CN110487704A - 免疫荧光分析装置与免疫荧光分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种免疫荧光分析装置与免疫荧光分析方法，所述免疫荧光分析装置包括黑色滤膜，所述免疫荧光分析方法采用黑色滤膜截留被荧光标记抗体染色的待检测对象，同时滤过未与待检测对象结合的荧光标记抗体，之后采用荧光检测装置对所述黑色滤膜表面的截留物进行分析，实现荧光点的阅读和计数；所述免疫荧光分析方法的操作步骤简单，分析成本低，并且检测结果准确；所述免疫荧光分析装置的结构简单，生产成本低，使用方便，检测效果好；本发明的免疫荧光分析装置与免疫荧光分析方法能够广泛使用，不仅适用于大型医院与专业的实验室，在基层的医疗机构也能广泛使用。
Description
技术领域
本发明涉及免疫荧光检测领域，尤其涉及一种免疫荧光分析装置与免疫荧光分析方法。
背景技术
细胞(包括人体细胞、真菌、细菌等)计数在临床诊断，食品安全，环境污染监控等方面具有重要的应用。
免疫荧光法广泛的应用于细胞计数中，其主要原理是每种细胞表面可能存在特异性的蛋白标志物，通过该标志物对应的荧光染料标记的抗体染色，则可以实现特定细胞的荧光成像，因此通过统计荧光点的数量就可以实现细胞计数。
现有的免疫荧光法计数法主要包括以下步骤：
步骤1、对待检测样品进行前处理；
步骤2、将待检测样品与荧光标记抗体进行混合，得到混合体系；所述待检测样品中含有能够与所述荧光标记抗体结合的待检测对象(例如待检测对象等)；
步骤3、对混合体系中未结合待检测对象的荧光标记抗体进行去除，得到待分析样品；
步骤4、利用荧光标记抗体在特定波长光线照射时发荧光的特点对所述待分析样品中的待检测对象进行计数。
上述免疫荧光法计数法存在以下问题：
(1)待检测样品中存在一些对荧光信号有明显干扰的物质(例如血液中的红细胞)，因此待检测样品的前处理过程中需要通过多步操作以降低干扰物质对检测结果的干扰，操作过程繁琐。
(2)采用荧光染料标记抗体对细胞染色后需要离心以去除没有和细胞结合的抗体，从而消除背景干扰。此过程需要执行多次洗涤操作，并且需要使用离心机和洗涤缓冲液，操作步骤复杂，成本高。
(3)步骤4的计数通常需要使用流式细胞仪等设备实现，这些设备比较昂贵，需要专业的人员操作，并且需要定期维护，运行成本高。
由于现有的免疫荧光法计数法具有以上缺点，因此目前该免疫荧光计数法主要应用于大型医院或者专业的实验室，由于基层的医疗机构(例如社区卫生院、诊所、家庭等)的医疗条件差，缺少具有操作能力的专业人员，并且无法承担高额的设备成本，因此该免疫荧光计数法在基层的医疗机构不能广泛应用。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种免疫荧光分析装置，结构简单，生产成本低，使用方便，检测效果好。
本发明的第二目的在于提供一种免疫荧光分析方法，操作步骤简单，分析成本低，分析结果准确。
为实现以上目的，本发明首先提供一种免疫荧光分析装置，包括黑色滤膜。
在本发明的第一实施例中，所述免疫荧光分析装置还包括外壳与第一吸水材料，所述外壳上设有依次连通的第一加样孔与安装槽，所述安装槽内设有层叠设置的黑色滤膜与第一吸水材料，其中所述黑色滤膜靠近所述第一加样孔设置。
可选的，所述外壳的颜色为黑色，所述第一吸水材料为吸水纸。
在本发明的第二实施例中，所述免疫荧光分析装置还包括相互配合连接的上盖与下壳体，所述上盖中设有第二加样孔，所述下壳体具有相对设置的上盖配合端与抽气端，所述黑色滤膜固定于所述上盖与所述下壳体的上盖配合端之间，所述下壳体内设有中空结构，所述中空结构贯穿所述上盖配合端与所述抽气端。
可选的，所述上盖配合端设有凸起部，所述上盖与所述凸起部配合连接，所述黑色滤膜固定于所述上盖与所述凸起部之间；所述中空结构包括设于所述下壳体的上盖配合端并且贯穿所述凸起部的第一通孔以及设于所述下壳体的抽气端的第一凹槽，所述第一凹槽的槽底与所述第一通孔连通。
在本发明的第三实施例中，所述免疫荧光分析装置还包括上壳体、固定塞、弹片以及底座；
所述上壳体具有相对设置的加样端与底座配合端，所述加样端设有第二加样孔，所述底座配合端设有第二凹槽，所述第二加样孔与所述第二凹槽的底部贯通，所述固定塞固定于所述第二凹槽内；
所述黑色滤膜设于所述固定塞上靠近所述第二加样孔一端的端面上；
所述固定塞内设有第二通孔，所述第二通孔贯通所述固定塞靠近所述第二加样孔的一端以及靠近所述底座的一端；
所述底座包括底板以及与所述底板相连的侧板，所述底板上设有开口，所述弹片承载于所述底板上，所述上壳体设于所述弹片上并且与所述底座连接；所述固定塞上靠近所述底座的一端与所述弹片之间设有间隔。
可选的，所述上壳体的颜色为黑色，所述固定塞通过卡合及粘接的方式固定于所述第二凹槽内，所述固定塞上靠近所述底座的一端与所述弹片之间的距离为2～5mm。
可选的，所述第二凹槽内还固定有第二吸水材料，所述第二吸水材料紧贴所述固定塞靠近所述底座的一侧，并且所述第二吸水材料与所述弹片之间设有间隔，所述第二吸水材料上设有与所述第二通孔对应的第三通孔。
本发明还提供一种免疫荧光分析方法，包括：
提供待分析样品、免疫荧光分析装置以及荧光检测装置，所述免疫荧光分析装置包括黑色滤膜，所述待分析样品为包含待检测样品与荧光标记抗体的混合体系，所述待检测样品中含有待检测对象；
将待分析样品添加到所述黑色滤膜表面进行过滤；
采用荧光检测装置对所述黑色滤膜表面的截留物进行阅读。
可选的，所述免疫荧光分析装置还包括外壳与第一吸水材料，所述外壳上设有依次连通的第一加样孔与安装槽，所述安装槽内设有层叠设置的黑色滤膜与第一吸水材料，其中所述黑色滤膜靠近所述第一加样孔设置；
所述将待分析样品添加到所述黑色滤膜表面进行过滤的步骤包括：将所述待分析样品从所述第一加样孔添加到黑色滤膜上进行渗滤。
可选的，所述免疫荧光分析装置还包括相互配合连接的上盖与下壳体，所述上盖中设有第二加样孔，所述下壳体具有相对设置的上盖配合端与抽气端，所述黑色滤膜固定于所述上盖与所述下壳体的上盖配合端之间，所述下壳体内设有中空结构，所述中空结构贯穿所述上盖配合端与所述抽气端；
所述将待分析样品添加到所述黑色滤膜表面进行过滤的步骤包括：使所述免疫荧光分析装置与抽气装置连接，之后将所述免疫荧光分析装置设有上盖的一端伸入待分析样品中，再使抽气装置执行抽气动作，使待分析样品经由所述上盖中的第二加样孔进入黑色滤膜中进行过滤。
可选的，所述免疫荧光分析装置还包括上壳体、固定塞、弹片以及底座；所述上壳体具有相对设置的加样端与底座配合端，所述加样端设有第二加样孔，所述底座配合端设有第二凹槽，所述第二加样孔与所述第二凹槽的底部贯通，所述固定塞固定于所述第二凹槽内；所述黑色滤膜设于所述固定塞上靠近所述第二加样孔一端的端面上；所述固定塞内设有第二通孔，所述第二通孔贯通所述固定塞靠近所述第二加样孔的一端以及靠近所述底座的一端；所述底座包括底板以及与所述底板相连的侧板，所述底板上设有开口，所述弹片承载于所述底板上，所述上壳体设于所述弹片上并且与所述底座连接；所述固定塞上靠近所述底座的一端与所述弹片之间设有间隔；
所述将待分析样品添加到所述黑色滤膜表面进行过滤的步骤包括：从所述弹片上远离所述上壳体的一侧按压所述弹片，同时将待分析样品经由所述上壳体的第三加样孔添加到黑色滤膜表面；之后取消按压。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种免疫荧光分析装置与免疫荧光分析方法，所述免疫荧光分析装置包括黑色滤膜，所述免疫荧光分析方法采用黑色滤膜截留被荧光标记抗体染色的待检测对象，同时滤过未与待检测对象结合的荧光标记抗体，之后采用荧光检测装置对所述黑色滤膜表面的截留物进行分析，实现荧光点的阅读和计数；本发明通过将滤膜颜色设定为黑色，能够显著减弱滤膜的反光效果，避免由于滤膜反光导致荧光点阅读与计数不准确等情况的发生；所述免疫荧光分析方法的操作步骤简单，分析成本低，并且检测结果准确；所述免疫荧光分析装置的结构简单，生产成本低，使用方便，检测效果好；本发明的免疫荧光分析装置与免疫荧光分析方法能够广泛使用，不仅适用于大型医院与专业的实验室，在基层的医疗机构也能广泛使用。
为使本发明的上述目的、特征和优点能更明显和易懂，下文特举较佳实施例，并配合所附附图，做详细说明如下。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1A为本发明免疫荧光分析装置第一实施例的分解结构示意图；
图1B为本发明免疫荧光分析装置第一实施例的剖面结构示意图；
图2A为本发明免疫荧光分析装置第二实施例的分解结构示意图；
图2B为本发明免疫荧光分析装置第二实施例的剖面结构示意图；
图3A为本发明免疫荧光分析装置第三实施例的分解结构示意图；
图3B为本发明免疫荧光分析装置第三实施例的剖面结构示意图；
图4为本发明免疫荧光分析方法的原理示意图。
主要元件符号说明：
10、外壳；11、第一加样孔；12、安装槽；20、黑色滤膜；31、第一吸水材料；41、上盖；412、第二加样孔；20、黑色滤膜；42、下壳体；421、凸起部；51、第一通孔；61、第一凹槽；71、上壳体；713、第三加样孔；714、第二凹槽；715、固定塞；716、第二通孔；717、空腔；20、黑色滤膜；72、底座；721、底板；723、开口；722、侧板；32、第二吸水材料；323、第三通孔；80、弹片。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，当元件被称为“固定于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。相反，当元件被称作“直接在”另一元件“上”时，不存在中间元件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在模板的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
请参阅图1A至图3B，本发明提供一种免疫荧光分析装置，包括黑色滤膜20。
本发明采用黑色滤膜20对包含被荧光标记抗体染色的待检测对象(例如细胞和/或微生物)的待分析样品进行过滤，之后采用荧光检测装置对黑色滤膜20表面的截留物进行检测，该荧光分析方法简单易操作、结果准确，本发明免疫荧光分析装置的结构简单，生产成本低；另外，本发明通过将滤膜颜色设定为黑色，能够显著减弱滤膜的反光效果，避免由于滤膜反光导致荧光点阅读与计数不准确等情况的发生。
具体的，所述黑色滤膜20中的滤孔的孔径大于被荧光标记抗体的尺寸，同时小于被荧光标记抗体染色的待检测对象(例如细胞和/或微生物)的尺寸。
请参阅图4，基于上述免疫荧光分析装置，本发明提供一种免疫荧光分析方法，包括：
提供待分析样品、免疫荧光分析装置以及上述荧光检测装置，所述待分析样品为包含待检测样品(例如血液、细菌样品、分泌物等)与荧光标记抗体的混合体系，所述待检测样品中含有待检测对象(例如细胞和/或微生物)；
将待分析样品添加到所述黑色滤膜20表面进行过滤，所述待分析样品中的液体以及未与待检测对象结合的荧光标记抗体和其它微小杂质会从所述黑色滤膜20的滤孔中滤过，被荧光标记抗体染色的待检测对象由于体积较大，无法从滤孔中通过，从而能够截留于所述黑色滤膜20表面；
采用荧光检测装置(例如荧光显微镜)对所述黑色滤膜20表面的截留物进行阅读和计数，根据所述黑色滤膜20表面添加的样品量和待分析样品的总体积，通过换算可以得到待分析样品中待检测对象的数量。
可以理解的是，待检测对象的尺寸通常都是微米(μm)级，而荧光标记抗体的尺寸通常是在纳米(nm)级，因此通过对所述黑色滤膜20上滤孔的孔径进行合适设计，即可使未与待检测对象结合的荧光标记抗体和其它微小杂质从所述黑色滤膜20中顺利滤过并且使被荧光标记抗体染色的待检测对象有效截留在所述黑色滤膜20表面。
在一些实施例中，待检测对象(细胞或微生物)的直径在2-12μm范围内，而荧光标记抗体的直径在3-10nm范围内，在这种情况下，可以将所述黑色滤膜20中的滤孔的孔径设计为1-10μm范围内，具体孔径大小根据实际的待检测对象的大小决定，该孔径范围能够有效保证未与待检测对象结合的荧光标记抗体从所述黑色滤膜20中滤过，同时保证被荧光标记抗体染色的待检测对象有效截留于所述黑色滤膜20表面。
具体的，所述黑色滤膜20的材料包括基材以及分散于所述基材内部和/或表面的黑色颜料。
可选的，所述基材包括聚碳酸酯、醋酸纤维素、植物纤维等材料中的一种或多种。
可选的，所述黑色颜料可以为无机黑色颜料(例如炭黑)或者有机黑色颜料。
图1A与图1B分别为本发明免疫荧光分析装置第一实施例的分解结构示意图与剖面结构示意图，如图1A与图1B所示，所述第一实施例中，所述免疫荧光分析装置还包括外壳10与第一吸水材料31，所述外壳10上设有依次连通的第一加样孔11与安装槽12，所述安装槽12内设有层叠设置的黑色滤膜20与第一吸水材料31，其中所述黑色滤膜20靠近所述第一加样孔11设置。
可选的，如图1B所示，所述黑色滤膜20紧贴所述安装槽12的槽底设置。
可选的，所述黑色滤膜20和第一吸水材料31卡合于所述安装槽12内，所述安装槽12的形状和尺寸与所述黑色滤膜20和第一吸水材料31的形状和尺寸相适应，例如，当所述安装槽12呈圆柱形时，所述黑色滤膜20与所述第一吸水材料31均优选为圆形。
所述第一实施例中，所述免疫荧光分析装置的工作原理为：待分析样品经由所述第一加样孔11添加到所述黑色滤膜20上，待分析样品中的液体以及未与待检测对象结合的抗体和其它微小杂质从所述黑色滤膜20中透过，之后被所述第一吸水材料31吸收，待分析样品中被荧光标记抗体染色的待检测对象被截留在所述黑色滤膜20的表面，采用配套的荧光检测装置(例如荧光显微镜)对所述免疫荧光分析装置中黑色滤膜20表面的截留物进行分析。
具体的，在进行荧光检测时，所述荧光显微镜的视场须大于所述第一加样孔11最狭窄处(例如所述第一加样孔11底部)的截面积，使得所述第一加样孔11最狭窄处对应的黑色滤膜20区域中的待检测对象都能够被荧光显微镜检测到。
基于所述第一实施例的免疫荧光分析装置的工作原理，所述第一实施例的免疫荧光分析装置可以命名为渗滤式免疫荧光分析装置。
所述第一实施例中：
可选的，所述第一加样孔11呈锥形，例如圆锥形。
可选的，所述第一加样孔11呈柱形，例如圆柱形。
优选的，所述外壳10的颜色为黑色，以进一步消除反光对荧光检测造成的影响。
可选的，所述第一吸水材料31为吸水纸，所述吸水纸的层数根据需要进行设定。
基于所述第一实施例的免疫荧光分析装置，本发明还提供一种免疫荧光分析方法，包括：
提供待分析样品、免疫荧光分析装置以及荧光检测装置，所述待分析样品为包含待检测样品与荧光标记抗体的混合体系，所述待检测样品中含有待检测对象，所述免疫荧光分析装置为所述第一实施例的免疫荧光分析装置。
将所述待分析样品从所述第一加样孔11添加到黑色滤膜20上进行渗滤。
经过渗滤后，待分析样品中的液体以及未与待检测对象结合的抗体和其它微小杂质从所述黑色滤膜20中透过，之后被所述第一吸水材料31吸收，待分析样品中被荧光标记抗体染色的待检测对象被截留在所述黑色滤膜20的表面，采用荧光检测装置对所述免疫荧光分析装置中黑色滤膜20表面的截留物进行分析。
图2A与图2B分别为本发明免疫荧光分析装置第二实施例的分解结构示意图与剖面结构示意图，如图2A与图2B所示，所述第二实施例中，所述免疫荧光分析装置还包括相互配合连接的上盖41与下壳体42，所述上盖41中设有第二加样孔412，所述下壳体42具有相对设置的上盖41配合端与抽气端，所述黑色滤膜20固定于所述上盖41与所述下壳体42的上盖41配合端之间，所述下壳体42内设有中空结构，所述中空结构贯穿所述上盖41配合端与所述抽气端。
如图2A与图2B所示，可选的，所述上盖41配合端设有凸起部421，所述上盖41与所述凸起部421配合连接，所述黑色滤膜20固定于所述上盖41与所述凸起部421之间；所述中空结构包括设于所述下壳体42的上盖41配合端并且贯穿所述凸起部421的第一通孔51以及设于所述下壳体42的抽气端的第一凹槽61，所述第一凹槽61的槽底与所述第一通孔51连通。
可选的，如图2B所示，所述上盖41与所述凸起部421卡合连接。
所述第二实施例中，所述免疫荧光分析装置的工作原理为：将所述免疫荧光分析装置与抽气装置(例如注射器)连接，之后将所述免疫荧光分析装置设有上盖41的一端伸入待分析样品中，使抽气装置执行抽气动作(例如抽出注射器芯杆)，使待分析样品经由所述上盖41的第二加样孔412进入黑色滤膜20中，待分析样品中的液体以及未与待检测对象结合的抗体和其它微小杂质从所述黑色滤膜20中透过，并且被吸入所述下壳体42的中空结构中，待分析样品中被荧光标记抗体染色的待检测对象被截留在所述黑色滤膜20的表面，采用配套的荧光检测装置(例如荧光显微镜)对所述免疫荧光分析装置中黑色滤膜20表面的截留物进行分析。
具体的，在荧光检测时，所述荧光显微镜的视场必须大于所述第二加样孔412最狭窄位置(例如底部)的截面积，使得所述第二加样孔412正下方对应的黑色滤膜20表面的待检测对象都能够被荧光显微镜检测到。
基于所述第二实施例的免疫荧光分析装置的工作原理，所述第二实施例的免疫荧光分析装置可以命名为抽滤式免疫荧光分析装置。
所述第二实施例中：
优选的，所述上盖41的颜色为黑色，以进一步消除反光对荧光检测造成的影响。
具体的，所述下壳体42与所述上盖41的材料可以是塑料、金属或陶瓷等。
具体的，所述第二加样孔412可以呈锥形，例如圆锥形。
基于所述第二实施例的免疫荧光分析装置，本发明还提供一种免疫荧光分析方法，包括：
提供待分析样品、免疫荧光分析装置、抽气装置以及荧光检测装置，所述待分析样品为包含待检测样品与荧光标记抗体的混合体系，所述待检测样品中含有待检测对象，所述免疫荧光分析装置为所述第二实施例的免疫荧光分析装置。
使所述免疫荧光分析装置与抽气装置连接，之后将所述免疫荧光分析装置设有上盖41的一端伸入待分析样品中，再使抽气装置执行抽气动作，使待分析样品经由所述上盖41中的第二加样孔412进入黑色滤膜20中进行过滤；
经过抽滤后，待分析样品中的液体以及未与待检测对象结合的抗体和其它微小杂质从所述黑色滤膜20中透过，被吸入所述免疫荧光分析装置的腔体中，待分析样品中被荧光标记抗体染色的待检测对象被截留在所述黑色滤膜20的表面，采用荧光检测装置对所述免疫荧光分析装置中黑色滤膜20表面的截留物进行分析。
可以理解的是，上述免疫荧光分析方法中，由于在进样时所述免疫荧光分析装置是倒置使用，因此在抽气后，为避免抽出的液体再回流至所述黑色滤膜20中，最好是迅速将所述免疫荧光分析装置倒转过来，以保证检测结果的准确性。
图3A与图3B分别为本发明免疫荧光分析装置第三实施例的分解结构示意图与剖面结构示意图，如图3A与图3B所示，所述第三实施例中，所述免疫荧光分析装置还包括上壳体71、固定塞715、弹片80以及底座72；
所述上壳体71具有相对设置的加样端与底座72配合端，所述加样端设有第二加样孔412，所述底座72配合端设有第二凹槽714，所述第二加样孔412与所述第二凹槽714的底部贯通，所述固定塞715固定于所述第二凹槽714内；
所述黑色滤膜20设于所述固定塞715上靠近所述第二加样孔412一端的端面上；
所述固定塞715内设有第二通孔716，所述第二通孔716贯通所述固定塞715靠近所述第二加样孔412的一端以及靠近所述底座72的一端；
所述底座72包括底板721以及与所述底板721相连的侧板722，所述底板721上设有开口723，所述弹片80承载于所述底板721上，所述上壳体71设于所述弹片80上并且与所述底座72连接；所述固定塞715上靠近所述底座72的一端与所述弹片80之间设有间隔。
可选的，如图3B所述，所述黑色滤膜20紧贴所述第二凹槽714的槽底设置。
可选的，如图3B所述，所述上壳体71与所述底座72的连接方式为卡合连接。
所述底板721上设有开口723的目的在于方便操作人员按压所述弹片80。
所述第三实施例中，所述免疫荧光分析装置的工作原理为：
所述第三实施例的免疫荧光分析装置中，所述上壳体71、所述固定塞715以及所述弹片80围出一空腔717，当操作人员从所述弹片80上远离所述上壳体71的一侧按压所述弹片80时，所述空腔717的体积缩小，所述空腔717内的空气由于受到压缩而产生流动，所述空气依次穿过所述固定塞715上的第二通孔716、黑色滤膜20以及第二加样孔412向外排出，从而使所述空腔717内产生负压，同时将待分析样品经由所述第三加样孔713添加到黑色滤膜20表面。取消按压，此时，由于所述空腔717相对于外界环境具有负压，因此外界大气压能够驱动待分析样品中的液体从黑色滤膜20流入所述空腔717内。此时被荧光标记抗体染色的待检测对象截留到黑色滤膜20表面，而待分析样品中的液体以及未与待检测对象结合的抗体和其它微小杂质则进入所述空腔717内。采用配套的荧光检测装置(例如荧光显微镜)对所述免疫荧光分析装置的黑色滤膜20表面的截留物进行分析。
具体的，在荧光检测时，所述荧光显微镜的视场必须大于所述第三加样孔713最狭窄位置(例如底部)的截面积，使得所述第三加样孔713正下方对应的黑色滤膜20表面的待检测对象都能通过荧光显微镜检测到。
基于所述第三实施例的免疫荧光分析装置的工作原理，所述第三实施例的免疫荧光分析装置可以命名为气滤式免疫荧光分析装置。
所述第三实施例中：
优选的，所述上壳体71的颜色为黑色，以进一步消除反光对荧光检测过程造成的影响。
优选的，所述第二凹槽714内还固定有第二吸水材料32，所述第二吸水材料32紧贴所述固定塞715靠近所述底座72的一侧，并且所述第二吸水材料32与所述弹片80之间设有间隔，所述第二吸水材料32的作用在于能够吸收从黑色滤膜20流入所述免疫荧光分析装置的空腔717内的液体，避免取消弹片80按压时液体向黑色滤膜20回流。
优选的，所述第二吸水材料32上设有与所述第二通孔716对应的第三通孔323，以使从黑色滤膜20流出的液体能够经由所述第三通孔323向所述空腔717内流动，以及使空气能够在所述空腔717与所述第二通孔716之间流动。
可选的，所述第二吸水材料32为吸水纸。
可选的，所述第二吸水材料32卡合于所述第二凹槽714内。
可选的，所述固定塞715通过卡合及粘接的方式固定于所述第二凹槽714内。
可选的，所述固定塞715上靠近所述底座72的一端与所述弹片80之间的距离为2～5mm。
具体的，所述上壳体71与所述底座72的材料可以是塑料、金属或陶瓷等。
具体的，所述第三加样孔713可以呈锥形，例如圆锥形。
具体的，所述固定塞715的材料可以是塑料、金属或陶瓷等。
基于所述第三实施例的免疫荧光分析装置，本发明还提供一种免疫荧光分析方法，包括：
提供待分析样品、免疫荧光分析装置以及荧光检测装置，所述待分析样品为包含待检测样品与荧光标记抗体的混合体系，所述待检测样品中含有待检测对象，所述免疫荧光分析装置为所述第三实施例的免疫荧光分析装置。
从所述弹片80上远离所述上壳体71的一侧按压所述弹片80，使所述空腔717内产生负压，同时将待分析样品经由所述上壳体71的第三加样孔713添加到黑色滤膜20表面。
取消按压，外界大气压驱动待分析样品中的液体从黑色滤膜20流入所述空腔717内。此时被荧光标记抗体染色的待检测对象截留到黑色滤膜20表面，而待分析样品中的液体以及未与待检测对象结合的抗体和其它微小杂质则进入所述空腔717内。
采用配套的荧光检测装置(例如荧光显微镜)对所述免疫荧光分析装置中黑色滤膜20表面的截留物进行分析。
下面以具体实施例的形式详细描述本发明的免疫荧光分析方法。
实施例1
请参阅图1A与图1B，该实施例1提供一种采用所述第一实施例的免疫荧光分析装置(即渗滤式免疫荧光分析装置)来检测CD4阳性细胞的免疫荧光分析方法，包括如下步骤：
(1)在10μL(抗凝剂处理的)全血中加入90μL红细胞裂解液和1μL荧光染料标记的抗人CD4单克隆抗体，室温孵育15min，得到待分析样品。
(2)取10μL上述液体加入到所述免疫荧光分析装置中的黑色滤膜20上，静置3-5min。
(3)把所述免疫荧光分析装置放置于配套的荧光显微镜中，打开显微镜的开关，并且和电脑或者手机无线连接，对最后结果拍照。
实施例2
请参阅图1A与图1B，该实施例2提供一种采用所述第一实施例的免疫荧光分析装置(即渗滤式免疫荧光分析装置)来检测白色念珠菌的免疫荧光分析方法，包括如下步骤：
(1)在10μL白色念珠菌样品中加入90μL PBS缓冲液和1μL荧光染料标记的抗白色念珠菌单克隆抗体，室温孵育15min，得到待分析样品。
(2)取10μL上述待分析样品加入到所述免疫荧光分析装置中的黑色滤膜20上，静置3-5min。
(3)把所述免疫荧光分析装置放置于配套的荧光显微镜中，打开显微镜的开关，并且和电脑或者手机无线连接，最后结果拍照。
实施例3
请参阅图2A与图2B，该实施例3提供一种采用所述第二实施例的免疫荧光分析装置(即抽滤式免疫荧光分析装置)来检测CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的免疫荧光分析方法，包括如下步骤：
(1)在10μL(抗凝剂处理的)全血中加入90μL红细胞裂解液、0.1μL荧光染料标记的抗人CD4单克隆抗体和0.1μL荧光染料标记的抗人CD8单克隆抗体，室温孵育15min，得到待分析样品。
(2)把所述免疫荧光分析装置和注射器通过连接件(例如气管)连接在一起，之后将所述免疫荧光分析装置设有上盖41的一端伸入待分析样品中，再抽出注射器芯杆，使待分析样品中的CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞吸附到黑色滤膜20表面。
(3)使用荧光显微镜分析所述免疫荧光分析装置中黑色滤膜20上的荧光图案，通过荧光点数分析血液中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的比例。
实施例4
请参阅图2A与图2B，该实施例4提供一种采用所述第二实施例的免疫荧光分析装置(即抽滤式免疫荧光分析装置)来检测阴道中白色念珠菌、加德纳菌和阴道毛滴虫的免疫荧光分析方法，包括如下步骤：
(1)用采样拭子从阴道采取分泌液，把拭子伸入PBS缓冲液，再用手使拭子在PBS缓冲液转动，使拭子上的白色念珠菌、加德纳菌和阴道毛滴虫分散到PBS缓冲液中。
(2)加入分别用绿色、黄色和红色荧光染料标记的抗白色念珠菌、加德纳菌和阴道毛滴虫抗体，混匀后静置孵育10min左右，得到待分析样品。
(3)把所述免疫荧光分析装置和注射器通过连接件(例如气管)连接在一起，之后将所述免疫荧光分析装置设有上盖41的一端伸入待分析样品中，再抽出注射器芯杆，使待分析样品中的白色念珠菌、加德纳菌和阴道毛滴虫吸附到黑色滤膜20表面。
(4)用荧光显微镜分析所述免疫荧光分析装置中黑色滤膜20上的荧光图案，通过荧光点数分析阴道分泌液中白色念珠菌、加德纳菌和阴道毛滴虫的比例。黑色滤膜20上出现的绿色荧光点表示白色念珠菌阳性，黄色荧光点表示加德纳菌阳性，红色荧光点表示阴道毛滴虫。
实施例5
请参阅图3A与图3B，该实施例5提供一种采用所述第三实施例的免疫荧光分析装置(即气滤式免疫荧光分析装置)来检测CD4+T淋巴细胞的免疫荧光分析方法，包括如下步骤：
(1)在10μL(抗凝剂处理的)全血中加入90μL红细胞裂解液和0.1μL荧光染料标记的抗人CD4单克隆抗体，室温孵育15min，得到待分析样品。
(2)用手指上挤所述免疫荧光分析装置中的弹片80，同时取10μL上述待分析样品加入到所述免疫荧光分析装置中的黑色滤膜20上，最后取消按压。
(3)用荧光显微镜分析所述免疫荧光分析装置中黑色滤膜20表面的荧光图案，通过荧光点数分析血液中CD4+T淋巴细胞的数量。
实施例6
请参阅图3A与图3B，该实施例6提供一种采用所述第三实施例的免疫荧光分析装置(即气滤式免疫荧光分析装置)来检测白色念珠菌的免疫荧光分析方法，包括如下步骤：
(1)在10μL白色念珠菌样品中加入90μL PBS缓冲液和1μL荧光染料标记的抗白色念珠菌单克隆抗体，室温孵育15min，得到待分析样品。
(2)用手指上挤所述免疫荧光分析装置中的弹片80，同时取10μL上述待分析样品加入到所述免疫荧光分析装置中的黑色滤膜20上，最后取消按压。
(3)用荧光显微镜分析所述免疫荧光分析装置中黑色滤膜20表面的荧光图案，通过荧光点数分析白色念珠菌的数量。
综上所述，本发明提供了一种免疫荧光分析装置与免疫荧光分析方法，所述免疫荧光分析装置包括黑色滤膜20，所述免疫荧光分析方法采用所述黑色滤膜20截留被荧光标记抗体染色的待检测对象，同时滤过未与所述待检测对象结合的荧光标记抗体，之后采用荧光检测装置对所述黑色滤膜20表面的截留物进行分析，实现荧光点的阅读和计数；所述免疫荧光分析方法的操作步骤简单，分析成本低，并且检测结果准确；所述免疫荧光分析装置的结构简单，生产成本低，使用方便，检测效果好；因此，本发明的免疫荧光分析装置与免疫荧光分析方法能够广泛使用，不仅适用于大型医院与专业的实验室，在基层的医疗机构也能广泛使用。
在这里示出和描述的所有示例中，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制，因此，示例性实施例的其他示例可以具有不同的值。
应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (12)
1.一种免疫荧光分析装置，其特征在于，包括黑色滤膜。
2.如权利要求1所述的免疫荧光分析装置，其特征在于，所述免疫荧光分析装置还包括外壳与第一吸水材料，所述外壳上设有依次连通的第一加样孔与安装槽，所述安装槽内设有层叠设置的黑色滤膜与第一吸水材料，其中所述黑色滤膜靠近所述第一加样孔设置。
3.根据权利要求2所述的免疫荧光分析装置，其特征在于，所述外壳的颜色为黑色，所述第一吸水材料为吸水纸。
4.如权利要求1所述的免疫荧光分析装置，其特征在于，所述免疫荧光分析装置还包括相互配合连接的上盖与下壳体，所述上盖中设有第二加样孔，所述下壳体具有相对设置的上盖配合端与抽气端，所述黑色滤膜固定于所述上盖与所述下壳体的上盖配合端之间，所述下壳体内设有中空结构，所述中空结构贯穿所述上盖配合端与所述抽气端。
5.如权利要求4所述的免疫荧光分析装置，其特征在于，所述上盖配合端设有凸起部，所述上盖与所述凸起部配合连接，所述黑色滤膜固定于所述上盖与所述凸起部之间；所述中空结构包括设于所述下壳体的上盖配合端并且贯穿所述凸起部的第一通孔以及设于所述下壳体的抽气端的第一凹槽，所述第一凹槽的槽底与所述第一通孔连通。
6.如权利要求1所述的免疫荧光分析装置，其特征在于，所述免疫荧光分析装置还包括上壳体、固定塞、弹片以及底座；
所述上壳体具有相对设置的加样端与底座配合端，所述加样端设有第二加样孔，所述底座配合端设有第二凹槽，所述第二加样孔与所述第二凹槽的底部贯通，所述固定塞固定于所述第二凹槽内；
所述黑色滤膜设于所述固定塞上靠近所述第二加样孔一端的端面上；
所述固定塞内设有第二通孔，所述第二通孔贯通所述固定塞靠近所述第二加样孔的一端以及靠近所述底座的一端；
所述底座包括底板以及与所述底板相连的侧板，所述底板上设有开口，所述弹片承载于所述底板上，所述上壳体设于所述弹片上并且与所述底座连接；所述固定塞上靠近所述底座的一端与所述弹片之间设有间隔。
7.如权利要求6所述的免疫荧光分析装置，其特征在于，所述上壳体的颜色为黑色，所述固定塞通过卡合及粘接的方式固定于所述第二凹槽内，所述固定塞上靠近所述底座的一端与所述弹片之间的距离为2～5mm。
8.如权利要求6所述的免疫荧光分析装置，其特征在于，所述第二凹槽内还固定有第二吸水材料，所述第二吸水材料紧贴所述固定塞靠近所述底座的一侧，并且所述第二吸水材料与所述弹片之间设有间隔，所述第二吸水材料上设有与所述第二通孔对应的第三通孔。
9.一种免疫荧光分析方法，其特征在于，包括：
提供待分析样品、免疫荧光分析装置以及荧光检测装置，所述免疫荧光分析装置包括黑色滤膜，所述待分析样品为包含待检测样品与荧光标记抗体的混合体系，所述待检测样品中含有待检测对象；
将待分析样品添加到所述黑色滤膜表面进行过滤；
采用荧光检测装置对所述黑色滤膜表面的截留物进行阅读。
10.根据权利要求9所述的免疫荧光分析方法，其特征在于，所述免疫荧光分析装置还包括外壳与第一吸水材料，所述外壳上设有依次连通的第一加样孔与安装槽，所述安装槽内设有层叠设置的黑色滤膜与第一吸水材料，其中所述黑色滤膜靠近所述第一加样孔设置；
所述将待分析样品添加到所述黑色滤膜表面进行过滤的步骤包括：将所述待分析样品从所述第一加样孔添加到黑色滤膜上进行渗滤。
11.根据权利要求9所述的免疫荧光分析方法，其特征在于，所述免疫荧光分析装置还包括相互配合连接的上盖与下壳体，所述上盖中设有第二加样孔，所述下壳体具有相对设置的上盖配合端与抽气端，所述黑色滤膜固定于所述上盖与所述下壳体的上盖配合端之间，所述下壳体内设有中空结构，所述中空结构贯穿所述上盖配合端与所述抽气端；
所述将待分析样品添加到所述黑色滤膜表面进行过滤的步骤包括：使所述免疫荧光分析装置与抽气装置连接，之后将所述免疫荧光分析装置设有上盖的一端伸入待分析样品中，再使抽气装置执行抽气动作，使待分析样品经由所述上盖中的第二加样孔进入黑色滤膜中进行过滤。
12.根据权利要求9所述的免疫荧光分析方法，其特征在于，所述免疫荧光分析装置还包括上壳体、固定塞、弹片以及底座；所述上壳体具有相对设置的加样端与底座配合端，所述加样端设有第二加样孔，所述底座配合端设有第二凹槽，所述第二加样孔与所述第二凹槽的底部贯通，所述固定塞固定于所述第二凹槽内；所述黑色滤膜设于所述固定塞上靠近所述第二加样孔一端的端面上；所述固定塞内设有第二通孔，所述第二通孔贯通所述固定塞靠近所述第二加样孔的一端以及靠近所述底座的一端；所述底座包括底板以及与所述底板相连的侧板，所述底板上设有开口，所述弹片承载于所述底板上，所述上壳体设于所述弹片上并且与所述底座连接；所述固定塞上靠近所述底座的一端与所述弹片之间设有间隔；
所述将待分析样品添加到所述黑色滤膜表面进行过滤的步骤包括：从所述弹片上远离所述上壳体的一侧按压所述弹片，同时将待分析样品经由所述上壳体的第三加样孔添加到黑色滤膜表面；之后取消按压。
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