CN110404117A - 一种功能化引导肌组织修复膜及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种功能化引导肌组织修复膜及其制备方法和应用，该修复膜以聚己内酯和胶原蛋白为基体材料，通过静电纺丝制备而成的纤维直径为1‑10μm且膜厚为50‑500μm的无规则排列的微米级纤维膜，还可以包括负载在所述修复膜上具有凝血功能的蛋白质的水凝胶以及结合在所述水凝胶上的促进细胞生长的蛋白质。本发明所提供的功能化引导肌组织修复膜具有优异的生物相容性、机械性能和能有效的促进肌组织的再生修复，且其制备方法科学简单，工艺流程可控，在制备促进肌组织再生修复的药物中应用广泛。

Description

一种功能化引导肌组织修复膜及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物材料领域，具体涉及一种功能化引导肌组织修复膜及其制备方法和应用。

背景技术

骨骼肌的损伤是科学界目前面临的一个重大课题，虽然可以采取保护性设施以降低受伤的风险，然而，这些设施的安全性往往受到质疑。一旦伤及关节及膝盖部位的骨骼肌，需要采用伤者自身的骨骼肌移植的方式进行修复，且术后恢复时间很长，此外，这种“挖肉补疮”的方式往往会带来二次伤害。医护人员也试图使用人工材料代替组织，但这些人工材料植入人体后因与机体排斥而无法正常与自身的肌肉组织融为一体。如何克服机体移植存在的免疫排斥反应，彻底解决人工取代物存在的生物相容性问题，从根本上解决组织和器官的损伤修复和功能重建问题，已成为生命科学领域的国际前沿性课题。

目前，骨骼肌组织主要有以下几种方法治疗：推拿疗法、生长因子疗法、干细胞移植疗法、基因工程、组织工程等。

尽管生长因子疗法在提高受损肌肉愈合的质量和速度上大大得到改观，但由于局部注射生长因子时，不能在注射部位维持较长时间的有效浓度，大大使生长因子的效果降低；另一方面，单独一种生长因子不太可能产生明显的效果，这就要求必须存在相互作用和适当的浓度的各种生长因子，才能缩短肌肉的愈合时间。因此，没有免疫排斥反应的基因的转导，可以在很长的时间里产生高浓度的生长因子，使肌肉修复效果更好，这称之为生长激素基因疗法。有人考虑到长时间、高浓度的生长因子可能会导致肌肉肥大等表现，但最近的报告表明，转基因的表达只有几个月，如转基因动物过早老化，可能与身体自我防御有关，其具体机制尚不清楚。尽管使用基因疗法和外源性生长因子可促进损伤肌肉的愈合，但是有可能产生免疫反应降低治疗效果。

组织工程是治疗肌肉损伤的一种很新颖很前沿的治疗手段，它利用体外培养组织多功能干细胞去修复受损或病态的组织，它有三个部分组成，分别是：反应细胞、组织修复所需的组织原有构架和生长刺激剂。

支架材料在组织工程中具有重要地位，它不仅为细胞的生长提供支撑，而且还能起到模板作用，引导组织的再生和控制组织结构。组织工程支架按照其塑性特点可以分为预塑性硬支架和可注射的水凝胶支架。预塑性硬支架的主要合成材料包括天然高分子与合成高分子。与天然高分子不同，合成高分子分子仪器理化特性可控可调、质量稳定性优良、价格便宜，在生物医学领域获得很好的应用。目前，在生物医药领域的应用中占绝对优势的是生物可降解聚酯，如PLGA、PLA、PCL和PGA，这些都是FDA批准认证的，特别是聚己内酯是一种比PGA和PLGA相对容易得到和价廉的生物可降解高分子材料，也是一种弹性材料，其力学性能优良，广泛应用于骨组织工程领域。由于其存在5个亚甲基相连的短碳链使其有很强的疏水性，为了增强亲水性需要对其表面进行处理。水凝胶作为组织工程的支架具有以下优势：(1)水凝胶的三维网状结构中充满了大量的水分，有助于保护细胞，并有利于营养物和分泌产物的运输；(2)水凝胶支架与软组织器官有着相似的机械性能，并且具有低的界面张力有利于细胞通过器官和植入体界面；(3)与预塑性硬支架相比，水凝胶可以通过注射方式植入体内，因此很容易充满缺损部位，手术创伤小。由于发生胶凝的条件温和，水凝胶是递送细胞生长因子适宜的载体。但是水凝胶材料力学强度差，所以只能用于软组织、神经组织以及皮肤等组织的修复。

利用静电纺丝制得的纤维，目前在生物医学领域，包括组织工程支架、表面敷料、药物缓释、医用绷带、呼吸面罩等方面已被广泛应用。电纺丝技术是一种制备纳米及微米纤维的简单通用方法，在静电纺丝或纺丝后处理过程中不同的药物及生物大分子很容易加载到纤维表面。递送生长因子的水凝胶在涂到纤维表面后，生长因子不会发生性能变化，仍能保持其促进肌肉修复的性能，同时植入干细胞，在电纺丝纤维膜力学性能优良的基础上，水凝胶亲水性强，有利于保护细胞，可以用来修复手术等肌肉的创伤。因此，负载水凝胶的电纺丝制备的纳米微米纤维功能膜具有良好的临床应用前景。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种功能化引导肌组织修复膜及其制备方法和应用。

根据本发明一方面提供了一种功能化引导肌组织修复膜，以聚己内酯和胶原蛋白为基体材料，通过静电纺丝制备成的纤维膜结构。

在上述技术方案中，所述修复膜还包括负载在所述修复膜上具有凝血功能的蛋白质的水凝胶以及结合在所述水凝胶上的促进细胞生长的蛋白质；优选地，所述具有凝血功能的蛋白质为纤维蛋白原、丝氨酸蛋白酶、凝血酶原、血纤维稳定因子、组织因子和钙因子中的一种或多种，所述促进细胞生长的蛋白质为碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子家族、结缔组织生长因子、肝素、转化生长因子、血小板源相关的生长因子中的一种或多种。

其中，纤维蛋白原由肝脏合成，具有凝血功能，是在凝血过程中，凝血酶切除血纤蛋白原中的血纤肽A和B而生成的单体蛋白质；丝氨酸蛋白酶是一个蛋白酶家族，它们的作用是断裂大分子蛋白质中的肽键，使之成为小分子蛋白质，在哺乳类动物里面，丝氨酸蛋白酶扮演着很重要的角色，特别是在消化，凝血和补体系统方面；凝血酶原是一种蛋白水解酶，在凝血机制中起着中心的作用，在激活的因子Ⅴ和由血小板或其他细胞提供的磷脂表面存在的条件下，被激活的因子Ⅹ激活形成凝血酶；组织因子是氨基酸残基组成的跨膜单链糖蛋白，通过与因子Ⅶ/Ⅶa结合而启动血液凝固级联反应。

其中，碱性成纤维细胞生长因子广泛分布在骨骼肌细胞，可以调节骨骼肌卫星细胞的增殖分化活性，促进其增殖效果；胰岛素样生长因子家族(IGF)，包括胰岛素样生长因子II和胰岛素样生长因子I两种，在骨骼肌卫星细胞的损伤后，IGF发挥明显的促进再生作用；肝素是一个重要的细胞因子，能促进卫星细胞增殖，还可以激活休眠的卫星细胞；转化生长因子(TGF)家族主要包括TGF-α和TGF-β，TGF-β又分为TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，它对外基质的沉积促进具有促进作用；血小板源相关的生长因子在维持组织生长和功能活性方面有重要作用。综上，上述促进细胞生长的蛋白质通过细胞间信号的相互传递，在骨骼肌损伤的修复过程中扮演重要的角色。

进一步地，在上述技术方案中，所述修复膜为无规则排列的微米级纤维膜结构，其平均搭桥孔径为0.1-20μm。

优选地，在上述技术方案中，所述纤维直径为1-10μm。

优选地，在上述技术方案中，所述修复膜的厚度为50-500μm。

根据本发明另一方面提供了上述修复膜的制备方法，包括以下步骤：将所述聚己内酯和所述胶原蛋白溶于第一有机溶剂中，制得第一溶液，然后进行静电纺丝，制得电纺丝纤维膜，干燥即得。

在上述技术方案中，所述修复膜的制备方法，还包括，将所述具有凝血功能的蛋白质的水凝胶与所述促进细胞生长的蛋白质混合，溶于第二有机溶剂中，加入光引发剂，在黑暗条件下搅拌，制得第一凝胶，将第一凝胶加到干燥的电纺丝纤维膜上，紫外光照射即得。

进一步地，在上述技术方案中，所述第一有机溶剂为氯仿与乙醇的混合物、六氟异丙醇和氯仿中的一种，优选为六氟异丙醇。

优选地，在上述技术方案中，所述第一溶液中聚己内酯和胶原蛋白的质量分数之和为5-25％。

其中，所述第一溶液中聚己内酯和胶原蛋白的质量分数之和是5％、8％、10％、12％、15％、18％、20％和25％中的任意一种；聚己内酯与胶原蛋白浓度的高低直接影响纤维的直径和纺丝过程的各项参数。

优选地，在上述技术方案中，所述第一溶液中聚己内酯和胶原蛋白的质量比为(1-9):1。

其中，所述第一溶液中聚己内酯和胶原蛋白的质量比是5：5、6：4、7：3、8：2和9：1中的任意一种；加入胶原蛋白可以为皮肤提供营养成分，增加纺丝膜的亲水性，然而，胶原蛋白浓度过高会导致膜极易溶解，成膜性变差，影响其支架功能。

再进一步地，在上述技术方案中，所述静电纺丝包括以下步骤：

S1、将所述第一溶液置于注射器中，利用推进器进行推动，待液滴稳定流下后调高电压；

S2、以不锈钢滚轴为接收装置，持续纺丝得到完整电纺丝纤维膜。

优选地，在上述技术方案中，步骤S1中，所述推进器的推进速度为0.1-15mL/h。

其中，所述推进器的推进速度是0.1mL/h、0.5mL/h、1mL/h、2mL/h、5mL/h、8mL/h、10mL/h、12mL/h和15mL/h中的任意一种；研究发现，速度过快会导致纺丝溶液滴出或纤维直径过大，速度过慢则会延长纺丝时间。

优选地，在上述技术方案中，步骤S1中，所述纺丝电压为7-30kV。

其中，所述纺丝电压是7kV、8kV、10kV、12kV、15kV、18kV、20kV、22kV、25kV、28kV和30kV中的任意一种；将电压限制在此范围内是为了保证连续的纤维的顺利形成，电压过低纺丝溶液无法形成纤维，电压过高则使纺丝过程不稳定，导致纺丝不连续。

优选地，在上述技术方案中，步骤S1中，所述注射器的针头型号为18-25G。

其中，所述注射器的针头型号是18G、19G、20G、22G、24G或25G；研究发现，针头型号直接影响纤维直径，针头型号较小时纤维直径较小。

优选地，在上述技术方案中，步骤S2中，所述不锈钢滚轴的接收距离为8-20cm，具体可以是8cm、10cm、12cm、15cm、18cm或20cm。

优选地，在上述技术方案中，步骤S2中，所述不锈钢滚轴的转动速度为100-2000rpm，具体可以是100rpm、200rpm、400rpm、500rpm、800rpm、1000rpm、1200rpm、1500rpm或2000rpm。

优选地，在上述技术方案中，步骤S2中，所述纺丝时间为2-20h，具体可以是2h、4h、8h、10h、15h、18h或20h。

进一步地，在上述技术方案中，所述第二有机溶剂为乙醇或乙醇水溶液，优选为乙醇水溶液。

具体地，所述乙醇水溶液中乙醇与水的体积比为(1-9):1，可以是5：5、6：4、7：3、8：2、9：1和10：0中的任意一种。

优选地，在上述技术方案中，所述具有凝血功能的蛋白质的水凝胶的浓度为5-20w/v％，具体可以是5w/v％、8w/v％、10w/v％、12w/v％或15w/v％，优选为10-15w/v％。

优选地，在上述技术方案中，所述促进细胞生长的蛋白质的浓度为10-100ng/ml。

具体地，所述促进细胞生长的蛋白质的浓度可以是10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml，40ng/ml、50ng/ml、80ng/ml、90ng/ml和100ng/ml中的任意一种，优选为30-50ng/ml；所述促进细胞生长的蛋白质的浓度与凝胶上铺覆的干细胞的生长状态直接相关。

优选地，在上述技术方案中，所述光引发剂为Irgacure 2959或Irgacure 1173，优选为Irgacure 2959。

其中，Irgacure 2959是一种高效不黄变的紫外光引发剂，用于引发不饱和预聚体系的UV聚合反应，特别适用于要求低气味、水性的丙烯酸酯和不饱和聚酯类树脂，Irgacure2959分子中的活性羟基可以使它很容易与不饱和树脂发生反应。

优选地，在上述技术方案中，所述光引发剂的浓度为0.01-0.2w/v％。

具体地，所述光引发剂的浓度可以是0.01w/v％、0.05w/v％、0.08w/v％、0.1w/v％、0.12w/v％、0.15w/v％、0.18w/v％和0.2w/v％中的任意一种，优选为0.05-0.1w/v％；光引发剂的浓度太低会导致凝胶反应反应不完全。

优选地，在上述技术方案中，所述紫外光的波长为250-400nm，优选为315-400nm。

优选地，在上述技术方案中，所述紫外光的功率为2-8W/cm²，具体可以为2W/cm²、4W/cm²、5W/cm²、6W/cm²、7W/cm²或8W/cm²，优选为4-5W/cm²。

优选地，在上述技术方案中，所述紫外光的照射时间为3-15min，具体可以为3min、5min、8min、10min、12min或15min，优选为4-5min。

再进一步地，在上述技术方案中，所述修复膜的制备方法包括以下步骤：

P1、将聚己内酯与胶原蛋白溶于六氟异丙醇中，在室温条件下，磁力搅拌12-24h，得到5-25wt％的聚己内酯和胶原蛋白的混合溶液；

P2、将步骤P1得到的聚己内酯和胶原蛋白的混合溶液进行静电纺丝，以不锈钢滚筒为接收装置，不锈钢滚筒的转动速率为100-2000rpm，纺丝液的流动速率为0.1-15mL/h，纺丝电压为7-30kV，不锈钢滚轴的接收距离为8-30cm，注射器的针头型号为18G-25G，纺丝温度为室温，纺丝时间为2-30h，得到厚度为50-500μm的电纺丝纤维膜，干燥；

P3、将具有凝血功能的蛋白质的水凝胶与促进细胞生长的蛋白质混合，溶于50-80v％的乙醇水溶液中，加入光引发剂Irgacure2959，在黑暗条件下搅拌，制得第一凝胶；

P4、将步骤P3得到的第一凝胶加到步骤P2得到的干燥的电纺丝纤维膜上，利用315-400nm波长的紫外光照射3-15min。

根据本发明又一方面提供了上述修复膜或上述制备方法在制备促进肌组织再生修复的药物中的应用。

本发明的优点：

本发明所所提供的功能化引导肌组织修复膜是以聚己内酯和胶原蛋白为主要基体材料，通过静电纺丝制备成的膜，并在膜上通过聚合反应形成载有结缔组织生长因子的水凝胶层；本发明所所提供的功能化引导肌组织修复膜具有优异的生物相容性、机械性能和能有效的促进肌组织的再生修复。

附图说明

图1为本发明实施例1所制备的功能化引导肌组织修复膜的扫描电镜照片；

图2为本发明实施例1和实施例2所制备的功能化引导肌组织修复膜的实物照片；

图3为本发明实施例1所制备的功能化引导肌组织修复膜的细胞毒性测试结果图；

图4为本发明实验例2中细胞在各不同功能化引导肌组织修复膜上生长3d时的状态图；

图中：TCP表示细胞培养板，PC表示PCL纺丝纤维膜，PFPC-C表示载有水凝胶及结缔组织生长因子的PCL纺丝纤维膜。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。

若未特别指明，本发明实施例中所用的实验试剂和材料等均可市售获得，若未具体指明，本发明实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1

(1)将聚己内酯与胶原蛋白溶于六氟异丙醇中，室温磁力搅拌24h，得到质量分数为15％的溶液；

(2)将上述聚己内酯与胶原蛋白的混合溶液进行静电纺丝，以不锈钢滚筒为接收装置，滚筒转动速率为1000rpm，纺丝液流动速率为10mL/h，电压25kV，接收距离20cm，注射器的针头型号为25G，纺丝温度为室温，纺丝10h，得到厚度50μm的电纺丝纤维膜PC。

如图1所示，实施例1中制得的PC纺丝纤维膜的直径在2μm左右。

实施例2

(1)将聚乙二醇修饰的具有凝血功能的蛋白质凝胶与促进细胞生长的蛋白质混合，溶于乙醇与水的混合溶液中，乙醇与水的体积比为5:5，蛋白质凝胶浓度为10w/v％，促进细胞生长的蛋白质浓度为40ng/ml，同时加入0.1w/v％的光引发剂Irgacure 2959，在黑暗条件下搅拌，制得凝胶；

(2)将胶加到实施例1中制得的干燥的电纺丝纤维膜上，利用长波长的紫外灯照射15分钟，制得电纺丝纤维膜PFPC-C。

实施例1中制得的PC及实施例2中制得的PFPC-C的形貌观察图如图2所示。

PC纺丝纤维膜和PFPC-C纺丝纤维膜均呈现红色，红色为DMEM培养基的颜色；此外，PC纺丝纤维膜表面光滑，PFPC-C纺丝纤维膜表面与PC纺丝纤维膜相比较为粗糙，是因为PFPC-C纺丝纤维膜载有水凝胶及生长因子。

实验例1

将实施例1-2中制备的膜打成48孔板孔径大小圆片，铺在48孔板里，75％乙醇浸泡30min，紫外照射10min，用封口膜密封，存放在4℃；待细胞处于对数期时，消化L6细胞，接种在铺有2种膜以及没铺膜的48孔板里，培养1d、3d、7d，每孔分别接种3×10⁵个细胞，每孔加600μl培养基(3d、5d和7d实行隔一天半换液，即弃掉300μl培养基，补充300μl新鲜培养基)，每一种膜设6个平行和3个只加培养基的平行空白组，没铺膜的处理组直接加入CTGF结缔组织生长因子；用镊子取出膜分别放在新的48孔板里，吸出两块板子里的培养基，再各向其加220μL的10％CCK-8(CCK-8使用无血清的DMEM培养基稀释)，培养1-4h，待溶液颜色变为棕黄色，对应吸出110μL的10％CCK-8培养液加入到96孔板里，利用酶标仪测OD450值。

上述3种处理的细胞毒性结果见图3。

如图3所示，在1d时，TCP+CTGF，PC，PFPC-C三个处理组没有明显差异，细胞存活率均在20％左右，3d时，TCP+CTGF组细胞存活率为22％，PC组为30％，PFPC-C组为40％，7d时，TCP+CTGF组细胞存活率为35％，PC组为55％，PFPC-C组为75％。随着时间增长，三个处理组均促进了细胞的生长；在3d和7d时，PFPC-C处理组的细胞存活率明显高于其余两组，在促进细胞增殖的能力上，PFPC-C>PC>TCP+CTGF。

实验例2

细胞形态观察实验与实验例3细胞培养的过程一致，每个时间点，无菌操作取出2种膜并放入新的48孔板，用PBS清洗三遍(血清影响多聚甲醛的固定)，每孔加入500微升的4％多聚甲醛室温固定30min，吸净液体，用PBS洗3遍，每次洗5min。将罗丹明标记的PI(phallodin)的甲醇溶液以1:200比例用0.2％Triton/PBS稀释，每孔加400μL，室温避光0.5h，用PBS洗3遍，每次洗5min。吸干液体，每孔加入400μL的DAPI溶液，室温避光15min，用PBS洗3遍，每次洗5min，然后把膜放到盖玻片上，有细胞的那面朝上，滴上一滴防猝灭固封剂，然后盖上载玻片，再倒置一下，使有细胞面朝下，室温保持8min。使用confocal荧光显微镜在403nm和543nm通道下拍出蓝色的细胞核及红色的微管蛋白的照片。

上述2种膜对细胞形态的影响见图4。

结果如图4所示，在所有条件相同的条件下，PFPC-C组细胞数多及细胞伸展性更好。因为PCL纤维是一个疏水性材料，而细胞喜欢亲水性的环境，所以在PC组，细胞会团聚在一起不会铺展开。而PFPC-C组在PCL纤维的基础上载有一层亲水性的水凝胶，利于细胞的铺展及生长。

最后，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种功能化引导肌组织修复膜，其特征在于，以聚己内酯和胶原蛋白为基体材料，通过静电纺丝制备成的纤维膜结构。

2.根据权利要求1所述的修复膜，其特征在于，还包括负载在所述修复膜上具有凝血功能的蛋白质的水凝胶以及结合在所述水凝胶上的促进细胞生长的蛋白质；优选地，所述具有凝血功能的蛋白质为纤维蛋白原、丝氨酸蛋白酶、凝血酶原、血纤维稳定因子、组织因子和钙因子中的一种或多种，所述促进细胞生长的蛋白质为碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子家族、结缔组织生长因子、肝素、转化生长因子、血小板源相关的生长因子中的一种或多种。

3.根据权利要求1或2所述的修复膜，其特征在于，所述修复膜为无规则排列的微米级纤维膜结构，其平均搭桥孔径为0.1-20μm；优选地，所述纤维直径为1-10μm；优选地，所述修复膜的厚度为50-500μm。

4.权利要求1-3任一项所述修复膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述聚己内酯和所述胶原蛋白溶于第一有机溶剂中，制得第一溶液，然后进行静电纺丝，制得电纺丝纤维膜，干燥即得。

5.根据权利要求4所述修复膜的制备方法，其特征在于，还包括，将所述具有凝血功能的蛋白质的水凝胶与所述促进细胞生长的蛋白质混合，溶于第二有机溶剂中，加入光引发剂，在黑暗条件下搅拌，制得第一凝胶，将第一凝胶加到干燥的电纺丝纤维膜上，紫外光照射即得。

6.根据权利要求4或5所述修复膜的制备方法，其特征在于，

所述第一有机溶剂为氯仿与乙醇的混合物、六氟异丙醇和氯仿中的一种，优选为六氟异丙醇；

和/或，所述第一溶液中聚己内酯和胶原蛋白的质量分数之和为5-25％；

和/或，所述第一溶液中聚己内酯和胶原蛋白的质量比为(1-9):1。

7.根据权利要求4-6任一项所述修复膜的制备方法，其特征在于，所述静电纺丝包括以下步骤：

S1、将所述第一溶液置于注射器中，利用推进器进行推动，待液滴稳定流下后调高电压；

S2、以不锈钢滚轴为接收装置，持续纺丝得到完整电纺丝纤维膜；

优选地，

步骤S1中，所述推进器的推进速度为0.1-15mL/h；

和/或，步骤S1中，所述纺丝电压为7-30kV；

和/或，步骤S1中，所述注射器的针头型号为18G-25G；

和/或，步骤S2中，所述不锈钢滚轴的接收距离为8-20cm；

和/或，步骤S2中，所述不锈钢滚轴的转动速度为100-2000rmp；

和/或，步骤S2中，所述纺丝时间为2-20h。

8.根据权利要求5所述修复膜的制备方法，其特征在于，

所述第二有机溶剂为乙醇或乙醇水溶液，优选为乙醇水溶液；

和/或，所述具有凝血功能的蛋白质的水凝胶的浓度为5-20w/v％，优选为10-15w/v％；

和/或，所述促进细胞生长的蛋白质的浓度为10-100ng/ml，优选为30-50ng/ml；

和/或，所述光引发剂为Irgacure 2959或Irgacure 1173，优选为Irgacure 2959；

和/或，所述光引发剂的浓度为0.01-0.2w/v％，优选为0.05-0.1w/v％；

和/或，所述紫外光的波长为250-400nm，优选为315-400nm；

和/或，所述紫外光的功率为2-8W/cm²，优选为4-5W/cm²；

和/或，所述紫外光的照射时间为3-15min，优选为4-5min。

9.根据权利要求4-8任一项所述修复膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

P1、将聚己内酯与胶原蛋白溶于六氟异丙醇中，在室温条件下，磁力搅拌12-24h，得到5-25wt％的聚己内酯和胶原蛋白的混合溶液；

P2、将步骤P1得到的聚己内酯和胶原蛋白的混合溶液进行静电纺丝，以不锈钢滚筒为接收装置，不锈钢滚筒的转动速率为100-2000rpm，纺丝液的流动速率为0.1-15mL/h，纺丝电压为7-30kV，不锈钢滚轴的接收距离为8-30cm，注射器的针头型号为18G-25G，纺丝温度为室温，纺丝时间为2-30h，得到厚度为50-500μm的电纺丝纤维膜，干燥；

P3、将具有凝血功能的蛋白质的水凝胶与促进细胞生长的蛋白质混合，溶于50-80v％的乙醇水溶液中，加入光引发剂Irgacure2959，在黑暗条件下搅拌，制得第一凝胶；

P4、将步骤P3得到的第一凝胶加到步骤P2得到的干燥的电纺丝纤维膜上，利用315-400nm波长的紫外光照射3-15min。

10.权利要求1-3任一项所述的修复膜或权利要求4-9任一项所述的制备方法在制备促进肌组织再生修复的药物中的应用。