CN110506862A - 一种改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料及其制法与应用 - Google Patents

一种改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料及其制法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料及其制法与应用，属于饲料领域。该固态发酵饲料由复合益生菌对发酵基料发酵而成，所述复合益生菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌；所述发酵基料包括玉米、去皮豆粕、大豆皮、豆油、蔗糖。本发明所提供的发酵饲料具有天然发酵香味、抗营养因子含量低提升仔猪的采食欲望，改善生长性能。所述固态发酵饲料的制备方法操作简单、发酵过程易于控制、能耗低、对环境要求相对较低、降低了生产成本。所述的固态发酵饲料尤为适用于断奶仔猪阶段饲养中，可显著提高断奶仔猪生长性能、缓解腹泻、改善仔猪肠黏膜屏障功能，具有广阔的市场前景。

Description

一种改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料及其 制法与应用
技术领域
本发明属于饲料技术领域，特别涉及一种改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料及其制法与应用。
背景技术
随着我国生猪行业朝着规模化、集约化方向飞速发展，养殖方式的改变和减抗禁抗相关政策的实施，催生出猪生长过程中一系列问题。尤其在断奶阶段，仔猪免疫系统发育不完全、抵抗力较差。同时，断奶造成的应激往往引发仔猪生长性能减弱、腹泻、死亡等问题，给行业带来了巨大的经济损失。诸多研究表明，通过微生物发酵，能够降解饲料中的抗营养因子，分解部分大分子蛋白质，得到多肽等易于被仔猪消化吸收的物质，产生酸、酯等使饲料有天然的发酵香味的物质，提高仔猪的生长性能。更重要的是，微生物发酵过程中产生的有益菌及其代谢产物，能够抑制肠道部分有害菌的生长、减缓腹泻、协助建立肠道免疫屏障，改善了仔猪肠道环境。因此，微生物发酵饲料被认为具有一定改善仔猪生长和肠道健康的作用，受到了养猪从业者的诸多关注。但在实际生产中，由于微生物发酵效果的差异、贮存条件的限制、大量生产效率低等问题，使微生物发酵饲料大规模制备和应用仍存在多问题。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料。所述的固态发酵饲料根据断奶阶段仔猪营养需要(参照NRC猪的营养需要2012版和中国猪营养标准2004版) 设计配方，优选玉米、豆粕等优质饲料原料配制饲料，不添加抗生素。
本发明的另一目的在于提供所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法；通过优选复合益生菌、改善发酵条件等措施来解决现有技术中的问题。所述的固态发酵饲料发酵过程易于控制、操作简单、能耗低、对环境要求相对较低、发酵原料成本相对经济。
本发明的又一目的在于提供所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的应用。所述的固态发酵饲料应用于断奶仔猪饲养中，提高仔猪生长性能、改善肠道健康。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料，玉米、去皮豆粕、大豆皮、豆油、蔗糖作为发酵基料，利用复合益生菌对所述的发酵基料进行固态发酵得到，所述的复合益生菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌。
所述枯草芽孢杆菌优选为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GIM1.372。
所述地衣芽孢杆菌优选为地衣芽孢杆菌(Baclicus lincheniformis)PWD-1。
所述植物乳杆菌优选为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) CGMCC1258。
所述罗伊氏乳杆菌优选为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)CGMCCNo.11154。
所述酵母菌优选为酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)CNCM I-1079。
所述复合益生菌中枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的活菌浓度分别优选为1.2×108CFU/mL、1.2×108CFU/mL、1.2 ×108CFU/mL、0.6×108CFU/mL、0.6×108CFU/mL。
所述的发酵基料优选包含以下重量百分比的组分，玉米：去皮豆粕：大豆皮：蔗糖：豆油＝(6.8～7.2):(1.8～2.2):(0.3～0.6):(0.12～0.15):(0.3～0.5)；更优选包含按重量百分比计算的玉米70.71％、去皮豆粕19.04％、大豆皮4.95％、蔗糖1.22％、豆油4.08％。
所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理
按配方量将玉米、去皮豆粕和大豆皮混合，随后加入蔗糖、豆油，有利于原料混匀，并使发酵更为充分，充分混匀得到发酵基料；
(2)配制发酵所用混合菌液
将活化好的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌菌种按所需份量加入营养液中，混合均匀即得到发酵菌液；
(3)向步骤(1)所述的发酵基料中均匀喷入步骤(2)所述的发酵菌液，将发酵基料与发酵菌液充分混合后密封进行固态发酵，即得所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料。
步骤(1)中所述的玉米和/或去皮豆粕混合前优选先进行粉碎过筛的操作，可使复合菌对基料进行更为充分的发酵；粉碎粒度优选为500μm。
步骤(2)中所述的营养液的配制方法为：在水中加入按质量比计算的葡萄糖2％、KH2PO4 0.2％、K2HPO4 0.3％。
所述的水优选为去离子水、蒸馏水或超纯水。
步骤(2)中所述的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌优选按配比1:1:1:0.5:0.5进行混合。
步骤(2)中所述的发酵菌液中的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的浓度优选依次为1.2×108CFU/mL、1.2×108 CFU/mL、1.2×108CFU/mL、0.6×108CFU/mL和0.6×108CFU/mL。
步骤(3)中所述的发酵基料的水分优选在37％～38％之间，水是微生物生长代谢的必须养分，含水量过低不利于菌体生长，含水量过高会增加杂菌污染的可能性。
步骤(3)所述的密封的具体操作优选为将充分混合后发酵基料与发酵菌液装入呼吸袋中，用封口机对呼吸袋进行密封。
步骤(3)中所述的固态发酵的时间优选为3～6天；更优选为发酵3天，不会造成乳酸菌过多，降低饲料pH值，进而影响饲料品质的问题；同时，发酵 3天后的饲料呈棕黄色，气味酸香，避免了发酵不充分或发酵过度的问题。
步骤(3)中所述的固态发酵的环境温度优选为32～37℃。
步骤(3)中所述的发酵基料与发酵菌液的配比优选为每吨发酵基料添加 400～450升发酵菌液，更优选为420升。
所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的应用，应用于断奶阶段仔猪的饲养中，可实现改善断奶仔猪生长性能和肠道健康的目的。
所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的应用的具体方法为将所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料用于饲喂，或基础饲粮混合后进行饲喂。
所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料与基础饲粮优选按质量比(1～5)：(5～9)进行混合。
在所述的饲喂中，参考NRC猪的营养需要2012版和中国猪营养标准2004 版的标准，还可以在所述的固态发酵饲料加入复合维生素和矿物质预混料进行饲喂。
所述复合维生素和矿物质预混料为每千克饲料提供：铁100mg、铜150 mg、锰30mg、硒0.30mg、碘0.5mg、维生素A 13500IU、维生素D3 2250IU、维生素E 24mg、维生素K 33mg、维生素B1 3mg、维生素B2 6mg、维生素 B6 3mg、维生素B12 25μg、泛酸钙15mg、叶酸1.2mg、生物素0.15μg。
本发明采用的复合菌组合中，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌主要在前期进行好氧发酵，产生多种生物活性酶，例如蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等，可将大分子蛋白分解为小分子肽类；同时二者在仔猪肠道中，在生物夺氧作用机制下，能够抑制有害菌生长，保障肠道健康；植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌主要在后期进行厌氧发酵，产生的乳酸和芳香物质，改善饲粮的风味和适口性，降低肠道的pH值，抑制有害微生物生长，预防仔猪腹泻；酵母菌属兼性好氧菌，在好氧或缺氧条件下都可对饲料进行发酵，产生大量菌体蛋白，提高发酵后饲料蛋白含量。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明所采用的固态常温发酵方法具有操作简单、对环境要求低、发酵时间短(夏季3天即可完成发酵)的优点，降低了成本，便于规模化生产。
(2)本发明所优用的原料中，玉米和去皮豆粕粉碎粒度至500μm，使原料更充分发酵；加入大豆皮，使物料疏松，解决了发酵过程中通气散热的问题；所用复合益生菌通过两步法进行发酵，优选的复合菌种配比和浓度，充分发挥了不同菌种的益生效果，解决了单一菌种发酵不充分问题。通过以上措施所得的本发明饲料，酸香气味明显，诱食性好(饲粮中发酵饲料比例越高，仔猪采食量越好)，同时显著提高了饲料营养品质(包括降低了大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子等抗营养因子含量、降低了pH值、使活菌数控制在合适范围，参见实施例1数据)，提高了饲料有效能值和营养组分表观消化率(包括粗蛋白消化率、中性洗涤纤维消化率，参见实施例4数据)。
(3)本发明所得的固态发酵饲料应用于断奶阶段仔猪饲养中，相比于未发酵饲料，显著提高了仔猪采食量、改善了生长性能，缓解仔猪腹泻、改善了仔猪肠道形态(包括降低隐窝深度、提高绒毛高度和绒隐比，参见实施例5～7)，保障了仔猪肠道健康。
总之，本发明所提供的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的及其制备方法和应用符合我国生猪行业饲料标准，具有制备简单、营养价值高的优点，能够改善断奶仔猪肠道健康和生长性能，具有广阔的市场空间。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1固态发酵饲料的制备及其对断奶仔猪全价料营养品质的影响
本实施例的改善断奶仔猪肠道健康的固态发酵饲料的原料包含以下重量百分比的组份：玉米70.71％、去皮豆粕19.04％、大豆皮4.95％、蔗糖1.22％、豆油4.08％。
所述的改善断奶仔猪肠道健康的固态发酵饲料由每吨原料接种420升发酵菌液进行多菌混合固态发酵3天(夏季)制成。
所述发酵菌液包含枯草芽孢杆菌1.2×108CFU/mL、地衣芽孢杆菌1.2×108 CFU/mL、酵母菌1.2×108CFU/mL、植物乳杆菌0.6×108CFU/mL和罗伊氏乳杆菌0.6×108CFU/mL。
所述的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GIM1.372，所述的地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌(Baclicus lincheniformis)PWD-1，购自广州市微生物研究所。所述的植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CGMCC No.1258，已在专利文献CN101671642A中公开，所述的罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)CGMCC No.11154，已在专利ZL201510751130.3 中公开，由广东省农业科学院动物科学研究所猪营养与饲料研究室保存。所述的酵母菌为酵母菌(Saccharomycescerevisiae)CNCM I-1079，购自安琪酵母股份有限公司。
所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理
选用无发霉变质无异味的玉米、去皮豆粕和大豆皮，粉碎过筛，称取配方要求份量后混匀，随后加入蔗糖、豆油，充分混匀得到发酵基料。
(2)配制发酵所用混合菌液
在蒸馏水中按质量比加入葡萄糖2％、KH2PO4 0.2％、K2HPO4 0.3％，配制得到营养液。
将活化好的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌菌种按所需份量加入营养液中，混合均匀即得到发酵菌液；
(3)制备复合维生素和矿物质预混料
所述复合维生素和矿物质预混料为每千克饲料提供：铁100mg、铜150 mg、锰30mg、硒0.30mg、碘0.5mg、维生素A13500IU、维生素D3 2250IU、维生素E 24mg、维生素K 33mg、维生素B1 3mg、维生素B2 6mg、维生素B6 3mg、维生素B12 25μg、泛酸钙15mg、叶酸1.2mg、生物素0.15μg。
(4)制备发酵饲料
向每吨步骤(1)所述基料中均匀喷入420升步骤(2)所述发酵菌液，通过发酵用搅拌机将基料与发酵菌液充分混合得到接种后原料，装入呼吸袋中，随即用封口机对呼吸袋(呼吸袋购于浙江中城塑业有限公司)进行密封即得到发酵饲料包。将所得发酵饲料包置于32～37℃环境中进行固态发酵，根据配方中比例添加步骤(3)制备的预混料，搅拌均匀后进行使用。
试验设计与方法：分别采集发酵原料(命名为发酵前)和发酵3天饲料(命名为发酵后)，测定抗营养因子含量，试验结果见表1；分别选取发酵第1天、第3天、第6天和第9天的饲料测定其活菌数和pH值，试验结果见表2。
其中，固态发酵饲料中抗营养因子大豆球蛋白、胰蛋白酶抑制因子、β-伴大豆球蛋白分别通过大豆球蛋白定量检测试剂盒(货号：EA02)、胰蛋白酶抑制因子定量检测试剂盒(货号：EA03)、β-伴大豆球蛋白定量检测试剂盒(货号：EA01) 进行测定，以上试剂盒均购自北京龙科方舟生物工程技术有限公司。
饲料pH测定方法：将6g发酵饲粮样品溶于60mL的超纯水中，高速冷冻离心机4℃4000rpm离心5min后，快速取上清液测pH值。
饲料中活菌数测定方法：取10g发酵饲料样品，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释，共稀释6个梯度，再用平板涂布法接种至LB培养基，每个梯度做两个平行，倒放至恒温培养箱37℃过夜，记录菌落数，进而计算得出饲料中活菌数。
LB培养基：1.5％的琼脂粉，蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，牛肉膏5g/L，混匀后高压蒸汽灭菌，于超净台倒入培养皿中，冷却后待用。
干物质和含水量：发酵完成后取样500g，60℃烘干粉碎所得即为干物质，干物质与取样比值即为含水量。
统计方法使用SPSS 18.0的T检验法、单因素方差分析(one-way ANOVA) 模块进行数据分析，结果显示为平均值±标准误，设定P<0.05为差异显著水平。
由表1可见，发酵后饲粮的大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子分别降低了13.43％(P＝0.21)、25.50％(P<0.05)、87.38％(P<0.01)；
由表2可见，不同发酵时间，饲料中所含活菌数有差异，但总体表明，本发明所提供的含水量，可以保证益生菌的生长；pH值从5.56逐渐下降至3.85，由此得出，最优发酵时间为3天。
表1 固态发酵饲料对抗营养因子含量的影响
注：同行数字肩标不同字母表示差异显著(P<0.05)，n＝6，下同；数据平均值±平均标准误表示。P＜0.05，表示差异显著；P＜0.01，表示差异极显著；P＞0.05，表示差异不显著。下同。
表2 固态发酵后饲料pH值和微生物活菌数变化
项目 第1天 第3天 第6天 第9天
芽孢杆菌(cfu/g) 9.00×10<sup>6</sup> 1.89×10<sup>6</sup> 1.11×10<sup>6</sup> 5.10×10<sup>5</sup>
乳杆菌(cfu/g) 1.80×10<sup>7</sup> 1.08×10<sup>9</sup> 4.76×10<sup>8</sup> 2.00×10<sup>8</sup>
酵母菌(cfu/g) 9.00×10<sup>6</sup> 1.50×10<sup>5</sup> 0 0
pH值 5.56 4.06 3.95 3.85
实施例2固态发酵饲料的制备
本实施例的改善断奶仔猪肠道健康的固态发酵饲料的原料包含以下重量百分比的组份：玉米68.72％、去皮豆粕21.34％、大豆皮5.37％、蔗糖1.50％、豆油3.07％。
所述的改善断奶仔猪肠道健康的固态发酵饲料由每吨原料接种405升发酵菌液进行多菌混合固态发酵4天(夏季)制成。
所述发酵菌液包含1.2×108CFU/mL枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GIM1.372、1.2×108CFU/mL地衣芽孢杆菌(Baclicus lincheniformis)PWD-1、 1.2×108CFU/mL酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)CNCM I-1079、0.6×108 CFU/mL植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CGMCC No.1258和0.6×108 CFU/mL罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)CGMCC No.11154。
所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理
选用无发霉变质无异味的玉米、去皮豆粕和大豆皮，粉碎过筛，称取配方要求份量后混匀，随后加入蔗糖、豆油，充分混匀得到发酵基料。
(2)配制发酵所用混合菌液
在蒸馏水中按质量比加入葡萄糖2％、KH2PO4 0.2％、K2HPO4 0.3％，配制得到营养液。
将活化好的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌菌种按所需份量加入营养液中，混合均匀即得到发酵菌液；
(3)制备复合维生素和矿物质预混料
所述复合维生素和矿物质预混料为每千克饲料提供：铁100mg、铜150 mg、锰30mg、硒0.30mg、碘0.5mg、维生素A13500IU、维生素D3 2250IU、维生素E 24mg、维生素K 33mg、维生素B1 3mg、维生素B2 6mg、维生素 B6 3mg、维生素B12 25μg、泛酸钙15mg、叶酸1.2mg、生物素0.15μg。
(4)制备发酵饲料
向每吨步骤(1)所述基料中均匀喷入405升步骤(2)所述发酵菌液，通过发酵用搅拌机将基料与发酵菌液充分混合得到接种后原料，装入呼吸袋中，随即用封口机对呼吸袋进行密封即得到发酵饲料包。将所得发酵饲料包置于 32～37℃环境中进行固态发酵，根据配方中比例添加步骤(3)制备的预混料，搅拌均匀后进行使用。
实施例3固态发酵饲料的制备
本实施例的改善断奶仔猪肠道健康的固态发酵饲料的原料包含以下重量百分比的组份：玉米71.83％、去皮豆粕18.04％、大豆皮3.76％、蔗糖1.39％、豆油4.98％。
所述的改善断奶仔猪肠道健康的固态发酵饲料由每吨原料接种450升发酵菌液进行多菌混合固态发酵6天(夏季)制成。
所述发酵菌液包含1.2×108CFU/mL枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GIM1.372、1.2×108CFU/mL地衣芽孢杆菌(Baclicus lincheniformis)PWD-1、 1.2×108CFU/mL酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)CNCM I-1079、0.6×108 CFU/mL植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CGMCC No.1258和0.6×108 CFU/mL罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)CGMCC No.11154。
所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理
选用无发霉变质无异味的玉米、去皮豆粕和大豆皮，粉碎过筛，称取配方要求份量后混匀，随后加入蔗糖、豆油，充分混匀得到发酵基料。
(2)配制发酵所用混合菌液
在蒸馏水中按质量比加入葡萄糖2％、KH2PO4 0.2％、K2HPO4 0.3％，配制得到营养液。
将活化好的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌菌种按所需份量加入营养液中，混合均匀即得到发酵菌液；
(3)制备复合维生素和矿物质预混料
所述复合维生素和矿物质预混料为每千克饲料提供：铁100mg、铜150 mg、锰30mg、硒0.30mg、碘0.5mg、维生素A13500IU、维生素D3 2250IU、维生素E 24mg、维生素K 33mg、维生素B1 3mg、维生素B2 6mg、维生素 B6 3mg、维生素B12 25μg、泛酸钙15mg、叶酸1.2mg、生物素0.15μg。
(4)制备发酵饲料
向每吨步骤(1)所述基料中均匀喷入450升步骤(2)所述发酵菌液，通过发酵用搅拌机将基料与发酵菌液充分混合得到接种后原料，装入呼吸袋中，随即用封口机对呼吸袋进行密封即得到发酵饲料包。将所得发酵饲料包置于 32～37℃环境中进行固态发酵，根据配方中比例添加步骤(3)制备的预混料，搅拌均匀后进行使用。
实施例4断奶仔猪消化试验
为了探明本发明固态发酵饲料营养物质的利用效率，本实施例设计了断奶仔猪消化试验，用于测定实施例1的固态发酵饲料饲喂断奶仔猪后其养分的消化率。
1、试验设计
选用12头体重相近的14日龄三元杂杜×(长×大)断奶去势公猪，根据组间体重无显著差异的原则将试验猪分配至对照组(饲喂基础试验饲粮，配方如表3所示)和发酵组(饲喂实施例1的发酵3天的100％发酵饲粮)，每组6个重复，每个重复1头猪。试验共分三个阶段：
(1)适应期：在仔猪代谢笼中适应7天，适应期间饲喂代乳料宝宝乐(购于广东新南都饲料科技有限公司)。于每日08:00、12:00、16:00、20:00饲喂，每日晚上清理并记录剩料量。每天观察采食、饮水和粪便等情况。
(2)正式试验期：正式试验期5天，按照试验仔猪4％的体重饲喂对应重量的基础试验饲粮和发酵饲粮，于每日08:00、12:00、16:00、20:00饲喂，每日晚上清理并记录剩料量。每天观察采食、饮水和粪便等情况。正式试验期内及时精确记录的剩料和撒料量。
2、正式试验期间样品采集
每日晚上清理并记录剩料量，收集粪尿到干净塑料桶中，加入6mol/L盐酸50mL，用滤纸过滤大颗粒物后保存在20mL离心管中，于-20℃冰柜中保存待检。粪样全部收集透明密封袋中，于65℃烘箱中烘干72小时后室温回潮 24小时，粉碎至40目后装袋保存于-20℃冰柜待检。
3、测定指标
(1)饲料样品：测定粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维；
(2)粪样：测定粗蛋白质、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维；
(3)上述(1)～(2)所述粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维测定方法分别参照中华人民共和国国家标准GB/T 6432-1994、GB/T 6433-2006、GB/T 6434-2006、GB/T20806-2006。酸性洗涤纤维按照中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1459-2007方法测定。食入总能和排出总粪能按照国际标准ISO9831:1998 方法进行测定。
(4)所采用计算公式：
饲粮表观消化能(MJ/kg)＝(食入总能MJ–排出总粪能MJ)/食入饲料的总量kg
饲粮表观代谢能(MJ/kg)＝(食入总能MJ–排出总粪能MJ–排出总尿能MJ)/食入饲料的总量kg
总能表观消化率(％)＝(食入总能–排出总粪能)/食入总能
4、结果与分析
断奶仔猪对固态发酵饲料营养物质的消化率统计结果见表4。与对照组相比，发酵组的总能表观消化率提高0.10％、粗蛋白消化率提高0.48％(P<0.01)、粗脂肪消化率提高0.57％、粗纤维消化率提高11.06％、中性洗涤纤维消化率降低23.52％(P＝0.07)、酸性洗涤纤维消化率降低25.69％、消化能提高1.34％ (P＝0.06)、代谢能提高0.76％。可见，本发明所提供的固态发酵饲料在断奶仔猪上的消化率高于普通未发酵饲料，表明本发明所提供固态发酵方法具有提高断奶仔猪饲料消化的效果。
表3 基础试验饲粮配比(88％干物质基础)
注：(1)预混料为每千克饲粮提供：维生素A 13500IU，维生素D3 2250IU，维生素E24mg，维生素 K 33mg，维生素B1 3mg，维生素B2 6mg，维生素B6 3mg，维生素B12 25μg，泛酸钙15mg，叶酸1.2 mg，生物素0.15μg，Fe 100mg，Cu 150mg，Mn 30mg，Se 0.30mg，I 0.5mg。
表4 断奶仔猪对固态发酵饲料营养物质的消化率
项目 对照组 发酵组 P值
总能表观消化率(％) 90.25±0.41 91.19±0.39 0.13
粗蛋白消化率(％) 97.81±0.07<sup>b</sup> 98.28±0.06<sup>a</sup> <0.01
粗脂肪消化率(％) 87.78±1.15 88.28±1.31 0.78
粗纤维消化率(％) 66.54±6.07 73.90±5.17 0.38
中性洗涤纤维消化率(％) 60.28±4.22 46.10±5.24 0.07
酸性洗涤纤维消化率(％) 36.39±7.54 27.04±4.66 0.30
消化能DE(MJ/kg) 13.96±0.06 14.15±0.06 0.06
代谢能ME(MJ/kg) 13.77±0.06 13.87±0.06 0.28
实施例5本发明的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料在仔猪饲养中的应用
将实施例1中所制得的发酵饲料(发酵3天)按质量10％的添加比例添加至(5.75±0.01)kg公斤阶段断奶仔猪的基础试验饲粮(配方如表3所示)中，以探明本发明的固态发酵饲料相较于普通日粮对断奶仔猪生长性能和肠道健康的改善效果。
试验材料与方法：选用64头健康的杜×(长×大)21日龄断奶阉公猪(体重5.75±0.01kg)，随机分为两组，每组8个重复，每个重复4头仔猪：(1) 对照组，饲喂100％基础试验饲粮；(2)10％发酵饲料组，饲喂10％发酵饲粮(发酵3天)+90％基础试验饲粮；试验采用湿拌饲喂方式。根据发酵饲粮水分含量确定对照组应添加水分，使每组饲粮饲喂时含水量一致，每餐饲喂前对饲粮加水进行湿拌后立即投喂。试验周期为14天，结束时每个重复选取一头体重居中的猪实施屠宰采样。试验结果见表5～6。
仔猪肠道形态测定方法：将屠宰取样所得的样品十二指肠、空肠、回肠组织制作成石蜡切片，用荧光正置显微镜观察每张切片并选取10个清晰视野进行拍照，再用图像软件Image-pro测量肠绒毛高度和隐窝深度，并计算两者比值。
由表5可见，与对照组相比，饲喂10％发酵饲料组实验仔猪1～14天平均日增重提高6.16％，平均日采食量提高5.32％，腹泻率降低13.77％。
由表6可见，与对照组相比，显著提高仔猪十二指肠绒隐比值和空肠绒毛高度(P<0.05)，空肠隐窝深度有降低的趋势，表明10％比例添加发酵饲料能够改善断奶仔猪肠道形态。
表5 固态发酵饲料对断奶仔猪生长性能的影响
项目 对照组 10％发酵饲料组
平均日增重(ADG,g/d) 98.53 104.60
平均日采食量(ADFI,g/d) 174.60 183.90
料重比(F:G) 1.80 1.79
腹泻率(％) 26.21 22.60
表6 固态发酵饲粮对断奶仔猪肠道形态的影响
实施例6本发明的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料在仔猪饲养中的应用
将实施例1中所制得的发酵饲料(发酵3天)按照50％添加比例添加至(6.11 ±0.05)kg公斤阶段断奶仔猪的基础试验日粮(配方如表3所示)中，以探明较高比例添加本发明的固态发酵饲料对仔猪生长性能和肠道健康的改善效果。
试验材料与方法：选用64头健康的杜×(长×大)21日龄断奶阉公猪(体重6.11±0.05kg)，随机分为两组，每组8个重复，每个重复4头仔猪：(1) 对照组，饲喂100％基础试验饲粮；(2)50％发酵饲料组，饲喂50％发酵饲料 +50％基础试验饲粮；试验采用湿拌饲喂方式。根据发酵饲粮水分含量确定对照组应添加的水分，使每组饲粮饲喂时含水量一致，每餐饲喂前对饲粮加水进行湿拌后立即投喂。试验周期为14天，试验结束时每个重复选取一头体重居中的猪实施屠宰采样。仔猪肠道形态测定方法参照实施例5，试验结果见表7～8。
由表7可见，与对照组相比，饲喂50％发酵饲料组实验仔猪1～14天平均日增重提高13.57％，平均日采食量提高11.63％，腹泻率降低10.11％。
由表8可见，与对照组相比，饲喂50％发酵饲料组实验仔猪十二指肠和空肠绒毛高度显著提高(全部P<0.05)，表明仔猪肠道形态有所改善。
表7 固态发酵饲料对断奶仔猪生长性能的影响
项目 对照组 50％发酵组
平均日增重(ADG,g/d) 98.53 111.90
平均日采食量(ADFI,g/d) 174.60<sup>b</sup> 194.90<sup>a</sup>
料重比(F:G) 1.80 1.77
腹泻率(％) 26.21<sup>a</sup> 23.56<sup>ab</sup>
表8 固态发酵饲料对断奶仔猪肠道形态的影响
实施例7本发明的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料在仔猪饲养中的应用
为了探明本发明的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的应用效果，将实施例1中所制得的发酵饲料(发酵3天)应用于(5.93±0.01)kg 公斤阶段断奶仔猪的饲养中。
试验材料与方法：选用64头健康的杜×(长×大)21日龄断奶阉公猪(体重5.93±0.01kg)，随机分为两组，每组8个重复，每个重复4头仔猪：(1) 对照组，饲喂100％基础试验饲粮(配方如表3所示)；(2)100％发酵饲料组，饲喂100％发酵饲料。试验期14天；试验采用湿拌饲喂方式。根据发酵饲粮水分含量确定对照组应添加水分，使每组饲粮饲喂时含水量一致，每餐饲喂前对饲粮加水进行湿拌后立即投喂。试验结束时每个重复选取一头体重居中的猪实施屠宰采样。仔猪肠道形态测定方法参照实施例5，试验结果见表9～10。
由表9可见，与对照组相比，100％发酵饲料组实验仔猪1～14天平均日采食量提高23.82％(P<0.05)；实验仔猪腹泻率降低23.88％(P<0.05)；平均日增重提高26.25％，表明固体发酵饲料对断奶仔猪的生长性能有显著提升，一定程度上缓解了仔猪腹泻。
由表10可见，与对照组相比，100％发酵饲料组显著提高仔猪十二指肠绒毛高度(P<0.05)，同时，也显著提高了仔猪空肠绒毛高度(P<0.05)，显著提高仔猪空肠绒隐比值(P<0.05)，表明饲喂发酵饲料显著改善了仔猪肠道形态。
表9 固态发酵饲料对断奶仔猪生长性能的影响
项目 对照组 100％发酵组
平均日增重(ADG,g/d) 98.53 124.40
平均日采食量(ADFI,g/d) 174.60<sup>b</sup> 216.20<sup>a</sup>
料重比(F:G) 1.80 1.75
腹泻率(％) 26.21<sup>a</sup> 19.95<sup>b</sup>
表10 固态发酵饲粮对断奶仔猪肠道形态的影响
综上，本发明提供的固态发酵饲料降低了普通饲粮的pH值和抗营养因子含量，提高了断奶仔猪饲粮有效能值和营养物质表观消化率；在仔猪断奶阶段饲喂本发明所得的发酵饲料，可以改善断奶后第1～14天仔猪生长性能，缓解腹泻，显著改善仔猪肠黏膜屏障功能，促进肠道健康。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料，其特征在于：
玉米、去皮豆粕、大豆皮、豆油、蔗糖作为发酵基料，利用复合益生菌对所述的发酵基料进行固态发酵得到，所述的复合益生菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌。
2.根据权利要求1所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料，其特征在于：
所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GIM1.372；
所述地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌(Baclicus lincheniformis)PWD-1；
所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CGMCC1258；
所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)CGMCC No.11154；
所述酵母菌为酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)CNCM I-1079。
3.根据权利要求1或2所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)原料预处理
按配方量将玉米、去皮豆粕和大豆皮混合，随后加入蔗糖、豆油，充分混匀得到发酵基料；
(2)配制发酵所用混合菌液
将活化好的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌菌种按所需份量加入营养液中，混合均匀即得到发酵菌液；
(3)向步骤(1)所述的发酵基料中均匀喷入步骤(2)所述的发酵菌液，将发酵基料与发酵菌液充分混合后密封进行固态发酵，即得所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料。
4.根据权利要求3所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的玉米和/或去皮豆粕混合前先进行粉碎过筛的操作；
所述的发酵基料包含按重量百分比计算的组分，玉米：去皮豆粕：大豆皮：蔗糖：豆油＝(6.8～7.2):(1.8～2.2):(0.3～0.6):(0.12～0.15):(0.3～0.5)；
步骤(2)中所述的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌按配比1:1:1:0.5:0.5进行混合；
步骤(3)中所述的固态发酵的时间为3～6天。
5.根据权利要求4所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法，其特征在于：
所述的玉米和/或去皮豆粕粉碎粒度为500μm；
步骤(2)中所述的发酵菌液中的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酵母菌、植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的浓度依次为1.2×108CFU/mL、1.2×108CFU/mL、1.2×108CFU/mL、0.6×108CFU/mL和0.6×108CFU/mL。
6.根据权利要求3所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法，其特征在于：
所述的发酵基料包含按重量百分比计算的玉米70.71％、去皮豆粕19.04％、大豆皮4.95％、蔗糖1.22％、豆油4.08％；
步骤(3)中所述的固态发酵的时间为3天；
步骤(3)中所述的发酵基料与发酵菌液的配比为每吨发酵基料添加400～450升发酵菌液；
步骤(3)所述的密封的具体操作为将充分混合后的发酵基料与发酵菌液装入呼吸袋中，用封口机对呼吸袋进行密封。
7.根据权利要求3所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的营养液的配制方法为：在水中加入按质量比计算的葡萄糖2％、KH2PO40.2％、K2HPO4 0.3％；
步骤(3)中所述的发酵基料的水分在37％～38％之间；
步骤(3)中所述的发酵基料与发酵菌液的配比为每吨发酵基料添加420升发酵菌液；
步骤(3)中所述的固态发酵的环境温度为32～37℃。
8.权利要求1或2所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的应用，其特征在于：
应用于断奶阶段仔猪的饲养中。
9.根据权利要求8所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的应用，其特征在于：
所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的应用的具体方法为将所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料用于饲喂或与基础饲粮混合后进行饲喂。
10.根据权利要求9所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料的应用，其特征在于：
所述的改善断奶仔猪肠道健康和生长性能的固态发酵饲料与基础饲粮按质量比(1～5)：(5～9)进行混合；
在所述的固态发酵饲料加入复合维生素和矿物质预混料进行饲喂。
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