CN110548144A - PPARγ激动剂与NKT细胞活化剂在肿瘤治疗中的用途 - Google Patents

PPARγ激动剂与NKT细胞活化剂在肿瘤治疗中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN110548144A
CN110548144A CN201810543973.8A CN201810543973A CN110548144A CN 110548144 A CN110548144 A CN 110548144A CN 201810543973 A CN201810543973 A CN 201810543973A CN 110548144 A CN110548144 A CN 110548144A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nkt
cells
ppar
nkt cells
tumor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810543973.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110548144B (zh
Inventor
白丽
傅思成
田辰曦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Science and Technology of China USTC
Original Assignee
University of Science and Technology of China USTC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Science and Technology of China USTC filed Critical University of Science and Technology of China USTC
Priority to CN201810543973.8A priority Critical patent/CN110548144B/zh
Publication of CN110548144A publication Critical patent/CN110548144A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110548144B publication Critical patent/CN110548144B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/385—Hormones with nuclear receptors of the family of the retinoic acid recptor, e.g. RAR, RXR; Peroxisome proliferator-activated receptor [PPAR]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及PPARγ激动剂与NKT细胞和/或NKT细胞活化剂在肿瘤治疗中的用途。本发明涉及一种药物组合物或试剂盒，其包含PPARγ激动剂和NKT细胞活化剂和/或NKT细胞，和药用载体。本发明还涉及通过PPARγ调节剂调节NKT细胞的活性的方法。本发明通过PPARγ激动剂恢复肿瘤组织中NKT细胞Th1型细胞因子IFNγ的产生，并进一步增强CD8+T细胞和NK细胞的抗肿瘤效应，由此获得显著的肿瘤治疗效果。

Description

PPARγ激动剂与NKT细胞活化剂在肿瘤治疗中的用途
技术领域
本发明属于肿瘤的免疫治疗领域。具体而言，本发明涉及肿瘤的联合免疫治疗。
背景技术
免疫疗法由于其更好的靶向性以及更小的副作用在癌症治疗中展现了很好的应用前景。针对抑制性受体CTLA4以及PD-L1/PD-1的抗体已经在临床治疗中取得了一定的成功，但是仅仅有一小部分患者有很好的疗效，这对于发展新的免疫治疗方案提出了需求。在肿瘤的发生过程中几乎所有的免疫细胞都参与其中，包括T细胞、B细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞、DC细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、MDSCs等(Bindea et al.，2013；Biswas andMantovani，2010；Hanahan and Coussens，2012；Hanahan and Weinberg，2011)。由于肿瘤中特殊的微环境，这些细胞的发育分化及功能都不同于正常组织。因此，探究这些免疫细胞在肿瘤微环境中的特性和功能，揭示调控这些免疫细胞功能的相关机制并促进其抗肿瘤效应，有利于发展新的肿瘤免疫治疗策略。
NKT细胞是一类独特的固有免疫样T淋巴细胞，可以识别CD1d分子递呈的脂类抗原并且可以快速地响应外界的刺激而产生大量的细胞因子和趋化因子(Bendelac A et al.，2007)，这种快速应答可以同时调控固有免疫和适应性免疫系统，例如，NKT细胞可以通过CD40L使DC成熟从而进一步活化抗原特异性的T细胞(Hermans IF et al.，2003，Fujii Set al.，2007)；NKT细胞也可以通过IL12、IFNγ来进一步活化TH1、CD8+T以及NK细胞来促进他们的抗肿瘤效应(Hermans IF et al.，2003，FujiiS et al.，2003，Moreno M et a1.，2008，Silk JD et al.，2004)；同时，NKT细胞还可以抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)及髓系来源的抑制细胞(MDSC)等一些免疫抑制细胞(Song L et al.，2009，De Santo C et al.，2008)，进而促进抗肿瘤免疫。这些特殊的功能使得NKT细胞成为癌症免疫疗法的理想选择(Shiny Nair et al.，2017，Melissa Bedard et al.，2017)。目前，基于NKT细胞的免疫治疗也展现了一定的疗效。但是，在氧气、营养物、生长因子和很多其他信号受限的肿瘤环境中，很多免疫细胞的糖代谢、脂代谢以及氨基酸代谢是异常的，从而抑制了抗肿瘤的免疫应答(Erika L.Pearce et al.，2013)。
发明内容
发明人的研究发现，肿瘤中NKT细胞的抗肿瘤效应受到明显抑制。在此基础上，发明人进一步研究揭示了其分子机制，并开发了恢复NKT细胞抗肿瘤功能的方法，提出了新的基于NKT细胞的肿瘤治疗方案。
针对肿瘤微环境中PPARγ下调导致NKT细胞IFNγ应答降低的现象，通过PPARγ激动剂恢复肿瘤中NKT细胞的功能，进一步联用可激活NKT细胞的抗原促进NKT细胞介导的抗肿瘤免疫。
通过多次灌胃PPARγ的激动剂恢复肿瘤中NKT细胞的IFNγ应答，利用特异性活化NKT细胞的抗原激活体内NKT细胞，从而促进NKT细胞介导的抗肿瘤效应，有效抑制肿瘤的生长并延长生存时间。
现有的基于NKT细胞的抗肿瘤治疗都是利用抗原或携带抗原的抗原递呈细胞直接活化体内内源性NKT细胞或转输的扩增NKT细胞，但是在肿瘤环境中NKT细胞的抗肿瘤功能是异常的，其Th1型细胞因子显著减少，影响了其抗肿瘤的效果。PPARγ的活化剂可以恢复肿瘤组织中NKT细胞Th1型细胞因子IFNγ的产生，并进一步增强CD8+T细胞和NK细胞的抗肿瘤效应。因此，PPARγ的激动剂和NKT细胞活化剂联用的效果明显优于传统的激活NKT细胞的治疗效果。
PPARγ的激动剂如吡格列酮(Pioglitazone(PIO))本身临床用于治疗糖尿病，有很好的安全性，可以直接用于临床试验，所以和NKT细胞特异性抗原αGC联用能够更好的治疗肿瘤。此外PIO和αGC价格便宜，相比价格昂贵的抑制性受体PD-L1/PD-1的抗体和CAR-T来说有价格优势。
在一些实施方案中，本发明提供一种药物组合物或试剂盒，其包含PPARγ激动剂和NKT细胞活化剂和/或NKT细胞(包括基因编辑后的NKT细胞，如CAR-NKT)，和药用载体。在一些实施方案中，本发明提供PPARγ激动剂和NKT细胞活化剂和/或NKT细胞(包括基因编辑后的NKT细胞，如CAR-NKT)在制备用于治疗肿瘤的药物组合物或试剂盒中的用途。
在一些实施方案中，适合用于本发明的PPARγ激动剂包括作为PPARγ受体激动剂或部分激动剂的化合物或组合物。例如，可以在本发明中使用的PPARγ激动剂包括二十二碳六烯酸、前列腺素J2、前列腺素J2类似物(例如Δ12-前列腺素和15-去氧-Δ12，14-前列腺素J2)、GI262570、噁唑烷二酮类和噻唑烷二酮类。在一些实施方案中，适合用于本发明的PPARγ激动剂包括格列酮型PPARγ激动剂和非格列酮型PPARγ激动剂，例如欧洲专利306228、欧洲专利申请公开号0319189、PCT专利申请公开号WO2006/029349和美国专利5104888中公开的格列酮型PPARγ激动剂和非格列酮型PPARγ激动剂。在一些实施方案中，PPARγ激动剂包括噻唑烷二酮衍生物(格列酮)型PPARγ激动剂。在一些实施方案中，格列酮型PPARγ激动剂可以是例如(S)-((3，4-二氢-2-(苯基-甲基)-2H-1-苯并吡喃-6-基)甲基-噻唑烷-2，4-二酮(恩格列酮)、5-{[4-(3-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-1-氧代丙基)-苯基]-甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(达格列酮)、5-{[4-((1-甲基-环己基)甲氧基)-苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(环格列酮)、5-{[4-(2-(1-吲哚基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(DRF2189)、5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-乙氧基]苄基}-噻唑烷-2，4-二酮(BM-13.1246)、5-(2-萘基磺酰基)-噻唑烷-2，4-二酮(AY-31637)、双{4-[(2，4-二氧代-5-噻唑烷基)甲基]苯基}甲烷(YM268)、5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-2-羟基乙氧基]苄基}-噻唑烷-2，4-二酮(AD--5075)、5-[4-(1-苯基-1-环丙烷羰基氨基)-苄基]-噻唑烷-2，4-二酮(DN-108)、5-{[4-(2-(2，3-二氢吲哚-1-基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(4-氯-苯基)-2-丙炔基]-5-苯基磺酰基)-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(4-氯苯基)]-2-丙炔基]-5-(4-氟苯基-磺酰基)噻唑烷-2，4-二酮、5-{[4-(2-(甲基-2-吡啶基-氨基)-乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(罗格列酮)、5-{[4-(2-(5-乙基-2-吡啶基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(吡格列酮)、5-{[4-((3，4-二氢-6-羟基-2，5，7，8-四甲基-2H-1-苯并吡喃-2-基)甲氧基)-苯基]-甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(曲格列酮)、5-[6-(2-氟-苄氧基)萘-2-基甲基]-噻唑烷-2，4-二酮(MCC555)、5-{[2-(2-萘基)-苯并噁唑-5-基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(T-174)和5-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-2-甲氧基-N-(4-三氟甲基-苄基)苯甲酰胺(KRP297)。在一些实施方案中，PPARγ激动剂包括吡格列酮、罗格列酮和曲格列酮。在一些实施方案中，PPARγ激动剂包括非格列酮类PPARγ激动剂，如N-(2-苯甲酰基苯基)-L-酪氨酸类似物，例如GI-262570和JTT501。
在一些实施方案中，NKT细胞活化剂包括任何能够活化NKT细胞(例如促进NKT细胞释放IFNγ，IL4等各种细胞因子的试剂)。在一些实施方案中，适合用于本发明的NKT细胞活化剂包括NKT细胞抗原，包括例如α-半乳糖基神经酰胺(α-GalCer，αGC)及其类似物，神经节苷脂GD3，糖磷脂酰肌醇，磷脂酰乙醇胺，β-GalCer，iGb3及其类似物4-HO-iGb3和4-dh-iGb3，以及其他可被CD1d呈递的抗原。在一些实施方案中，适合用于本发明的NKT细胞活化剂包括携带NKT细胞抗原的抗原递呈细胞，例如但不限于树突细胞。在一些实施方案中，适合用于本发明的NKT细胞活化剂包括表达在CAR-NKT表面识别肿瘤抗原的嵌合体受体(CAR)。在一些实施方案中，可以使用一种或多种NKT细胞活化剂，或联合其它物质进行NKT细胞的活性调节，例如抗体或融合蛋白、疾病相关抗原、细胞因子、抗原递呈细胞等。
在一些实施方案中，本发明提供一种调节NKT细胞活性的方法，所述方法包括通过PPARγ活性调节剂调节NKT细胞的活性。在一些实施方案中，本发明涉及PPARγ活性调节剂用于调节NKT细胞活性的用途。在一些实施方案中，本发明涉及PPARγ活性调节剂在制备用于调节NKT细胞活性的试剂、组合物或试剂盒中的用途。在一些实施方案中，适合用于本发明的PPARγ活性调节剂包括抑制剂或激动剂。在一些实施方案中，调节NKT细胞活性包括抑制或激活NKT细胞功能。在一些实施方案中，调节NKT细胞活性包括调节NKT细胞的Th1/Th2应答平衡。上述NKT细胞包括基因编辑后的NKT细胞，例如但不限于CAR-NKT。
如本领域已知的，NKT细胞具有增强免疫和抑制免疫的双向免疫调节作用。已经发现能够通过调节NKT细胞的Th1/Th2应答平衡来治疗疾病。例如，已经发现肿瘤微环境中PPARγ下调导致NKT细胞Th1型功能下调，通过PPARγ激动剂恢复肿瘤中NKT细胞的Th1型功能，能够促进NKT细胞介导的抗肿瘤免疫。因此，在一些实施方案中，本发明提供通过PPARγ激动剂促进NKT细胞的Th1型功能，包括基因编辑后的NKT细胞。在一些实施方案中，本发明通过PPARγ激动剂促进NKT细胞释放细胞因子IFNγ，包括基因编辑后的NKT细胞。已经发现PPARγ的激活剂可以恢复肿瘤组织中NKT细胞Th1型细胞因子IFNγ的产生，并进一步增强CD8+T细胞和NK细胞的抗肿瘤效应。在一些实施方案中，已经发现PPARγ的激动剂和NKT细胞活化剂如NKT细胞抗原联合时能够获得激活NKT细胞和治疗肿瘤的协同作用。如本领域技术人员已知的，NKT细胞可用于治疗多种肿瘤，如实体瘤、前列腺癌、多发性骨髓瘤，黑素瘤、肝转移癌、腺癌、白血病、结肠癌、淋巴癌、B细胞淋巴癌、卵巢癌、神经母细胞瘤。在一些实施方案中，本发明提供PPARγ的激动剂和NKT细胞活化剂和/或NKT细胞，包括基因编辑后的NKT细胞，联合用于治疗肿瘤，如实体瘤、腺癌、淋巴癌、前列腺癌、多发性骨髓瘤，黑素瘤、肝转移癌、白血病、结肠癌、B细胞淋巴癌、卵巢癌、神经母细胞瘤等。
在一些实施方案中，通过PPARγ活性调节剂调节NKT细胞的Th1/Th2应答平衡。例如，在一些实施方案中，本发明通过PPARγ抑制剂降低IFNγ的产生，从而促进Th2型应答。在一些实施方案中，本发明通过PPARγ调节剂结合其它调节NKT细胞的Th1/Th2应答平衡的调节剂调节Th1/Th2应答平衡。在一些实施方案中，调节NKT细胞的Th1/Th2应答平衡的调节剂可以是例如免疫疾病相关的抗原、细胞因子如IL4、IL10、TGFβ、IFNγ、IL2、IL18、IL12或IL15或粘附分子如整联蛋白、选择蛋白和ICAM。上述NKT细胞包括基因编辑后的NKT细胞。
在一些实施方案中，本发明提供治疗性组合物和/或试剂盒包括PPARγ活性调节剂、NKT细胞活化剂和/或其他NKT细胞活性调控细胞或分子、NKT细胞(包括基因编辑后的NKT细胞)、药用载体、稀释剂、赋形剂和/或添加剂。
在一些实施方案中，本发明提供治疗受试者疾病的方法，该方法包括：将PPARγ活性调节剂和NKT细胞活化剂和/或NKT细胞(包括基因编辑后的NKT细胞)施用给所述受试者，从而治疗受试者疾病，例如癌症。在一些实施方案中，还可以进一步结合其它物质进行NKT细胞的活性调节，例如与疾病相关抗原、抗原递呈细胞、细胞因子如IL4、IL10、TGFβ、IFNγ、IL2、IL18、IL12或IL15或粘附分子如整联蛋白、选择蛋白和ICAM。在一些实施方案中，受试者包括哺乳动物，例如人、猴、马、牛、犬、猫、小鼠、大鼠和猪等。
本发明的药物可以通过任何适当的方法使用，包括例如口服、静脉内、胃肠外、经皮、皮下、阴道内、腹膜内、鼻内、粘膜、舌下、局部或直肠给药以及它们的任何组合。在一些实施方案中，给药途径包括静脉内、肌内、皮内、腹膜内、皮下、或其它不经肠道的施用途径，例如通过注射或输注。在一些实施方案中，注射途径包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、硬膜内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管的、皮下、表皮下、关节内、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内的注射和输注。在一些实施方案中，可以通过局部的、表皮的或粘膜的施用途径给药。
已经发现通过活化NKT细胞可以增强对肿瘤的免疫。本发明涉及用于在患有疾病如肿瘤的受试者中通过恢复NKT细胞Th1型应答增强其抗肿瘤效果的方法，所述方法包括施用PPARγ激动剂和NKT细胞活化剂，由此获得协同的抗肿瘤效应。
在一些实施方案中，本发明的组合物和/或试剂盒还包含其它组分，例如具有抗原递呈细胞DC。在一些实施方案中，本发明的组合物和/或试剂盒可以包括例如B7信号分子的共刺激分子，允许有效和长时间激活NKT细胞。本发明的组合物还可以包含额外的佐剂组分，例如LPS、TLR9激动剂如CPGODNS、TLR7/8激动剂、IL12、IL2等细胞因子和生长因子。
如本领域技术人员所知的，能够通过适当的方法确定组合物能否能够调节NKT细胞的活性，例如通过将待测化合物或组合物施用给动物如小鼠后测定IL-4或IFN-γ产生来进行。例如可以测定IL-4或IFN-γ产生或NKT细胞增殖，用以确定NKT细胞的激活或Th1/Th2应答平衡。
在一些实施方案中，本发明的试剂、制剂、组合物和/或试剂盒包含PPARγ活性调节剂和NKT细胞活化剂和/或调控NKT细胞功能的细胞和分子和/或NKT细胞(包括基因编辑后的NKT细胞)。在一些实施方案中，例如试剂盒可以包括容器，和使用说明书。在一些实施方案中，合适的容器包括例如瓶子或注射器。在一些实施方案中，组合物中的至少一种活性剂是PPARγ活性调节剂，并还可以包含NKT细胞活化剂和/或NKT细胞(包括基因编辑后的NKT细胞)。在一些实施方案中，组合物和/或试剂盒可以包括含有PPARγ活性调节剂的第一容器，和(b)含有其它组合物的第二容器，和任选的含有更多其它组合物的更多容器。在一些实施方案中，组合物和/或试剂盒可以包括含有PPARγ活性调节剂的第一容器，和(b)含有NKT细胞活化剂和/或NKT细胞(包括基因编辑后的NKT细胞)的第二容器，和任选的含有更多其它组合物的更多容器。在一些实施方案中，制品、组合物或试剂盒还可以包含含有药用缓冲液、稀释剂、载体的容器。在一些实施方案中，还可包括其他材料，如滤器、针头和注射器。在一些实施方案中，药物组合物和/或试剂盒允许包含活性成分的生物学活性有效形式，并且不包含不可接受的毒性的另外的成分。在一些实施方案中，药用载体是指药物中不同于活性成分的成分，其对个体是无毒的。在一些实施方案中，药用载体包括缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
在一些实施方案中，本发明所述的治疗包括改变被治疗的个体的天然临床进程，并且可以包括预防或临床病理水平的改善。治疗包括但不限于防止疾病发生或复发，缓和症状，消除疾病的直接或间接病理后果，降低疾病进展速率，改善或减轻疾病状态，和改善的预后。在一些实施方案中，本发明的药物用于治疗和/或预防相关疾病，和/或用于延缓疾病的发生或减缓疾病的进展。
在一些实施方案中，为了预防或治疗疾病，本发明的药物的合适剂量可以通过待治疗疾病的类型、疾病的严重性和进程、药物以预防目的给药还是以治疗目的给药、以前的治疗、患者的临床病史和对所述药物的应答等因素确定。药物可以通过一次或多次分别给药，或通过连续输注。治疗的进展可以通过常规技术和测定来监测。
附图说明
图1至图3显示PPARγ促进NKT细胞TH1型功能，其中图1显示体外抑制PPARγ导致NKT细胞功能向TH2型极化，图2显示PPARγ抑制剂在体内显著抑制NKT细胞IFNγ的产生，图3显示PPARγ激动剂在体外促进NKT细胞IFNγ的产生。
图4至图5显示肿瘤组织中NKT细胞PPARγ表达降低，IFNγ产量显著减少，其中图4显示小鼠肿瘤组织中NKT细胞产生的IFNγ显著减少，图5显示小鼠肿瘤组织中NKT细胞PPARγ表达降低。
图6和图10显示PIO和αGC联用可以促进肿瘤组织NKT细胞IFNγ的产生并显著增强其抑癌效果，其中图6显示PPARγ激动剂PIO可以恢复肿瘤组织中NKT细胞IFNγ的产生，图7显示PIO和αGC联用可以在体内促进肿瘤组织CD8T以及NK细胞的聚集，图8显示PIO和αGC联用可以在体内促进肿瘤组织CD8T以及NK细胞的功能，图9显示PIO和αGC联用可以显著抑制B16F10的生长，图10显示PIO和αGC联用可以显著抑制MC38的生长。
具体实施方式
以下的实例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
Vα14 Tg.cxcr6小鼠：来源见文献(Lee WY，et al，2014)
野生型小鼠：北京维通利华公司购买
PE-CY7抗鼠TCRβ抗体：Biolegend，109222
FITC抗鼠NK1.1抗体：Biolegend，108706
PerCP-CY5.5抗鼠CD8α抗体：Biolegend，100734
PE抗鼠CD4抗体：Biolegend，100408
PE抗人TCRβ抗体：Biolegend，306708
PE抗鼠IL4抗体：Biolegend，504104
PE-CY7抗鼠IFNγ抗体：Biolegend，505826
FITC抗PPARγ抗体：Santa Cruz，sc-7273
抗鼠CD4磁珠：Miltenyibiotec，130-117-043
鼠IFNγ释放检测试剂盒(APC)：Miltenyibiotec，130-090-984
GW9662：Sigma，G5668
Pioglitazone(PIO)：Sigma，Y0001520
T0070907(T007)：Sigma，T8703
鼠IFNγ检测试剂盒：BD，558296
鼠IL4检测试剂盒：BD，558298
CDld-pbs57 tetramer：由美国国家卫生研究院埃默里大学四聚体研发中心提供。
实施例一、PPARγ促进NKT细胞Th1型功能
1、体外抑制PPARγ导致NKT细胞功能向Th2型极化
(1)多聚赖氨酸处理96孔板，1μg/ml CD1d-pbs57 tetramer在37℃过夜铺板。
(2)Vα14Tg.cxcr6小鼠提取肝脏淋巴细胞，用磁珠富集CD4+T淋巴细胞，分成五组，每组三个复孔。
第一组，PBS铺板的孔，阴性对照组。
第二组，CD1d-pbs57 tetramer铺板的孔，阳性对照组。
第三组，CD1d-pbs57 tetramer铺板的孔，每孔加入终浓度为0.5μg/ml T0070907。
第四组，CD1d-pbs57 tetramer铺板的孔，每孔加入终浓度为1μg/ml T0070907。
第五组，CD1d-pbs57 tetramer铺板的孔，每孔加入终浓度为2μg/ml T0070907。
(3)步骤(2)处理后的细胞24h后收集细胞上清，流式检测上清中的IFNγ和IL4。结果见图1。
在CDld-pbs57 tetramer作用下，NKT细胞活化，产生大量的TH1型细胞因子IFNγ和TH2型细胞因子IL4，PPARγ抑制剂T0070907的加入，显著地抑制了IFNγ的产生，但是对IL4的影响很小，使得NKT细胞的功能向TH2型极化，并且这种效果是呈剂量依赖性的。
2、PPARγ抑制剂在体内显著抑制NKT细胞IFNγ的产生
(1)第一天，野生型小鼠分成三组。
第一组，阴性对照组，每只鼠腹腔注射100μl PBS。
第二组，阳性对照组，每只鼠腹腔注射100μl PBS。
第三组，每只鼠腹腔注射100μl 2mg/ml的GW9662。
(2)第二天，腹腔注射PPARγ抑制剂20h后用抗原活化NKT细胞。
第一组，阴性对照组，每只鼠腹腔注射100μl PBS。
第二组，阳性对照组，每只鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
第三组，每只鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
(3)4h后，处死小鼠，提取肝脏淋巴细胞，流式检测肝脏NKT细胞胞内细胞因子IFNγ和IL4。结果见图2(左图是对IFNγ或IL4阳性NKT细胞比例的统计，一个点代表一只鼠；右图是对IFNγ或IL4阳性NKT细胞IFNγ或IL4平均荧光值的统计，一个点代表一只鼠)。
αGC体内注射后，小鼠NKT细胞活化，产生大量的TH1型细胞因子IFNγ和TH2型细胞因子IL4；PPARγ抑制剂GW9662预处理的小鼠在αGC的活化下，IFNγ阳性NKT的比例以及IFNγ阳性NKT细胞IFNγ的平均荧光值(表征活化NKT细胞产生IFNγ的能力)都会明显降低，但是NKT细胞产生的IL4并没有明显变化，与体外的结果一致。
3、PPARγ激动剂在体外促进NKT细胞IFNγ的产生
(1)多聚赖氨酸处理96孔板，1μg/ml CD1d-pbs57 tetramer在37℃过夜铺板。
(2)Vα14Tg.cxcr6小鼠提取肝脏淋巴细胞，用磁珠富集CD4+T淋巴细胞，分成五组，每组三个复孔。
第一组，PBS铺板的孔，阴性对照组。
第二组，CD1d-pbs57 tetramer铺板的孔，阳性对照组。
第三组，CD1d-pbs57 tetramer铺板的孔，每孔加入终浓度为1.25μg/ml PIO。
第四组，CD1d-pbs57 tetramer铺板的孔，每孔加入终浓度为2.5μg/ml PIO。
第五组，CD1d-pbs57 tetramer铺板的孔，每孔加入终浓度为5μg/ml PIO。
(3)步骤(2)处理后的细胞24h后收集细胞上清，流式检测上清中的IFNγ和IL4。结果见图3。
在CD1d-pbs57 tetramer作用下，NKT细胞活化，产生大量的TH1型细胞因子IFNγ和TH2型细胞因子IL4，PPARγ激动剂PIO的加入，显著地促进了IFNγ的产生，也一定程度促进了IL4的产生，并且这种效果是呈剂量依赖性的。
实施例二、肿瘤组织中NKT细胞PPARγ表达降低，IFNγ产量显著减少
1、小鼠肿瘤组织中NKT细胞产生的IFNγ显著减少
(1)1×105B16F10黑色素瘤细胞皮下注射到每只野生型小鼠腋下，两周后处死小鼠，提取肿瘤组织和脾脏组织淋巴细胞，用磁珠富集CD4+T淋巴细胞。
(2)多聚赖氨酸处理96孔板，1μg/ml CD1d-pbs57 tetramer在37℃过夜铺板。
(3)步骤(1)中提取的脾脏组织CD4+T淋巴细胞分别转入CD1d-pbs57 tetramer铺板的孔和PBS铺板的孔；步骤(1)中提取的肿瘤组织CD4+T淋巴细胞转入CD1d-pbs57tetramer铺板的孔。
(4)24h后收集细胞上清，流式检测上清中的IFNγ。结果见图4。
在肿瘤环境中NKT细胞功能异常，产生的IFNγ相比脾脏组织中NKT细胞显著减弱。
2、小鼠肿瘤组织中NKT细胞PPARγ表达降低
1×105B16F10黑色素瘤细胞皮下注射到每只野生型小鼠腋下，两周后处死小鼠，提取肿瘤组织和脾脏组织淋巴细胞，流式检测肿瘤组织和脾脏组织中NKT细胞PPARγ的表达。结果见图5。
与脾脏组织NKT细胞相比，肿瘤组织中NKT细胞PPARγ表达明显减弱。
实施例三、PIO和αGC联用可以促进肿瘤组织中NKT细胞IFNγ的产生并显著增强其抑癌效果
1、PPARY激动剂PIO可以恢复肿瘤组织中NKT细胞IFNγ的产生
1×105B16F10黑色素瘤细胞皮下注射到每只野生型小鼠腋下，相似肿瘤大小的荷瘤小鼠被随机分配到四组中。
第一组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃100μl PBS，第14天给小鼠腹腔注射100μl PBS。
第二组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃100μl PBS，第14天给小鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
第三组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃30mg kg-1PIO(溶在100μl PBS里)，第14天给小鼠腹腔注射100μl PBS。
第四组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃30mg kg-1PIO(溶在100μl PBS里)，第14天给每只小鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
注射αGC或PBS 5h后，小鼠被处死，提取肿瘤组织和脾脏组织淋巴细胞，流式检测肿瘤组织和脾脏组织中NKT细胞释放的IFNγ。结果见图6。
与体外的结果一致，在体内肿瘤环境中αGC诱导NKT细胞产生的IFNγ相比脾脏组织中NKT细胞显著减弱。灌胃PIO后，可以在体内一定程度恢复αGC诱导NKT细胞IFNγ的产生。
2、PIO和αGC联用可以在体内促进肿瘤组织CD8T以及NK细胞的聚集和功能
1×105B16F10黑色素瘤细胞皮下注射到每只野生型小鼠腋下，相似肿瘤大小的荷瘤小鼠被随机分配到四组中。
第一组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃100μl PBS，第14天给小鼠腹腔注射100μl PBS。
第二组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃100μl PBS，第14天给小鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
第三组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃30mg kg-1PIO(溶在100μl PBS里)，第14天给小鼠腹腔注射100μl PBS。
第四组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃30mg kg-1PIO(溶在100μl PBS里)，第14天给每只小鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
注射αGC或PBS 5h后，小鼠被处死，提取肿瘤组织淋巴细胞，流式检测肿瘤组织中CD8+T细胞、NK细胞占淋巴细胞的比例(图7)以及CD8+T细胞、NK细胞产生的IFNγ(图8)。
小鼠注射αGC后，会导致NKT细胞的活化并产生IFNγ，而NKT细胞产生的IFNγ会进一步促进CD8+T细胞、NK细胞的功能。PIO可以增强αGC诱导的肿瘤组织中NKT细胞IFNγ的产生，并促进肿瘤中CD8+T细胞、NK细胞的聚集以及IFNγ的产生。
3、PIO和aGC联用可以显著抑制B16F10的生长
1×105B16F10黑色素瘤细胞皮下注射到每只野生型小鼠腋下，相似肿瘤大小的荷瘤小鼠被随机分配到四组中。
第一组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃100μl PBS，第14天给小鼠腹腔注射100μl PBS。
第二组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃100μl PBS，第14天给小鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
第三组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃30mg kg-1PIO(溶在100μl PBS里)，第14天给小鼠腹腔注射100μl PBS。
第四组，从第7天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃30mg kg-1PIO(溶在100μl PBS里)，第14天给每只小鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
第6天起，肿瘤大小每两天量一次，小鼠的存活率每天记录一次。肿瘤大小为肿瘤的长径乘以肿瘤的短径，考虑到动物伦理，小鼠肿瘤长径超过20mm则会被安乐死。结果见图9。
第20天，每组处死3只小鼠，分别取出皮下的肿瘤，拍照记录。结果见图9。
单独灌胃PIO或单独腹腔注射αGC都可以在一定程度上抑制B16F10肿瘤的生长；PIO和αGC联用可以显著抑制B16F10肿瘤的生长，而且小鼠的存活率也会明显提高。
4、PIO和αGC联用可以显著抑制MC38的生长
1×106 MC38细胞皮下注射到每只野生型小鼠腋下，相似肿瘤大小的荷瘤小鼠被随机分配到四组中。
第一组，从第8天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃100μl PBS，第14天给小鼠腹腔注射100μl PBS。
第二组，从第8天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃100μl PBS，第14天给小鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
第三组，从第8天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃30mg kg-1PIO(溶在100μl PBS里)，第14天给小鼠腹腔注射100μl PBS。
第四组，从第8天起到第14天，每天给每只小鼠灌胃30mg kg-1PIO(溶在100μl PBS里)，第14天给每只小鼠腹腔注射2μg αGC(溶在100μl PBS里)。
第8天起，肿瘤大小每两天量一次，小鼠的存活率每天记录一次。肿瘤大小为肿瘤的长径乘以肿瘤的短径，考虑到动物伦理，小鼠肿瘤长径超过20mm则会被安乐死。结果见图10。
单独灌胃PIO或单独腹腔注射αGC都可以在一定程度上抑制MC38肿瘤的生长；PIO和αGC联用可以显著抑制MC38肿瘤的生长，而且小鼠的存活率也会明显提高。

Claims (10)

1.一种药物组合物或试剂盒，其包含PPARγ激动剂和NKT细胞活化剂和/或NKT细胞，和药用载体，NKT细胞包括例如基因编辑后的NKT细胞，例如但不限于CAR-NKT。
2.PPARγ激动剂和NKT细胞活化剂和/或NKT细胞在制备用于治疗肿瘤的药物组合物或试剂盒中的用途，NKT细胞包括例如基因编辑后的NKT细胞，例如但不限于CAR-NKT。
3.一种调节NKT细胞活性的方法，所述方法包括通过PPARγ调节剂调节NKT细胞的活性，NKT细胞包括例如基因编辑后的NKT细胞。
4.权利要求3所述的方法，其中所述方法包括体外、体内或离体方法。
5.PPARγ活性调节剂用于调节NKT细胞活性的用途，NKT细胞包括例如基因编辑后的NKT细胞。
6.PPARγ活性调节剂在制备用于调节NKT细胞(包括例如基因编辑后的NKT细胞)活性的试剂、组合物或试剂盒中的用途。
7.权利要求3或4所述的方法或权利要求5或6所述的用途，其中所述PPARγ活性调节剂包括抑制剂或激动剂。
8.权利要求3、4或7所述的方法或权利要求5、6或7所述的用途，其中调节NKT细胞(包括例如基因编辑后的NKT细胞)活性包括抑制或促进NKT细胞功能或调控Th1/Th2平衡。
9.权利要求3、4、7或8所述的方法或权利要求5、6、7或8所述的用途，其中调节NKT细胞活性是通过PPARγ激动剂促进NKT细胞的Th1型功能，通过PPARγ抑制剂促进NKT细胞的Th2型功能，NKT细胞包括例如基因编辑后的NKT细胞，例如但不限于CAR-NKT。
10.权利要求3、4或7-9任一项所述的方法或权利要求5、6或7-9任一项所述的用途，其中调节NKT细胞活性是通过PPARγ激动剂促进NKT细胞释放细胞因子IFNγ，通过PPARγ抑制剂抑制NKT细胞释放细胞因子IFNγ，NKT细胞包括例如基因编辑后的NKT细胞，例如但不限于CAR-NKT。
CN201810543973.8A 2018-05-30 2018-05-30 PPARγ激动剂与NKT细胞活化剂在肿瘤治疗中的用途 Active CN110548144B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810543973.8A CN110548144B (zh) 2018-05-30 2018-05-30 PPARγ激动剂与NKT细胞活化剂在肿瘤治疗中的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810543973.8A CN110548144B (zh) 2018-05-30 2018-05-30 PPARγ激动剂与NKT细胞活化剂在肿瘤治疗中的用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110548144A true CN110548144A (zh) 2019-12-10
CN110548144B CN110548144B (zh) 2021-07-09

Family

ID=68734583

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810543973.8A Active CN110548144B (zh) 2018-05-30 2018-05-30 PPARγ激动剂与NKT细胞活化剂在肿瘤治疗中的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110548144B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113368217A (zh) * 2020-03-09 2021-09-10 四川大学华西医院 IFN-γ在制备抗肿瘤辅助药物中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004101776A2 (en) * 2003-05-14 2004-11-25 University Of Debrecen Novel uses of ppar modulators and professional apcs manipulated by the same
US20110129503A1 (en) * 2009-12-01 2011-06-02 Samuel Strober Tumor vaccination in combination with hematopoietic cell transplantation for cancer therapy
CN105535979A (zh) * 2015-11-22 2016-05-04 李素华 一种提高难溶药物生物利用度的自微乳化载药系统及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004101776A2 (en) * 2003-05-14 2004-11-25 University Of Debrecen Novel uses of ppar modulators and professional apcs manipulated by the same
US20110129503A1 (en) * 2009-12-01 2011-06-02 Samuel Strober Tumor vaccination in combination with hematopoietic cell transplantation for cancer therapy
CN105535979A (zh) * 2015-11-22 2016-05-04 李素华 一种提高难溶药物生物利用度的自微乳化载药系统及其应用

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BEDARD ET AL.: "Harnessing the Power of Invariant Natural Killer T Cells in Cancer Immunotherapy", 《FRONTIERS IN IMMUNOLOGY》 *
EL-SISI ET AL.: "PPARγ-dependent anti-tumor and immunomodulatory actions of pioglitazone", 《JOURNAL OF IMMUNOTOXICOLOGY》 *
FU ET AL.: "Impaired lipid biosynthesis hinders anti-tumor efficacy of intratumoral iNKT cells", 《NATURE COMMUNICATION》 *
HUNG ET AL.: "Tailored design of NKT-stimulatory glycolipids for polarization of immune responses", 《JOURNAL OF BIOMEDICAL SCIENCE》 *
LOUIS ET AL.: "iNKT-Cell Activation Induces Late Preterm Birth That Is Attenuated by Rosiglitazone", 《J IMMUNOL.》 *
NAKKEN ET AL.: "Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ-Regulated Cathepsin D Is Required for Lipid Antigen Presentation by Dendritic Cells", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》 *
王志亮等主编: "《用药基础》", 31 January 2016, 华中科技大学出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113368217A (zh) * 2020-03-09 2021-09-10 四川大学华西医院 IFN-γ在制备抗肿瘤辅助药物中的应用
CN113368217B (zh) * 2020-03-09 2024-02-27 四川大学华西医院 IFN-γ在制备抗肿瘤辅助药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN110548144B (zh) 2021-07-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11660309B2 (en) Prevention and treatment of inflammatory conditions
JP6656349B2 (ja) 単純ヘルペスウイルスおよび免疫チェックポイント阻害薬を使用して、メラノーマを治療するための方法
JP6853331B2 (ja) セルライト処置用コラゲナーゼ
JP2014517077A5 (zh)
JP2020534285A (ja) 投与および処置の方法
KR101909433B1 (ko) 키나제 저해제의 부작용 저감제
JP2023030210A (ja) 炎症性病態の予防および治療
CN110548144B (zh) PPARγ激动剂与NKT细胞活化剂在肿瘤治疗中的用途
TW202114647A (zh) 用於治療具有高間質壓力的腫瘤受試者的癌症的小分子抑制劑
RU2789326C1 (ru) Предупреждение и лечение воспалительных состояний
US20220395494A1 (en) Combination therapy for cancer
Levi-Schaffer et al. Long-term cultures of mast cells: a new model for studying the allergic response
JP2023543197A (ja) Ｃｓｆ１ｒキナーゼ阻害剤およびその使用
Beyer et al. Biologics in Cutaneous Lymphoma
Beyer et al. 14 Biologics in Cutaneous Lymphoma

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Bai Li

Inventor after: Fu Sicheng

Inventor after: Tian Chenxi

Inventor before: Bai Li

Inventor before: Fu Sicheng

Inventor before: Tian Chenxi

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant