CN110583359A - 块菌原位抚育菌剂及其制备和使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于野生块菌原位保育促繁技术领域，具体涉及一种块菌原位抚育菌剂及其制备和使用方法。针对现有菌剂原位抚育效果差等问题，本发明提供一种块菌原位抚育菌剂，由营养供释包A和孢子粉剂B组成；其中，营养供释包A是由小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土组成；孢子粉剂B是由块菌子囊孢子粉和吸水树脂组成。将上述原料按比例称好，混匀即得块菌原位抚育菌剂。本发明的块菌原位抚育菌剂，可提高自然块菌菌塘菌根形成率53.90％‑66.19％，块菌属在菌塘中的相对丰度能提高54.57％‑131.40％，提高宿主植物抗逆性，实现块菌菌塘微生态快速修复，恢复菌塘产菌能力。
Description
技术领域
本发明属于野生块菌原位保育促繁技术领域，具体涉及一种块菌原位抚育菌剂及其制备和使用方法。
背景技术
块菌(Truffle)又叫松露、猪拱菌、无娘果等，属地下生大型真菌，被欧洲国家称为“黑色金刚石”、“上帝的食物”等。相关文献记载，欧洲国家从古罗马时代就有食用块菌的记载，黑孢块菌在19世纪就开始实现果园栽培，那时亚洲地区的块菌还没有得到开发，直到20世纪80年代，块菌属在中国才被发现。在过去的几十年，欧洲国家野生块菌大幅度减产，块菌属真菌价值在中国逐渐被认识，在利益驱使下，暴力性、毁灭性采挖在中国主产区的块菌成为常态，使得这一天然资源产量从90年代的200多吨下降到了2018年的不足100吨。在中国，关于块菌人工栽培成功的报道极少，产业尚不能实现商业化栽培。开展野生块菌的抚育，实现菌塘产量恢复成为当下产业聚焦的重点，是实现产业长足发展，种质资源保护所采取的有效措施。
CN201410013496.6公开了一种块菌的林间微环境改造促繁方法，包括以下步骤：选择采集块菌后经翻挖过的块菌出产点，以该出产点的宿主植物为中心，在直径为1-1.5m的范围内，先铲除表面的杂草，然后将翻挖出的土轻轻捣碎后作为回填土回填到该范围内；将所述回填土按照体积比为，回填土：蛭石：河沙＝1:1:1的比例加入蛭石和河沙混合，再加入占总重量3％的石灰，然后加入50g块菌菌种，260g保水剂，0.8g生根粉，混合均匀后再回填。上述方法大面积翻动菌塘及周围土壤，一方面由于人为因素会破坏菌塘根系，特别是须根系，造成菌塘菌根难以恢复，另一方面还会误将菌塘外及菌塘表面的其他竞争性杂菌(如红菇属、口蘑属、牛肝菌属等)引入菌塘中下部，造成菌塘菌群失衡，引起菌塘污染，致使块菌属在菌塘土壤中的相对丰富度下降，从而引起菌塘功能退化，不利于块菌的保育促繁。
CN201710413126.5公开了一种块菌接种菌丸及其制备和使用方法，所述块菌接种菌丸组成包括：块菌粉末30～35份，石灰石粉末8～12份，蛭石粉20～25份，泥炭粉10～20份，EM酵母菌1～2份，白糖4～6份，枯草芽孢杆菌1～2份。上述块菌菌丸只能将菌根感染率提升至20％左右，提升幅度并不显著。
发明内容
本发明的目的在于提供一种原位抚育效果显著的块菌菌剂及其制备和使用方法。
本发明首先提供了一种块菌原位抚育菌剂，由营养供释包A和孢子粉剂B组成；其中，营养供释包A是由小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土组成；孢子粉剂B是由块菌子囊孢子粉和吸水树脂组成。
其中，上述块菌原位抚育菌剂，其特征在于：所述块菌原位抚育菌剂中块菌子囊孢子粉的干重质量百分含量为3％～10％；优选的，所述块菌原位抚育菌剂中块菌子囊孢子粉的干重质量百分含量为7.0％～7.6％。
其中，上述块菌原位抚育菌剂，所述营养供释包A，原料按干重计为：小麦60-70份，谷壳7-12份，棉籽壳3-7份，蛭石4-8份，腐叶土15-25份；所述孢子粉剂B，原料按干重计为：块菌子囊孢子粉7-10份，吸水树脂1.5-2.5份。
其中，上述块菌原位抚育菌剂，所述营养供释包A由以下方法制备：按干重配比称取小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土，混匀后，加水至含水量35-45wt％，于常温下闷堆5-8h后进行分装，分装量以干重计为1.0-1.5kg/袋，灭菌即可；所述孢子粉剂B由以下方法制备：将干燥的块菌子囊果粉碎成粒径＜0.2mm的子囊孢子粉；将吸水树脂粉碎成粒径＜0.2mm的粉末，按干重配比称取块菌子囊孢子粉和吸水树脂，混匀后进行分装，分装量以干重计为0.1-0.2kg/袋。
其中，上述块菌原位抚育菌剂，所述块菌为印度块菌Tuber indicum、中华夏块菌Tuber sinoaestivum、攀枝花白块菌Tuberpanzhihuanense、会东块菌Tuber huidongense、凹陷块菌Tuber excavatum、假凹陷块菌Tuberpseudoexacavatum、太原块菌Tubertaiyuanense、中甸块菌Tuber zhongdianense或中华单孢块菌Tubersinomonosporum；所述吸水树脂为聚丙烯酸类吸水树脂、壳聚糖类吸水树脂或纤维素类吸水树脂。
本发明还提供了上述块菌原位抚育菌剂的制备方法，包括以下步骤：
D1、营养供释包A的制备按干重配比称取小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土，混匀后，加水至含水量35-45wt％，于常温下闷堆5-8h后进行分装，分装量以干重计为1.0-1.5kg/袋，灭菌；
D2、孢子粉剂B的制备将干燥的块菌子囊果粉碎成粒径＜0.2mm的子囊孢子粉；将吸水树脂粉碎成粒径＜0.2mm的粉末，按干重配比称取块菌子囊孢子粉和吸水树脂，混匀后进行分装，分装量以干重计为0.1-0.2kg/袋；
D3、块菌原位抚育菌剂的制备取D1营养供释包A1袋和D2孢子粉剂B1袋，混匀即得。
其中，上述块菌原位抚育菌剂的制备方法，D1中，所述小麦在使用前需要在浓度为2％-2.5％的石灰水中浸泡10-15h，捞起晾干水分待用；所述谷壳在使用前需要在浓度为2％-2.5％的石灰水中浸泡8-12h，捞起晾干水分待用。
其中，上述块菌原位抚育菌剂的制备方法，D1中，所述灭菌的方法为：在100±3℃于常压下灭菌16-18h，或者，在0.1～0.2MPa于121±3℃灭菌2-3h。
本发明还提供了上述块菌原位抚育菌剂的使用方法，在块菌菌塘区域内每间隔50-100cm打一孔洞，在孔洞内施加块菌原位抚育菌剂，施加量以孢子粉剂B的干重计为25～40g/孔洞，然后将菌塘土回填。
其中，上述块菌原位抚育菌剂的使用方法，所述孔洞的直径为5～7cm，高度为18～25cm；所述菌塘的宿主植物为美国山核桃Carya illinoinensis、华山松Pinus armandii、云南松Pinus yunnanensis、云南油杉Keteleeria evelyniana、青冈Cyclobalanopsisglauca、栓皮栎Quercus variabilis、榛Corylus heterophylla、槲栎Quercus aliena、白栎Quercusfabri或板栗Castanea mollissima。
本发明的有益效果为：
本发明提供了一种块菌原位抚育菌剂，可提高菌塘块菌菌根形成率53.90％-66.19％，块菌属在菌塘中的相对丰度能提高54.57％-131.40％，提高宿主植物抗逆性，实现块菌菌塘微生态快速修复，恢复菌塘产菌能力。
附图说明
图1为实施例1抚育后6个月的菌根形态图，其中，图1a为簇生型菌根形态，图1b为主根系二叉状分枝菌根，图1c为印度块菌成熟子囊果，图1c下方刻度尺中一个小刻度表示1mm；
图2为实施例2抚育后6个月的菌根形态图，其中，图2d为簇生型菌根形态，图2e为主根系珊瑚状分枝菌根，图2f为假凹陷块菌子囊果，图2f下方刻度尺中一个小刻度表示1mm；
图3为对比例1抚育后6个月的菌根形态图，其中，图3g为S1菌根形态图，图3h为S2菌根形态图。
具体实施方式
具体的，一种块菌原位抚育菌剂，由营养供释包A和孢子粉剂B组成；其中，营养供释包A是由小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土组成；孢子粉剂B是由块菌子囊孢子粉和吸水树脂组成。
本发明的发明人通过大量的人工培育无菌苗的接种实验，以宿主侵染率、菌根长势、宿主植物生物量、根系POD、SOD酶活等为指标进行综合分析，优选菌根侵染率高，合成率高，宿主抗性强的配方，最终确定块菌原位抚育菌剂中块菌子囊孢子粉的质量百分含量为3％～10％时，菌剂的抚育效果显著，并且成本低。优选的，所述块菌原位抚育菌剂中，营养供释包A，原料按干重份数计为：小麦60-70份，谷壳7-12份，棉籽壳3-7份，蛭石4-6份，腐叶土15-25份；孢子粉剂B，原料按干重份数计为：块菌子囊孢子粉7-10份，吸水树脂1.5-2.5份。
本发明营养供释包A中的小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土除了可诱导块菌宿主根系生长，调节宿主营养平衡外，这些原料中的维生素、碳氮、氮源、无机盐、生长素和腐殖酸等物质还可起到促进块菌孢子萌发，为块菌菌丝体提供营养的效果，同时，在菌塘功能修复中能促进菌塘植被丰富(如，草、苔藓等)，另外起填充作用，使得整个块菌孢子悬浮在整个接种体系里面，在根系生长中能很好的进行接种。同时，发明人在实验的过程中发现营养供释包A中的小麦和孢子粉剂B中块菌子囊孢子粉与吸水树脂的配比是影响抚育效果的两大关键因子，只有在本发明的组成以及配比下，块菌原位抚育菌剂才具有优良的综合效果。
本发明中，所述营养供释包A由以下方法制备：按干重配比称取小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土，混匀后，加水至含水量35-45wt％，于常温下闷堆5-8h后进行分装，分装量以干重计为1.0-1.5kg/袋，灭菌即可；所述孢子粉剂B由以下方法制备：将干燥的块菌子囊果粉碎成粒径＜0.2mm的子囊孢子粉；将吸水树脂粉碎成粒径＜0.2mm的粉末，按干重配比称取块菌子囊孢子粉和吸水树脂，混匀后进行分装，分装量以干重计为0.1-0.2kg/袋。
营养供释包A在制备过程中闷堆主要是为了让各种组份材料充分吸水，在灭菌环节灭菌彻底，避免材料含杂菌影响整体体系。
本发明的菌剂为固体菌剂，方便施加、携带，不局限于具体的形状，颗粒状、块状、条状或粉末状均可。
本发明还提供了上述块菌原位抚育菌剂的制备方法，包括以下步骤：
D1、营养供释包A的制备按干重配比称取小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土，混匀后，加水至含水量35-45wt％，于常温下闷堆5-8h后进行分装，分装量以干重计为1.0-1.5kg/袋，灭菌；
D2、孢子粉剂B的制备将干燥的块菌子囊果粉碎成粒径＜0.2mm的子囊孢子粉；将吸水树脂粉碎成粒径＜0.2mm的粉末，按干重配比称取块菌子囊孢子粉和吸水树脂，混匀后进行分装，分装量以干重计为0.1-0.2kg/袋；
D3、块菌原位抚育菌剂的制备取D1营养供释包A1袋和D2孢子粉剂B1袋，混匀即得。
本发明的方法中，小麦在使用前需要在浓度为2％-2.5％的石灰水中浸泡10-15h，捞起晾干水分待用；所述谷壳在使用前需要在浓度为2％-2.5％的石灰水中浸泡8-12h，捞起晾干水分待用。这是因为日常生活中小麦和谷壳多为干品销售运输，采用石灰石浸泡可利用石灰石创造的碱性条件和温度等软化组织，灭菌后使得该类材料更易被微生物利用。
本发明的方法中，所述干燥的块菌子囊果是通过将新鲜成熟的块菌子囊果置于30℃环境下自然晾干或者采用低温冷冻干燥设备进行冷冻干燥所得。
当块菌孢子含量较少时，接种效果不显著，容易在块菌侵染宿主过程中，由于块菌属的群体规模较小，致使侵染失败的概率增加；块菌孢子含量越多，接种效果在一定范围呈上升趋势，但由于块菌价格昂贵，在设计抚育菌剂时充分考虑块菌孢子含量在抚育体系的整体百分比，综合成本与接种效果考虑，优选施加方式按照：在块菌菌塘区域内每间隔50-100cm打一孔洞，在孔洞内施加块菌原位抚育菌剂，施加量以孢子粉剂B干重计为25～40g/孔洞时能达到显著效果，且成本较低。
其中，所述孔洞的数量根据菌塘大小而定，一般为4～16个/株。
发明人通过大量野外试验验证，当孔洞的直径为5～7cm，高度为18～25cm时，能以最佳配比将抚育菌剂施入，并将孔洞填补至一定高度，在回填泥土后恰好将洞填补整齐，且在此深度范围开展抚育有利于块菌的采挖。宿主植物与块菌形成的菌根以表层须根系为主，实践证明在0～25cm的深度范围内形成的块菌数量最多。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用原料未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
本发明实施例中，印度块菌、假凹陷块菌等购自攀枝花块菌主产区，直径5cm以上，无虫洞和破损，子囊果充分成熟；棉籽壳水分含量≤14.0％，容重≥720g/L，不完善粒含量≤4.0％，杂质含量≤1.0％；蛭石粒径≤5mm；吸水树脂的吸水率为1g干粉吸水量在100g以上。
实施例1本发明块菌原位抚育菌剂及其制备和使用方法应用实例。
1、营养供释包A
1.1、由以下干重配比的原料组成：小麦60kg、谷壳7kg、棉籽壳3kg、蛭石4kg和腐叶土15kg。
1.2、制备方法：
(1)小麦预处理：用2.5％的石灰水浸泡小麦12h(25℃)，捞起晾干水分待用，放置时间低于5h。
(2)谷壳预处理：用2.5％的石灰石浸泡谷壳12h(25℃)，捞起晾干水分待用，放置时间低于5h。
(3)混料和灭菌：按照1-1.1中的干重配比均匀混料，加水至含水量40％，闷堆5-8h(25℃)后进行装袋，装袋完成后用扎口机进行料袋封口。
所述装袋优选规格为15cm×30cm×0.003cm的聚乙烯塑料袋，装料量以干重计为1.0kg/袋。
料袋采用常压灭菌：100℃维持16h。
(4)冷却待用：待(3)的料包自然冷却后，放置在4℃的环境中保存待用。
营养供释包A制备完成后需在2个月内使用，储存温度4±1℃，不可长期暴露在15℃以上高温环境。
2、孢子粉剂B
2.1、由以下干重配比的原料组成：块菌子囊孢子粉7kg，纤维素吸水树脂1.5kg。所述块菌子囊孢子粉为自然脱水或低温冷冻干燥品，含水量10.00％-15.00％。所述块菌为印度块菌Tuber indicum。所述吸水树脂为干品，含水量10.00％-15.00％。
2.2、制备方法：
(1)块菌子囊孢子粉的获取：新鲜成熟的块菌子囊果置于30℃环境下自然晾干或者采用低温冷冻干燥设备进行冷冻干燥，再将块菌子囊果用超微粉碎机进行粉碎，粒径小于0.2mm。
(2)吸水树脂的粉碎：将吸水树脂放置在超微粉碎机中粉碎成粒径小于0.2mm的粉末。
(3)组分分装与保存：按照2-2.1中的干重配比称取块菌子囊孢子粉和吸水树脂，用均质机进行混匀，然后分装，分装规格以干重计为0.1kg/袋，分装完毕后放置在4℃的环境中保存待用。
孢子粉剂B制备完成后需在6个月内使用，储存温度4±1℃，不可长期暴露在15℃以上高温环境。
3、抚育菌剂的使用方法
本发明的营养供释包A需要搭配孢子粉剂B联合使用，即配即用，本实施例使用菌剂中块菌孢子的干重质量百分数为7.18％。使用前将1中的营养供释包A1袋和2中的孢子粉剂B1袋充分混匀，待用。
抚育菌剂的施用需要再结合以下几个步骤进行：
(1)林地确定：在四川凉山彝族自治州会东县选择海拔2600±18m的印度块菌Tuber indicum自然产林，宿主优势植物为华山松Pinus armandii和白栎Quercusfabri，林地为阴坡面，有一定坡度，树龄8-60年之间，土壤pH为6.8，曾经三年内出产过块菌，并找出了块菌的菌塘位置。
(2)菌塘块菌类型确定：按蛇形采样法，随机选择6-9个菌塘，用无菌操作流程采取宿主植物根系菌根，迅速运回实验室，进行菌根真菌DNA的提取和ITS测序分析，通过序列比对确定菌塘块菌类型为印度块菌Tuber indicum。
(3)林地梳理：调整上层乔灌郁闭度在50％～70％，地表灌木密度和其它植被密度调整至有少量散射光照射地面即可。
(4)抚育菌剂施用：在块菌菌塘区域内每间隔100cm打一个孔洞(圆柱形，直径5cm，高20cm)，在孔洞内施加块菌原位抚育菌剂，施加量以孢子粉剂B的干重计为30g/孔洞。
(5)菌塘土回填。抚育菌剂施用后，将打洞出来的泥土去除表土后重新回填平整。
效果检测：2016年3月课题组在四川凉山彝族自治州会东县按照上述实施例1的方法进行块菌抚育菌剂的应用，将同一菌塘一分为二，一半施加本发明菌剂，另一半施加用等量河沙代替本发明B剂中块菌孢子的混合制剂(对照)，历经3年，每年的3月都在同一孔洞进行抚育菌剂重复添加(每年的添加量都相同)，观测结果表明，施用本发明的印度块菌原位抚育菌剂后，宿主植物菌根形成良好。本实施例菌塘区域相比于对照区域，与2016年3月相比，2017年3月时试验区菌根侵染率提高了56.39％，宿主植物菌塘区域单位面积块菌鲜产平均提高3.05％，至2019年3月时菌根侵染率提高了60.59％，宿主植物菌塘区域单位面积块菌鲜产平均提高3.49％，菌塘植被得到丰度，宿主根系和菌根的形成得到提高，宿主植物长势更好，菌塘产菌功能恢复良好。菌根形态图见图1。
实施例2本发明块菌原位抚育菌剂及其制备和使用方法应用实例。
1、营养供释包A
由以下干重配比的原料组成：小麦70kg、谷壳12kg、棉籽壳7kg、蛭石6kg和腐叶土25kg，其他同实施例1。
2、孢子粉剂B
所述块菌子囊孢子粉为假凹陷块菌Tuberpseudoexacavatum，配比组成为块菌子囊孢子粉10kg，纤维素吸水树脂2.5kg，其他同实施例1。
3、抚育菌剂的使用方法
本发明的营养供释包A需要搭配孢子粉剂B联合使用，即配即用，本实施例菌剂中块菌孢子的质量百分数为7.55％。使用前将1中的营养供释包A1袋和2中的孢子粉剂B1袋充分混匀，待用。
抚育菌剂的施用需要再结合以下几个步骤进行：
(1)林地确定：在四川凉山彝族自治州会东县选择海拔2750±20m的假凹陷块菌Tuber pseudoexacavatum自然产林，宿主优势植物为华山松Pinus armandii和白栎Quercusfabri，林地为阴坡面，有一定坡度，树龄8-60年之间，土壤pH为6.8，曾经三年内出产过块菌，并找出了块菌的菌塘位置。
(2)菌塘块菌类型确定：按蛇形采样法，随机选择6-9个菌塘，用无菌操作流程采取宿主植物根系菌根，迅速运回实验室，进行菌根真菌DNA的提取和ITS测序分析，通过序列比对确定菌塘块菌类型为假凹陷块菌Tuber pseudoexacavatum。
(3)林地梳理：调整上层乔灌郁闭度在50％～70％，地表灌木密度和其它植被密度调整至有少量散射光照射地面即可。
(4)抚育菌剂施用：在块菌菌塘区域内每间隔100cm打一个孔洞(圆柱形，直径5cm，高20cm)，在孔洞内施加块菌原位抚育菌剂，施加量以孢子粉剂B的干重计为30g/孔洞。
(5)菌塘土回填。抚育菌剂施用后，将打洞出来的泥土去除表土后重新回填平整。
效果检测：2016年3月课题组在四川凉山彝族自治州会东县按照上述实施例2的方法进行块菌抚育菌剂的应用，将同一菌塘一分为二，一半施加本发明菌剂，另一半施加用等量河沙代替本发明B剂中块菌孢子的混合制剂(对照)，历经3年，每年的3月都在同一孔洞进行抚育菌剂重复添加(每年的添加量都相同)，观测结果表明，施用假凹陷块菌原位抚育菌剂后，宿主植物菌根形成良好。本实施例菌塘区域相比于对照区域，与2016年3月相比，2017年3月时试验区菌根侵染率提高了53.39％，宿主植物菌塘区域单位面积块菌鲜产平均提高2.89％，至2019年3月时菌根侵染率提高了57.71％，宿主植物菌塘区域单位面积块菌鲜产平均提高3.22％，块菌产量得到回升，同时菌塘及其周边生物多样性得到丰富。菌根形态图见图2。
对比例1
在四川凉山州会东县海拔为2750±20m，经鉴定产出块菌为印度块菌Tuberindicum，宿主植物为华山松Pinus armandii的纯林中进行试验。实施CN201710413126.5中所述的技术方法，严格按照该专利方法步骤进行，制备完成该专利所述的菌丸(印度块菌)后，设计处理S1，按照该专利方法进行钻孔并施入菌丸；设计处理S2，按本发明专利方法进行钻孔并施入本发明专利的块菌原位抚育菌剂；设计处理S3，钻同等规格的孔，并施入用等量灭菌的河沙代替B剂中块菌孢子的混合制剂。处理S1、S2和S3选择相同地块邻近的3株宿主植物开展试验(宿主菌塘面积一致)，设计3个生物学重复，单个处理试验区域菌塘面积为15cm2，并于2017年12月开始试验，每个菌塘菌剂(丸)中的施用块菌占比份量一致(5个孔，30g块菌孢子/孔)，并对试验区进行了块菌采挖，且其它条件相对一致。菌根形态图见图3。随后每隔3个月对试验区采取菌根样品，并按照科学方法采集菌根根际土壤进行高通量测序检测等，结果如下：
与S3处理相比，使用本发明块菌原位抚育菌剂后菌塘菌根侵染率提高53.90％-66.19％(S2)，块菌属相对丰富度提高了54.57％-131.40％(S2)，相对增产了49.33％(S2)。采用CN201710413126.5所述的菌丸试验时菌根侵染率提高了15.45％-19.93％(S1)，块菌属相对丰富度提高了14.16％-86.83％(S1)，相对增产了20.25％(S1)，这与该专利所述的“能将感染率提高20％左右。”相符。S3处理组菌根侵染率为39.16％-59.29％，土壤中块菌属相对丰度为3.39％-19.36％，产量变化幅度为3.89％。可见采用本发明专利的方法开展块菌原位抚育能取得更显著的效果。
Claims (10)
1.块菌原位抚育菌剂，其特征在于：由营养供释包A和孢子粉剂B组成；其中，营养供释包A是由小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土组成；孢子粉剂B是由块菌子囊孢子粉和吸水树脂组成。
2.根据权利要求1所述块菌原位抚育菌剂，其特征在于：所述块菌原位抚育菌剂中块菌子囊孢子粉的干重质量百分含量为3％～10％；优选的，所述块菌原位抚育菌剂中块菌子囊孢子粉的干重质量百分含量为7.0％～7.6％。
3.根据权利要求1或2所述块菌原位抚育菌剂，其特征在于，所述营养供释包A，原料按干重计为：小麦60-70份，谷壳7-12份，棉籽壳3-7份，蛭石4-8份，腐叶土15-25份；所述孢子粉剂B，原料按干重计为：块菌子囊孢子粉7-10份，吸水树脂1.5-2.5份。
4.根据权利要求1～3任一项所述块菌原位抚育菌剂，其特征在于，所述营养供释包A由以下方法制备：按干重配比称取小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土，混匀后，加水至含水量35-45wt％，于常温下闷堆5-8h后进行分装，分装量以干重计为1.0-1.5kg/袋，灭菌即可；所述孢子粉剂B由以下方法制备：将干燥的块菌子囊果粉碎成粒径＜0.2mm的子囊孢子粉；将吸水树脂粉碎成粒径＜0.2mm的粉末，按干重配比称取块菌子囊孢子粉和吸水树脂，混匀后进行分装，分装量以干重计为0.1-0.2kg/袋。
5.根据权利要求1～4任一项所述块菌原位抚育菌剂，其特征在于：所述块菌为印度块菌Tuber indicum、中华夏块菌Tuber sinoaestivum、攀枝花白块菌Tuberpanzhihuanense、会东块菌Tuber huidongense、凹陷块菌Tuber excavatum、假凹陷块菌Tuber pseudoexacavatum、太原块菌Tuber taiyuanense、中甸块菌Tuber zhongdianense或中华单孢块菌Tuber sinomonosporum；所述吸水树脂为聚丙烯酸类吸水树脂、壳聚糖类吸水树脂或纤维素类吸水树脂。
6.权利要求1～5任一项所述块菌原位抚育菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
D1、营养供释包A的制备按干重配比称取小麦、谷壳、棉籽壳、蛭石和腐叶土，混匀后，加水至含水量35-45wt％，于常温下闷堆5-8h后进行分装，分装量以干重计为1.0-1.5kg/袋，灭菌；
D2、孢子粉剂B的制备将干燥的块菌子囊果粉碎成粒径＜0.2mm的子囊孢子粉；将吸水树脂粉碎成粒径＜0.2mm的粉末，按干重配比称取块菌子囊孢子粉和吸水树脂，混匀后进行分装，分装量以干重计为0.1-0.2kg/袋；
D3、块菌原位抚育菌剂的制备取D1营养供释包A1袋和D2孢子粉剂B1袋，混匀即得。
7.根据权利要求6所述块菌原位抚育菌剂的制备方法，其特征在于：D1中，所述小麦在使用前需要在浓度为2％-2.5％的石灰水中浸泡10-15h，捞起晾干水分待用；所述谷壳在使用前需要在浓度为2％-2.5％的石灰水中浸泡8-12h，捞起晾干水分待用。
8.根据权利要求6所述块菌原位抚育菌剂的制备方法，其特征在于：D1中，所述灭菌的方法为：在100±3℃于常压下灭菌16-18h，或者，在0.1～0.2MPa于121±3℃灭菌2-3h。
9.权利要求1～5任一项所述块菌原位抚育菌剂的使用方法，其特征在于：在块菌菌塘区域内每间隔50-100cm打一孔洞，在孔洞内施加块菌原位抚育菌剂，施加量以孢子粉剂B的干重计为25～40g/孔洞，然后将菌塘土回填。
10.根据权利要求9所述块菌原位抚育菌剂的使用方法，其特征在于：所述孔洞的直径为5～7cm，高度为18～25cm；所述菌塘的宿主植物为美国山核桃Carya illinoinensis、华山松Pinus armandii、云南松Pinus yunnanensis、云南油杉Keteleeria evelyniana、青冈Cyclobalanopsis glauca、栓皮栎Quercus variabilis、榛Corylus heterophylla、槲栎Quercus aliena、白栎Quercus fabri或板栗Castanea mollissima。
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Legal Events
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Address after: 610066 zone 2, Shizishan Road, waidong, Jinjiang District, Chengdu City, Sichuan Province Applicant after: Institute of agricultural resources and environment, Sichuan Academy of Agricultural Sciences Address before: 610066 Institute of soil and fertilizer, Sichuan Academy of Agricultural Sciences, zone 2, Shizishan Road, waidong, Jinjiang District, Chengdu City, Sichuan Province Applicant before: SOIL AND FERTILIZER Research Institute SAAS |
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| CB02 | Change of applicant information | ||
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Effective date of registration: 20220424 Address after: No.4 Shizishan Road, Jinjiang District, Chengdu, Sichuan 610066 Applicant after: Sichuan Edible Fungi Research Institute Address before: 610066 zone 2, Shizishan Road, waidong, Jinjiang District, Chengdu City, Sichuan Province Applicant before: Institute of agricultural resources and environment, Sichuan Academy of Agricultural Sciences |
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| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240902 Address after: 272000 cork oak industry science and technology innovation base in Jiazhuang Village, Liying Street, Rencheng District, Jining City, Shandong Province Patentee after: Shandong Quercus variabilis Industrial Technology Research Institute Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: No.4 Shizishan Road, Jinjiang District, Chengdu, Sichuan 610066 Patentee before: Sichuan Edible Fungi Research Institute Country or region before: China |
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| TR01 | Transfer of patent right |