CN110475862B - 洗涤剂组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种洗涤剂组合物，其包含：‑(a)0.0001至1重量％，优选0.0001至0.1重量％，更优选0.0001至0.01重量％，最优选0.0005至0.001重量％的调色染料；和，(b)0.0001至10重量％，优选0.0005至8重量％，更优选0.001至5重量％，最优选0.002至0.2重量％的纤维素酶，所述纤维素酶选自与SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:17具有至少80％，优选至少85％，进一步优选至少90％，甚至更优选至少92％，还优选至少95％，特别优选至少98％和最优选至少99％的序列同一性的任何序列。
Description
技术领域
本发明涉及一种洗涤剂组合物，其包含调色染料和新型纤维素酶。本发明还涉及使用这种组合物进行洗衣的方法。
背景技术
纤维素酶用于各种应用，并且对于清洁应用的良好性能例如洗涤剂组合物的性能特别重要。
现有技术中已知有多种纤维素酶，但是，随着客户期望高清洁性能，同时生产成本和因此最终产品成本应保持低，功能要求不断提高。另外，环境方面变得重要，并且上市许可的要求不断增加。到目前为止，织物的白度通常是通过使用漂白剂例如含氯组合物来实现。这不仅导致织物的损坏，而且导致成本增加和对环境有害。这样的工艺现状的酶例如在US2005070003A1中公开。
由于纤维素酶的种类繁多及其相关益处，洗衣组合物经常包含纤维素酶混合物(即，用于白度的纤维素酶和用于去起球(de-pilling)的另外的纤维素酶，也称为“织物护理”)。
这增加了洗涤剂中的酶含量，增加了每剂量的成本和在洗涤循环结束时冲洗掉的酶的量。此外，不同的纤维素酶可能具有不同的稳定性和活性要求以及最适条件，这使得配制和洗涤说明考虑更加困难。
发明内容
本发明寻求通过提供包含本文所述的纤维素酶的洗涤剂组合物来解决这些问题。这样的纤维素酶可以显示出改进的衣物白度和织物护理(去起毛(de-fuzzing)和去起球)两者的有利双重益处。这仅使用一种而不是两种纤维素酶而提供护理和清洁(白度)功效两者。
发明人还观察到在洗涤剂组合物中在新型纤维素酶和调色染料之间发现了协同作用。
因此，本发明的第一方面提供了一种洗涤剂组合物，其包含：-
(a)0.0001至1重量％，优选0.0001至0.1重量％，更优选0.0001至0.01重量％，最优选0.0005至0.001重量％的调色染料；和，
(b)0.0001至10重量％，优选0.0005至8重量％，更优选0.001至5重量％，最优选0.002至0.2重量％的纤维素酶，所述纤维素酶选自与SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13，SEQ IDNO:15或SEQ ID NO:17具有至少80％，优选至少85％，进一步优选至少90％，甚至更优选至少92％，还优选至少95％，特别优选至少98％和最优选至少99％的序列同一性的任何序列。
在第二方面，本发明提供了一种洗涤白色织物的方法，所述方法包括使所述织物与包含根据第一方面的组合物的水溶液接触，任选地，其中使所述织物与所述水溶液接触的步骤在30℃或更低温度下进行。
具体实施方式
纤维素酶
在本发明中，术语“纤维素酶”应理解为是指任何催化纤维素分解的酶，其是纤维素和相关多糖的分解。在本发明中，术语“纤维素酶”也指这样的酶的任何天然存在的混合物或复合物，其连续地或协同地作用以分解纤维素材料。本发明的纤维素酶可以具有真菌，细菌或原生动物来源。术语“纤维素酶”特别是指能够将纤维素分解成单糖，例如β-葡萄糖，或更短的多糖和寡糖的任何酶。
术语“去起球”是指纤维素酶去除织物中或织物上的棉绒和松散表面纤维的能力。此过程也称为“去起球”，“生物抛光”和“生物整理”，并使织物表面光滑，其因此改善其柔软性和外观。纤维素酶处理还有助于防止随后形成使衣服显得陈旧的纤维球。在去起球过程中，期望的是使由于纤维素酶的水解作用而引起的织物强度损失最小化。
本发明的纤维素酶包含催化结构域基序[STA]-T-R-Y-[FYW]-D-x(5)-[CA]。本申请内提及的任何基序或修饰是使用本领域技术人员众所周知的氨基酸的单字母代码来定义。
氨基酸编码如下：
G甘氨酸，P脯氨酸，A丙氨酸，V缬氨酸，L亮氨酸，I异亮氨酸，M蛋氨酸，C半胱氨酸，F苯丙氨酸，Y酪氨酸，W色氨酸，H组氨酸，K赖氨酸，R精氨酸，Q谷氨酰胺，N天冬酰胺，E谷氨酸，D天冬氨酸，S丝氨酸，T苏氨酸。
方括号中的氨基酸应理解为各个位置的替代物。“x”表示各个位置可以选自所有现有的氨基酸。括号中的数字(在该定义内称为变量“z”)(例如，如催化结构域基序中包含的5)表示在括号之前的该术语(“术语”表示氨基酸或任何基序，例如[ACT])重复z次(例如，A(5)表示氨基酸A重复5次)。如果有显示两个数字，例如(5，10)，则在括号之前的术语(如上定义)可以重复5至10次。
纤维素酶可以包含催化结构域基序[STA]-T-R-Y-[FYW]-D-x(5)-[CA]，和与SEQID NO:3具有至少80％序列同一性的碳水化合物结合结构域，或包含标签基序V-[PSC]-[DQEN]-S-G-G-P-G-P-G-P-G-P-G-P的碳水化合物结合结构域。
在本发明的一个优选实施方式中，催化结构域基序是T-T-R-Y-[FYW]-D-x(5)-[CA]。
在本发明的特别优选的实施方式中，催化结构域基序是T-T-R-Y-W-D-x(5)-C，其中催化结构域基序T-T-R-Y-W-D-C-C-K-P-S-C(也称为SEQ ID NO:9)是最优选的。
本发明的纤维素酶还包含与SEQ ID NO:3具有至少80％，优选至少85％，进一步优选至少90％，甚至更优选至少92％，还优选至少95％，特别优选至少98％和最优选至少99％的序列同一性的碳水化合物结合结构域，或碳水化合物结合标签基序V-[PSC]-[DQEN]-S-G-G-P-G-P-G-P-G-P-G-P，其中V-P-D-S-G-G-P-G-P-G-P-G-P-G-P的碳水化合物结合结构域标签是最优选的。
在本发明内，术语“碳水化合物结合结构域标签”是指包含基序V-[PSC]-[DQEN]-S-G-G-P-G-P-G-P-G-P-G-P的任何序列，其可能直接连接至纤维素酶催化结构域或通过连接子，优选本文定义的连接子。
两个氨基酸序列之间的序列同一性是使用Needleman-Wunsch算法(Needlemanand Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48：443-453)来测定，如在EMBOSS包的Needle程序中实施的(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite，Rice等，2000，TrendsGenet.16：276-277)，优选版本5.0.0或更新。使用的参数是空位开放罚分为10，空位延伸罚分为0.5，和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)替代矩阵。标记为“最长同一性”的Needle的输出(使用-nobrief选项获得)用作同一性百分比，计算如下：(相同残基×100)/(对齐长度-对齐中的间隙总数)。
在特别优选的实施方式中，本发明的纤维素酶包含与SEQ ID NO:1具有至少80％，优选至少85％，进一步优选至少90％，甚至更优选至少92％，还优选至少95％，特别优选至少98％和最优选至少99％的序列同一性的序列。
在一个优选的实施方式中，本发明的纤维素酶还包含接头。术语“接头”是指本领域技术人员已知的适合于连接或“连接”催化结构域与碳水化合物结合结构域或碳水化合物结合结构域标签的任何序列。“连接子”或“间隔子”是自然界中产生的短氨基酸序列，用于分隔单个蛋白质中的多个结构域。该功能是在不干扰每个结构域的功能的情况下，阻止催化结构域与碳水化合物结合结构域或碳水化合物结合结构域标签之间的有害相互作用。已经惊奇地发现一些接头有助于新型纤维素酶的性能并增加ARD(抗再沉积)和去起球作用，并且本发明的发明人甚至已经能够鉴定接头基序。
在优选的实施方式中，接头与SEQ ID NO:5具有至少80％，优选至少85％，进一步优选至少90％，甚至更优选至少92％，还优选至少95％，特别优选至少98％和最优选至少99％的的序列同一性。因此，进一步优选的是，接头包含[AGSVT](5,65)的氨基酸序列。
在另一个优选的实施方式中，接头与SEQ ID NO:7具有至少80％，优选至少85％，进一步优选至少90％，甚至更优选至少92％，还优选至少95％，特别优选至少98％和最优选至少99％的的序列同一性。因此，进一步优选的是，接头包含([SG]-P)(5,10)的氨基酸序列。
纤维素酶选自与SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:17具有至少80％，优选至少85％，进一步优选至少90％，甚至更优选至少92％，还优选至少95％，特别优选至少98％和最优选至少99％的序列同一性的任何序列。
最优选的纤维素酶选自与SEQ ID NO:11具有至少80％，优选至少85％，进一步优选至少90％，甚至更优选至少92％，还优选至少95％，特别优选至少98％，最优选至少99％的序列同一性的任何序列。
本发明的纤维素酶可以通过本领域技术人员已知适合于本发明目的的任何方法来制备。优选的是通过合适的宿主细胞表达本发明的纤维素酶。术语“宿主细胞”是指适于用包含本发明的纤维素酶的核酸序列的核酸构建体或表达载体进行转化，转染，转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”还涵盖母体细胞的任何后代，其由于复制期间发生的突变而与母体细胞不相同。宿主细胞优选选自真菌，酵母和细菌。在本发明中，宿主细胞优选地是酵母细胞，例如假丝酵母属，汉逊酵母属，克鲁维酵母属；毕赤酵母属，酵母菌属，裂殖酵母属或耶氏酵母属，其中乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)，嘉士伯酵母(Kaccharomyces carlsbergensis)，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)，道格拉斯酵母(Saccharomyces douglasii)，克氏酵母(Saccharomyces kluyveri)，诺地酵母(Saccharomyces norbensis)，卵形酵母(Saccharomyces oviformis)，解脂耶氏酵母(Yarrowia Iipolytica)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)是优选的。
术语“表达”包括本发明纤维素酶的生产中涉及的任何步骤，例如但不限于转录，转录后，修饰，翻译，翻译后修饰和分泌。
优选地，洗涤剂组合物包含0.0005至8重量％，更优选0.001至5重量％，最优选0.002至0.2重量％的纤维素酶。
调色染料
优选地，调色染料是蓝色或紫色调色染料，尽管其他色调也在本发明的范围内。使用蓝色或紫色调色染料可增强对白度和/或清洁度的感知。
合适的调色染料描述在WO2011/047987中，其内容通过引用整体并入本文。
优选地，调色染料是与聚合物共价键合的反应性染料。更优选地，聚合物是聚亚胺，任选地但优选地其中聚亚胺被2-羟基丙-1-基取代。
调色染料可优选包含下式的生色团：
其中----表示连接点。
示例性和优选的调色染料是UB40，其具有以下结构：
在某些情况下，调色染料优选是直接染料(direct dye)，例如，吖嗪染料。合适的吖嗪染料描述于WO2008/017570中，其内容通过引用整体并入本文。
在某些情况下，染料优选是AV50，其具有以下结构：
调色染料在组合物中的存在量优选为0.0001至1重量％，更优选为0.0001至0.1重量％，甚至更优选为0.0001至0.01重量％，最优选为0.0005至0.001重量％。
组合物
本发明的洗涤剂组合物可以是任何方便的形式，例如条，均质片剂，具有两个或更多个层的片剂，具有一个或多个隔室的小袋，规则或致密的粉末，颗粒剂，糊剂，凝胶，或规则的、致密的或浓缩的液体。
小袋可以配置为单隔室或多隔室。它可以是本领域技术人员已知适合于本发明目的，并且防止在与水接触之前组合物从袋中释放出来的任何形式、形状和材料。小袋优选地由包围内部容积的水溶性膜制成。内部容积可分为小袋的隔间。优选的膜是聚合物材料，优选形成膜或片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯，和水溶性丙烯酸酯共聚物，甲基纤维素，羧甲基纤维素，糊精钠，乙基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，麦芽糖糊精，聚甲基丙烯酸酯，最优选聚乙烯醇共聚物和羟丙基甲基纤维素(HPMC)。
液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，优选包含至少20重量％和至多95重量％的水，例如至多约70重量％的水，至多约65重量％的水，至多约55重量％的水，至多约45重量％的水，至多约35重量％的水，其中2至40重量％的水含量是优选的。其他类型的液体包括在水性液体或凝胶中的烷醇，胺，二醇，醚和多元醇。水性液体或凝胶洗涤剂可包含0至30重量％的有机溶剂。液体或凝胶洗涤剂也可以是非水性的。
优选地，洗涤剂组合物是液体，粉末或凝胶。它可以以胶囊或片剂的形式或以自由倾倒的形式提供。洗涤剂组合物可以使用本领域已知的任何合适的方法来制备。
优选地，组合物是液体。液体组合物是许多消费者优选的，并且浓缩液体产品由于减少了包装和减小了运输足迹而提高了可持续性。优选的液体组合物包含2至60重量％的表面活性剂，优选阴离子表面活性剂，和5至80重量％的水。
表面活性剂
组合物是洗涤剂组合物，并且适合地包含表面活性剂。合适的表面活性剂含量可以为0.1至80重量％，优选为1至70重量％，更优选为2至60重量％。
洗涤剂组合物优选包含4至40重量％，更优选5至35重量％，最优选6至33重量％的表面活性剂。
合适的表面活性剂可以选自“Surface Active Agents”，卷1，Schwartz&Perry，Interscience 1949；卷2，Schwartz,Perry&Berch，Interscience 1958；ManufacturingConfectioners Company出版的“McCutcheon's Emulsifiers and Detergents”的当前版本，或“Tenside-Taschenbuch”，H.Stache，第2版，Carl Hauser Verlag，1981，或HelmutW.Stache编辑的Anionic Surfactants:Organic Chemistry(Marcel Dekker 1996)中描述的表面活性剂。
优选存在阴离子表面活性剂。
可以使用的合适的阴离子洗涤剂化合物通常是具有含约8至约22个碳原子的烷基的有机硫酸和磺酸的水溶性碱金属盐，术语烷基用于包括较高级烷基的烷基部分。
合适的合成阴离子洗涤剂化合物的实例是烷基硫酸钠和烷基硫酸钾，特别是通过使例如由牛油或椰油制得的较高级C8至C18醇硫酸化而获得的那些，烷基醚羧酸，烷基C9至C20苯磺酸钠和钾，特别是直链仲烷基C10至C15苯磺酸钠；以及烷基甘油醚硫酸钠，特别是衍生自牛油或椰油的较高级醇和衍生自石油的合成醇的那些醚。
阴离子表面活性剂优选选自：直链烷基苯磺酸盐；烷基硫酸盐；烷基醚硫酸盐；烷基醚羧酸盐；皂；烷基(优选甲基)酯磺酸盐及其混合物。
最优选的阴离子表面活性剂选自：直链烷基苯磺酸盐；烷基硫酸盐；烷基醚硫酸盐及其混合物。优选地，烷基醚硫酸盐是具有平均1至3个EO(乙氧基化物)单元的C12-C14正烷基醚硫酸盐。月桂基醚硫酸钠(SLES)是特别优选的。优选地，直链烷基苯磺酸盐是C11至C15烷基苯磺酸钠。优选地，烷基硫酸盐是直链或支链C12至C18烷基硫酸钠。十二烷基硫酸钠是特别优选的(SDS，也称为伯烷基硫酸盐)。
优选存在两种或更多种阴离子表面活性剂，例如直链烷基苯磺酸盐与烷基醚硫酸盐一起。
最优选地，阴离子表面活性剂选自：直链烷基苯磺酸盐；烷基硫酸盐；烷基醚硫酸盐；及其混合物。
组合物可以包含阴离子和/或非离子表面活性剂。
可以使用的合适的非离子洗涤剂化合物包括，特别地，具有脂肪族疏水基团和反应性氢原子的化合物(例如脂肪醇、酸或酰胺)与尤其是环氧乙烷(单独或与环氧丙烷一起)的反应产物。优选的非离子洗涤剂化合物是脂肪族C8至C18直链或支链伯或仲醇与环氧乙烷的缩合产物。
优选地，烷基乙氧基化非离子表面活性剂是具有7EO至9EO单元的平均乙氧基化的C8至C18伯醇。
如果存在非离子型表面活性剂，那么最优选地，该非离子型表面活性剂是醇乙氧基化物，更优选具有平均3-10摩尔环氧乙烷的C10-C18醇乙氧基化物，最优选具有平均5-9摩尔环氧乙烷的C12-C15醇乙氧基化物。
高度优选的表面活性剂包含4至40重量％，更优选5至35重量％，最优选6至33重量％的表面活性剂，其包含阴离子表面活性剂，优选包含直链烷基苯磺酸盐，和非离子表面活性剂。
在这种优选的表面活性剂混合物中，最优选非离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的重量分数为<0.5，例如0.1至<0.5。这意味着在洗涤剂组合物中阴离子表面活性剂的含量优选大于非离子表面活性剂的含量。
可以适合地包含在本发明的组合物中的另外的优选的成分包括香料，荧光剂，另外的酶，助洗剂和聚合物。
香料
优选地，组合物包含一种或多种香料。
组合物优选包含香料。香料优选以0.001至3重量％，更优选0.05至0.5重量％，最优选0.1至1重量％的范围存在。在由CFTA Publications出版的CTFA(Cosmetic，Toiletryand Fragrance Association)1992 International Buyers Guide和由SchnellPublishing Co.出版的OPD 1993 Chemicals Buyers Directory 80th Annual Edition中提供了香料的许多合适实例。
优选地，香料包含以下的至少一种香型(note)(化合物)：α-异甲基紫罗酮，水杨酸苄酯；香茅醇；香豆素；己基肉桂醛；芳樟醇；2-甲基戊酸乙基酯；辛醛；乙酸苄酯；3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇3-乙酸酯；2-(1,1-二甲基乙基)-环己醇1-乙酸酯；δ-大马酮(damascone)；β-紫罗酮；乙酸三环癸烯酯(verdyl acetate)；十二醛；己基肉桂醛(hexylcinnamic aldehyde)；环十五内酯；苯乙酸2-苯基乙基酯；水杨酸戊酯；β-石竹烯；十一碳烯酸乙酯；邻氨基苯甲酸香叶酯；α-鸢尾酮；β-苯基乙基苯甲酸酯；α-檀香醇；雪松醇；乙酸柏木酯；甲酸柏木酯(cedry formate)；水杨酸环己酯；γ-十二内酯，和β-苯乙基苯基乙酸酯。
香料的有用组分包括天然和合成来源的材料两者。它们包括单一化合物和混合物。这样的组分的具体实例可见于现有文献中，例如，Fenaroli's Handbook of FlavorIngredients,1975,CRC Press；M.B.Jacobs,Synthetic Food Adjuncts,1947,VanNostrand编辑；或S.Arctander,Perfume and Flavor Chemicals,1969,Montclair,N.J.(USA)。
在制剂中存在多种香料组分是常见的。在本发明的组合物中，设想将存在四种或更多种、优选五种或更多种、更优选六种或更多种、或甚至七种或更多种不同的香料组分。
在香料混合物中，优选15至25重量％是头香。头香是由Poucher(Journal of theSociety of Cosmetic Chemists 6(2):80[1955])所定义的。优选的头香选自柑桔油、芳樟醇、乙酸芳樟酯、薰衣草、二氢月桂烯醇、玫瑰醚(rose oxide)和顺-3-己醇。
国际日用香精香料协会已在2011年发布了香氛成分(香料)的清单。(http://www.ifraorg.org/en-us/ingredients#.U7Z4hPldWzk)。
国际日用香料研究所提供了具有安全性信息的香料(香氛)数据库。
一些或所有香料可以被包封，有利于包封的典型香料组分包括具有相对低的沸点的那些，优选沸点小于300℃，优选为100-250℃的那些。包封具有低Clog P(即，将具有更高的被分配到水中的倾向的那些)，优选具有小于3.0的CLog P的香料组分也是有利的。这些具有相对低沸点和相对低CLog P的材料已经被称为“延迟释香(delayed blooming)”的香料成分，并且包含以下材料中的一种或多种：
己酸烯丙酯、乙酸戊酯、丙酸戊酯、茴香醛、苯甲醚、苯甲醛、乙酸苄酯、苄基丙酮、苯甲醇、甲酸苄酯、异戊酸苄酯、丙酸苄酯、β-γ己烯醇、樟脑胶、左旋-香芹酮、d-香芹酮、肉桂醇、甲酸肉桂酯(cinamyl formate)、顺-茉莉酮、顺-3-己烯基乙酸酯、枯茗醇、cyclalc、二甲基苄基甲醇、二甲基苄基甲醇乙酸酯、乙酸乙酯、乙酰乙酸乙酯、乙基戊基酮、苯甲酸乙酯、丁酸乙酯、乙基己基酮、乙基苯基乙酸酯、桉树脑、丁香酚、乙酸葑酯(fenchylacetate)、flor acetate(三环癸烯基乙酸酯)、frutene(三环癸烯基丙酸酯)、香叶醇、己烯醇、乙酸己烯酯、乙酸己酯、甲酸己酯、龙葵醇(hydratropic alcohol)、羟基香茅醛、茚酮、异戊醇、异薄荷酮、乙酸异胡薄荷酯(isopulegyl acetate)、异喹啉酮、女贞醛、芳樟醇、芳樟醇氧化物、甲酸芳樟酯、薄荷酮、薄荷基苯乙酮(menthyl acetphenone)、甲基戊基酮、邻氨基苯甲酸甲酯、苯甲酸甲酯、甲基苄基乙酸酯(methyl benyl acetate)、甲基丁香酚、甲基庚烯酮、甲基庚炔碳酸酯(methyl heptine carbonate)、甲基庚基酮、甲基己基酮、甲基苯基甲基乙酸酯、水杨酸甲酯、甲基-n-甲基邻氨基苯甲酸酯、橙花醇、辛内酯、辛醇、对甲酚、对甲酚甲基醚、对甲氧基苯乙酮、对甲基苯乙酮、苯氧乙醇、苯基乙醛、苯基乙基乙酸酯、苯基乙基醇、苯基乙基二甲基甲醇、乙酸异戊二烯酯、propyl bornate、胡薄荷酮、玫瑰醚(rose oxide)、黄樟素、4-萜品烯醇(4-terpinenol)、α-萜品烯醇和/或苯乙醛二甲醇缩醛(viridine)。多种香料组分存在于制剂中是常见的。在本发明的组合物中，设想将有来自上文给出的延迟释香香料的给定列表的四种或更多种，优选五种或更多种，更优选六种或更多种，或甚至七种或更多种不同的香料组分存在于香料中。
可以与本发明一起应用的另一组香料是所谓的“芳香疗法”材料。这些包括也用于香水中的许多组分，包括精油的组分如鼠尾草、桉树、天竺葵、薰衣草、肉豆蔻干皮(Mace)提取物、橙花油、肉豆蔻、留兰香、甜紫罗兰叶和缬草。
荧光剂
优选地，组合物包含一种或多种荧光剂。
组合物优选包含荧光剂(光亮剂)。荧光剂是众所周知的，并且许多这样的荧光剂是可商购的。通常，这些荧光剂以其碱金属盐，例如钠盐的形式提供和使用。
荧光剂的优选类别是：二苯乙烯基联苯化合物，如Tinopal(商标)CBS-X，二胺芪二磺酸化合物，如Tinopal DMS pure Xtra和Blankophor(商标)HRH，以及吡唑啉化合物，如Blankophor SN。
优选的荧光剂是：2-(4-苯乙烯基-3-磺基苯基)-2H-萘并(napthol)[1,2-d]三唑钠、4,4'-双{[(4-苯胺基-6-(N-甲基-N-2-羟乙基)氨基-1,3,5-三嗪-2-基)]氨基}芪-2-2'-二磺酸二钠、4,4'-双{[(4-苯胺基-6-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)]氨基}芪-2-2'-二磺酸二钠以及4,4'-双(2-磺基苯乙烯基)联苯二钠。
组合物中使用的一种或多种荧光剂的总量优选为0.0001至0.5重量％，更优选为0.005至2重量％，最优选为0.05至0.25重量％。
另外的酶
除所示的纤维素酶之外，组合物中可优选存在另外的酶。
如果存在的话，那么本发明的洗衣组合物中每种酶的含量为0.0001重量％至0.1重量％。
预期设想的另外的酶包括蛋白酶，α-淀粉酶，其他纤维素酶(在提交时由权利要求书定义的本发明中指定的那些以外的纤维素酶)，脂肪酶，过氧化物酶/氧化酶，果胶酸裂合酶和甘露聚糖酶，或其混合物。
优选地，酶选自：蛋白酶，α-淀粉酶，和脂肪酶。
助洗剂或络合剂
可以存在助洗剂材料。如果存在，则它们通常选自1)钙螯合剂材料，2)沉淀材料，3)钙离子交换材料及4)其混合物。
钙螯合剂助洗剂材料的实例包括碱金属多磷酸盐，例如三聚磷酸钠，和有机螯合剂，例如乙二胺四乙酸。
沉淀助洗剂材料的实例包括正磷酸钠和碳酸钠。
钙离子交换助洗剂材料的实例包括各种类型的水不溶性晶体或无定形铝硅酸盐，其中沸石是最众所周知的代表，例如沸石A、沸石B(也称为沸石P)、沸石C、沸石X、沸石Y以及如EP-A-0,384,070中所述的P型沸石。
组合物还可以含有0-65％的助洗剂或络合剂，例如乙二胺四乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、烷基或烯基琥珀酸、次氮基三乙酸或下文提及的其他助洗剂。
优选地，衣物清洁制剂是非磷酸盐助洗的衣物清洁制剂，即，包含少于1重量％的磷酸盐。
聚合物
组合物可优选包含一种或多种聚合物。实例聚合物是聚乙烯亚胺，聚(乙烯吡咯烷酮)，聚(乙烯吡啶-N-氧化物)，聚(乙烯基咪唑)，羧甲基纤维素，聚(乙二醇)，聚(乙烯醇)，聚羧酸盐如聚丙烯酸酯，马来酸/丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。优选的聚合物是聚乙烯亚胺。
方法和用途
本发明还涉及洗涤织物的方法。适合地，至少一些织物是白色的，尽管应理解，本文所述的组合物可用于有色织物。术语白色织物包括衣服中织物的白色部分，其可以是图案化的并具有两个或多个彩色部分。
如本文所述，本发明的组合物中的纤维素酶可以在较高温度下稳定，但在较低温度下显示良好活性。较低温度的洗涤可以是优选的，因为它们更环保，更便宜并且通常不太可能损坏织物和装饰物。使织物与包含本发明的组合物的水溶液接触的步骤或洗涤步骤可以在60℃或更低，例如在50℃或更低，例如在40℃或更低，例如在30℃或更低下发生。
实施例
现将参考以下非限制性实施例并参考以下附图描述本发明：
图1示出了实施例4的结果：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:11的dL*值的比较。
图2显示了实施例5的结果：施加不同的纤维素变体导致不同的L+值，表明本发明的纤维素SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:17的不同ARD作用。
图3显示实施例6的结果：对于地毯污物，SEQ ID NO:11与
相比的ARD洗涤活性。
图4显示了实施例8的结果：在20℃下以0.625mg/L的浓度应用SEQ ID NO:11时，dL*值为4.5。
图5显示实施例9的结果：SEQ ID NO:11的最佳温度。
图6显示实施例10的结果：SEQ ID NO:11的最佳pH。
图7显示实施例11的结果：SEQ ID NO:11的热稳定性。
图8显示了在45℃洗涤3次后，本发明限定中的纤维素酶(纤维素酶SEQ ID NO:11)的白度与
和对照的比较。
图9显示了在不同温度下，液体制剂中纤维素酶SEQ ID NO:11与
相比改善的白度性能。
图10比较了本发明的组合物(纤维素酶SEQ ID NO:11和AV50调色染料)与包含
的组合物和各种对照组合物的性能。
图11显示了包含纤维素酶SEQ ID NO:11的组合物与
相比的多次洗涤的优越白度性能。
图12显示了纤维素酶SEQ ID NO:11的去起球效果优于
图13显示了用对照、包含纤维素酶SEQ ID NO:11的组合物和基准“Care”纤维素酶洗涤15次的新的黛棉丽蓝(Drimarine blue)织物样品的爆裂强度数据。
实施例1：在巴斯德毕赤酵母中纤维素酶的纤维素酶表达
为了表达蛋白质(以下方法涉及SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:1作为例子)，首先将相应的基因(SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:16)克隆到标准载体中。因此，通过PCR用具有限制性位点作为突出端的引物扩增两个基因。根据供应商手册连接PCR产物和用KpnI和XbaI消化的载体(pGAPZαA，pPICZαA；InvitrogenTM)。所得载体列于表1。
表1：质粒名称和描述
| 质粒名称 | 描述 |
| pGAP-SEQ ID NO:1 | 具有SEQ ID NO:1的pGAPZαA |
| pAOX-SEQ ID NO:1 | 具有SEQ ID NO:1的pPICZαA |
| pGAP-SEQ ID NO:15 | 具有SEQ ID NO:15的pGAPZαA |
| pAOX-SEQ ID NO:15 | 具有SEQ ID NO:15的pPICZαA |
用BglI直链化后，根据供应商手册将载体转化到X-33菌株(InvitrogenTM)中。对于每种质粒，在深孔板中对96个转化子筛选高蛋白生产。对于每个转化体系列，在300ml摇瓶(50ml含1％甘油的YP基础培养基；27℃，250rpm，80％湿度；40小时，48小时，66小时和72小时后2ml小杯的甘油或甲醇；96小时后收获)中培养最好的5-10个克隆以进行验证。最后用Azo-CMC测定法(Megazyme，爱尔兰)测定蛋白质的活性。
实施例2：通过凝胶定量目标条带确定酶浓度
SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:17发酵上清液是使用外部蛋白质校准曲线通过内部SDS凝胶定量方法进行定量。将酶样品施加到SDS凝胶上，然后用Sypro Ruby(Thermo Fisher：S12000)将其染色。凝胶图像记录在标准Bio-Rad凝胶记录仪器上。使用ImageLab软件(Bio-Rad)进行图像分析。在同一SDS凝胶上使用外部蛋白校准曲线(例如BSA；牛血清白蛋白)，通过靶蛋白的特定SDS凝胶带的信号积分来测定蛋白浓度。
实施例3：使用特定酶活性的发酵上清液中的纤维素酶定量
通过Ni-NTA纯化，然后使用Superdex 75 10/300GL柱进行尺寸排阻色谱，将SEQID NO:1和SEQ ID NO:11纯化至均质。通过完整的质量测定和N端测序实验测定蛋白质序列。使用从实验测定的蛋白质序列计算出的摩尔消光系数，通过具有UV280信号检测的HPLC，对均质样品进行蛋白质定量。简而言之，HPLC运行如下进行。将蛋白施加到端部封盖的Nucleosil C4柱上，并通过线性梯度的缓冲液A(90％水，10％乙腈，0.1％TFA)和缓冲液B(100％乙腈，0.1％TFA)洗脱。积分峰UV280信号以计算蛋白质浓度。纯化的SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:11样品或粗蛋白上清液的体积酶活性是使用改良的96孔功能良好的
C分析法(Megazyme)测量。尺寸排阻色谱法纯化的SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:11的比活性和摩尔活性用于计算粗发酵上清液中的靶蛋白质浓度。
实施例4：纤维素酶的ARD(抗再沉积)洗涤活性
在Tergotometer规模的ARD洗涤试验中测试纤维素酶的活性。将白色棉布样品(T460-40，center for testmaterials B.V.3133 KT Vlaardingen，荷兰)在800mL中于40℃洗涤4次20分钟。洗涤液由以1.5g/L剂量在限定法国硬度为27，Ca:Mg为2:1的水中的洗涤剂AATCC WOB 93组成。向每个洗涤循环添加被炭黑和橄榄油弄脏的8个新的棉布样品作为污物压载物(8×10厘米；101 swissatest Testmaterialien AG,9015 St Gallen，瑞士)。通过添加棉织物80A和10A(wfk Testgewebe GmbH,41379 Brüggen，德国)作为压载物，将液体布比率设置为25。使用具有D65、10°的分光光度计(ColorFlex EZ，Hunterlab)，在空气中干燥纺织品后，记录白色棉布样品的L*a*b*值。在测量之前，用提供的白色标准品校准仪器。dL*值是通过从用纤维素酶处理的棉布样品的L*减去没有酶的空白对照的L*来计算。dL*反映了织物的白度，因此较高的dL*表示较高的酶的ARD作用。酶作为活性酶蛋白(AEP)的毫克数定量加料。基于酶比活计算每种制剂的AEP含量。如实施例3中所述进行蛋白质定量。酶制剂的剂量为每升洗涤液0.625mg活性酶蛋白，对照样品不含酶。
结果如图1所示。与SEQ ID NO:1(2.94)相比，以相同蛋白质浓度施加酶导致SEQID NO:11(3.85)更高的dL*值，表明SEQ ID NO:11的ARD作用增加。
实施例5：纤维素酶变体的ARD(抗再沉积)洗涤活性
在Tergotometer规模的ARD洗涤试验中测试纤维素酶的活性。将白色棉布样品(T460-40，center for testmaterials B.V.3133 KT Vlaardingen，荷兰)在800mL中于40℃洗涤4次20分钟。洗涤液由以1.5g/L剂量在设定法国硬度为27，Ca:Mg为2:1的水中的洗涤剂AATCC WOB 93组成。向每个洗涤循环添加被炭黑和橄榄油弄脏的8个新的棉布样品作为污物压载物(8×10厘米；101 swissatest Testmaterialien AG,9015St Gallen，瑞士)。通过添加棉织物80A和10A(wfk Testgewebe GmbH,41379 Brüggen，德国)作为压载物，将液体布比率设置为25。使用具有D65、10°的分光光度计(ColorFlex EZ，Hunterlab)，在空气中干燥纺织品后，记录白色棉布样品的L*a*b*值。在测量之前，用提供的白色标准品校准仪器。dL*值是通过从用纤维素酶处理的棉布样品的L*减去没有酶的空白对照的L*来计算。dL*反映了织物的白度，因此较高的dL*表示较高的酶的ARD作用。酶作为活性酶蛋白(AEP)的毫克数定量加料。基于用于蛋白质定量(实施例2)的SDS-PAGE计算每种制剂的AEP含量。酶制剂的剂量为每升洗涤液1.5mg活性酶蛋白，对照样品不含酶。
结果如图2所示。应用不同的纤维素变体产生不同的L+值，表明纤维素变体的不同ARD作用。
实施例6：酶对地毯污物的ARD(抗再沉积)洗涤活性
在Tergotometer规模的ARD洗涤试验中测试纤维素酶的洗涤活性。将白色棉布样品(T460-40，center for testmaterials B.V.3133 KT Vlaardingen，荷兰)在800mL中于35℃洗涤7次20分钟。洗涤液由以2g/L剂量在法国硬度设置为26，Ca:Mg为2:1的水中的洗涤剂AATCCliqD组成。通过添加棉织物80A和10A(wfk Testgewebe GmbH,41379Brüggen，德国)作为压载物，将液体布比率设置为29。在每次洗涤循环中，将10g/L地毯污物wfk 09W(wfkTestgewebe GmbH,41379,Brüggen，德国)作为污物添加到洗涤液中。
酶以0.625mg/L的浓度定量加料(AEP；活性蛋白；实施例2)。使用具有D65、10°的分光光度计(ColorFlex EZ，Hunterlab)，在空气中干燥纺织品后，记录白色棉布样品的L*a*b*值。在每次测量之前，用提供的白色标准品(Hunterlab)校准仪器。dL*值是通过从用纤维素酶处理的棉布样品的L*减去没有酶的空白对照的L*来计算。dL*给出了织物的白度，因此较高的dL*表示较高的酶的ARD作用。
结果如图3所示。与未经酶处理洗涤的织物相比，SEQ ID NO:11显示出dL*为～2的正ARD作用。另一方面，
5000L对地毯污物平均显示出很小的负ARD洗涤效果。
实施例7：使用液体洗涤剂的纤维素酶的Launder-O-meter测试
如WO2016066896中所公开进行测试。如实施例1中所述，在巴斯德毕赤酵母中产生纤维素酶(SEQ ID NO:11)，并用AATCCliq.洗涤剂在40℃下测试其性能。监视物E-253用于演示去起球效果，代表用过的棉纺织品。将测试织物切成样品(约29cm×15-16.5cm，两个样品的总重量为约24g)，其含有每种颜色(黑色，红色，绿色，蓝色)的全宽条纹。
纤维素酶处理如下在Atlas LP-2 Launder-O-meter(SDS Atlas，Rock Hill，SC29732，USA)中进行。Launder-O-meter首先被预热至40℃。随后，将60克钢球(直径0.6厘米)和240毫升洗涤液和稀释酶(<1.0毫升)添加到1.2升容器中。之后，将一个E-253样品放置在容器中，并将Launder-O-meter在40℃下运行60分钟。
酶作为活性酶蛋白(AEP)的毫克数定量加料。基于用于蛋白质定量的SDS-PAGE计算每种制剂的AEP含量(实施例2)。
酶制剂的剂量为每升洗涤液0.4mg活性酶蛋白，对照样品不含酶。洗涤液包含每升合成自来水(16°dH)5g的AATCCliq.。如WO2016066896实施例4中所述制备具有16°dH的硬度的合成自来水的制剂。在Launder-O-meter上进行纤维素酶处理后，首先将样品在流水下(环境温度～20℃)分别漂洗，然后在旋转干燥机(THOMAS，Neunkirchen；类型：776SEL 202)中干燥5分钟。
使用L*a*b*颜色空间坐标，使用分光光度计(ColorFlex EZ，Hunterlab)通过测量颜色作为反射率值来评估洗涤剂应用中的纤维素酶性能。在5个洗涤循环后，测量测试监视物的每4个条纹的颜色。亮度(L*)的降低，即与没有纤维素酶的处理相比暗度的增加，被用作纤维素酶作用的指示。当通过纤维素酶除去从形成毛球并赋予织物灰色外观的纱线突出的表面纤维和细纤维时，织物的亮度降低，并且织物的表面显得更暗并且颜色变得更亮(WO2016066896)。
根据WO2016066896实施例4计算纤维素酶性能。监视物上所有4条测试条纹的L*值总和为负(-2.50)。如上所述，负的L*值表示除去了从形成毛球、赋予织物灰色外观的纱线突出的纤维和细纤维。该分光光度法结果也通过目测评估得以确认。
实施例8：在20℃下纤维素酶的ARD(抗再沉积)洗涤活性
在20℃下在Tergotometer规模的ARD洗涤试验中测试SEQ ID NO:11的活性。将白色棉布样品(WK05,wfk Testgewebe GmbH,41379Brüggen，德国)在800mL中于20℃洗涤20分钟。洗涤液由以0.72g/L剂量在限定法国硬度为26，Ca:Mg为2:1的水中的洗涤剂IKEA12组成。向每个洗涤循环添加0.04g/L。
IKEA制剂是：
通过添加机织棉织物作为压载物，将液体布比率设定为33。在D65、10°(ColorFlexEZ，Hunterlab)的分光光度计中在25℃、10％湿度过夜干燥纺织品后，记录白色棉布样品的L*a*b*值。在测量之前，用提供的白色标准品校准仪器。dL*值是通过从用纤维素酶处理的棉布样品的L*减去没有酶的空白对照的L*来计算。dL*反映了织物的白度，因此较高的dL*表示较高的酶的ARD作用。酶作为活性酶蛋白(AEP)的毫克数定量加料。根据实施例2中所述的方法计算每种制剂的AEP含量。酶制剂的剂量为每升洗涤液0.625mg活性酶蛋白，对照样品不含酶。
结果如图4所示。以0.625mg/L浓度应用SEQ ID NO:15导致dL*值为4.5。
实施例9：确定SEQ ID NO:11的最适温度
为了确定最适温度，将100μL的酶溶液在100mM乙酸钠缓冲液pH 5中与100μL的1％羧甲基纤维素水溶液混合，并在10℃，20℃，30℃，40℃，50℃，60℃，70℃，80℃，90℃和99℃下孵育10分钟，振摇。通过在95℃下孵育反应混合物5分钟来终止反应。通过使用对羟基苯甲酰肼测定法测量释放的还原端来测定活性。
对于还原端测定，将0.5M HCl中的5％(w/v)对羟基苯甲酰肼储备溶液在0.5MNaOH中按1:3稀释，以得到对羟基苯甲酰肼工作溶液。将50μL样品与150μL工作溶液混合，并将反应液在95℃孵育5分钟。冷却至4℃后，测定410nm处的吸光度，并使用葡萄糖校准曲线计算释放的还原端。
结果显示(图5)，SEQ ID NO:11保证了在与清洁和洗涤应用有关的所有温度下的活性。即使在低温下，也保持高于20％的活性。
实施例10：确定SEQ ID NO:11的最适pH
为了确定最适pH，将酶储备溶液在分别调节至pH 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12的120mM Britton-Robinson通用缓冲液中稀释。将100μL的这些稀释液与100μL的1％羧甲基纤维素水溶液混合，并在70℃孵育10分钟，振荡。通过将反应混合物在95℃下孵育5分钟来终止反应。如实施例9所述通过使用对羟基苯甲酰肼测定法测量释放的还原端来测定活性。
结果显示(图6)，SEQ ID NO:11保证了在宽pH范围内的活性，并且在与洗涤和清洁应用相关的高/碱性pH值(高达pH 9)下仍显示出非常好的活性。
实施例11：确定SEQ ID NO:11的最适温度和pH，以及热稳定性
为了确定温度稳定性，将100μL酶溶液在100mM乙酸钠缓冲液pH 5中在10℃，20℃，30℃，40℃，50℃，60℃，70℃，80℃，90℃和99℃下孵育30分钟。将溶液冷却至4℃。随后，加入100μL的1％羧甲基纤维素水溶液，并将样品在50℃下温育10分钟。加入40μL 1M碳酸钠溶液终止反应。如实施例9所述，通过使用对羟基苯甲酰肼测定法测量释放的还原端来测定活性。
结果显示(图7)，SEQ ID NO:11保证了优异的温度稳定性，显示了在宽温度范围内的活性。
实施例12至17
使用的方法和材料：
Tergotometer洗涤研究
洗涤过程中使用的条件如下：
温度：20摄氏度或45摄氏度
酶浓度：0.625ppm
产品剂量：0.72gpl IKEA或RIN粉
污物剂量：0.04gpl炭黑
遮阳调色染料剂量：0.006％AV50
洗涤时间：1×20分钟洗涤
冲洗漂洗时间：1×10秒漂洗
使用的IKEA液体制剂为：
所用的RIN粉末制剂为：
使用的OMO制剂为：
多机洗研究
所使用的棉监视物通过用OMO粉洗涤20次进行预老化。1、3、5、10、15、20、25和30次洗涤的每个洗涤点使用3个重复。所使用的污物监视物包括3×E101监视物。用一系列制剂+/-Celluclean和AV50(调色染料)洗涤织物，以评估是否由于存在酶而导致再沉积有任何改善。用于研究的机器是Asian TLA 45L。在40℃、26FH(2:1的Ca:Mg)、45L洗涤液中进行洗涤，所用的压载物为1.5kg。
织物毛球去除评估
使用仪器毛球测量设备评估通过纤维素酶去除毛球。通过拍摄多个图像来分析用各种纤维素酶技术洗涤的织物，然后对随后的图像进行处理，以获得一定百分比的毛球覆盖面积。
爆裂强度分析
TruBurst-智能爆裂强度测试仪是计算机控制的气动测试设备。当标准拉伸强度方法不合适时，它用于在各种纺织品基材上进行爆裂强度测试，包括机织，针织和无纺织物。
除特殊情况(例如湿法测试)外，纺织品的物理和机械测试均在ISO 139标准规定的标准温度气氛和相对湿度下的条件性状态中进行。标准温度气氛为20℃和65％相对湿度。
将用不同的酶技术洗涤15次的黛棉丽蓝互锁棉织物切成两半以打开织物。然后使用以下概述的条件对每个样品进行12次测量：
温度：20℃
相对湿度：65％
重量：0
NTests：3/3
隔膜(diaphragm)：1.0mm
测试面积：50cm2(直径79.8mm)
充气速率：15kPa/s
校正速率：3kPa/s
爆裂检测：正常
夹钳压力：500kPa
目标压力：0kPa
目标距离：0.0mm
实施例12
该实施例显示纤维素酶SEQ ID NO:11在白度益处方面胜过
(图8)。纤维素酶SEQ ID NO:11与celluclean相比在白度方面提供了统计学显著的改善。所使用的测试方法是如先前所述的在45℃下进行的tergotometer洗涤研究，使用了RIN粉。
实施例13
该实施例还显示了纤维素酶SEQ ID NO:11在白度益处方面胜过
(图9)。该实施例在不同的洗涤温度(20和45摄氏度)下进行。纤维素酶SEQ ID NO:11与
相比在白度方面提供了统计学显著的改善。测试方法是如前所述使用IKEA液体制剂在20℃和45℃两者下进行的tergotometer洗涤研究。
在摄氏20度
在摄氏45度
实施例14
该实施例表明纤维素酶SEQ ID NO:11与调色染料(AV50)的组合在白度方面提供了协同作用，高于纤维素酶SEQ ID NO:11和调色染料单独提供的效果(图10)。白度值(dL*)表示为与不含调色染料或纤维素酶的对照制剂(IKEA液体)的差值。所使用的测试方法是如先前所述在20℃下进行的tergotometer洗涤研究。
值得注意的是，纤维素酶SEQ ID NO:11与调色染料(AV50)的组合与
与调色染料的组合相比提供协同益处(测量的相对于计算的)，其中测量值低于计算的白度值。
实施例15
该实施例表明，纤维素酶SEQ ID NO:11与
相比，增强的白度效果在许多(30)洗涤中持续存在。该效果在针织的老化棉上显示，基础制剂是可商购的OMO粉。在Δ460反射率值所示的值是根据未洗涤的织物标准化的，因此它们作为负值给出。较小的负值表示已洗涤的织物更接近原始未洗涤的值。图11以图形格式显示了下表中的一些选定结果(对于OMO，OMO+/>
和OMO+纤维素酶SEQ ID NO:11)。测试方法是如前所述的多机洗研究方法。
实施例16
该实施例如图12所示，显示纤维素酶SEQ ID NO:11在织物护理(特别是去起球)方面也优于
(参比)。用可商购的OMO粉末进行该实验。测量值是毛球覆盖的平均百分比面积。较低的数字更好，因为这意味着织物上的毛球更少。测试是如先前定义的织物毛球去除评估。
实施例17
重要的是，这种去起球伴随着爆裂强度数据(参见图13)中所见的拉伸强度的相对较小损失(见图13)，这是有利的，因为某些强力的“护理”酶有效地去除毛球，但削弱织物，从而降低服装的可穿着性寿命。该实施例表明，如通过纤维素酶SEQ ID NO:11相对于
参比所示的爆裂强度测量的，存在扩大的热阻。将织物洗涤15次，对照是可商购的OMO粉末。该方法使用了前面定义的爆裂强度分析方法。/>
在本发明中显示的序列：
SEQ ID NO:1，包含催化结构域基序[STA]-T-R-Y-[FYW]-D-x(5)-[CA]的序列
SEQ ID NO:2，对应于SEQ ID NO:1的核苷酸序列
SEQ ID NO:3，碳水化合物结合结构域
SEQ ID NO:4，对应于SEQ ID NO:3的核苷酸序列
SEQ ID NO:5，接头序列
SEQ ID NO:6，对应于SEQ ID NO:5的核苷酸序列
SEQ ID NO:7，接头序列
SEQ ID NO:8，对应于SEQ ID NO:7的核苷酸序列
SEQ ID NO:9，优选的催化结构域基序T-T-R-Y-W-D-C-C-K-P-S-C
SEQ ID NO:10，对应于SEQ ID NO:9的核苷酸序列
SEQ ID NO:11，根据本发明的优选的纤维素酶
SEQ ID NO:12，对应于SEQ ID NO:11的核苷酸序列
SEQ ID NO:13，根据本发明的优选的纤维素酶
SEQ ID NO:14，对应于SEQ ID NO:13的核苷酸序列
SEQ ID NO:15，根据本发明的优选的纤维素酶
SEQ ID NO:16，对应于SEQ ID NO:15的核苷酸序列
SEQ ID NO:17，根据本发明的优选的纤维素酶
SEQ ID NO:18，对应于SEQ ID NO:17的核苷酸序列
SEQ ID NO:19，优选的碳水化合物结合结构域标签
SEQ ID NO:20，对应于SEQ ID NO:19的核苷酸序列
SEQ ID NO:21至24是本发明中显示的其他序列
序列表
<210>SEQ.ID NO.1
<211>204
<212>PRT
<213>嗜热毁丝菌
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.1
<210>SEQ.ID NO.2
<211>612
<212>DNA
<213>嗜热毁丝菌
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.2
<210>SEQ.ID NO.3
<211>137
<212>PRT
<213>棒状链霉菌
<220>
<223>CBM
<400>SEQ.ID NO.3
<210>SEQ.ID NO.4
<211>411
<212>DNA
<213>棒状链霉菌
<220>
<223>CBM
<400>SEQ.ID NO.4
<210>SEQ.ID NO.5
<211>63
<212>PRT
<213>Teredinibacter turnerae
<220>
<223>接头
<400>SEQ.ID NO.5
<210>SEQ.ID NO.6
<211>189
<212>DNA
<213>Teredinibacter turnerae
<220>
<223>接头
<400>SEQ.ID NO.6
<210>SEQ.ID NO.7
<211>17
<212>PRT
<213>棒状链霉菌
<220>
<223>接头
<400>SEQ.ID NO.7
<210>SEQ.ID NO.8
<211>51
<212>DNA
<213>棒状链霉菌
<220>
<223>接头
<400>SEQ.ID NO.8
gactccgggg gacccggccc cggccccgga cccggcccgg gcggcacccc c 51
<210>SEQ.ID NO.9
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>催化结构域基序
<400>SEQ.ID NO.9
<210>SEQ.ID NO.10
<211>36
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>催化结构域基序
<400>SEQ.ID NO.10
acgacccggt actgggactg ctgcaagccg agctgc 36
<210>SEQ.ID NO.11
<211>223
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.11
<210>SEQ.ID NO.12
<211>669
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.12
<210>SEQ.ID NO.13
<211>404
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.13
<210>SEQ.ID NO.14
<211>1212
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.14
<210>SEQ.ID NO.15
<211>358
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.15
<210>SEQ.ID NO.16
<211>1074
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.16
<210>SEQ.ID NO.17
<211>365
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.17
<210>SEQ.ID NO.18
<211>1095
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>纤维素酶
<400>SEQ.ID NO.18
<210>SEQ.ID NO.19
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>碳水化合物结合结构域标签
<400>SEQ.ID NO.19
<210>SEQ.ID NO.20
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>碳水化合物结合结构域标签
<400>SEQ.ID NO.20
gttccagact ctggtggtcc aggtccaggt ccaggtccag gtcca 45
<210>SEQ.ID NO.21
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>序列基序不特异性于任何生物体
<220>
<221>变体
<222>(1)..(1)
<223>Xaa是选自丝氨酸、苏氨酸和丙氨酸的任何氨基酸
<220>
<221>变体
<222>(5)..(5)
<223>Xaa是选自苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的任何氨基酸
<220>
<221>变体
<222>(7)..(11)
<223>Xaa是任何氨基酸
<220>
<221>变体
<222>(12)..(12)
<223>Xaa是选自半胱氨酸和丙氨酸的任何氨基酸
<400>SEQ.ID NO.21
<210>SEQ.ID NO.22
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>序列基序不特异性于任何生物体
<220>
<221>变体
<222>(2)..(2)
<223>Xaa是选自脯氨酸、丝氨酸和半胱氨酸的任何氨基酸
<220>
<221>变体
<222>(3)..(3)
<223>Xaa是选自天冬氨酸盐、谷氨酰胺、谷氨酸盐和天冬酰胺的任何氨基酸
<400>SEQ.ID NO.22
<210>SEQ.ID NO.23
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>序列基序不特异性于任何生物体
<220>
<221>变体
<222>(5)..(5)
<223>Xaa是选自苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的任何氨基酸
<220>
<221>变体
<222>(7)..(11)
<223>Xaa是任何氨基酸
<220>
<221>变体
<222>(12)..(12)
<223>Xaa是选自半胱氨酸和丙氨酸的任何氨基酸
<400>SEQ.ID NO.23
<210>SEQ.ID NO.24
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>序列基序不特异性于任何生物体
<220>
<221>变体
<222>(7)..(11)
<223>Xaa是任何氨基酸
<400>SEQ.ID NO.24
Claims (23)
1.一种洗涤剂组合物，其包含：
(a)0.0001至1重量％的调色染料；和，
(b)0.0001至10重量％的纤维素酶，所述纤维素酶与SEQ ID NO:11的序列同一性为100％。
2.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中所述调色染料是蓝色或紫色调色染料。
3.根据权利要求1或2所述的洗涤剂组合物，其中所述调色染料是共价键合至聚合物的反应性染料。
4.根据权利要求3所述的洗涤剂组合物，其中所述调色染料包含下式的生色团：
其中----表示连接点。
5.根据权利要求1或2所述的洗涤剂组合物，其中所述染料是直接染料。
6.根据权利要求1或2所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物包含0.0005至0.01重量％的调色染料和0.001至5重量％的纤维素酶。
7.根据权利要求1或2所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物包含0.1至80重量％的表面活性剂。
8.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其包含0.0001至0.1重量％的调色染料。
9.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其包含0.0001至0.01重量％的调色染料。
10.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其包含0.0005至0.001重量％的调色染料。
11.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其包含0.0005至8重量％的纤维素酶。
12.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其包含0.001至5重量％的纤维素酶。
13.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其包含0.002至0.2重量％的纤维素酶。
14.根据权利要求3所述的洗涤剂组合物，其中所述聚合物是聚亚胺。
15.根据权利要求14所述的洗涤剂组合物，其中所述聚亚胺被2-羟基丙-1-基取代。
16.根据权利要求5所述的洗涤剂组合物，其中所述染料是吖嗪染料。
17.根据权利要求5所述的洗涤剂组合物，其中所述染料具有以下结构：
18.根据权利要求7所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物包含1至70重量％的表面活性剂。
19.根据权利要求7所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物包含2至60重量％的表面活性剂。
20.根据权利要求7所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物包含4至40重量％的表面活性剂。
21.根据权利要求7所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物包含阴离子表面活性剂。
22.根据权利要求21所述的洗涤剂组合物，其中所述阴离子表面活性剂选自：直链烷基苯磺酸盐；烷基硫酸盐；烷基醚硫酸盐；及其混合物。
23.一种洗涤白色织物的方法，所述方法包括使所述织物与包含根据权利要求1至22中任一项所述的洗涤剂组合物的水溶液接触，任选地，其中使所述织物与所述水溶液接触的步骤在30℃或更低温度下进行。
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