CN110283792B - 一种植物病毒的高效富集方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种植物病毒的高效富集方法，包括：选取植物种子样品并研磨成粉末；称取一次测量所需的待测粉末并将待测粉末平均分成N份，得到N份子样品粉末，N为正整数；在N份子样品粉末中的任意一份加入体积为Mml的样品抽提缓冲液，得到第一子样品溶液，M为正整数；使第一子样品溶液充分混匀并离心，移取第一上清液，丢弃沉淀；将第一上清液定容至Mml得到混合溶液并向混合溶液中加入剩余的子样品粉末中的任意一份得到第二子样品溶液；重复步骤S4和S5至得到第N子样品溶液；将第N子样品溶液充分混匀并离心，移取第N上清液，丢弃沉淀，即得到富集的样品提取液。有效提高了提取液中植物病毒的含量，为后续检测提供保障。

Description

一种植物病毒的高效富集方法
技术领域
本发明涉及植物病毒检验技术领域，尤其涉及一种植物病毒的高效富集方法。
背景技术
随着农业产业化的发展，我国植物种子的出口和国外品种的引入呈逐年上升的趋势。种子可能携带植物病毒、植物病原真菌等有害生物，造成国外植物病虫害侵入。病毒种质在田间更新繁殖时会产生病害扩散问题,对未来农业生产造成潜在的威胁。如玉米种子如果携带玉米粗缩病毒(MRDV)会造成玉米植株矮缩，严重时甚至造成绝产。但是植物种子中的病毒含量比较低，现有技术中，一般是将植物种子样品研磨成粉然后按照适当的比例加入抽提缓冲液，由此制备得到的植物病毒提取液中植物病毒的比例低，不利于后续的样品检测。
现有技术中缺乏一种有效的富集植物病毒的方法。
发明内容
本发明为了解决现有的问题，提供一种植物病毒的高效富集方法。
为了解决上述问题，本发明采用的技术方案如下所述：
一种植物病毒的高效富集方法，包括如下步骤：S1：选取植物种子样品并研磨成粉末；S2：称取一次测量所需的待测粉末并将所述待测粉末平均分成N份，得到N份子样品粉末，所述N为正整数；S3：在所述N份子样品粉末中的任意一份加入体积为Mml的样品抽提缓冲液，得到第一子样品溶液，所述M为正数； S4：使所述第一子样品溶液充分混匀并离心，移取第一上清液，丢弃沉淀；S5：将所述第一上清液定容至Mml得到混合溶液并向所述混合溶液中加入剩余的所述子样品粉末中的任意一份得到第二子样品溶液；S6：重复步骤S4和S5至得到第N子样品溶液；S7：将所述第N子样品溶液充分混匀并离心，移取第N上清液，丢弃沉淀，即得到富集的样品提取液。
优选地，所述粉末的颗粒直径3μm-30μm。
优选地，称取一次测量所需的所述待测粉末1g并分成9-12份所述子样品粉末。
优选地，在所述N份子样品粉末中的任意一份加入体积为0.75ml-0.85ml的所述样品抽提缓冲液。
优选地，采用涡旋振荡器使所述子样品溶液混匀。
优选地，采用11000g-16000g的转速持续混匀时间不少于2min。
优选地，利用球磨仪对所述植物种子样品进行研磨。
优选地，所述富集的样品提取液中包括：植物病毒、植物病原细菌、类菌原体、植物病原真菌、植物类病毒。
优选地，所述富集的样品提取液用于血清学检测试验或分子生物学。
优选地，所述样品抽提缓冲液依据植物种子样品不同而不同。
本发明的有益效果为：提供植物病毒的高效富集方法，不改变抽提液浓度的情况下，通过富集的思想对本身含量很低的植物病毒进行富集到一定浓度的病毒粒子溶液，使得含量很低的植物病毒也能采用现有技术中的设备和仪器检测出来，避免植物病毒带来的危害。
附图说明
图1是本发明实施例中植物病毒的高效富集方法示意图。
具体实施方式
为了使本发明实施例所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
需要说明的是，当元件被称为“固定于”或“设置于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者间接在该另一个元件上。当一个元件被称为是“连接于”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或间接连接至该另一个元件上。另外，连接即可以是用于固定作用也可以是用于电路连通作用。
需要理解的是，术语“长度”、“宽度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明实施例和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多该特征。在本发明实施例的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
如图1所示，本发明提供一种植物病毒的高效富集方法，包括如下步骤：
S1：选取植物种子样品并研磨成粉末；
S2：称取一次测量所需的待测粉末并将所述待测粉末平均分成N份，得到 N份子样品粉末，所述N为正整数；
S3：在所述N份子样品粉末中的任意一份加入体积为Mml的样品抽提缓冲液，得到第一子样品溶液，所述M为正数；
S4：使所述第一子样品溶液充分混匀并离心，移取第一上清液，丢弃沉淀；
S5：将所述第一上清液定容至Mml得到混合溶液并向所述混合溶液中加入剩余的所述子样品粉末中的任意一份得到第二子样品溶液；
S6：重复步骤S4和S5至得到第N子样品溶液；
S7：将所述第N子样品溶液充分混匀并离心，移取第N上清液，丢弃沉淀，即得到富集的样品提取液。
在一种具体的实施例中，对于玉米种子的病毒检测，可以采用如上所述的方法进行植物病毒的高效富集，具体如下所示：
1.选取一定数量的玉米种子研磨成粉末，粉末的颗粒直径是5μm，在另外一种实施例中，粉末颗粒可以是3μm，最大可以是30μm。可以理解的是，粉末颗粒大小会影响粉末在抽提缓冲液中的溶解性，对于具体的种子可以选择不同的颗粒大小。利用球磨仪对植物种子样品进行研磨。
2.称取一次测量所需的待测粉末1g并分成10份子样品粉末，每份0.1g；
在另外的一种实施例中，也可以分成9份，最多可以分成12份子样品粉末。
3.取10份子样品粉末中的任意一份加入体积为0.8ml的样品抽提缓冲液，样品抽提缓冲液依据植物种子样品不同而不同，可以依据现有技术中的加入方式进行。
在其他的实施例中，也可以加入0.75ml或0.85ml的样品抽提缓冲液。
4.采用涡旋振荡器使子样品溶液混匀，然后离心得到第一上清液和沉淀。
在一种具体的实施例中，采用14000g的转速离心2min，在本发明的另一种实施例中，转速可以是11000g或16000g的转速持续混匀时间不少于2min。
5.移取第一上清液，丢弃沉淀；将第一上清液定容至0.8ml得到混合溶液并向混合溶液中加入剩余的子样品粉末中的任意一份得到第二子样品溶液；
6：对第二子样品溶液重复步骤4和步骤5，最后得到第十子样品溶液。
7.使第十子样品溶液充分混匀并离心，移取第十上清液，丢弃沉淀，即得到富集的样品提取液。
可以理解的是，采用本发明的方法不仅可以富集植物病毒，还可以富集植物病原细菌、类菌原体、植物病原真菌、植物类病毒。
本发明得到的富集的样品提取液用于血清学检测试验或分子生物学。
可以理解的是，本发明提出一种植物种子种含量很少的植物病毒的富集方法，为后续检测提供便利，防止因为植物病毒含量少而没有检测出来造成危害。本发明提出的富集方法类似于数学中复利的计算方法，将本身含量很少的植物病毒逐步富集达到一定浓度。可以理解的是，任何属于本发明的富集思想的方案都应该属于本发明的保护范围。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干等同替代或明显变型，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种植物病毒的高效富集方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：选取植物种子样品并研磨成粉末；
S2：称取一次测量所需的待测粉末并将所述待测粉末平均分成N份，得到N份子样品粉末，所述N为正整数；
S3：在所述N份子样品粉末中的任意一份加入体积为Mml的样品抽提缓冲液，得到第一子样品溶液，所述M为正数；
S4：使所述第一子样品溶液充分混匀并离心，移取第一上清液，丢弃沉淀；
S5：将所述第一上清液用所述样品抽提缓冲液定容至Mml得到混合溶液并向所述混合溶液中加入剩余的所述子样品粉末中的任意一份得到第二子样品溶液；
S6：重复步骤S4和S5至得到第N子样品溶液；
S7：将所述第N子样品溶液充分混匀并离心，移取第N上清液，丢弃沉淀，即得到富集的样品提取液。
2. 如权利要求1所述的植物病毒的高效富集方法，其特征在于，所述粉末的颗粒直径3μm -30μm。
3.如权利要求1所述的植物病毒的高效富集方法，其特征在于，称取一次测量所需的所述待测粉末1g并分成9-12份所述子样品粉末。
4.如权利要求3所述的植物病毒的高效富集方法，其特征在于，在所述9-12份子样品粉末中的任意一份加入体积为0.75ml-0.85ml的所述样品抽提缓冲液。
5.如权利要求3所述的植物病毒的高效富集方法，其特征在于，采用涡旋振荡器使所述子样品溶液混匀。
6.如权利要求5所述的植物病毒的高效富集方法，其特征在于，采用11000g-16000g的转速持续混匀时间不少于2min。
7.如权利要求1所述的植物病毒的高效富集方法，其特征在于，利用球磨仪对所述植物种子样品进行研磨。
8.如权利要求1-7任一所述的植物病毒的高效富集方法，其特征在于，所述富集的样品提取液中包括：植物病毒。
9.如权利要求1-7任一所述的植物病毒的高效富集方法，其特征在于，所述富集的样品提取液用于血清学检测试验或分子生物学试验。
10.如权利要求1-7任一所述的植物病毒的高效富集方法，其特征在于，所述样品抽提缓冲液依据植物种子样品不同而不同。
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