CN110573026A - 动物饲料组合物及使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包含来自表达重组耐热的α‑淀粉酶的转基因植物或植物部分的植物材料的动物饲料组合物。本发明进一步提供了改善饲料利用和降低肝脓肿的方法。还提供了生产蒸汽压片的玉米产品的方法、以及如此生产的蒸汽压片的玉米产品。本发明提供了包含来自表达重组耐热的α‑淀粉酶的转基因植物或植物部分的植物材料的动物饲料组合物。本发明进一步提供了改善饲料利用和降低肝脓肿的方法。还提供了生产蒸汽压片的玉米产品的方法、以及如此生产的蒸汽压片的玉米产品。

Description

动物饲料组合物及使用方法

相关申请信息

本申请要求于2017年5月1日提交的美国临时专利申请序列号62/492609的权益，其披露内容通过引用以其全文并入本文。

关于序列表的电子提交的声明

提供ASCII文本格式的序列表来代替纸质副本，该序列表是根据37 CFR§1.821提交的，名称为“81324_ST25.txt”，大小为15,179字节，于2018年4月26日生成并经由EFS-WEB提交。这个序列表特此通过引用以其披露内容并入本说明书中。

技术领域

本发明涉及动物饲料组合物及制备和使用动物饲料组合物的方法。

背景技术

动物饲料可以分为两类：(1)精饲料或复合饲料，和(2)粗饲料。精饲料或复合饲料的能量值高，包括脂肪、谷物及其副产品(大麦、玉米、燕麦、黑麦、小麦)，高蛋白油粕或油饼(大豆、卡诺拉、棉籽、花生等)，以及能以颗粒或碎屑的形式生产的甜菜、甘蔗、动物和鱼的加工副产品。精饲料或复合饲料可以是全面的，因为它们可以提供所有日常需要的食物需求，或者它们可以提供日粮的一部分，补充可能作为食物日粮提供的任何其他物质。粗饲料包括牧草、干草、青贮饲料、根作物、禾秆和秸秆(玉米秆)。

对于食物生产来说，饲料构成养殖动物的最大成本。因此，本发明针对用于改善动物饲料利用效率从而降低生产成本的组合物和方法。

另外，在饲养场牛(feedlot cattle)中，化脓性细菌引起的肝脓肿是常见的。肝脓肿的患病率随着低草料/高精饲料饮食而增加。减少饲养场牛的肝脓肿使活重、胴体重、屠宰率和胴体修整得到改善。患有重度肝脓肿的牛可能需要另外的胴体修整，并且在某些情况下，还需要废弃整个内脏。脓肿破裂会导致胴体污染，从而造成胴体流动中断、时间浪费、成本增加和劳动力增加。

发明内容

本发明的一个方面提供了包含微生物α-淀粉酶的动物饲料组合物和使用该动物饲料组合物降低牛的肝脓肿的方法。在一些方面，微生物α-淀粉酶包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽或由与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有至少约80％同一性的核苷酸序列编码的多肽。在一些方面，动物饲料组合物包含表达微生物α-淀粉酶的蒸汽压片的玉米。还提供了通过蒸汽压片来自表达微生物α-淀粉酶的转基因玉米植物的玉米籽粒来生产蒸汽压片的玉米产品的方法，和由此产生的蒸汽压片的玉米产品。

具体实施方式

除非上下文另外指示，明确地预期的是本文所述的本发明的不同特征能以任何组合使用。

此外，本发明还考虑到在本发明的一些实施例中，本文陈述的任何特征或特征的组合可以被排除或省略。举例说明，如果本说明书陈述组合物包含组分A、B和C，明确地预期A、B或C的任何一种或其组合可单一地或以任何组合被省略和放弃。

除非另外定义，本文所使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。在本文的发明的说明中使用的术语是仅出于描述特定实施例的目的，且并不旨在限制本发明。

如在本发明的说明书和所附的权利要求中所使用的，单数形式“一个/一种(a/an)”和“该/所述(the)”旨在也包括复数形式，除非上下文清楚地另外指示。

如本文所使用的，“和/或”是指并且涵盖一个或多个相关的列出项的任何及全部可能组合，连同当以可替代性(“或”)解释时组合的缺少。

如本文所使用的，术语“约”当是指可测量的值如剂量、量或时间段等时意在涵盖±20％、±10％、±5％、±1％、±0.5％、或甚至±0.1％的指定量(例如，所增加的重量或所提供的饲料的量)的变化。

如本文所使用的，短语如“在X和Y之间”与“在约X和Y之间”应解释为包括X和Y。如本文所使用的，短语如“在X和Y之间”意指“在约X和约Y之间”。如本文所使用的，短语如“从约X至Y”意指“从约X至约Y”。

如本文所使用的，术语“包含(comprise、comprises和comprising)”指示所说明的特征、整数、步骤、操作、要素、和/或组分的存在，但并不排除一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、要素、组分、和/或其组的存在或添加。

如本文所使用的，过渡短语“基本上由……组成”意指权利要求的范围将被解释为包括该权利要求中所提到的指定材料或步骤以及不实质上影响要求保护的发明的一个或多个基本特征和新特征的那些材料或步骤。因此，当用于本发明的权利要求中时，术语“基本上由...组成”并不旨在被解释为等同于“包含(comprising)”。

本发明针对用于改善动物饲料利用效率从而降低生产成本的组合物和方法。诸位发明人已经取得了令人惊讶的发现，即饲喂了包含微生物α-淀粉酶的动物饲料组合物的动物与未饲喂所述饲料组合物的动物相比，可以具有平均日增重或生长速率的增加、饲料利用效率的增加、或达到所希望重量而需要的天数减少。

因此，在本发明的一个方面，提供了包含微生物α-淀粉酶的动物饲料组合物。在本发明的另外的方面，微生物α-淀粉酶包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少80％同一性的多肽或由与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施例中，α-淀粉酶是液体。因此，在本发明的一些实施例中，本发明的动物饲料组合物可以是可添加到提供给动物的饲料中的补充剂，其包含液体微生物α-淀粉酶。

在另一方面，本发明提供了包含植物材料的动物饲料组合物，其中该植物材料包含表达的重组α-淀粉酶。在一些特定实施例中，表达的重组α-淀粉酶由与SEQ ID NO:2、SEQID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有至少约80％同一性的核苷酸序列编码或包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽。因此，在另外的实施例中，本发明提供了包含来自转基因植物或植物部分的植物材料的动物饲料组合物，该转基因植物或植物部分包含由与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ IDNO:5的核苷酸序列具有至少约80％同一性的核苷酸序列编码或包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽的重组α-淀粉酶。

在特定实施例中，转基因植物或植物部分可以包含按重量计约1％至约100％的植物材料。因此，例如，转基因植物或植物部分可以包含按重量计约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的植物材料等，或其中的任何范围。因此，在一些实施例中，植物材料可以包含一种或多种不同类型的植物。因此，例如，植物材料可以来自表达重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物。在其他实施例中，植物材料包含来自其中表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物的材料和来自不表达所述重组或异源α-淀粉酶的植物(例如，商品植物)的材料，基本上由其组成，或由其组成。因此，在一些实施例中，当植物材料包含来自其中表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物的材料和来自不表达所述重组或异源α-淀粉酶的植物(例如，商品植物)的材料时，来自其中表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物的材料可以构成按重量计从约1％至约99％的植物材料，并且来自不表达所述重组或异源α-淀粉酶的植物的材料可以构成按重量计从约99％至约1％的植物材料。

在另外的实施例中，植物材料可以构成按重量计从约5％至约100％的动物饲料组合物。因此，例如，植物材料可以构成按重量计约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的动物饲料组合物等，和/或其中的任何范围。

本发明的动物饲料可以处于对本发明有用的任何形式。因此，在一些实施例中，动物饲料的形式可以是但不限于颗粒，谷物(包括混合的一种或多种类型的谷物(即混合谷物))，谷物和颗粒的混合物，青贮饲料，干轧、蒸汽压片的全籽粒，粗裂籽粒(例如，粗裂玉米)，高水分玉米和/或其任何组合。在一些实施例中，动物饲料可以包含其他组分，包括但不限于粗裂籽粒、湿酒糟、干酒糟、玉米青贮饲料、补充剂/液体补充剂、玉米谷蛋白饲料和/或碎干草。

如本文所使用的，术语“植物材料”包括任何植物部分，包括但不限于胚乳、胚(胚芽)、果皮(麸皮)、肉茎(尖端根冠)、花粉、胚珠、种子(谷物)、叶、花、枝、茎、果实、核、穗、穗轴、壳、茎秆、根、根尖、花药、植物细胞(包括在植物和/或植物的部分中完整的植物细胞)、植物原生质体、植物组织、植物细胞组织培养物、植物愈伤组织、植物团(plant clumps)等。另外，如本文所使用的，“植物细胞”是指植物的结构和生理单位，包括细胞壁并且也可以指原生质体。本发明的植物细胞可以处于分离的单细胞形式，或者可以是培养的细胞，或者可以是较高级的组织单位(例如像，植物组织或植物器官)的一部分。“原生质体”是分离的植物细胞，没有细胞壁或仅具有部分细胞壁。因此，在本发明的一些实施例中，包含由本发明的核苷酸序列编码的重组α-淀粉酶的转基因植物或植物部分包含如下细胞，该细胞包含由本发明的核苷酸序列编码的所述重组α-淀粉酶，其中该细胞是任何植物或植物部分的细胞，包括但不限于根细胞、叶细胞、组织培养细胞、种子细胞、花细胞、果实细胞、花粉细胞等。在代表性实施例中，植物材料可以是种子或谷物。

植物材料可以来自任何植物。在一些实施例中，植物材料来自其中可以表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物。此外，如本文所讨论的，在其他实施例中，植物材料可以是来自其中表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物和来自不表达所述重组或异源α-淀粉酶的植物(例如，商品植物)的植物材料的混合物。因此，在代表性实施例中，植物材料可以是正常“商品”植物材料(例如，商品玉米)和来自本发明的表达重组或异源α-淀粉酶的转基因植物的植物材料的混合物。

因此，在一些实施例中，植物材料可以来自玉米植物、高粱植物、小麦植物、大麦植物、黑麦植物、燕麦植物、水稻植物和/或粟植物。在代表性实施例中，植物材料可以来自玉米植物。在其他实施例中，植物材料可以是来自玉米植物的种子或谷物。在特定实施例中，植物材料可以是包含玉米事件3272(参见美国专利号8,093,453)的玉米植物。

在一些实施例中，本发明提供了包含来自转基因玉米植物或植物部分的植物材料的“全混合日粮”，该转基因玉米植物或植物部分用由与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有约80％同一性的核苷酸序列编码或包含与SEQID NO:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽的重组α-淀粉酶稳定地转化。如本文所使用的，“全混合日粮”可以意指单个动物的24小时饲料允许量，其包括例如来自转基因玉米植物或植物部分的植物材料(例如，玉米籽粒、粗裂玉米等)、补充剂和添加剂(例如，维生素和矿物质)和/或“粗饲料”(例如，牧草、干草、青贮饲料、根作物、禾秆和秸秆(玉米秆))。

在一些实施例中，来自转基因玉米植物或植物部分的植物材料构成按重量计从约1％至约100％的全混合日粮。因此，例如，转基因植物或植物部分可以包含按重量计约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的植物材料等，和/或其中的任何范围。

在其他实施例中，提供了包含本发明的全混合日粮的动物饲料组合物。在一些实施例中，全混合日粮可以构成按重量计约5％至约100％的动物饲料组合物。因此，例如，全混合日粮可以构成按重量计约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的动物饲料组合物等，和/或其中的任何范围。在代表性实施例中，全混合日粮构成约50％的动物饲料组合物。

在再另外的实施例中，本发明提供了包含来自转基因玉米植物或植物部分的植物材料的玉米日粮，该转基因玉米植物或植物部分用由与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有约80％同一性的核苷酸序列编码或包含与SEQID NO:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽的重组α-淀粉酶稳定地转化。如本文所使用的，“玉米日粮”意指单个动物的24小时玉米允许量。

在一些实施例中，来自转基因玉米植物或植物部分的植物材料构成按重量计从约1％至约100％的玉米日粮。因此，例如，转基因植物或植物部分可以包含按重量计约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的植物材料等，和/或其中的任何范围。

在其他实施例中，提供了包含本发明的玉米日粮的动物饲料组合物。在一些实施例中，玉米日粮可以构成按重量计约5％至约100％的动物饲料组合物。因此，例如，玉米日粮可以构成按重量计约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的动物饲料组合物等，和/或其中的任何范围。在代表性实施例中，玉米日粮构成约50％的动物饲料组合物。

在一些实施例中，全混合日粮可以包含湿玉米谷蛋白饲料，其可以为按重量计约10％至约40％的动物饲料组合物。在另外的实施例中，全混合日粮可以包含湿玉米谷蛋白饲料，其可以为按重量计约10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％的动物饲料组合物。

在其他实施例中，全混合日粮可以包含具有可溶物的改性酒糟，其可以为按重量计约5％至约25％的动物饲料组合物。在另外的实施例中，全混合日粮可以包含具有可溶物的改性酒糟，其可以为按重量计约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％的动物饲料组合物。

在其他实施例中，全混合日粮可以包含具有可溶物的改性酒糟，其可以为按重量计约5％至约25％的动物饲料组合物。在另外的实施例中，全混合日粮可以包含干酒糟，其可以为按重量计约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％的动物饲料组合物。

在另外的实施例中，全混合日粮可以包含具有可溶物的湿酒糟，其可以为按重量计约5％至约25％的动物饲料组合物。在另外的实施例中，全混合日粮可以包含具有可溶物的湿酒糟，其可以为按重量计约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％的动物饲料组合物。

具有同源性的不同核酸或蛋白质本文被称作“同源物”。术语同源物包括来自相同物种和其他物种的同源序列以及来自相同物种和其他物种的直向同源序列。“同源性”是指就位置同一性(即，序列相似性或同一性)百分比而言，两个或更多个核酸和/或氨基酸序列之间的相似性水平。同源性也是指不同核酸或蛋白质之间相似功能特性的概念。因此，本发明的组合物和方法还包含本发明的核苷酸序列和多肽序列(例如，SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5)的同源物。如本文所使用的，“直向同源”是指在物种形成过程中由共同的祖先基因产生的不同物种中的同源核苷酸序列和/或氨基酸序列。本发明的同源物与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:5具有显著序列同一性(例如，70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和/或100％)。

SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5的同源物可以与本发明的任何饲料组合物或方法一起使用，单独或彼此组合，和/或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5一起。

如本文所使用的“序列同一性”是指两个最佳比对的多核苷酸或肽序列在组分(例如，核苷酸或氨基酸)的整个比对窗口内不变的程度。可以通过包括但不限于描述于以下的那些已知方法容易地计算“同一性”：Computational Molecular Biology[计算分子生物学](Lesk,A.M.编辑)Oxford University Press[牛津大学出版社],纽约(1988)；Biocomputing:Informatics and Genome Projects[生物运算：信息学和基因组项目](Smith,D.W.编辑)Academic Press[学术出版社],纽约(1993)；Computer Analysis ofSequence Data,Part I[序列数据的计算机分析，第I部分](Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑)Humana Press[胡马纳出版社],新泽西州(1994)；Sequence Analysis in MolecularBiology[分子生物学中的序列分析](von Heinje,G.编辑)Academic Press[学术出版社](1987)；以及Sequence Analysis Primer[序列分析引物](Gribskov,M.和Devereux,J.编辑)Stockton Press[斯托克顿出版社],纽约(1991)。

如本文所使用的，术语“序列同一性百分比”或“同一性百分比”是指在最佳比对两个序列时，与测试(“主题”)多核苷酸分子(或其互补链)相比，参考(“查询”)多核苷酸分子(或其互补链)的线性多核苷酸序列中的同一核苷酸的百分比。在一些实施例中，“同一性百分比”可以是指氨基酸序列中同一氨基酸的百分比。

在两个核酸分子、核苷酸序列或蛋白质序列的上下文中的短语“基本上同一”是指当比较并比对最大对应性时具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％核苷酸或氨基酸残基同一性的两个或更多个序列或子序列，如使用以下序列比较算法之一(本文所述的和本领域已知的)或通过目测检查所测量的。在本发明的一些实施例中，在长度为至少约50个残基至约200个残基、约50个残基至约150个残基等的序列区域上存在基本同一性。因此，在本发明的一些实施例中，在长度为至少约50、约60、约70、约80、约90、约100、约110、约120、约130、约140、约150、约160、约170、约180、约190、约200或更多个残基的序列区域上存在基本同一性。在另外的实施例中，序列在编码区的整个长度上是基本上同一的。此外，在代表性实施例中，基本上同一的核苷酸或蛋白质序列执行基本上相同的功能(例如，α-淀粉酶活性)。因此，在一些特定实施例中，这些序列在至少约150个残基上是基本上同一的并具有α-淀粉酶活性。

对于序列比较，典型地，一个序列充当与测试序列进行比较的参考序列。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中(若有必要，则指定子序列坐标)，并且指定序列算法程序的参数。然后，该序列比较算法基于所指定的程序参数来计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。

用于比对比较窗口的最佳序列比对是本领域技术人员所熟知的并且可以由以下工具实施：如Smith和Waterman的局部同源性算法、Needleman和Wunsch的同源性比对算法、Pearson和Lipman的相似性搜索方法，并且任选地由这些算法的计算机化实现方式来实施，如作为Wisconsin(材料科学软件公司(Accelrys Inc.)，圣地亚哥，加利福尼亚州)的部分可获得的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA。测试序列和参考序列的已比对区段的“同一性分数”是由两个已比对序列所共有的相同组分的数目除以参考序列区段(即，完整的参考序列或参考序列的更小限定部分)中组分的总数目。序列同一性百分比被表示为同一性分数乘以100。一个或多个多核苷酸序列的比较可以是相对于全长多核苷酸序列或其部分，或相对于较长的多核苷酸序列。出于本发明的目的，也可以使用针对翻译的核苷酸序列的2.0版BLASTX和针对多核苷酸序列的2.0版BLASTN确定“同一性百分比”。

用于执行BLAST分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(National Centerfor Biotechnology Information)公开地获得。这种算法涉及首先通过鉴定查询序列中具有长度W的短字码而鉴定得分高的序列对(HSP)，这些得分高的序列对当与数据库序列中具有相同长度的字码(word)进行比对时匹配或满足一些正值阈值的得分T。T被称为邻近字码得分阈(Altschul等人,1990.J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403)。这些初始的邻近字码命中充当种子用于起始搜索以发现含有它们的较长的HSP。然后，将这些字码命中在两个方向上沿着每个序列延伸直到累积的比对得分可以增加。对于核苷酸序列，使用参数M(对于一对匹配残基的奖赏得分；总是>0)和N(对于错配残基的罚分；总是<0)来计算累积得分。对于氨基酸序列，使用评分矩阵来计算累积得分。当累积的比对得分从它的最大达到值降低了数量X；由于累积一个或多个负得分的残基比对使累积得分趋于零或零以下；或者到达任一序列的末端时，停止这些字码命中在每个方向上的延伸。BLAST算法的参数W、T、以及X决定了比对的灵敏度与速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)使用字长(W)为11、期望值(E)为10、截止值(cutoff)为100、M＝5、N＝-4、以及两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用字长(W)为3、期望值(E)为10、以及BLOSUM62评分矩阵作为默认值(参见Henikoff&Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]89:10915(1989))。

除了计算序列同一性百分之外，BLAST算法还进行两个序列之间相似性的统计分析(参见，例如Karlin和Altschul,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]90:5873-5787(1993))。由BLAST算法提供的相似性的一种量度是最小概率总和(P(N))，它提供了在两个核苷酸或氨基酸序列之间会偶然发生匹配的概率的指示。例如，如果在测试核苷酸序列与参考核苷酸序列的比较中的最小概率总和小于约0.1至小于约0.001，则该测试核酸序列被认为是与该参考序列相似的。因此，在本发明的一些实施例中，在测试核苷酸序列与参考核苷酸序列的比较中的最小概率总和小于约0.001。

当两个核苷酸序列在严格条件下彼此杂交时，这两个核苷酸序列也可以被认为是基本上同一的。在一些代表性实施例中，被认为基本上同一的两个核苷酸序列在高严格条件下彼此杂交。

在核酸杂交实验(如DNA杂交和RNA杂交)的上下文中，“严格杂交条件”和“严格杂交洗涤条件”是序列依赖性的，并且在不同的环境参数下是不同的。对核酸杂交的广泛指导见于以下：Tijssen Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid[生物化学和分子生物学实验室技术-使用核酸探针的杂交]第2章第I部分“Overview of principles of hybridization and the strategy ofnucleic acid probe assays[杂交原理和核酸探针测定策略综述]”Elsevier[爱思唯尔],纽约(1993)。通常，高严格杂交和洗涤条件在限定的离子强度和pH下被选定为比特定序列的热熔点(T_m)低约5℃。

T_m是50％的靶序列与完全匹配的探针进行杂交时的温度(在限定的离子强度和pH下)。非常严格条件被选定为等于特定探针的T_m。用于互补核苷酸序列(它们在DNA印迹或RNA印迹中在滤器上具有超过100个互补残基)的杂交的严格杂交条件的实例是在42℃具有1mg肝素的50％甲酰胺，其中杂交是过夜进行的。高严格洗涤条件的实例是在72℃以0.15MNaCl持续约15分钟。严格洗涤条件的实例是在65℃以0.2x SSC洗涤持续15分钟(参见Sambrook，下文，针对SSC缓冲液的描述)。通常，高严格洗涤之前会先进行低严格洗涤，以去除背景探针信号。对于例如多于100个核苷酸的双链体的中严格洗涤的实例是在45℃以1xSSC持续15分钟。对于例如多于100个核苷酸的双链体的低严格洗涤的实例是在40℃以4-6xSSC持续15分钟。对于短探针(例如，约10至50个核苷酸)，严格条件典型地涉及小于约1.0M的Na离子的盐浓度，典型地在pH 7.0至8.3下约0.01至1.0M的Na离子浓度(或其他盐)，并且温度典型地是至少约30℃。还可以通过添加去稳定剂(如甲酰胺)来达到严格条件。一般而言，在特定的杂交测定中相比于不相关的探针观察到的高出2倍或更高的信噪比指示检测到特定杂交。如果在严格条件下彼此不杂交的核苷酸序列所编码的蛋白质是基本上同一的，则这些核苷酸序列仍然是基本上同一的。例如，当使用遗传密码所允许的最大密码子简并性来生成核苷酸序列的拷贝时，这种情况可能发生。

以下是可以用来克隆同源核苷酸序列的杂交/洗涤条件的设置的实例，这些序列是与参考核苷酸序列(例如，SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5)基本上同一的。在一个实施例中，参考核苷酸序列在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5MNaPO₄、1mM EDTA中与“测试”核苷酸序列杂交，同时在50℃在2X SSC、0.1％SDS中洗涤。在另一个实施例中，参考核苷酸序列在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO₄、1mM EDTA中与“测试”核苷酸序列杂交，同时在50℃在1X SSC、0.1％SDS中洗涤；或者在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO₄、1mM EDTA中杂交，同时在50℃在0.5X SSC、0.1％SDS中洗涤。在再另外的实施例中，参考核苷酸序列在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5MNaPO₄、1mM EDTA中与“测试”核苷酸序列杂交，同时在50℃在0.1X SSC、0.1％SDS中洗涤；或者在50℃在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M NaPO₄、1mM EDTA中杂交，同时在65℃在0.1XSSC、0.1％SDS中洗涤。

在特定实施例中，两个核苷酸序列或两个多肽序列是基本上同一的另一个指示可以是由第一核酸所编码的蛋白质与由第二核酸所编码的蛋白质具有免疫交叉反应性或与其特异性结合。因此，在一些实施例中，多肽可以是与第二多肽基本上同一的，例如其中这两种多肽仅区别于保守取代。

因此，在本发明的一些实施例中，提供了与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有显著序列同一性的核苷酸序列。“显著序列同一性”或“显著序列相似性”意指与另一个核苷酸序列有至少约70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和/或100％同一性或相似性。因此，在另外的实施例中，“显著序列同一性”或“显著序列相似性”意指与另一个核苷酸序列有约70％至约100％、约75％至约100％、约80％至约100％、约81％至约100％、约82％至约100％、约83％至约100％、约84％至约100％、约85％至约100％、约86％至约100％、约87％至约100％、约88％至约100％、约89％至约100％、约90％至约100％、约91％至约100％、约92％至约100％、约93％至约100％、约94％至约100％、约95％至约100％、约96％至约100％、约97％至约100％、约98％至约100％和/或约99％至约100％同一性或相似性的范围。因此，在一些实施例中，本发明的核苷酸序列是与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有显著序列同一性并编码具有α-淀粉酶活性的多肽的核苷酸序列。在一些实施例中，本发明的核苷酸序列是与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有80％至100％同一性并编码具有α-淀粉酶活性的多肽的核苷酸序列。在代表性实施例中，本发明的核苷酸序列是与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有95％同一性并编码具有α-淀粉酶活性的多肽的核苷酸序列。

在一些实施例中，本发明的多肽包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少70％同一，例如至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和/或100％同一的氨基酸序列，基本上由其组成，或由其组成，并且具有α淀粉酶活性。

在一些实施例中，多肽或核苷酸序列可以是保守修饰的变体。如本文所使用的，“保守修饰的变体”是指含有单独取代、缺失或添加的多肽或核苷酸序列，这些取代、缺失或添加在该序列中改变、添加或缺失单个氨基酸或核苷酸或小百分比的氨基酸或核苷酸，其中该改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸取代。提供功能上相似的氨基酸的保守取代表在本领域中是熟知的。

如本文所使用的，多肽的保守修饰的变体是具有生物活性的，并且因此具有如本文所述的参考多肽的所希望活性(例如，α-淀粉酶活性)。变体可以产生于例如遗传多态性或产生于人工操纵。参考多肽的生物活性变体可以与参考多肽的氨基酸序列具有至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或更大的序列同一性或相似性(例如，约40％至约99％或更大的序列同一性或相似性以及其中的任何范围)，如通过本文的其他地方所述的序列比对程序和参数所确定的。活性变体可以与参考多肽序列区别于尽可能少的1-15个氨基酸残基，尽可能少的1-10个(如6-10个)，尽可能少的5个，尽可能少的4个、3个、2个、或甚至1个氨基酸残基。

天然存在的变体可以存在于群体内。此类变体可以通过使用熟知的分子生物学技术来鉴定，如使用如以下所述的聚合酶链式反应(PCR)以及杂交。合成来源的核苷酸序列，例如通过定点诱变或PCR介导的诱变生成的、编码本发明的多肽的序列，也作为变体包括在内。可以将一个或多个核苷酸或氨基酸取代、添加、或缺失引入本文所披露的核苷酸或氨基酸序列中，以使得将这些取代、添加、或缺失引入所编码的蛋白质中。这些添加(插入)或缺失(截短)可以在天然蛋白的N-末端或C-末端进行，或者在天然蛋白的一个或多个位点处进行。类似地，一个或多个核苷酸或氨基酸的取代可以在天然蛋白的一个或多个位点处进行。

例如，保守的氨基酸取代可以在一个或多个预测的、优选是非必需氨基酸残基处进行。“非必需”氨基酸残基是可以与蛋白质的野生型序列不同但不改变生物活性的残基，而“必需”氨基酸是生物活性所要求的。“保守的氨基酸取代”是用具有相似侧链的氨基酸残基替换该氨基酸残基的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族在本领域是已知的。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、以及具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。此类取代不会针对保守的氨基酸残基、或针对位于保守基序中的氨基酸残基进行，在这些地方此类残基对于蛋白质活性是必需的。

例如，可以通过使编码酶的核苷酸序列突变来制备参考多肽的氨基酸序列变体。可以在植物中将所得到的突变体进行重组表达，并且使用本领域熟知的方法通过测定α-淀粉酶活性来筛选保留生物活性的那些。用于诱变与核苷酸序列改变的方法在本领域是已知的。参见例如，Kunkel(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]82:488-492；Kunkel等人(1987)Methods in Enzymol.[酶学方法]154:367-382；和Techniques inMolecular Biology[分子生物学技术](Walker和Gaastra编辑,MacMillan PublishingCo.[麦克米兰出版公司]1983)以及其中所引用的参考文献；以及美国专利号4,873,192。清楚的是，在编码变体的DNA内所进行的突变一定不能破坏阅读框并且优选地不会生成互补区，这些互补区会产生二级mRNA结构。参见，欧洲专利申请公开号75,444。关于不影响目的蛋白质的生物活性的适当氨基酸取代的指导可以见于Dayhoff等人(1978)Atlas ofProtein Sequence and Structure[蛋白质序列与结构图谱](National BiomedicalResearch Foundation[国家生物医药研究基金会],Washington,D.C.[华盛顿特区])的模型中，将该文献通过引用并入本文。

本文所述的多肽中的缺失、插入以及取代不预期在多肽的特征(例如，多肽的活性)中产生根本性改变。然而，当在如此做之前难以预测该取代、缺失或插入的精确效果时，本领域的普通技术人员将理解，该效果可以通过能针对具体目的多肽活性(例如，α-淀粉酶活性)进行筛选的常规筛选测定来评估。

在一些实施例中，本发明的组合物可以包含多肽的活性片段。如本文所使用的，“片段”意指参考多肽的一部分，该部分保留了多肽的α-淀粉酶活性。片段还意指编码参考多肽的核酸分子的一部分。多肽的活性片段可以例如通过分离表达所编码的多肽片段的编码多肽的核酸分子的一部分(例如，利用体外重组表达)并评估该片段的活性来制备。编码此类片段的核酸分子可以是至少约150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、或2200个连续核苷酸，或其中的任何范围，或高达存在于全长编码多肽的核酸分子中的核苷酸数目。这样，多肽片段可以是至少约50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、525、550、600、625、650、675、或700个连续氨基酸残基，或其中的任何范围，或高达存在于全长多肽中的氨基酸残基总数。因此，在一些实施例中，本发明提供了如下多肽，该多肽包含本发明的多肽(例如，SEQ ID NO:1)的至少约150个连续氨基酸残基，基本上由其组成，或由其组成，并且具有α-淀粉酶活性。

如本文所使用的，关于核酸分子和/或核苷酸序列(例如，RNA或DNA)的术语“表达(express、expresses、expressed或expression)”等指示该核酸分子和/或核苷酸序列被转录并且任选地被翻译。因此，核酸分子和/或核苷酸序列可以表达或产生目的多肽或功能性的未翻译的RNA。

“异源”或“重组”核苷酸序列是不与该核苷酸序列所引入的宿主细胞天然地关联的核苷酸序列，包括天然存在的核苷酸序列的非天然存在的多个拷贝。

“天然”或“野生型”核酸、核苷酸序列、多肽或氨基酸序列是指天然存在的或内源性的核酸、核苷酸序列、多肽或氨基酸序列。因此，例如，“野生型mRNA”是天然存在于生物体中的或对生物体来说是内源性的mRNA。“同源”核酸序列是与该核酸序列所引入的宿主细胞天然地关联的核苷酸序列。

也如本文所使用的，术语“核酸”、“核酸分子”、“核苷酸序列”以及“多核苷酸”可以互换使用并且涵盖RNA和DNA两者，包括cDNA、基因组DNA、mRNA、合成的(例如，化学合成的)DNA或RNA、以及RNA和DNA的嵌合体。术语多核苷酸、核苷酸序列、或核酸是指核苷酸链而与链长无关。核酸可以是双链或单链的。在单链时，核酸可以是有义链或反义链。可以使用寡核苷酸类似物或衍生物(例如，肌苷或硫代磷酸酯核苷酸)合成核酸。此类寡核苷酸可以例如用于制备具有改变的碱基配对能力或对核酸酶的增强的抗性的核酸。本发明进一步提供了为本发明的核酸、核苷酸序列、或多核苷酸的互补序列(该互补序列可以是完全互补序列或部分互补序列)的核酸。本文提供的核酸分子和/或核苷酸序列本文以5’至3’方向从左至右呈现，并且使用代表核苷酸字符的标准代码表示，如美国序列规则37CFR§§1.821-1.825和世界知识产权组织(WIPO)标准ST.25中所述。

在一些实施例中，本发明的重组核酸分子、核苷酸序列以及多肽是“分离的”。“分离的”核酸分子、“分离的”核苷酸序列或“分离的”多肽是通过人工方式从其天然环境中分开而存在的核酸分子、核苷酸序列或多肽并因此不是自然产物。分离的核酸分子、核苷酸序列或多肽能以纯化形式存在，即与天然存在的生物体或病毒的至少一些其他组分(例如，细胞或病毒结构组分或通常发现与该多核苷酸相关的其他多肽或核酸)至少部分地分开。在代表性实施例中，分离的核酸分子、分离的核苷酸序列和/或分离的多肽是至少约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或更纯的。

在其他实施例中，分离的核酸分子、核苷酸序列或多肽可以存在于非天然环境中，例如像重组宿主细胞。因此，例如，就核苷酸序列而言，术语“分离的”意指它从其天然存在于其中的染色体和/或细胞中分离出来。如果将多核苷酸从其天然存在于其中的染色体和/或细胞中分离出并且然后将其插入它并不天然存在于其中的遗传背景、染色体和/或细胞(例如，不同的宿主细胞、不同的调节序列和/或与自然中发现的不同的基因组位置)中，则该多核苷酸也是被分离的。因此，这些重组核酸分子、核苷酸序列以及它们所编码的多肽是“分离的”，因为它们通过人工方式从其天然环境中分开而存在并因此不是自然产物，然而，在一些实施例中，它们可以被引入到重组宿主细胞中并存在于该重组宿主细胞中。

在一些实施例中，本发明的核苷酸序列和/或核酸分子可以与多种启动子可操作地关联以用于在宿主细胞(例如，植物细胞)中表达。如本文所使用的，“可操作地关联”当指示可操作地连接至第二核酸序列的第一核酸序列时意指在该第一核酸序列与该第二核酸序列处于功能性关系中时的情况。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则该启动子与该编码序列可操作地关联。

DNA“启动子”是编码区上游的非翻译的DNA序列，它含有RNA聚合酶结合位点并且启动DNA的转录。“启动子区”也可以包括充当基因表达的调节子的其他元件。启动子可以包括例如用于在重组核酸分子(即，嵌合基因)的制备中使用的组成型、可诱导型、时间调节型、发育调节型、化学调节型、组织优选型、以及组织特异型启动子。在特定方面，适用于本发明的“启动子”是能够在植物细胞中启动核苷酸序列的转录的启动子。

“嵌合基因”是如下重组核酸分子，其中启动子或其他调节核苷酸序列与核苷酸序列可操作地关联，该核苷酸序列对mRNA进行编码或者该核苷酸序列被表达为蛋白质，以使得该调节核苷酸序列能够调节所关联的核苷酸序列的转录或表达。嵌合基因的调节核苷酸序列不能如自然界中所发现的那样正常地可操作地连接至所关联的核苷酸序列上。

启动子的选择将依赖于表达的时间和空间需要而变化，并且还依赖于有待转化的宿主细胞而变化。因此，例如，核苷酸序列的表达可以处于任何植物和/或植物部分中(例如，处于叶中、处于茎杆或茎中、处于穗中、处于花序(例如，穗状花序、圆锥花序、穗轴等)中、处于根、种子和/或幼苗等中)。尽管已经显示来自双子叶植物的很多启动子在单子叶植物中是可操作的并且反之亦然，但理想的是选择双子叶植物启动子用于在双子叶植物中表达，并且选择单子叶植物启动子用于在单子叶植物中表达。不过，对于所选的启动子的起源没有限制；只要它们可有效驱动核苦酸序列在所希望细胞中表达就足够了。

适用于本发明的启动子包括但不限于组成性地驱动核苷酸序列的表达的那些启动子、在诱导时驱动表达的那些启动子、以及以组织或发育特异性方式驱动表达的那些启动子。这些不同类型的启动子在本领域是已知的。

组成型启动子的实例包括但不限于夜香树属病毒启动子(cmp)(美国专利号7,166,770)、水稻肌动蛋白1启动子(Wang等人(1992)Mol.Cell.Biol.[分子细胞生物学]12:3399-3406；以及美国专利号5,641,876)、CaMV 35S启动子(Odell等人(1985)Nature[自然]313:810-812)、CaMV 19S启动子(Lawton等人(1987)Plant Mol.Biol.[植物分子生物学]9:315-324)、nos启动子(Ebert等人(1987)Proc.Natl.Acad.Sci USA[美国国家科学院院刊]84:5745-5749)、Adh启动子(Walker等人(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]84:6624-6629)、蔗糖合酶启动子(Yang和Russell(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]87:4144-4148)、以及泛素启动子。源于泛素的组成型启动子积累在很多细胞类型中。已经从几种植物物种中克隆出泛素启动子以用在转基因植物中使用，例如，向日葵(Binet等人,1991.Plant Science[植物科学]79:87-94)、玉蜀黍(Christensen等人,1989.Plant Molec.Biol.[植物分子生物学]12:619-632)和拟南芥(Norris等人1993.Plant Molec.Biol.[植物分子生物学]21:895-906)。玉蜀黍泛素启动子(UbiP)已经在转基因单子叶植物系统中得到发展，并且它的序列以及构建用于单子叶植物转化的载体披露于专利公开EP 0 342 926中。此外，由McElroy等人(Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与普通遗传学]231:150-160(1991))描述的启动子表达盒可容易被修饰以用于核苷酸序列的表达并且特别适用于在单子叶植物宿主中使用。

在一些实施例中，可以使用组织特异性/组织优选的启动子。组织特异性或优选的表达模式包括但不限于绿色组织特异性或优选的、根特异性或优选的、茎特异性或优选的、以及花特异性或优选的。适用于在绿色组织中表达的启动子包括调节涉及光合作用的基因的许多启动子，并且这些中的许多已经从单子叶植物和双子叶植物两者中得以克隆。在一个实施例中，适用于本发明的启动子是来自磷酸烯醇羧化酶基因的玉蜀黍PEPC启动子(Hudspeth和Grula,Plant Molec.Biol.[植物分子生物学]12:579-589(1989))。组织特异性启动子的非限制性实例包括与编码种子贮藏蛋白(如β-伴大豆球蛋白、十字花科蛋白、油菜籽蛋白和菜豆素)、玉米蛋白(例如，γ玉米蛋白)或油体蛋白(如油质蛋白)、或脂肪酸生物合成中涉及的蛋白质(包括酰基载体蛋白、硬脂酰-ACP去饱和酶和脂肪酸去饱和酶(fad2-1))的基因关联以及与胚发育过程中表达的其他核酸(如Bce4，参见例如Kridl等人(1991)Seed Sci.Res.[种子科学研究]1:209-219；以及欧洲专利号255378)关联的那些启动子。适用于核苷酸序列在植物(特别是玉蜀黍)中表达的组织特异性或组织优先的启动子包括但不限于直接在根、髓、叶或花粉中表达的那些启动子。此类启动子披露于例如PCT公开WO 93/07278中，通过引用以其全文并入本文。组织特异性或组织优选的启动子的其他非限制性实例包括披露于美国专利6,040,504中的棉花二磷酸核酮糖羧化酶(rubisco)启动子；披露于美国专利5,604,121中的水稻蔗糖合酶启动子；由de Framond(FEBS 290:103-106(1991)；授予汽巴-嘉基(Ciba-Geigy)的EP 0 452 269)描述的根特异性启动子；描述于美国专利5,625,136(授予汽巴-嘉基)并驱动玉蜀黍trpA基因表达的茎特异性启动子；以及披露于PCT公开WO 01/73087中的夜香树属黄叶卷曲病毒启动子，将所有专利文献通过引用并入本文。

组织特异性/组织优选的启动子的另外的实例包括但不限于根特异性启动子RCc3(Jeong等人Plant Physiol.[植物生理学]153:185-197(2010))和RB7(美国专利号5459252)、凝集素启动子(Lindstrom等人(1990)Der.Genet.[基因技术]11:160-167；和Vodkin(1983)Prog.Clin.Biol.Res.[临床生物研究进展]138:87-98)、玉米乙醇脱氢酶1启动子(Dennis等人(1984)Nucleic Acids Res.[核酸研究]12:3983-4000)、S-腺苷基-L-甲硫氨酸合成酶(SAMS)(Vander Mijnsbrugge等人(1996)Plant and Cell Physiology[植物和细胞生理学],37(8):1108-1115)、玉米集光复合体启动子(Bansal等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]89:3654-3658)、玉米热激蛋白启动子(O’Dell等人(1985)EMBO J.[欧洲分子生物学杂志]5:451-458)；和Rochester等人(1986)EMBOJ.[欧洲分子生物学杂志]5:451-458)、豌豆小亚基RuBP羧化酶启动子(Cashmore,“Nucleargenes encoding the small subunit of ribulose-l,5-bisphosphate carboxylase[编码核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶的小亚基的核基因]”第29-39页，于Genetic Engineering ofPlants[植物基因工程]中(Hollaender编辑,Plenum Press[普莱南出版社]1983；和Poulsen等人(1986)Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与普通遗传学]205:193-200)、Ti质粒甘露氨酸合酶启动子(Langridge等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:3219-3223)、Ti质粒胭脂碱合酶启动子(Langridge等人(1989),同上)、矮牵牛查尔酮异构酶启动子(van Tunen等人(1988)EMBO J.[欧洲分子生物学杂志]7:1257-1263)、菜豆富甘氨酸蛋白1启动子(Keller等人(1989)Genes Dev.[基因与发育]3:1639-1646)、截短CaMV 35S启动子(O’Dell等人(1985)Nature[自然]313:810-812)、马铃薯糖蛋白启动子(Wenzler等人(1989)Plant Mol.Biol.[植物分子生物学]13:347-354)、根细胞启动子(Yamamoto等人(1990)Nucleic Acids Res.[核酸研究]18:7449)、玉米醇溶蛋白启动子(Kriz等人(1987)Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与普通遗传学]207:90-98；Langridge等人(1983)Cell[细胞]34:1015-1022；Reina等人(1990)Nucleic Acids Res.[核酸研究]18:6425；Reina等人(1990)Nucleic Acids Res.[核酸研究]18:7449；和Wandelt等人(1989)Nucleic Acids Res.[核酸研究]17:2354)、球蛋白-1启动子(Belanger等人(1991)Genetics[遗传学]129:863-872)、α-微管蛋白cab启动子(Sullivan等人(1989)Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与普通遗传学]215:431-440)、PEPCase启动子(Hudspeth和Grula(1989)Plant Mol.Biol.[植物分子生物学]12:579-589)、R基因复合物相关启动子(Chandler等人(1989)Plant Cell[植物细胞]1:1175-1183)以及查尔酮合酶启动子(Franken等人(1991)EMBO J.[欧洲分子生物学杂志]10:2605-2612)。

尤其可用于种子特异性表达的是豌豆球蛋白启动子(Czako等人(1992)Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与普通遗传学]235:33-40)；以及披露在美国专利号5,625,136中的种子特异性启动子。在一些实施例中，启动子可以是胚乳特异性启动子，包括但不限于玉蜀黍γ-玉米蛋白启动子或玉蜀黍ADP-gpp启动子。

可用于成熟的叶中表达的启动子是当衰老开始时开启的那些启动子，如来自拟南芥属(Arabidopsis)的SAG启动子(Gan等人(1995)Science[科学]270:1986-1988)。

此外，可以使用在质体中发挥作用的启动子。此类启动子的非限制性实例包括噬菌体T3基因9 5’UTR以及其他的披露于美国专利号7,579,516中的启动子。适用于本发明的其他启动子包括但不限于S-E9小亚基RuBP羧化酶启动子和Kunitz胰蛋白酶抑制剂基因启动子(Kti3)。

在本发明的一些实施例中，可以使用诱导型启动子。因此，例如，可以使用化学调节的启动子以通过应用外源化学调节物来调节植物中的基因表达。核苷酸序列的表达经由化学调节过的启动子进行的调节使得本发明的多肽仅当用诱导的化学品处理作物植物时能被合成。取决于目的，在应用化学物诱导基因表达时启动子可以是化学诱导型启动子，或者在应用化学物阻抑基因表达时启动子可以是化学阻抑型启动子。

化学诱导型启动子在本领域是已知的，并且包括但不限于玉蜀黍In2-2启动子(它是由苯磺酰胺除草剂安全剂激活)、玉蜀黍GST启动子(它是由用作发芽前除草剂的疏水亲电子化合物激活)、以及烟草PR-1a启动子(它是由水杨酸激活)(例如，PR1a系统)、类固醇反应性启动子(参见例如，Schena等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]88,10421-10425和McNellis等人(1998)Plant J.[植物杂志]14,247-257)中的糖皮质激素诱导型启动子)以及四环素诱导型启动子和四环素-阻抑型启动子(参见例如，Gatz等人(1991)Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与普通遗传学]227,229-237和美国专利号5,814,618和5,789,156)、Lac阻遏物系统启动子、铜诱导型系统启动子、水杨酸诱导型系统启动子(例如，PR1a系统)、糖皮质激素诱导型启动子(Aoyama等人(1997)Plant J.[植物杂志]11:605-612)以及蜕皮激素诱导型系统启动子。

诱导型启动子的其他非限制性实例包括ABA诱导型和细胞膨胀诱导型启动子、植物生长素结合蛋白基因启动子(Schwob等人(1993)Plant J.[植物杂志]4:423-432)、UDP葡萄糖类黄酮糖基转移酶启动子(Ralston等人(1988)Genetics[遗传学]119:185-197)、MPI蛋白酶抑制剂启动子(Cordero等人(1994)Plant J.[植物杂志]6:141-150)以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(Kohler等人(1995)Plant Mol.Biol.[植物分子生物学]29:1293-1298；Martinez等人(1989)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]208:551-565；和Quigley等人(1989)J.Mol.Evol.[分子进化杂志]29:412-421)。还包括苯磺酰胺诱导型(美国专利号5,364,780)和乙醇诱导型(国际专利申请公开号WO 97/06269和WO 97/06268)系统和谷胱甘肽S-转移酶启动子。同样地，可以使用描述于以下文献中的诱导型启动子中的任一种：Gatz(1996)Current Opinion Biotechnol.[生物技术新见]7:168-172和Gatz(1997)Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.[植物生理学与植物分子生物学年度综述]48:89-108。适用于指导本发明的核苷酸序列在植物中的表达的其他化学诱导型启动子披露于美国专利5,614,395中，将该专利通过引用以其全文并入本文。基因表达的化学诱导还详述于公开申请EP 0 332 104(授予汽巴-嘉基)和美国专利5,614,395中。在一些实施例中，用于化学诱导的启动子可以是烟草PR-1a启动子。

本发明的多肽可以或可以不通过使用信号序列被靶向植物内的区室。已知多种信号肽影响多核苷酸的表达或将多核苷酸靶向到特定的区室/组织中或特定的区室/组织外。适合的信号序列和靶向启动子在本领域是已知的并且包括但不限于本文提供的那些(参见例如，美国专利号7,919,681)。靶标的实例包括但不限于液泡、内质网(ER)、叶绿体、造粉体、淀粉粒、细胞壁、种子，或不限于特定的组织，例如胚乳。因此，编码本发明的多肽(例如，SEQ ID NO:1)的核苷酸序列可以可操作地连接到用于将该多肽靶向和/或保留至植物内的区室的信号序列。在一些实施例中，信号序列可以是来自waxy的N-末端信号序列、来自γ-玉米蛋白的N-末端信号序列、淀粉结合结构域、或C-末端淀粉结合结构域。在另外的实施例中，信号序列可以是ER信号序列、ER保留序列、ER信号序列和另外的ER保留序列。因此，在本发明的一些实施例中，α-淀粉酶多肽可以与一个或多个信号序列融合(和/或编码所述多肽的核苷酸序列可以可操作地连接到编码所述信号序列的核苷酸序列)。

如本文所使用的，“表达盒”意指包含目的核苷酸序列(例如，SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列)的核酸分子，其中所述核苷酸序列与至少一个控制序列(例如，启动子)可操作地关联。因此，本发明的一些实施例提供了设计为表达SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列的表达盒。以这种方式，例如，可以在用以在生物体或其细胞(例如，植物、植物部分和/或植物细胞)中表达的表达盒中提供与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列或与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5的核苷酸序列具有显著同一性的核苷酸序列可操作地关联的一个或多个植物启动子。

包含目的核苷酸序列的表达盒可以是嵌合的，意味着它的组分中的至少一种相对于它的其他组分中的至少一种而言是异源的。表达盒还可以是天然存在但已经是以适用于异源表达的重组形式获得的表达盒。然而，典型地，该表达盒相对于该宿主而言是异源的，即该表达盒的特定核酸序列不是天然存在于该宿主细胞中的，并且必须已经通过转化事件引入到该宿主细胞或该宿主细胞的祖先中。

除可操作地连接至待表达的核苷酸序列的启动子之外，表达盒还可以包括其他调节序列。如本文所使用的，“调节序列”意指位于编码序列的上游(5’非编码序列)、内部和/或下游(3’非编码序列)和/或影响相关编码序列的转录、RNA加工或稳定性、或翻译的核苷酸序列。调节序列包括但不限于启动子、增强子、内含子、翻译前导序列、终止信号、以及聚腺苷酸化信号序列。在一些实施例中，表达盒还可以包括编码可操作地连接到本发明的多核苷酸序列的信号序列的核苷酸序列。

出于本发明的目的，这些调节序列或区域相对于植物、植物部分和/或植物细胞可以是天然的/类似的，和/或这些调节序列相对于其他调节序列可以是天然的/类似的。可替代地，这些调节序列相对于植物(和/或植物部分和/或植物细胞)和/或相对于彼此(即，这些调节序列)可以是异源的。因此，例如，当启动子可操作地连接至来自一个物种的多核苷酸(该物种与多核苷酸所来源的物种不同)时，该启动子可以是异源的。可替代地，如果启动子是来自与多核苷酸所来源的物种相同/类似的物种，则该启动子相对于选定的核苷酸序列也可以是异源的，但是一者或两者(即，启动子和/或多核苷酸)是从其原始形式和/或基因组的基因座进行大致修饰的，和/或该启动子不是可操作地连接的多核苷酸的天然启动子。

已知源自病毒的多个非翻译前导序列用来增强基因表达。确切地说，来自烟草花叶病病毒(TMV，“ω-序列”)、玉蜀黍褪绿斑驳病毒(MCMV)以及苜蓿花叶病病毒(AMV)的前导序列已显示有效增强表达(Gallie等人(1987)Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:8693-8711；和Skuzeski等人(1990)Plant Mol.Biol.[植物分子生物]15:65-79)。本领域已知的其他前导序列包括但不限于小核糖核酸病毒前导子，如脑心肌炎(EMCV)5’非编码区前导子(Elroy-Stein等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:6126-6130)；马铃薯y病毒组前导子，如烟草蚀纹病毒(TEV)前导子(Allison等人(1986)Virology[病毒学]154:9-20)；玉蜀黍矮花叶病毒(MDMV)前导子(Allison等人(1986),同上)；人免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)前导子(Macejak和Samow(1991)Nature[自然]353:90-94)；来自AMV的外壳蛋白mRNA的非翻译前导子(AMV RNA 4；Jobling和Gehrke(1987)Nature[自然]325:622-625)；烟草花叶病TMV前导子(Gallie等人(1989)Molecular Biology of RNA[RNA分子生物学]237-256)；以及MCMV前导子(Lommel等人(1991)Virology[病毒学]81:382-385)。还参见，Della-Cioppa等人(1987)Plant Physiol.[植物生理学]84:965-968。

表达盒还可以任选地包括在植物中发挥作用的转录和/或翻译终止区(即，终止区)。多种转录终止子是可供用于在表达盒中使用的并且负责在超出目的异源核苷酸序列时的转录终止以及正确的mRNA聚腺苷酸化。终止区对于转录起始区可以是天然的，对于可操作地连接的目的核苷酸序列可以是天然的，对于植物宿主可以是天然的，或者可以是源自另一种来源(即，对于启动子、目的核苷酸序列、植物宿主、或其任何组合而言是外来的或异源的)。适当的转录终止子包括但不限于CAMV 35S终止子、tml终止子、胭脂碱合酶终止子和/或豌豆rbcs E9终止子。这些终止子可以在单子叶植物和双子叶植物两者中使用。此外，可以使用编码序列的天然转录终止子。

本发明的表达盒还可以包括用于选择性标记的核苷酸序列，所述选择性标记可以用于选择转化的植物、植物部分和/或植物细胞。如本文所使用的，“选择性标记(selectable marker)”意指如下核苷酸序列，当该核苷酸序列表达时向表达该标记的植物、植物部分和/或植物细胞赋予不同的表型，并且因此允许此类转化的植物、植物部分和/或植物细胞与不具有该标记的那些区别开来。这样的核苷酸序列可以编码选择性或筛选性标记，这取决于该标记是否赋予可以通过化学手段而被选择的性状，如通过使用选择剂(例如，抗生素、除草剂等)，或者取决于该标记是否仅是人们可以通过观察或测试而鉴别的性状，如通过筛选(例如，R基因座性状)。当然，适合的选择性标记的许多实例在本领域是已知的并且可以用于本文所述的表达盒中。

选择性标记的实例包括但不限于编码neo或nptII的核苷酸序列，它赋予对卡那霉素、G418等的抗性(Potrykus等人(1985)Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与普通遗传学]199:183-188)；编码bar的核苷酸序列，它赋予对草丁膦的抗性；编码改变的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶的核苷酸序列，它赋予对草甘膦的抗性(Hinchee等人(1988)Biotech.[生物技术]6:915-922)；编码腈水解酶(如来自臭鼻克雷白氏杆菌(Klebsiella ozaenae)的bxn)的核苷酸序列，它赋予对溴草腈的抗性(Stalker等人(1988)Science[科学]242:419-423)；编码改变的乙酰乳酸合酶(ALS)的核苷酸序列，它赋予对咪唑啉酮、磺酰脲或其他ALS-抑制化学品的抗性(欧洲专利申请号154204)；编码甲氨蝶呤抗性的二氢叶酸还原酶(DHFR)的核苷酸序列(Thillet等人(1988)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]263:12500-12508)；编码茅草枯脱卤素酶的核苷酸序列，它赋予对茅草枯的抗性；编码甘露糖-6-磷酸异构酶(也称为磷酸甘露糖异构酶(PMI))的核苷酸序列，它赋予代谢甘露糖的能力(美国专利号5,767,378和5,994,629)；编码改变的邻氨基苯甲酸合酶的核苷酸序列，它赋予对5-甲基色氨酸的抗性；和/或编码hph的核苷酸序列，它赋予对潮霉素的抗性。本领域技术人员能够选择用于在本发明的表达盒中使用的适合的选择性标记。

另外的选择性标记包括但不限于：编码β-葡萄糖醛酸酶或uidA(GUS、编码一种不同的显色底物已知的酶的核苷酸序列；编码一种调节花青素颜料(红色)在植物组织中的产生的产物的R-基因座核苷酸序列(Dellaporta等人,“Molecular cloning of the maizeR-nj allele by transposon-tagging with Ac[通过用Ac进行转座子-标记的玉蜀黍R-nj等位基因的分子克隆]”,第263-282页，于Chromosome Structure and Function:Impactof New Concepts[染色体结构和功能：新概念的影响]，18th Stadler GeneticsSymposium[第18次斯塔德勒遗传学研讨会]中(Gustafson和Appels编辑,Plenum Press[普莱纽姆出版社]1988))；编码β-内酰胺酶(一种不同的显色底物(例如，PADAC，一种显色的头孢菌素)已知的酶)的核苷酸序列(Sutcliffe(1978)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3737-3741)；编码xylE(编码邻苯二酚双加氧酶)的核苷酸序列(Zukowsky等人(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:1101-1105)；编码酪氨酸酶(一种能够将酪氨酸氧化成DOPA和多巴醌(它们又缩合形成黑色素)的酶)的核苷酸序列(Katz等人(1983)J.Gen.Microbiol.[普通微生物学杂志]129:2703-2714)；编码β-半乳糖苷酶(一种存在显色底物的酶)的核苷酸序列；编码允许生物体发光检测的荧光素酶(lux)的核苷酸序列(Ow等人(1986)Science[科学]234:856-859)；编码可以用于钙敏感性的生物体发光检测中的水母发光蛋白的核苷酸序列(Prasher等人(1985)Biochem.Biophys.Res.Comm.[生物化学与生物物理研究通讯]126:1259-1268)；或者编码绿色荧光蛋白的核苷酸序列(Niedz等人(1995)Plant Cell Reports[植物细胞报告]14:403-406)。本领域技术人员能够选择用于在本发明的表达盒中使用的适合的选择性标记。

在本发明的其他方面，提供了增加动物的生长速率(增重)或平均日增重的方法，该方法包括向所述动物饲喂本发明的动物饲料组合物，其中该动物的生长速率或该动物的平均日增重与未提供本发明的动物饲料组合物的对照动物的生长速率相比增加约0.05磅/天至约10磅/天。因此，在一些实施例中，生长速率或平均日增重的增加可以为约0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.1、0.125、0.15、0.175、0.2、0.225、0.25、0.275、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.425、0.45、0.475、0.5、0.525、0.55、0.575、0.6、0.625、0.65、0.675、0.7、0.725、0.75、0.775、0.8、0.825、0.85、0.875、0.9、0.925、0.95、0.975、1、1.25、1.5、1.75、2、2.25、2.5、2.75、3、3.25、3.5、3.75、4、4.1、4.2、4.21、4.22、4.23、4.24、4.25、4.26、4.27、4.28、4.29、4.3、4.31、4.32、4.33、4.34、4.35、4.36、4.37、4.38、4.39、4.4、4.41、4.42、4.43、4.44、4.45、4.46、4.47、4.48、4.49、4.5、4.75、5、5.25、5.5、5.75、6、6.25、6.5、6.75、7、7.25、7.5、7.75、8、8.25、8.5、8.75、9、9.25、9.5、9.75、10磅/天等，和/或其中的任何范围。在一些特定实施例中，生长速率或平均日增重的增加可以是从约0.05磅/天到约0.5磅/天。在另外的实施例中，与未提供所述动物饲料组合物的对照动物的生长相比，生长速率或平均日增重的增加可以是0.1磅/天。

在本发明的再另外的方面，提供了用于减少动物达到所希望重量而需要的天数的方法，该方法包括向所述动物喂食本发明的动物饲料组合物，从而与未饲喂所述动物饲料组合物的对照动物达到相同所希望重量而需要的天数相比，减少达到所希望重量而需要的天数。

如本文所使用的，“所希望重量”或“所希望育肥重量(finished weight)”可以指活重或热胴体重。因此，例如，对于牛，所希望的活重可以在约950至约1,600磅之间，并且所希望的热胴体重可以在约700至约1,000磅之间。

在进入饲养场之前，牛的大部分时间都会在放牧区或牧场上放牧度过，并且然后被运送到向它们饲喂谷物和其他饲料浓缩物的育肥饲养场。通常，牛以约600至约750磅的重量进入饲养场。取决于安置时的重量、饲喂条件和所希望的育肥重量，饲养场中的时间可以在约90天至约300天的范围内。平均增加可以是从约2.5至约5磅/天。

因此，在本发明的另一方面，饲喂本发明的动物饲料组合物的动物与未饲喂所述动物饲料组合物的对照动物相比，达到所希望重量而需要的天数可以减少约1天至约30天。在一些实施例中，饲喂本发明的动物饲料组合物的动物与未饲喂所述动物饲料组合物的对照动物相比，达到所希望重量而需要的天数可以减少约1天至约25天、约1天至约20天、约5天至约20天、约5天至约15天等。因此，在一些实施例中，饲喂本发明的动物饲料组合物的动物达到所希望重量而需要的天数可以减少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30天等，和/或其中的任何范围。

在本发明的其他方面，提供了增加动物的饲料利用效率的方法，该方法包括以与未饲喂所述动物饲料组合物的对照动物相比有效于增加所述动物的饲料利用效率的量向所述动物喂养本发明的动物饲料组合物。

饲料利用效率可以计算为动物体重的增加/提供的饲料量。在一些实施例中，体重是宰杀之前的育肥体重。在另外的实施例中，提供的饲料是在约90天至约300天的时间内提供的饲料量。因此，在一些实施例中，提供的饲料是在约100天至约275天、约125天至约250天、约150天至约225天、约180天至约200天等的时间内提供的饲料量。

因此，在一些实施例中，测量增重的时间段(天数)是90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300天等，和/或其中的任何范围。

在本发明的另外的方面，与未饲喂所述动物饲料组合物的对照动物相比，玉米的动物饲用价值增加约1％至约25％。玉米的饲用价值等于本发明的饲料组合物的饲料效率和未饲喂所述饲料组合物的对照动物的饲料效率的差异，除以未饲喂所述饲料组合物的所述对照动物的饲料效率，所有都除以所述饲料组合物的玉米内含物百分比。因此，在一些实施例中，玉米的饲用价值的增加可以为约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％等，和/或其中的任何范围。在特定实施例中，与对照相比，玉米饲料价值的增加为约1％至约10％。在代表性实施例中，与对照相比，饲料价值的增加为约5％。

在本发明的另外的方面，与未饲喂所述动物饲料组合物的对照动物相比，动物的饲料利用效率增加约0.005至约0.1。因此，在一些实施例中，饲料利用效率的增加可以为约0.005、0.006、0.007、0.008、0.009,0.01、0.011、0.012、0.013、0.014、0.015、0.016、0.017、0.018、0.019、0.02、0.021、0.022、0.023、0.024、0.025、0.026、0.027、0.028、0.029、0.03等，和/或其中的任何范围。在特定实施例中，与对照相比，饲料利用效率的增加为约0.005至约0.01。在代表性实施例中，与对照相比，饲料利用效率的增加为约0.06。饲料利用效率(也称为“G:F”)是动物的平均日增重除以每天的干物质摄入量。

在一些实施例中，饲喂动物约1磅至约30磅/动物/天的本发明的动物饲料组合物。因此，在一些实施例中，饲喂动物约1磅、2磅、3磅、4磅、5磅、6磅、7磅、8磅、9磅、10磅、11磅、12磅、13磅、14磅、15磅、16磅、17磅、18磅、19磅、20磅、21磅、22磅、23磅、24磅、25磅、26磅、27磅、28磅、29磅、30磅/动物/天的本发明的动物饲料组合物等，和/或其中的任何范围。在一些实施例中，饲喂动物约9磅至约21磅/动物/天的本发明的动物饲料组合物。在一些实施例中，可以随意饲喂动物本发明的动物饲料组合物，或约一次至约三次(例如，1、2、3)/天或其任何组合。

本发明还考虑了降低捕杀的(harvested)(例如，宰杀的(slaughtered))牛中的肝脓肿的方法，所述方法包括以下步骤：a)向牛饲喂动物饲料组合物，其中所述动物饲料组合物包含来自表达重组耐热的(任选地，微生物)α-淀粉酶的转基因植物或植物部分(例如，转基因玉米植物或植物部分)的植物材料；和b)捕杀所述牛。本发明的α-淀粉酶是如本文所述的。在实施例中，转基因植物或植物部分是任选地包含玉米事件3272的转基因玉米植物或植物部分(例如，蒸汽压片的玉米籽粒)。在代表性实施例中，转基因植物或植物部分包含按重量计约1％至约100％的植物材料。该方法可以用任何牛例如肉牛(beef cattle)(阉牛(steer)和/或小母牛(heifer))和/或奶牛(dairy cow)来实践。在实施例中，牛是饲养场牛。

在本领域中已知，肝脓肿形成的频率随着饲料浓缩物含量高和草料(即粗饲料)含量低的饮食而增加。在代表性实施例中，降低肝脓肿的方法在饲喂高精饲料/低草料饮食的牛中实践。在实施例中，饮食包含小于或等于约20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％(基于干物质)的量的草料。在实施例中，饮食不包含或基本上不包含草料。在实施例中，饮食包含至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的饲料浓缩物(基于干物质)。

在实施例中，肝脓肿形成的总体频率降低(例如，降低至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％或更高)。在代表性实施例中，中度和/或重度肝脓肿的频率降低(例如，降低至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％或更高)。

本发明还提供了通过如本文所述的饲喂方法产生的一个捕杀的(即，宰杀的)牛胴体(或多个捕杀的牛胴体)，其中所述一个或多个捕杀的牛胴体包含所捕杀的动物的肝脏，并且其中与来自未饲喂来自表达重组耐热的(例如，微生物)α-淀粉酶的转基因植物或植物部分的植物材料的对照牛的胴体相比，所述一个或多个捕杀的牛胴体的肝脏中肝脓肿的发病率降低。在实施例中，肝脓肿形成的总体频率降低(例如，降低至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％或更高)。在代表性实施例中，中度和/或重度肝脓肿的频率降低(例如，降低至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％或更高)。

诸位发明人发现与不表达重组耐热的α-淀粉酶的合适的对照植物材料相比，蒸汽压片表达重组耐热的(例如，微生物)α-淀粉酶(如本文所述)的植物材料(例如，玉米籽粒)具有令人惊讶且出乎意料的优点。举例说明，诸位发明人发现，例如在相似或甚至相同的条件(例如湿度、温度等)下，表达重组耐热的α-淀粉酶的植物材料(例如，玉米籽粒)与不表达该α-淀粉酶的植物材料相比，生产率可能增加。在实施例中，这些方法产生了蒸汽压片的产品，其具有基本上相同(例如，在约5％或10％以内)或甚至改善(降低)的片厚度，基本上相同(例如，在约5％或10％以内)或甚至改善(降低的)几何平均粒度和/或基本上相同(例如，在5％或10％以内)或改善(增加的)片密度。增加的生产率具有优势，因为它可以支持饲喂增加数量的动物和/或可以转化为劳动力、水、能源(例如电和/或天然气)和/或机械成本方面的节省。

因此，本发明还提供了通过蒸汽压片包含重组耐热的(例如，微生物)α-淀粉酶的植物材料来生产动物饲料的方法。在代表性实施例中，方法包括：a)提供包含重组耐热的(例如，微生物)α-淀粉酶的转基因玉米籽粒(如本文所述的，例如，完整去壳玉米籽粒)；和b)蒸汽压片玉米籽粒以产生蒸汽压片的玉米产品；任选地，其中例如在相似或甚至同一的条件(例如，湿度、温度等)下，如与不包含重组耐热的(例如，微生物)α-淀粉酶的合适的对照玉米籽粒相比，生产率增加。在实施例中，生产率增加了至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％或50％或更高。“生产”率通常是指通过完整蒸汽压片过程和仪器(任选地包括初步洁净(preliminary cleaning)室/初步洁净步骤、初步均热(preliminarysoaking)室/初步均热步骤、随后的冷却室/随后的冷却步骤、随后的干燥室/随后的干燥步骤等)加工植物材料的比率。在实施例中，生产率具体是指通过蒸汽室和压片机(例如辊)加工植物材料的比率。

如本文所使用的，“对照”植物材料、玉米籽粒等是指不表达重组耐热的α-淀粉酶(如本文所述)的植物材料或玉米籽粒，例如对照植物材料或玉米籽粒除此之外具有与转基因植物材料或玉米籽粒相似的特性。如本文所使用的，“对照”蒸汽压片的植物产品或“对照”蒸汽压片的玉米产品分别由“对照”植物材料或玉米籽粒生产。

在代表性实施例中，在本发明的蒸汽压片方法中使用的转基因玉米籽粒包含玉米事件3272。

在实施例中，在其他方面相似的条件下，与对照植物材料相比，蒸汽压片表达重组耐热的(例如微生物)α-淀粉酶的转基因植物材料(例如玉米籽粒)的时间可能降低(例如，降低至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更高)。

在代表性实施例中，与从对照玉米籽粒生产的对照蒸汽压片的玉米产品中的淀粉的可消化率相比，蒸汽压片的植物产品(例如，玉米产品)中的淀粉的可消化率增加(例如，增加至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、15％、20％或更高)。淀粉可消化率是对饲料中有多少淀粉转化为能量并被动物使用的量度，并且可以通过本领域已知的任何方法(包括整个动物方法(例如粪便淀粉)和实验室方法(例如，如随附实例中所述))来确定。

在实施例中，与从对照植物产品产生的对照蒸汽压片的植物产品相比，通过本发明的蒸汽压片方法产生的蒸汽压片的植物产品(例如，蒸汽压片的玉米产品)的几何平均粒度降低(例如，降低至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、15％、20％或更多)。确定几何平均粒度的方法是本领域已知的(参见，例如实例)。

在实施例中，本发明的蒸汽压片方法可导致与对照蒸汽压片的植物产品相比，从表达重组耐热的(例如，微生物)α-淀粉酶的植物材料制备的蒸汽压片的植物产品(例如，玉米籽粒)的褐变的增加。在实施例中，在冷却过程中和/或之后观察到蒸汽压片的产品的褐变的增加。在实施例中，褐变(例如，非酶褐变)增加(例如，增加至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更高)。不受本发明任何理论的限制，似乎重组耐热的(例如微生物)α-淀粉酶在植物材料中产生增加浓度的可溶性糖，例如麦芽糖和其他还原糖。还原糖可以参与美拉德反应(Maillardreaction)(氨基酸与还原糖之间的化学反应产生褐色)，这可能导致与从对照植物材料生产的对照蒸汽压片的植物产品相比，表达重组耐热的(例如微生物)α-淀粉酶的蒸汽压片的植物材料(例如玉米籽粒)中的褐变增加(例如，如通过目视检查或通过实验室分析所确定)。

本发明还提供了通过如本文所述的蒸汽压片方法生产的蒸汽压片的植物产品(例如，玉米产品)。在实施例中，蒸汽压片的植物产品可包含上述讨论的一项或多项优点(例如，增加的淀粉可消化率、降低的几何平均粒度、降低的片厚度和/或增加的片密度)。在代表性实施例中，与对照蒸汽压片的植物产品相比，蒸汽压片的植物产品在饲喂给动物(例如牛)时的利用效率更高。例如，通过增重与饲料比率测量的饲料效率可能增加。本文描述了确定饲料效率和增重与饲料比率的增加的方法。例如，在实施例中，与包含对照蒸汽压片的植物产品的日粮相比，增重与饲料比率增加至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、15％或更高。在代表性实施例中，即使与具有基本相似(例如在约5％或10％内)水平的淀粉利用率的对照蒸汽压片的植物产品相比，当饲喂本发明的蒸汽压片的植物产品时，观察到饲料效率增加。在实施例中，淀粉利用率在等于或大于约48％、49％、50％和/或等于或小于约51％、52％、53％、54％或55％的范围内(包括其任意组合，只要范围的下限小于范围的上限)。在实施例中，淀粉利用率是在约48％至55％、约48％至54％、约48％至53％、约48％至52％、约49％至55％、约49％至54％、约49％至53％、约49％至52％、约50％至55％、约50％至54％、约50％至53％、约50％至52％、约51％至55％、约51％至54％、约51％至53％或约51％至52％的范围内。

淀粉利用率反映了有多少淀粉被糊化(例如，在蒸汽压片过程中)和/或以其他方式从通常包裹淀粉颗粒的蛋白质基质中(例如，在玉米籽粒中)分解出来，并且因此可用于酶促消化(例如瘤胃)。淀粉利用率可通过本领域已知的任何方法测量(例如，Sindt等人,(2000)“Refractive Index:a rapid method for determination of starchavailability in grains[折射率：一种确定谷物中淀粉利用率的快速方法],”KansasAgricultural Experiment Station Research Reports[堪萨斯州农业实验站研究报告],文章398:第0卷:第1期,可见于因特网doi.org/10.4148/2378-5977.1801)。在蒸汽压片中，淀粉利用率与片密度高度相关，在实践中通常将其用作淀粉利用率的间接量度。

本发明的动物饲料组合物可以饲喂给任何动物，例如农场动物、动物园动物、实验动物和/或伴侣动物。在一些实施例中，动物可以是但不限于牛科动物(例如，家牛(乳牛(cow)，例如奶牛和/或菜牛(beef)))、野牛、水牛)、马科动物(例如，马、驴、斑马等)、禽类(例如，鸡、鹌鹑、火鸡、鸭等；例如，家禽)、绵羊、山羊、羚羊、猪科动物(例如，猪)、犬科动物、猫科动物、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠)、兔、鱼等。在一些实施例中，动物可以是乳牛。在一些实施例中，动物可以是家禽。在其他实施例中，动物可以是鸡。在另外的实施例中，动物可以是猪。在再另外的实施例中，动物可以是猪科动物。

在另外的实施例中，本发明提供了用于增加乳畜(例如，乳牛、山羊等)产生的乳量的方法，该方法包括向所述乳畜饲喂本发明的动物饲料组合物，其中与由未提供本发明的动物饲料组合物的对照动物产生的乳量相比，由所述动物产生的乳量增加约5％至约200％。在一些实施例中，乳量的增加是在从约1至约72小时的时间段内。在其他实施例中，由所述动物产生的乳量增加约25％至约175％、约50％至约150％等。在另外的实施例中，与未饲喂本发明的动物饲料组合物的对照动物相比，所述动物产生的乳量增加约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、155％、160％、165％、170％、175％、180％、185％、190％、195％和/或200％。

如本文所使用的，术语“增加(increase、increasing、increased)”、“增强(enhance、enhanced、enhancing和enhancement)”(及其语法变体)描述了通过向动物饲喂本发明的动物饲料组合物，指定参数例如所述动物的平均日增重或所述动物的生长速率(增重)的增加，其中动物的平均日增重或生长速率增加约0.05磅/天至约10磅/天，或者通过以有效于增加所述动物的饲料利用效率的量向所述动物饲喂本发明的动物饲料组合物，饲料利用效率的增加。平均日增重、生长速率(增重)或动物饲料利用效率的这种增加可以通过将平均日增重、生长速率(增重)或动物饲料利用效率的增加与未饲喂本发明的动物饲料组合物的动物(即，对照)相比进行观察。

如本文所使用的，术语“降低(reduce、reduced、reducing、reduction)”、“减小(diminish)”、“抑制(suppress)”和“减少(decrease)”(及其语法变体)描述了例如与对照(例如，未饲喂动物饲料组合物的对照动物)相比，指定参数的减少或降低，例如，肝脓肿形成的数量和/或严重性或动物达到所希望重量而需要的天数的减少或降低。

本发明在以下实例中进行更具体地描述，这些实例仅意在是说明性的，因为其中众多改变与变体对于本领域内的普通技术人员是明显的。

实例

实例1-高淀粉酶饲料玉米对育肥肉用小母牛的饲养场性能和胴体质量的影响

饲料玉米(EFC；先正达种子公司(Syngenta Seeds,LLC))的特征是在籽粒胚乳中的高淀粉酶表达。它是最初设计的，并且现已广泛用于生产乙醇。玉米被公认为是饲喂育肥牛的最主要成分，因为淀粉提供了大部分的饮食能量。反刍动物的胰淀粉酶分泌能力有限，并且因此淀粉的瘤胃后消化是有限的(Harmon等人,2004.Can.J.Anim.Sci.[加拿大动物科学杂志]84:309)。可信的是，任何反刍动物未消化的淀粉都可能通过谷物产生的α-淀粉酶在小肠中进一步降解。这将是一个能量优势。

许多人认为蒸汽压片的玉米是最大化利用谷物能量的最佳加工方法，并且这种加工技术的改善已被广泛记录(Owens等人,1997.J.Anim.Sci.[动物科学杂志]75:868；Zinn等人,2002.J.Anim.Sci.[动物科学杂志]80:1145)。据诸位发明人所知，本文所述的研究是首次评估蒸汽压片的EFC的研究。我们的结果指示，EFC的作用增强了压片过程，从而导致更大的处理量，这可能是由于淀粉酶增加了淀粉糊化的速率。

我们在这项研究中的目的是检查饲喂育肥肉用小母牛(beef heifer)的EFC的蒸汽压片的特征，以及对饲养场性能、胴体特征以及肝脓肿患病率和严重性的影响。

材料与方法

堪萨斯州立大学机构动物护理和使用委员会(Kansas State UniversityInstitutional Animal Care and Use Committee)批准了本研究中使用的所有方案和程序。试验于12月启动，并于4月结束，在堪萨斯州立大学肉牛研究中心(Kansas StateUniversity Beef Cattle Research Center)(堪萨斯州曼哈顿(Manhattan,KS))进行。

实验设计

使用700头杂交小母牛(394kg±8.5的初始BW)进行具有2种处理的随机完整区组设计。试验中使用了分别划分区组的两批牛。6月份接收的350头小母牛以前曾用于接受检查微量矿物质补充的试验中。第二批牛于11月接收，目标是在研究开始时各批之间的初始体重(BW)相似。将小母牛按批次、然后按BW划分区组，分层，然后将其随机分配到28个泥土墙面的围栏(dirt surfaced pen)中的1个(25头动物/围栏)。在区组中随机分配处理方式，处理方式包括：作为对照的磨粉的玉米(CON)，蒸汽压片至360g/L；和Enogen饲料玉米(EFC)，蒸汽压片至390g/L。谷物处理设计为针对相似的日淀粉利用率；基于初步工作，决定将EFC压片为更大的堆密度，并以更高的磨机处理量压片以实现此目的。磨粉的玉米以大约6吨/h压片；EFC以大约9吨/h(磨机处理量增加50％)压片，从而减少蒸汽室停留时间。

动物处理、安置、和管理

到达堪萨斯州立大学肉牛研究中心后，小母牛可随意获取苜蓿干草和水。每批都在多个日期接收牛，并在牛到达后24至48小时进行处理。第1批的处理包括使用5向病毒疫苗(5-way viral vaccine)(Bovishield Gold-5；硕腾公司(Zoetis)，新泽西州帕西波尼)、7向梭菌(7-way clostridial)(Ultrabac 7/Somubac；硕腾公司(Zoetis))和抗生素(Micotil；伊兰科动物健康公司(Elanco Animal Health)，印第安纳州格林菲尔德)接种疫苗以靶向呼吸道疾病，因为这批中的小母牛年龄较小。第2批的疫苗接种相同，只是未使用Micotil处理该批的小母牛，并使用了局部杀寄生虫剂(Dectomax；硕腾公司(Zoetis))。在两组的初始处理期间，都用唯一的编号对动物进行耳标以进行识别，并记录BW。在试验开始的第1天，记录开始的BW，同时将动物分进围栏中，并接受群勃龙/雌二醇植入物(具有泰乐菌素的组分TE-IH；伊兰科动物健康公司(Elanco Animal Health))。在第84天，将小母牛重新植入(具有泰乐菌素的组分TE-200；伊兰科动物健康公司(Elanco Animal Health))，并用泼洒的杀虫剂处理(Standguard；伊兰科动物健康公司(Elanco Animal Health))。

将动物安置在泥土墙面的围栏中，这些围栏具有大约13m²的表面积/动物；栅栏和大门由钢管制成，并通过另外的电栅栏分成2个部分。相邻围栏之间共享允许随意取用的自动饮水器。使用围栏秤(pen-scale)来确定体重，并平均化围栏重量以确定每个围栏中的平均BW。

饮食制备

在试验开始后经过21天，将小母牛过渡至育肥饮食，其中使用3种中间饮食且精饲料:粗饲料的比率为：60:40、71:29、和92:8(7d/步骤)，以逐步适应。将两种谷物类型每天都使用带有46x 91cm瓦楞辊的蒸汽压片机(R&R机械公司(R&R Machine Works)；德克萨斯州达尔哈特)和能够容纳大约4.25吨玉米的蒸汽室进行蒸汽压片。谷物特征使该系统中的磨粉的玉米能够以大约6吨/h压片，而不会在辊上积聚谷物；但是，EFC能以最大的磨机容量压片，而不会积聚任何谷物(约9吨/h)。在蒸汽之前将水分施加到谷物上的系统(SarTec公司；明尼苏达州阿诺卡)使我们能够调整谷物水分调节，使两次处理的谷物干物质(DM)相等。表1示出了实验饮食的组成。在最后39天重新配制饮食，使其包括300mg/d的欧多福斯(Optaflexx)(伊兰科动物健康公司(Elanco Animal Health))。用日粮随意饲喂牛，将这些日粮混合并每天递送一次，在大约0800h开始。目视监测饲料的摄入量，并根据需要每天进行调整，以便每天早晨在料槽(bunks)中仅残留微量的饲料。根据需要收集残屑以解释未消耗的饲料，并将残屑在55℃干燥48h以精确调节干物质摄入量(DMI)。每周或在到达时收集每种饲料成分的子样品，将其在55℃干燥48h，并且然后混合成每月样品，随后对每月样品的营养组成进行分析(SDK实验室(SDK Labs)；堪萨斯州哈钦森)。

表1.饲喂给肉用小母牛的育肥饮食的组成¹

¹在最后39天，在饲料中，以300mg/d的比率，将欧多福斯(伊兰科动物健康公司(Elanco Animal Health))配制进饮食中。

²配制以在总饮食DM中提供1.76mg/kg的乙酸美仑孕酮，与作为载体的玉米粉和1％牛脂共混。

³含有尿素、盐、石灰石、微量矿物质/维生素预混料、KCl以提供(以总饮食DM计)0.15mg/kg钴、10mg/kg铜、0.50mg/kg碘、20mg/kg锰、0.10mg/kg硒、30mg/kg锌、2205IU/kg维生素A、22IU/kg维生素E、和36.4mg/kg莫能菌素(瘤胃素(Rumensin)，伊兰科动物健康公司(Elanco Animal Health))。

⁴总饮食中成分的分析的营养组成(SDK实验室)。

⁵CP，粗蛋白

⁶ADF，酸性洗涤纤维

⁷EE，醚提取物

捕杀

在第136天，在运送去宰杀之前，将所有动物在围栏秤上称重。通过将每个围栏中的平均BW乘以0.96(4％解释为旅行期间的缩水)来计算最终BW。将小母牛装载到卡车上，并运送大约440km到内华达州列克星敦的一家商业屠场。堪萨斯州立大学训练有素的人员在屠杀当天收集的记录是：使用Elanco评分系统(肝脓肿技术信息AI 6288；伊兰科动物健康公司(Elanco Animal Health))，杀死顺序内的动物识别、热胴体重(HCW)、和肝脓肿患病率和严重性。肝脏评分给出以下等级：0(无脓肿)、或A^-、A、或A⁺分别代表轻度、中度、和重度肝脓肿。经过24h的冷却期后，收集了LM区域、第12根肋骨皮下脂肪、大理石纹得分、USDA产量等级和USDA质量等级数据。屠宰率通过将饲养场围栏内的HCW平均化，并且除以最终缩水的BW来确定。

谷物特征

测量了两种谷物类型的DM、淀粉利用率、和粒度的每天观察值。通过在设置为105℃的强制对流型烤箱中干燥24h来确定谷物DM。如果发生DM变化，我们将相应地调整SarTec系统施加的水分量，以使玉米类型之间的水分含量相等。通过将25g玉米片浸渍在加热到55℃的100ml 2.5％淀粉葡萄糖苷酶溶液中15min来确定淀粉利用率(Sindt等人,2006.J.Anim.Sci.[动物科学杂志]84:424)。然后将液体级分过滤，并在手持折射仪上观察可溶性糖的百分比。然后将可溶物百分比和DM放入确定淀粉利用率的回归方程式中。粒度通过以下来确定：称量大约200g压片的玉米，将其倒在一组筛(筛孔尺寸依次减小为：4750、3350、2360、1700、1180、850、600μm)和实心秤盘上。将堆放入Ro-Tap轨道振动器中，旋转攻丝循环运行5min。清洁每个单独的筛，并且称重颗粒。使用Pfost和Headley描述的公式(Methods of determining and expressing particle size[确定和表达粒度的方法].于:H.Pfost(编辑),Feed Manufacturing Technology II-Appendix C[饲料制造技术II-附录C].Am.Feed Manufacturers Assoc.[美国饲料制造商协会]1976:512-520)在电子表格(Scott和Herrman,2002.Evaluating Particle Size[评估粒度].Kansas StateUniversity Department of Grain Science and Industry[堪萨斯州立大学谷物科学与工业系].MF-2051,1-6)中计算几何粒度。

统计分析

BW、DMI、平均日增重(ADG)和饲料效率的分析使用了统计分析系统的MIXED程序(9.4版SAS；SAS研究所有限公司(SAS Inst.Inc.)，北卡罗来纳州卡里)，以围栏为实验单位，处理为固定效应，并且以区组作为随机效应。使用SAS的GLIMMIX程序分析分类胴体特性(USDA质量等级、USDA产量等级以及肝脓肿患病率和严重性)，其中使用了与上述相同的参数。

结果-

出于与处理无关的原因，将4头动物从CON组中移出；3头因产犊，且1头被发现因呼吸道疾病死亡。出于与处理无关的原因，还将四头动物从EFC组中移出；1头因细菌感染，1头因呼吸道疾病，1头因皱胃异位，且1头因髋部损伤，所有这些都导致严重的体重减轻。

谷物特征

表2示出了CON和EFC之间营养组成的实验室分析(SDK实验室)。Enogen饲料玉米含有更高的ADF(P<0.01)和钾(P＝0.03)组分。Enogen饲料玉米还具有更大的脂肪含量(以醚提取物[EE]为指标)的趋势(P＝0.06)。对于压片的谷物，谷物中蛋白质、钙或磷没有明显差异。

表2.磨粉的玉米和Enogen饲料玉米的营养分析

表3列出了谷物特征。通过设计，两种玉米类型的水分含量在蒸汽压片后没有差异(P＝0.55)，并且淀粉利用率相似，尽管EFC有趋势(P＝0.08)产生更大的淀粉利用率值。即使将EFC压片为更大的堆密度(390与360g/L)，它仍然导致较小的平均粒度(P<0.01)。

表3.压片的谷物的特征

饲养场性能

表4中示出了EFC对饲养场小母牛的增重和效率的影响。试验开始时BW没有差异(P＝0.52)，但饲喂EFC的牛在最后一天较重(P<0.01)。因此，在136天期间，Enogen牛的ADG有所改善(P<0.01)。两种处理之间的DMI无差异(P＝0.78)，这导致饲喂EFC的牛的饲料效率(谷物:饲料，G:F)提高5％(P<0.01)。

表4.使用磨粉的玉米或EFC育肥的小母牛的饲养场性能

胴体特征

表5示出了EFC对胴体品质的影响。用EFC饲喂的牛的改善的饲养场日增重转化为胴体重量，因为小母牛产生大约多6kg的胴体(P<0.01)。最长肌(LM)区域或第12根肋骨脂肪没有出现差异。CON饮食产生的胴体具有较高的大理石纹得分(P＝0.04)，但是这不会对USDA质量等级产生影响(P>0.33)。用EFC饲喂的小母牛也有产生更多USDA产量等级3胴体的趋势(P＝0.09)。

表5.使用磨粉的玉米或EFC育肥的肉用小母牛的胴体特征

600-699＝中等程度的大理石纹。

表6示出了肝脓肿的患病率和严重性。请注意，实验饮食中未包含防止肝脓肿的泰乐菌素(表1)。用EFC饲喂的育肥肉用小母牛在宰杀时的总肝脓肿要比CON对应物少(P＝0.03)。这一差异的出现是由于EFC组的中度肝脓肿(P＝0.03)和重度肝脓肿(P＝0.11)较少。肝脓肿对牛增重(Potter等人,1985.J.Anim.Sci.[动物科学杂志]61:1058)的有害影响造成较轻、较差质量的胴体(Brown和Lawrence,2010.J.Anim.Sci.[动物科学杂志]88:4037)，这已得到公认。图1示出了每种处理的肝脓肿严重性与HCW之间的关系。饮食(P<0.01)、肝脓肿严重性(P<0.01)和处理与肝脓肿相互作用的趋势(P＝0.09)造成影响。EFC组维持较重的胴体，并且当脓肿的严重性增加时没有显示与在CON牛中观察到的相同的HCW降低。尽管目前尚不清楚蒸汽压片的EFC对肝脓肿的作用方式，但其意义可能是重大的，这是因为越来越不提倡使用抗生素造成需要新的预防肝脓肿的方法。

表6.用磨粉的玉米或EFC饲喂的小母牛中的肝脓肿患病率和严重性

将需要更多关于EFC淀粉酶表达特性的研究，以更好地了解描述我们观察到的增强的动物性能的作用方式。本文阶段尚不清楚，消化优势是在瘤胃中还是在瘤胃后发生。我们确实相信EFC中高淀粉酶的表达可能导致了更高产的压片过程，在该过程中，淀粉糊化速度更快，并且能够以更大的处理量和降低的加工水平(更大的堆密度)压片。

意义

生产者可以有利地使用Enogen饲料玉米来降低与蒸汽压片相关的生产成本。减少蒸汽的使用、减少谷物的加工、增加磨机处理量(在本研究中为50％)，并且因此降低成本和劳动力都是将饲料递送到料槽之前产生的益处。磨机处理量、ADG、饲料效率、HCW的改善和肝脓肿减轻似乎是使用蒸汽压片的EFC的重大益处。

实例2-淀粉酶玉米共混物经过不同的水分和蒸汽处理后压片的消化特征。

谷物处理

研究谷物的混合物是使用淀粉酶完整去壳玉米、以及磨粉的完整去壳玉米的单一来源作为对照制备的。将淀粉酶谷物与磨粉谷物共混，比例为0:100、25:75、50:50、75:25、和100:0。将样品(1.8kg)放入3.8-L有螺旋盖的玻璃瓶中。以0％、3％或6％(w/w)添加水，将瓶密封，并且随后水平放置在机械辊装置上，该装置缓慢旋转瓶以在整个回火期间分散水。装满谷物的瓶在辊上停留1小时，以确保谷物混合均匀并最大程度地暴露于水分处理。60分钟后，将谷物混合物从瓶中取出并且放入带孔的不锈钢篮中，然后将这些不锈钢篮放入配备有12个独立腔室的蒸汽桌中。将样品用蒸汽调节15、30或45分钟，从而完成5x 3x 3阶乘处理安排(5种谷物混合物、3种水分含量和3种水分调节时间)。45个处理中的每个均一式两份制备，总共制备90个样品。蒸汽水分调节后，立即使用双驱动辊磨机(R&R机械公司(R&RMachine))将样品压片，将辊设定为目标密度360g/L(28磅/bu)。通过辊上方的输送系统将样品放入压片机中，然后立即收集在辊下的压片的产品。立即使用温彻斯特杯(Winchestercup)确定堆密度，并且然后将样品冷冻以用于将来的粒度分析。此后不久，使用酶法测定，确定淀粉利用率。将另一部分谷物放入105℃的强制对流型烤箱中24小时以确定水分含量。将剩余的样品(大约700g)冷冻并保留以备将来进行体外和原位分析。

粒度分析

使用配备有一组八个筛和底部秤盘的RoTap设备，将大约200g的每种谷物用于表征粒度分布。将筛自上而下堆叠，筛孔尺寸逐渐减小，为9.50、6.70、4.75、3.35、2.36、1.70和1.18mm，并且放在秤盘之上用于收集细颗粒。将压片的玉米样品添加到顶部筛中，并且然后将堆放在Ro-Tap轨道振动器的床上5分钟。搅拌后，将每个筛的内容物取出并称重，并如Scott和Herrman所述(Scott,B.,T.Herrman.2002.Evaluating Particle Size[评估粒度].Kansas State University Department of Grain Science and Industry[堪萨斯州立大学谷物科学与工业系].MF-2051,1-6)，计算每种谷物的平均几何直径(Dgw)和标准偏差(Sgw)。

淀粉利用率

使用Sindt(Sindt,J.J.2004.Factors influencing utilization of steam-flaked corn[影响蒸汽压片的玉米利用的因素].博士论文，曼哈顿堪萨斯州立大学)的酶法程序确定每个样品的淀粉利用率。将乙酸盐缓冲液中的淀粉葡萄糖苷酶(西格玛化学公司(Sigma Chemical Company)，密苏里州圣路易斯)在水浴中预热至55℃。将压片的谷物样品(25g)与100mL预热的缓冲液合并，并在55℃的水浴中孵育15min。孵育后，将内容物通过滤纸过滤，并将几滴无颗粒的滤液置于手持折射仪的棱镜上。折射率给出水溶性组分的量度，并且因此是酶水解程度的指标中的有用指标。获得的值(可溶物百分比)是基于干物质来表示的，以产生淀粉利用率的估算值。

原位干物质缺失

称量大约2g(基于干物质)的每种压片的样品并将其密封到Dacron袋中，一式三份制备。在同一周的3天进行测量。将样品分配到区组中6个插管的泽西阉牛(Jersey steer)中，从而解释对最终缺失值的动物影响。将袋悬挂在插管的阉牛的瘤胃中14个小时，然后将其取出，彻底冲洗并在强制对流型烤箱中于105℃干燥24小时。然后称量袋重，减去袋的重量，并将干燥的残余物表示为孵育前干重的百分比。原位干物质缺失百分比(ISDMD)计算如下：

体外气体产生和VFA曲线

使用以瘤胃液作为接种物的体外程序来评估谷物对消化的敏感性，每个样品一式两份制备(总共180次观察)。每次运行中使用两个没有底物(空白)的瓶，以解释瘤胃液对培养物中挥发性脂肪酸(VFA)含量的影响。使用Ankom RF气体产生监控系统(Ankom科技公司(Ankom Technologies)，纽约州马其顿)来监测发酵曲线。将三克加工过的谷物放入250-mL有螺旋盖的瓶中，添加10mL过滤的瘤胃液和140mL麦氏缓冲液(McDougall’s buffer)，在瓶中安装Ankom射频压力传感模块，将培养物置于摇动孵育器中在39℃持续24小时，并在整个孵育过程中每隔15分钟记录一次瓶内的气压。24小时后，确定培养物的pH，并将4mL上清液与1mL 25％偏磷酸溶液在闪烁瓶中合并，随后将其冷冻以备将来使用。随后将样品解冻、用涡旋混合器均质化，将上清液转移至微量离心管中，将内容物以15,ooo x g离心15分钟，并且将无颗粒的上清液转移至色谱瓶中以通过气相色谱法测量VFA。使用配备Nukol毛细管柱(15m x 0.35mm，d_f 0.50μm)的Aglient 7890气相色谱仪(安捷伦科技公司(AgilentTechnologies)，加利福尼亚州圣克拉拉)测量挥发性脂肪酸，得到乙酸盐、丙酸盐、异丁酸盐、丁酸盐、异戊酸盐、戊酸盐、异己酸盐、己酸盐和庚酸盐的浓度。

统计分析

使用统计分析系统(9.4版SAS)的MIXED模型程序来分析数据。固定效应包括玉米淀粉酶百分比、增加的水分百分比、蒸汽水分调节时间以及所有2向和3向相互作用。区组用作随机效应。另外的正交对比允许检查处理之间的线性和二次效应。P值小于0.05认为处理效果是显著的。

对于任何分析，两次处理之间均无显著的二向或三向效应。

粒度分析

饲喂反刍动物时，粒度在谷物的消化率和发酵特性中起着重要的作用。谷物混合物中淀粉酶玉米的包含百分比中存在线性响应(P<0.01)。淀粉酶玉米的百分比越高，平均粒度越低。水分处理对粒度没有影响(P>0.10)。谷物的蒸汽水分调节时间引起二次效应(P<0.01)，其中蒸汽暴露30min导致最低的平均粒度。蒸汽的这种二次效应反映了在随后的测定中所看到的结果。

淀粉利用率

淀粉利用率测定通常用于表征压片的谷物对消化的敏感性。纯淀粉酶谷物导致最大的淀粉利用率(52.7％)，并且随着用磨粉的玉米稀释淀粉酶玉米，淀粉利用率线性降低(P<0.01)，这表明混合物中淀粉酶玉米级分中的淀粉酶相对较少地影响非淀粉酶玉米，即，混合物的磨粉的谷物组分。

淀粉利用率随水分量的增加而线性增加(P<0.01)。在另一方面，蒸汽水分调节时间导致二次效应(P<0.01)，其中30-min的水分调节处理可产生最大的淀粉利用率。

原位干物质缺失

谷物混合物中的淀粉酶玉米含量对压片的谷物混合物的原位消化率具有显著的影响(淀粉酶玉米含量的线性影响；P<0.01)。缺少非线性影响表明，淀粉酶玉米来源的淀粉酶的作用基本上仅限于谷物本身，并且混合物中没有明显向非淀粉酶玉米谷物迁移。

与淀粉酶玉米含量的作用相比，回火阶段期间添加水分和蒸汽水分调节时间对谷物原位干物质缺失的影响相对较小。水分调节时间倾向于以二次方式影响原位干物质缺失(P＝0.12)；而且这种关系与淀粉利用率明显相似，其中蒸汽水分调节30分钟产生最大的谷物原位缺失。

体外气体产生和VFA曲线

最终底物pH是体外培养的总体发酵活性的有用指标，其中较低的测量值指示更大的有机酸产量，并且因此指示增加的谷物的微生物消化。培养物的最终pH与掺入混合物中的淀粉酶玉米谷物的量成正比(线性影响P<0.01)。观察到针对蒸汽水分调节时间的明显的二次效应(P<0.01)，其中30-min产生了最低的培养物pH。在回火阶段期间添加水分似乎对体外培养物的最终pH几乎没有影响。

如预期，VFA产量的变化与培养物最终pH的差异相一致。分析样品的己酸盐、异己酸盐和庚酸盐；但是，未检测到这些次要VFA中的任一种。表7总结了由不同比例的淀粉酶玉米和磨粉的玉米组成的压片的谷物的VFA曲线。

表7.以饲喂混合蒸汽压片的谷物的混合瘤胃微生物的体外培养物作为底物，淀粉酶玉米含量对VFA产量的影响。

VFA(乙酸盐、丙酸盐、戊酸盐、异戊酸盐和总VFA)的产量随淀粉酶玉米谷物比例的增加而线性增加(P<0.01)。这指示与磨粉的玉米相比，淀粉酶玉米谷物具有更广泛的微生物消化。VFA为反刍动物的维持和生产目的贡献了绝大部分能量，并且微生物消化的增加通常与淀粉总肠道消化的增加相一致。因此，更容易被瘤胃微生物消化的谷物很可能具有更大的总肠道消化，并且因此可以产生性能或效率的改善。增加淀粉酶玉米谷物的比例也降低了乙酸盐:丙酸盐的比率(P<0.01)。这是理想的效果，因为乙酸盐:丙酸盐的向下改变通常与甲烷生成的减少相关，这在能量上是更有利的。

体外气体产生是总发酵活性的良好指标，其中二氧化碳和甲烷是瘤胃发酵的主要气体副产物。每隔6小时分析一次处理之间的统计差异。在第6小时，0％淀粉酶玉米谷物开始分离，这显著低于50％、75％和100％处理。在第12小时，0％和25％的淀粉酶玉米水平与所有其他处理不同；50％的与100％不同，而75％与100％之间的差异并不显著。第18小时反映的处理差异与第12小时完全相同。在发酵的24小时内，使用50％淀粉酶玉米处理可以弥补差距，并且在75％和100％之间不再是可以统计区分的。

与用作对照的磨粉的玉米相比，淀粉酶玉米谷物似乎更易消化，这导致淀粉利用率、体外和原位消化以及最终产物的形成的极大改善。对混合物中淀粉酶玉米谷物的应答与淀粉酶玉米含量成正比，这表明淀粉酶玉米来源的淀粉酶对混合物中的另一种谷物几乎没有影响或没有影响。淀粉酶玉米为通过蒸汽压片加工谷物赋予了显著的优势。

以上所述情形是用作说明本发明的，并且不应当解释为本发明的限制。本发明是由以下权利要求书限定的，这些权利要求的等效物被包括在其中。

本文引用的所有的公开、专利申请、专利以及其他参考文件对于引用中提及的有关句子和/或段落的传授内容通过引用以其全文并入本文。

序列表

<110> SYNGENTA PARTICIPATIONS AG

Drouillard, James S.

Horton, Lucas Michael

<120> 动物饲料组合物及使用方法

<130> 81324-WO-REG-ORG-P-1

<150> US 62/492609

<151> 2017-05-01

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 436

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 合成

<400> 1

Met Ala Lys Tyr Leu Glu Leu Glu Glu Gly Gly Val Ile Met Gln Ala

1 5 10 15

Phe Tyr Trp Asp Val Pro Ser Gly Gly Ile Trp Trp Asp Thr Ile Arg

20 25 30

Gln Lys Ile Pro Glu Trp Tyr Asp Ala Gly Ile Ser Ala Ile Trp Ile

35 40 45

Pro Pro Ala Ser Lys Gly Met Ser Gly Gly Tyr Ser Met Gly Tyr Asp

50 55 60

Pro Tyr Asp Tyr Phe Asp Leu Gly Glu Tyr Tyr Gln Lys Gly Thr Val

65 70 75 80

Glu Thr Arg Phe Gly Ser Lys Gln Glu Leu Ile Asn Met Ile Asn Thr

85 90 95

Ala His Ala Tyr Gly Ile Lys Val Ile Ala Asp Ile Val Ile Asn His

100 105 110

Arg Ala Gly Gly Asp Leu Glu Trp Asn Pro Phe Val Gly Asp Tyr Thr

115 120 125

Trp Thr Asp Phe Ser Lys Val Ala Ser Gly Lys Tyr Thr Ala Asn Tyr

130 135 140

Leu Asp Phe His Pro Asn Glu Leu His Ala Gly Asp Ser Gly Thr Phe

145 150 155 160

Gly Gly Tyr Pro Asp Ile Cys His Asp Lys Ser Trp Asp Gln Tyr Trp

165 170 175

Leu Trp Ala Ser Gln Glu Ser Tyr Ala Ala Tyr Leu Arg Ser Ile Gly

180 185 190

Ile Asp Ala Trp Arg Phe Asp Tyr Val Lys Gly Tyr Gly Ala Trp Val

195 200 205

Val Lys Asp Trp Leu Asn Trp Trp Gly Gly Trp Ala Val Gly Glu Tyr

210 215 220

Trp Asp Thr Asn Val Asp Ala Leu Leu Asn Trp Ala Tyr Ser Ser Gly

225 230 235 240

Ala Lys Val Phe Asp Phe Pro Leu Tyr Tyr Lys Met Asp Ala Ala Phe

245 250 255

Asp Asn Lys Asn Ile Pro Ala Leu Val Glu Ala Leu Lys Asn Gly Gly

260 265 270

Thr Val Val Ser Arg Asp Pro Phe Lys Ala Val Thr Phe Val Ala Asn

275 280 285

His Asp Thr Asp Ile Ile Trp Asn Lys Tyr Pro Ala Tyr Ala Phe Ile

290 295 300

Leu Thr Tyr Glu Gly Gln Pro Thr Ile Phe Tyr Arg Asp Tyr Glu Glu

305 310 315 320

Trp Leu Asn Lys Asp Lys Leu Lys Asn Leu Ile Trp Ile His Asp Asn

325 330 335

Leu Ala Gly Gly Ser Thr Ser Ile Val Tyr Tyr Asp Ser Asp Glu Met

340 345 350

Ile Phe Val Arg Asn Gly Tyr Gly Ser Lys Pro Gly Leu Ile Thr Tyr

355 360 365

Ile Asn Leu Gly Ser Ser Lys Val Gly Arg Trp Val Tyr Val Pro Lys

370 375 380

Phe Ala Gly Ala Cys Ile His Glu Tyr Thr Gly Asn Leu Gly Gly Trp

385 390 395 400

Val Asp Lys Tyr Val Tyr Ser Ser Gly Trp Val Tyr Leu Glu Ala Pro

405 410 415

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420 425 430

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435

<210> 2

<211> 1308

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成

<400> 2

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<210> 3

<211> 2223

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成

<400> 3

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gacgtgcaga tcgttctgct gggcacgggc aagaagaagt tcgagcgcat gctcatgagc 1740

gccgaggaga agttcccagg caaggtgcgc gccgtggtca agttcaacgc ggcgctggcg 1800

caccacatca tggccggcgc cgacgtgctc gccgtcacca gccgcttcga gccctgcggc 1860

ctcatccagc tgcaggggat gcgatacgga acgccctgcg cctgcgcgtc caccggtgga 1920

ctcgtcgaca ccatcatcga aggcaagacc gggttccaca tgggccgcct cagcgtcgac 1980

tgcaacgtcg tggagccggc ggacgtcaag aaggtggcca ccaccttgca gcgcgccatc 2040

aaggtggtcg gcacgccggc gtacgaggag atggtgagga actgcatgat ccaggatctc 2100

tcctggaagg gccctgccaa gaactgggag aacgtgctgc tcagcctcgg ggtcgccggc 2160

ggcgagccag gggttgaagg cgaggagatc gcgccgctcg ccaaggagaa cgtggccgcg 2220

ccc 2223

<210> 4

<211> 3285

<212> DNA

<213> Aspergillus shirousami

<400> 4

gccaccccgg ccgactggcg ctcccagtcc atctacttcc tcctcaccga ccgcttcgcc 60

cgcaccgacg gctccaccac cgccacctgc aacaccgccg accagaagta ctgcggcggc 120

acctggcagg gcatcatcga caagctcgac tacatccagg gcatgggctt caccgccatc 180

tggatcaccc cggtgaccgc ccagctcccg cagaccaccg cctacggcga cgcctaccac 240

ggctactggc agcaggacat ctactccctc aacgagaact acggcaccgc cgacgacctc 300

aaggccctct cctccgccct ccacgagcgc ggcatgtacc tcatggtgga cgtggtggcc 360

aaccacatgg gctacgacgg cgccggctcc tccgtggact actccgtgtt caagccgttc 420

tcctcccagg actacttcca cccgttctgc ttcatccaga actacgagga ccagacccag 480

gtggaggact gctggctcgg cgacaacacc gtgtccctcc cggacctcga caccaccaag 540

gacgtggtga agaacgagtg gtacgactgg gtgggctccc tcgtgtccaa ctactccatc 600

gacggcctcc gcatcgacac cgtgaagcac gtgcagaagg acttctggcc gggctacaac 660

aaggccgccg gcgtgtactg catcggcgag gtgctcgacg tggacccggc ctacacctgc 720

ccgtaccaga acgtgatgga cggcgtgctc aactacccga tctactaccc gctcctcaac 780

gccttcaagt ccacctccgg ctcgatggac gacctctaca acatgatcaa caccgtgaag 840

tccgactgcc cggactccac cctcctcggc accttcgtgg agaaccacga caacccgcgc 900

ttcgcctcct acaccaacga catcgccctc gccaagaacg tggccgcctt catcatcctc 960

aacgacggca tcccgatcat ctacgccggc caggagcagc actacgccgg cggcaacgac 1020

ccggccaacc gcgaggccac ctggctctcc ggctacccga ccgactccga gctgtacaag 1080

ctcatcgcct ccgccaacgc catccgcaac tacgccatct ccaaggacac cggcttcgtg 1140

acctacaaga actggccgat ctacaaggac gacaccacca tcgccatgcg caagggcacc 1200

gacggctccc agatcgtgac catcctctcc aacaagggcg cctccggcga ctcctacacc 1260

ctctccctct ccggcgccgg ctacaccgcc ggccagcagc tcaccgaggt gatcggctgc 1320

accaccgtga ccgtgggctc cgacggcaac gtgccggtgc cgatggccgg cggcctcccg 1380

cgcgtgctct acccgaccga gaagctcgcc ggctccaaga tatgctcctc ctccaagccg 1440

gccaccctcg actcctggct ctccaacgag gccaccgtgg cccgcaccgc catcctcaac 1500

aacatcggcg ccgacggcgc ctgggtgtcc ggcgccgact ccggcatcgt ggtggcctcc 1560

ccgtccaccg acaacccgga ctacttctac acctggaccc gcgactccgg catcgtgctc 1620

aagaccctcg tggacctctt ccgcaacggc gacaccgacc tcctctccac catcgagcac 1680

tacatctcct cccaggccat catccagggc gtgtccaacc cgtccggcga cctctcctcc 1740

ggcggcctcg gcgagccgaa gttcaacgtg gacgagaccg cctacgccgg ctcctggggc 1800

cgcccgcagc gcgacggccc ggccctccgc gccaccgcca tgatcggctt cggccagtgg 1860

ctcctcgaca acggctacac ctccgccgcc accgagatcg tgtggccgct cgtgcgcaac 1920

gacctctcct acgtggccca gtactggaac cagaccggct acgacctctg ggaggaggtg 1980

aacggctcct ccttcttcac catcgccgtg cagcaccgcg ccctcgtgga gggctccgcc 2040

ttcgccaccg ccgtgggctc ctcctgctcc tggtgcgact cccaggcccc gcagatcctc 2100

tgctacctcc agtccttctg gaccggctcc tacatcctcg ccaacttcga ctcctcccgc 2160

tccggcaagg acaccaacac cctcctcggc tccatccaca ccttcgaccc ggaggccggc 2220

tgcgacgact ccaccttcca gccgtgctcc ccgcgcgccc tcgccaacca caaggaggtg 2280

gtggactcct tccgctccat ctacaccctc aacgacggcc tctccgactc cgaggccgtg 2340

gccgtgggcc gctacccgga ggactcctac tacaacggca acccgtggtt cctctgcacc 2400

ctcgccgccg ccgagcagct ctacgacgcc ctctaccagt gggacaagca gggctccctg 2460

gagatcaccg acgtgtccct cgacttcttc aaggccctct actccggcgc cgccaccggc 2520

acctactcct cctcctcctc cacctactcc tccatcgtgt ccgccgtgaa gaccttcgcc 2580

gacggcttcg tgtccatcgt ggagacccac gccgcctcca acggctccct ctccgagcag 2640

ttcgacaagt ccgacggcga cgagctgtcc gcccgcgacc tcacctggtc ctacgccgcc 2700

ctcctcaccg ccaacaaccg ccgcaactcc gtggtgccgc cgtcctgggg cgagacctcc 2760

gcctcctccg tgccgggcac ctgcgccgcc acctccgcct ccggcaccta ctcctccgtg 2820

accgtgacct cctggccgtc catcgtggcc accggcggca ccaccaccac cgccaccacc 2880

accggctccg gcggcgtgac ctccacctcc aagaccacca ccaccgcctc caagacctcc 2940

accaccacct cctccacctc ctgcaccacc ccgaccgccg tggccgtgac cttcgacctc 3000

accgccacca ccacctacgg cgagaacatc tacctcgtgg gctccatctc ccagctcggc 3060

gactgggaga cctccgacgg catcgccctc tccgccgaca agtacacctc ctccaacccg 3120

ccgtggtacg tgaccgtgac cctcccggcc ggcgagtcct tcgagtacaa gttcatccgc 3180

gtggagtccg acgactccgt ggagtgggag tccgacccga accgcgagta caccgtgccg 3240

caggcctgcg gcgagtccac cgccaccgtg accgacacct ggcgc 3285

<210> 5

<211> 1320

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 合成

<400> 5

atggcgaagc acttggctgc catgtgctgg tgcagcctcc tagtgcttgt actgctctgc 60

ttgggctccc agctggccca atcccaggtc ctcttccagg ggttcaactg ggagtcgtgg 120

aagaagcaag gtgggtggta caactacctc ctggggcggg tggacgacat cgccgcgacg 180

ggggccacgc acgtctggct cccgcagccg tcgcactcgg tggcgccgca ggggtacatg 240

cccggccggc tctacgacct ggacgcgtcc aagtacggca cccacgcgga gctcaagtcg 300

ctcaccgcgg cgttccacgc caagggcgtc cagtgcgtcg ccgacgtcgt gatcaaccac 360

cgctgcgccg actacaagga cggccgcggc atctactgcg tcttcgaggg cggcacgccc 420

gacagccgcc tcgactgggg ccccgacatg atctgcagcg acgacacgca gtactccaac 480

gggcgcgggc accgcgacac gggggccgac ttcgccgccg cgcccgacat cgaccacctc 540

aacccgcgcg tgcagcagga gctctcggac tggctcaact ggctcaagtc cgacctcggc 600

ttcgacggct ggcgcctcga cttcgccaag ggctactccg ccgccgtcgc caaggtgtac 660

gtcgacagca ccgcccccac cttcgtcgtc gccgagatat ggagctccct ccactacgac 720

ggcaacggcg agccgtccag caaccaggac gccgacaggc aggagctggt caactgggcg 780

caggcggtgg gcggccccgc cgcggcgttc gacttcacca ccaagggcgt gctgcaggcg 840

gccgtccagg gcgagctgtg gcgcatgaag gacggcaacg gcaaggcgcc cgggatgatc 900

ggctggctgc cggagaaggc cgtcacgttc gtcgacaacc acgacaccgg ctccacgcag 960

aactcgtggc cattcccctc cgacaaggtc atgcagggct acgcctatat cctcacgcac 1020

ccaggaactc catgcatctt ctacgaccac gttttcgact ggaacctgaa gcaggagatc 1080

agcgcgctgt ctgcggtgag gtcaagaaac gggatccacc cggggagcga gctgaacatc 1140

ctcgccgccg acggggatct ctacgtcgcc aagattgacg acaaggtcat cgtgaagatc 1200

gggtcacggt acgacgtcgg gaacctgatc ccctcagact tccacgccgt tgcccctggc 1260

aacaactact gcgtttggga gaagcacggt ctgagagttc cagcggggcg gcaccactag 1320

Claims (20)

1.一种降低捕杀的牛中的肝脓肿的方法，所述方法包括以下步骤：

a)向牛饲喂动物饲料组合物，其中所述动物饲料组合物包含来自表达重组耐热的微生物α-淀粉酶的转基因植物或植物部分的植物材料；和

b)捕杀所述牛。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述微生物α-淀粉酶包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少80％同一性的多肽或由与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQID NO:5的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列编码的多肽。

3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述转基因植物或植物部分包含按重量计约1％至约100％的植物材料。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述植物材料构成按重量计从约5％至约100％的动物饲料组合物。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述植物材料是玉米。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述玉米包含玉米事件3272。

7.如权利要求5或权利要求6所述的方法，其中所述玉米是蒸汽压片的。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述牛是肉牛。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述牛是饲养场牛。

10.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述牛是奶牛。

11.一种通过如权利要求1-10中任一项所述的方法产生的捕杀的牛胴体，其中所述捕杀的牛胴体包含所捕杀的动物的肝脏，并且其中与来自对照牛的胴体相比，所述捕杀的牛胴体的肝脓肿的发病率降低，所述对照牛未饲喂来自表达重组耐热的微生物α-淀粉酶的转基因植物或植物部分的植物材料。

12.一种产生动物饲料的方法，所述方法包括：

a)提供包含重组耐热的微生物α-淀粉酶的转基因玉米籽粒；和

b)蒸汽压片所述玉米籽粒以产生蒸汽压片的玉米产品。

13.如权利要求12所述的方法，其中与不包含重组耐热的微生物α-淀粉酶的对照玉米籽粒相比，生产率增加。

14.如权利要求12或权利要求13所述的方法，其中与所述对照玉米籽粒相比，蒸汽压片所述转基因玉米籽粒的时间降低。

15.如权利要求12至14中任一项所述的方法，其中与从所述对照玉米籽粒产生的对照蒸汽压片的玉米产品中的淀粉的可消化率相比，蒸汽压片的玉米产品中的淀粉的可消化率增加。

16.如权利要求12至15中任一项所述的方法，其中与从所述对照玉米籽粒产生的对照蒸汽压片的玉米产品相比，蒸汽压片的玉米产品的几何平均粒度降低。

17.如权利要求12至16中任一项所述的方法，其中所述转基因玉米籽粒包含玉米事件3272。

18.一种通过如权利要求12至17中任一项所述的方法产生的蒸汽压片的玉米产品。

19.如权利要求18所述的蒸汽压片的玉米产品，其中与对照蒸汽压片的玉米产品相比，蒸汽压片的玉米产品在饲喂给牛时的利用效率更高。

20.如权利要求19所述的蒸汽压片的玉米产品，其中与具有基本上相似的淀粉利用率的对照蒸汽压片的玉米产品相比，蒸汽压片的玉米产品在饲喂给牛时的利用效率更高。