CN110412156A - 一种测定土壤中多氯联苯的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于土壤污染物的检测领域，具体涉及一种基于适配体杂交链式反应的固相微萃取材料用于测定土壤中多氯联苯的方法。该检测方法，包括：(1)高选择性固相微萃取涂层材料的制备；(2)利用顶空固相微萃取技术获取样品中的多氯联苯；(3)采用气相色谱‑质谱联用仪获取数据，并对照已绘制的标准曲线，求得土壤中特定多氯联苯的含量。该方法建立的土壤中的特定多氯联苯的定量分析方法简便，步骤简洁，不仅提高了选择性，而且绿色安全。且该方法制备的高选择性涂层只需改变相应核酸适配体的核苷酸序列，便可用于其他有机污染物的检测，该方法在其它污染物的残留分析中以及食品检测中具有较大的应用潜力。
Description
技术领域
本发明属于土壤污染物的检测领域，具体涉及一种基于适配体杂交链式反应的固相微萃取材料用于测定土壤中多氯联苯的方法。
背景技术
多氯联苯(Polchlorinated biphenyls，以下简称PCBs)，是工业合成的一类联苯的氯取代物，根据氯原子的数量和位置不同，总共有209种不同的单体。其化学性能稳定，在环境中降解缓慢，同时也被列为环境持久性污染物(Persistent Organic Pollutants，简称POPs)之一。它具有高毒性、环境持久性、生物累积性、长距离迁移能力等特点。通过生物链的累积富集作用可影响神经系统、内分泌系统，能够导致生物体内分泌紊乱、生殖及免疫机能失调、神经行为和发育紊乱以及癌症等严重疾病，对人类健康和环境具有严重危害。其结构如下：
虽然早在1972年人们已经意识到PCBs的危害，并已经在全球范围内停止PCBs的生产和使用，但由于其降解缓慢并通过各种途径残留在了环境中依然威胁着人类的健康。
目前，PCBs已成为全球性的污染物，各国相继制定了相关的环境法规和标准来严格监控环境中的 PCBs。我国也早在1989年就将PCBs列入了环境检测的黑名单中。随后对其的监控力度不断扩大，出台了一系列的控制标准。国标GB 15618-2008土壤环境质量标准，规定了土壤中多氯联苯的限量指标， PCB72和PCB106的总和限量为0.015mg/kg。
但是，目前在土壤、底泥和生物组织中检测到的PCBs含量依然不容乐观。对其的监测依然是未来环境检测的重中之重。
固相微萃取技术自上个世纪九十年代问世以来，因为其集萃取、浓缩和净化于一体的优点，被广泛的应用于复杂基质样品中雌激素的监测。固相微萃取技术的关键在于纤维涂层，而商品化的固相微萃取涂层在萃取选择性、制备效率、萃取效率等方面的具有一些缺陷。
目前，商品化的SPME涂层由Sepulco公司研制生产可选择的种类有限，主要包括聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚二烯酸酯(PA)、二乙烯基苯(DVB)、碳分子筛(CAR)以及上述不同涂层之间的相互组合 (PDMS/DVB、DVB/CAR/PDMS、PDMS/CAR等)。这些商品化涂层中PDMS和PA是均相聚合物涂层，以吸收机理萃取分析物；其它涂层为多孔聚合物涂层，主要以吸附机理萃取分析物。中国发明专利 (CN 107576748A)为我们课题组的前期成果，使用商用萃取头建立泥土中七种多氯联苯的定量分析方法，具有较好的现实意义。后期研究发现商用萃取头都是广谱性的，对某种或某类特定多氯联苯不具有高选择性和高特异性，导致无法准确检测特定多氯联苯，且检测灵敏度低。例如，普通的商用萃取头就很难准确检测PCB72、PCB106多氯联苯。
因此有必要建立更为有效和的对某种或某类特定的分析物具有高选择性的前处理涂层，而有效的前处理手段是准确检测的有效保证。
发明内容
为克服上述技术缺陷，本发明人等经过深入研究，结合寡核苷酸适配体(又称适配体)与靶物质的特异性亲和力特点，提供一种利用核酸适配体设计成发夹型探针，结合核酸杂交链式反应信号放大策略进行适配体扩增，从而特异性捕获目标物；即设计了一种基于适配体杂交链式反应的高选择性固相微萃取涂层材料，利用顶空固相微萃取技术，采用气相色谱-质谱联用仪，以实现对土壤中特定多氯联苯的快速测定。
即，一种测定土壤中多氯联苯的方法，包含如下步骤：
(1)AuNMPs@HCR的制备；
(2)标准样品处理：将10-300μL的混标多氯联苯和5-15mL蒸馏水置于顶空瓶中，调pH值至6-8，混匀样品；
(3)顶空固相微萃取：将步骤(1)制备得到的AuNMPs@HCR吸附在一个磁子上得到A磁子，将A 磁子用细铁丝固定在顶空瓶的瓶盖上并密封进行萃取，萃取温度为0-60℃，萃取时间为10-120min；
(4)目标物洗脱：将上述吸附多氯联苯的A磁子取下，置于烧瓶中，加入乙醇并在磁力搅拌下洗脱得到洗脱液，搅拌速率为200-600rmp，洗脱时间为1-60min，乙醇用量为1-5mL；
(5)气相色谱-质谱联用：用进样针取上述洗脱液1μL，打入气相色谱-质谱联用仪进样口，启动数据采集仪器采集数据；
(6)数据处理：改变所述标准样品处理中的所述混标多氯联苯的加入量，重复上述(2)、(3)、(4)和 (5)步骤5次，得到6组上述(5)中的多氯联苯的数据，绘制标准曲线；
(7)真实样品处理和测定：将待测泥土样品1-20.0g置于顶空瓶中，加入5-15mL蒸馏水，调pH值至 6-8，混匀样品；重复上述步骤(3)、(4)和(5)得到数据，并代入已绘制的标准曲线，计算得到泥土样品的多氯联苯浓度；
所述步骤(1)包含步骤(1-1)、(1-2)、(1-3)和(1-4)，
(1-1)Fe3O4纳米粒子的制备，
(1-2)金纳米粒子的制备，
(1-3)金纳米粒子修饰Fe3O4纳米粒子得到AuNMPs，
(1-4)AuNMPs@HCR的制备：将AuNMPs置于10-100μL浓度为10-20μM巯基化的引物链溶液中，4℃条件下放置24小时，随后磁性分离产物并用PBS缓冲溶液冲洗数次，再加入到H1-Apt和H2- Apt的混合溶液中，该混合溶液的体积和浓度分别为100μL、10μM，并在20-30℃下放置2h，最后，磁性分离后并用PBS缓冲溶液洗涤数次得产物AuNMPs@HCR，
其中，所述引物链的浓度为1-10μM，引物链序列组成为：SH-(CH2)6-AGA GTG ATG GAGATT CAG CTT AGC；
H1-Apt序列组成为：
H2-Apt序列组成为：
上述步骤(1-1)、(1-2)、(1-3)和(1-4)的具体步骤并无特别限定，可以如下：
(1-1)Fe3O4纳米粒子的制备：将FeCl3·6H2O和无水醋酸钠加入到乙醇中超声溶解，得到的黄色溶液，转移到反应釜中，密封，180-220℃下反应5-16小时。反应完后冷却至室温并磁性分离，所得的黑色固体用去离子水和乙醇反复超声洗涤两次，并真空干燥后储存待用。
(1-2)金纳米粒子的制备：将50-200mL质量浓度为0.01％的HAuCl4溶液加入到圆底烧瓶中，放在磁力搅拌器上加热并搅拌，煮沸后，迅速加入1-5mL质量浓度为1％的柠檬酸钠溶液，并剧烈搅拌，溶液变到橙红色，待溶液颜色不再发生变化后，继续加热10min后停止，冷却至室温，所得产物溶液 (AuNPs溶液)置于3-8℃保存待用。
(1-3)金纳米粒子修饰Fe3O4纳米粒子得到AuNMPs的制备：将5-20mg的Fe3O4纳米粒子置于离心管中，并加入200-400ml的上述AuNPs溶液，充分摇晃后磁性分离，得到Fe3O4@AuNPs (AuNMPs)。
(1-4)AuNMPs@HCR的制备：将AuNMPs置于10-100μL浓度为10-20μM巯基化的引物链溶液中，4℃条件下放置24小时，随后磁性分离产物并用PBS缓冲溶液冲洗数次，再加入到H1-Apt和H2-Apt的混合溶液中，该混合溶液的体积和浓度分别为100μL、10μM，并在20-30℃下放置2h，最后，磁性分离后并用PBS缓冲溶液洗涤数次得产物AuNMPs@HCR。
优选的，本发明所使用的乙醇均为色谱纯。
优选的，所述步骤中，气相色谱-质谱的条件为：
色谱柱：Rxi-5ms，30m×0.25mm×0.25μm；
进样口温度：240℃；
程序升温条件：初始温度为110℃，保持2min；以20℃/min的速度升温至230℃，保持2min；再以5℃/min的速度升温至250℃，保持2min；再以20℃/min的速度升温至280℃，保持2min；
电离模式：EI；
选择离子：PCB72：m/z292、290、362；PCB106：m/z324、326、328。
本发明结合适配体和核酸信号放大策略，提供一种基于适配体杂交链式反应的高选择性固相微萃取涂层材料，大大的提高涂层材料对分析物的选择性；并结合顶空固相微萃取技术，在前处理过程中简化了使用步骤，并结合核酸信号放大策略，提高了涂层材料的吸附容量。而且本方法无需添加有机溶剂，溶剂可采用蒸馏水，绿色、安全、无毒、无害、无污染。因此，本方法建立的土壤中的特定多氯联苯(例如，PCB72和PCB106)的定量分析方法简便，步骤简洁，不仅提高了选择性，而且绿色安全。且该方法制备的高选择性涂层只需改变相应核酸适配体的核苷酸序列，便可用于其他有机污染物的检测，该方法在其它污染物的残留分析中以及食品检测中具有较大的应用潜力。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步描述说明，但本发明并不限于所述实施例。
本例展示实际测定土壤中PCB72和PCB106的方法。
(1)AuNMPs@HCR的制备，
(1-1)Fe3O4纳米粒子的制备：1.35g的FeCl3·6H2O，3.6g的无水醋酸钠加入到40mL的乙醇中超声溶解，得到的黄色溶液，转移到反应釜中，密封，200℃下反应8小时。反应完后冷却至室温并磁性分离，所得的黑色固体用去离子水和乙醇反复超声洗涤两次，并真空69℃条件下干燥后储存待用。
(1-2)金纳米粒子的制备：HAuCl4(100mL，0.01％)加入到圆底烧瓶中(先用王水把圆底烧瓶和磁石浸泡1小时，并用乙醇反复超声洗涤)，放在磁力搅拌器上加热并搅拌(用保鲜膜把圆底烧瓶封住)，煮沸后，迅速加入柠檬酸钠溶液(2.5mL，1％)，并剧烈搅拌，溶液变到橙红色，待溶液颜色不再发生变化后，继续加热10min后停止，冷却至室温，所得产物溶液(AuNPs溶液)置于冰箱4℃保存待用。
(1-3)金纳米粒子修饰Fe3O4纳米粒子得到AuNMPs的制备：取10mg Fe3O4于离心管中，并加入300mL AuNPs溶液，充分摇晃后磁性分离，得Fe3O4@AuNPs(AuNMPs)。
(1-4)AuNMPs@HCR的制备：将AuNMPs置于50μL浓度为10μM巯基化的引物链溶液中， 4℃条件下放置24小时，随后磁性分离产物并用PBS缓冲溶液冲洗数次，再加入到H1-Apt和H2-Apt的混合溶液中，该混合溶液的体积和浓度分别为100μL、10μM，并在25℃下放置2h，最后，磁性分离后并用PBS缓冲溶液洗涤数次得产物AuNMPs@HCR。
(2)标准样品处理：将10μL浓度为10μg/L的PCB72/PCB106的混标多氯联苯和15mL蒸馏水置于顶空瓶中，调pH值至7，混匀样品；
(3)顶空固相微萃取：将步骤1制备得到的10mg AuNMPs@HCR吸附在一个磁子上得到A磁子，将A 磁子用细铁丝固定在顶空瓶的瓶盖上并密封进行萃取，萃取温度为50℃，萃取时间为40min；
(4)目标物洗脱：将上述吸附多氯联苯的A磁子取下，置于烧瓶中，加入乙醇并在磁力搅拌下洗脱得到洗脱液，搅拌速率为600rmp，洗脱时间为20min，乙醇用量为1mL；
(5)气相色谱-质谱联用：用进样针取上述洗脱液1μL，打入气相色谱-质谱联用仪进样口，启动数据采集仪器采集数据；
(6)数据处理：改变所述标准样品处理中的混标多氯联苯的加入量，重复上述(2)、(3)、(4)和(5)步骤5次(重复第二、三、四、五、六次时在步骤(2)中分别加入50、100、150、200、300μL的混标多氯联苯)，得到6组上述(5)中的多氯联苯的数据，根据以上数据，以浓度为横坐标，多氯联苯的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如表1所示：
表1
(7)真实样品处理和测定：从甬江河边取泥土样品，将10g样品置于顶空瓶中，加入15mL蒸馏水，调 pH值至7，混匀样品；重复上述步骤(3)、(4)和(5)得到数据，并代入已绘制的标准曲线，计算得到泥土样品的多氯联苯浓度；并对其进行加标回收实验，结果如表2所示，证明该方法有很好的回收率。
表2
。
Claims (3)
1.一种测定土壤中多氯联苯的方法，包含如下步骤：
(1)AuNMPs@HCR的制备；
(2)标准样品处理：将10-300μL的混标多氯联苯和5-15mL蒸馏水置于顶空瓶中，调pH值至6-8，混匀样品；
(3)顶空固相微萃取：将步骤(1)制备得到的AuNMPs@HCR吸附在一个磁子上得到A磁子，将A磁子用细铁丝固定在顶空瓶的瓶盖上并密封进行萃取，萃取温度为0-60℃，萃取时间为10-120min；
(4)目标物洗脱：将上述吸附多氯联苯的A磁子取下，置于烧瓶中，加入乙醇并在磁力搅拌下洗脱得到洗脱液，搅拌速率为200-600rmp，洗脱时间为1-60min，乙醇用量为1-5mL；
(5)气相色谱-质谱联用：用进样针取上述洗脱液1μL，打入气相色谱-质谱联用仪进样口，启动数据采集仪器采集数据；
(6)数据处理：改变所述标准样品处理中的所述混标多氯联苯的加入量，重复上述(2)、(3)、(4)和(5)步骤5次，得到6组上述(5)中的多氯联苯的数据，绘制标准曲线；
(7)真实样品处理和测定：将待测泥土样品1-20.0g置于顶空瓶中，加入5-15mL蒸馏水，调pH值至6-8，混匀样品；重复上述步骤(3)、(4)和(5)得到数据，并代入已绘制的标准曲线，计算得到泥土样品的多氯联苯浓度；
所述步骤(1)包含步骤(1-1)、(1-2)、(1-3)和(1-4)，
(1-1)Fe3O4纳米粒子的制备，
(1-2)金纳米粒子的制备，
(1-3)金纳米粒子修饰Fe3O4纳米粒子得到AuNMPs，
(1-4)AuNMPs@HCR的制备：将AuNMPs置于10-100μL浓度为10-20μM巯基化的引物链溶液中，4℃条件下放置24小时，随后磁性分离产物并用PBS缓冲溶液冲洗数次，再加入到H1-Apt和H2-Apt的混合溶液中，该混合溶液的体积和浓度分别为100μL、10μM，并在20-30℃下放置2h，最后，磁性分离后并用PBS缓冲溶液洗涤数次得产物AuNMPs@HCR，
其中，所述引物链的浓度为1-10μM，引物链序列组成为：SH-(CH2)6-AGA GTG ATG GAGATT CAG CTT AGC；
H1-Apt序列组成为：
H2-Apt序列组成为：
2.权力要求1所述的测定土壤中多氯联苯的方法，所述步骤(1-1)、(1-2)和(1-3)如下，
(1-1)Fe3O4纳米粒子的制备：将FeCl3·6H2O和无水醋酸钠加入到乙醇中超声溶解，得到的黄色溶液，转移到反应釜中，密封，180-220℃下反应5-16小时，反应完后冷却至室温并磁性分离，所得的黑色固体用去离子水和乙醇反复超声洗涤两次，并真空干燥后储存待用；
(1-2)金纳米粒子的制备：将50-200mL质量浓度为0.01％的HAuCl4溶液加入到圆底烧瓶中，放在磁力搅拌器上加热并搅拌，煮沸后，迅速加入1-5mL质量浓度为1％的柠檬酸钠溶液，并剧烈搅拌，溶液变到橙红色，待溶液颜色不再发生变化后，继续加热10min后停止，冷却至室温，所得产物溶液(AuNPs溶液)置于3-8℃保存待用；
(1-3)金纳米粒子修饰Fe3O4纳米粒子得到AuNMPs的制备：将5-20mg的Fe3O4纳米粒子置于离心管中，并加入200-400ml的上述AuNPs溶液，充分摇晃后磁性分离，得到Fe3O4@AuNPs(AuNMPs)。
3.权力要求1所述的测定土壤中多氯联苯的方法，所述步骤(5)中的气相色谱-质谱的条件为：
色谱柱：Rxi-5ms，30m×0.25mm×0.25μm；
进样口温度：240℃；
程序升温条件：初始温度为110℃，保持2min；以20℃/min的速度升温至230℃，保持2min；再以5℃/min的速度升温至250℃，保持2min；再以20℃/min的速度升温至280℃，保持2min；
电离模式：EI；
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112359094A (zh) * | 2020-07-27 | 2021-02-12 | 江苏科技大学 | DNA/Fe3O4网状结构结合磁性三相萃取法的核酸检测方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110171749A1 (en) * | 2009-03-02 | 2011-07-14 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Nanoparticle tracer-based electrochemical dna sensor for detection of pathogens-amplification by a universal nano-tracer (aunt) |
| CN105044236A (zh) * | 2015-07-06 | 2015-11-11 | 浙江省海洋水产研究所 | 一种土壤和沉积物中多氯联苯的分散固相萃取气相色谱检测方法 |
| CN107576748A (zh) * | 2016-09-29 | 2018-01-12 | 宁波大学 | 一种应用超声辅助‑顶空‑固相微萃取技术测定土壤中七种多氯联苯的方法 |
| CN108760715A (zh) * | 2018-05-07 | 2018-11-06 | 同济大学 | 检测多氯联苯表面增强拉曼散射核酸适配体传感器及应用 |
| CN109580731A (zh) * | 2019-01-15 | 2019-04-05 | 安徽师范大学 | Dna微囊及金电极-dna树枝状大分子传感器的制备方法以及在检测多氯联苯中的应用 |
| CN109781871A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-05-21 | 北京农业质量标准与检测技术研究中心 | 黄曲霉毒素b1和b2磁固相萃取材料及制备方法与应用 |
-
2019
- 2019-06-28 CN CN201910613963.1A patent/CN110412156B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110171749A1 (en) * | 2009-03-02 | 2011-07-14 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Nanoparticle tracer-based electrochemical dna sensor for detection of pathogens-amplification by a universal nano-tracer (aunt) |
| CN105044236A (zh) * | 2015-07-06 | 2015-11-11 | 浙江省海洋水产研究所 | 一种土壤和沉积物中多氯联苯的分散固相萃取气相色谱检测方法 |
| CN107576748A (zh) * | 2016-09-29 | 2018-01-12 | 宁波大学 | 一种应用超声辅助‑顶空‑固相微萃取技术测定土壤中七种多氯联苯的方法 |
| CN108760715A (zh) * | 2018-05-07 | 2018-11-06 | 同济大学 | 检测多氯联苯表面增强拉曼散射核酸适配体传感器及应用 |
| CN109781871A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-05-21 | 北京农业质量标准与检测技术研究中心 | 黄曲霉毒素b1和b2磁固相萃取材料及制备方法与应用 |
| CN109580731A (zh) * | 2019-01-15 | 2019-04-05 | 安徽师范大学 | Dna微囊及金电极-dna树枝状大分子传感器的制备方法以及在检测多氯联苯中的应用 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| LI NINGXING 等: "Highly sensitive chemiluminescence biosensor for protein detection based on the functionalized magnetic microparticles and the hybridization chain reaction", 《BIOSENSORS & BIOELECTRONICS 》 * |
| LINA WANG 等: "A colorimetric assay for Hg(II) based on the use of a magnetic aptamer and a hybridization chain reaction", 《MICROCHIMICA ACTA》 * |
| MENG CHEN 等: "Electrochemical simultaneous assay of chloramphenicol and PCB72 using magnetic and aptamer-modified quantum dot-encoded dendritic nanotracers for signal amplification", 《MICROCHIMICA ACTA》 * |
| SAICHAI LIN 等: "Selective dispersive solid phase extraction-chromatography tandem mass spectrometry based on aptamer-functionalized UiO-66-NH2 for determination of polychlorinated biphenyls", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 * |
| 周迎卓 等: "基于适配体的功能化纳米探针在食品安全检测中的应用进展", 《食品工业科技》 * |
| 朱超 等: "核酸适配体技术在霉菌毒素检测中的应用", 《中国食品学报》 * |
| 王薇薇 等: "核酸适配体在固相萃取技术中的研究进展", 《色谱》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112359094A (zh) * | 2020-07-27 | 2021-02-12 | 江苏科技大学 | DNA/Fe3O4网状结构结合磁性三相萃取法的核酸检测方法 |
| CN112359094B (zh) * | 2020-07-27 | 2024-05-10 | 江苏科技大学 | DNA/Fe3O4网状结构结合磁性三相萃取法的核酸检测方法 |
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