CN110256367B - 1,3,5-三嗪类化合物或其可药用的盐及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了具有通式(I)或通式(II)的1，3，5‑三嗪类化合物或其可药用的盐，还公开了上述化合物或其可药用的盐的制备方法及用途。本发明的化合物或其可药用的盐可用于制备治疗人乳腺癌、子宫内膜癌的药物。
Description
技术领域
本发明涉及化学药物及制备方法和用途，特别涉及一种1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐及其制备方法和用途。
背景技术
雌激素受体(ER)与其内源性的配体E2发生特异性结合后，可通过激发雌激素受体介导的相关信号通路来调控乳腺上皮细胞的增殖、分化和凋亡，如果信号通路出现异常，会引发相关基因表达紊乱，进而导致乳腺上皮细胞过度生长和繁殖，最终诱导乳腺癌的发生。ERα已被证实能够促进乳腺癌的增长和繁殖，其作为有效的乳腺癌治疗靶点一直被广泛研究。目前，选择性雌激素受体调节剂(SERMs)如Tamoxifen，Raloxifene以及选择性雌激素受体下调剂(SERDs)如Fulvestrant作为ERα调节剂，已经被批准用于ER阳性乳腺癌的治疗。然而SERMs多数存在易耐药性及引发子宫内膜癌的缺点，SERDs 存在口服生物利用度差的问题，因此，需要开发新型的ERα调节剂。
发明内容
发明目的：本发明目的是提供一种1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐。
本发明的另一目的是提供上述化合物或其可药用的盐的制备方法。
本发明的另一目的是提供一种药物组合物。
本发明的最后一个一目的是提供所述的化合物或其可药用的盐在制备治疗人乳腺癌、子宫内膜癌的药物中的用途。
技术方案：本发明提供一种具有通式(I)或通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐：
其中，
R1选自碳数为1～3的烷氧基、碳数为1～3的烷烃基、氢、羟基、三氟甲氧基或卤素；
R2选自碳数为1～3的烷氧基、碳数为1～3的烷烃基、氢、羟基、三氟甲氧基或卤素；
R3选自氢、碳数为1～3的烷烃基或甲氧基；
R4选自羟基、-XH(CH2)nOH，其中n＝1，2，3，X＝C，N，O或-XH(CH2)nCF3，其中n＝1， 2，3，X＝C，N，O。
进一步地，所述的具有通式(I)或通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，为如下任一种：
(E)-3-(4-((4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1601)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基) 丙烯酰胺(XHA1602)
(E)-3-(4-((4，6-二苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1603)
(E)-3-(4-((4，6-二苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1604)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1605)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1606)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸 (XHA1607)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3- 羟丙基)丙烯酰胺(XHA1608)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1609)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟基丙基)丙烯酰胺(XHA1610)
(E)-3-(4-((4-(4-羟基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1611)
(E)-3-(4-((4-(4-羟基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基) 丙烯酰胺(XHA1612)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-(邻甲苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1613)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1614)
(E)-3-(4-((4-(4-氯苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1615)
(E)-3-(4-((4-(4-氟苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1616)
(E)-3-(4-((4-(4-氟-2-甲基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1617)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基) 苯基)丙烯酸(XHA1618)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)丙烯酸(XHA1619)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1620)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)丙烯酸(XHA1621)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺 (XHA1622)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(2-羟基乙基)丙烯酰胺(XHA1623)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙烯酰胺(XHA1624)
一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种所述的具有通式(I)或通式(II) 的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，及药学上可接受的载体。
一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种所述的具有通式(I)或通式(II) 的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，及药学上可接受的载体。
具有通式(I)或通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐的制备方法：
a、通式(I)1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐的制备方法，包括如下步骤：
以三聚氯氰(49)为起始原料，首先与4-氨基苯丙烯酸乙酯(36)发生亲核取代反应得到中间体37，然后与取代苯硼酸发生Suzuki偶联依次得到4-苯基取代(38)和4， 6-二苯基取代的中间体(39-48)，最后酯基水解得到羧酸产物I，羧酸产物I在缩合剂 HATU和DIPEA催化下与各类烷基胺发生缩合，得到通式(I)1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐；
其中，4-氨基苯丙烯酸乙酯(36)的合成路线：
对硝基苯甲醛33与丙二酸反应得到中间体(E)-3-(4-硝基苯基)丙烯酸34，34在酸性条件下与乙醇进行酯化反应得到(E)-3-(4-硝基苯基)丙烯酸乙酯35，35与铁粉、氯化铵在85℃下反应得到36；
b、通式(II)1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐的制备方法，包括如下步骤：
以三聚氯氰(49)作为起始原料，首先与4-甲氧基苯硼酸发生两次Suzuki偶联依次得到4-苯基取代(50)和4，6-二苯基取代的中间体(51)，继而又与4-甲酰基苯硼酸发生偶联反应得到(52)，然后醛基与Wittig试剂反应得到反式丙烯酸酯中间体(53)，最后酯基水解得到羧酸产物II，羧酸产物II在缩合剂HATU和DIPEA催化下与各类烷基胺发生缩合，得到通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐。
具有通式(I)或通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐在制备治疗人乳腺癌、子宫内膜癌的药物中的用途。
有益效果：本发明的化合物或其可药用的盐对对ERα蛋白的表达表现出浓度依赖性抑制作用，对ERα具有良好的降解作用，可用于制备治疗人乳腺癌、子宫内膜癌的药物。
附图说明
图1为化合物XHA1622在MCF-7细胞中对ERα和Ki67蛋白水平的抑制作用；
图2为阳性对照Fluvestrant在MCF-7细胞中对ERα和Ki67蛋白水平的抑制作用。
具体实施方式
以下实施例中的熔点数据结果均是由X-4型数字显示显微熔点仪(北京泰克仪器有限公司)测定；终产物以及中间体的核磁谱图数据是以DMSO-d6或者CDCl3-d3为溶剂，TMS为内标，由Bruker公司的300MHz或者400MHz核磁共振仪测定；高分辨质谱(HRMS) 均是由安捷伦公司的型号为Q-TOF 6520的质谱仪测定。
化合物的合成、纯化、分离中所使用的试剂有：(1)柱层析硅胶：200或者300目硅胶均购自青岛海洋化工；(2)HSGF254型TLC薄层色谱板：购自烟台化工研究所；(3) 柱层析洗脱系统中所使用的常规溶剂如石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇等以及反应所需的化学试剂，除特殊说明外，均为市售化学纯或分析纯产品。
实施例1：(E)-3-(4-硝基苯基)丙烯酸(34)的制备
将对硝基苯甲醛33(5g，33mmol)溶于30mL吡啶中，加入丙二酸(5.15g，49.50mmol)和哌啶(3mL，33mmol)，100℃加热回流反应2h。停止加热，待反应冷却至室温，将反应液倒入冰水中，用6N盐酸调节pH至酸性，析出大量固体，抽滤得黄色固体(5.26g， 82％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：12.69(s，1H)，8.22(d，J＝8.7Hz，2H)，7.96 (d，J＝8.4Hz，2H)，7.68(d，J＝15.9Hz，1H)，6.73(d，J＝16.0Hz，1H).
实施例2：(E)-3-(4-硝基苯基)丙烯酸乙酯(35)的制备
将化合物34(5g，25.89mmol)溶于100mL乙醇中，加入5mL浓硫酸，70℃加热回流反应3h。停止加热，待反应冷却至室温，将反应液倒入冰水中，抽滤得黄色固体(5.60g，97％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3-d3)δ：8.20(d，J＝8.7Hz，2H)，7.66(dd，J＝16.1， 8.7Hz，3H)，6.53(d，J＝16.1Hz，1H)，4.25(q，J＝7.1Hz，2H)，1.31(t，J ＝7.1Hz，3H).
实施例3：(E)-3-(4-氨基苯基)丙烯酸乙酯(36)的制备
将化合物35(2.31g，10.44mmol)溶于35mL乙醇溶液中，加入还原铁粉(1.75g，31.32mmol)、NH4Cl(0.29g，5.43mmol)和9mL水，85℃加热回流反应1h。趁热用硅藻土抽滤，滤饼用250ml乙醇∶二氯甲烷＝1∶1的混合溶剂洗涤，滤液减压蒸馏除掉溶剂后加水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，减压浓缩得橙红色固体(2.10g，100％)。1H-NMR (300MHz，CDCl3-d3)δ：7.61(d，J＝15.9Hz，1H)，7.35(d，J＝8.4Hz，2H)，6.65 (d，J＝8.4Hz，2H)，6.24(d，J＝15.9Hz，1H)，4.25(q，J＝7.1Hz，2H)，3.98 (s，2H)，1.33(t，J＝7.1Hz，3H).
实施例4：(E)-3-(4-(4，6-二氯-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸乙酯(37)的制备
将三聚氯氰(0.50g，2.71mmol)溶于5mL丙酮溶液，控制该反应液温度在0-5℃，同时缓慢滴加5.2ml化合物36的丙酮溶液(0.52g，2.71mmol)和20％Na2CO3水溶液 (0.29g，2.71mmol)，2h滴加完毕后，将反应液倒入水中，抽滤得粗品，丙酮打浆得到淡黄色纯品(0.70g，76％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3-d3)δ：7.61(dt，J＝14.9， 8.7Hz，6H)，6.41(d，J＝16.0Hz，1H)，4.27(q，J＝7.1Hz，2H)，1.34(t，J ＝7.1Hz，3H).
实施例5：(E)-3-(4-((4-氯-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸乙酯(38)的制备
将化合物37(0.30g，0.88mmol)溶于3mL甲苯溶液，加入4-甲氧基苯硼酸(0.15g，0.97mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(2mg，2.64μmol)、2M K2CO3水溶液(0.24g，1.76mmol)， N2保护下60℃加热反应6h。停止加热，待反应液冷却至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1， (0.27g，75％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3-d3)δ：8.42(d，J＝8.4Hz，2H)，7.78- 7.63(m，3H)，7.59(d，J＝7.4Hz，3H)，7.01(d，J＝8.7Hz，2H)，6.43(d，J ＝16.0Hz，1H)，4.30(q，J＝7.1Hz，2H)，3.92(s，3H)，1.37(t，J＝7.1Hz， 3H).
实施例6：(E)-3-(4-((4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸乙酯(39)的制备
将化合物37(0.70g，2mmol)溶于7mL甲苯溶液，加入4-甲氧基苯硼酸(0.69g，4.50mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(4.20mg，6μmol)、2M K2CO3水溶液(0.55g，4mmol)，N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应液冷却至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1， (0.70g，73％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.44(s，1H)，8.51(d，J＝8.8 Hz，4H)，7.97(d，J＝8.5Hz，2H)，7.77(d，J＝8.6Hz，2H)，7.64(d，J＝16.1 Hz，1H)，7.14(d，J＝8.9Hz，4H)，6.56(d，J＝16.0Hz，1H)，4.19(q，J＝7.1 Hz，2H)，3.88(s，6H)，1.26(t，J＝7.1Hz，3H).
实施例7：(E)-3-(4-((4，6-二苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸乙酯(40) 的制备
采用化合物39的合成方法制备化合物40，将化合物37(0.70g，2mmol)溶于7mL 甲苯溶液，加入苯硼酸(0.54g，4.50mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(4.20mg，6μmol)、2M K2CO3水溶液(0.55g，4mmol)，N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应液冷却至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1，得到白色固体(0.58g，80％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6) δ：10.59(s，1H)，8.55(d，J＝7.4Hz，4H)，7.97(d，J＝8.3Hz，2H)，7.77(d， J＝8.3Hz，2H)，7.61(dd，J＝15.3，7.9Hz，7H)，6.55(d，J＝16.0Hz，1H)， 4.18(q，J＝7.0Hz，2H)，1.25(t，J＝7.1Hz，3H).
实施例8：(E)-3-(4-((4，6-双(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基) 丙烯酸乙酯(41)的制备
采用化合物39的合成方法制备化合物41，将化合物37(0.70g，2mmol)溶于7mL 甲苯溶液，加入4-三氟甲基苯硼酸(0.85g，4.50mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(4.20mg，6μmol)、2M K2CO3水溶液(0.55g，4mmol)，N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应液冷却至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1，得到白色固体(0.45g，52％)。1H-NMR(400MHz， DMSO-d6)δ：10.70(s，1H)，8.63(d，J＝8.9Hz，4H)，7.93(d，J＝8.7Hz，2H)， 7.76(d，J＝8.7Hz，2H)，7.64(d，J＝15.9Hz，1H)，7.59(d，J＝8.1Hz，4H)， 6.56(d，J＝16.0Hz，1H)，4.20(q，J＝7.1Hz，2H)，1.27(t，J＝7.1Hz，3H).
实施例9：(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸乙酯(42)的制备
将化合物38(0.43g，1.05mmol)溶于5mL甲苯溶液中，依次加入苯硼酸(0.14g，1.15mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(2mg，3.15μmol)、2M K2CO3水溶液(0.29g，2.10mmol)， N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应温度降至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1， (0.35g，73％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.51(s，1H)，8.51-8.56(m，4H)， 7.98(d，J＝8.6Hz，2H)，7.78(d，J＝8.5Hz，2H)，7.59-7.67(m，4H)，7.16(d，J＝8.7 Hz，2H)，6.57(d，J＝16.0Hz，1H)，4.19(q，J＝7.0Hz，2H)，3.86(s，3H)，1.27 (t，J＝7.1Hz，3H).
实施例10：(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-(邻甲苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基) 苯基)丙烯酸乙酯(43)的制备
采用化合物42的合成方法制备化合物43，将化合物38(0.2g，0.48mmol)溶于5mL甲苯溶液中，依次加入2-甲基苯硼酸(0.07g，0.52mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.91mg， 1.44μmol)、2M K2CO3水溶液(0.13g，0.96mmol)，N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应温度降至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1，得到白色固体(0.17g，88％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.45(s，1H)，8.42(d，J＝8.7Hz，2H)，8.14- 8.04(m，1H)，7.91(d，J＝7.7Hz，2H)，7.73(d，J＝7.7Hz，2H)，7.61(d，J ＝16.0Hz，1H)，7.21(t，J＝9.4Hz，3H)，7.12(d，J＝8.8Hz，2H)，6.53(d， J＝15.9Hz，1H)，4.18(q，J＝7.1Hz，2H)，3.86(s，3H)，2.69(s，3H)，1.25 (t，J＝7.0Hz，3H).
实施例11：(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪 -2-基)氨基)苯基)丙烯酸乙酯(44)的制备
采用化合物42的合成方法制备化合物44，将化合物38(0.2g，0.48mmol)溶于5mL甲苯溶液中，依次加入4-甲氧基-2-甲基苯硼酸(0.086g，0.52mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.91mg，1.44μmol)、2M K2CO3水溶液(0.13g，0.96mmol)，N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应温度降至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1，得到白色固体(0.19g，83％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.38(s，1H)，8.45(d，J＝8.6 Hz，2H)，8.15(d，J＝8.4Hz，1H)，7.95(d，J＝8.2Hz，2H)，7.76(d，J＝8.1 Hz，2H)，7.64(d，J＝16.1Hz，1H)，7.15(d，J＝8.8Hz，2H)，6.96(d，J＝8.7 Hz，2H)，6.56(d，J＝16.1Hz，1H)，4.20(q，J＝7.1Hz，2H)，3.88(s，3H)，3.85 (s，3H)，2.75(s，3H)，1.30-1.20(t，J＝7.1Hz，3H).
实施例12：(E)-3-(4-((4-(4-氯苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基) 苯基)丙烯酸乙酯(45)的制备
采用化合物42的合成方法制备化合物45，将化合物38(0.2g，0.48mmol)溶于5mL甲苯溶液中，依次加入4-氯苯硼酸(0.081g，0.52mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.91mg， 1.44μmol)、2M K2CO3水溶液(0.13g，0.96mmol)，N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应温度降至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1，得到白色固体(0.18g，68％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3-d3)δ：8.71-8.46(m，4H)，7.81(d，J＝8.7Hz，2H)， 7.69(d，J＝15.7Hz，1H)，7.60(d，J＝8.5Hz，2H)，7.50(d，J＝8.7Hz，2H)， 7.41(s，1H)，7.04(d，J＝9.1Hz，2H)，6.41(d，J＝16.1Hz，1H)，4.28(q，J＝7.1Hz，2H)，3.91(s，3H)，1.35(t，J＝7.0Hz，3H).
实施例13：(E)-3-(4-((4-(4-氟苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基) 苯基)丙烯酸乙酯(46)的制备
采用化合物42的合成方法制备化合物46，将化合物38(0.2g，0.48mmol)溶于5mL甲苯溶液中，依次加入4-氟苯硼酸(0.072g，0.52mmol)、Pd(PPha)2Cl2(0.91mg， 1.44μmol)、2M K2CO3水溶液(0.13g，0.96mmol)，N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应温度降至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1，得到白色固体(0.17g，99％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.50(s，1H)，8.67-8.54(m，2H)，8.51(d，J ＝8.7Hz，2H)，7.95(d，J＝8.5Hz，2H)，7.77(d，J＝8.5Hz，2H)，7.64(d，J ＝15.9Hz，1H)，7.43(t，J＝8.8Hz，2H)，7.14(d，J＝8.8Hz，2H)，6.55(d， J＝16.0Hz，1H)，4.19(q，J＝7.1Hz，2H)，3.88(s，3H)，1.25(q，J＝7.0Hz， 3H).
实施例14：(E)-3-(4-((4-(4-氟-2-甲基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2- 基)氨基)苯基)丙烯酸乙酯(47)的制备
采用化合物42的合成方法制备化合物47，将化合物38(0.2g，0.48mmol)溶于5mL甲苯溶液中，依次加入2-甲基4-氟苯硼酸(0.079g，0.52mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.91mg， 1.44μmol)、2M K2CO3水溶液(0.13g，0.96mmol)，N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应温度降至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1，得到白色固体(0.28g，80％)。
实施例15：(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪 -2-基)氨基)苯基)丙烯酸乙酯(48)的制备
采用化合物42的合成方法制备化合物48，将化合物38(0.2g，0.48mmol)溶于5mL甲苯溶液中，依次加入4-三氟甲基苯硼酸(0.098g，0.52mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.91mg， 1.44μmol)、2M K2CO3水溶液(0.13g，0.96mmol)，N2保护下100℃加热回流6h。停止加热，待反应温度降至室温，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝2∶1，得到白色固体(0.28g，74％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3-d3)δ：8.63(d，J＝8.9Hz，2H)，8.56(d，J＝8.9Hz，2H)， 7.82(d，J＝8.7Hz，2H)，7.71(d，J＝15.8Hz，1H)，7.61(d，J＝8.7Hz，2H)， 7.44(s，1H)，7.37(d，J＝8.1Hz，2H)，7.05(d，J＝8.9Hz，2H)，6.43(d，J ＝15.9Hz，1H)，4.29(q，J＝7.2Hz，2H)，3.93(s，3H)，1.36(t，J＝7.1Hz， 3H).
实施例16：(E)-3-(4-((4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1601)的制备
将化合物39(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到淡黄色纯品(0.16g，88％)。mp：238-240℃. 1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.40(s，1H)，8.49(d，J＝8.4Hz，4H)，7.95(d， J＝8.1Hz，2H)，7.71(d，J＝7.8Hz，2H)，7.54(d，J＝15.9Hz，1H)，7.13(d， J＝8.4Hz，4H)，6.47(d，J＝15.7Hz，1H)，3.87(s，6H).13C-NMR(101MHz，DMSO-d6) δ：170.11，168.64，164.18，162.69，142.75，141.06，130.50，130.14，128.72， 128.24，120.05，118.43，113.96，55.36.HRMS(ESI)m/z calcd forC26H22N4O4 [M+H]+455.1720，found 455.1714.
实施例17：(E)-3-(4-((4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1602)的制备
将化合物XHA1601(0.09g，0.2mmol)和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入丙醇胺(0.045ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA(0.1ml，0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得白色絮状纯品。(0.06g，59％)。mp： 230-232℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.34(s，1H)，8.48(d，J＝8.0Hz，4H)， 8.07(t，J＝5.7Hz，1H)，7.94(d，J＝7.7Hz，2H)，7.60(d，J＝7.4Hz，2H)， 7.41(d，J＝15.1Hz，1H)，7.12(d，J＝8.1Hz，4H)，6.57(d，J＝15.7Hz，1H)， 4.52(t，J＝5.2Hz，1H)，3.86(s，6H)，3.45(q，6.0Hz，2H)，3.25(q，6.7Hz，2H)，1.62(p，J＝6.5Hz，2H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)6：170.64，165.75，164.70， 163.21，140.89，138.64，130.67，129.58，128.74，128.67，120.96，120.75，114.53， 58.91，55.90，36.40，32.97.HRMS(ESI)m/z calcd for C29H29N5O4[M+H]+512.2299，found 512.2301.
实施例18：(E)-3-(4-((4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1605)的制备
将化合物XHA1601(0.2g，0.44mmol)溶于9ml无水二氯甲烷中，冰盐浴下加入3mol/L的BBr3/CH2Cl2溶液(1.45mL，4.4mmol)，室温下反应6h后，倒入冰水中，加入1M NaOH水溶液调节pH至5-6。减压蒸馏除去二氯甲烷，乙酸乙酯萃取，减压浓缩， PE/FA混合溶剂重结晶得黄色纯品(0.13g，70％)。mp：274-276℃.1H-NMR(300MHz， DMSO-d6)δ：10.31(s，2H)，8.42(d，J＝7.9Hz，4H)，7.98(d，J＝7.6Hz，2H)， 7.74(d，J＝7.9Hz，2H)，7.58(d，J＝15.8Hz，1H)，6.96(d，J＝7.9Hz，4H)， 6.47(d，J＝15.6Hz，1H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.23，167.78，164.21， 161.48，143.67，141.42，130.37，129.00，128.03，126.69，119.91，117.07，115.43. HRMS(ESI)m/z calcd for C24H18N404[M+H]+427.1407，found427.1401.
实施例19：(E)-3-(4-((4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1606)的制备
采用化合物XHA1602的合成方法制备XHA1606，将化合物XHA1605(0.085g，0.2mmol) 和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入丙醇胺(0.045ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA(0.1ml，0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得白色絮状纯品。得到黄色固体(0.12g，75％)。mp：270-272℃.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6) δ：10.27(s，1H)，10.25(s，2H)，8.42(d，J＝8.8Hz，4H)，8.08(t，J＝5.7 Hz，1H)，7.96(d，J＝8.7Hz，2H)，7.62(d，J＝8.7Hz，2H)，7.42(d，J＝15.7 Hz，1H)，6.97(d，J＝8.8Hz，4H)，6.59(d，J＝15.7Hz，1H)，4.52(t，J＝5.2 Hz，1H)，347(q，5.7Hz，2H)，3.26(q，6.7Hz，2H)，1.64(p，J＝6.5Hz，2H).13C-NMR (101MHz，DMSO-d6)δ：170.24，165.29，164.22，161.46，140.59，138.19，130.37， 129.16，128.14，126.77，120.29，120.16，115.43，58.45，35.92，32.47.HRMS(ESI)m/z calcd for C27H25N5O4[M+H]+484.1986，found 484.1985.
实施例20：(E)-3-(4-((4，6-二苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1603)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1603，将化合物40(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到淡黄色纯品(0.16g，88％)得到黄色固体(0.34g，91％)。mp：271-272℃.1H-NMR(300MHz， DMSO-d6)δ：10.50(s，1H)，8.50(d，J＝6.8Hz，4H)，7.92(d，J＝8.0Hz，2H)， 7.49-7.69(m，9H)，6.48(d，J＝15.8Hz，1H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：171.27， 164.91，142.72，142.46，142.42，141.02，136.32，132.92，129.85，129.19，129.13， 128.80，120.79.HRMS(ESI)m/z calcd forC24H18N402[M+H]+395.1509，found395.1503.
实施例21：(E)-3-(4-((4，6-二苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基) 丙烯酰胺(XHA1604)的制备
采用化合物XHA1602的合成方法制备XHA1604，将化合物XHA1603(0.09g，0.2mmol)和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入丙醇胺 (0.045ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA(0.1ml， 0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得到白色固体(0.14g，66％)。mp：210-211℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.50(s， 1H)，8.52(d，J＝6.6Hz，4H)，8.03(t，J＝5.7Hz，1H)，7.93(d，J＝8.4Hz，2H)， 7.58-7.60(m，8H)，7.40(d，J＝15.7Hz，1H)，6.56(d，J＝15.7Hz，1H)，4.45(t， J＝5.1Hz，1H)，343(q，5.7Hz，2H)，3.22(q，6.8Hz，2H)，1.60(p，J＝6.5 Hz，2H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：171.28，165.70，164.92，140.64，138.57， 136.33，132.94，130.12，129.22，128.82，128.63，121.18，120.95，58.93，36.42，32.98.HRMS(ESI)m/z calcd for C27H25N5O2[M+H]+452.2087，found 452.2073.
实施例22：(E)-3-(4-((4，6-双(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基) 丙烯酸(XHA1607)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1607，将化合物41(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到黄色固体(0.34g，82％)。mp：240-242℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.54(s，1H)，8.49(d， J＝8.5Hz，4H)，7.82(d，J＝8.3Hz，2H)，7.61(d，J＝8.3Hz，2H)，7.44-7.47(m，4H)， 6.39(d，J＝15.9Hz，1H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.10，168.62，164.73， 151.77，143.48，141.01，135.13，130.94，129.61，129.27，122.17，121.22，120.85， 118.76.HRMS(ESI)m/z calcd for C26H16F6N4O4[M+H]+563.1155，found 563.1153.
实施例23：(E)-3-(4-((4，6-双(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1608)的制备
采用化合物XHA1602的合成方法制备XHA1608，将化合物XHA1607(0.09g，0.2mmol)和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入丙醇胺 (0.045ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA(0.1ml， 0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得到白色固体(0.12g，64％)。mp：246-248℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.61(s， 1H)，8.59(d，J＝8.4Hz，4H)，8.08(t，J＝5.7Hz，1H)，7.89(d，J＝8.1Hz，2H)， 7.53-7.61(m，6H)，7.42(d，J＝15.7Hz，1H)，6.59(d，J＝15.7Hz，1H)，4.50(t，J ＝5.1Hz，1H)，347(q，5.7Hz，2H)，3.25(q，6.8Hz，2H)，1.64(p，J＝6.5Hz， 2H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：169.63，165.16，164.24，151.28，139.82，138.03， 134.67，130.47，129.78，128.08，121.68，120.75，120.56，118.26，58.41，35.90， 32.47.HRMS(ESI)m/z calcd for C29H23F6N5O4[M+H]+620.1733，found 620.1738.
实施例24：(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基) 丙烯酸(XHA1609)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1609，将化合物42(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到黄色固体(0.50g，97％)。mp：234-236℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.38(s，1H)， 8.41-8.47(m，4H)，7.89(d，J＝8.3Hz，2H)，7.64(d，J＝8.3Hz，2H)，7.47-7.54(m，4H)， 7.05(d，J＝8.6Hz，2H)，6.41(d，J＝16.0Hz，1H)，3.79(s，3H).13C-NMR(75MHz， DMSO-d6)δ：171.04，170.88，168.89，164.81，163.32，143.34，141.43，136.46， 132.80，130.74，129.37，129.30，129.15，128.75，128.58，120.65，118.85，114.56， 55.91.HRMS(ESI)m/z calcd for C25H20N4O3[M+H]+425.1614，found 425.1614.
实施例25：(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟基丙基)丙烯酰胺(XHA1610)的制备
采用化合物XHA1602的合成方法制备XHA1610，将化合物XHA1609(0.09g，0.2mmol)和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入丙醇胺 (0.045ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA(0.1ml， 0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得到白色固体(0.20g，57％)。mp：226-228℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.39(s， 1H)，8.47-8.52(m，4H)，8.04(t，J＝5.5Hz，1H)，7.93(d，J＝8.5Hz，2H)，7.59(d， J＝8.3Hz，4H)，7.40(d，J＝15.7Hz)，7.11(d，J＝8.7Hz)，6.56(d，J＝15.7Hz)，4.50(t， J＝5.1Hz，1H)，3.84(s，3H)，345(q，5.7Hz，2H)，3.23(q，6.8Hz，2H)，1.61(p， J＝6.5Hz，2H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.52，170.41，165.32，164.28， 162.83，140.27，138.10，136.99，132.28，130.32，130.29，129.51，128.74，128.23， 127.98，120.59，120.43，114.11，58.50，55.41，35.92，32.49.HRMS(ESI)m/z calcd for C28H27N5O3[M+H]+482.2193，found 482.2187.
实施例26：(E)-3-(4-((4-(4-羟基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1611)的制备
采用化合物XHA1605的合成方法制备XHA1611，将化合物XHA1609(0.2g，0.44mmol)溶于9ml无水二氯甲烷中，冰盐浴下加入3mol/L的BBr3/CH2Cl2溶液(1.45mL， 4.4mmol)，室温下反应6h后，倒入冰水中，加入1M NaOH水溶液调节pH至5-6。减压蒸馏除去二氯甲烷，乙酸乙酯萃取，减压浓缩，PE/EA混合溶剂重结晶得到黄色固体 (0.35g，80％)。mp：274-276℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.40(s，1H)，8.46 (d，J＝6.9Hz，2H)，8.36(d，J＝7.3Hz，2H)，7.90(d，J＝6.4Hz，2H)，7.67 (d，J＝6.9Hz，2H)，7.61-7.29(m，4H)，6.89(d，J＝6.2Hz，2H)，6.40(d， J＝15.0Hz，1H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.03，167.69，165.69，163.98，161.71，143.27，141.15，135.54，132.11，130.53，128.97，128.69，128.62，128.23，126.44，120.06，117.42，115，53.HRMS(ESI)m/z calcd for C24H18N4O3[M+H]+411.1458，found 411.1458.
实施例27：(E)-3-(4-((4-(4-羟基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1612)的制备
采用化合物XHA1602的合成方法制备XHA1612，将化合物XHA1611(0.09g，0.2mmol)和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入丙醇胺 (0.045ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA(0.1ml， 0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得到白色固体(0.15g，67％)。mp：240-242℃.1H-NMR((300MHz，DMSO-d6)δ：10.36(s，1H)，10.25(s，1H)，8.46(d，J＝6.7Hz，2H)，8.36(d，J＝8.3Hz，2H)，8.03 (s，1H)，7.88(d，J＝8.1Hz，2H)，7.54(s，5H)，7.34(d，J＝15.6Hz，1H)，6.89 (d，J＝8.2Hz，2H)，6.51(d，J＝15.3Hz，1H)，4.46(t，J＝5.2Hz，1H)，3.38 (q，J＝5.8Hz，2H)，3.17(q，J＝6.7Hz，2H)，1.55(p，J＝6.5Hz，2H).13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.30，165.23，164.31，161.66，161.61，140.37，138.12， 136.04，132.25，130.50，129.36，128.66，128.23.128.15，126.50，120.51，120.29， 115.51，58.42，35.90，32.47.HRMS(ESI)m/z calcd for C27H25N5O3[M+H]+468.2036，found 468.2034.
实施例28：(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-(邻甲苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基) 苯基)丙烯酸(XHA1613)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1613，将化合物43(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到黄色固体(0.15g，76％)。mp：＞280℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.28(s，1H)，8.35 (d，J＝7.3Hz，2H)，7.94(d，J＝7.2Hz，1H)，7.83(d，J＝7.7Hz，2H)，7.56-7.50 (m，3H)，7.38(d，J＝6.5Hz，1H)，7.30(d，J＝7.5Hz，2H)，7.04(d，J＝6.5Hz， 2H)，6.53(d，J＝15.4Hz，1H)，3.81(s，3H)，2.61(s，3H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6) δ：174.03，173.15，170.33，164.42，163.15，140.30，139.61，138.12，136.82， 131.80，131.67，130.71，130.59，128.72，128.67，128.37，126.19，124.88，120.77， 114.46，55.81，21.92.HRMS(ESI)m/z calcd for C26H22N4O3[M+H]+439.1771，found 439.1770.
实施例29：(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1614)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1614，将化合物44(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到黄色固体(0.09g，65％)。mp：230-232℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.35(s，1H)， 8.43(d，J＝8.5Hz，2H)，8.12(d，J＝8.4Hz，1H)，7.92(d，J＝8.0Hz，2H)， 7.69(d，J＝8.1Hz，2H)，7.53(d，J＝15.9Hz，1H)，7.13(d，J＝8.7Hz，2H)， 6.94(d，J＝9.5Hz，2H)，6.44(d，J＝15.7Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.83(s，3H)， 2.72(s，3H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：173.47，170.28，168.68，164.46，163.19，161.50，143.48，141.54，141.03，132.97，130.68，130.61，129.27，129.20，128.81，120.58，118.55，117.29，114.58，111.84，55.88，55.69，22.95.HRMS(ESI)m/z calcd for C27H24N4O4[M+H]+469.1877，found 469.1876.
实施例30：(E)-3-(4-((4-(4-氯苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基) 苯基)丙烯酸(XHA1615)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1615，将化合物45(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到黄色固体(0.12g，59％)。mp：＞280℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.26(s，1H)，8.36-8.32 (m，4H)，7.80(d，J＝7.3Hz，2H)，7.62-7.44(m，4H)，6.99(d，J＝7.9Hz， 2H)，6.54(d，J＝15.6Hz，1H)，3.80(s，3H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.77， 170.67，169.80，164.53，163.18，140.55，140.46，137.42，135.27，130.63，130.40， 130.30，129.06，128.56，128.42，123.61，120.70，114.33，55.80.HRMS(ESI)m/z calcd for C25H19ClN4O3[M+H]+459.1225，found 459.1214.
实施例31：(E)-3-(4-((4-(4-氟苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基) 苯基)丙烯酸(XHA1616)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1616，将化合物46(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到黄色固体(0.08g，57％)。mp：250-252℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.49(s，1H)， 8.53(t，J＝8.8Hz，2H)，8.52(d，J＝8.5Hz，2H)，7.95(d，J＝8.5Hz，2H)， 7.72(d，J＝8.2Hz，2H)，7.54(d，J＝16.2Hz，1H)，7.44(t，J＝8.8Hz，2H)， 7.15(d，J＝8.6Hz，2H)，6.48(d，J＝16.1Hz，1H)，3.88(s，3H).13C-NMR(75 MHz，DMSO-d6)δ：170.83，170.00，168.84，166.92，164.70，163.61，163.32，143.01，141.28，132.94，131.32，131.21，130.73，129.49，129.21，128.49，120.66，119.26，116.28，115.99，114.52，55.88.HRMS(ESI)m/z calcd for C25H19FN4O3 [M+H]+443.1520，found 443.1511
实施例32：(E)-3-(4-((4-(4-氟-2-甲基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2- 基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1617)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1617，将化合物47(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到黄色固体(0.11g，61％)。mp：248-250℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.45(s，1H)， 8.43(d，J＝7.8Hz，2H)，8.10(t，J＝8.8Hz，1H)，7.91(d，J＝7.8Hz，2H)， 7.70(d，J＝7.6Hz，2H)，7.54(d，J＝16.1Hz，1H)，7.23(d，J＝9.1Hz，2H)， 7.13(d，J＝8.2Hz，2H)，6.45(d，J＝15.6Hz，1H)，3.86(s，3H)，2.69(s， 3H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：172.68，169.71，168.01，163.97，162.81，161.37，143.26，141.37，141.26，140.93，132.86，132.79，132.68，130.20，128.84，128.77，128.08，120.15，118.00，117.72，114.12，112.88，112.60，55.39，21.63.HRMS(ESI) m/zcalcd for C26H21FN4O3[M+H]+457.1677，found 457.1674.
实施例33：(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪 -2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1618)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1618，将化合物48(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到黄色固体(0.15g，70％)。mp：248-250℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.53(s，1H)， 8.64(d，J＝8.6Hz，2H)，8.51(d，J＝8.6Hz，2H)，7.94(d，J＝8.6Hz，2H)， 7.72(d，J＝8.4Hz，2H)，7.65-7.43(m，3H)，7.15(d，J＝8.8Hz，2H)，6.47 (d，J＝16.0Hz，1H)，3.88(s，3H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.43，169.30， 168.55，164.20，162.87，151.12，142.70，140.74，134.99，130.37，130.25，128.99， 128.71，127.90，121.69，120.71，120.21，118.28，114.02，55.38.HRMS(ESI)m/zcalcd for C26H19F3N4O4[M+H]+509.1437，found 509.1437.
实施例34∶2，4-二氯-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪(50)的制备
将化合物49(2g，10.85mmol)溶于40mL甲苯溶液，加入4-甲氧基苯硼酸(1.10g，7.23mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(25mg，36.15μmol)、K2CO3(4g，28.92mmol)，N2保护下60℃加热反应12h。减压浓缩除去甲苯，向反应液中加水，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝5∶1。(0.81g，44％)。1H-NMR(300 MHz，CDCl3-d3)6：8.46(d，J＝9.0Hz，2H)，7.00(d，J＝9.0Hz，2H)，3.93(s，3H).
实施例35：2-氯-4，6-二(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪(51)的制备
将化合物50(0.81g，3.16mmol)溶于9mL甲苯溶液，加入4-甲氧基苯硼酸(0.53g，3.48mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(7mg，10.08μmol)、2M K2CO3水溶液(0.87g，6.72mmol)， N2保护下60℃加热反应6h。减压浓缩除去甲苯，向反应液中加水，二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品，流动相体系：PE∶DCM＝5∶1。(0.80g，67％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3-d3)δ：8.56(d，J＝8.4Hz，4H)，7.04(d，J＝8.4 Hz，4H)，3.93(s，6H).
实施例36：4-(4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯甲醛(52)的制备
将化合物51(0.80g，2.41mmol)溶于8mLDMF溶液，加入4-甲酰基苯硼酸(0.40g，3.48mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(15mg，24.10μmol)、2M K2CO3水溶液(0.67g，4.82mmol)， N2保护下120℃加热回流6h。向反应液中加水，乙酸乙酯萃取，收集有机相，减压浓缩，柱层析分离得白色纯品(流动相体系：PE∶DCM＝2∶1)(0.50g，74％)。1H-NMR(300MHz， DMSO-d6)δ10.11(s，1H)，8.76(d，J＝8.2Hz，2H)，8.57(d，J＝8.8Hz，4H)， 8.07(d，J＝8.2Hz，2H)，7.10(d，J＝8.9Hz，4H)，3.86(s，6H).
实施例37：(E)-3-(4-(4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)丙烯酸乙酯 (53)的制备
将化合物52(0.50g，1.26mmol)溶于13ml无水二氯甲烷溶液，加入乙氧甲酰基亚甲基三苯基膦(0.57g，1.64mmol)N2保护下室温反应16h。减压浓缩，柱层析分离得白色纯品(流动相体系：PE∶DCM＝2∶1)(0.50g，85％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3-d3)δ：8.78 -8.72(m，6H)，7.80(d，J＝16.1Hz，1H)，7.72(d，J＝8.3Hz，2H)，7.08(d， J＝8.8Hz，4H)，6.59(d，J＝15.9Hz，1H)，4.32(q，J＝7.2Hz，2H)，3.95(s， 6H)，1.39(t，J＝7.1Hz，3H).
实施例38：(E)-3-(4-(4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)丙烯酸(XHA1619)的制备
采用化合物XHA1601的合成方法制备XHA1619，将化合物53(0.2g，0.4mmol)溶于6ml四氢呋喃溶液中，加入2ml KOH甲醇溶液(0.11g，2mmol)，60℃加热回流3.5h。将反应液倒入水中，用1N盐酸调节PH至5-6，抽滤得粗品，二氯甲烷打浆得到黄色固体(0.49g，84％)。mp：238-240℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：8.66-8.61(m， 6H)，7.88(d，J＝8.2Hz，2H)，7.65(d，J＝16.4Hz，1H)，7.13(d，J＝8.8Hz， 4H)，6.69(d，J＝16.0Hz，1H)，3.87(s，6H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.59， 170.06，168.15，163.51，142.72，138.74，137.18，130.90，129.18，128.75，128.14， 122.41，114.52，55.84.HRMS(ESI)m/z calcd for C26H21N3O4[M+H]+440.1611， found440.1606.
实施例39：(E)-3-(4-(4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1620)的制备
采用化合物XHA1602的合成方法制备XHA1620，将化合物XHA1619(0.09g，0.2mmol)和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入丙醇胺(0.045ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA(0.1ml， 0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得到白色固体(0.13g，67％)。mp：230-232℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：8.91- 8.39(m，6H)，8.18(t，J＝5.3Hz，1H)，7.71(d，J＝8.1Hz，2H)，7.47(d，J ＝15.7Hz，1H)，7.07(d，J＝8.3Hz，4H)，6.74(d，J＝15.8Hz，1H)，4.47(t， J＝5.1Hz，1H)，3.83(s，6H)，3.43(q，J＝5.7Hz，2H)，3.23(q，J＝6.3Hz， 2H)，1.61(p，J＝6.5Hz，2H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.22，169.79，164.69，163.12，138.99，137.49，136.17，130.51，128.93，127.79，127.70，124.23，114.15， 58.42，55.43，36.00，32.39.HRMS(ESI)m/z calcd for C29H28N4O4[M+H]+497.2190，found497.2183.
实施例40：(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)丙烯酸(XHA1621)的制备
采用化合物XHA1605的合成方法制备XHA1621，将化合物XHA1619(0.2g，0.44mmol)溶于9ml无水二氯甲烷中，冰盐浴下加入3mol/L的BBr3/CH2Cl2溶液(1.45mL，4.4mmol)，室温下反应6h后，倒入冰水中，加入1M NaOH水溶液调节pH至5-6。减压蒸馏除去二氯甲烷，乙酸乙酯萃取，减压浓缩，PE/EA混合溶剂重结晶得到黄色固体(0.21g，50％)。 mp：＞280℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：12.53(s，1H)，10.33(s，2H)，8.67(d， J＝7.9Hz，2H)，8.57(d，J＝8.1Hz，4H)，7.91(d，J＝7.6Hz，2H)，7.71(d， J＝15.9Hz，1H)，6.99(d，J＝8.2Hz，4H)，6.70(d，J＝15.9Hz，1H).13C-NMR(75 MHz，DMSO-d6)δ：170.38，169.26，167.37，162.00142.63，137.91，137.12，130.79， 128.80，128.52，126.19，121.16，115.65.HRMS(ESI)m/z calcdfor C24H17N3O4 [M+H]+412.1298，found 412.1295.
实施例41：(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(3-羟丙基) 丙烯酰胺(XHA1622)的制备
采用化合物XHA1602的合成方法制备XHA1622，将化合物XHA1621(0.09g，0.2mmol)和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入丙醇胺 (0.045ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA(0.1ml， 0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得到白色固体(0.12g，60％)。mp：＞280℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：10.34(s，2H)， 8.69(d，J＝7.6Hz，2H)，8.58(d，J＝8.1Hz，4H)，8.22(t，J＝5.7Hz，1H)，7.80 (d，J＝7.6Hz，2H)，7.54(d，J＝15.8Hz，1H)，7.00(d，J＝8.1Hz，4H)，6.81 (d，J＝15.9Hz，1H)，4.50(t，J＝5.2Hz，1H)，3.48(q，J＝5.9Hz，2H)，3.27(q，J＝6.5Hz，2H)，1.66(p，J＝6.2Hz，2H).13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ：170.38，169.39， 164.69，162.01，138.96，137.42，136.37，130.77，128.96，127.82，126.23，124.16， 115.66，58.41，35.99，32.39.HRMS(ESI)m/z calcd for C27H24N4O4[M+H]+469.1877，found 469.1875.
实施例42：(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(2-羟基乙基)丙烯酰胺(XHA1623)的制备
采用化合物XHA1602的合成方法制备XHA1623，将化合物XHA1621(0.09g，0.2mmol)和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入乙醇胺 (0.036ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA(0.1ml， 0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得到红色固体(0.22g，78％)。mp：248-250℃.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：10.41(s， 2H)，8.71(d，J＝8.4Hz，2H)，8.59(d，J＝8.8Hz，4H)，8.29(t，J＝5.7Hz， 1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，2H)，7.55(d，J＝15.7Hz，1H)，7.00(d，J＝8.8Hz， 4H)，6.87(d，J＝15.8Hz，1H)，4.80(s，1H)，3.49(t，J＝5.9Hz，2H)，3.30 (t，J＝5.8Hz，2H).13C-NMR(101MHz，DMSO-d6)δ：170.91，170.20，165.35，162.63， 139.46，138.08，136.97，131.27，129.45，128.31，126.70，124.85，116.19，60.40，42.27.HRMS(ESI)m/z calcd for C26H22N4O4[M+H]+455.1720，found 455.1722.
实施例43：(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙烯酰胺(XHA1624)的制备
采用化合物XHA1602的合成方法制备XHA1624，将化合物XHA1621(0.09g，0.2mmol)和HATU(0.114g，0.3mmol)溶于1.5ml无水DMF中，室温下搅拌10min，加入2，2， 2-三氟乙胺(0.047ml，0.6mmol)，继续搅拌20min，待反应液变为黄色，缓慢滴加DIPEA (0.1ml，0.6mmol)，室温反应5h。将反应液倒入水中，抽滤得粗品，THF/PE混合溶剂重结晶得到白色固体(0.11g，58％)。mp：＞280℃.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ： 10.35(s，2H)，8.89(t，J＝6.4Hz，1H)，8.72(d，J＝8.5Hz，2H)，8.59(d，J ＝8.8Hz，4H)，7.84(d，J＝8.3Hz，2H)，7.65(d，J＝15.8Hz，1H)，6.99(d， J＝8.8Hz，4H)，6.87(d，J＝15.9Hz，1H)，4.14-4.02(m，2H).13C-NMR(75MHz， DMSO-d6)δ：170.88，170.12，165.83，162.53，139.98，138.94，137.31，131.29， 129.47，128.59，126.70，123.92，123.15，116.16.HRMS(ESI)m/z calcd forC26H19F3N4O3[M+H]+493.1488，found 493.1488.
表1为上述部分实施例中1，3，5-三嗪类化合物及其药学上可接受的盐的取代基的分配情况。
表1 1，3，5-三嗪类化合物及其药学上可接受的盐的取代基的分配情况
| Compound | R<sub>1</sub> | R<sub>2</sub> | R<sub>3</sub> | R<sub>4</sub> |
| XHA1601 | -OCH<sub>3</sub> | -OCH<sub>3</sub> | -H | -OH |
| XHA1602 | -OCH<sub>3</sub> | -OCH<sub>3</sub> | -H | -NHCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OH |
| XHA1603 | -H | -H | -H | -OH |
| XHA1604 | -H | -H | -H | -NHCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OH |
| XHA1605 | -OH | -OH | -H | -OH |
| XHA1606 | -OH | -OH | -H | -NHCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OH |
| XHA1607 | -OCF<sub>3</sub> | -OCF<sub>3</sub> | -H | -OH |
| XHA1608 | -OCF<sub>3</sub> | -OCF<sub>3</sub> | -H | -NHCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OH |
| XHA1609 | -OCH<sub>3</sub> | -H | -H | -OH |
| XHA1610 | -OCH<sub>3</sub> | -H | -H | -NHCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OH |
| XHA1611 | -OH | -H | -H | -OH |
| XHA1612 | -OH | -H | -H | -NHCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OH |
| XHA1613 | -OCH3 | -H | -CH<sub>3</sub> | -OH |
| XHA1614 | -OCH3 | -OCH<sub>3</sub> | -CH<sub>3</sub> | -OH |
| XHA1615 | -OCH3 | -Cl | -H | -OH |
| XHA1616 | -OCH3 | -F | -H | -OH |
| XHA1617 | -OCH3 | -F | -CH<sub>3</sub> | -OH |
| XHA1618 | -OCH3 | -OCF<sub>3</sub> | -H | -OH |
| XHA1619 | -OCH<sub>3</sub> | -OCH<sub>3</sub> | -H | -OH |
| XHA1620 | -OCH<sub>3</sub> | -OCH<sub>3</sub> | -H | -NHCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OH |
| XHA1621 | -OH | -OH | -H | -OH |
| XHA1622 | -OH | -OH | -H | -NHCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OH |
| XHA1623 | -OH | -OH | -H | -NHCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OH |
| XHA1624 | -OH | -OH | -H | -NHCH<sub>2</sub>CF<sub>3</sub> |
实施例44：性能测试
表2是以下性能测试所用到的试剂来源。
表2试剂来源
| 试剂名称 | 生产厂家 |
| 不完全DMEM(高糖)培养基(含双抗) | 江苏凯基生物技术股份有限公司 |
| 德国胎牛血清(FBS) | GIBCO |
| 人乳腺癌MCF-7细胞株 | 江苏凯基生物技术股份有限公司 |
| 人子宫内膜癌Ishikawa细胞株 | 江苏凯基生物技术股份有限公司 |
| MTT | Amresco |
| 胰蛋白酶 | Biosharp |
| PBS | 自制 |
| 无血清冻存液 | Bambanker |
| ER Alpha Competitor Assay Kit，Green(A15882) | Life Technologies Corporation |
| 阳性对照(Fulvestrant) | MedChemExpress |
| DMSO | 南京化学试剂股份有限公司 |
| 雌二醇 | MERYER |
| 阳性药(Tamoxifen) | - |
| 氯仿 | 阿拉丁 |
| 异丙醇 | 阿拉丁 |
| 乙醇 | 阿拉丁 |
| RNAiso Plus | takara |
| PrimeScrip RT reagent Kit with gDNA Eraser | takara |
| SYBR Premix Ex Taq | takara |
| RIPA裂解液 | Servicebio |
| BCA蛋白定量检测试剂盒 | Servicebio |
| 5*蛋白上样缓冲液 | Servicebio |
| SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 | Servicebio |
| PVDF膜 | millipore |
| ECL | Servicebio |
| 显影定影试剂 | Servicebio |
| β-actin | Servicebio |
| TBS缓冲液 | Servicebio |
表3是以下性能测试所用到的仪器来源。
表3试剂来源
| 仪器名称 | 生产厂家 |
| 万分之一天平 | 上海上平仪器有限公司 |
| CO<sub>2</sub>培养箱 | ESCO |
| 安全柜 | 苏州净化设备有限公司 |
| 倒置显微镜 | 尼康公司 |
| 酶标仪 | 北京普朗新技术有限公司 |
| 高压蒸汽灭菌锅 | 上海博讯实业有限公司医疗设备厂 |
| SpectraMax Paradigm多功能酶标仪 | Molecular Devices |
| 涡旋机 | 上海沪西分析仪器厂有限公司 |
| 震荡仪 | 常州国华电器有限公司 |
| 离心机 | 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司 |
| PCR仪 | ABI |
| Stepone plus荧光定量PCR仪 | ABI |
| 脱色摇床 | Servicebio |
| 电泳仪 | 北京六一仪器厂 |
| 暗匣 | 广东粤华医疗器械厂有限公司 |
| 扫描仪 | EPSON |
(一)、化合物的药理(抗增殖)实验
由于MCF-7细胞抗增殖实验可以用来初步评价化合物在体外对ER阳性乳腺癌的抑制作用，所以本文对合成的部分化合物进行了体外MCF-7抗增殖实验。
1、实验方法
取对数生长期的人乳腺癌MCF-7细胞用于生物活性测试，用完全培养基将消化下来的细胞团的密度稀释至5×104个/ml，并用排枪将此细胞悬液接种至96孔板中。每块 96孔板各设一组空白阴性对照和一组空白阳性对照，阴性对照不加药也不加细胞悬液，用同体积的完全培养基替代，阳性对照只加细胞悬液不加药，给药时用同体积的含有 0.1％的DMSO的完全培养基替代。另外，外周的36个孔为防止96孔板中央待测区的细胞悬液因长期置于细胞培养箱内而引起的溶剂挥发，需加入200μl的PBS缓冲溶液。铺完细胞后，放入细胞培养箱内孵育24h。然后取出96孔板，每孔加入100μl含样品的完全培养基，使得待测样品的最终浓度依次为80μM、40μM、20μM、10μM、1μM，每个浓度各设置3个复孔。放入培养箱内培养48h后，避光的条件下每孔加入20μl的 5mg/ml MTT溶液，于培养箱中培养4h。取出96孔板，小心吸出培养基，每孔加入150 μl的DMSO溶液，放入震荡仪中震动10min，使底部的紫色结晶完全溶出，于酶标仪中检测其光吸收值(OD)，检测波长设置为490nm。按照如下公式算出各浓度的抑制率，并用GraphPad Prism 7.0绘制出浓度-抑制率曲线，最后给出化合物的IC50值(抑制率＝OD待测-OD阴性/OD阳性-OD阴性)。
2、实验结果
表4为化合物的药理(抗增殖)实验结果。
表4为化合物的药理(抗增殖)实验结果
| Compound | IC<sub>50</sub>(μM) | Compound | IC<sub>50</sub>(μM) |
| XHA1601 | 23.71 | XHA1614 | 32.51 |
| XHA1602 | 5.97 | XHA1615 | 53.16 |
| XHA1603 | 43.94 | XHA1616 | 49.67 |
| XHA1604 | ND | XHA1617 | 64.49 |
| XHA1605 | 78.95 | XHA1618 | 37.08 |
| XHA1606 | 5.49 | XHA1619 | 60.37 |
| XHA1607 | 10.63 | XHA1620 | 16.80 |
| XHA1608 | 2.07 | XHA1621 | 60.37 |
| XHA1609 | 35.23 | XHA1622 | 3.15 |
| XHA1610 | ND | XHA1623 | 4.00 |
| XHA1611 | 39.51 | XHA1624 | 3.87 |
| XHA1612 | 10.11 | Tamoxifen | 16.63 |
| XHA1613 | 44.33 | Fulvestrant | ND |
上述人乳腺癌MCF-7细胞株来自江苏凯基生物技术股份有限公司，他莫昔芬、Fulvestrant实施例作对照组。
研究结果表明，本发明化合物对MCF-7细胞表现出较好的抑制活性。
(二)人子宫内膜癌细胞株Ishikawa的抗增殖活性实验
1、实验方法
操作以及给药浓度设置均与MCF-7相同，但调整了细胞孵育时间，MCF-7细胞铺板后24h才给药，而Ishikawa细胞株的孵育时间为18h。
2、实验结果
表5为人子宫内膜癌细胞株Ishikawa的抗增殖活性实验结果
表5为人子宫内膜癌细胞株Ishikawa的抗增殖活性实验结果
| Compound | IC<sub>50</sub>(μM) | Compound | IC<sub>50</sub>(μM) |
| XHA1601 | 16.95 | XHA1613 | 28.76 |
| XHA1602 | 2.98 | XHA1614 | 17.41 |
| XHA1603 | 26.64 | XHA1615 | 19.64 |
| XHA1604 | 79.12 | XHA1616 | 29.84 |
| XHA1605 | 42.38 | XHA1617 | 25.34 |
| XHA1606 | 1.17 | XHA1618 | 18.79 |
| XHA1607 | 4.75 | XHA1619 | 26.11 |
| XHA1608 | 0.69 | XHA1620 | 4.06 |
| XHA1609 | 17.33 | XHA1621 | 22.95 |
| XHA1610 | ND | XHA1622 | 3.11 |
| XHA1611 | 29.21 | Tamoxifen | 10.69 |
| XHA1612 | 1.68 | Fulvestrant | ND |
研究结果表明，本发明化合物对Ishikawa细胞表现出较好的抑制活性。且构效趋势与MCF-7相一致。
(三)、Western Blot法检测ERα和Ki67的水平
为了证明本发明化合物具有ERα降解作用，利用Western Blot方法，以Fulvestrant 作为阳性对照，分别测试了化合物XHA1622对ERα和Ki67(细胞增生标志物，与ERα介导的信号通路密切相关)蛋白水平的下调作用。
1、实验方法
MCF-7细胞经化合物处理完毕后，弃去培养基，PBS洗涤2-3次，依次加入蛋白酶抑制剂和RIPA裂解液，反复晃动培养板，使细胞与之充分接触，然后用刮子将细胞刮下。将所得的细胞悬液转移至离心管中，于冰上裂解30min，期间可用移液枪反复吹打，促进细胞裂解完全，然后进行离心(4℃，12,000g，10min)，上层液即为得到的总蛋白溶液。参照试剂盒的说明书，用BCA蛋白定量检测试剂盒测定蛋白浓度，然后按照蛋白溶液∶蛋白上样缓冲液＝4∶1的比例加入5*蛋白上样缓冲液，并于沸水浴中煮沸15min，准备进行下一步的蛋白分离。将等量的上述蛋白溶液加入到凝胶上样孔中，准备进行电泳，其中浓缩胶的电压为75V，分离胶电压为120V。电泳至溴酚蓝刚跑出即可终止，进行转模。将目的蛋白的条带剥离出来，贴上PVDF膜，通过电泳，转移至PVDF膜上，后用5％脱脂牛奶于脱色摇床上封闭1h。加入一抗，4℃孵育过夜，而后用TBST洗涤三次，每次洗涤时间为5min。加入二抗，室温下孵育30min，而后用TBST洗涤三次，每次洗涤时间为5min。提前于暗室中按照ECLA∶ECLB＝1∶1的比例配置ECL混合溶液，然后将处理好的PVDF膜面朝上放在曝光匣中，加入配置好的ECL混合溶液反应1-2min后弃去反应液，根据显影试剂的发光强度调整曝光条件，开始曝光。扫描所得胶片，用Photoshop 整理去色，Alpha软件分析光密度值。
2、实验结果
实验结果见图1、2，结果表明与阳性药Fluvestrant相比，化合物XHA1622从1nM～1μM浓度下对ERα蛋白的表达表现出浓度依赖性抑制作用，证明了化合物XHA1622具有 ERα降解作用；化合物XHA1622从1nM～1μM浓度下对Ki67蛋白水平的表达有不同程度的抑制效果，效力与阳性药相当。
Claims (5)
1.一种具有通式(I)或通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐：
其中，
R1选自碳数为1～3的烷氧基、碳数为1～3的烷烃基、氢、羟基、三氟甲氧基或卤素；
R2选自碳数为1～3的烷氧基、碳数为1～3的烷烃基、氢、羟基、三氟甲氧基或卤素；
R3选自氢、碳数为1～3的烷烃基或甲氧基；
R4选自羟基、-XH(CH2)nOH，其中n＝1，2，3，X＝N，或-XH(CH2)nCF3，其中n＝1，2，3，X＝N。
2.根据权利要求1所述的具有通式(I)或通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，为如下任一种：
(E)-3-(4-((4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1601)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1602)
(E)-3-(4-((4，6-二苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1603)
(E)-3-(4-((4，6-二苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1604)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1605)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1606)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1607)
(E)-3-(4-((4，6-双(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1608)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1609)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟基丙基)丙烯酰胺(XHA1610)
(E)-3-(4-((4-(4-羟基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1611)
(E)-3-(4-((4-(4-羟基苯基)-6-苯基-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1612)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-(邻甲苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1613)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基-2-甲基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1614)
(E)-3-(4-((4-(4-氯苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1615)
(E)-3-(4-((4-(4-氟苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1616)
(E)-3-(4-((4-(4-氟-2-甲基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1617)
(E)-3-(4-((4-(4-甲氧基苯基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酸(XHA1618)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)丙烯酸(XHA1619)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1620)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)丙烯酸(XHA1621)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(3-羟丙基)丙烯酰胺(XHA1622)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(2-羟基乙基)丙烯酰胺(XHA1623)
(E)-3-(4-(4，6-双(4-羟基苯基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)丙烯酰胺(XHA1624)
3.一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种如权利要求1或2所述的具有通式(I)或通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，及药学上可接受的载体。
4.权利要求1所述的具有通式(I)或通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐的制备方法：
a、通式(I)1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐的制备方法，包括如下步骤：
以三聚氯氰(49)为起始原料，首先与4-氨基苯丙烯酸乙酯(36)发生亲核取代反应得到中间体37，然后与取代苯硼酸发生Suzuki偶联依次得到4-苯基取代(38)和4，6-二苯基取代的中间体(39-48)，最后酯基水解得到羧酸产物I，羧酸产物I在缩合剂HATU和DIPEA催化下与各类烷基胺发生缩合，得到通式(I)1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐；
其中，4-氨基苯丙烯酸乙酯(36)的合成路线：
对硝基苯甲醛33与丙二酸反应得到中间体(E)-3-(4-硝基苯基)丙烯酸34，34在酸性条件下与乙醇进行酯化反应得到(E)-3-(4-硝基苯基)丙烯酸乙酯35，35与铁粉、氯化铵在85℃下反应得到36；
b、通式(II)1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐的制备方法，包括如下步骤：
以三聚氯氰(49)作为起始原料，首先与4-甲氧基苯硼酸发生两次Suzuki偶联依次得到4-苯基取代(50)和4，6-二苯基取代的中间体(51)，继而又与4-甲酰基苯硼酸发生偶联反应得到(52)，然后醛基与Wittig试剂反应得到反式丙烯酸酯中间体(53)，最后酯基水解得到羧酸产物II，羧酸产物II在缩合剂HATU和DIPEA催化下与各类烷基胺发生缩合，得到通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐。
5.权利要求1或2所述的具有通式(I)或通式(II)的1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐在制备治疗人乳腺癌、子宫内膜癌的药物中的用途。
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