CN110531070A - 一种垂直流试纸条 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种垂直流试纸条，用于样本中的靶标检测。该垂直流试纸条以外壳（1）作为基片，外壳内的结构从上至下依次为层析垫（2）和吸收垫（3）。其中层析垫上设置有检测区（4）和质控区（5）。本试纸条的具体实施步骤包含两个部分：①在试管中进行靶标（6）与基于纳米材料（7）的标签反应；②反应液通过试纸条进行垂直流测定，通过信号（8）采集实现靶标检测。该试纸条具有制备简便、成本低廉、易于操作等优势，且可以实现多靶标检测，在食品安全、公共卫生检测、环境监测等领域具有广泛的应用前景。

Description

一种垂直流试纸条

技术领域

本发明涉及一种垂直流试纸条，属于即时检测领域。

背景技术

侧向流层析免疫检测技术作为于20世纪70年代早期首次商业开发的技术，其可对资源有限的地区或即时检测领域中的靶标进行定性以及快速的检测。基于这些优势，现已开发出多种商品化的应用产品，广泛应用于医疗保健、农业、食品卫生安全、环境监测等领域。传统的侧向流层析免疫检测技术由于固有的单抗原抗体设计，仅能检测单一的靶标，这显然无法满足多靶标检测市场的需求。虽然现已开发出多靶标检测的侧向流层析免疫检测技术，但是由于层析垫上的免疫反应存在先后顺序，所以交叉反应是影响其进一步应用的主要屏障。相较于侧向流层析免疫检测技术中层析垫上的免疫反应，垂直流免疫检测技术中的层析垫上的免疫反应是平行进行的，这可有效地克服侧向流层析检测技术应用于多靶标检测中的技术屏障。但是现有的垂直流试纸只能检测一种或少量的几种物质，检测的效率较低，直接导致了检测成本的提高。此外，现阶段垂直流层析试纸条中的层析垫是硝酸纤维素膜，其为无规则的多孔微纳结构。该结构的不规则一方面导致了强散射特性(薄膜发白)，影响光学信号检测；另一方面也导致流速以及层析的不一致，从而影响检测性能。

垂直双通道结构的孔洞在垂直方向上是直接相互连通的，这使得纳米标签在其内的流通更加地顺畅，从而可以有效地降低背景信号，提高检测的准确性。其中垂直双通道的光子晶体有序微纳结构由于具有一些特殊的物理光学特性，在分子检测方面越来越受到人们的重视。光子晶体有序微纳结构是由不同折射率的介质材料周期性排列而成的人造微结构，其具有光子带隙以及光子局域特性。具体表现为光子晶体的光子禁带能够减慢光子的群速度，从而增强光与物质的相互作用；此外，减慢的光子群速度还能增强电磁场的密度。另一方面，光子晶体具有精准的电磁场限域效应，能够将不同频率的光的能量局限在光子晶体的不同位置。例如将有序微纳结构与SERS相结合，一方面可以克服传统无序结构膜的缺陷；另一方面可以增强检测标签的SERS信号，从而进一步降低检测限。此外，垂直双通道结构中的微孔分布高度有序，柱状孔道彼此平行，且孔洞的密度、直径和深度均可控，且热稳定性以及化学稳定性都较高。

发明内容

技术问题：本发明的目的在于提供一种垂直流试纸条，该试纸条使用信号标签编码的纳米材料来实现靶标检测；基于垂直双通道有序微纳结构的层析垫可以增强纳米标签的信号，进一步提高检测的灵敏度。该试纸条适用于即时检测，具有操作简便快速、样品用量少、可多靶标和成本低廉的特征。

技术方案：为解决现有检测技术中存在的问题，本发明提供了一种垂直流试纸条，该试纸条以外壳作为基片，外壳内的结构从上至下依次为层析垫和吸收垫。其中层析垫上设置有检测区和质控区。层析垫和吸收垫上下交叠在一起。本试纸条的具体实施步骤包含两个部分：①在试管中进行靶标与基于纳米材料的标签反应；②反应液通过试纸条进行垂直流测定，通过信号采集实现靶标检测。

其中：

所述的外壳是由防止液体渗透的惰性硬质材料制作而成的方形或圆形的盒状结构，其长度为20-50mm，宽度为20-50mm或直径为20-50mm。

所述的层析垫为具有垂直双通道二维有序结构的光子晶体层析垫或具有垂直双通道无序结构的层析垫，所述的二维有序结构的周期为100-3000nm，孔洞的直径为10-2500nm，孔深为30-100μm。所述的层析垫具有蛋白吸附能力，为多孔阳极氧化铝、多孔硅、二氧化钛、聚苯乙烯、二氧化硅、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酸乙酯、聚乙烯、硝酸纤维素、醋酸纤维素、尼龙或聚偏氟乙烯。所述的层析垫的长度为10-40mm，宽度为10-40mm或直径为10-40 mm。

所述的吸收垫具有亲水性，其材料为吸水纸、纤维素膜、滤纸、纤维素-玻璃纤维复合物、无纺布或海绵。所述的吸收垫的长度为10-40mm，宽度为10-40mm或直径为10-40mm。

所述的检测区为使用靶标结合剂划在层析垫上的一条或多条直线、单个点或多个点组成的阵列，用于检测样本中的靶标。其中，当检测区为一条直线或单个点时，其上连接有一种、两种或多种靶标结合剂；当检测区为两条及两条以上直线或两个点及两个点以上时，各条直线平行排列，或各个点组成阵列的形式，每条直线或每个点上连接一种、两种或多种靶标结合剂。所述的靶标结合剂为靶标的捕获抗体、适配体、DNA序列或配基。

所述的质控区的呈现形式可以是一条直线或多条直线、单个点或多个点组成的阵列，该直线或点上通过物理吸附或共价固定有与检测抗体相对应的捕获抗体、适配体、DNA序列或配基，该与检测抗体相对应的捕获抗体、适配体、DNA序列或配基与检测抗体进行特异性结合，且不与靶标发生交叉反应。所述的质控区的位置可以在检测区的左边、右边、上方或下方。

所述的层析垫和吸收垫是上下交叠在一起，其中层析垫在上，且层析垫和吸收垫之间的间隙为0mm。

所述的具体实施步骤包含两个部分：①在试管中进行靶标与基于纳米材料的标签反应；②反应液通过试纸条进行垂直流测定，通过信号采集实现靶标检测。

所述的具体实施步骤①中的靶标是蛋白质、核酸、重金属离子、有机小分子、真菌、细菌或病毒。

当检测的靶标是核酸时，所述的检测抗体和靶标结合剂分别为与该核酸片段不同位置特异性互补配对的核酸序列，所述的质控线上固定有与检测抗体进行特异性配对结合的互补核酸序列。

所述的垂直流免疫层析试纸条检测靶标过程中的检测反应是竞争性免疫反应或夹心式免疫反应。当是竞争性免疫反应时，靶标样品溶液中添加有竞争性反应试剂。

所述的具体实施步骤①中的纳米材料修饰有信号标签，且纳米材料表面通过静电吸附或共价连接固定有检测抗体，实现靶标的检测，或纳米材料表面直接通过静电吸附或共价连接固定有检测抗体，实现靶标的检测。

所述的纳米材料包括四类：第一类是金属纳米粒子，这其中包含两部分，a)单一结构的纳米材料，如金纳米粒子、银纳米粒子、铜纳米粒子或铂纳米粒子，其粒径分布范围为2-500 nm；b)核壳结构的纳米粒子，如金核银壳纳米粒子、金核金壳纳米粒子、银核金壳纳米粒子、银核银壳纳米粒子、二氧化硅核金壳纳米粒子、金核二氧化硅壳纳米粒子、二氧化硅核银壳纳米粒子或银核二氧化硅壳纳米粒子，其核的尺寸范围在2-500nm；壳的厚度范围在1-100 nm。第二类是碳纳米材料，如碳纳米管、碳纳米纤维或纳米碳球，其粒径分布范围为2-500nm。第三类是磁性纳米材料，如三氧化二铁纳米粒子、四氧化三铁纳米粒子或锰锌铁氧体纳米晶，其粒径分布范围为3-500nm。第四类是量子点，如磷化铟/硫化锌量子点、硒化镉/硫化锌量子点或硫化铅量子点，其粒径分布范围为1-100nm。所述的信号标签包括两类：第一类是拉曼标签分子，如耐尔兰A、结晶紫、罗丹明6G、亚甲基蓝、对氨基苯硫酚、水溶性3H-吲哚菁型生物荧光标示染料、甲基蓝、4,4’-联吡啶、孔雀石绿异硫氰酸酯、4-巯基吡啶、对氟苯硫酚、对巯基苯胺、对氨基苯硫酚、对巯基苯硫酚、对巯基苯甲酸或甲苯胺蓝。第二类是荧光材料，如异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白、碘化丙啶、别藻青蛋白、 Cy3、Cy5、量子点或上转换纳米粒子。所述的信号标签修饰的纳米粒子的修饰方式是指将信号标签通过静电吸附或共价连接固定在纳米粒子表面或核壳结构纳米粒子的核壳间隙处。

所述的具体实施步骤②中信号是比色信号、荧光信号、表面增强拉曼散射信号、化学发光信号、非线性光学相应信号或磁信号。

有益效果：相对于现有技术中的方案，本发明的优点是：

1、本发明提供的试纸条可实现多靶标快速和高通量定量检测，有效地提高了检测的效率和降低了检测的成本。

2、本发明提供的试纸条特异性强，免疫反应后，可通过检测区和质控区上有无纳米标签的信号来判断检测的结果，结果精准，假阳性或假阴性率低。

3、本发明提供的试纸条使用基于垂直双通道结构的层析垫替代传统的层析垫，提高了信噪比，尤其是可以利用垂直双通道有序微纳结构对光的调制作用，增强检测体系的信号强度，从而进一步提高检测的灵敏度。

因此，在本发明中，我们将垂直流免疫层析技术和垂直双通道结构相结合，制备一种垂直流试纸条，能够同时满足低成本、操作简易以及多靶标检测等要求，具有非常重要的意义。

附图说明

图1为垂直流试纸条的结构组成示意图；

图2为垂直流试纸条的俯视结构组成示意图；

图3为垂直流试纸条的侧视结构组成示意图；

图4为垂直流试纸条的具体实施步骤流程示意图，

图中：

1、外壳；2、层析垫；3、吸收垫；4、检测区；5、质控区；6、靶标；7、基于纳米材料的标签；8、信号。

①代表在试管中进行靶标与基于纳米材料的标签反应；②代表反应液通过试纸条进行垂直流测定，利用信号采集实现靶标检。

具体实施方案

以下结合具体实施例对上述垂直流试纸条做进一步说明。应注意，这些实施例是用于说明本发明的可实现性以及优越性，并非以此来限制本发明的应用范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体检测的要求做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。任何本领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，应当可以做出各种修改与变更。因此，本发明的保护范围应当视为所附的权利要求书所限定的范围。

实施例1

甲基苯丙胺、可卡因和吗啡多靶标检测垂直流试纸条，包括以下步骤：

1)垂直流试纸条的构建：选用长方形的塑料材质的外壳(长度：50mm；宽度：20mm)。基于多孔阳极氧化铝的层析垫的结构周期为100nm，孔深为30μm，其长度为40mm，宽度为10mm。吸收垫的材质为吸水纸，其长度为40mm，宽度为10mm。层析垫上划有一条包含甲基苯丙胺-牛血清白蛋白抗原、可卡因-牛血清白蛋白抗原和吗啡-牛血清白蛋白抗原三种靶标结合剂的检测线，质控线位于检测线的右边，其上固定有兔抗鼠免疫球蛋白。按照层析垫在上，吸收垫在下的原则将两垫交叠在一起后封装在外壳内。

2)纳米标签的制备：选用基于金纳米粒子(粒径：2nm)的SERS纳米标签，分别将甲基苯丙胺抗体、可卡因抗体和吗啡抗体分别标记在固定有耐尔兰A、罗丹明6G和结晶紫的金纳米粒子上组成多靶标的SERS纳米标签。

3)靶标检测的过程：

①取人的尿液于试管中，无需进行特殊的前处理，若过于浑浊，可进行离心取上清。随后加入三种SERS纳米标签的混合标签，反应2-5min；

②将试管中的混合液滴加到试纸条中的层析垫上，4-10min后，使用手持式拉曼光谱仪对试纸条上的检测线和质控线进行信号采集。

4)结果分析：

①质控线检测：从质控线所采集的拉曼光谱中，若同时出现耐尔兰A、罗丹明6G和结晶紫的特征峰，则表明试纸条检测结果可信；

②检测线检测：从检测线所采集的拉曼光谱中，若耐尔兰A、罗丹明6G和结晶紫的特征峰均同时出现，则表明检测样品中不存在甲基苯丙胺、可卡因和吗啡成分；若耐尔兰A的特征峰不出现，罗丹明6G和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在甲基苯丙胺；罗丹明6G的特征峰不出现，耐尔兰A和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在可卡因；若结晶紫的特征峰不出现，耐尔兰A和罗丹明6G的特征峰出现，则表明检测样品中存在吗啡；若耐尔兰A和罗丹明6G的特征峰不出现，结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在甲基苯丙胺和可卡因；若耐尔兰A和结晶紫的特征峰不出现，罗丹明6G的特征峰出现，则表明检测样品中存在甲基苯丙胺和吗啡；若耐尔兰A和结晶紫的特征峰不出现，罗丹明6G的特征峰出现，则表明检测样品中存在甲基苯丙胺和吗啡；若罗丹明6G和结晶紫的特征峰不出现，耐尔兰A的特征峰出现，则表明检测样品中存在可卡因和吗啡；若耐尔兰A、罗丹明6G和结晶紫的特征峰均同时不出现，则表明检测样品中存在甲基苯丙胺、可卡因和吗啡。

实施例2

C反应蛋白检测垂直流试纸条，包括以下步骤：

1)垂直流试纸条的构建：选用正方形的塑料材质的外壳(边长：50mm)。基于垂直双通道的二氧化硅层析垫的结构是无序的，孔洞的直径为10nm，孔深为40μm，其边长为40mm。吸收垫的材质为海绵，其边长为40mm。层析垫上划有单个包含抗C反应蛋白捕获抗体的检测点，质控点位于检测点的下边，其上固定有羊抗兔免疫球蛋白。按照层析垫在上，吸收垫在下的原则将两垫交叠在一起后封装在外壳内。

2)纳米标签的制备：选用基于磷化铟/硫化锌量子点(粒径：100nm)的纳米标签，将抗C反应蛋白检测抗体标记在磷化铟/硫化锌量子点上组成纳米标签。

3)靶标检测的过程：

①取人的血液于试管中，进行离心取上清。随后加入基于磷化铟/硫化锌量子点的纳米标签，反应2-5min；

②将试管中的混合液滴加到试纸条中的层析垫上，4-10min后，使用荧光分光光度计对试纸条上的检测点和质控点进行信号采集。

4)结果分析：

①质控点检测：从质控点所采集的荧光光谱中，若出现磷化铟/硫化锌量子点的荧光光谱，则表明试纸条检测结果可信；

②检测点检测：从检测点所采集的荧光光谱中，若出现磷化铟/硫化锌量子点的荧光光谱，则表明检测样品中存在C反应蛋白；若不出现磷化铟/硫化锌量子点的荧光光谱，则表明检测样品中不存在C反应蛋白。

实施例3

甲胎蛋白检测垂直流试纸条，包括以下步骤：

1)垂直流试纸条的构建：选用圆形的塑料材质的外壳(直径为50nm)。基于垂直双通道的聚甲基丙烯酸甲酯层析垫的结构是无序的，孔洞的直径为2500nm，孔深为60μm，其直径为40mm。吸收垫的材质为无纺布，其直径为40mm。层析垫上划有单个包含抗甲胎蛋白捕获抗体的检测点，质控点位于检测点的右边，其上固定有羊抗鼠免疫球蛋白。按照层析垫在上，吸收垫在下的原则将两垫交叠在一起后封装在外壳内。

2)纳米标签的制备：选用基于四氧化三铁(粒径：3nm)纳米粒子的纳米标签，将抗甲胎蛋白检测抗体标记在四氧化三铁纳米粒子上组成纳米标签。

3)靶标检测的过程：

①取人的血液于试管中，进行离心取上清。随后加入基于四氧化三铁纳米粒子的纳米标签，反应2-5min；

②将试管中的混合液滴加到试纸条中的层析垫上，4-10min后，使用磁力分析仪对试纸条上的检测点和质控点进行信号采集。

4)结果分析：

①质控点检测：从质控点所采集的磁信号光谱中，若出现四氧化三铁纳米粒子的磁信号光谱，则表明试纸条检测结果可信；

②检测点检测：从检测点所采集的磁信号光谱中，若出现四氧化三铁纳米粒子的磁信号光谱，则表明检测样品中存在甲胎蛋白；若不出现四氧化三铁纳米粒子的磁信号光谱，则表明检测样品中不存在甲胎蛋白。

实施例4

人绒毛膜促性腺激素检测垂直流试纸条，包括以下步骤：

1)垂直流试纸条的构建：选用圆形的塑料材质的外壳(直径为20nm)。基于聚苯乙烯的层析垫的结构周期为3000nm，孔深为100μm，其直径为10mm。吸收垫的材质为纤维素 -玻璃纤维复合物，其直径为10mm。层析垫上划有单条包含抗人绒毛膜促性腺激素捕获抗体的检测线，质控线位于检测点的左边，其上固定有羊抗兔免疫球蛋白。按照层析垫在上，吸收垫在下的原则将两垫交叠在一起后封装在外壳内。

2)纳米标签的制备：选用粒径为500nm的金纳米粒子，将抗人绒毛膜促性腺激素检测抗体标记在金纳米粒子上组成纳米标签。

3)靶标检测的过程：

①取人的尿液于试管中，无需进行特殊的前处理，若过于浑浊，可进行离心取上清。随后加入纳米标签，反应2-5min；

②将试管中的混合液滴加到试纸条中的层析垫上，4-10min后，使用肉眼对试纸条上的检测线和质控线进行信号采集。

4)结果分析：

①质控线检测：从质控线所采集的颜色信号中，若出现红色的条带，则表明试纸条检测结果可信；

②检测线检测：从检测线所采集的颜色信号中，若出现红色的条带，则表明检测样品中存在人绒毛膜促性腺激素；若不出现红色的条带，则表明检测样品中不存在人绒毛膜促性腺激素。

实施例5

氯霉素、链霉素、四环素和林可霉素多靶标检测垂直流试纸条，包括以下步骤：

1)垂直流试纸条的构建：选用圆形的塑料材质的外壳(直径为30mm)。基于垂直双通道的多孔硅层析垫的结构是无序的，孔洞的直径为1000nm，孔深为80μm，其直径为20mm。吸收垫的材质为滤纸，其直径为20mm。层析垫上依次划有四条检测线，每条检测线上分别固定有氯霉素-牛血清白蛋白抗原、链霉素-牛血清白蛋白抗原、四环素-牛血清白蛋白抗原和林可霉素-牛血清白蛋白抗原四种靶标结合剂，质控线位于检测线的左边，其上固定有羊抗兔免疫球蛋白。按照层析垫在上，吸收垫在下的原则将两垫交叠在一起后封装在外壳内。

2)纳米标签的制备：选用基于金核银壳纳米粒子(金核的直径为2nm；银壳的厚度为1 nm)的SERS纳米标签，分别将氯霉素抗体、链霉素抗体、四环素抗体和林可霉素抗体分别标记在固定有孔雀石绿异硫氰酸酯、对巯基苯甲酸、水溶性3H-吲哚菁型生物荧光标示染料和结晶紫的纳米粒子上组成多靶标的SERS纳米标签。

3)靶标检测的过程：

①取纯牛奶制品于试管中，无需进行特殊的前处理。随后加入四种SERS纳米标签的混合标签，反应2-5min；

②将试管中的混合液滴加到试纸条中的层析垫上，4-10min后，使用手持式拉曼光谱仪对试纸条上的四条检测线和质控线进行信号采集。

4)结果分析：

①质控线检测：从质控线所采集的拉曼光谱中若同时出现孔雀石绿异硫氰酸酯、对巯基苯甲酸、水溶性3H-吲哚菁型生物荧光标示染料和结晶紫的特征峰，则表明试纸条检测结果可信；

②检测线检测：对试纸条上的四条检测线a、b、c、d分别进行拉曼光谱分析，依次对应的抗生素是氯霉素(a)、链霉素(b)、四环素(c)和林可霉素(d)。从检测线a中采集的拉曼光谱中，若孔雀石绿异硫氰酸酯的特征峰不出现，则表明检测样品中存在氯霉素；反之，则表明检测样品中不存在氯霉素；从检测线b中采集的拉曼光谱中，若对巯基苯甲酸的特征峰不出现，则表明检测样品中存在链霉素；反之，则表明检测样品中不存在链霉素；从检测线c中采集的拉曼光谱中，若水溶性3H-吲哚菁型生物荧光标示染料的特征峰不出现，则表明检测样品中存在四环素；反之，则表明检测样品中不存在四环素；从检测线d中采集的拉曼光谱中，若结晶紫的特征峰不出现，则表明检测样品中存在林可霉素；反之，则表明检测样品中不存在林可霉素。

实施例6

盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林和西马特罗多靶标检测垂直流试纸条，包括以下步骤：

1)垂直流试纸条的构建：选用圆形的塑料材质的外壳(直径为40mm)。基于二氧化钛的层析垫的结构周期为2000nm，孔深为90μm，其直径为30mm。吸收垫的材质为纤维素膜，其直径为30mm。析垫上划有单个包含盐酸克伦特罗抗体-鸡卵清白蛋白抗原、莱克多巴胺-鸡卵清白蛋白抗原、沙丁胺醇-鸡卵清白蛋白抗原、特布他林-鸡卵清白蛋白抗原和西马特罗-鸡卵清白蛋白抗原五种靶标结合剂的检测点，质控点位于检测点的上边，其上固定有羊抗鼠免疫球蛋白。按照层析垫在上，吸收垫在下的原则将两垫交叠在一起后封装在外壳内。

2)纳米标签的制备：选用基于二氧化硅核金壳纳米粒子(二氧化硅核的直径为500nm；银壳的厚度为100nm)的SERS纳米标签，分别将盐酸克伦特罗抗体、莱克多巴胺抗体、沙丁胺醇抗体、特布他林抗体和西马特罗抗体分别标记在固定有孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰 A、对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的纳米粒子上组成多靶标的SERS纳米标签。

3)靶标检测的过程：

①取猪的尿液于试管中，无需进行特殊的前处理，若过于浑浊，可进行离心取上清。随后加入五种SERS纳米标签的混合标签，反应2-5min；

②将试管中的混合液滴加到试纸条中的层析垫上，4-10min后，使用手持式拉曼光谱仪对试纸条上的四条检测线和质控线进行光谱采集。

4)结果分析：

①质控线检测：从质控线所采集的拉曼光谱中，若同时出现孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰，则表明试纸条检测结果可信；

②检测线检测：从检测线所采集的拉曼光谱中，孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰均同时出现，则表明检测样品中不存在盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林和西马特罗五种所检测的瘦肉精成分；

若孔雀石绿异硫氰酸酯的特征峰不出现，耐尔兰A、对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗；若耐尔兰A的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在莱克多巴胺；若对巯基苯甲酸的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、罗丹明6G和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在沙丁胺醇；若罗丹明6G的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在特布他林；若结晶紫的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、对巯基苯甲酸和罗丹明6G的特征峰出现，则表明检测样品中存在西马特罗；若孔雀石绿异硫氰酸酯和耐尔兰A的特征峰不出现，对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗和莱克多巴胺；若孔雀石绿异硫氰酸酯和对巯基苯甲酸的特征峰不出现，耐尔兰A、罗丹明6G和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗和沙丁胺醇；若孔雀石绿异硫氰酸酯和罗丹明6G的特征峰不出现，耐尔兰A、对巯基苯甲酸和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗和特布他林；若孔雀石绿异硫氰酸酯和结晶紫的特征峰不出现，耐尔兰A、对巯基苯甲酸和罗丹明6G的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗和西马特罗；若耐尔兰A和对巯基苯甲酸的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、罗丹明6G和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在莱克多巴胺和沙丁胺醇；若耐尔兰A和罗丹明6G的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、对巯基苯甲酸和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在莱克多巴胺和特布他林；若耐尔兰A和结晶紫的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、对巯基苯甲酸和罗丹明6G的特征峰出现，则表明检测样品中存在莱克多巴胺和西马特罗；若对巯基苯甲酸和罗丹明6G的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在沙丁胺醇和特布他林；若对巯基苯甲酸和结晶紫的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、和罗丹明6G的特征峰出现，则表明检测样品中存在沙丁胺醇和西马特罗；若罗丹明6G和结晶紫的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A和对巯基苯甲酸的特征峰出现，则表明检测样品中存在特布他林和西马特罗；若孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A和对巯基苯甲酸的特征峰不出现，罗丹明6G和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇；若孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、和罗丹明6G的特征峰不出现，对巯基苯甲酸和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和特布他林；若孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A和结晶紫的特征峰不出现，对巯基苯甲酸和罗丹明6G 的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和西马特罗；若耐尔兰A、对巯基苯甲酸和罗丹明6G的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林；若耐尔兰A、对巯基苯甲酸和结晶紫的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯和罗丹明6G的特征峰出现，则表明检测样品中存在莱克多巴胺、沙丁胺醇和西马特罗；若对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯和耐尔兰A的特征峰出现，则表明检测样品中存在沙丁胺醇、特布他林和西马特罗；若孔雀石绿异硫氰酸酯、对巯基苯甲酸和罗丹明6G的特征峰不出现，耐尔兰A 和结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和特布他林；若孔雀石绿异硫氰酸酯、对巯基苯甲酸和结晶紫的特征峰不出现，耐尔兰A和罗丹明6G的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和西马特罗；若孔雀石绿异硫氰酸酯、罗丹明6G和结晶紫的特征峰不出现，耐尔兰A和对巯基苯甲酸的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗、西马特罗和特布他林；若耐尔兰A、罗丹明6G和结晶紫的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯和对巯基苯甲酸的特征峰出现，则表明检测样品中存在沙丁胺醇、特布他林和西马特罗；若孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、对巯基苯甲酸和罗丹明6G的特征峰不出现，结晶紫的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林；若孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、对巯基苯甲酸和结晶紫的特征峰不出现，罗丹明6G的特征峰出现，则表明样品中存在盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和西马特罗；若孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、罗丹明6G和结晶紫的特征峰不出现，对巯基苯甲酸的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、特布他林和西马特罗；若孔雀石绿异硫氰酸酯、对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰不出现，耐尔兰A 的特征峰出现，则表明检测样品中存在盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林和西马特罗；若耐尔兰A、对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰不出现，孔雀石绿异硫氰酸酯的特征峰出现，则表明检测样品中存在莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林和西马特罗；若孔雀石绿异硫氰酸酯、耐尔兰A、对巯基苯甲酸、罗丹明6G和结晶紫的特征峰均不同时出现，则表明检测样品中存在所检测的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林和西马特罗五种瘦肉精成分。

本发明方案所公开的技术手段不仅限于上述实施方式所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种垂直流试纸条，其特征在于：所述试纸条以外壳(1)作为基片，外壳内的结构从上至下依次为层析垫(2)和吸收垫(3)；其中层析垫(2)上设置有检测区(4)和质控区(5)；层析垫(2)和吸收垫(3)上下交叠在一起。

2.如权利要求1所述的一种垂直流试纸条，其特征在于：所述的外壳(1)是由防止液体渗透的惰性硬质材料制作而成的方形或圆形的盒状结构，其长度为20-50mm，宽度为20-50mm或直径为20-50mm。

3.如权利要求1所述的一种垂直流试纸条，其特征在于：所述的层析垫(2)为具有垂直双面通道二维有序结构的层析垫或具有垂直双面通道无序结构的层析垫，所述的二维有序结构的周期为100-3000nm，孔洞的直径为10-2500nm，孔深为30-100μm；所述的层析垫(2)具有蛋白吸附能力，其材料是氧化铝、硅、二氧化钛、聚苯乙烯、二氧化硅、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酸乙酯、聚乙烯、硝酸纤维素、醋酸纤维素、尼龙或聚偏氟乙烯的其中一种；所述的层析垫(2)的长度为10-40mm，宽度为10-40mm或直径为10-40mm。

4.如权利要求1所述的一种垂直流试纸条，其特征在于：所述的吸收垫(3)具有亲水性，吸收垫(3)材料为吸水纸、纤维素膜、滤纸、纤维素-玻璃纤维复合物、无纺布或海绵的其中一种；所述的吸收垫(3)的长度为10-40mm，宽度为10-40mm或直径为10-40mm。

5.如权利要求1所述的一种垂直流试纸条，其特征在于：所述的检测区(4)为使用靶标结合剂划在层析垫(2)上的一条或多条直线、单个点或多个点组成的阵列，用于检测样本中的靶标；其中，当检测区(4)为一条直线或单个点时，其上连接有一种、两种或多种靶标结合剂；当检测区(4)为两条及两条以上直线或两个点及两个点以上时，各条直线平行排列，或各个点组成阵列的形式，每条直线或每个点上连接一种、两种或多种靶标结合剂；所述的靶标结合剂为靶标的捕获抗体、适配体、DNA序列或配基。

6.如权利要求1所述的一种垂直流试纸条，其特征在于：所述的质控区(5)的呈现形式可以是一条直线或多条直线、单个点或多个点组成的阵列，该直线或点上通过物理吸附或共价固定有与检测抗体相对应的捕获抗体、适配体、DNA序列或配基，该与检测抗体相对应的捕获抗体、适配体、DNA序列或配基与检测抗体进行特异性结合，且不与靶标发生交叉反应；所述的质控区(5)的位置可以在检测区(4)的左边、右边、上方或下方。

7.如权利要求1所述的一种垂直流试纸条，其特征在于：所述试纸条的具体实施步骤包括①在试管中进行靶标(6)与基于纳米材料(7)的标签反应；②反应液通过试纸条进行垂直流测定，通过信号(8)采集实现靶标检测。

8.如权利要求7所述的一种垂直流试纸条，其特征在于：所述的具体实施步骤①中的靶标(6)是蛋白质、核酸、重金属离子、有机小分子、真菌、细菌或病毒的其中一种。

9.如权利要求7所述的一种垂直流试纸条，其特征在于：所述的具体实施步骤①中的纳米材料(7)修饰有信号标签，且纳米材料(7)表面通过静电吸附或共价连接固定有检测抗体，实现靶标的检测，或纳米材料(7)表面直接通过静电吸附或共价连接固定有检测抗体，实现靶标的检测。所述的纳米材料(7)包括四类：第一类是金属纳米粒子，这其中包含两部分，a)单一结构的纳米材料，金纳米粒子、银纳米粒子、铜纳米粒子或铂纳米粒子的其中一种，其粒径分布范围为2-500nm；b)核壳结构的纳米粒子，金核银壳纳米粒子、金核金壳纳米粒子、银核金壳纳米粒子、银核银壳纳米粒子、二氧化硅核金壳纳米粒子、金核二氧化硅壳纳米粒子、二氧化硅核银壳纳米粒子或银核二氧化硅壳纳米粒子的其中一种，其核的尺寸范围在2-500nm；壳的厚度范围在1-100nm；第二类是碳纳米材料，碳纳米管、碳纳米纤维或纳米碳球的其中一种，其粒径分布范围为2-500nm；第三类是磁性纳米材料，三氧化二铁纳米粒子、四氧化三铁纳米粒子或锰锌铁氧体纳米晶的其中一种，其粒径分布范围为3-500nm；第四类是量子点，磷化铟/硫化锌量子点、硒化镉/硫化锌量子点或硫化铅量子点的其中一种，其粒径分布范围为1-100nm；所述的信号标签包括两类：第一类是拉曼标签分子，耐尔兰A、结晶紫、罗丹明6G、亚甲基蓝、对氨基苯硫酚、水溶性3H-吲哚菁型生物荧光标示染料、甲基蓝、4,4’-联吡啶、孔雀石绿异硫氰酸酯、4-巯基吡啶、对氟苯硫酚、对巯基苯胺、对氨基苯硫酚、对巯基苯硫酚、对巯基苯甲酸或甲苯胺蓝的其中一种；第二类是荧光材料，异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白、碘化丙啶、别藻青蛋白、Cy3、Cy5、量子点或上转换纳米粒子的其中一种；所述的信号标签修饰的纳米粒子(7)的修饰方式是指将信号标签通过静电吸附或共价连接固定在纳米粒子(7)表面或核壳结构纳米粒子的核壳间隙处。

10.如权利要求7所述的一种垂直流试纸条，其特征在于：所述的具体实施步骤②中信号(8)是比色信号、荧光信号、表面增强拉曼散射信号、化学发光信号、非线性光学响应信号或磁信号的其中一种。