CN106139230A - 一种具有生物活性的医用敷料及其制备方法 - Google Patents
一种具有生物活性的医用敷料及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种具有生物活性的医用敷料及其制备方法，用于覆盖烧、烫伤、手术、创伤、疾病引起的皮肤缺损创面，诱导创面修复。属于生物医学工程及材料科学技术领域。所述一种具有生物活性的医用敷料是将人或动物的胚胎干细胞、脐带血干细胞、羊水干细胞、外周血造血干细胞、骨髓间充质干细胞的一种或几种在体外培养，收集对数生长期分泌的干细胞生长因子与I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠中的一种或几种基质按比例混合制成薄层海绵作为内层，贴合以聚乳酸(PLA)、聚羟基乙酸(PGA)、乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)等中的一种或几种形成的混合物制成的多孔高分子材料薄膜外层，冻干裁切后组成具有生物活性的医用敷料，用于覆盖烧、烫伤、手术、创伤、疾病引起的皮肤缺损创面，诱导创面修复。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有生物活性的医用敷料及其制备方法，用于覆盖烧、烫伤、手术、创伤、疾病引起的皮肤缺损创面，诱导创面修复。属于生物医学工程及材料科学技术领域。
背景技术
皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成，其功能是保护体内组织免受外界损害；进行新陈代谢如吸收、排汗、分泌皮脂和排泻废物等；皮肤还能调节体温，感受痛、触、压、温、冷等刺激，并有免疫作用。人的一生中不可避免地会受到各种轻重不同的创伤，尤其是外伤、自然灾害及患病后手术创伤往往在所难免。当皮肤损伤达到一定程度时，由于纤维增生性反应，皮肤创伤修复将以瘢痕形成而告终。各种体表瘢痕都会破坏原有的皮肤完整性，损坏容貌，给患者带来身心的伤害。如何在创伤修复的同时治疗其造成的容貌破坏一直是医学领域的重要研究课题之一。严重创伤，大面积烧伤、整形术后的创面覆盖已经成为了一个十分重要的问题。自体皮是最好的创面敷料，但从自体其它隐蔽的地方挖取皮肤来填补易暴露的损伤处的皮肤，本身又造成二次损伤和不便。而且需量大时不易满足，特此需要一种能替代人体本身的皮肤的人工皮肤便应运而生。为克服自体供皮不足的困难，从自愿捐献者获得的同种异体皮是最常用的暂时代用品，经过加工处理后，用液氮冰冻保存，当需要时，异体皮被迅速解冻应用，异体皮将为烧伤创面提供暂时的生物敷料，并与宿主建立短暂的血运，直到宿主识别出异体皮上面表达的外源性抗原表面物质，启动机体的免疫机制，产生排斥反应。但异体皮不易获得，处理和储藏成本较高，只能为创面提供暂时的覆盖，受体也常面临病毒感染的威胁。临床上也使用猪皮作为人工皮肤，被加工后制成膜片或筛网状的均质真皮结构，用于暂时覆盖清洁创面、浅II0伤口和供皮区，保持创面干净并有效控制疼痛，但它们最终要被排斥，又由于其原料来源的个体差异，导致产品的均一性及可重复性较差。
也有用不同的材料制成的人工合成膜作为人工皮肤。明胶海绵是最早使用的止血吸收敷料，但其引导细胞生长性能不如胶原。多糖类如甲壳糖，糖胺多糖，透明质酸等类材料有促进细胞生长的功能，例如甲壳糖有消炎杀菌、促角质细胞生长作用，为良好的细胞生长基质材料，但随着用量增加，有抑制成纤维细胞生长的作用，同时材料的弹性低，质脆。聚氨酯，涤纶，尼龙，硅橡胶等为生物惰性材料，不降解，不能进行生理代谢，只能用做外层敷料。乙丙交酯等生物降解材料，可降解，可代谢，但如果其分子量小则强度不够，分子量大难溶于水，溶解时出现降解，影响材料的机械强度，并且其降解之后的产物使其周围组织酸度提高，出现无菌性炎症。胶原蛋白为人工皮肤的重要组分，是细胞分化、生长的营养基质，有增加结缔组织修复和再生的作用，但其存在的缺点是无弹性、强度低。常用的戊二醛交联法可稍微增加其强度，但导致脆性大大增加，且残留的戊二醛对皮肤、黏膜有刺激性和致敏作用，有致癌、致畸的可能。
最理想的皮肤创面覆盖物应当具有以下性质：无抗原性、可作为细菌屏障、较好的柔韧性、能诱导自体皮肤再生、可适应不规则创口表面、易于保存、一次手术即可完成移植、价格不昂贵。符合上述条件的皮肤替代物目前还未存在。随着组织工程学的发展，种植细胞的复合人工皮肤的研究已成为近年来研究的热点，间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。大量实验研究显示，间充质干细胞具有表皮细胞分化潜能，可促进受创皮肤的愈合。骨髓源性间充质干细胞就是一种适合体外扩增的干细胞。而来源于人脐带、胎盘或羊膜的间充质干细胞，成功避开了胚胎干细胞来源缺乏、异体排斥、道德伦理等诸多限制，它们具有自我更新、组织修复、免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，此外还能够向及其它胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞、血管内皮细胞分化；而且细胞在体外易于扩增，扩增后分化能力、增殖能力保持稳定，适合大规模制备。目前临床上已有将MSCs应用于病人的报道，在深度烧伤的患者的创面涂布自体MSCs悬液，能够促进皮肤再生和血管的新生。但一些专利采用种植细胞(尤其是干细胞)的方法(CN201210585481；CN201210133427；CN201180012330；CN03134535；CN03134540；CN03134539；CN201410482323；)制备人工皮肤作为修复创面的敷料，在临床实践中往往导致失败的疗效，因为细胞移植到创面后不可避免地受到污染和缺乏培养液的供应而造成死亡，很难附着在创口表面持续发生作用，且细胞的死亡又会引起创面的恶化。
近年来的研究发现干细胞对数生长期分泌干细胞生长因子(富含表皮生长因子(EGF)、纤维细胞生长因子(FGF)、神经生长因子(NGF)、肝细胞生长因子(HGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)等多重有效成分)，可以快速激活休眠的皮肤成体干细胞并促使其生长，同时可以调节机体内微环境，为皮肤细胞提供有利的生长条件。本发明用这种干细胞生长因子添加到载体上制成人工皮肤既避免了细胞移植到创面后因缺乏营养和污染微生物导致死亡进而引起创面恶化、外源细胞引起的免疫排斥反应，又有效地利用了干细胞诱导皮肤细胞增殖分化的功能，与I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠等基质的协同作用极大地提高了诱导创面愈合的能力。
发明内容
本发明提出一种具有生物活性的医用敷料及其制备方法，将人或动物的胚胎干细胞、脐带血干细胞、羊水干细胞、外周血造血干细胞、骨髓间充质干细胞的一种或几种在体外培养，收集对数生长期分泌的干细胞生长因子与I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠中的一种或几种基质按比例混合制成薄层海绵作为内层，贴合以聚乳酸(PLA)、聚羟基乙酸(PGA)、乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)等中的一种或几种形成的混合物制成的多孔高分子材料薄膜外层，冻干裁切后组成具有生物活性的医用敷料，用于覆盖烧、烫伤、手术、创伤、疾病引起的皮肤缺损创面，诱导创面修复。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种具有生物活性的医用敷料及其制备方法由混合有干细胞生长因子的基质海绵内层与多孔的高分子材料外层贴合组成。
上述基质溶液的粘度优选为4000～5500mPa.s。1-10×106个对数生长期干细胞所分泌的生长因子与100ml基质复配。外层多孔高分子材料薄膜表面孔洞均匀分散，其平均孔径为50μm～100μm。
具体包括如下步骤：
a、外层多孔高分子材料薄膜的制备：取一份质量的高分子材料溶解在15mL的三氯甲烷溶液中，待溶解完后加入六份质量的粒径为50～100μm的盐颗粒，搅拌均匀后倒入预先准备的模具中，室温下放置24h；待溶剂挥发完将材料从模具中取出放入去离子水中37℃摇床下震荡3h，取出后干燥得到外层的多孔高分子材料层；
b、干细胞生长因子的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37℃、5％CO2的条件下对干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到1～10×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冷冻干燥后备用；
c：基质的病毒灭活及抗原去除：提取基质的过程中或将提取后的基质用PH＝3.0±0.5的酸溶液浸泡30分钟以上以灭活病毒和去除抗原；
d、内层基质海绵层的制备：将上述上清液冻干品与100ml、粘度为4000～5500mPa.s的基质溶液混合、然后倒入平底盘中摊成1～3mm的薄膜，冷冻干燥即成；
e、双层医用敷料的制备：将a步制备的多孔外层高分子薄膜贴合d步制备的内层基质海绵，裁切成相应规格后密封包装；
f、将e步所得用20～25kGy剂量60Co或相当剂量的其他放射源剂量辐照灭菌。
本发明用这种干细胞生长因子添加到基质载体上制成人工皮肤既避免了细胞移植到创面后因缺乏营养和污染微生物导致死亡进而引起创面恶化、外源细胞引起的免疫排斥反应，又有效地利用了干细胞诱导皮肤细胞增殖分化的功能，与I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠等基质的协同作用极大地提高了诱导创面愈合的能力；与外层高分子材料薄膜贴合使用则提高了敷料的力学性能。
附图说明
图1剪除直径为1.5cm的圆形全层皮肤。
图2皮肤缺损处覆盖医用敷料后5天可见皮肤再生。
图3皮肤缺损处覆盖医用敷料后12天可见皮肤完全再生愈合。
图4未覆盖敷料组大白兔术后23天皮肤缺损尚未完全再生愈合。
具体实施方式
本发明提出的一种具有生物活性的医用敷料及其制备方法如下：
a、外层多孔高分子材料薄膜的制备：取一份质量的高分子材料溶解在15mL的三氯甲烷溶液中，待溶解完后加入六份质量的粒径为50～100μm的盐颗粒，搅拌均匀后倒入预先准备的模具中，室温下放置24h；待溶剂挥发完将材料从模具中取出放入去离子水中37℃摇床下震荡3h，取出后干燥得到外层的多孔高分子材料层；
b、干细胞生长因子的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37℃、5％CO2的条件下对干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到1～10×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冷冻干燥备用；
c：基质的病毒灭活及抗原去除：提取基质的过程中或将提取后的基质用PH＝3.0±0.5的酸溶液浸泡30分钟以上以灭活病毒和去除抗原；
d、内层基质海绵层的制备：将上述上清液冻干品与100ml、粘度为4000～5500mPa.s的基质溶液混合、然后倒入平底盘中摊成1～3mm的薄膜，冷冻干燥即成；
e、双层医用敷料的制备：将a步制备的多孔外层高分子薄膜贴合d步制备的内层基质海绵，裁切成相应规格后密封包装；
f、将e步所得用20～25kGy剂量60Co或相当剂量的其他放射源剂量辐照灭菌。
下面介绍本发明的具体实施例：
实施例1
a、外层多孔高分子材料薄膜的制备：取2g聚乳酸(PLA)溶解在15mL的三氯甲烷溶液中，待溶解完后加入12g粒径为50μm的盐颗粒，搅拌均匀后倒入预先准备的模具中，摊成厚度为1mm的薄膜，室温下放置24h；待溶剂挥发完将材料从模具中取出放入去离子水中37℃摇床下震荡3h，取出后干燥得到外层的多孔高分子材料层；
b、干细胞生长因子的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37℃、5％CO2的条件下对来源于人工授精用于开展试管婴儿操作剩余的胚胎干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到1×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冷冻干燥备用；
c：基质的病毒灭活及抗原去除：提取胶原蛋白的过程中用PH＝3.0的乙酸溶液浸泡30分钟以灭活病毒和去除抗原；
d、内层基质海绵层的制备：将b步获得的上清液与100ml、粘度为4000mPa.s的I型胶原溶液混合、然后倒入平底盘中摊成1mm的薄膜，冷冻干燥即成；
e、双层医用敷料的制备：将a步制备的多孔聚乳酸薄膜贴合d步制备的内层胶原海绵，裁切成相应规格后密封包装；
f、将e步所得用20kGy剂量60Co辐照灭菌。
实施例2
a、外层多孔高分子材料薄膜的制备：15g聚羟基乙酸(PGA)溶解在15mL的三氯甲烷溶液中，待溶解完后加入90g的粒径为60μm的盐颗粒，搅拌均匀后倒入预先准备的模具中，摊成厚度为0.5mm的薄膜，室温下放置24h；待溶剂挥发完将材料从模具中取出放入去离子水中37℃摇床下震荡3h，取出后干燥得到外层的多孔聚羟基乙酸(PGA)层；
b、干细胞生长因子的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37℃、5％CO2的条件下对来源于牛人工授精产生的胚胎干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到2×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冷冻干燥备用；
c：基质的病毒灭活及抗原去除：提取壳聚糖的过程中用PH＝3.2的磷酸溶液浸泡40分钟以灭活病毒和去除抗原；
d、内层基质海绵层的制备：将b步获得的上清液冻干品与100ml、粘度为5500mPa.s的壳聚糖溶液混合、然后倒入平底盘中摊成2mm的薄膜，冷冻干燥即成；
e、双层医用敷料的制备：将a步制备的多孔聚羟基乙酸(PGA)薄膜贴合d步制备的内层壳聚糖海绵，裁切成相应规格后密封包装；
f、将e步所得用21kGy剂量直线加速器灭菌。
实施例3
a、外层多孔高分子材料薄膜的制备：取8g的乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶解在15mL的三氯甲烷溶液中，待溶解完后加入48g的粒径为70μm的盐颗粒，搅拌均匀后倒入预先准备的模具中，摊成1.5mm厚度的薄膜，室温下放置24h；待溶剂挥发完将材料从模具中取出放入去离子水中37℃摇床下震荡3h，取出后干燥得到外层的多孔乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)薄膜；
b、干细胞生长因子的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37℃、5％CO2的条件下对来源于人的脐带血干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到3×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冷冻干燥备用；
c：基质的病毒灭活及抗原去除：提取透明质酸的过程中用PH＝3.3的柠檬酸溶液浸泡50分钟以灭活病毒和去除抗原；
d、内层基质海绵层的制备：将b步获得的上清液冻干品与100ml、粘度为4300mPa.s的透明质酸溶液混合、然后倒入平底盘中摊成2.6mm的薄膜，冷冻干燥即成；
e、双层医用敷料的制备：将a步制备的乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)薄膜贴合d步制备的内层透明质酸海绵，裁切成相应规格后密封包装；
f、将e步所得用22kGy剂量直线加速器灭菌。
实施例4
a、外层多孔高分子材料薄膜的制备：取5g聚己内酯(PCL)溶解在15mL的三氯甲烷溶液中，待溶解完后加入30g粒径为80μm的盐颗粒，搅拌均匀后倒入预先准备的模具中，摊成厚度为2mm的薄膜，室温下放置24h；待溶剂挥发完将材料从模具中取出放入去离子水中37℃摇床下震荡3h，取出后干燥得到外层的多孔高分子材料薄膜；
b、干细胞生长因子的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37℃、5％CO2的条件下对来源于人的羊水干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到4×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冷冻干燥备用；
c：基质的病毒灭活及抗原去除：提取硫酸软骨素的过程中用PH＝3.4的乳酸溶液浸泡60分钟以灭活病毒和去除抗原；
d、内层基质海绵层的制备：将b步获得的上清液冻干品与100ml、粘度为5200mPa.s的硫酸软骨素混合、然后倒入平底盘中摊成2.7mm的薄膜，冷冻干燥即成；
e、双层医用敷料的制备：将a步制备的多孔聚己内酯(PCL)薄膜贴合d步制备的内层加有干细胞生长因子的硫酸软骨素海绵，裁切成相应规格后密封包装；
f、将e步所得用24kGy剂量60Co辐照灭菌。
实施例5
a、外层多孔高分子材料薄膜的制备：取10g的聚乳酸(PLA)和聚己内酯(PCL)的混合粉末(1∶1配比)溶解在15mL的三氯甲烷溶液中，待溶解完后加入60g粒径为90μm的盐颗粒，搅拌均匀后倒入预先准备的模具中，摊成0.8mm的薄膜，室温下放置24h；待溶剂挥发完将材料从模具中取出放入去离子水中37℃摇床下震荡3h，取出后干燥得到外层的多孔高分子材料层；
b、干细胞生长因子的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37℃、5％CO2的条件下对来源于狗的外周血造血干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到5×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冻干备用；
c：基质的病毒灭活及抗原去除：将提取后的海藻酸钠用PH＝3.0的硝酸溶液浸泡30分钟以灭活病毒和去除抗原；
d、内层基质海绵层的制备：将b步获得的上清液冻干品与100ml、粘度为4800mPa.s的I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸复合溶液(各成分等比例配比)混合、然后倒入平底盘中摊成3mm的薄膜，冷冻干燥即成；
e、双层医用敷料的制备：将a步制备的多孔聚乳酸、聚己内酯薄膜贴合d步制备的内层基质海绵，裁切成相应规格后密封包装；
f、将e步所得用25kGy剂量60Co辐照灭菌。
实施例6
a、外层多孔高分子材料薄膜的制备：取10g聚乳酸(PLA)、聚羟基乙酸(PGA)、乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)的混合物(1∶1∶1质量比配比)溶解在15mL的三氯甲烷溶液中，待溶解完后加入60g的粒径为100μm的盐颗粒，搅拌均匀后倒入预先准备的模具中，摊成厚度为0.7mm的薄膜，室温下放置24h；待溶剂挥发完将材料从模具中取出放入去离子水中37℃摇床下震荡3h，取出后干燥得到外层的多孔高分子材料层；
b、干细胞生长因子的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37℃、5％CO2的条件下对来源于人骨髓间充质干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到10×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冷冻干燥备用；
c：基质的病毒灭活及抗原去除：将I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠溶液混合物(各成分等比例配比)用PH＝3.5的盐酸溶液浸泡100分钟以灭活病毒和去除抗原；
d、内层基质海绵层的制备：将b步获得的上清液冻干品与100ml、粘度为5000mPa.s的I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠溶液混合、然后倒入平底盘中摊成2.5mm的薄膜，冷冻干燥即成；
e、双层医用敷料的制备：将a步制备的多孔高分子材料薄膜贴合d步制备的内层基质海绵，裁切成相应规格后密封包装；
f、将e步所得用24kGy剂量60Co辐照灭菌。
实施例7
a、外层多孔高分子材料薄膜的制备：取10g聚羟基乙酸(PGA)、乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)的混合物(1∶1∶1质量比配比)溶解在15mL的三氯甲烷溶液中，待溶解完后加入60g的粒径为88μm的盐颗粒，搅拌均匀后倒入预先准备的模具中，摊成厚度为0.7mm的薄膜，室温下放置24h；待溶剂挥发完将材料从模具中取出放入去离子水中37℃摇床下震荡3h，取出后干燥得到外层的多孔高分子材料层；
b、干细胞生长因子的制备：使用含10％胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基)，于37℃、5％CO2的条件下分别对来源于人骨髓间充质干细胞和脐带血干细胞进行常规培养，待细胞融合度达到90％左右、细胞浓度达到10×106时，吸取含有干细胞生长因子的培养液，进行离心，弃沉淀取上清液冷冻干燥备用；
c：基质的病毒灭活及抗原去除：将I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠溶液混合物(各成分等比例配比)用PH＝3.5的苹果酸溶液浸泡100分钟以灭活病毒和去除抗原；
d、内层基质海绵层的制备：将b步获得的上清液冻干品与100ml、粘度为5200mPa.s的I型胶原、硫酸软骨素、海藻酸钠溶液混合、然后倒入平底盘中摊成2.5mm的薄膜，冷冻干燥即成；
e、双层医用敷料的制备：将a步制备的多孔高分子材料薄膜贴合d步制备的内层基质海绵，裁切成相应规格后密封包装；
f、将e步所得用24.5kGy剂量60Co辐照灭菌。
应用实施例1
方法：使用10只新西兰大白兔(1.5-2.0kg，广东省实验动物中心)作为实验动物，分2组进行对照试验，5只动物被戊巴比妥钠溶液局部麻醉后在一侧背部皮肤剪除直径1.5cm圆形全层皮肤，在缺损处覆盖上述实施例1所得敷料；另外5只大白兔实行同样皮肤缺损处理后不覆盖敷料。术后每天观察愈合情况。
结果：术后12天可见覆盖本发明制备的医用敷料组缺损的皮肤完全再生愈合，而未覆盖敷料组大白兔术后23天皮肤缺损尚未完全再生愈合。
本发明分别将上述其它实施例所得的医用敷料覆盖皮肤缺损处后，均得到与应用实施例1一致的结果。
Claims (9)
1.一种具有生物活性的医用敷料及其制备方法，其特征在于该医用敷料由外层多孔高分子材料薄膜、基质和干细胞生长因子按适当比例混合组成的内层海绵层组成。
2.如权利要求1所述多孔高分子材料薄膜表面孔洞均匀分散，其平均孔径为50～100μm。
3.如权利要求1所述高分子材料是聚酯类高分子聚合物，是选自聚乳酸(PLA)、聚羟基乙酸(PGA)、乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)等中的一种或几种形成的混合物。
4.如权利要求1所述基质为I型胶原、III型胶原、壳聚糖、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠中的一种或几种。
5.如权利1所述的干细胞生长因子为胚胎干细胞或成体干细胞的一种或几种细胞在培养过程中分泌的含表皮生长因子(EGF)、纤维细胞生长因子(FGF)、神经生长因子(NGF)、肝细胞生长因子(HGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)等多重有效成分。
6.如权利要求5所述的胚胎干细胞来源于人或动物；成体干细胞为来源于人或动物的脐带血干细胞、羊水干细胞、外周血造血干细胞、骨髓间充质干细胞的一种或几种。
7.如权利要求1所述干细胞因子与基质混合的比例为：1～10×106个对数生长期干细胞所分泌的生长因子与100ml基质混合。
8.如权利要求1所述的基质是用PH＝3.0±0.5的酸溶液浸泡30分钟以上的方法以灭活病毒和去除抗原的。
9.如权利要求8所述的酸为乙酸、苹果酸、柠檬酸、硫酸、盐酸、硝酸、磷酸的一种。
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