CN110343175B

CN110343175B - 抑制HIV-1病毒感染的scFv序列及其应用

Info

Publication number: CN110343175B
Application number: CN201910558818.8A
Authority: CN
Inventors: 张辉
Original assignee: Shenzhen Renewal City Biomedical Technology Co ltd
Current assignee: Shenzhen Renewal City Biomedical Technology Co ltd
Priority date: 2019-06-26
Filing date: 2019-06-26
Publication date: 2021-02-26
Anticipated expiration: 2039-06-26
Also published as: CN110343175A

Abstract

本发明公开了抑制HIV‑1病毒感染的scFv序列及其应用。基于HIV‑1中和抗体VRC01的可变区重链(V_H)和轻链(V_L)，利用自有方法将其序列相连组成scFv，共得到与HIV‑1的gp120蛋白具有较高亲和力的9条scFv分子。本发明部分实例的scFv序列，对HIV‑1病毒具有很好的亲和力，可以有效抑制病毒对靶细胞TZM‑bl细胞的感染。使用本发明部分实例的scFv序列，可以构建得到可以抑制HIV‑1病毒感染的CAR‑T细胞，该CAR‑T细胞可以强有力地介导靶细胞的裂解，释放LDH。本发明部分实例的CAR‑T细胞，通过负载多种具有不同scFv序列的CAR分子，可以更好地避免HIV‑1病毒突变导致的逃逸，具有更为广谱的HIV‑1病毒抑制效果。

Description

抑制HIV-1病毒感染的scFv序列及其应用

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗技术领域，具体涉及抑制HIV-1病毒感染的scFv序列及其应用。

背景技术

人类免疫缺陷病毒1型(Human Immunodificiency Virus Type-1,HIV-1)感染后，联合抗逆转录病毒疗法(combined antiretroviral therapy,cART)可以有效地抑制病毒复制。然而，由于病毒整合在被感染细胞中并形成一个稳定的潜伏感染储存库，被感染者一旦停止cART治疗，病毒血症即在短时间内再爆发，这构成了治愈HIV-1感染的主要障碍。

当前的研究热点是通过特异性的潜伏感染逆转药物(latency-reversingagents,LRAs)激活潜伏感染的病毒，进而药物治疗或诱导机体免疫系统杀灭被感染细胞。这种干预策略被称为“shock and kill”。然而，HIV-1可以迅速的发生突变以逃避免疫识别。研究显示在经过cART 治疗的感染者当中，即使成功激活了其潜伏感染，体内的CD8⁺ T淋巴细胞由于缺乏对HIV-1 有效的免疫应答，所以不能完全清除被感染的细胞。因此，在“shock and kill”策略中，为了更好的清除潜伏感染储存库，需要在被感染者体内重建强有力的免疫监控机能。

近年来，由于具有高亲和力、TCR(T cell receptor)非依赖和MHC(majorhistocompatibility complex)非限制等特点，嵌合抗原受体(chimeric antigenreceptor,CAR)的免疫细胞疗法成为了杀伤肿瘤细胞的全新途径。CAR是由抗体靶向区域与T细胞激活胞内信号区融合而成，从而赋予细胞特异性抗原识别能力。通过在患者自体免疫细胞中表达识别肿瘤天然抗原的 CAR分子并对进行过继免疫回输，可以特异性的靶向杀伤患者体内的肿瘤细胞。CAR-T细胞疗法已在白血病和淋巴瘤的临床治疗中证明了有效性，并且获得了令人鼓舞的成功。该策略也可应用于抗病毒治疗，包括HIV-1、HBV(hepatitis Bvirus)和HCV(hepatitis C virus)等病毒感染的治疗。但是，传统构建的CAR分子还不能完全满足各种疾病的免疫治疗。

前期研究中，发明人将HIV-1广谱中和抗体VRC01来源的scFv序列和全新设计的第三代CAR分子胞内段序列连接在一起并转导CD8⁺ T细胞，产生了HIV-1特异性的VC-CAR-T细胞。相比已报道的CD4-CAR-T细胞，VC-CAR-T细胞介导特异性杀伤效果更加明显。并且首次证明了该疗法可以有效清除cART治疗HIV-1感染者样本中被激活的潜伏感染储存库(Liu et al,Journal of Virology,90:9712-9724.2016)。

但是HIV-1具有较高的突变率，从而产生逃逸克隆。有必要开发出更多对HIV-1病毒感染具有抑制作用的分子。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供抑制HIV-1病毒感染的scFv序列及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：

抑制HIV-1病毒感染的scFv蛋白，所述scFv蛋白的序列如SEQ ID NO.1～SEQ IDNO.9所示。

本发明的第二个方面，提供：

一种抑制HIV-1病毒感染的CAR分子，所述CAR分子包括胞外抗原结合域和胞内结构域，所述胞外抗原结合域为scFv蛋白，所述scFv蛋白的序列如SEQ ID NO.1～SEQ IDNO.9所示。

在一些CAR分子的实例中，所述胞内结构域的序列如SEQ ID NO.10所示。

本发明的第三个方面，提供：

一种抑制HIV-1病毒感染的CAR-T细胞，所述CAR-T细胞转导有至少一种CAR分子，所述CAR分子包括胞外抗原结合域和胞内结构域，所述胞外抗原结合域具有SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.9任一序列所示的蛋白。

在一些CAR-T细胞的实例中，所述胞外抗原结合域具有SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5任一项所示的序列。

在一些CAR-T细胞的实例中，所述CAR-T细胞的CAR分子的胞内结构域的序列如SEQID NO.10所示。

在一些CAR-T细胞的实例中，T细胞为CD8⁺ T细胞。

本发明的第四个方面，提供：

CAR-T细胞在制备清除HIV-1感染细胞的制剂中的应用，所述CAR-T细胞如本发明的第三个方面所述。

本发明的第五个方面，提供：

scFv蛋白在构建抑制HIV-1病毒感染的CAR-T细胞中的应用，所述scFv蛋白的序列如 SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.9的一项所示。

本发明的第六个方面，提供：

scFv蛋白在制备HIV-1病毒靶向制剂中的应用，所述scFv蛋白的序列如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.9的一项所示。

本发明的有益效果是：

本发明部分实例的scFv序列，对HIV-1病毒具有很好的亲和力，可以有效抑制病毒对靶细胞TZM-bl细胞的感染。

使用本发明部分实例的scFv序列，可以构建得到可以抑制HIV-1病毒感染的CAR-T细胞，该CAR-T细胞可以强有力地介导靶细胞的裂解，释放LDH。

本发明部分实例的CAR-T细胞，通过负载多种具有不同scFv序列的CAR分子，可以更好地避免HIV-1病毒突变导致的逃逸，具有更为广谱的HIV-1病毒抑制效果。

附图说明

图1是筛选出的QY-PhD-001至QY-PhD-009分子进行HIV-1病毒中和实验结果；

图2是构建的QY-PhD-CAR分子结构示意图；

图3是构建的VC-CAR分子结构示意图；

图4是QY-PhD-001-CAR、QY-PhD-002-CAR和QY-PhD-005-CAR转导的CD8+ T细胞与表达HIV-1包膜蛋白gp120的靶细胞系混合培养后，通过检测LDH的释放，检测对目的靶细胞的杀伤活性，VC-CAR-T细胞为阳性对照，HER2-CAR-T细胞为阴性对照；

图5是QY-PhD-001-CAR、QY-PhD-002-CAR和QY-PhD-005-CAR细胞与不表达目的蛋白的对照靶细胞系混合培养后，通过检测LDH的释放，检测对目的靶细胞的杀伤活性， VC-CAR-T细胞为阳性对照，HER2-CAR-T细胞为阴性对照。

具体实施方式

本发明的第一个方面，提供：

本发明的第二个方面，提供：

本发明的第三个方面，提供：

在一些CAR-T细胞的实例中，所述CAR-T细胞可以负载多种CAR分子，以实现为广谱的特异性杀伤作用。

在一些CAR-T细胞的实例中，T细胞为CD8+ T细胞。

本发明的第四个方面，提供：

本发明的第五个方面，提供：

scFv蛋白在构建抑制HIV-1病毒感染的CAR-T细胞中的应用，所述scFv蛋白的序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.9的一项所示。

本发明的第六个方面，提供：

scFv蛋白在制备HIV-1病毒靶向制剂中的应用，所述scFv蛋白的序列如SEQ IDNO.1～ SEQ ID NO.9的一项所示。

具体的，可以将scFv蛋白与其他分子偶联，利用scFv蛋白对HIV-1的gp120蛋白的高亲和力，实现对体内HIV-1病毒的检测、药物分子靶向释放等。

下面结合实验，进一步说明本发明的技术方案。

scFv的获得

本发明基于HIV-1中和抗体VRC01的可变区重链(V_H)和轻链(V_L)，利用自有方法将其序列相连组成scFv，共得到与HIV-1的gp120蛋白具有较高亲和力的9条scFv分子，并将其命名为QY-PhD-001至QY-PhD-009(其氨基酸序列分别对应SEQ ID NO.1～9)。

SEQ ID NO.1为QY-PhD-001分子

EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCRSLWYQQRPGQAPRLVIYLQYPAGPLLGIPDRFSGSR WGPDYNLTISNLESGDFGVYYCRLEGSPPVNFGQGTKVQVDIKRQVQLVQSGGQMKKPG ESMRISCRASRSPTRNSHRLARLLHLTPRLHQLTEPPPPEEPPPPEEPPPPDRLMSTWTLVPWP NTGTARQTPKSPDSRLLMVRLSGPHRLPLNLSGMPLAINGGIMTAWGPGRASVDTSGSPWG VTRDKRWLFPLETKTGCLETVSTQFPWPAGPHRKEQLKELRIIIFSRKSPKKRLQSLASWLFP VNCYPLTIPHNIRAGSIKGKAWGAWGRGTPVIVSS

SEQ ID NO.2为QY-PhD-002分子

EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCSPVVMQWYQQRPGQAPRLVIYYGFIPSGLASIGIPDRF SGSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCGTPGRYREPVFGQGTKVQVDIKRQVQLVQSGGQ MKKPGESMRISCRASRSPTRNSHRLARLLHLTPRLHQLHLRAAAARRAAAARRAAAARSL NVDLDLGPLAKSSSYCAIINTKISRLQVADGEIVVWPHRLPLNLSGMPMCIQRREMTSLGA WPGLCYHADLLKGDTQEMMAVSPGDKDRVPGDCVKQFPWPAGPHRKEQLKELRIIASVDT TQTCRGETHKRWLFPLETKTGCLETVSNNFPWPSLGRKRKEQLEEWGRGTPVIVSS

SEQ ID NO.3为QY-PhD-003分子

EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCWLCWYQQRPGQAPRLVIYYHLALRPFPRGGIPDRFS GSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCGIVSPLEARQFGQGTKVQVDIKRQVQLVQSGGQMK KPGESMRISCRASEILIDSPGFFIPPDCTSCTEPPPPEEPPPPEEPPPPDRLMSTWTLVPWPNRR LIAQTPKSPDSRLLMVRLSGPTDCRGTCLGCRCVSSDENRRAWGPGRASVDTTQTCRGETH KRWLFPLETKTGCLETVSNNFHGRLGRIERNNRNCEFFHVENLQKEAPSLASWSLVPEWGR GTPVIVSS

SEQ ID NO.4为QY-PhD-004分子

EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCWRSWYQQRPGQAPRLVIYLFQIKPPGIKLGGIPDRFS GSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCTIRLLKKPDKFGQGTKVQVDIKRQVQLVQSGGQM KKPGESMRISCRASKFSSTRQASSSDPQTAPAAPESRRRQKSRRRQSLNVDLDLGPLAKRGL NYAIINTKISRLQVADGEIVVWPPPTAAEPVWDAKKGLLMKIDDEPGGLAGPLLIPAPRNVL TGTRDDGCFPWRQRQGAWRLCQHNSMAGWAAKGTTKGIANNNFFTLKISKKKAPKLGVI MVIAVSCVKLLSAHNSTQHTSRKHKVSLGCLMSELTHWGRGTPVIVSS

SEQ ID NO.5为QY-PhD-005分子

EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCFCVCEWYQQRPGQAPRLVIYHGHSFRASRLVGGIPDR FSGSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCTNPSIKLETPFGQGTKVQVDIKRQVQLVQSGGQ MKKPGESMRISCRASPPKRSPTRNSHRLARLLHLTPRLHQLHLRAAAARRAAAARRAAAA RSLNVDLDLGPLAKPLGLNAIINTKISRLQVADGEIVVWPPPTAAEPVWDAPWPGGEAIDDE PGGLAGPLLISLLCVRLKATRDDGCFPWRQRQGAWRLCQHNFHGRLGRIERNNRNCEFFH VENLQKKGSKAWRNHGHSCFLCEIVIRSQFHTTYEPEASVKPGVWGRGTPVIVSS

SEQ ID NO.6为QY-PhD-006分子

EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCSGHRWYQQRPGQAPRLVIYYHLALRPFPRGGIPDRFS GSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCRIQALQVGIVFGQGTKVQVDIKRQVQLVQSGGQMK KPGESMRISCRASSPLEARQEILIDSPGFFIPPDCTSCTEPPPPEEPPPPEEPPPPDRLMSTWTLV PWPNRRLIAQTPKSPDSRLLMVRLSGPTDCRTCLGCRCVSSDENRRAWGPGRASVDTTQTC RGETHKRWLFPLETKTGCLETVSNNFHGRLGRIERNNRNCEFFHVENLQKRGSKAWRNHG HSCFLCEIVIRSQFHTTYEPEASWGRGTPVIVSS

SEQ ID NO.7为QY-PhD-007分子

EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCSGHRLFFLWYQQRPGQAPRLVIYHSVVSLDALLIGGI PDRFSGSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCGGTRRVKRSPFGQGTKVQVDIKRQVQLVQS GGQMKKPGESMRISCRASTRNSHRLARLLHLTPRLHQLHLRAAAARRAAAARRAAAARSL NVDLDLGPLAKFPVSAIINTKISRLQVADGEIVVWPPPTAAEPVWDAYNAKVEGIDDEPGGL AGPLLIPSRVSSNISLTRDDGCFPWRQRQGAWRLCQHNFHGRLGRIERNNRNCEFFHVENL QKKGSKAWRNHGHSCFLCEIVIRSQFHTTYEPEASVKPGVPWGRGTPVIVSS

SEQ ID NO.8为QY-PhD-008分子

EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCETGGWYQQRPGQAPRLVIYESWSLFQIKPPGGIPDRF SGSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCTYRVTIRLLKFGQGTKVQVDIKRQVQLVQSGGQM KKPGESMRISCRASKPDKKFSSTRQASSSDPQTAPAAPESRRRQKSRRRQSLNVDLDLGPLA KRGLNYAIINTKISRLQVADGEIVVWPPPTAAEPVWDAKKGLLMKIDDEPGGLAGPLLIPAP RNVLTGTRDDGCFPWRQRQGAWRLCQHNSMAGWAAKGTTKGIANNNFFTLKISKKKAPK LGVIMVIAVSCVKLLSAHNSTQHTSRKHKVSLGCLMSELTHWGRGTPVIVSS

SEQ ID NO.9为QY-PhD-009分子

EIVLTQSPGTLSLSPGETAIISCDWWSWYQQRPGQAPRLVIYKAARYKTRNPRGGIPD RFSGSRWGPDYNLTISNLESGDFGVYYCQGDDPAPQEAFGQGTKVQVDIKRQVQLVQSGG QMKKPGESMRISCRASRQEILIDSPGFFIPPDCTSCTEPPPPEEPPPPVACRPGPWSPGQTWAQ LCNNKHQNLPTPGCWDCSLAPTDCRTCLGCQKRITNEDRRAWGPGRASVDTSSSERTDLG YKRWLFPLETKTGCLETVSTQFHGRLGRIERNNRNCEFFHVENLQKKGSKAWRNHGHSCF LCEIVIRSQFHTTYEPEASVKPGVPNEANSWGRGTPVIVSS。

scFv分子的病毒感染抑制实验：

将得到的9条scFv序列，连接至带有抗体恒定区(Fc)和分泌信号肽的真核细胞表达载体上，通过测序确认序列的正确性后，转染HEK293T细胞。收集转染后细胞的上清，并通过ELISA滴定后，确定抗体浓度。

利用HIV-1_NL4-3野生型病毒感染TZM-bl细胞进行抗体中和实验，广谱中和抗体VRC01 作为阳性对照，通过测定感染后细胞荧光素酶的读值，进一步确定筛选得到的抗体序列是否具有抗病毒功能。在这9条序列中，发明人发现，其中三条序列抑制病毒感染的功能最为突出，分别为QY-PhD-001、QY-PhD-002、QY-PhD-005(见图1)。

QY-PhD-CAR-T细胞的构建

将实验确定的具有更好抗病毒中和效果的三条QY-PhD的scFv序列与CAR分子的跨膜结构域和胞内结构域相连，CAR分子序列C’端是以三代CAR结构为基础，包括CD28(nucleotides 460-660,GenBank NM_006139.3)，CD137(nucleotides 640-765,GenBankNM_001561.5)和CD3ζ(nucleotides 160-492,Genbank NM_198053.2)胞内结构域串联组成，通过CD28分子的跨膜结构域将scFv和胞内信号分子相连。即把SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.5分别与SEQ ID NO.10串联，从而提供一组全新的CAR分子，分别命名为QY-PhD-001-CAR、QY-PhD-002-CAR、QY-PhD-005-CAR，合成的QY-PhD-CAR通过NheI 和EcoRI双酶切，插入pCPPT-IRES-mStrewbeery慢病毒载体中，酶切、连接的具体步骤参考本领域的常规方法；得到QY-PhD-CAR分子(图2)重组后的 pCPPT-QY-PhD-CAR-IRES-mStrewbeery慢病毒载体。

SEQ ID NO.10为CAR分子的胞内结构域信号分子

GGGGSGGGGSGGGGSFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGA VHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGP TRKHYQPYAPPRDFAAYRSRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEE GGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNP QEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR DYKDDDDK。

将一个生长状态的HEK293T细胞平均铺于用多聚赖氨酸处理的10cm培养皿中(细胞密度约为6.5×10⁴/cm²)，要求细胞呈单个均匀分布。培养约24小时后，细胞汇合度应接近80％，此时各皿均以12ml完全培养基换液，同时加入3.75ul氯喹(100mM，4000×)。换液后按表 1配制磷酸钙-DNA混合液，颠倒数次混匀后静置1分钟，然后以3ml/皿迅速加入各皿细胞培养液中，边加边摇匀，逐滴快速加入。

表1为磷酸钙-DNA混合液体系配方

转染后12小时，细胞汇合度应接近100％，此时各皿均以12ml新鲜培养基换液，同时加入90μl丁酸钠(1M，100×)。转染后约48小时，收集全部34ml HEK293T细胞上清液，以0.45μm的过滤器过滤后装入50ml离心管，按下表2比例加入PEG-NaCl-PBS混合液，颠倒混匀后于4℃放置1.5小时，期间每20～30分钟混匀一次或颠倒混匀后于4℃放置过夜。

表2

将混合液于4℃，7000g离心10分钟，管壁上可见白色沉淀，小心去除全部上清液，加入适量体积(300ul～3ml)的新鲜培养基，轻轻摇晃使沉淀溶解，即得到QY-PhD-CAR分子重组的病毒浓缩液，立即使用或分装后于-80℃保存。

QY-PhD-CAR在CD8⁺ T细胞中的表达情况：从外周血样本中分离外周血单个核细胞，然后通过偶联生物素的CD8抗体分离富集CD8⁺ T淋巴细胞，计数，离心。用RPMI1640完全培养基重悬，然后按2×10⁶/ml的细胞浓度，均匀铺至细胞培养板中。利用anti-CD3(终浓度为1μg/ml)、anti-CD28(终浓度为1μg/ml)抗体和IL2(终浓度为10ng/ml)对细胞进行刺激，作用48小时后，收集细胞，用于QY-PhD-CAR假病毒的转导。

取适量生长状态良好的目标细胞悬液，放入离心管中300g离心5分钟。弃去上清液，以 1ml/1×10⁶细胞的比例加入假病毒浓缩液，同时加入终浓度8μg/ml的Polybrene，轻轻吹打混匀。将细胞悬液移入培养皿，37℃、350×g离心90分钟，离心结束后，放回培养箱中继续培养。约8～12小时后，进行第二轮感染，步骤同上，约12小时后，离心换液，用PBS洗去培养基中的病毒，以新鲜培养基重悬细胞，并加入终浓度均为10ng/ml的IL-2和IL-7保持细胞状态。继续培养并及时传代，进一步扩增细胞。感染后的第3天，根据细胞状态和增殖情况，对细胞添加完全RMPI1640培养基，细胞浓度维持在2×10⁶/ml。并补充IL-2和IL-7，终浓度均为10ng/ml。感染后的第5天，按照第3天的流程继续扩增细胞。并利用荧光定量 PCR检测CD3ζ的表达，确定QY-PhD-001-CAR、QY-PhD-002-CAR和QY-PhD-005-CAR的感染效率，通常需确保感染率达到50％以上。感染后的第5天，细胞用于后续实验检测或继续培养以及冻存。

为了方便起见，以下实验均称其为QY-PhD-CAR-T细胞。

QY-PhD-CAR-T细胞的对表达HIV-1包膜蛋白细胞的特异性杀伤实验

为了进一步验证QY-PhD-001-CAR、QY-PhD-002-CAR和QY-PhD-005-CAR的特异性杀伤表达HIV-1包膜蛋白细胞效果。同时对比新开发QY-PhD-CAR-T细胞和发明人之前研究发表的VC-CAR-T细胞的效果(Liu et al,Journal of Virology,90:9712-9724.2016)(图3)，发明人将转导后的QY-PhD-CAR-T细胞或VC-CAR-T细胞，然后与表达HIV-1包膜蛋白的靶细胞系(Jurkat-gp160_NL4-3)混合，在U形底的96孔板中进行细胞杀伤实验。靶细胞数量为10⁴/孔，RMPI1640完全培养基体积为150μl/孔。

在给定的效靶比范围内(40：1至1.25：1)，24小时后，通过检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放，以确定每个实验组经过改造CD8⁺CAR-T淋巴细胞的杀伤活性。

结果显示：在从40：1到1.25：1的效靶比区间范围内，QY-PhD-001-CAR-T、 QY-PhD-002-CAR-T和QY-PhD-005-CAR-T细胞均以剂量依赖的方式显著杀伤表达HIV-1 gp120的靶细胞(Jurkat-gp160_NL4-3)，而对对照靶细胞(Jurkat-GFP)没有显著的杀伤效果，并且QY-PhD-CAR-T细胞的特异性杀伤效果与VC-CAR-T细胞相当。该结果说明筛选得到的 QY-PhD-CAR-T细胞是通过识别靶细胞表面的gp120而介导对靶细胞的杀伤作用，且杀伤作用是特异性的(见图4和图5)。

SEQUENCE LISTING

<110> 深圳市再生之城生物医药技术有限公司

<120> 抑制HIV-1病毒感染的scFv序列及其应用

<130>

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 342

<212> PRT

<213> HIV-1中和抗体

<400> 1

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Arg Ser Leu Trp Tyr Gln Gln Arg Pro

20 25 30

Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Leu Gln Tyr Pro Ala Gly Pro

35 40 45

Leu Leu Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Trp Gly Pro Asp

50 55 60

Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp Phe Gly Val Tyr

65 70 75 80

Tyr Cys Arg Leu Glu Gly Ser Pro Pro Val Asn Phe Gly Gln Gly Thr

85 90 95

Lys Val Gln Val Asp Ile Lys Arg Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly

100 105 110

Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala

115 120 125

Ser Arg Ser Pro Thr Arg Asn Ser His Arg Leu Ala Arg Leu Leu His

130 135 140

Leu Thr Pro Arg Leu His Gln Leu Thr Glu Pro Pro Pro Pro Glu Glu

145 150 155 160

Pro Pro Pro Pro Glu Glu Pro Pro Pro Pro Asp Arg Leu Met Ser Thr

165 170 175

Trp Thr Leu Val Pro Trp Pro Asn Thr Gly Thr Ala Arg Gln Thr Pro

180 185 190

Lys Ser Pro Asp Ser Arg Leu Leu Met Val Arg Leu Ser Gly Pro His

195 200 205

Arg Leu Pro Leu Asn Leu Ser Gly Met Pro Leu Ala Ile Asn Gly Gly

210 215 220

Ile Met Thr Ala Trp Gly Pro Gly Arg Ala Ser Val Asp Thr Ser Gly

225 230 235 240

Ser Pro Trp Gly Val Thr Arg Asp Lys Arg Trp Leu Phe Pro Leu Glu

245 250 255

Thr Lys Thr Gly Cys Leu Glu Thr Val Ser Thr Gln Phe Pro Trp Pro

260 265 270

Ala Gly Pro His Arg Lys Glu Gln Leu Lys Glu Leu Arg Ile Ile Ile

275 280 285

Phe Ser Arg Lys Ser Pro Lys Lys Arg Leu Gln Ser Leu Ala Ser Trp

290 295 300

Leu Phe Pro Val Asn Cys Tyr Pro Leu Thr Ile Pro His Asn Ile Arg

305 310 315 320

Ala Gly Ser Ile Lys Gly Lys Ala Trp Gly Ala Trp Gly Arg Gly Thr

325 330 335

Pro Val Ile Val Ser Ser

340

<210> 2

<211> 357

<212> PRT

<213> HIV-1中和抗体

<400> 2

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Ser Pro Val Val Met Gln Trp Tyr Gln

20 25 30

Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Tyr Gly Phe Ile

35 40 45

Pro Ser Gly Leu Ala Ser Ile Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Arg Trp Gly Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Thr Pro Gly Arg Tyr Arg Glu Pro

85 90 95

Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Gln Val Asp Ile Lys Arg Gln Val

100 105 110

Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu Ser Met

115 120 125

Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Arg Ser Pro Thr Arg Asn Ser His Arg

130 135 140

Leu Ala Arg Leu Leu His Leu Thr Pro Arg Leu His Gln Leu His Leu

145 150 155 160

Arg Ala Ala Ala Ala Arg Arg Ala Ala Ala Ala Arg Arg Ala Ala Ala

165 170 175

Ala Arg Ser Leu Asn Val Asp Leu Asp Leu Gly Pro Leu Ala Lys Ser

180 185 190

Ser Ser Tyr Cys Ala Ile Ile Asn Thr Lys Ile Ser Arg Leu Gln Val

195 200 205

Ala Asp Gly Glu Ile Val Val Trp Pro His Arg Leu Pro Leu Asn Leu

210 215 220

Ser Gly Met Pro Met Cys Ile Gln Arg Arg Glu Met Thr Ser Leu Gly

225 230 235 240

Ala Trp Pro Gly Leu Cys Tyr His Ala Asp Leu Leu Lys Gly Asp Thr

245 250 255

Gln Glu Met Met Ala Val Ser Pro Gly Asp Lys Asp Arg Val Pro Gly

260 265 270

Asp Cys Val Lys Gln Phe Pro Trp Pro Ala Gly Pro His Arg Lys Glu

275 280 285

Gln Leu Lys Glu Leu Arg Ile Ile Ala Ser Val Asp Thr Thr Gln Thr

290 295 300

Cys Arg Gly Glu Thr His Lys Arg Trp Leu Phe Pro Leu Glu Thr Lys

305 310 315 320

Thr Gly Cys Leu Glu Thr Val Ser Asn Asn Phe Pro Trp Pro Ser Leu

325 330 335

Gly Arg Lys Arg Lys Glu Gln Leu Glu Glu Trp Gly Arg Gly Thr Pro

340 345 350

Val Ile Val Ser Ser

355

<210> 3

<211> 314

<212> PRT

<213> HIV-1中和抗体

<400> 3

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Trp Leu Cys Trp Tyr Gln Gln Arg Pro

20 25 30

Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Tyr His Leu Ala Leu Arg Pro

35 40 45

Phe Pro Arg Gly Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Trp Gly

50 55 60

Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp Phe Gly

65 70 75 80

Val Tyr Tyr Cys Gly Ile Val Ser Pro Leu Glu Ala Arg Gln Phe Gly

85 90 95

Gln Gly Thr Lys Val Gln Val Asp Ile Lys Arg Gln Val Gln Leu Val

100 105 110

Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu Ser Met Arg Ile Ser

115 120 125

Cys Arg Ala Ser Glu Ile Leu Ile Asp Ser Pro Gly Phe Phe Ile Pro

130 135 140

Pro Asp Cys Thr Ser Cys Thr Glu Pro Pro Pro Pro Glu Glu Pro Pro

145 150 155 160

Pro Pro Glu Glu Pro Pro Pro Pro Asp Arg Leu Met Ser Thr Trp Thr

165 170 175

Leu Val Pro Trp Pro Asn Arg Arg Leu Ile Ala Gln Thr Pro Lys Ser

180 185 190

Pro Asp Ser Arg Leu Leu Met Val Arg Leu Ser Gly Pro Thr Asp Cys

195 200 205

Arg Gly Thr Cys Leu Gly Cys Arg Cys Val Ser Ser Asp Glu Asn Arg

210 215 220

Arg Ala Trp Gly Pro Gly Arg Ala Ser Val Asp Thr Thr Gln Thr Cys

225 230 235 240

Arg Gly Glu Thr His Lys Arg Trp Leu Phe Pro Leu Glu Thr Lys Thr

245 250 255

Gly Cys Leu Glu Thr Val Ser Asn Asn Phe His Gly Arg Leu Gly Arg

260 265 270

Ile Glu Arg Asn Asn Arg Asn Cys Glu Phe Phe His Val Glu Asn Leu

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Gln Lys Glu Ala Pro Ser Leu Ala Ser Trp Ser Leu Val Pro Glu Trp

290 295 300

Gly Arg Gly Thr Pro Val Ile Val Ser Ser

305 310

<210> 4

<211> 350

<212> PRT

<213> HIV-1中和抗体

<400> 4

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Trp Arg Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro

20 25 30

Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Leu Phe Gln Ile Lys Pro Pro

35 40 45

Gly Ile Lys Leu Gly Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Trp

50 55 60

Gly Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp Phe

65 70 75 80

Gly Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Arg Leu Leu Lys Lys Pro Asp Lys Phe

85 90 95

Gly Gln Gly Thr Lys Val Gln Val Asp Ile Lys Arg Gln Val Gln Leu

100 105 110

Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu Ser Met Arg Ile

115 120 125

Ser Cys Arg Ala Ser Lys Phe Ser Ser Thr Arg Gln Ala Ser Ser Ser

130 135 140

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145 150 155 160

Ser Arg Arg Arg Gln Ser Leu Asn Val Asp Leu Asp Leu Gly Pro Leu

165 170 175

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

Asn Val Leu Thr Gly Thr Arg Asp Asp Gly Cys Phe Pro Trp Arg Gln

245 250 255

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260 265 270

Ala Ala Lys Gly Thr Thr Lys Gly Ile Ala Asn Asn Asn Phe Phe Thr

275 280 285

Leu Lys Ile Ser Lys Lys Lys Ala Pro Lys Leu Gly Val Ile Met Val

290 295 300

Ile Ala Val Ser Cys Val Lys Leu Leu Ser Ala His Asn Ser Thr Gln

305 310 315 320

His Thr Ser Arg Lys His Lys Val Ser Leu Gly Cys Leu Met Ser Glu

325 330 335

Leu Thr His Trp Gly Arg Gly Thr Pro Val Ile Val Ser Ser

340 345 350

<210> 5

<211> 357

<212> PRT

<213> HIV-1中和抗体

<400> 5

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Phe Cys Val Cys Glu Trp Tyr Gln Gln

20 25 30

Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr His Gly His Ser Phe

35 40 45

Arg Ala Ser Arg Leu Val Gly Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Arg Trp Gly Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly

65 70 75 80

Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Thr Asn Pro Ser Ile Lys Leu Glu Thr

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100 105 110

Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu Ser Met

115 120 125

Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Pro Pro Lys Arg Ser Pro Thr Arg Asn

130 135 140

Ser His Arg Leu Ala Arg Leu Leu His Leu Thr Pro Arg Leu His Gln

145 150 155 160

Leu His Leu Arg Ala Ala Ala Ala Arg Arg Ala Ala Ala Ala Arg Arg

165 170 175

Ala Ala Ala Ala Arg Ser Leu Asn Val Asp Leu Asp Leu Gly Pro Leu

180 185 190

Ala Lys Pro Leu Gly Leu Asn Ala Ile Ile Asn Thr Lys Ile Ser Arg

195 200 205

Leu Gln Val Ala Asp Gly Glu Ile Val Val Trp Pro Pro Pro Thr Ala

210 215 220

Ala Glu Pro Val Trp Asp Ala Pro Trp Pro Gly Gly Glu Ala Ile Asp

225 230 235 240

Asp Glu Pro Gly Gly Leu Ala Gly Pro Leu Leu Ile Ser Leu Leu Cys

245 250 255

Val Arg Leu Lys Ala Thr Arg Asp Asp Gly Cys Phe Pro Trp Arg Gln

260 265 270

Arg Gln Gly Ala Trp Arg Leu Cys Gln His Asn Phe His Gly Arg Leu

275 280 285

Gly Arg Ile Glu Arg Asn Asn Arg Asn Cys Glu Phe Phe His Val Glu

290 295 300

Asn Leu Gln Lys Lys Gly Ser Lys Ala Trp Arg Asn His Gly His Ser

305 310 315 320

Cys Phe Leu Cys Glu Ile Val Ile Arg Ser Gln Phe His Thr Thr Tyr

325 330 335

Glu Pro Glu Ala Ser Val Lys Pro Gly Val Trp Gly Arg Gly Thr Pro

340 345 350

Val Ile Val Ser Ser

355

<210> 6

<211> 341

<212> PRT

<213> HIV-1中和抗体

<400> 6

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Ser Gly His Arg Trp Tyr Gln Gln Arg

20 25 30

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Tyr His Leu Ala Leu Arg

35 40 45

Pro Phe Pro Arg Gly Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Trp

50 55 60

Gly Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp Phe

65 70 75 80

Gly Val Tyr Tyr Cys Arg Ile Gln Ala Leu Gln Val Gly Ile Val Phe

85 90 95

Gly Gln Gly Thr Lys Val Gln Val Asp Ile Lys Arg Gln Val Gln Leu

100 105 110

Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu Ser Met Arg Ile

115 120 125

Ser Cys Arg Ala Ser Ser Pro Leu Glu Ala Arg Gln Glu Ile Leu Ile

130 135 140

Asp Ser Pro Gly Phe Phe Ile Pro Pro Asp Cys Thr Ser Cys Thr Glu

145 150 155 160

Pro Pro Pro Pro Glu Glu Pro Pro Pro Pro Glu Glu Pro Pro Pro Pro

165 170 175

Asp Arg Leu Met Ser Thr Trp Thr Leu Val Pro Trp Pro Asn Arg Arg

180 185 190

Leu Ile Ala Gln Thr Pro Lys Ser Pro Asp Ser Arg Leu Leu Met Val

195 200 205

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210 215 220

Val Ser Ser Asp Glu Asn Arg Arg Ala Trp Gly Pro Gly Arg Ala Ser

225 230 235 240

Val Asp Thr Thr Gln Thr Cys Arg Gly Glu Thr His Lys Arg Trp Leu

245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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Asn His Gly His Ser Cys Phe Leu Cys Glu Ile Val Ile Arg Ser Gln

305 310 315 320

Phe His Thr Thr Tyr Glu Pro Glu Ala Ser Trp Gly Arg Gly Thr Pro

325 330 335

Val Ile Val Ser Ser

340

<210> 7

<211> 355

<212> PRT

<213> HIV-1中和抗体

<400> 7

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Ser Gly His Arg Leu Phe Phe Leu Trp

20 25 30

Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr His Ser

35 40 45

Val Val Ser Leu Asp Ala Leu Leu Ile Gly Gly Ile Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Arg Trp Gly Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu

65 70 75 80

Glu Ser Gly Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Thr Arg Arg Val

85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

Glu Ser Met Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Thr Arg Asn Ser His Arg

130 135 140

Leu Ala Arg Leu Leu His Leu Thr Pro Arg Leu His Gln Leu His Leu

145 150 155 160

Arg Ala Ala Ala Ala Arg Arg Ala Ala Ala Ala Arg Arg Ala Ala Ala

165 170 175

Ala Arg Ser Leu Asn Val Asp Leu Asp Leu Gly Pro Leu Ala Lys Phe

180 185 190

Pro Val Ser Ala Ile Ile Asn Thr Lys Ile Ser Arg Leu Gln Val Ala

195 200 205

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210 215 220

Trp Asp Ala Tyr Asn Ala Lys Val Glu Gly Ile Asp Asp Glu Pro Gly

225 230 235 240

Gly Leu Ala Gly Pro Leu Leu Ile Pro Ser Arg Val Ser Ser Asn Ile

245 250 255

Ser Leu Thr Arg Asp Asp Gly Cys Phe Pro Trp Arg Gln Arg Gln Gly

260 265 270

Ala Trp Arg Leu Cys Gln His Asn Phe His Gly Arg Leu Gly Arg Ile

275 280 285

Glu Arg Asn Asn Arg Asn Cys Glu Phe Phe His Val Glu Asn Leu Gln

290 295 300

Lys Lys Gly Ser Lys Ala Trp Arg Asn His Gly His Ser Cys Phe Leu

305 310 315 320

Cys Glu Ile Val Ile Arg Ser Gln Phe His Thr Thr Tyr Glu Pro Glu

325 330 335

Ala Ser Val Lys Pro Gly Val Pro Trp Gly Arg Gly Thr Pro Val Ile

340 345 350

Val Ser Ser

355

<210> 8

<211> 355

<212> PRT

<213> HIV-1中和抗体

<400> 8

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Glu Thr Gly Gly Trp Tyr Gln Gln Arg

20 25 30

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile Tyr Glu Ser Trp Ser Leu Phe

35 40 45

Gln Ile Lys Pro Pro Gly Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg

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Trp Gly Pro Asp Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Ser Gly Asp

65 70 75 80

Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Thr Tyr Arg Val Thr Ile Arg Leu Leu Lys

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Gln Val Asp Ile Lys Arg Gln Val Gln

100 105 110

Leu Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu Ser Met Arg

115 120 125

Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Pro Asp Lys Lys Phe Ser Ser Thr Arg

130 135 140

Gln Ala Ser Ser Ser Asp Pro Gln Thr Ala Pro Ala Ala Pro Glu Ser

145 150 155 160

Arg Arg Arg Gln Lys Ser Arg Arg Arg Gln Ser Leu Asn Val Asp Leu

165 170 175

Asp Leu Gly Pro Leu Ala Lys Arg Gly Leu Asn Tyr Ala Ile Ile Asn

180 185 190

Thr Lys Ile Ser Arg Leu Gln Val Ala Asp Gly Glu Ile Val Val Trp

195 200 205

Pro Pro Pro Thr Ala Ala Glu Pro Val Trp Asp Ala Lys Lys Gly Leu

210 215 220

Leu Met Lys Ile Asp Asp Glu Pro Gly Gly Leu Ala Gly Pro Leu Leu

225 230 235 240

Ile Pro Ala Pro Arg Asn Val Leu Thr Gly Thr Arg Asp Asp Gly Cys

245 250 255

Phe Pro Trp Arg Gln Arg Gln Gly Ala Trp Arg Leu Cys Gln His Asn

260 265 270

Ser Met Ala Gly Trp Ala Ala Lys Gly Thr Thr Lys Gly Ile Ala Asn

275 280 285

Asn Asn Phe Phe Thr Leu Lys Ile Ser Lys Lys Lys Ala Pro Lys Leu

290 295 300

Gly Val Ile Met Val Ile Ala Val Ser Cys Val Lys Leu Leu Ser Ala

305 310 315 320

His Asn Ser Thr Gln His Thr Ser Arg Lys His Lys Val Ser Leu Gly

325 330 335

Cys Leu Met Ser Glu Leu Thr His Trp Gly Arg Gly Thr Pro Val Ile

340 345 350

Val Ser Ser

355

<210> 9

<211> 343

<212> PRT

<213> HIV-1中和抗体

<400> 9

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Ile Ile Ser Cys Asp Trp Trp Ser Trp Tyr Gln Gln Arg

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gly Asp Asp Pro Ala Pro Gln Glu Ala

85 90 95

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100 105 110

Leu Val Gln Ser Gly Gly Gln Met Lys Lys Pro Gly Glu Ser Met Arg

115 120 125

Ile Ser Cys Arg Ala Ser Arg Gln Glu Ile Leu Ile Asp Ser Pro Gly

130 135 140

Phe Phe Ile Pro Pro Asp Cys Thr Ser Cys Thr Glu Pro Pro Pro Pro

145 150 155 160

Glu Glu Pro Pro Pro Pro Val Ala Cys Arg Pro Gly Pro Trp Ser Pro

165 170 175

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180 185 190

Thr Pro Gly Cys Trp Asp Cys Ser Leu Ala Pro Thr Asp Cys Arg Thr

195 200 205

Cys Leu Gly Cys Gln Lys Arg Ile Thr Asn Glu Asp Arg Arg Ala Trp

210 215 220

Gly Pro Gly Arg Ala Ser Val Asp Thr Ser Ser Ser Glu Arg Thr Asp

225 230 235 240

Leu Gly Tyr Lys Arg Trp Leu Phe Pro Leu Glu Thr Lys Thr Gly Cys

245 250 255

Leu Glu Thr Val Ser Thr Gln Phe His Gly Arg Leu Gly Arg Ile Glu

260 265 270

Arg Asn Asn Arg Asn Cys Glu Phe Phe His Val Glu Asn Leu Gln Lys

275 280 285

Lys Gly Ser Lys Ala Trp Arg Asn His Gly His Ser Cys Phe Leu Cys

290 295 300

Glu Ile Val Ile Arg Ser Gln Phe His Thr Thr Tyr Glu Pro Glu Ala

305 310 315 320

Ser Val Lys Pro Gly Val Pro Asn Glu Ala Asn Ser Trp Gly Arg Gly

325 330 335

Thr Pro Val Ile Val Ser Ser

340

<210> 10

<211> 306

<212> PRT

<213> CAR分子胞内结构域

<400> 10

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe

1 5 10 15

Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

20 25 30

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

35 40 45

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

50 55 60

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

65 70 75 80

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His

85 90 95

Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn

100 105 110

Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr

115 120 125

Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Phe Ser Val Val

130 135 140

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

145 150 155 160

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

165 170 175

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

180 185 190

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

195 200 205

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

210 215 220

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

225 230 235 240

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

245 250 255

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

260 265 270

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

275 280 285

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Asp Tyr Lys Asp Asp Asp

290 295 300

Asp Lys

305

Claims

1.抑制HIV-1病毒感染的scFv蛋白，其特征在于：所述scFv蛋白的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5任一项所示。

2.一种抑制HIV-1病毒感染的CAR分子，所述CAR分子包括胞外抗原结合域和胞内结构域，其特征在于：所述胞外抗原结合域为scFv蛋白，所述scFv蛋白的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5任一项所示。

3.根据权利要求2所述的CAR分子，其特征在于：所述胞内结构域的序列如SEQ IDNO.10所示。

4.一种抑制HIV-1病毒感染的CAR-T细胞，所述CAR-T细胞转导有至少一种CAR分子，所述CAR分子包括胞外抗原结合域和胞内结构域，其特征在于：所述胞外抗原结合域如SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5任一序列所示的蛋白。

5.根据权利要求4所述的CAR-T细胞，其特征在于：所述胞外抗原结合域如SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5任一项所示的序列。

6.根据权利要求4所述的CAR-T细胞，其特征在于：所述CAR-T细胞的CAR分子的胞内结构域的序列如SEQ ID NO.10所示。

7.根据权利要求4～6任一项所述的CAR-T细胞，其特征在于：T细胞为CD8⁺ T细胞。

8.CAR-T细胞在制备清除 HIV-1感染细胞的制剂中的应用，其特征在于：所述CAR-T细胞如权利要求4～7任一项所述。

9.scFv蛋白在构建抑制HIV-1病毒感染的CAR-T细胞中的应用，其特征在于：所述scFv蛋白的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5任一项所示。

10.scFv蛋白在制备HIV-1病毒靶向制剂中的应用，其特征在于：所述scFv蛋白的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5任一项所示。