的。通过非限制性实例，一些受试者可能在C5的α链中具有突变，这可以使得它们对依库珠单抗的治疗耐受(参见Genetic variants in C5 and poor response toeculizumab.Nishimura J等人,N Engl J Med.2014 Feb 13；370(7):632-9)。
免疫系统区分“自体抗原”和“非自体抗原”的能力对于免疫系统作为抵御侵袭性微生物的特异性防御起作用是至关重要的。“非自体抗原”是进入或存在于身体中的物质上的那些抗原，其可检测地不同于受试者的自身成分，或者对于受试者的自身成分是外源的，然而“自体抗原”是在健康受试者中与其自身成分无可检测的不同或不是外源的那些。在方法的多个实施方式中，受抑制的补体激活是通过微生物抗原、非生物外源表面、改变的自体组织或其组合中的至少一种所引发的补体激活。非生物外源表面的一个实例是血管(bloodtubing)，如在心-肺搭桥手术或肾透析中使用的血管。改变的自体组织的实例包括凋亡、坏死和缺血应激的组织和细胞或其组合。
在一些实施方式中，本发明所述的抗C5抗体抑制替代补体途径(AP)、经典途径(CP)或者凝集素途径(LP)的下游激活作用。通常，通过抗原抗体复合物起始CP，通过凝集素与微生物表面上的糖分子的结合激活LP，而AP在低水平是组成型活性的，但是可以由于缺乏调节蛋白，在细菌、病毒和寄生虫细胞表面上快速放大。通常通过调节蛋白保护宿主细胞抵抗AP补体激活。但是，在一些情况下，如当所述调节蛋白有缺陷或缺失时，还可以在宿主细胞上不可控地激活AP，从而导致产生补体介导的疾病或病症。CP由组分C1、C2、C4组成并且在C3激活步骤与AP汇合。LP由结合甘露糖的凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(Masps)组成，并且与CP共有组分C4和C2。AP由组分C3和几种因子，如因子B、因子D、备解素、C5和流体相调节因子H组成。补体激活包括三个阶段：(a)识别，(b)酶促激活，和(c)膜攻击，从而导致细胞死亡。CP补体激活的第一阶段起始于C1。C1由三种不同的蛋白组成：识别亚基C1q，和丝氨酸蛋白酶亚组分C1r和C1s，其在钙依赖性四聚体复合物C1r2s2中结合在一起。完整的C1复合物是产生C1的生理学激活所必需的。当完整的C1复合物结合至与抗原复合的免疫球蛋白时，发生激活。这种结合激活了C1s，其然后切割C4和C2蛋白两者以产生C4a和C4b，和C2a和C2b。C4b和C2a片段合并以形成C3转化酶C4b2a，其反过来切割C3以形成C3a和C3b。通过MBL结合至靶标表面上的某些糖起始了LP的激活，并且这引发了MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASPs)的激活，其然后以类似于CP的C1s的活性的方式切割C4和C2，从而导致C3转化酶C4b2a的产生。因此，通过不同机制激活CP和LP，但是它们共有相同的组分C4和C2，并且两条途径均导致相同的C3转化酶C4b2a的产生。出于两种原因，通过C4b2a将C3切割成C3b和C3a是补体途径的中央事件。它起始了AP放大环路(amplification loop)，因为表面沉积的C3b是AP的中央中间产物。C3a和C3b两者是生物学上重要的。C3a是促炎性的并且与C5a一起被称为过敏毒素。C3b及其进一步的切割产物还结合至嗜中性白细胞、嗜曙红细胞、单核细胞和巨噬细胞上存在的补体受体，借此有利于C3b-调理的颗粒的吞噬和清除。最终，C3b可以与C4b2a结合以形成CP和LP的C5转化酶以激活末端补体序列，从而导致有效的促炎介体C5a的产生以及溶胞膜攻击复合物(MAC)C5-C9的组装。
在一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体途径的活性是通过选自脂多糖(LPS)、脂寡糖(LOS)、病原体相关分子模式(PAMP)和危险相关分子模式(DAMP)中的至少一种所引起的补体途径激活。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体信号转导活性是C5a蛋白的产生。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体信号转导活性是C5b蛋白的产生。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体信号转导活性是MAC的形成。在另一个实施方式中，使用本发明的方法抑制的补体途径的活性是C5依赖性的。
在一个实施方式中，本发明是抑制个体中末端补体激活起始的方法，包括向所述个体施用抗C5抗体的步骤，借此抑制了个体中由于CP、LP或AP激活所引起的末端补体激活的起始。这些实施方式的实例为经受补体介导的溶血的PNH患者和经受补体介导的aHUS、哮喘、缺血性/再灌注损伤、类风湿性关节炎和ANCA介导的肾病的个体。在本发明的多个实施方式中，可以使用本发明的组合物和方法治疗的疾病和病症包括但不限于补体介导的溶血、补体介导的aHUS、C3肾小球病、视神经脊髓炎、重症肌无力、哮喘、缺血性/再灌注损伤、类风湿性关节炎和ANCA介导的肾疾病或病症。
在多个其他实施方式中，本文提供了识别对补体信号转导具有抑制作用的潜在抗C5抗体的方法。一种这种方法包括以下步骤：a)用脂多糖(LPS)涂板；b)清洗板以除去未结合的LPS；c)添加牛血清白蛋白(BSA)在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的溶液；d)清洗板以除去未结合的BSA；e)添加已与血清预培育并且混合至正常人血清中的候选抗C5抗体化合物的混合物；f)清洗板；g)添加HRP缀合的抗人C3抗体；h)清洗板以除去未结合的抗体；i)添加HRP底物试剂；j)添加硫酸以终止反应；k)测量450nm下的光密度；l)将含有候选抗C5抗体化合物的板的光密度与阳性对比物对照和阴性对比物对照的光密度相比较；其中当与阳性对比物对照相比，光密度减小时，识别出抗C5抗体。
抗C5抗体
在一些实施方式中，本发明包括包含特异性结合至C5的抗体的组合物。在一个实施方式中，抗C5抗体是多克隆抗体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗C5抗体是嵌合抗体。在其他实施方式中，抗C5抗体是人源化抗体。在一些实施方式中，抗体是抗体片段。在一些实施方式中，C5是人C5。
在一些实施方式中，抗人C5的抗体或抗体片段的结合与完整生物中的补体激活途径中的C5a或C5b的产生和MAC的形成的减少有关。在一些实施方式中，本发明是能够结合至人C5的蛋白或多肽。在一些实施方式中，抗体或抗体片段；蛋白或多肽结合至人C5的相关部分(portion)或部份(fraction)或表位；并且抗体或其抗体片段，或者蛋白或多肽与人C5的相关部分的结合与完整生物中C5a或C5b的产生和MAC的形成的减少有关。
在一些实施方式中，结合抗体或其C5结合抗体片段的人C5进一步缀合至蛋白、肽或另一种化合物。在一些实施方式中，结合抗体或其抗体片段的人C5缀合至蛋白、肽或其他化合物。在一些实施方式中，人C5结合抗体或其抗体片段所缀合的蛋白、肽或其他化合物是靶向部分(即，所述靶向部分特异性结合至人C5以外的分子)。在一些实施方式中，人C5结合抗体或其抗体片段所缀合的蛋白、肽或其他化合物是效应分子(例如，细胞毒分子)。
在一个实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR的全部：VH-CDR1：SEQID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH-CDR1或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:8，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:8。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH-CDR2或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:9。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH-CDR3或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb 2G1，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb 2G1包括包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。
在一个实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:13；VH-CDR2：SEQ ID NO:14；VH-CDR3：SEQ IDNO:15；VL-CDR1：SEQ ID NO:18；VL-CDR2：SEQ ID NO:19；和VL-CDR3：SEQ ID NO:20，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR的全部：VH-CDR1：SEQ ID NO:13；VH-CDR2：SEQ ID NO:14；VH-CDR3：SEQ ID NO:15；VL-CDR1：SEQ IDNO:18；VL-CDR2：SEQ ID NO:19；和VL-CDR3：SEQ ID NO:20，或其变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH-CDR1或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:18，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:18。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH-CDR2或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:19，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:19。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH-CDR3或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:20，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:20。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ IDNO:19的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb 8E1，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb 8E1包括包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的轻链。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。
在一个实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:23；VH-CDR2：SEQ ID NO:24；VH-CDR3：SEQ IDNO:25，VL-CDR1：SEQ ID NO:28；和VL-CDR3：SEQ ID NO:29，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR的全部：VH-CDR1：SEQ ID NO:23；VH-CDR2：SEQ ID NO:24；VH-CDR3：SEQ ID NO:25，VL-CDR1：SEQ ID NO:28；和VL-CDR3：SEQ IDNO:29，或其变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH-CDR1或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:28，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:28。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:29，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:29。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的VH-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的VL-CDR1；和包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的VL-CDR2。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb 4E7，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb 4E7包括包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。
在一个实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:32；VH-CDR2：SEQ ID NO:33；VH-CDR3：SEQ IDNO:34；VL-CDR1：SEQ ID NO:37；VL-CDR2：SEQ ID NO:38；和VL-CDR3：SEQ ID NO:39，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR的全部：VH-CDR1：SEQ ID NO:32；VH-CDR2：SEQ ID NO:33；VH-CDR3：SEQ ID NO:34；VL-CDR1：SEQ IDNO:37；VL-CDR2：SEQ ID NO:38；和VL-CDR3：SEQ ID NO:39，或其变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VH-CDR1或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:37，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:37。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:38，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:38。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:39，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:39。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb 9G6，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb 9G6包括包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。
在一个实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ IDNO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:47；VL-CDR2：SEQ ID NO:48；和VL-CDR3：SEQ ID NO:49，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR的全部：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ IDNO:47；VL-CDR2：SEQ ID NO:48；和VL-CDR3：SEQ ID NO:49，或其变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VH-CDR1或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:47，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:47。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:48，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:48。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:49，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:49。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ IDNO:48的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb 11C5，或其变体。表示为mAb 11C5的单克隆抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。
在一个实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ IDNO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:57；VL-CDR2：SEQ ID NO:58；和VL-CDR3：SEQ ID NO:59，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR的全部：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ IDNO:57；VL-CDR2：SEQ ID NO:58；和VL-CDR3：SEQ ID NO:59，或其变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的VH-CDR1或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:57，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:57。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:58，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:58。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:59，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:59。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ IDNO:58的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb 11D9，或其变体。表示为mAb 11D9的单克隆抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。
在一个实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:64；VH-CDR2：SEQ ID NO:65；VH-CDR3：SEQ IDNO:66；VL-CDR1：SEQ ID NO:74；VL-CDR2：SEQ ID NO:75；和VL-CDR3：SEQ ID NO:76，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR的全部：VH-CDR1：SEQ ID NO:64；VH-CDR2：SEQ ID NO:65；VH-CDR3：SEQ ID NO:66；VL-CDR1：SEQ IDNO:74；VL-CDR2：SEQ ID NO:75；和VL-CDR3：SEQ ID NO:76，或其变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的VH-CDR1或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:74，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:74。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:75，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:75。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:76，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:76。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ IDNO:75的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一个实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:69；VH-CDR2：SEQ ID NO:70；VH-CDR3：SEQ IDNO:71；VL-CDR1：SEQ ID NO:74；VL-CDR2：SEQ ID NO:75；和VL-CDR3：SEQ ID NO:76，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR的全部：VH-CDR1：SEQ ID NO:69；VH-CDR2：SEQ ID NO:70；VH-CDR3：SEQ ID NO:71；VL-CDR1：SEQ IDNO:74；VL-CDR2：SEQ ID NO:75；和VL-CDR3：SEQ ID NO:76，或其变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VH-CDR1或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR1：SEQ ID NO:74，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VH-CDR1；和VL-CDR1：SEQ ID NO:74。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR2：SEQ ID NO:75，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VH-CDR2；和VL-CDR2：SEQ ID NO:75。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和VL-CDR3：SEQ ID NO:76，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VH-CDR3；和VL-CDR3：SEQ ID NO:76。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VH-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ IDNO:75的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL-CDR3，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VH-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VH-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL-CDR1，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL-CDR2，或其包含最高达约3个(如约1、2或3个中的任一个)氨基酸替换的变体；和包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括：包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VH-CDR1；包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VH-CDR2；包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VH-CDR3；包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL-CDR1；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL-CDR2；和包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL-CDR3。
在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mAb 2G1，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb 2G1包括包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。在一些实施方式中，抗C5抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链，或其变体。在其他实施方式中，抗C5抗体包含含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链，或其变体。在另一个实施方式中，抗C5抗体是mA b2G1，或其变体。单克隆抗C5抗体mAb 2G1包括包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是人源化的。在一些实施方式中，单克隆抗C5抗体是嵌合抗体。
在一些实施方式中，抗体为嵌合抗体。在一些实施方式中，抗人C5抗体可以包含人轻链和人重链恒定区连同在以上说明书中所描述的可变区CDR序列。本领域技术人员将能够使用所关心的具体抗体的相关域交换的已知技术制备和获得嵌合抗体。通过移植异种抗体域，引入本申请中所描述的一种或多种CDR序列，容易地制备了这种抗体。使用已知重组技术，有可能获得和制备包含人重链和轻链恒定区的核酸序列所编码的重链和轻链恒定区的重组抗体；并且在本发明公开中说明了包含对应于CDR序列的通过核酸序列所编码的CDR的重链和轻链可变区。本领域技术人员可以制备包含在本发明公开中所述的一个或多个CDR序列的抗人C5抗体，其中所述轻链部分单独地或所述重链部分单独地被来自属于另一物种，如(例如)人的抗体的区域替代。可以通过本领域中已知的常规方法制备包含具有一种或多种CDR序列的可变区连同位于所述CDR区以外的鼠科或非鼠科抗体结构成分的人抗人C5抗体，所述一种或多种CDR序列序列选自SEQ ID NO:3-5、8-10、13-15、18-20、23-25、28-29、32-34、37-39、42-44、47-49、52-54和57-59，或其变体。在一些实施方式中，使用本领域中已知的技术使抗体或抗体片段进一步人源化。
在多个实施方式中，具有任何本文所描述的可变区的本文所描述的任何本发明的抗体可以包含人IgG4恒定重链。SEQ ID NO:104是人IgG4恒定重链的氨基酸序列实例。在一些实施方式中，本发明所述的抗体包含具有S228P突变的人IgG4恒定重链。SEQ ID NO:60是具有S228P突变的人IgG4恒定重链的氨基酸序列实例。
在一些实施方式中，抗C5抗体包含与本文所描述的SEQ ID NO 3-5、8-10、13-15、18-20、23-25、28-29、32-34、37-39、42-44、47-49、52-54和57-59中所列的CDR序列具有至少约85％(如至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的任一个)的氨基酸同一性的抗体。
在一个实施方式中，本发明公开涵盖了具有与如上所描述的CDR序列具有至少约85％(如至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的任一个)的同一性的CDR序列的抗C5抗体。在一个实施方式中，抗人C5抗体具有重链可变(vH)区和轻链可变(vL)区，其中vH区具有与选自SEQ ID NO2、12、22、31、41、51、63和68中的一个具有大于约90％(如大于约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的任一个)的同一性的氨基酸序列，并且其中vL区具有与选自SEQ ID NO7、17、27、36、46、56和73中的一个具有大于约90％(如大于约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％中的任一个)的同一性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，修饰了抗体或抗体片段。在一些实施方式中，所述修饰包括抗体或其抗原结合片段与另一种蛋白的部分或蛋白片段的融合。在一些实施方式中，修饰本发明所述的抗体或其抗体片段以提高其体内循环半衰期。例如，所述片段的抗体可以与FcRn分子(也称为新生儿Fc受体)融合以体内稳定抗体(Nature Reviews Immunology 7:715-725)。在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段缀合(例如，融合)至效应分子和/或另一种靶向部分(如识别不同分子、不同抗原或不同表位的抗体或抗体片段)。
本领域技术人员将能够制备人C5结合单链可变区片段(scFv)，其包括选自SEQ IDNO 3-5、8-10、13-15、18-20、23-25、28-29、32-34、37-39、42-44、47-49、52-54和57-59的至少一种具体的CDR序列，或其变体。scFv可以包括以SEQ ID NO 3-5所表示的重链可变区序列，或其变体，和以SEQ ID NO 8-10所表示的轻链可变区，或其变体。scFv可以包括以SEQID NO 13-15所表示的重链可变区序列，或其变体，和以SEQ ID NO 18-20所表示的轻链可变区，或其变体。scFv可以包括以SEQ ID NO 23-25所表示的重链可变区序列，或其变体，和以SEQ ID NO 28-29所表示的轻链可变区，或其变体。scFv可以包括以SEQ ID NO 32-34所表示的重链可变区序列，或其变体，和以SEQ ID NO 37-39所表示的轻链可变区，或其变体。scFv可以包括以SEQ ID NO 42-44所表示的重链可变区序列，或其变体，和以SEQ ID NO47-49所表示的轻链可变区，或其变体。scFv可以包括以SEQ ID NO 52-54所表示的重链可变区序列，或其变体，和以SEQ ID NO57-59所表示的轻链可变区，或其变体。引入scFv内的与本发明公开中所述的CDR序列具有至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列同一性的CDR序列涵盖在本发明公开的范围内。
在一些实施方式中，分离的抗体结合至人C5，其中抗体结合至人C5的表位。在一些实施方式中，本发明的人C5抗体是结合至人C5特异性表位的抗体。在一些实施方式中，表位包括C5的α链中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的β链中的至少一个氨基酸。
在一些实施方式中，表位包括C5的α链的MG7域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的α链的CUB域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的α链的C5d域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的α链的MG8域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的α链的C345C域中的至少一个氨基酸。
在一些实施方式中，表位包括C5的β链的MG1域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的β链的MG2域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的β链的MG3域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的β链的MG4域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的β链的MG5域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，表位包括C5的β链的MG6域中的至少一个氨基酸。
在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的α链的MG7域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的α链的CUB域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的α链的C5d域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的α链的MG8域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的α链的C345C域中的至少一个氨基酸。
在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的β链的MG1域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的β链的MG2域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的β链的MG3域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的β链的MG4域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的β链的MG5域中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其结合部分结合至C5的β链的MG6域中的至少一个氨基酸。
在一个实施方式中，SEQ ID NO:84的氨基酸中的至少一个(如至少1、2、3或4个)位于人C5抗体的表位中。在一个实施方式中，SEQ ID NO:85的氨基酸中的至少一个(如至少1、2、3或4个)位于人C5抗体的表位中。在一个实施方式中，SEQ ID NO:86的氨基酸中的至少一个(如至少1、2、3或4个)位于人C5抗体的表位中。在一个实施方式中，SEQ ID NO:87的氨基酸中的至少一个(如至少1、2、3或4个)位于人C5抗体的表位中。在一个实施方式中，SEQ IDNO:88的氨基酸中的至少一个(如至少1、2、3或4个)位于人C5抗体的表位中。在一个实施方式中，SEQ ID NO:89的氨基酸中的至少一个(如至少1、2、3或4个)位于人C5抗体的表位中。
在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其结合片段结合至SEQ ID NO:84的氨基酸的至少一个(如至少1、2、3或4个)。在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其结合片段结合至SEQ ID NO:85的氨基酸的至少一个(如至少1、2、3或4个)。在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其结合片段结合至SEQ ID NO:86的氨基酸的至少一个(如至少1、2、3或4个)。在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其结合片段结合至SEQ ID NO:87的氨基酸的至少一个(如至少1、2、3或4个)。在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其结合片段结合至SEQ ID NO:88的氨基酸的至少一个(如至少1、2、3或4个)。在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其结合片段结合至SEQ ID NO:89的氨基酸的至少一个(如至少1、2、3或4个)。
筛选测定
本发明在多种筛选测定中具有应用，其包括确定候选抗C5抗体是否可以抑制补体活性。
在一些实施方式中，将存在候选抗C5抗体的情况下的补体活性水平与阳性对比物对照中所检测的补体活性相比较。阳性对比物对照在不存在所添加的测试化合物的情况下包括补体激活。在一些实施方式中，当在存在候选抗C5抗体的情况下，补体活性小于阳性对比物对照中所检测的补体活性的约70％时，将候选抗C5抗体识别为补体抑制剂；这对应于在存在测试化合物的情况下，大于约30％的补体活性抑制。在其他实施方式中，当在存在候选抗C5抗体的情况下，补体活性小于阳性对比物对照中所检测的补体活性的约80％时，将候选抗C5抗体识别为补体抑制剂；这对应于在存在测试化合物的情况下，大于约20％的补体活性抑制。在其他实施方式中，当在存在候选抗C5抗体的情况下，补体活性小于阳性对比物对照中所检测的补体活性的约90％时，将候选抗C5抗体识别为补体抑制剂；这对应于在存在测试化合物的情况下，大于约10％的补体活性抑制。在一些实施方式中，将通过候选抗C5抗体的补体抑制水平与阴性对比物对照中所检测的抑制水平相比较。
多种免疫测定形式，包括竞争性和非竞争性免疫测定形式、抗原捕获测定、双-抗体夹心测定和三-抗体夹心测定是本发明有用的方法(Self等人,1996,Curr.Opin.Biotechnol.7:60-65)。本发明不应视为受限于任何一种已知或迄今未知的测定类型，只要测定能够检测补体抑制。
酶联免疫吸附测定(ELISA)在本发明的方法中是有用的。可以将酶，如(但不限于)辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或尿酶连接(例如)至抗C3抗体或第二抗体以用于在本发明的方法中使用。辣根-过氧化物酶检测系统可以与(例如)发色底物四甲基联苯胺(TMB)一起使用，其在存在过氧化氢的情况下产生了在450nm下可检测的可溶性产物。其他方便的酶联系统包括(例如)碱性磷酸酶检测系统，其可以与发色底物对硝基磷酸苯酯一起使用以产生在405nm下易于可检测的可溶性产物。类似地，β-半乳糖苷酶检测系统可以与发色底物o-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)一起使用以产生在410nm下可检测的可溶性产物。作为另外一种选择，尿酶检测系统可以与底物，如脲-溴甲酚紫(SigmaImmunochemicals,St.Louis,MO)一起使用。有用的酶联一抗和二抗可以得自多个商品化来源。
化学发光检测对于AP抑制的检测也是有用的。化学发光二抗可以得自多个商品化来源。
荧光检测对于AP抑制的检测也是有用的。有用的荧色物包括但不限于DAPI、荧光素、Hoechst 33258、R-藻蓝蛋白、B-藻红蛋白、R-藻红蛋白、罗丹明、德克萨斯红和丽丝胺、荧光素、或罗丹明标记的抗体。
放射免疫测定(RIA)在本发明的方法中也是有用的。这些测定在本领域中是熟知的，并且在(例如)Brophy等人(1990,Biochem.Biophys.Res.Comm.167:898-903)和Guechot等人(1996,Clin.Chem.42:558-563)中有描述。例如，使用碘-125标记的一抗或二抗进行放射免疫测定(Harlow等人，如上，1999)。
分析可检测抗体所发出的信号，例如，使用分光光度计检测来自发色底物的颜色；使用辐射计数器检测辐射，如使用γ粒子计数管用于检测碘-125；或者在存在特定波长的光的情况下，使用荧光计检测荧光。当使用酶联测定时，使用分光光度计进行定量分析。应理解可以手动实施本发明所述的测定，或者如果需要，可以自动实施，并且可以在多个可商用系统中同时检测多个样品所发出的信号。
本发明的方法还涵盖了基于毛细管电泳的免疫测定(CEIA)的使用，如果需要，其可以是自动的。免疫测定还可以结合激光诱导荧光使用，如(例如)Schmalzing等人(1997,Electrophoresis 18:2184-2193)和Bao(1997,J.Chromatogr.B.Biomed.Sci.699:463-480)中所述。还可以根据本发明的方法使用脂质体免疫测定，如流动-注射脂质体免疫测定和脂质体免疫传感器(Rongen等人,1997,J.Immunol.Methods 204:105-133)。
定量免疫印迹还可以在本发明的方法中用于确定补体抑制水平。使用熟知的方法，如扫描显象测密术定量免疫印迹(Parra等人,1998,J.Vase.Surg.28:669-675)。
施用方法
本发明的方法包括向识别为患有补体介导的疾病或病症的个体施用治疗有效量的至少一种抗C5抗体或其结合片段(如本文其他地方所描述的任何抗体或其片段)。在一个实施方式中，个体是具有补体系统的哺乳动物。在一个实施方式中，个体是人。在多个实施方式中，局部、区域或全身施用所述至少一种抗C5抗体或其结合片段。
在多个实施方式中，疾病或病症至少选自由以下各项组成的组：黄斑变性(MD)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、缺血性再灌注损伤、关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、变应性哮喘、狼疮、溃疡性结肠炎、中风、术后全身性炎症综合征、哮喘、变应性哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎(NMO)、多发性硬化、移植功能延迟、抗体介导的排斥反应、非典型性溶血性尿毒(aHUS)综合征、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、视网膜中央动脉阻塞(CRAO)、大疱性表皮松解、败血病、器官移植、炎症(包括但不限于与心肺分流术和肾透析有关的炎症)、C3肾小球病、膜性肾病、IgA肾病、血管球性肾炎(包括但不限于抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)介导的血管球性肾炎、狼疮肾炎和它们的组合)、ANCA介导的血管炎、志贺毒素引起的HUS和抗磷脂抗体引起的妊娠丢失，或它们的任何组合。在一些实施方式中，AP介导的疾病为C3肾小球病。在一些实施方式中，AP介导的疾病为黄斑变性，如年龄相关性黄斑变性。在一个实施方式中，抗C5抗体的施用抑制C5a或C5b蛋白的产生。在一些实施方式中，本发明的组合物和方法对于治疗对使用依库珠单抗的治疗不起反应的受试者，包括患有PNH的受试者是有用的。通过非限制性实例，一些受试者可能在C5的α链中具有突变，这可以使它们对依库珠单抗的治疗耐受(参见Geneticvariants in C5and poor response to eculizumab.Nishimura J等人,N Engl JMed.2014Feb 13；370(7):632-9)。
本发明的方法可以包括至少一种抗C5抗体或其结合片段的施用，但是决不应将本发明视为受限于本文所描述的抗C5抗体，而是应将其视为涵盖了减弱和降低补体激活的任何已知和未知的抗C5抗体。
本发明的方法包括向个体施用治疗有效量的至少一种抗C5抗体或其结合片段，其中本发明的组合物单独或与至少一种其他治疗剂组合包括至少一种抗C5抗体或其结合片段。本发明可以与其他治疗方式，如(例如)抗炎疗法等组合。可以与本发明的方法组合使用的抗炎疗法的实例包括(例如)使用甾族药物的疗法以及使用非甾族药物的疗法。
本发明的方法包括向受试者施用治疗有效量的抗C5抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，本发明涵盖了通过施用治疗有效量的本发明的抗体或者治疗有效量的其抗体片段，从而减少受试者中C5a或C5b或者MAC的形成来治疗涉及补体信号调控异常的C5相关疾病的方法。在一些实施方式中，本发明涵盖了通过施用治疗有效量的抗体或抗体片段来治疗涉及补体信号调控异常的C5相关疾病的方法。在一些实施方式中，本发明涵盖了通过向受试者施用有效量的抗体、抗体片段、多肽、肽、缀合肽，从而减少受试者中的补体激活途径的激活来治疗涉及补体信号调控异常的C5相关疾病的方法。在一些实施方式中，治疗方法涵盖了向受试者施用全身有效剂量的抗体或抗体片段，借此在受试者中全身性减少C5a或C5b或者MAC的形成。
可以施用对于实践本发明有用的药物组合物以递送至少约1ng/kg、至少约5ng/kg、至少约10ng/kg、至少约25ng/kg、至少约50ng/kg、至少约100ng/kg、至少约500ng/kg、至少约1μg/kg、至少约5μg/kg、至少约10μg/kg、至少约25μg/kg、至少约50μg/kg、至少约100μg/kg、至少约500μg/kg、至少约1mg/kg、至少约5mg/kg、至少约10mg/kg、至少约25mg/kg、至少约50mg/kg、至少约100mg/kg、至少约200mg/kg、至少约300mg/kg、至少约400mg/kg和至少约500mg/kg受试者体重的剂量。在一个实施方式中，本发明施用了使得在个体中产生以下本发明所述的抗C5抗体的浓度的剂量：至少约1pM、至少约10pM、至少约100pM、至少约1nM、至少约10nM、至少约100nΜ、至少约1μM、至少约2μM、至少约3μM、至少约4μM、至少约5μM、至少约6μM、至少约7μM、至少约8μM、至少约9μM和至少约10μM。在另一个实施方式中，本发明设想了导致在个体血浆中产生以下本发明所述的抗C5抗体的浓度的剂量施用：至少约1pM、至少约10pM、至少约100pM、至少约1nM、至少约10nM、至少约100nΜ、至少约1μM、至少约2μM、至少约3μM、至少约4μM、至少约5μM、至少约6μM、至少约7μM、至少约8μM、至少约9μM和至少约10μM。
在一些实施方式中，可以施用对于实践本发明有用的药物组合物以递送不超过1ng/kg、不超过5ng/kg、不超过10ng/kg、不超过25ng/kg、不超过50ng/kg、不超过100ng/kg、不超过500ng/kg、不超过1μg/kg、不超过5μg/kg、不超过10μg/kg、不超过25μg/kg、不超过50μg/kg、不超过100μg/kg、不超过500μg/kg、不超过1mg/kg、不超过5mg/kg、不超过10mg/kg、不超过25mg/kg、不超过50mg/kg、不超过100mg/kg、不超过200mg/kg、不超过300mg/kg、不超过400mg/kg和不超过500mg/kg受试者体重的剂量。在一个实施方式中，本发明施用了使得在个体中产生以下本发明所述的抗C5抗体的浓度的剂量：不超过1pM、不超过10pM、不超过100pM、不超过1nM、不超过10nM、不超过100nM、不超过1μM、不超过2μM、不超过3μM、不超过4μM、不超过5μM、不超过6μM、不超过7μM、不超过8μM、不超过9μM和不超过10μM。在另一个实施方式中，本发明设想了导致在个体血浆中产生以下本发明所述的抗C5抗体的浓度的剂量施用：不超过1pM、不超过10pM、不超过100pM、不超过1nM、不超过10nM、不超过100nM、不超过1μM、不超过2μM、不超过3μM、不超过4μM、不超过5μM、不超过6μM、不超过7μM、不超过8μM、不超过9μM和不超过10μM。还考虑了任何本文所公开的剂量之间的剂量范围。
通常，在本发明的方法中可以施用于受试者(在一些实施方式中，人)的剂量在0.5μg至约50mg每公斤受试者体重的量的范围内。然而，所施用的准确剂量将基于多种因素而不同，其包括但不限于受试者的类型和要治疗的疾病状态的类型、受试者的年龄和施用途径。在一些实施方式中，化合物的剂量将在约1μg至约10mg每公斤受试者体重之间改变。在其他实施方式中，剂量将在约3μg至约1mg每公斤受试者体重之间改变。
可以将抗体以每天数次的频率施用于受试者，或者可以不太频繁施用，如每天一次、每天两次、每天三次、每周一次、每周两次、每周三次、每两周一次、每两周两次、每两周三次、每月一次、每月两次、每月三次，或者更不频繁，如每几个月一次或甚至每年一次或几次或更少。剂量的频率对于技术人员来说将是显而易见的并且将取决于多种因素，如(但不限于)要治疗的疾病的类型和严重程度，受试者的类型和年龄等。可以通过任何药学领域中已知的或此后发展的方法制备所述药物组合物制剂。一般地，这些制备方法包括使活性成分与载体或一种或多种其他辅助成分结合的步骤，然后，如有必要或者如果希望，将所述产物成形或包装成所期望的单剂量或多剂量单元。
尽管对本文所提供的药物组合物的描述主要涉及适合于向人伦理学施用的药物组合物，但是技术人员将理解这些组合物通常适合于向各种各样的受试者施用。对适合于向人施用的药物组合物进行改变以使组合物适合于向多种受试者施用是很好理解的，并且常规兽医药理学家可以仅通过常规实验(即使有的话)来设计和实施这些改变。考虑了施用本发明所述的药物组合物的个体，其包括但不限于人及其他灵长类、哺乳动物，包括商业上相关的哺乳动物，如非人灵长类、牛、猪、马、绵羊、牛和狗。
可以以适合于眼部、口服、直肠、阴道、肠胃外、局部、肺部、鼻内、口腔、眼内、玻璃体、肌内、皮内和静脉内施用途径的制剂制备、包装或出售在本发明的方法中有用的药物组合物。其他所考虑的制剂包括投射纳米颗粒(projected nanoparticle)、脂质体制剂、包含活性成分的重新包封的红细胞和基于免疫学的制剂。
可以作为整体，作为单一单位剂量或者作为多个单一单位剂量制备、包装或出售本发明的药物组合物。单位剂量是包含预决的量的活性成分的药物组合物的单个的量。活性成分的量通常等于将施用于个体的活性成分的剂量或者这些剂量的便捷的部分(convenient fraction)，如(例如)这些剂量的一半或三分之一。
在本发明的药物组合物中，活性成分、药物可用的载体和任何其他成分的相对量将基于所治疗的个体的身份、体型和状况并且还基于施用组合物的途径而改变。举例来说，组合物可以包括0.1％至100％(w/w)之间的活性成分。在多个实施方式中，组合物包括至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约11％、至少约12％、至少约13％、至少约14％、至少约15％、至少约16％、至少约17％、至少约18％、至少约19％、至少约20％、至少约21％、至少约22％、至少约23％、至少约24％、至少约25％、至少约26％、至少约27％、至少约28％、至少约29％、至少约30％、至少约31％、至少约32％、至少约33％、至少约34％、至少约35％、至少约36％、至少约37％、至少约38％、至少约39％、至少约40％、至少约41％、至少约42％、至少约43％、至少约44％、至少约45％、至少约46％、至少约47％、至少约48％、至少约49％、至少约50％、至少约51％、至少约52％、至少约53％、至少约54％、至少约55％、至少约56％、至少约57％、至少约58％、至少约59％、至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约100％(w/w)的活性成分。
除活性成分之外，本发明的药物组合物还可以包括一种或多种其他药物活性剂。
可以使用常规技术制备本发明的药物组合物的控释或缓释制剂。
药物组合物的肠胃外施用包括任何施用途径，其特征在于物理破坏个体组织并通过所述组织中的破口施用所述药物组合物。肠胃外施用可以是局部、区域或全身性的。因此，肠胃外施用包括但不限于通过组合物的注射，通过手术切口的组合物应用，通过穿透组织的非手术伤口的组合物应用等的药物组合物的施用。具体地，考虑了肠胃外施用，其包括但不限于静脉内、眼内、玻璃体内、皮下、腹膜内、肌内、皮内、胸骨内注射和肿瘤内施用。
适合于肠胃外施用的药物组合物制剂包括与药物可用的载体，如无菌水或无菌等渗盐水组合的活性成分。可以以适合于丸剂施用或者适合于连续施用的形式制备、包装或出售这些制剂。可以以单位剂量形式，如在安瓿瓶中或在含有防腐剂的多剂量容器中制备、包装或出售注射制剂。用于肠胃外施用的制剂包括但不限于处于油性或水性媒介物中的混悬液、溶液、乳液、糊剂和可植入缓释或生物可降解制剂。这些制剂还可以包括一种或多种其他成分，其包括但不限于混悬剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的制剂的一个实施方式中，以在肠胃外施用所复原的组合物之前，用适合的媒介物(例如，无菌无热原的水)复原的干燥(即粉末或颗粒)形式提供活性成分。
以无菌可注射的水性或油性混悬液或溶液的形式制备、包装或出售所述药物组合物。可以根据已知技术配制这种混悬液或溶液，并且除活性成分之外，其可以包括其他成分，如分散剂、润湿剂或助悬剂。可以使用无毒的肠胃外-可用的稀释剂或溶剂，如(例如)水或1,3-丁二醇制备这些无菌注射制剂。其他可用的稀释剂和溶剂包括但不限于林格氏溶液、等渗氯化钠溶液和固定油剂，如合成的单或二-甘油酯。其他有用的可胃肠外施用的制剂包括包含处于微晶形式，处于脂质体制剂中或者作为可生物降解的聚合物系统的组分的活性成分的那些。用于缓释或植入的组合物可以包括药物可用的聚合物或疏水性材料，如乳液、离子交换树脂、微溶性聚合物或微溶性盐。
可以以适合于通过颊间隙肺部施用的制剂制备、包装或出售本发明的药物组合物。这种制剂可以包括干燥的颗粒，所述颗粒包括活性成分并且具有约0.5至约7纳米，与在一些实施方式中，约1至约6纳米的范围内的直径。这些组合物方便地处于用于使用装置或者使用自抛射溶剂/粉末分配容器施用的干粉形式，装置包括干粉储罐，可以将抛射剂流导向所述干粉储罐以分散所述粉末，并且所述自抛射溶剂/粉末分配容器如包括溶解或混悬在密封容器中的低沸点抛射剂中的活性成分的装置。在一些实施方式中，这些粉末包括颗粒，其中按重量计至少98％的颗粒的直径大于0.5纳米并且按数量计至少95％的颗粒的直径小于7纳米。在一些实施方式中，按重量计至少95％的颗粒的直径大于1纳米并且按数量计至少90％的颗粒的直径小于6纳米。在一些实施方式中，干粉组合物包括固体细粉稀释剂，如糖，并且干粉组合物方便地以单位剂量形式提供。
低沸点抛射剂通常包括在大气压力下具有小于65°F的沸点的液体抛射剂。通常，抛射剂可以占组合物的50至99.9％(w/w)，并且活性成分可以占组合物的0.1至20％(w/w)。抛射剂还可以包括其他成分，如液体非离子或固体阴离子表面活性剂或者固体稀释剂(在一些实施方式中，具有与包含活性成分的颗粒同数量级的颗粒尺寸)。
配制用于经肺递送的本发明的药物组合物还可以提供处于溶液或混悬液液滴形式的活性成分。这些制剂可以作为可选地无菌的，包含活性成分的醇的水溶液或稀释溶液或混悬液制备、包装或出售，并且可以方便地使用任何雾化或喷雾装置施用。这些制剂还可以包括一种或多种其他成分，其包括但不限于调味剂，如糖精钠、挥发油、缓冲剂、表面活性剂或防腐剂，如羟苯甲酯。在一些实施方式中，通过该施用途径所提供的液滴的平均直径在约0.1至约200纳米的范围内。
制剂对于本发明的药物组合物的鼻内递送也是有用的。
适合于鼻内施用的另一种制剂是包含活性成分并且具有约0.2至500微米的平均颗粒的粗粉末。以其中服用鼻吸药，即，通过从保持接近于鼻孔的所述粉末容器中通过鼻部通道快速吸入的方式施用这种制剂。
适合于鼻部施用的制剂可以(例如)包括约少至0.1％(w/w)至多至100％(w/w)的活性成分，并且还可以包括一种或多种其他成分。
可以以适合于口腔施用的制剂制备、包装或出售本发明的药物组合物。这些制剂可以(例如)处于使用常规方法制备的片剂或糖锭的形式，并且可以(例如)包括0.1至20％(w/w)的活性成分，其余部分包括口服可溶解或可降解组成和可选地，一种或多种其他成分。作为另外一种选择，适合于口腔施用的制剂可以包括包含活性成分的粉末或者喷雾或雾化的溶液或混悬液。在一些实施方式中，当分散时，这些粉末、喷雾或雾化制剂的平均颗粒或微滴尺寸在约0.1至约200纳米的范围内，并且还可以包括一种或多种其他成分。
如本文所使用的，“其他成分”包括但不限于以下中的一种或多种：赋形剂；表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；造粒剂和崩解剂；粘结剂；润滑剂；甜味剂；调味剂；着色剂；防腐剂；生理学可降解的组成，如明胶；水性媒介物和溶剂；油性媒介物和溶剂；助悬剂；分散剂或润湿剂；乳化剂，镇痛剂；缓冲剂；盐；增稠剂；填料；乳化剂；抗氧化剂；抗生素；抗真菌剂；稳定剂；和药物可用的聚合物或疏水性材料。可以包括在本发明的药物组合物中的其他“其他成分”在本领域中是已知的，并且，例如，在Remington's Pharmaceutical Sciences(1985,Genaro主编,Mack Publishing Co.,Easton,PA)中描述，以上文献作为参考并入本文。
产生抗体及其抗原结合片段的细胞
在一些实施方式中，本发明是产生本文所描述的抗C5抗体或抗原结合片段中的至少一种的细胞或细胞系(如宿主细胞)。在一个实施方式中，细胞或细胞系是产生本文所描述的抗C5抗体或抗原结合片段中的至少一种的遗传修饰的细胞。在一个实施方式中，细胞或细胞系是产生本文所描述的抗C5抗体或抗原结合片段中的至少一种的杂交瘤。
杂交细胞(杂交瘤)通常从鼠科脾细胞(其高度富集了B-淋巴细胞)和骨髓瘤“融合伴侣细胞”之间的团块融合产生(Alberts等人,Molecular Biology of the Cell(GarlandPublishing,Inc.1994)；Harlow等人,Antibodies.A Laboratory Manual(Cold SpringHarbor Laboratory,Cold Spring Harbor,1988)。随后，将融合中的细胞分成可以分析具有所期望的特异性的抗体的产生的混合池(pools)。可以将测试为阳性的混合池进一步再分，直至识别出产生具有所期望的特异性的抗体的单细胞克隆。通过这些克隆所产生的抗体被称为单克隆抗体。
还提供了编码本文所公开的任何抗体或抗体片段的核酸以及包含所述核酸的载体。因此，可以通过在细胞或细胞系，如通常用于重组或人源化免疫球蛋白的表达的细胞系中表达所述核酸来产生本发明所述的抗体和片段。因此，还可以通过将所述核酸克隆至一个或多个表达载体中，并将载体转化到细胞系，如通常用于重组或人源化免疫球蛋白的表达的细胞系中来产生本发明所述的抗体和片段。
可以根据本领域中已知的方法工程设计编码免疫球蛋白的重链和轻链或其片段的基因，方法包括但不限于聚合酶链反应(PCR)(参见，例如，Sambrook等人,MolecularCloning:A Laboratory Manual,第2版,Cold Spring Harbor,N.Y.,1989；Berger&Kimmel,Methods in Enzymology,152卷:Guide to Molecular Cloning Techniques,AcademicPress,Inc.,San Diego,Calif,1987；Co等人,1992,J.Immunol.148:1149)。例如，可以从抗体分泌细胞的基因组DNA克隆编码重链和轻链或其片段的基因，或者通过细胞RNA的反转录产生cDNA。通过包括与要克隆的基因或基因段侧接或重叠的序列杂交的PCR引物的使用在内的常规方法完成克隆。
可以获得编码本发明的抗体或其重链或轻链或片段的核酸，并根据在多种宿主细胞或者在体外翻译系统中用于产生特异性免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段或变体的重组核酸技术使用所述核酸。例如，可以将编码抗体的核酸或其片段置于适合的原核或真核载体，例如，表达载体中，并通过适当的方法(例如，转化、转染、电穿孔、感染)将其引入适合的宿主细胞，从而所述核酸可操作性地连接至(例如)载体中的一个或多个表达控制元件或者整合至宿主细胞基因组。
在一些实施方式中，可以在可以用于共转染受体细胞的两个不同的表达载体中组装所述重链和轻链或其片段。在一些实施方式中，每个载体可以含有两个或更多个可选择基因，一个用于在细菌系统中选择，一个用于在真核系统中选择。这些载体使得基因能够在细菌系统中产生和扩增，并且使得能够进行后续的真核细胞共转染和共转染细胞的选择。所述选择程序可以用于对引入到两个不同的DNA载体上的抗体核酸在真核细胞中的表达进行选择。
作为另外一种选择，可以从一个载体中表达编码所述重链和轻链或其片段的核酸。尽管通过不同的基因编码所述轻链和重链，但是可以使用重组方法将它们连接。例如，可以通过合成接头将两个多肽连接，所述合成接头使他们作为单一蛋白链制备，其中VL和VH区配对以形成一价分子(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人,1988,Science 242:423-426；和Huston等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。
本发明提供了分离的核酸分子，其包含编码重链和/或轻链及其片段的核酸序列。当在细胞中产生时，可以工程设计包含编码轻链和重链两者或其片段的序列的核酸分子以包含用于抗体或片段分泌的合成信号序列。此外，核酸分子可以含有特异性DNA连接，其允许其他抗体序列的插入并且维持了翻译阅读框，从而不会改变通常在抗体序列中存在的氨基酸。
根据本发明，可以将编码抗体的核酸序列插入到适当的表达载体中。在多个实施方式中，表达载体包含所插入的编码抗体的核酸的转录和翻译所必需的元件，以产生指导用于抗体或其片段的形成的抗体序列的表达的重组DNA分子。
可以对编码抗体的核酸或其片段进行本领域技术人员已知的多种重组核酸技术，如定点突变。
多种方法可以用于在细胞中表达核酸。可以将核酸克隆到一些载体类型中。然而，不应将本发明视为受限于任何具体的载体。作为替代，应将本发明视为涵盖了易于获得和/或本领域中已知的多种载体。例如，可以将本发明的核酸克隆至载体中，载体包括但不限于质粒、噬粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。特别关心的载体包括表达载体、复制载体、探针产生载体和测序载体。
在具体的实施方式中，表达载体选自病毒载体、细菌载体和哺乳动物细胞载体。存在包含以上所讨论的组成中的至少一部分或全部的多种表达载体系统。基于原核生物载体和/或真核生物载体的系统可以用于和本发明一起使用以产生多核苷酸或者它们的同源多肽。众多这类系统是可商购的和广泛可用的。
病毒载体技术在本领域中是熟知的并且在(例如)Sambrook等人(2012)中和在Ausubel等人(1999)中以及在其他病毒学和分子生物学手册中有描述。作为载体有用的病毒包括但不限于反转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、疱疹病毒和慢病毒。在一些实施方式中，使用鼠科干细胞病毒(MSCV)载体来表达所期望的核酸。MSCV载体已证明在细胞中有效表达所期望的核酸。然而，本发明不应仅限于使用MSCV载体，而是在本发明中包括了任何反转录病毒表达的方法。病毒载体的其他实例为基于莫洛尼小鼠白血病病毒(MoMuLV)和HIV的那些。在一些实施方式中，适合的载体含有在至少一种生物中起作用的复制起点、启动子序列、方便的限制性核酸内切酶位点和一种或多种可选择标志物。(参见，例如，WO 01/96584；WO 01/29058；和美国专利No.6,326,193)。
其他调控元件，例如，增强子可以用于调控转录起始的频率。启动子可以是与基因或核酸序列天然结合的启动子，如可以通过分离位于所述编码段和/或外显子上游的5'非编码序列获得。这种启动子可以称为“内源的”。类似地，增强子可以是与核酸序列天然结合的增强子，其位于所述序列的下游或上游。作为另外一种选择，通过将编码核酸段置于重组或异源启动子的控制之下将获得某些优势，启动子是指在其自然环境中通常不与核酸序列结合的启动子。重组或异源增强子还表示在其自然环境中通常不与核酸序列结合的增强子。这些启动子或增强子可以包括其他基因的启动子或增强子，和分离自任何其他原核、病毒或真核细胞的启动子或增强子，和非“天然存在的”启动子或增强子，例如，含有不同转录调控区的不同元件和/或改变表达的突变的启动子或增强子。除通过合成产生启动子和增强子的核酸序列之外，可以结合本文所公开的组成，使用重组克隆和/或核酸扩增技术，包括PCR产生序列(美国专利No.4,683,202，美国专利No.5,928,906)。此外，考虑还可以使用在非核细胞器，如线粒体、叶绿体等内指导序列的转录和/或表达的控制序列。
天然地，使用在选择用于表达的细胞类型、细胞器和生物中有效指导DNA段的表达的启动子和/或增强子将是重要的。分子生物学领域的技术人员通常已知如何使用启动子、增强子和细胞类型的组合来用于蛋白表达，例如，参见Sambrook等人(2012)。所使用的启动子可以是组成型的、组织特异的、诱导型的和/或在适当条件下有用的以指导所引入的DNA段的高水平表达，如在重组蛋白及其片段的大规模生产中是有利的。
启动子的实例是立即早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。该启动子序列是能够驱动与之操作性连接的任何多核苷酸序列的高水平表达的强组成型启动子序列。然而，还可以使用其他组成型启动子序列，其包括但不限于猿猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)、人类免疫缺陷性病毒(HIV)长末端重复(LTR)启动子、Moloney病毒启动子、禽白血病病毒启动子、埃-巴二氏病毒立即早期启动子、劳氏肉瘤病毒启动子以及人基因启动子，如(但不限于)肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌肉肌酸启动子。此外，本发明不应受限于组成型启动子的使用。作为本发明的一部分，还考虑了诱导型启动子。在本发明中诱导型启动子的使用提供了分子开关，当这种表达是所期望的时，其能够打开与其可操作性地连接的多核苷酸序列的表达，或者当表达不是所期望的时，关闭表达。诱导型启动子的实例包括但不限于金属硫蛋白(metallothionine)启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。此外，本发明包括组织特异性启动子或细胞类型特异性启动子的使用，启动子是仅在所期望的组织或细胞中具有活性的启动子。组织特异性启动子在本领域中是熟知的并且包括但不限于HER-2启动子和PSA相关启动子序列。
为了评价核酸的表达，要引入到细胞中的表达载体还可以含有可选择标志物基因或者报告基因或者两者，以有利于从试图通过病毒载体转染或感染的细胞群体中识别和选择出表达细胞。在其他实施方式中，所述可选择标志物可以携带在单独的核酸上并在共转染程序中使用。可选择标志物和报告基因两者均可以侧接适当的调控序列，以使得能够在宿主细胞中表达。有用的可选择标志物在本领域中是已知的并且包括(例如)抗生素-抗性基因，如neo等。
将报告基因用于识别潜在转染的细胞并用于评价调控序列的功能性。编码易于可测定的蛋白的报告基因在本领域中是熟知的。一般地，报告基因是在受体生物或组织中不存在或不表达的基因，其编码通过一些容易可检测的性质，如酶活力显示其表达的蛋白。
在将DNA引入受体细胞后的合适时间，测定报告基因的表达。
适合的报告基因可以包括编码荧光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌型碱性磷酸酶或者绿色荧光蛋白的基因(参见，例如，Ui-Tei等人,2000FEBS Lett.479:79-82)。适合的表达系统是熟知的并且可以使用熟知的技术制备或商购获得。一般地，将显示出报告基因最高表达水平的含有最小5'侧接区的构建体识别为启动子。这些启动子区可以连接至报告基因并用于评价试剂调控启动子驱动的转录的能力。
将核酸引入细胞并表达的方法在本领域中是已知的。在表达载体的背景中，可以通过本领域中的任何方法容易地将载体引入宿主细胞，例如，哺乳动物、细菌、酵母或昆虫细胞。例如，可以通过物理、化学或生物方式将表达载体转移至宿主细胞。
将多核苷酸引入宿主细胞的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质转染、粒子轰击、微注射、电穿孔、激光穿孔(laserporation)等。用于产生包含载体和/或外源核酸的细胞的方法在本领域中是熟知的。参见，例如，Sambrook等人(2012)和Ausubel等人(1999)。
将所关心的核酸引入宿主细胞的生物学方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，并且特别是反转录病毒载体已成为将基因插入到哺乳动物，例如，人细胞中的最广泛使用的方法。其他病毒载体可以来源于慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒I、腺病毒和腺病毒相关病毒等。参见，例如，美国专利No.5,350,674和5,585,362。
将核酸引入宿主细胞的化学方法包括胶体分散体系，如大分子复合物、纳米胶囊、微球体、珠和脂质基系统，包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。用作体外和体内递送媒介的优选的胶体体系是脂质体(例如，人工膜囊)。这些体系的制备和使用在本领域中是熟知的。
不考虑用于将外源核酸引入到宿主细胞中或者另外将细胞暴露于本发明的核酸的方法，为了确认所述宿主细胞中重组DNA序列的存在，可以实施多种测定。这些测定包括(例如)本领域技术人员熟知的“分子生物学”测定，如DNA印迹法和RNA印迹法、RT-PCR和PCR；“生物化学”测定，如(例如)通过免疫学方式(ELISA和免疫印迹)或者通过本文所描述的测定检测特定的肽的存在或不存在，以识别试剂是否在本发明的范围内。
试剂盒
本发明还包括试剂盒，其包含本发明的抗C5抗体或其组合和说明材料，说明材料描述了(例如)作为如本文其他地方所描述的治疗性治疗或非治疗性使用，向个体施用抗C5抗体或其组合。在一个实施方式中，该试剂盒还包括(例如)适合于在向个体施用抗体之前，溶解或混悬包含本发明的抗C5抗体或其组合的治疗性组合物的(可选地，无菌的)药物可用的载体。可选地，试剂盒包含用于施用抗体的施用器。
实验实施例
现将参考以下实施例描述本发明。仅出于说明的目的提供了这些实施例，并且本发明决不应视为受限于这些实施例，而是应视为涵盖了由于本文所提供的教导内容而变得显而易见的任何和所有改变。
在不进行进一步描述的情况下，据信本领域的技术人员可以使用以上描述和以下说明性实施例制备和使用本发明所述的化合物和实践所主张的方法。因此，不应以任何方式将以下工作实施例视为对本发明公开的其余部分的限制。
实施例1
补体系统是在宿主防御中起关键作用的先天免疫的一部分。然而，激活的补体还具有导致明显组织损伤和破坏的潜能，并且已发现失调的补体活性与一些罕见和常见疾病，如阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、非典型性溶血尿毒症综合征、类风湿性关节炎、年龄相关性黄斑变性等有关。因此，抗补体疗法是治疗这些人类病症的有希望的方法。
补体C5是补体激活的末端途径中的关键蛋白并且是用于产生有效促炎介体C5a以及溶胞膜攻击复合物(MAC)的前体蛋白。
已产生了6种鼠科抗人C5单克隆抗体，并且已对它们进行了鉴定并确认它们是功能-阻断的抗人C5 mAb，当通过经典的凝集素或者替代途径激活补体时，它们阻断了C5a的产生和MAC的形成两者。这些mAb的身份符(identity)如下所示：mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1。
此外，已确定了上述抗体的重链和轻链的Ig亚型，并且已克隆了所述6种mAb的重链可变区的cDNA。
现将描述在本实施例中使用的方法和材料。
抗C5 mAb的亲合力分析：
使用BIAcore 3000仪(Biacore AB,Uppsala,Sweden)，使用表面等离子共振分析测量人C5与抗C5 mAb之间结合的结合和解离速率常数，并且所有Biacore实验是在25℃下进行的。将CM5传感器芯片的羧基化葡聚糖阵列(carboxylated dextran matrix)用于通过胺偶联化学来偶联纯化的αmRabbit IgG(RAMFc)mAb以获得1000RU的表面密度，在固定化的RAMFc上捕获抗C5 mAb。在抗C5 mAb结合稳定后，将100、50、25、12.5、6.25和0nM范围内的不同浓度的人C5注入到HBSET(具有吐温20的HEPES-EDTA缓冲盐水)中的表面上，并将样品以30μl/min(60μl进样)在抗体表面上注入180s，并使结合的分析物的解离进行900s。通过BIA评价软件3.2，采用1：1结合模型来分析数据。使用50μl 10mM Glycone HCl pH 1.5的进样(50μl/min)实现了表面的再生。
LPS诱导的C5a产生测定：
将10％的正常人血清(NHS)与不同浓度的4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1在4℃预培育1小时。将抗体-处理的样品与LPS在Mg-EGTA GVB2+中，在37℃培育1小时，然后用40mMEDTA在PBS中的溶液终止。
用于人C5a检测的夹心ELISA：
在4℃，以1μg/ml的最终浓度，用小鼠抗人C5a特异性抗体(R&D systems#MAB2037)涂覆96孔板过夜。在用含有0.05％吐温-20的PBS清洗三次之后，将板与1/8稀释的血清样品(来自LPS诱导的C5a产生测定)在室温下培育1小时。在再次清洗后，将板与相应的生物素化的抗人C5a mAb(R&D systems#BAM20371)在室温下培育1h，再次清洗并与缀合至辣根过氧化物酶的抗生蛋白链菌素(BD pharmagen#554058)在室温下培育1小时。在最后一次清洗之后，用HRP底物使板显色6-10min。用2N H2SO4终止反应，并在微量酶标仪中在450nm下读取板。
人C5和mAb的结合测定：
在37℃，用纯化的人C5(50ng/孔)在PBS中的溶液涂覆聚苯乙烯微量滴定板1小时。在吸出C5溶液之后，用含有1％BSA的PBS溶液在室温下封闭所述孔1小时。将无C5涂层的孔用作背景对照。将不同浓度的4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1在封闭溶液中以50μl/孔加入至所述孔中。在室温下培育1小时之后，用PBST彻底清洗所述孔。通过添加抗小鼠IgG HRP或者抗人IgG4 HRP在封闭溶液中的1：4000的稀释液(使其在RT培育1小时)来检测人C5-结合的mAb。在用PBST清洗之后，用HRP底物使板显色6-10min。用2N H2SO4终止反应，并在微量酶标仪中在450nm下读取板。
抗人C5 mAb的产生：
用通过佐剂乳化的30μg纯化的人C5(#A120，Complement Technology Inc)免疫B10.D2/oSnJ雌性(Stock#000461,Jackson laboratory)小鼠。在第14天，用通过佐剂乳化的30μg纯化的人C5再次免疫小鼠。在融合之前，用33μg纯化的人C5对小鼠免疫加强三次。然后，通过颈椎脱位将小鼠处死，并分离脾脏以用于通过机械破坏制备单细胞混悬液。用HYB-SFM(Invitrogen)+10％FBS培养基清洗脾细胞悬液一次，对细胞计数并将其与X63-Ag8.653骨髓瘤细胞(ATCC)以2:1的比例混合。再次用HYB-SFM培养基清洗细胞混合物，并且通过离心(1000rpm×5min)制备细胞颗粒。轻轻扰动细胞颗粒并使其松开，然后通过缓慢加入聚乙二醇(PEG 1500)(对于3×108个细胞，1.5ml PEG)来诱导细胞融合。将细胞在37℃保持1min，然后将20ml HYB-SFM培养基在3min内加入至细胞(第一分钟，1ml，第二分钟，3ml，并且第三分钟，16ml)。将混合物以1000rpm离心5min，并且将细胞在24孔板中的HAT培养基(10ml HAT[Sigma H0262]，5ml Pen/Strep，500μl庆大霉素和10％FBS，在500ml HYB-SFM培养基中)中涂板。2周后，从具有可见集落的孔中取出上清液以用于通过ELISA筛选与纯化的人C5的反应性，挑取阳性克隆并在通过ELISA的第二轮筛选之后，通过有限稀释法在96孔板中涂板以获得单克隆。使阳性克隆在HT培养基(10ml HT，5ml Pen/Strep，500μl庆大霉素和10％FBS，在500ml HYB-SFM培养基中)中增殖。在抗体收集之前，将杂交瘤细胞转换至无血清培养基(HYB-SFM)中2-3天。收集细胞培养基以用于通过蛋白G亲和色谱法的mAb纯化。
mAb克隆：
为了克隆4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1的cDNA，通过TRizol试剂(Sigma)从杂交瘤细胞分离了总RNA。使用寡聚(dT)引物，通过反转录合成了第一链cDNA，为了扩增重链cDNA(对于IgGl，IgG2a/b)，在PCR反应中使用了以下引物：5'-GAGGTGAAGCTGGTGGAG(T/A)C(T/A)GG-3'(SEQ ID NO:77)和5'-GGGGCCAGTGGATAGAC-3'(SEQ ID NO:78)。为了扩增k轻链，使用了以下引物：4种上游引物的混合物：5'-CCAGTTCCGAGCTCCAGATGACCCAGACTCCA-3'(SEQ ID NO:79)；5'-CCAGTTCCGAGCTCGTGCTCACCCAGTCTCCA-3'(SEQ ID NO:80)；5'-CCAGTTCCGAGCTCCAGATGACCCAGTCTCCA-3'(SEQ ID NO:81)；5'-CCAGTTCCGAGCTCGTGATGACACAGTCTCCA-3'(SEQ ID NO:82)；下游引物：5'-GTTGGTGCAGCATCAGC-3(SEQ ID NO:83)。将PCR扩增子克隆至pCR TOPO TA 2.1载体中(Invitrogen)并测序。为了获得mAb的信号肽(前导)序列，通过来自Invitrogen的试剂盒(GeneRacer)使用了5'-RACE法。使用根据5'-RACE和原始测序数据所确定的特异性引物扩增了完整的可变区cDNA。
嵌合2G1 mAb的构建和表达
通过使用EcoRI/NheI位点，将mAb 2G1的可变区克隆至pFUSE-CHIg-hG4载体(来自InvivoGen)构建了嵌合2G1重链cDNA，其含有具有突变为脯氨酸的丝氨酸229的人IgG4重链恒定区(SEQ ID NO:60)。通过使用Agel/BsiWI位点，将mAb 2G1的可变区克隆至pFUSE2-CLIg-hk载体(来自InvivoGen)构建了嵌合2G1轻链cDNA，其含有人k轻链恒定区(SEQ ID NO61)。使用脂质体试剂，用2G1的2Glor人源化重链和轻链(两个人源化重链与相同的人源化轻链配对)的嵌合重链和轻链共转染CHO细胞。转染后，用Geocine(1mg/ml)和灭瘟素(Blastcidine)(10μg/ml)对CHO细胞选择约7天。挑取抗药性细胞集落，胰蛋白酶化并在存在相同选择药物的情况下在96孔板中对其进行有限稀释培养。在细胞在96孔板中汇合后，通过ELISA测试培养基对人C5的反应性并使阳性克隆增殖。对于抗体产生，将稳定的转染的CHO细胞系在150cm培养瓶中的具有10％FBS的DMEM：F 12培养基中生长，并且在达到汇合之后，将它们转换至无血清CD-CHO培养基(Invitrogen)中，3天后，收集培养基并通过蛋白G色谱法纯化Ab。通过SDS-PAGE分析纯化的Ab等份。
人源化2G1 mAb的构建和表达
将VH和VL的mAb 2G1 CDR分别移植到人Ig重链和轻链的种系可变和连接(V，J)基因节段的骨架上，并基于人免疫球蛋白和mAb 2G1之间的CDR相似性对其进行选择(Hwang等人,Method,2005)。这种方法的优势在于产生了保留了它们与它们的同源抗原的结合亲合力的人源化Ab并且大大降低了非人Ab的潜在免疫原性，因为框架中所有的残基均来自人Ab种系序列。使用EcoRI/NheI位点，通过将2G1的人源化重链可变区(通过Genescript合成)克隆至pFUSE-CHIg-hG4载体(来自InvivoGen)构建了人源化2G1重链cDNA，其含有人IgG4重链恒定区，并且具有突变为脯氨酸的丝氨酸229(SEQ ID NO:60)。使用Agel/BsiWI位点，通过将2G1的人源化轻链可变区(通过Genescript合成)克隆至pFUSE2-CLIg-hk载体(来自InvivoGen)构建了人源化2G1轻链cDNA，其含有人κ轻链恒定区(SEQ ID NO:61)。使用脂质体试剂，用2G1的2Glor人源化重链和轻链(两个人源化重链与相同的人源化轻链配对)的嵌合重链和轻链共转染CHO细胞。转染后，用Geocine(1mg/ml)和灭瘟素(Blastcidine)(10μg/ml)对CHO细胞选择约7天。挑取抗药性细胞集落，胰蛋白酶化并在存在相同选择药物的情况下在96孔板中对其进行有限稀释培养。在细胞在96孔板中汇合后，通过ELISA测试培养基对人C5的反应性并使阳性克隆增殖。对于抗体产生，将稳定的转染的CHO细胞系在150cm培养瓶中的具有10％FBS的DMEM：F 12培养基中生长，并且在达到汇合之后，将它们转换至无血清CD-CHO培养基(Invitrogen)中，3天后，收集培养基并通过蛋白G色谱法纯化Ab。通过SDS-PAGE分析纯化的Ab等份。
溶血测定：
绵羊红细胞(RBC)溶胞测定：将绵羊RBC(1×107或1×108个细胞，ComplementTechnology Inc)在37℃与10％或50％NHS(Complement Technology Inc)在明胶佛罗那缓冲液(GVB2+，Sigma)中培育20分钟。在加入至绵羊RBC中之前，将NHS与mAb(4E7、9G6、11C5、2G1、11D9、8E1和对照mAb 7A12)或者嵌合2G1和7A12，或者人源化2G1在4℃预培育1小时。通过添加冰冷的40mM EDTA的PBS溶液终止溶胞反应。将培育混合物以1500rpm离心5min，并且收集上清液并测量OD405nm。将未添加NHS或者添加EDTA的样品用作阴性溶胞对照，并且将用蒸馏水完全裂解的绵羊RBC样品用作阳性对照(100％溶胞)，将其他样品中的溶胞％对它们进行归一化。
鸡RBC溶胞测定：将鸡RBC(1×107或1×108个细胞，Complement Technology Inc)在37℃与50％的血清(Complement Technology Inc)在GVB2+中培育1小时。在添加至鸡RBC中之前，将来自不同动物种，包括人、狗、兔、仓鼠、山羊、猪、绵羊、恒河猴或食蟹猴的血清与50μg/ml的4E7、9G6、11C5、2G1、11D9或8E1在4℃预培育1小时。在一些实验中，将NHS与连续稀释的2G1或8E1在4℃预培育1小时。通过添加冰冷的40mM EDTA的PBS溶液终止溶胞反应将培育混合物以1500rpm离心5min，并且收集上清液并测量OD405nm。将所收集的数据对作为阴性对照的血清加EDTA(0％)和对作为阳性对照的血清加无抗体(100％)归一化。
PNH RBC溶胞测定：用GVB2+缓冲液稀释NHS并使其酸化至pH 6.4(酸化正常人血清：aNHS)并将其用于通过PNH RBC的测定。将5×106个细胞加入至50％aNHS。在37℃培育，并且在30min之后，通过添加200μl冷的20mM EDTA的PBS溶液终止反应。在加入至PNH RBC之前，将mAb 2G1与aNHS在4℃培育30min。通过离心使RBC成颗粒，并且将所回收的上清液的等份在405nm的光密度用于计算溶胞百分比。将在水中裂解的PNH RBC用作100％溶胞标准品。
人C5β链和域缺失突变体的表达：
处于pGEM-T载体中的人C5(hC5)cDNA购自Sino Biologicals Inc.(Cat#HG13416-G)。通过基因和载体特异性引物确认了得自Sino Biologicals Inc.的C5核苷酸序列。通过PubMed(NM_001735.2)和Uniprot Id-P01031识别了hC5β链核苷酸和蛋白序列。将来自hC5的β链扩增并克隆至pCAGGS载体。通过反向PCR在hC5-pGEM-T载体中进行β链的巨球蛋白(MG)域缺失突变体(MG1、MG2、MG3、MG4、MG5和MG6)并且通过测序确认缺失。类似地，将hC5β链的MG域突变体克隆至pCAGGS载体。用于MG缺失突变体构建和克隆的引物如下表1所列。
表1.用于MG突变体构建和克隆的引物
hC5β和hC5β-MG缺失的转染：
使用Lipofectamine 2000(Invitrogen)，将完整的β链和多种MG域缺失突变体cDNA转染到HEK细胞中。48小时后，收集上清液并用于测定。
SDS-PAGE和免疫印迹：
对于免疫印迹分析，将40μl来自hC5β链-和MG域缺失突变体转染的HEK细胞的上清液或者非转染的HEK细胞上清液(阴性对照)加入至含有样品缓冲液和β-巯基乙醇的管中。将纯化的人C5用作阳性对照。将样品在100℃煮沸7min，并加载到4-12％梯度凝胶上，并将蛋白转移至0.2μm孔径的PVDF膜上。用5％脱脂奶粉的TBS溶液在室温下封闭膜1小时。然后，将膜与第一抗体(来自Comptech的山羊抗hC5多克隆，cat#A220或者生物素化的mAb 2G1-3或QDC5)在5％脱脂奶粉的TBST溶液中在4℃培育过夜。用具有0.1％吐温-20的TBS(TBST)清洗膜6×5min，并与兔抗山羊-HRP(Bio-Rad，Cat#172-1034)的1:4000稀释液在室温下培育1hr。根据生产商的说明，使用PierceTMECL 2免疫印迹底物检测蛋白。mAb QDC5是具有人源化小鼠抗人C5 mAb的VH和VL序列的重组人IgG4 mAb，如Thomas等人(Mol Immunol,1996Dec；33(17-18):1389-401)中所述。将其在Expi-CHO细胞(Invitrogen)中表达并通过蛋白A亲合色谱法纯化。
用于hC5β链和MG缺失突变体检测的夹心ELISA
对于夹心ELISA，以2μg/ml的最终浓度，用2G1-3mAb在4℃涂覆96孔板过夜。在用含有0.05％吐温-20的PBS清洗后，用3％的牛血清白蛋白(BSA)在室温下封闭板1小时。清洗后，将板与200μl转染的HEK细胞上清液或者20％NHS在室温下培育1h。再次清洗后，将板与最终浓度2μg/ml的检测抗体SKY59在室温下培育1h，再次清洗并与HRP缀合的第二人IgG4特异性抗体(Invitrogen#MAI-34437)在室温下培育1小时。基于公开的VH/VL序列，作为IgG4重组mAb表达mAb SKY59(Fukuzawa等人,Sci Rep.,2017Apr 24；7(1):1080.doi:10.1038/s41598-017-01087-7)。在使用多克隆山羊抗人C5抗体的免疫印迹的情况下，以1:500的稀释度在室温下使用抗体1小时。再次清洗后，将所述孔与兔抗山羊IgG HRP(1:4000)培育1小时。用HRP底物使板显色6-10min。用2N H2SO4终止反应，并在微量酶标仪中在450nm下读取板。
现将描述本实施例的结果。
图1显示了ELISA测定的结果，其表明了抗人C5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1与人C5的结合。直接抗原结合ELISA，其中将mAb在用纯化的人C5涂覆的微量滴定板上连续稀释。所有6种mAb显示出与人C5的高反应性。
图2-图7显示了表明抗C5 mAb 2G1、8E1、4E7、9G6、11C5和11D9与C5的结合亲合力的实验结果。使用胺偶联法，将纯化的αmRabbit IgG(RAMFc)mAb偶联至CM4芯片。然后，在固定化的RAMFc上捕获抗C6mAb。在Biacore-2000仪上进行Biacore分析。
图8显示了通过抗人C5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1的LPS诱导的C5a产生的剂量依赖性抑制。为了评价抗人C5 mAb对LPS诱导的C5a产生的影响，使用了两种测定的组合：LPS诱导的C5a产生和人C5a夹心ELISA。当以12.5μg/ml的最终浓度加入至10％正常人血清(NHS)时，所有6种mAb有效地抑制了LPS诱导的C5a产生。
图9显示了抗人C5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9和8E1对补体介导的溶血的影响。图9A显示了在将绵羊RBC与含有各种抗C5 mAb的连续稀释的50％的NHS在37℃培育1小时后，通过测量OD405nm的吸光值所确定的RBC溶胞。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。在120μg/ml，所有mAb抑制了50％的NHS介导的绵羊红细胞溶胞。在较低剂量(例如，30-60μg/ml)，9G6在防止溶血方面不如其他mAb有效。
图9B显示在30μg/ml，mAb 2G1和8E1在抑制补体介导的溶血方面比4E7、11C5和11D9更有效。
图10显示了使用来自不同动物种的血清的抗人C5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9、8E1对补体介导的溶血的影响。将鸡RBC与含有各种抗C5 mAb(最终浓度：50μg/ml)的50％NHS、正常家兔血清、恒河猴血清或食蟹猴血清在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值确定了RBC溶胞，并将其对作为阴性对照的血清加EDTA(0％)和对作为阳性对照的血清加无抗体(100％)归一化。在使用NHS的溶血测定中，6种抗人C5 mAb中的5种显著抑制溶血，即，大于50％。特别是，含有2G1的NHS样品显示出对溶血几乎完全抑制。当用mAb 9G6或2G1处理时，兔血清中的溶血活性显著降低。另一方面，使用猴(恒河猴和食蟹猴)、山羊、猪和绵羊的血清，所有mAb不能抑制补体介导的溶血。
图11显示了抗人C5 mAb 2G1和8E1对补体介导的溶血的影响。将鸡RBC与含有2G1或8E1或对照mAb(MOPC，鼠标IgGl)的连续稀释的50％NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。
图12中提供了抗人C5 mAb 2G1对PNH RBC溶血的影响。在存在或不存在mAb 2G1的情况下，对来自阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)患者的RBC进行Ham酸化血清试验。将RBC与含有2G1的连续稀释的50％NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。在不存在mAb的情况下，通过酸化血清使约35％的RBC裂解，而mAb 2G1在25μg/ml的处理导致溶血活性降低70％，40μg/ml的处理导致降低85％。
图13至图18显示了6种抗体的抗体序列。图13显示了mAb 2Gl的重链和轻链的可变区序列。图14显示了mAb 8E1的重链和轻链的可变区序列。图15显示了mAb 4E7的重链和轻链的可变区序列。图16显示了mAb 9G6的重链和轻链的可变区序列。图17显示了mAb 11C5的重链和轻链的可变区序列。图18显示了mAb 11D9的重链和轻链的可变区序列。
图19显示了具有丝氨酸228向脯氨酸的突变(即S228P)的人IgG4重链恒定区和人κ轻链恒定区的氨基酸序列。这些序列用于构建嵌合(小鼠可变区+人恒定区)和人源化(人源化小鼠可变区+人恒定区)抗人C5抗体(2G1)。
图20显示了2G1人IgG4嵌合mAb与人C5的反应性。通过将mAb 2G1的可变区与具有S228P突变的人IgG4重链恒定区和人κ轻链恒定区连接制备了嵌合2G1。用人C5涂覆板。在与连续稀释的嵌合2G1培育之后，通过HRP缀合的抗人IgG4检测结合的嵌合mAb。嵌合2G1以剂量依赖性方式结合至人C5。
图21显示了2G1人IgG4嵌合mAb对经典途径补体介导的溶血的影响。将致敏的绵羊RBC与含有连续稀释的嵌合2G1的NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。结果显示在30μg/ml和更高的浓度，嵌合2G1 mAb抑制了50％的NHS介导的绵羊红细胞溶胞。
图22显示了mAb 2G1的人源化可变重链(VH)(人源化2G1VH-11801)的核苷酸和氨基酸序列。通过来自鼠科mAb 2G1 VH的CDR向种系编码的人VH框架(11801)的移植实现了人源化。对信号肽的氨基酸序列加下划线，并且对CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列加粗和加阴影。
图23显示了mAb 2G1的另一种人源化VH(人源化2G1 VH-16901)的核苷酸和氨基酸序列。通过来自鼠科mAb 2G1 VH的CDR向种系编码的人VH框架(16901)的移植实现了人源化。对信号肽的氨基酸序列加下划线，并且对CDRl、CDR2和CDR3的氨基酸序列加粗和加阴影。
图24显示了mAb 2G1的人源化可变轻链(VL)(人源化2G1 VL-1901)的核苷酸和氨基酸序列。通过来自鼠科mAb 2G1 VL的CDR向种系编码的人VL框架(1901)的移植实现了人源化。对信号肽的氨基酸序列加下划线，并且对CDRl、CDR2和CDR3的氨基酸序列加粗和加阴影。
图25显示了人源化2G1(VH-11801/VL-1901)与人C5的反应性。作为在Fc域中具有S228P突变的人IgG4 mAb表达人源化2G1(VH-11801/VL-1901)。用人C5涂覆板。在与连续稀释的人源化2G1(VH-11801/VL-1901)培育之后，通过HRP缀合的抗人IgG4检测结合的mAb。人源化2G1(VH-11801/VL-1901)以剂量依赖性方式结合人C5。
图26显示了人源化2G1(VH-16901/VL-1901)与人C5的反应性。作为在Fc域中具有S228P突变的人IgG4 mAb表达人源化2G1(VH-16901/VL-1901)。用人C5涂覆板。在与连续稀释的人源化2G1(VH-16901/VL-1901)培育之后，通过HRP缀合的抗人IgG4检测结合的Ab。人源化2G1(VH-16901/VL-1901)以剂量依赖性方式结合人C5。
图27显示了人源化2G1(VH-11801/VL-1901)对经典途径补体介导的溶血的影响。作为在Fc域中具有S228P突变的人IgG4 mAb表达人源化2G1(VH-11801/VL-1901)。将致敏的绵羊RBC与含有连续稀释的人源化2G1(VH-11801/VL-1901)的10％NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。在10μg/ml和更高的mAb浓度，人源化2G1(VH-11801/VL-1901)显著抑制10％NHS介导的绵羊红细胞溶胞。
图28显示了人源化2G1(VH-16901/VL-1901)对经典途径补体介导的溶血的影响。作为在Fc域中具有S228P突变的人IgG4 mAb表达人源化2G1(VH-16901/VL-1901)。将致敏的绵羊RBC与含有连续稀释的人源化2G1(VH-16901/VL-1901)的10％NHS在37℃培育1小时。通过测量OD405nm的吸光值来确定RBC溶胞。在10μg/ml和更高的mAb浓度，人源化2G1(VH-16901/VL-1901)显著抑制10％NHS介导的绵羊红细胞溶胞。
本文所引用的每篇专利、专利申请和专利公开的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。
尽管已参考具体实施方式公开了本发明，但是显然在不背离本发明的真正精神和范围的情况下，本领域其他技术人员可以设计本发明的其他实施方式和变化。所附权利要求旨在视为包括所有这些实施方式和等价变化。
序列表
<110> 宾夕法尼亚大学理事会（The Trustees of the University ofPennsylvania）
宋文超（Song, Wenchao）
佐藤纱也加（Sato, Sakaya）
三轮隆史（Miwa, Takashi）
达莫达尔.吉利帕利（Gullipalli, Damodar）
<120> 抗C5抗体及其用途
<130> 046483-6156-00-WO.607244
<150> US 62/467,498
<151> 2017-03-06
<160> 104
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 432
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VH的核苷酸序列
<400> 1
atgggatgga gctggatctt tctcctcttc ctgtcaggaa ctgcaggtgt cctctctgag 60
gtccagctgc aacagtctgg accagagctg gtgaagcctg gggcttcagt gaagatatcc 120
tgcaaggctt ctggatacac aatcacagac tacaatttgg actgggtgaa gcagagccat 180
ggaaagagcc ttgagtggat tggagatatt agtcctaact atggttatac tatctacaac 240
cagaaattca aggacaaggc cacattgact gtagacaggt cctccagcac agcctacatg 300
gagctccgca gcctgacatc tgaggacact gcagtttatt actgtgcaag aagggacatt 360
cgttactccg gtaattccta caaatggtac ttcgatgtct ggggcacagg gaccacggtc 420
accgtctcct ca 432
<210> 2
<211> 144
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VH的氨基酸序列
<400> 2
Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Leu Phe Leu Ser Gly Thr Ala Gly
1 5 10 15
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile
35 40 45
Thr Asp Tyr Asn Leu Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys
115 120 125
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VH的CDR1的氨基酸序列
<400> 3
Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr Asn Leu Asp
1 5 10
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VH的CDR2的氨基酸序列
<400> 4
Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 5
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VH的CDR3的氨基酸序列
<400> 5
Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10 15
<210> 6
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VL的核苷酸序列
<400> 6
atgaggttcc aggttcaggt tctggggctc cttctgctct ggatatcagg tgcccagtgt 60
gatgtccaga taacccagtc tccatcttat cttgctgcat ctcctggaga aaccattact 120
attaattgca ggacaagtaa gagcataagc aaatatttag cctggtatca agagaaacct 180
gggaaaacta ataagcttct tatctactct ggatccacct tgcaatctgg aattccatca 240
aggttcaggg gcagtggatc tggtacagat ttcactctca ccatcagtag cctggagcct 300
gaagattttg caatgtatta ctgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gttcggaggg 360
gggaccaagc tggaaataaa a 381
<210> 7
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VL的氨基酸序列
<400> 7
Met Arg Phe Gln Val Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Gln Cys Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala
20 25 30
Ala Ser Pro Gly Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Thr Ser Lys Ser
35 40 45
Ile Ser Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120 125
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VL的CDR1的氨基酸序列
<400> 8
Arg Thr Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VL的CDR2的氨基酸序列
<400> 9
Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 2G1的VL的CDR3的氨基酸序列
<400> 10
Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 11
<211> 414
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VH的核苷酸序列
<400> 11
atggctgtcc tggggctgct tctctgcctg gtgactttcc caagctgtgt cctgtcccag 60
gtgcagctga aggagtcagg acctggcctg gtggcgccct cacagagcct gtccatcaca 120
tgcaccgtct cagggttccc tttaaacaac tatggaatac actgggttcg ccagcctcca 180
ggaaagggtc tggagtggct ggcagtgata tggagtgatg gaagaacaac ctataattca 240
gctctcaact ccagactgag catcagcaag gacaactcca agagccaagt tttctttaaa 300
atgaacagtc tccaaactga tgacacagcc atgtactatt gtgccagaca tgatggtcgg 360
ggggactata gtatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 414
<210> 12
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VH的氨基酸序列
<400> 12
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala
20 25 30
Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Pro Leu
35 40 45
Asn Asn Tyr Gly Ile His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Leu Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Asn Ser
65 70 75 80
Ala Leu Asn Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln
85 90 95
Val Phe Phe Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg His Asp Gly Arg Gly Asp Tyr Ser Met Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 13
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VH的CDR1的氨基酸序列
<400> 13
Gly Phe Pro Leu Asn Asn Tyr Gly Ile His
1 5 10
<210> 14
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VH的CDR2的氨基酸序列
<400> 14
Val Ile Trp Ser Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Asn Ser
1 5 10 15
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VH的CDR3的氨基酸序列
<400> 15
His Asp Gly Arg Gly Asp Tyr Ser Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 16
<211> 390
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VL的核苷酸序列
<400> 16
atggagacag acacactcct gttatgggta ctgctgctct gggcccttag ttccgagctc 60
gtgatgacac agtctcctgc ttccttagtt gtatctctgg ggcagagggc caccatctca 120
tgcagggcca gcaaaggtgt cagtacatct gtctacagtt atatgcactg gtaccaacag 180
aaaccaggac agccacccaa actcctcatc tatcttgcat ccaacctaga atctggggtc 240
cctgccaggt tcagtggcag tgggtctggg acagacttct ccctcaacat ccatcctgtg 300
gaggaggagg atgctgcaac ctattactgt cagcaaagtg gggagcttcc gctcacgttc 360
ggtgctggga ccaagctgga gctgaaacgg 390
<210> 17
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VL的氨基酸序列
<400> 17
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Ala Leu
1 5 10 15
Ser Ser Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Val Val Ser
20 25 30
Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser
35 40 45
Thr Ser Val Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
50 55 60
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn
85 90 95
Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
100 105 110
Ser Gly Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
115 120 125
Lys Arg
130
<210> 18
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VL的CDR1的氨基酸序列
<400> 18
Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Val Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VL的CDR2的氨基酸序列
<400> 19
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 8E1的VL的CDR3的氨基酸序列
<400> 20
Gln Gln Ser Gly Glu Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 21
<211> 429
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 4E7的VH的核苷酸序列
<400> 21
atgtcctctc ctcagacact gaacacactg actctaacca tgggatggag ctggatcttt 60
ctctttctcc tgtcagaaac tgcaggagtc ctctctgagg tccagctgca acagggggct 120
tcagtgaaga tgtcctgtaa gacttctcga tactcattca ctgactacat catgcactgg 180
gtgaagctga gccatggaaa gagccttgag tggattggat atattaaccc taacaatggt 240
ggtactatct acaaccagaa gttcaaggac aaggccacat tgactgtaaa caagtcctcc 300
agcacagcct acatggaatt ccgcagcctg acatcggagg attctgcagt ctatttctgt 360
tcaagagggg gggtttatta ccgggggttt gcttactggg gccaagggac actggtcact 420
gtctctgca 429
<210> 22
<211> 143
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 4E7的VH的氨基酸序列
<400> 22
Met Ser Ser Pro Gln Thr Leu Asn Thr Leu Thr Leu Thr Met Gly Trp
1 5 10 15
Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Glu Thr Ala Gly Val Leu Ser
20 25 30
Glu Val Gln Leu Gln Gln Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr
35 40 45
Ser Arg Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Ile Met His Trp Val Lys Leu Ser
50 55 60
His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Asn Gly
65 70 75 80
Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val
85 90 95
Asn Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Phe Arg Ser Leu Thr Ser
100 105 110
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ser Arg Gly Gly Val Tyr Tyr Arg
115 120 125
Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
130 135 140
<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 4E7的VH的CDR1的氨基酸序列
<400> 23
Arg Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Ile Met
1 5
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 4E7的VH的CDR2的氨基酸序列
<400> 24
Tyr Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 25
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 4E7的VH的CDR3的氨基酸序列
<400> 25
Gly Gly Val Tyr Tyr Arg Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 26
<211> 411
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 4E7的VL的核苷酸序列
<400> 26
atggcctgga tttcacttat actctctctc ctggctctca gctcaggggc catttcccag 60
gctgttgtga ctcaggaatc tgcactcacc acatcacctg gtgaaacagt cacattcact 120
tgtcgctcaa gtactggggc tgttacaaac agtaactatg ccaactgggt ccaagaaaaa 180
ccagatcatt ttttcactgg tctaataggt gttaccaaca accgaggtcc aggtgttcct 240
gcccgattct caggctccct gattggagac aaggctgccc tcaccatcac aggggcacag 300
actgaggatg aggcaatata tttctgtgct ctatggtaca gcaaccactt gggtgttcgg 360
tggaggaacc aaactgactg tcctaggcca gcccaagtct tcgccatcag t 411
<210> 27
<211> 137
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 4E7的VL的氨基酸序列
<400> 27
Met Ala Trp Ile Ser Leu Ile Leu Ser Leu Leu Ala Leu Ser Ser Gly
1 5 10 15
Ala Ile Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser
20 25 30
Pro Gly Glu Thr Val Thr Phe Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val
35 40 45
Thr Asn Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Phe
50 55 60
Phe Thr Gly Leu Ile Gly Val Thr Asn Asn Arg Gly Pro Gly Val Pro
65 70 75 80
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile
85 90 95
Thr Gly Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp
100 105 110
Tyr Ser Asn His Leu Gly Val Arg Trp Arg Asn Gln Thr Asp Cys Pro
115 120 125
Arg Pro Ala Gln Val Phe Ala Ile Ser
130 135
<210> 28
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 4E7的VL的CDR1的氨基酸序列
<400> 28
Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Asn Ser Asn Tyr Ala Asn
1 5 10
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 4E7的VL的CDR2的氨基酸序列
<400> 29
Val Thr Asn Asn Arg Gly Pro
1 5
<210> 30
<211> 423
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VH的核苷酸序列
<400> 30
atggattggg tgtggacctt ggtattcctg atagcagctg cccaaagtgc ccaagcacag 60
atccagttgg tgcagtctgg acctgagctg aagaagcctg gagagacagt caagatctcc 120
tgcaaggctt ctgggtatac cttcacagaa tatccaatgc actgggtgaa gcaggctcca 180
ggaaagagtt tcaagtggat gggcatccta tacaccgaca ctggagagcc aacatatgct 240
gaagagttca ggggacggtt tgccttctct ttggagacct ctgccagcac tgcctatttg 300
cagatcaaca acctcaaaaa tgaggacacg gctacatatt tctgtgttca ctcaggctac 360
gtaggctact ggggccaagg caccactctc acagtctcat cagccaaaac aacaccccca 420
tca 423
<210> 31
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VH的氨基酸序列
<400> 31
Met Asp Trp Val Trp Thr Leu Val Phe Leu Ile Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ala Gln Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Glu Tyr Pro Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Ser Phe
50 55 60
Lys Trp Met Gly Ile Leu Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala
65 70 75 80
Glu Glu Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr
100 105 110
Tyr Phe Cys Val His Ser Gly Tyr Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Thr Leu Thr Val Ser Ser
130
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VH的CDR1的氨基酸序列
<400> 32
Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Pro Met His
1 5 10
<210> 33
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VH的CDR2的氨基酸序列
<400> 33
Ile Leu Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 34
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VH的CDR3的氨基酸序列
<400> 34
Ser Gly Tyr Val Gly Tyr
1 5
<210> 35
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VL的核苷酸序列
<400> 35
atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacagg tgccagatgt 60
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatcagcat ctgtgggaga aactgtcacc 120
ttcacatgtc gggcaagtga gattatttac agttatttag tttggtatca gcagaaacag 180
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctctaat gcaaaaacct tagcagaggg tgtgccatca 240
aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcaatag cctgcagcct 300
gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat tattatggta atcctcccac gttcggaggg 360
gggaccaagc tggaaataaa acgg 384
<210> 36
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VL的氨基酸序列
<400> 36
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ile
35 40 45
Ile Tyr Ser Tyr Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro
50 55 60
Gln Leu Leu Val Ser Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Tyr
100 105 110
Gly Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115 120 125
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VL的CDR1的氨基酸序列
<400> 37
Arg Ala Ser Glu Ile Ile Tyr Ser Tyr Leu Val
1 5 10
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VL的CDR2的氨基酸序列
<400> 38
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 9G6的VL的CDR3的氨基酸序列
<400> 39
Gln His Tyr Tyr Gly Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 40
<211> 447
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VH的核苷酸序列
<400> 40
atgagcactg aacacggacc cctcaccatg aacttcgggc tcagcttgat tttccttgtc 60
cttgttttaa aaggtgtcca gtgtgaagtg cagctagtgg agtctggggg aggcttagtg 120
aagcctggag ggtccctgaa actctcctgt gcagcctctg gattcacttt cactacctat 180
gccatgtctt gggttcgcca gactccggaa aagaggctgg agtgggtcgc aaccattagt 240
gctggtggta cttacaccta ctattcagac aatgtaaagg gccgattcac catctccaga 300
gacaatgcca agaacaacct gtacctgcaa atgagccatc tgaagtctga ggacacagcc 360
atgttttact gtgcaagaga tcccgattac tacggtagaa gcccgtttgc ttactggggc 420
caagggactc tggtcactgt ctctgca 447
<210> 41
<211> 149
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VH的氨基酸序列
<400> 41
Met Ser Thr Glu His Gly Pro Leu Thr Met Asn Phe Gly Leu Ser Leu
1 5 10 15
Ile Phe Leu Val Leu Val Leu Lys Gly Val Gln Cys Glu Val Gln Leu
20 25 30
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu
35 40 45
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr Ala Met Ser Trp
50 55 60
Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ala Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys Gly Arg Phe
85 90 95
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr Leu Gln Met Ser
100 105 110
His Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Phe Tyr Cys Ala Arg Asp Pro
115 120 125
Asp Tyr Tyr Gly Arg Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
130 135 140
Val Thr Val Ser Ala
145
<210> 42
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VH的CDR1的氨基酸序列
<400> 42
Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VH的CDR2的氨基酸序列
<400> 43
Thr Ile Ser Ala Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 44
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VH的CDR3的氨基酸序列
<400> 44
Asp Pro Asp Tyr Tyr Gly Arg Ser Pro Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 45
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VL的核苷酸序列
<400> 45
atggttttca cacctcagat acttggactt atgctttttt ggatttcagc ctccagaggt 60
gaaattgtgc tcactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga gagcgtcagt 120
ctttcctgta gggccagcca aagtattagc aacaacctac agtggtatca acaaaaatca 180
catgagtctc caagacttct catcaaatat gcttcccagt ccatctctgg gatcccctcc 240
aggttcagtg gcagtggatc agggacagat ttcactctca gtatcaacag tgtggagact 300
gaagattttg gaatgtattt ctgtcaacag agtaacagct ggcctctcac gttcggtggt 360
gggaccaagg tggagctgaa acgg 384
<210> 46
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VL的氨基酸序列
<400> 46
Met Val Phe Thr Pro Gln Ile Leu Gly Leu Met Leu Phe Trp Ile Ser
1 5 10 15
Ala Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Ile Ser Asn Asn Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn
85 90 95
Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn
100 105 110
Ser Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Arg
115 120 125
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VL的CDR1的氨基酸序列
<400> 47
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Leu Gln
1 5 10
<210> 48
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VL的CDR2的氨基酸序列
<400> 48
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11C5的VL的CDR3的氨基酸序列
<400> 49
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 50
<211> 465
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VH的核苷酸序列
<400> 50
atgtcctcac cacagacact gaacacactg actctaacca tgggatggag ctggatcttt 60
ctctttctcc tgtcaggaac tgcaggtgtc ctctctgagg tccagctgca acaatctgga 120
cctgaggtgg tgaagcctgg ggcttcagtg aagatatcct gtaaggcttc tggatacacg 180
ttcactgact tctacatgaa ctgggtgaaa cagagccatg gaaagagcct tgagtggatt 240
ggatatatta atcctaacaa tggtgatact agttacaacc agaagttcaa gggcaaggcc 300
acatcgactg tagacaggtc ctccaacaca gcctacatgg agctccgcag cctgacatct 360
gaggactctg cagtctatta ctgtgcaaga ctcatcttct atggtaactg gtactttgat 420
gtctggggca cagggaccac ggtcaccgtc tcctcagcca aaaca 465
<210> 51
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VH的氨基酸序列
<400> 51
Met Ser Ser Pro Gln Thr Leu Asn Thr Leu Thr Leu Thr Met Gly Trp
1 5 10 15
Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly Val Leu Ser
20 25 30
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
35 40 45
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
50 55 60
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
65 70 75 80
Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
85 90 95
Lys Gly Lys Ala Thr Ser Thr Val Asp Arg Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
100 105 110
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
115 120 125
Ala Arg Leu Ile Phe Tyr Gly Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr
130 135 140
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr
145 150 155
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VH的CDR1的氨基酸序列
<400> 52
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VH的CDR2的氨基酸序列
<400> 53
Tyr Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VH的CDR3的氨基酸序列
<400> 54
Leu Ile Phe Tyr Gly Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 55
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VL的核苷酸序列
<400> 55
atggattttc agatgcagat tatcagcttg ctgctaatca gtgtcacagt catagtgtct 60
aatggagaaa ttgtgctcac ccagtctcca cccaccatgg ctgcatctcc cggggagaag 120
atcactatca cctgcagtgc cagctcaagt ataagttcca attacgtgca ttggtatcag 180
cagaagccag gattctcccc taaactcttg atttatagga catccaatct ggcttctgga 240
gtcccagttc gcttcagtgg cagtgggtct gggacctctt actctctcac aattggcacc 300
atggaggctg aagatgttgc cacttactac tgccagcagg gtactagtat accgtggacg 360
ttcggtggag gcaccaaggt ggaaattaat cgg 393
<210> 56
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VL的氨基酸序列
<400> 56
Met Asp Phe Gln Met Gln Ile Ile Ser Leu Leu Leu Ile Ser Val Thr
1 5 10 15
Val Ile Val Ser Asn Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Thr
20 25 30
Met Ala Ala Ser Pro Gly Glu Lys Ile Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
50 55 60
Phe Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly
65 70 75 80
Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu
85 90 95
Thr Ile Gly Thr Met Glu Ala Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Ile Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
115 120 125
Ile Asn Arg
130
<210> 57
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VL的CDR1的氨基酸序列
<400> 57
Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn Tyr Val His
1 5 10
<210> 58
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VL的CDR2的氨基酸序列
<400> 58
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mAb 11D9的VL的CDR3的氨基酸序列
<400> 59
Gln Gln Gly Thr Ser Ile Pro Trp Thr
1 5
<210> 60
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有S228P突变的人IgG4恒定重链的氨基酸序列
<400> 60
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 61
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人κ轻链恒定区的氨基酸序列
<400> 61
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 62
<211> 432
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-11801的核苷酸序列
<400> 62
atggactgga cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag 60
gttcagctgg tgcagtctgg agctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 120
tgcaaggctt ctggatacac aatcacagac tacaatttgg actgggtgcg acaggcccct 180
ggacaagggc ttgagtggat gggagatatt agtcctaact atggttatac tatctacaac 240
cagaaattca aggacagagt caccatgacc acagacacat ccacgagcac agcctacatg 300
gagctgagga gcctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt 360
cgttactccg gtaattccta caaatggtac ttcgatgtct ggggccaagg gacaatggtc 420
accgtctctt ca 432
<210> 63
<211> 144
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-11801的氨基酸序列
<400> 63
Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile
35 40 45
Thr Asp Tyr Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys
115 120 125
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 64
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-11801的CDR1的氨基酸序列
<400> 64
Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr Asn Leu Asp
1 5 10
<210> 65
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-11801的CDR2的氨基酸序列
<400> 65
Gly Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
1 5 10 15
Lys Asp
<210> 66
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-11801的CDR3的氨基酸序列
<400> 66
Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10 15
<210> 67
<211> 432
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-16901的核苷酸序列
<400> 67
atggactgga cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc 120
tgcaaggctt ctggatacac aatcacagac tacaatttgg actgggtgcg acaggcccct 180
ggacaagggc ttgagtggat gggagatatt agtcctaact atggttatac tatctacaac 240
cagaaattca aggacagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300
gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aagggacatt 360
cgttactccg gtaattccta caaatggtac ttcgatgtct ggggccaagg gacaatggtc 420
accgtctctt ca 432
<210> 68
<211> 144
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-16901的氨基酸序列
<400> 68
Met Asp Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile
35 40 45
Thr Asp Tyr Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys
115 120 125
Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
<210> 69
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-16901的CDR1的氨基酸序列
<400> 69
Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr Asn Leu Asp
1 5 10
<210> 70
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-16901的CDR2的氨基酸序列
<400> 70
Asp Ile Ser Pro Asn Tyr Gly Tyr Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 71
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VH-16901的CDR3的氨基酸序列
<400> 71
Arg Asp Ile Arg Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Lys Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10 15
<210> 72
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VL-1901的核苷酸序列
<400> 72
atggaagccc cagctcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60
gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 120
atcacttgca ggacaagtaa gagcataagc aaatatttag cctggtatca gcaaaaacca 180
gggaaagccc ctaagctcct gatctattct ggatccacct tgcaatctgg ggtcccatca 240
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 300
gaagattttg caacttatta ctgtcaacaa cataatgaat acccgtacac gtttggccag 360
gggaccaagc tggagatcaa a 381
<210> 73
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VL-1901的氨基酸序列
<400> 73
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Lys Ser
35 40 45
Ile Ser Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120 125
<210> 74
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VL-1901的CDR1的氨基酸序列
<400> 74
Arg Thr Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 75
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VL-1901的CDR2的氨基酸序列
<400> 75
Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2G1 VL-1901的CDR3的氨基酸序列
<400> 76
Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 77
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> A或T
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> A或T
<400> 77
gaggtgaagc tggtggagnc nagg 24
<210> 78
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 78
ggggccagtg gatagac 17
<210> 79
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 79
ccagttccga gctccagatg acccagactc ca 32
<210> 80
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 80
ccagttccga gctcgtgctc acccagtctc ca 32
<210> 81
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 81
ccagttccga gctccagatg acccagtctc ca 32
<210> 82
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 82
ccagttccga gctcgtgatg acacagtctc ca 32
<210> 83
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 83
gttggtgcag catcagc 17
<210> 84
<211> 104
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 84
Gln Glu Gln Thr Tyr Val Ile Ser Ala Pro Lys Ile Phe Arg Val Gly
1 5 10 15
Ala Ser Glu Asn Ile Val Ile Gln Val Tyr Gly Tyr Thr Glu Ala Phe
20 25 30
Asp Ala Thr Ile Ser Ile Lys Ser Tyr Pro Asp Lys Lys Phe Ser Tyr
35 40 45
Ser Ser Gly His Val His Leu Ser Ser Glu Asn Lys Phe Gln Asn Ser
50 55 60
Ala Ile Leu Thr Ile Gln Pro Lys Gln Leu Pro Gly Gly Gln Asn Pro
65 70 75 80
Val Ser Tyr Val Tyr Leu Glu Val Val Ser Lys His Phe Ser Lys Ser
85 90 95
Lys Arg Met Pro Ile Thr Tyr Asp
100
<210> 85
<211> 101
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 85
Asn Gly Phe Leu Phe Ile His Thr Asp Lys Pro Val Tyr Thr Pro Asp
1 5 10 15
Gln Ser Val Lys Val Arg Val Tyr Ser Leu Asn Asp Asp Leu Lys Pro
20 25 30
Ala Lys Arg Glu Thr Val Leu Thr Phe Ile Asp Pro Glu Gly Ser Glu
35 40 45
Val Asp Met Val Glu Glu Ile Asp His Ile Gly Ile Ile Ser Phe Pro
50 55 60
Asp Phe Lys Ile Pro Ser Asn Pro Arg Tyr Gly Met Trp Thr Ile Lys
65 70 75 80
Ala Lys Tyr Lys Glu Asp Phe Ser Thr Thr Gly Thr Ala Tyr Phe Glu
85 90 95
Val Lys Glu Tyr Val
100
<210> 86
<211> 127
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 86
Leu Pro His Phe Ser Val Ser Ile Glu Pro Glu Tyr Asn Phe Ile Gly
1 5 10 15
Tyr Lys Asn Phe Lys Asn Phe Glu Ile Thr Ile Lys Ala Arg Tyr Phe
20 25 30
Tyr Asn Lys Val Val Thr Glu Ala Asp Val Tyr Ile Thr Phe Gly Ile
35 40 45
Arg Glu Asp Leu Lys Asp Asp Gln Lys Glu Met Met Gln Thr Ala Met
50 55 60
Gln Asn Thr Met Leu Ile Asn Gly Ile Ala Gln Val Thr Phe Asp Ser
65 70 75 80
Glu Thr Ala Val Lys Glu Leu Ser Tyr Tyr Ser Leu Glu Asp Leu Asn
85 90 95
Asn Lys Tyr Leu Tyr Ile Ala Val Thr Val Ile Glu Ser Thr Gly Gly
100 105 110
Phe Ser Glu Glu Ala Glu Ile Pro Gly Ile Lys Tyr Val Leu Ser
115 120 125
<210> 87
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 87
Pro Tyr Lys Leu Asn Leu Val Ala Thr Pro Leu Phe Leu Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ile Pro Tyr Pro Ile Lys Val Gln Val Lys Asp Ser Leu Asp Gln Leu
20 25 30
Val Gly Gly Val Pro Val Thr Leu Asn Ala Gln Thr Ile Asp Val Asn
35 40 45
Gln Glu Thr Ser Asp Leu Asp Pro Ser Lys Ser Val Thr Arg Val Asp
50 55 60
Asp Gly Val Ala Ser Phe Val Leu Asn Leu Pro Ser Gly Val Thr Val
65 70 75 80
Leu Glu Phe Asn Val Lys Thr Asp Ala Pro Asp Leu Pro Glu Glu Asn
85 90 95
Gln Ala Arg Glu Gly Tyr Arg Ala Ile Ala Tyr Ser
100 105
<210> 88
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 88
Ser Leu Ser Gln Ser Tyr Leu Tyr Ile Asp Trp Thr Asp Asn His Lys
1 5 10 15
Ala Leu Leu Val Gly Glu His Leu Asn Ile Ile Val Thr Pro Lys Ser
20 25 30
Pro Tyr Ile Asp Lys Ile Thr His Tyr Asn Tyr Leu Ile Leu Ser Lys
35 40 45
Gly Lys Ile Ile His Phe Gly Thr Arg Glu Lys Phe Ser Asp Ala Ser
50 55 60
Tyr Gln Ser Ile Asn Ile Pro Val Thr Gln Asn Met Val Pro Ser Ser
65 70 75 80
Arg Leu Leu Val Tyr Tyr Ile Val Thr Gly Glu Gln Thr Ala Glu Leu
85 90 95
Val Ser Asp Ser Val Trp Leu Asn Ile Glu Glu Lys
100 105
<210> 89
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 89
Cys Gly Asn Gln Leu Gln Val His Leu Ser Pro Asp Ala Asp Ala Tyr
1 5 10 15
Ser Pro Gly Gln Thr Val Ser Leu Asn Met Ala Thr Gly Met Asp Ser
20 25 30
Trp Val Ala Leu Ala Ala Val Asp Ser Ala Val Tyr Gly Val Gln Arg
35 40 45
Gly Ala Lys Lys Pro Leu Glu Arg Val Phe Gln Phe Leu Glu Lys Ser
50 55 60
Asp Leu Gly Cys Gly Ala Gly Gly Gly Leu Asn Asn Ala Asn Val Phe
65 70 75 80
His Leu Ala Gly Leu Thr Phe Leu Thr Asn Ala Asn Ala Asp Asp Ser
85 90 95
Gln Glu Asn Asp Glu Pro Cys Lys Glu Ile Leu
100 105
<210> 90
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 90
tccccaggtt ttccccagga agat 24
<210> 91
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 91
aatggatttc tcttcattca tac 23
<210> 92
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 92
gtcataggtt attggcattc tt 22
<210> 93
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 93
ttgccacatt tttctgtctc aatc 24
<210> 94
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 94
gacatattct ttaacttcaa aatatg 26
<210> 95
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 95
ccctacaaac tgaatttggt tg 22
<210> 96
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 96
agagaggaca tatttgatgc cag 23
<210> 97
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 97
tctctcagcc aaagttacct t 21
<210> 98
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 98
tgagtatgct attgctcggt aac 23
<210> 99
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 99
tgtggcaacc agctccaggt tc 22
<210> 100
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 100
tttttcttca atatttaacc ag 22
<210> 101
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 101
aggccaagaa gaacgctgca aaag 24
<210> 102
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 102
ttttggcaaa gaattcgcca ccatgggcct tttgggaata c 41
<210> 103
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCR引物
<400> 103
cctgaggagt gaattcttaa tggtgatggt gatggtggag aatttcttta caaggttc 58
<210> 104
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG4恒定重链区的氨基酸序列
<400> 104
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325

Claims (39)

1.一种特异性结合至人C5的抗体。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含选自由以下各项组成的组中的CDR中的至少一种：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:3；VH-CDR2：SEQ ID NO:4；VH-CDR3：SEQ ID NO:5；VL-CDR1：SEQ ID NO:8；VL-CDR2：SEQ ID NO:9；和VL-CDR3：SEQ ID NO:10，或其变体。
5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链，或其变体。
6.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链，或其变体。
7.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链，或其变体。
8.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含至少一种CDR，其选自：VH-CDR1：SEQID NO:13；VH-CDR2：SEQ ID NO:14；VH-CDR3：SEQ ID NO:15；VL-CDR1：SEQ ID NO:18；VL-CDR2：SEQ ID NO:19；和VL-CDR3：SEQ ID NO:20，或其变体。
9.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:13；VH-CDR2：SEQ ID NO:14；VH-CDR3：SEQ ID NO:15；VL-CDR1：SEQ ID NO:18；VL-CDR2：SEQ IDNO:19；和VL-CDR3：SEQ ID NO:20，或其变体。
10.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链，或其变体。
11.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的轻链，或其变体。
12.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的轻链，或其变体。
13.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含至少一种CDR，其选自：VH-CDR1：SEQID NO:23；VH-CDR2：SEQ ID NO:24；VH-CDR3：SEQ ID NO:25；VL-CDR1：SEQ ID NO:28；和VL-CDR2：SEQ ID NO:29，或其变体。
14.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:23；VH-CDR2：SEQ ID NO:24；VH-CDR3：SEQ ID NO:25；VL-CDR1：SEQ ID NO:28；和VL-CDR2：SEQ IDNO:29，或其变体。
15.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链，或其变体。
16.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链，或其变体。
17.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链，或其变体。
18.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含至少一种CDR，其选自：VH-CDR1：SEQID NO:32；VH-CDR2：SEQ ID NO:33；VH-CDR3：SEQ ID NO:34；VL-CDR1：SEQ ID NO:37；VL-CDR2：SEQ ID NO:38，VL-CDR3：SEQ ID NO:39，或其变体。
19.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:32；VH-CDR2：SEQ ID NO:33；VH-CDR3：SEQ ID NO:34；VL-CDR1：SEQ ID NO:37；VL-CDR2：SEQ IDNO:38，VL-CDR3：SEQ ID NO:39，或其变体。
20.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链，或其变体。
21.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链，或其变体。
22.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链，或其变体。
23.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含至少一种CDR，其选自：VH-CDR1：SEQID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:47；VL-CDR2：SEQ ID NO:48，VL-CDR3：SEQ ID NO:49，或其变体。
24.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:42；VH-CDR2：SEQ ID NO:43；VH-CDR3：SEQ ID NO:44；VL-CDR1：SEQ ID NO:47；VL-CDR2：SEQ IDNO:48，VL-CDR3：SEQ ID NO:49，或其变体。
25.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链，或其变体。
26.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链，或其变体。
27.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链，或其变体。
28.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含至少一种CDR，其选自：VH-CDR1：SEQID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:57；VL-CDR2：SEQ ID NO:58，VL-CDR3：SEQ ID NO:59，或其变体。
29.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含CDR：VH-CDR1：SEQ ID NO:52；VH-CDR2：SEQ ID NO:53；VH-CDR3：SEQ ID NO:54；VL-CDR1：SEQ ID NO:57；VL-CDR2：SEQ IDNO:58，VL-CDR3：SEQ ID NO:59，或其变体。
30.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链，或其变体。
31.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链，或其变体。
32.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链，或其变体。
33.一种治疗个体中补体途径介导的疾病或病症的方法，包括向所述个体施用根据权利要求1-32中任一项所述的抗C5抗体的步骤。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述疾病或病症至少选自由以下各项组成的组：黄斑变性(MD)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、缺血性再灌注损伤、关节炎、类风湿性关节炎、狼疮、溃疡性结肠炎、中风、术后全身性炎症综合征、哮喘、变应性哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎(NMO)、多发性硬化、移植功能延迟、抗体介导的排斥反应、非典型性溶血性尿毒(aHUS)综合征、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、视网膜中央动脉阻塞(CRAO)、大疱性表皮松解、败血病、器官移植、炎症(包括但不限于与心肺分流术和肾透析有关的炎症)、C3肾小球病、膜性肾病、IgA肾病、血管球性肾炎(包括但不限于抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)介导的血管球性肾炎、狼疮肾炎和它们的组合)、ANCA介导的血管炎、志贺毒素引起的HUS和抗磷脂抗体引起的妊娠丢失，或它们的任何组合。
35.一种降低个体的补体系统活性的方法，其中所述方法包括经由选自由肠内施用、肠胃外施用和它们的组合组成的组的施用途径向所述个体施用抗体，并且其中所述抗体是根据权利要求1-32中任一项所述的抗体。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述抗体是选自由Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、scFv和它们的组合组成的组的抗体片段。
37.一种包含根据权利要求1-32中至少一项所述的抗体的细胞。
38.根据权利要求37所述的细胞，其中所述细胞产生根据权利要求1-32中至少一项所述的抗体。
39.根据权利要求37所述的细胞，其中所述细胞是杂交瘤。
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