CN110221012A - 一种沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法。该方法采用高效液相色谱/飞行时间质谱联用测定沉香提取物，得到液相色谱图和高分辨质谱的总离子流色谱图，根据色谱峰的保留时间以及每个色谱峰对应的高分辨质谱的精确质量数表征沉香中每个化学成分，即为每个成分给出具有唯一性的数字信息，以数字化的形式来表征化学成分，由此建立沉香的数字化的HPLC‑UV/TOF MS色谱/高分辨质谱指纹图。本发明提供的方法对沉香的每种化学成分给出了类似于身份认定的数字化信息，具有唯一性，能全面反映沉香的物质成分，实现对沉香的全面、科学的表征。

Description

一种沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法
技术领域
本发明属于分析检测领域，具体涉及一种沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法。
背景技术
目前中药材存在以下问题：一是《中国药典》规定的中药材的鉴定大都采用薄层色谱和液相色谱法，只能通过保留时间判定，结果不够准确；二是中药的发挥药效的物质基础是化学成分，但目前还有很多成分未弄清楚，不能给出各个色谱峰对应化学成分的定性数据，给中药的质量评价和质量控制带来困难，影响中药的现代化进程。
沉香由瑞香科植物白木香树产生，主产地在中国南方及东南亚，是一种珍贵的中药材。国内外对沉香的化学成分分析的相关报道较少，《中国药典》中沉香的定量指标仅为沉香四醇，然而沉香的药效还有很多成分共同发挥作用，需要一种可以对沉香的其他化学成分进行全面、科学表征的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法，该方法对每个色谱峰给出保留时间和精确质量数信息(精确到小数点后第4位)，相当于每个色谱峰给出类似于认定身份证明的唯一信息，从而实现成分的识别。获得的沉香指纹图谱能全面、准确地表征沉香的化学成分，对沉香的每个化学物质提供数字化的唯一性信息。
本发明的沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：采用高效液相色谱/飞行时间质谱联用测定沉香提取物，同时得到液相色谱图和高分辨质谱的总离子流色谱图，通过高分辨质谱为色谱图中的每个色谱峰标上精确质量数，根据色谱峰的保留时间以及每个色谱峰对应的精确质量数表征沉香中每个化学成分，构建沉香的数字化色谱/质谱指纹图谱；并根据各个峰的精确质量数推测出分子式，然后结合其二级质谱碎片离子和文献数据鉴定化学结构，共鉴定出27个化学成分。
上述的沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法中，是根据液相色谱图和高分辨质谱的总离子流色谱图得到色谱峰的保留时间，根据每个色谱峰对应的高分辨质谱图的精确质荷比确定每个色谱峰的精确质量数。
所述的高效液相色谱条件为：色谱柱：Phenomenex luna C18色谱柱，柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm，流速为每分钟0.7mL；流动相：乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱程序按A的变化为：0min，15％；10min，20％；19min，23％；21min，33％；39min，33％，40min，35％；50min，35％，50.1min，95％；60min，95％；66min，15％，紫外检测波长为252nm。
所述的质谱条件为：离子源为Agilent双喷Jet Stream源，正离子模式采集，干燥气温度350℃，雾化气压力40psi，干燥气温度325℃，流速8L/min，鞘气温度350℃，流速11L/min，毛细管电压3000V，毛细管出口电压110V，锥孔电压65V，八极杆电压750V，采集模式为自动MS/MS，扫描范围m/z 80～1100；参比离子正离子为：m/z 121.0509、922.0098。
所述的沉香提取物的制备包括以下步骤：将沉香药材粉碎，精密称定0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇10mL，称定重量，浸泡0.5小时，在功率250W，频率40kHz的超声条件下处理1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，得到沉香提取物。
本发明的有益效果为：
(1)构建沉香的HPLC-UV/TOF MS色谱/质谱指纹图，对每种化学物质给出了类似于身份认定的数字化信息，具有唯一性。
(2)本发明提供的方法能全面反映沉香的物质成分，实现对沉香的全面、科学的表征。
附图说明
图1是沉香的HPLC-UV液相色谱图；
图2是沉香的HPLC/TOF MS总离子流色谱图(TIC)；
图3是沉香中各个色谱峰的HPLC-UV/TOF MS色谱/质谱指纹图谱。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
一种沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
(1)采用溶剂超声波振荡的方法提取出沉香的化学成分：将沉香药材粉碎，精密称定0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇10mL，称定重量，浸泡0.5小时，超声处理(功率250W，频率40kHz)1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，待上机分析。
(2)采用高效液相色谱-紫外检测/高分辨飞行时间质谱(HPLC-UV/TOF MS)分离测定沉香的化学成分：沉香提取液10μL注入高效液相色谱中，色谱条件为：色谱柱：Phenomenex luna C18色谱柱，柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm，流速为每分钟0.7mL；流动相：乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱程序按A的变化为：0min，15％；10min，20％；19min，23％；21min，33％；39min，33％，40min，35％；50min，35％，50.1min，95％；60min，95％；66min，15％，紫外检测波长为252nm。
质谱条件：离子源为Agilent双喷Jet Stream源(Dual Jet Stream ESI)，正离子摸式采集，干燥气(N2)温度350℃，雾化气(N2)压力40psi，干燥气(N2)温度325℃，流速8L/min，鞘气温度350℃，流速11L/min，毛细管电压3000V，毛细管出口电压(Fragmentor)110V，锥孔电压(Skimmer)65V，八极杆电压750V，采集模式为自动MS/MS，扫描范围m/z80～1100；参比离子正离子为：m/z 121.0509、922.0098。
(3)上面得到的沉香HPLC-UV液相色谱图(见图1)和TOF MS总离子流色谱图(见图2)，根据色谱图得到31个色谱峰的保留时间，对其中的每个色谱峰找出对应的高分辨质谱图，然后以丰度最高的质谱峰的质荷比(m/z)，分别对TOF MS总离子流色谱图中的各个色谱峰进行精确质量数识别，为HPLC-UV色谱图和TOF MS总离子流色谱图中的每个色谱峰标上精确质量数，确定每个色谱峰的精确质量数，结合每个色谱峰的保留时间，用于表征沉香中的每个化学成分(见表1)，构建沉香的HPLC-UV/TOF MS数字化色谱/质谱指纹图(见图3)，具有唯一性的数字信息，全面表征沉香中药材。并根据精确质量数推测出分子式，结合二级质谱碎片离子和文献数据，鉴定出该指纹图谱中的27个成分的化学结构(见表1)。
表1沉香指纹峰的精确质量数及其化学成分
本发明人按照上述方法做过上百份的沉香样品，得到的结果与上面基本相同。因此本发明用精确质量数结合保留时间来表征沉香中每个化学成分，即为每个成分给出具有唯一性的数字信息，以数字化的形式来表征化学成分，由此建立沉香的数字化的HPLC-UV/TOFMS色谱/高分辨质谱指纹图。本发明提供的方法对沉香的每种化学成分给出了类似于身份认定的数字化信息，具有唯一性，能全面反映沉香的物质成分，实现对沉香的全面、科学的表征。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：采用高效液相色谱/飞行时间质谱联用测定沉香提取物，同时得到液相色谱图和高分辨质谱的总离子流色谱图，通过高分辨质谱为色谱图中的每个色谱峰标上精确质量数，根据色谱峰的保留时间以及每个色谱峰对应的精确质量数表征沉香中每个化学成分，构建沉香的数字化色谱/质谱指纹图谱；并根据精确质量数推测出分子式，结合二级质谱碎片离子和文献数据，鉴定出该指纹图谱中的27个成分的化学结构；
所述的高效液相色谱条件为：色谱柱：Phenomenex luna C18色谱柱，柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm，流速为每分钟0.7mL；流动相：乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱程序按A的变化为：0min，15％；10min，20％；19min，23％；21min，33％；39min，33％，40min，35％；50min，35％，50.1min，95％；60min，95％；66min，15％，紫外检测波长为252nm；
所述的沉香的数字化色谱/质谱指纹图谱如下表所示：
2.根据权利要求1所述的沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法，其特征在于，是根据液相色谱图和高分辨质谱的总离子流色谱图得到色谱峰的保留时间，根据每个色谱峰对应的高分辨质谱图的精确质荷比确定每个色谱峰的精确质量数。
3.根据权利要求1或2所述的沉香数字化色谱/质谱指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述的质谱条件为：离子源为Agilent双喷Jet Stream源，正离子模式采集，干燥气温度350℃，雾化气压力40psi，干燥气温度325℃，流速8L/min，鞘气温度350℃，流速11L/min，毛细管电压3000V，毛细管出口电压110V，锥孔电压65V，八极杆电压750V，采集模式为自动MS/MS，扫描范围m/z 80～1100；参比离子正离子为：m/z 121.0509、922.0098。
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