CN110521514A - 一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法；包括如下步骤：A、菌液的发酵制备：A‑1、将发酵菌株阴沟肠杆菌接种到LB液体培养基上培养和初次筛选；A‑2、对于步骤A‑1制备的初等菌液进行筛选获取优等菌液；B、番茄种子处理：B‑1、番茄种子进行消毒处理，备用；B‑2、取步骤A获得的优等菌液，将番茄种子在菌液中浸泡，取浸泡过的种子进行无菌水培养发芽培养至出苗；C、番茄根部处理，处理后的番茄植株在根系生长、植株发育、叶绿素含量等方面均具有明显的优势。本研究面向番茄的种植开发出了一套微生物促生处理方法，微生物处理对番茄的根系生长、植株发育、叶绿素含量都有明显的促进作用。

Description

一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植 株种子和根系处理方法
技术领域
本发明涉及一种农业微生物技术领域，尤其是一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法。
背景技术
长期采用不同的施肥方式，土壤有机质含量和组成会有较大变化，土壤微生物多样性也呈现较大的差异。研究表明，施肥使土壤微生物群落结构发生显著变化，长期平衡施肥使土壤微生物量碳氮和微生物功能活性增强，施用有机肥或复合肥均有利于根际微生物的生长繁殖，根际细菌多样性指数和均匀度指数也有所提高。总之，长期施肥能够使土壤生态系统的质量和功能结构发生显著变化，对土壤微生物的群落结构和生物多样性产生重要影响。
植物根际促生菌(plantgrowthpromotingrhizobacteria,简称PGPR)是指能够通过分泌有益物质直接或者间接促进植物生长的细菌[7],植物根际促生菌具有固氮、溶磷、溶铁、产生植物激素，以及提高植物抗逆性等多种促生作用[8]。利用植物根际促生菌来改善土壤结构、减少化肥农药使用、提高作物产量、改善产品品质等方面有着重要作用和意义。
相关参考技术文献包括：
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发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。
一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，包括如下步骤：
A、菌液的发酵制备：
A-1、将发酵菌株阴沟肠杆菌接种到LB液体培养基上培养，得到种子液；然后取种子液再次接种到的LB液体培养基上，培养结束后取培养液置于离心管中，离心取上清液加入到孔板中,加入S2比色液，黑暗中观察，颜色不变的菌液废弃，颜色变红者为初等菌液；
A-2、对于步骤A-1制备的初等菌液进行筛选获取优等菌液；
A-2-1、制作标准曲线，使用吲哚乙酸制作25、50、75、100、125mg/L溶液，取标准吲哚乙酸溶液置于孔板中，加入比色液，黑暗反应，然后使用酶标仪测定OD值，得到数据制成标准曲线；
A-2-2、将步骤A-1制备的初等菌液按照2‰v/v接种到LB液体培养基上，培养得到种子液；取种子液再次接种到LB液体培养基上培养，取培养液置于离心管中，离心取上清液置于孔板中，加入等体积S2比色液，黑暗反应，利用酶标仪测量OD535，在标准曲线上计算出吲哚乙酸浓度；计算择取24h吲哚乙酸发酵产量不小于35mg/L的菌液为优等菌液；
B、番茄种子处理：
B-1、番茄种子进行消毒处理，使用无菌水清洗种子，用75％的酒精浸泡番茄种子，然后再用无菌水清洗，用次氯酸钠溶液浸泡10min，再次用无菌水清洗，备用；
B-2、取步骤A获得的优等菌液，调节菌液OD600值至0.6-1.0，将番茄种子在菌液中浸泡，取浸泡过的种子进行无菌水培养发芽培养，至出苗；
C、番茄根部处理：
取步骤A获得的优等菌液，调节菌液浓度至(0.5-5)×10^8CFU/ml，出苗后每株番茄根部浇灌200-800uL菌液；其余处理与常规番茄种植方法一致；处理后的番茄植株在根系生长、植株发育、叶绿素含量等方面均具有明显的优势。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤A-1的具体操作步骤为：A-1、将发酵菌株阴沟肠杆菌接种到LB液体培养基上，置于28摄氏度、150r/min培养24h，得到种子液；取20uL种子液接种到10mL的LB液体培养基上，置于28摄氏度、 150r/min培养24h，取1mL于离心管中，8000r/min离心10min，取上清液100uL 于96孔板中,加入等体积的S2比色液，黑暗30分钟，颜色不变的菌液废弃，颜色变红者为初等菌液。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤A-2-1的具体操作步骤为：A-2-1、制作标准曲线，使用3-吲哚乙酸制作25、50、75、100、125mg/L溶液，取标准吲哚乙酸溶液100uL置于96孔板，加入S2比色液，黑暗反应30min，使用酶标仪测定OD535，每组重复3组，得到数据制成标准曲线。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤A-2-2的具体操作步骤为：A-2-2、将步骤A-1制备的初等菌液按照2‰w/w接种到LB液体培养基上，置于28摄氏度、150r/min培养24h，得到种子液；取200uL种子液接种到100mlLB液体培养基上，每个菌样重复3次，置于28摄氏度、150r/min培养24h，取培养液 1ml于离心管中，8000r/min离心10min，取上清液100uL于96孔板中，分别加入等体积S2比色液，黑暗反应30min，利用酶标仪测量OD535，在标准曲线上计算出吲哚乙酸浓度；计算择取24h吲哚乙酸发酵产量不小于35mg/L的菌液为优等菌液。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-1的具体操作步骤为：B-1、番茄种子进行消毒处理，使用无菌水清洗种子数次，用75％的酒精浸泡番茄种子30s，用无菌水清洗5次，用有效氯浓度1％的次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水再次清洗5次，备用。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-2的具体操作步骤为：B-2、取步骤A获得的优等菌液，调节菌液OD600值至0.6-1.0，将番茄种子在菌液中浸泡 12h，取浸泡过的种子进行无菌水培养发芽培养。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤C的具体操作步骤为：C、番茄根部处理：取步骤A获得的优等菌液，调节菌液浓度至10^8CFU/ml，出苗后每株番茄根部浇灌500uL菌液；其余处理与常规番茄种植方法一致；处理后的番茄植株在根系生长、植株发育、叶绿素含量等方面均具有明显的优势。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-2中，番茄种子发芽指标的测定方法为：每组6个重复，每个重复40颗种子，每24h统计一次发芽种子数，连续统计8d，计算发芽率，发芽势，发芽指数，萌发活力指数；发芽率＝8d发芽种子数/总的发芽种子数*100,发芽势＝4d发芽种子数/总的种子数*100，发芽指数＝∑(Gt/Dt)，其中Gt为t时间内发芽种子数、Dt为发芽时间，萌发活力指数＝发芽指数*平均单株鲜重。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤C中，番茄根系发育指标的测定方法为：番茄植株置于22℃、18h光照/6h黑暗的气候室内培养至4片真叶时进行破坏性取样，测量常规生长指标，使用根系分析仪分析根系发育情况。
作为本发明的一种优选技术方案，步骤A-2-2中，保存所得到的优等菌液，作为下次发酵的菌种种液。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本研究针对长期施用化肥的大田土壤，面向番茄的种植开发出了一套微生物促生处理方法。本研究控制单因子变量，探究时间、温度、酸碱度、通气量对阴沟肠杆菌IAA发酵的影响，得到了极佳的实用性操作工艺参数；尤其是，进一步通过番茄发芽和根系生长试验验证菌株对植物的促生作用。结果表明：利用阴沟肠杆菌进行发酵，经过简单筛选即可完成促生菌液的快速、高产、稳定制备，发酵条件探究显示最适发酵条件为：温度为35℃、初始pH为8，时间为72h，装液量为25ml/250ml；传代过程中产IAA性质稳定。促生实验显示，微生物处理对番茄的根系生长、植株发育、叶绿素含量都有明显的促进作用。
附图说明
图1是本发明菌株发酵条件的探究结果图示。
具体实施方式
以下实施例详细说明了本发明。本发明所使用的各种原料及各项设备均为常规市售产品，均能够通过市场购买直接获得。
实施例1、材料
1.1.1土壤样品采集及前期处理
土壤样品采自河南省农科院试验田，从长期施用N2PK的试验田中采用抖土法获得土壤样品，剔除石块、根茬后装入自封袋运回实验室，土样过2mm筛备用。
1.1.2试剂和培养基
试剂：3-IAA、L-色氨酸.(纯度均为98％以上，由solar提供)；
阴沟肠杆菌由河南省农科院提供，购自上海研生生化试剂有限公司。
LB培养基：蛋白胨10g,酵母提取物5g，氯化钠10g,加蒸馏水至1000ml，调节pH至7.0；固体培养基在此基础上加15g琼脂；
发酵培养基：LB液体培养基+色氨酸(100mg/L)。
1.1.3Salkowski比色液
S1比色液：12g三氯化铁，300ml蒸馏水，429.7mL98％硫酸，待冷却后定容至1L，测定IAA范围0.3-20mg/L；
S2比色液：4.5g三氯化铁，300ml蒸馏水，587.4mL98％硫酸，待冷却后定容至1L，测定IAA范围5-200mg/L.
实施例2、方法
1.2.1培养和发酵方法
取阴沟肠杆菌菌株，接种到LB液体培养基上，置于28摄氏度、150r/min 培养24h，得到种子液。取20uL种子液接种到10mL的LB液体培养基上，置于 28摄氏度、150r/min培养24h。取1mL于离心管中，8000r/min离心10min，取上清液100uL于96孔板中,加入等体积的S2比色液，黑暗30分钟，颜色能变红者能产IAA,颜色越深，IAA产量越大，颜色不变者表示不能产生IAA。
1.2.2复筛
标准曲线的制作：标准曲线使用3-IAA制作25、50、75、100、125mg/L，取标准IAA溶液100uL置于96孔板，加入S2比色液，黑暗反应30min，使用酶标仪测定OD535，每组重复3组，得到数据制成标准曲线。
产量定量检测：将比色反应颜色较深的菌株种子液按照2‰接种到LB液体培养基上，置于28摄氏度、150r/min培养24h，得到种子液。取200uL接种到 100mlLB液体培养基上，每个菌样重复3次，置于28摄氏度、150r/min培养24h。取培养液1ml于离心管中，8000r/min离心10min，取上清液100uL于96孔板中，分别加入等体积S2比色液，黑暗反应30min，利用酶标仪测量OD535，在标准曲线上计算出IAA浓度。
实施例3、发酵条件的探究
1.2.3.1时间
采用上述的体系和培养条件，连续培养5d,每24h取样一次，测定菌液中 IAA浓度和相应的菌液OD600值。
1.2.3.2温度
采用1.2.1.3的体系，分别设置20℃、24℃、28℃、32℃、36℃，每组设置3个重复，置于150r/min培养24h，测定菌液中IAA浓度和相应的菌液OD600 值。
1.2.3.3pH值
采用1.2.1.3的体系和方法，调整培养基pH值分别为4、5、6、7、8、9、 10，每组设置3个重复，培养24h，测定菌液中IAA浓度和相应的菌液OD600值。
1.2.3.4通气量
设置发酵体系为25ml/250ml、50ml/250ml、100ml/250ml、150ml/250ml、 200ml/250ml，每组3个重复，置于28℃，150r/min条件下培养24h，测定菌液 IAA浓度和相应的菌液OD600值。
实施例4、产IAA菌对番茄的促生作用
1.2.4.1材料及处理
使用材料为中国番茄(Solanum lycopersicum Mill.var.Ailsa Craig, AC++)种子(由本实验室提供)，种子进行消毒处理，使用无菌水清洗种子数次，用75％的酒精浸泡番茄种子30s，用无菌水清洗5次，用有效氯浓度1％的次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水再次清洗5次，备用。
1.2.4.2种子发芽指标
选取阴沟肠杆菌菌株接种到LB液体培养基上，置于28摄氏度、150r/min 摇床上培养24h，使用培养基调节菌液OD600值至0.6-1.0，第一组将番茄种子在菌液中浸泡12h，第二组在无菌水中浸泡12h。取浸泡过的种子进行发芽培养，设置2组实验：a:菌液浸泡+无菌水培养；b：无菌水浸泡+无菌水培养培养。每组6个重复，每个重复40颗种子。每24h统计一次发芽种子数，连续统计8d。计算发芽率，发芽势，发芽指数，萌发活力指数。发芽率＝8d发芽种子数/总的发芽种子数*100,发芽势＝4d发芽种子数/总的种子数*100，发芽指数＝∑(Gt/Dt) (其中Gt为t时间内发芽种子数、Dt为发芽时间)，萌发活力指数＝发芽指数* 平均单株鲜重。
1.2.4.3产IAA菌对根系的促生作用
取阴沟肠杆菌菌株接种到LB液体培养基上，置于28摄氏度、150r/min培养24h，调节菌液浓度至10^8CFU/ml。供试土壤采用营养土，每盆装土110g。每盆种植1颗野生型番茄种子，实验组每盆加入500uL菌液，对照组每盆加入等体积灭活菌液，每个菌样实验组和对照组各设置8个重复。置于22℃、18h 光照/6h黑暗的气候室内培养至4片真叶时进行破坏性取样，测量各项生长指标，使用根系分析仪分析根系发育情况。
实施例5、菌株发酵条件的探究影响
2.4.1时间由图1A可知，液体培养基的OD600值在72h之前一直增加，表明菌体一直在生长，同时IAA含量也一直在积累。72h之后，由于营养物质的消耗和次生代谢物的积累，菌体生长停止，培养液OD600值下降，不在产生IAA，同时产生并积累的次生代谢物会分解IAA，造成IAA含量下降。
2.4.2温度由图1B可知，菌株在35℃生长最为旺盛，IAA产量也最高，其发酵液OD600值与IAA含量随温度的变化趋势是相同的，也说明菌株的生长温度与产IAA的温度是同步的。温度过低，菌株生长缓慢，IAA产量较低；高温则抑制了菌株的生长和代谢，所以菌液浓度和IAA含量都会降低。
2.4.3pH值分析图1C可知，菌株在pH为8左右时菌株浓度最大，IAA 产量最高。在pH小于8时，pH的变化对菌体生长和IAA的生产的影响较小，在pH为4时菌体浓度和IAA含量依旧很高，表明菌株对酸性环境不敏感；在pH 大于8时，其菌体浓度和IAA含量随pH值增加而显著降低，当pH等于10时，其菌体浓度已经接近于0，表明菌株对碱性环境很敏感。在IAA菌最适pH值方面，有报道产IAA菌的最适pH值在4-5[18]，也有报道产IAA菌的最适pH值在 8左右[19-20],之所以产IAA菌的最适pH值差异较大，一方面是菌株原生环境的差异，另一方面也是由于菌株之间的物种差异造成的。
2.4.4通气量根据图1D可知，随着通气量的增加，其菌体浓度和IAA含量递增，大致呈现线性关系。增加通气量，能够保证菌体生长和生化代谢所需氧气，加速菌体生长和次生代谢物的产生。
实施例6、菌株对番茄的促生效果
2.5.1菌株对番茄种子发芽的影响
实验结果表明，实验组使用菌液上清浸泡，发芽指标呈现出显著差异 (p<0.01)。在发芽率、发芽势、发芽指数、萌发活力指数四个方面都显示出极显著差异，也验证了菌株对中国番茄(Solanum lycopersicum Mill.var.Ailsa Craig,AC++)发芽有明显的促进作用。
菌株对番茄种子发芽的影响结果
注：**代表T检验显著性差异显示差异极显著(p<0.01)
2.5.2对番茄促进生长的结果
本实验的实验组在加入阴沟肠杆菌菌株后，其根表面积、根宽、体积等与对照组相比呈现显著差异(p<0.05)，根尖数实验组与对照组呈现极显著差异 (p<0.01),根表面积增加35％、根宽增加23％、根长增加36％、根尖数增加38％，根体积实验组是对照组的1,5倍，菌株对番茄根系的促生效果明显。对于地上部分，实验组与对照组之间没有显著差异。相关试验数据见下表。
菌株对番茄生长指标的影响
株高(cm) 株重(g) 叶绿素含量(mg/g)
CK 7.11±0.287 1.15±0.097 910.67±67.901
N2PK2 7.72±0.340 1.24±0.149 914.95±29.475
菌株对番茄根系发育的影响
注：同一列中*代表有显著差异(p<0.05),**代表有极显著差异(p<0.001)
相关原始数据记录如下：
RgnArea RgnWudth RgnHeight
CK 42.19±3.772 5.52±0.298 7.55±0.353
试验组 56.91±3.601* 6.79±0.356* 8.41±0.369
Len SA PA
CK 99.87±12.463 10.27±1.228 3.27±0.391
试验组 135.52±8.992* 14.35±0.980* 4.57±0.312*
Vol AygD NTips
CK 0.08±0.010 0.33±0.005 541.13±50.490
试验组 0.12±0.009* 0.34±0.006 745.25±36.632**
NForks NCross 叶绿素
CK 554.75±83.827 82.00±14.127 910.67±67.901
试验组 71738±60933 12375±14095 91495±29475
株重 株高
CK 1.15±0.097 7.11±0.287
试验组 1.24±0.149 7.72±0.340
实施例7、菌株分析
研究组进一步对所采用的阴沟肠杆菌菌株进行了生理生化测定。
经过在LB培养基上观察，其形成大而湿润的粘液状菌落，无荚膜。菌体生理生化结果如下：
生理生化测定结果
综上可见，本研究面向番茄的种植开发出了一套微生物促生处理方法。本研究控制单因子变量，探究时间、温度、酸碱度、通气量对阴沟肠杆菌IAA发酵的影响，得到了极佳的实用性操作工艺参数；尤其是，进一步通过番茄发芽和根系生长试验验证菌株对植物的促生作用。结果表明：利用阴沟肠杆菌进行发酵，经过简单筛选即可完成促生菌液的快速、高产、稳定制备，发酵条件探究显示最适发酵条件为：温度为35℃、初始pH为8，时间为72h，装液量为 25ml/250ml；传代过程中产IAA性质稳定。促生实验显示，微生物处理对番茄的根系生长、植株发育、叶绿素含量都有明显的促进作用。
上述描述仅作为本发明可实施的技术方案提出，不作为对其技术方案本身的单一限制条件。

Claims (10)

1.一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
A、菌液的发酵制备：
A-1、将发酵菌株阴沟肠杆菌接种到LB液体培养基上培养，得到种子液；然后取种子液再次接种到的LB液体培养基上，培养结束后取培养液置于离心管中，离心取上清液加入到孔板中,加入S2比色液，黑暗中观察，颜色不变的菌液废弃，颜色变红者为初等菌液；
A-2、对于步骤A-1制备的初等菌液进行筛选获取优等菌液；
A-2-1、制作标准曲线，使用吲哚乙酸制作25、50、75、100、125mg/L溶液，取标准吲哚乙酸溶液置于孔板中，加入比色液，黑暗反应，然后使用酶标仪测定OD值，得到数据制成标准曲线；
A-2-2、将步骤A-1制备的初等菌液按照2‰v/v接种到LB液体培养基上，培养得到种子液；取种子液再次接种到LB液体培养基上培养，取培养液置于离心管中，离心取上清液置于孔板中，加入等体积S2比色液，黑暗反应，利用酶标仪测量OD535，在标准曲线上计算出吲哚乙酸浓度；计算择取24h吲哚乙酸发酵产量不小于35mg/L的菌液为优等菌液；
B、番茄种子处理：
B-1、番茄种子进行消毒处理，使用无菌水清洗种子，用75％的酒精浸泡番茄种子，然后再用无菌水清洗，用次氯酸钠溶液浸泡10min，再次用无菌水清洗，备用；
B-2、取步骤A获得的优等菌液，调节菌液OD600值至0.6-1.0，将番茄种子在菌液中浸泡，取浸泡过的种子进行无菌水培养发芽培养，至出苗；
C、番茄根部处理：
取步骤A获得的优等菌液，调节菌液浓度至(0.5-5)×10^8CFU/ml，出苗后每株番茄根部浇灌200-800uL菌液；其余处理与常规番茄种植方法一致；处理后的番茄植株在根系生长、植株发育、叶绿素含量等方面均具有明显的优势。
2.根据权利要求1所述的一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：步骤A-1的具体操作步骤为：A-1、将发酵菌株阴沟肠杆菌接种到LB液体培养基上，置于28摄氏度、150r/min培养24h，得到种子液；取20uL种子液接种到10mL的LB液体培养基上，置于28摄氏度、150r/min培养24h，取1mL于离心管中，8000r/min离心10min，取上清液100uL于96孔板中,加入等体积的S2比色液，黑暗30分钟，颜色不变的菌液废弃，颜色变红者为初等菌液。
3.根据权利要求1所述的一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：步骤A-2-1的具体操作步骤为：A-2-1、制作标准曲线，使用3-吲哚乙酸制作25、50、75、100、125mg/L溶液，取标准吲哚乙酸溶液100uL置于96孔板，加入S2比色液，黑暗反应30min，使用酶标仪测定OD535，每组重复3组，得到数据制成标准曲线。
4.根据权利要求1所述的一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：步骤A-2-2的具体操作步骤为：A-2-2、将步骤A-1制备的初等菌液按照2‰w/w接种到LB液体培养基上，置于28摄氏度、150r/min培养24h，得到种子液；取200uL种子液接种到100mlLB液体培养基上，每个菌样重复3次，置于28摄氏度、150r/min培养24h，取培养液1ml于离心管中，8000r/min离心10min，取上清液100uL于96孔板中，分别加入等体积S2比色液，黑暗反应30min，利用酶标仪测量OD535，在标准曲线上计算出吲哚乙酸浓度；计算择取24h吲哚乙酸发酵产量不小于35mg/L的菌液为优等菌液。
5.根据权利要求1所述的一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：步骤B-1的具体操作步骤为：B-1、番茄种子进行消毒处理，使用无菌水清洗种子数次，用75％的酒精浸泡番茄种子30s，用无菌水清洗5次，用有效氯浓度1％的次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水再次清洗5次，备用。
6.根据权利要求1所述的一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：步骤B-2的具体操作步骤为：B-2、取步骤A获得的优等菌液，调节菌液OD600值至0.6-1.0，将番茄种子在菌液中浸泡12h，取浸泡过的种子进行无菌水培养发芽培养。
7.根据权利要求1所述的一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：步骤C的具体操作步骤为：C、番茄根部处理：取步骤A获得的优等菌液，调节菌液浓度至10^8CFU/ml，出苗后每株番茄根部浇灌500uL菌液；其余处理与常规番茄种植方法一致；处理后的番茄植株在根系生长、植株发育、叶绿素含量等方面均具有明显的优势。
8.根据权利要求1所述的一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：步骤B-2中，番茄种子发芽指标的测定方法为：每组6个重复，每个重复40颗种子，每24h统计一次发芽种子数，连续统计8d，计算发芽率，发芽势，发芽指数，萌发活力指数；发芽率＝8d发芽种子数/总的发芽种子数*100,发芽势＝4d发芽种子数/总的种子数*100，发芽指数＝∑(Gt/Dt)，其中Gt为t时间内发芽种子数、Dt为发芽时间，萌发活力指数＝发芽指数*平均单株鲜重。
9.根据权利要求1所述的一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：步骤C中，番茄根系发育指标的测定方法为：番茄植株置于22℃、18h光照/6h黑暗的气候室内培养至4片真叶时进行破坏性取样，测量常规生长指标，使用根系分析仪分析根系发育情况。
10.根据权利要求1所述的一种能够同时促进番茄根系生长、植株发育、叶绿素含量的植株种子和根系处理方法，其特征在于：步骤A-2-2中，保存所得到的优等菌液，作为下次发酵的菌种种液。
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