CN110333207A - CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域,公开了一种CREB在Ang‑2调节VEGFR2表达中分析方法,结合基因敲除、信号通路抑制等技术手段,证实CREB在Ang‑2调节VEGFR2表达过程中的重要作用,通过蛋白表达单元对确定的蛋白进行表达;采用待筛选的化合物对部分蛋白表达单元进行优化;将蛋白表达量与设定的对照系统中的蛋白表达量相比较;对蛋白表达结果进行分析,得出检测基因毒性活性的相关结论。本发明用待筛选的化合物温育至少部分系统,并将系统中的蛋白表达与对照系统中的蛋白表达相比较,从而检测(前‑)基因毒性活性来进行。为CREB在Ang‑2调节VEGFR2表达中的分析提供了理论依据。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,尤其涉及一种CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法。
背景技术
目前,最接近的现有技术:血管生成是实体肿瘤细胞生长和转移的必要条件。血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)通过多种机制促进肿瘤血管生成与血流量增加,其结合并激活3种结构类似的Ⅲ型酪氨酸激酶受体即血管内皮细胞生长因子受体(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor,VEGFR),VEGFR家族包含有3种亚型,即VEGFR1(F1t-1),VEGFR2(KDR/Flk-1)和VEGFR3(Flt-4)。其中VEGFR1调节肿瘤血管的生成并影响微血管的数量;VEGFR2参与介导对内皮细胞的增殖过程,诱导肿瘤血管的形成;VEGFR3可调节肿瘤淋巴管的形成。因此VEGF和VEGFR特别是VEGFR1和VEGFR2是抗血管生成靶向治疗的主要靶标。
近几年免疫靶向疗法在临床诊疗中的作用有了较大进步,血管生成和血管相关疾病(包括肿瘤)密切相连,而血管的生成主要依靠血管生长因子(VEGF)和血管生长抑制因子的调控,其中最密切的是血管内皮生长因子及其受体(VEGFR),特别是VEGFR-2。但是,国内外关于CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析甚少,缺少理论与临床研究。
综上所述,现有技术存在的问题是:国内外关于CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析甚少,缺少理论与临床研究。
发明内容
针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法。
本发明是这样实现的,一种CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法,所述CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法包括以下步骤:
步骤一,通过蛋白表达单元对确定的蛋白进行表达;
步骤二,采用待筛选的化合物对部分蛋白表达单元进行优化;
步骤三,将蛋白表达量与设定的对照系统中的蛋白表达量相比较;
步骤四,对蛋白表达结果进行分析,得出检测(前-)基因毒性活性的相关结论。
进一步,所述步骤三中蛋白表达量的测定方法包括:利用SDS-PAGE跑全菌电泳,然后用使用灰度扫描仪对各条带进行灰度扫描,确定目的蛋白占全菌蛋白的百分比;
所述灰度扫描仪使用修正方法对蛋白的图像进行修正,具体包括:
(1)获得最初蛋白扫描图像的灰度数据,设第j行的第i个传感器的最初蛋白扫描图像为Image[j][i];
(2)根据扫描获得的灰度数据Image[j][i],计算每个点的修正系数;
1)采样行数为N,传感器个数为M,逐个求第1个传感器的N行图像各对应点的平均值,得到行向量mVector[i];
2)计算M各传感器行向量的平均值Average:
3)计算第i个传感器的修正系数aVector[i]:
aVector[i]=Average-mVector[i];
(3)将修正系数写入灰度扫描仪的EEPROM中;
(4)现将每个像素点的模拟信号转换为数字信号,将与该点对应的修正系数向量按照下式通过加法器相加,得到修正后的像素点的值Rimage[i][j]:
若加法器相加后没有进位,由加法器会直接输出结果Rimage[i][j];作为修正后的像素点的值;如果加法器相加后有进位,由加法器输出最大值FF,作为修正后的像素点的值。
进一步,所述步骤四中的对蛋白表达进行分析包括:
按待分析蛋白要求,选取已知的一维蛋白芯片;取微量的待分析的目标分子置于芯片一侧储液池中,以平均20mm/min的压力驱动或300v/cm的电驱动方式,使样品流经微通道进入小室;经30~10分钟后,用二次水冲洗储液池和微通道中的多余样品溶液;然后以同样条件的压力驱动或电驱动方式将待分析目标分子的一抗兔抗单或多克隆抗体与荧光标记的二抗山羊抗兔IgG;以1∶100比例的抗体稀释液稀释后依次由储液池进入微通道与小室中的微颗粒作用,20分钟后用二次水洗净储液池和微通道,反应后的芯片用荧光成像检测。
本发明的另一目的在于提供一种基于所述CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法的CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析系统,所述CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析系统包括:
蛋白表达单元,用于对确定的蛋白进行表达;
温育单元,通过采用待筛选的化合物对部分蛋白表达单元进行温育;
比较单元,用于将蛋白表达单元中的蛋白表达与设定的对照系统中的蛋白表达相比较;
分析单元,对蛋白表达进行分析,得出检测(前-)基因毒性活性的相关结论。
本发明的另一目的在于提供一种应用所述CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法的信息数据处理终端。
综上所述,本发明的优点及积极效果为:本发明通过提供能够表达一组确定的蛋白的系统,用待筛选的化合物温育至少部分系统,并将系统中的蛋白表达与对照系统中的蛋白表达相比较,从而检测(前-)基因毒性活性来进行。为CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析提供了理论依据。
本发明利用SDS-PAGE跑全菌电泳,然后用使用灰度扫描仪对各条带进行灰度扫描,确定目的蛋白占全菌蛋白的百分比;灰度扫描仪使用修正方法对蛋白的图像进行修正,提高了蛋白的图像处理正确率,更加准确获得蛋白的表达量。
附图说明
图1是本发明实施例提供的CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法流程图。
图2是本发明实施例提供的CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析系统结构示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的技术方案作详细描述。
如图1所示,本发明实施例提供的CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法包括以下步骤:
S101:通过蛋白表达单元对确定的蛋白进行表达;
S102:采用待筛选的化合物对部分蛋白表达单元进行优化;
S103:将蛋白表达量与设定的对照系统中的蛋白表达量相比较;
S104:对蛋白表达结果进行分析,得出检测(前-)基因毒性活性的相关结论。
在本发明的优选实施例中,步骤S103中蛋白表达量的测定方法包括:利用SDS-PAGE跑全菌电泳,然后用使用灰度扫描仪对各条带进行灰度扫描,确定目的蛋白占全菌蛋白的百分比;
所述灰度扫描仪使用修正方法对蛋白的图像进行修正,具体包括:
(1)获得最初蛋白扫描图像的灰度数据,设第j行的第i个传感器的最初蛋白扫描图像为Image[j][i];
(2)根据扫描获得的灰度数据Image[j][i],计算每个点的修正系数;
1)采样行数为N,传感器个数为M,逐个求第1个传感器的N行图像各对应点的平均值,得到行向量mVector[i];
2)计算M各传感器行向量的平均值Average:
3)计算第i个传感器的修正系数aVector[i]:
aVector[i]=Average-mVector[i].
(3)将修正系数写入灰度扫描仪的EEPROM中;
(4)现将每个像素点的模拟信号转换为数字信号,将与该点对应的修正系数向量按照下式通过加法器相加,得到修正后的像素点的值Rimage[i][j]:
若加法器相加后没有进位,由加法器会直接输出结果Rimage[i][j];作为修正后的像素点的值;如果加法器相加后有进位,由加法器输出最大值FF,作为修正后的像素点的值。
在本发明的优选实施例中,步骤S104中的对蛋白表达进行分析包括:
按待分析蛋白要求,选取已知的一维蛋白芯片;取微量的待分析的目标分子置于芯片一侧储液池中,以平均20mm/min的压力驱动或300v/cm的电驱动方式,使样品流经微通道进入小室;经30~10分钟后,用二次水冲洗储液池和微通道中的多余样品溶液;然后以同样条件的压力驱动或电驱动方式将待分析目标分子的一抗兔抗单或多克隆抗体与荧光标记的二抗山羊抗兔IgG;以1∶100比例的抗体稀释液稀释后依次由储液池进入微通道与小室中的微颗粒作用,20分钟后用二次水洗净储液池和微通道,反应后的芯片用荧光成像检测。
如图2所示,本发明实施例提供的CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析系统包括:
蛋白表达单元1,用于对确定的蛋白进行表达;
温育单元2,通过采用待筛选的化合物对部分蛋白表达单元1进行温育;
比较单元3,用于将蛋白表达单元1中的蛋白表达与设定的对照系统中的蛋白表达相比较;
分析单元4,对蛋白表达进行分析,得出检测(前-)基因毒性活性的相关结论。
本发明通过提供能够表达一组确定的蛋白的系统,用待筛选的化合物温育至少部分系统,并将系统中的蛋白表达与对照系统中的蛋白表达相比较,从而检测(前-)基因毒性活性来进行。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法,其特征在于,所述CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法包括以下步骤:
步骤一,通过蛋白表达单元对确定的蛋白进行表达;
步骤二,采用待筛选的化合物对部分蛋白表达单元进行优化;
步骤三,将蛋白表达量与设定的对照系统中的蛋白表达量相比较;
步骤四,对蛋白表达结果进行分析,得出检测(前-)基因毒性活性的相关结论。
2.如权利要求1所述的CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法,其特征在于,所述步骤三中蛋白表达量的测定方法包括:利用SDS-PAGE跑全菌电泳,然后用使用灰度扫描仪对各条带进行灰度扫描,确定目的蛋白占全菌蛋白的百分比;
所述灰度扫描仪使用修正方法对蛋白的图像进行修正,具体包括:
(1)获得最初蛋白扫描图像的灰度数据,设第j行的第i个传感器的最初蛋白扫描图像为Image[j][i];
(2)根据扫描获得的灰度数据Image[j][i],计算每个点的修正系数;
1)采样行数为N,传感器个数为M,逐个求第I个传感器的N行图像各对应点的平均值,得到行向量mVector[i];
2)计算M各传感器行向量的平均值Average:
3)计算第i个传感器的修正系数aVector[i]:
aVector[i]=Average-mVector[i];
(3)将修正系数写入灰度扫描仪的EEPROM中;
(4)现将每个像素点的模拟信号转换为数字信号,将与该点对应的修正系数向量按照下式通过加法器相加,得到修正后的像素点的值Rimage[i][j]:
若加法器相加后没有进位,由加法器会直接输出结果Rimage[i][j];作为修正后的像素点的值;如果加法器相加后有进位,由加法器输出最大值FF,作为修正后的像素点的值。
3.如权利要求1所述的CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法,其特征在于,所述步骤四中的对蛋白表达进行分析包括:
按待分析蛋白要求,选取已知的一维蛋白芯片;取微量的待分析的目标分子置于芯片一侧储液池中,以平均20mm/min的压力驱动或300v/cm的电驱动方式,使样品流经微通道进入小室;经30~10分钟后,用二次水冲洗储液池和微通道中的多余样品溶液;然后以同样条件的压力驱动或电驱动方式将待分析目标分子的一抗兔抗单或多克隆抗体与荧光标记的二抗山羊抗兔IgG;以1∶100比例的抗体稀释液稀释后依次由储液池进入微通道与小室中的微颗粒作用,20分钟后用二次水洗净储液池和微通道,反应后的芯片用荧光成像检测。
4.一种基于权利要求1所述CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法的CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析系统,其特征在于,所述CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析系统包括:
蛋白表达单元,用于对确定的蛋白进行表达;
温育单元,通过采用待筛选的化合物对部分蛋白表达单元进行温育;
比较单元,用于将蛋白表达单元中的蛋白表达与设定的对照系统中的蛋白表达相比较;
分析单元,对蛋白表达进行分析,得出检测(前-)基因毒性活性的相关结论。
5.一种应用权利要求1~3任意一项所述CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法的信息数据处理终端。
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