CN110195043A - 一种高水溶性的cgta酶及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及高分子酶技术领域，尤其是一种高水溶性的cgta酶的制备方法，包括反应物酶的获取、反应催化剂的选择、反应的发生、cgta酶与催化剂的分离、cgta酶的活性检测以及cgta酶的储存。本发明cgta酶主要用于神经节苷脂类寡糖的体外酶法合成中，本发明能够采用CjCgtA作为反应的催化剂，不经能够对反应速度的提升，同时也提高了cgta酶的纯度以及活性。
Description
技术领域
本发明涉及高分子酶技术领域，尤其涉及一种高水溶性的cgta酶及其制备方法和应用。
背景技术
现有技术中对cgta酶的制备操作复杂，同时制备的cgta酶的纯度以及活性低，无法对cgta酶进行量产，同时无法寻找到正确的反应催化剂从而使得反应的过程相当的缓慢，降低了制备的速度，从而不适用于大规模的生产。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种高水溶性的cgta酶及其制备方法和应用。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
设计一种高水溶性的cgta酶的制备方法，包括如下步骤：
S1、反应物酶的获取；
S2、反应催化剂的选择：采用CjCgtA作为该反应的催化剂；
S3、反应的发生，反应的具体操作步骤如下：
M1、在S1中的反应柱载体的底部粘接分布着多个均匀筛孔的滤膜，在反应柱载体的底部卡设圆形筛板，从而通过筛板将滤膜进行固定；
M2、将S2中准备的催化剂缓慢的倒入反应柱载体的上端，使得催化剂溶液在重力的作用下进入反应柱载体的内部，实现与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶充分的接触；
M3、将培养皿进行水浴加热，温度控制在22-24摄氏度，反应液的PH控制在7.5-8.5之间，静置3-4小时，同时每小时利用PH检测计对反应液的PH进行检测；
S4、cgta酶与催化剂的分离；
S5、cgta酶的活性检测；
S6、cgta酶的储存。
优选的，所述S1反应物酶的获取的具体步骤为：反应物采用一种β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶，并将β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶涂抹在反应柱载体上，同时将反应柱载体放置在培养皿中。
优选的，所述S4中的cgta酶与催化剂的分离具体包括：催化剂与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶反应后生成的溶液会通过滤膜以及筛板的配合漏出反应柱载体，此时反应柱载体中仅剩cgta酶与催化剂的混合溶液，向反应柱载体内加入分离液以及辅助酶，震荡后催化剂及辅助酶反应后会漏出反应柱载体，从而使得反应柱载体中仅剩cgta酶分子颗粒。
优选的，所述S5中cgta酶的活性检测具体为：取1-2ml的cgta酶溶液并加入愈创木酚作为cgta酶的底物，两者进行振荡混合，倒入里心机重的离心管内，离心10min,通过检测离心后产物在470nm吸光度的变化，测定cgta酶的活性。
优选的，所述S6中cgta酶的储存集体为：将制备得到的cgta酶保存在药剂盒内，加入酶蛋白溶液、缓冲液、-SH保护剂以及抑制剂，并对药剂盒进行封口，放置在温度24-27摄氏度的条件下保存。
优选的，所述反应柱载体具体为聚丙烯酰胺。
优选的，所述cgta酶主要用于神经节苷脂类寡糖的体外酶法合成中。
本发明提出的一种高水溶性的cgta酶及其制备方法和应用，有益效果在于：该一种高水溶性的cgta酶及其制备方法和应用，cgta酶主要用于神经节苷脂类寡糖的体外酶法合成中，本发明能够采用CjCgtA作为反应的催化剂，不经能够对反应速度的提升，同时也提高了cgta酶的纯度以及活性。
附图说明
图1为本发明提出的一种高水溶性的cgta酶及其制备方法和应用的反应示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
参照图1，一种高水溶性的cgta酶的制备方法，包括如下步骤：
S1、反应物酶的获取：反应物采用一种β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶，并将β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶涂抹在反应柱载体上，反应柱载体具体为聚丙烯酰胺，同时将反应柱载体放置在培养皿中；
S2、反应催化剂的选择：采用CjCgtA作为该反应的催化剂；
S3、反应的发生，反应的具体操作步骤如下：
M1、在S1中的反应柱载体的底部粘接分布着多个均匀筛孔的滤膜，在反应柱载体的底部卡设圆形筛板，从而通过筛板将滤膜进行固定；
M2、将S2中准备的催化剂缓慢的倒入反应柱载体的上端，使得催化剂溶液在重力的作用下进入反应柱载体的内部，实现与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶充分的接触；
M3、将培养皿进行水浴加热，温度控制在22摄氏度，反应液的PH控制在7.5之间，静置3小时，同时每小时利用PH检测计对反应液的PH进行检测；
S4、cgta酶与催化剂的分离：催化剂与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶反应后生成的溶液会通过滤膜以及筛板的配合漏出反应柱载体，此时反应柱载体中仅剩cgta酶与催化剂的混合溶液，向反应柱载体内加入分离液以及辅助酶，震荡后催化剂及辅助酶反应后会漏出反应柱载体，从而使得反应柱载体中仅剩cgta酶分子颗粒，实现了对cgta酶的纯化。
S5、cgta酶的活性检测，取1ml的cgta酶溶液并加入愈创木酚作为cgta酶的底物，两者进行振荡混合，倒入里心机重的离心管内，离心10min,通过检测离心后产物在470nm吸光度的变化，测定cgta酶的活性。
S6、cgta酶的储存，将制备得到的cgta酶保存在药剂盒内，加入酶蛋白溶液、缓冲液、-SH保护剂以及抑制剂，并对药剂盒进行封口，放置在温度24摄氏度的条件下保存。
cgta酶主要用于神经节苷脂类寡糖的体外酶法合成中。
实施例2
参照图1，一种高水溶性的cgta酶的制备方法，包括如下步骤：
S1、反应物酶的获取：反应物采用一种β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶，并将β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶涂抹在反应柱载体上，反应柱载体具体为聚丙烯酰胺，同时将反应柱载体放置在培养皿中；
S2、反应催化剂的选择：采用CjCgtA作为该反应的催化剂；
S3、反应的发生，反应的具体操作步骤如下：
M1、在S1中的反应柱载体的底部粘接分布着多个均匀筛孔的滤膜，在反应柱载体的底部卡设圆形筛板，从而通过筛板将滤膜进行固定；
M2、将S2中准备的催化剂缓慢的倒入反应柱载体的上端，使得催化剂溶液在重力的作用下进入反应柱载体的内部，实现与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶充分的接触；
M3、将培养皿进行水浴加热，温度控制在23摄氏度，反应液的PH控制在8之间，静置3.5小时，同时每小时利用PH检测计对反应液的PH进行检测；
S4、cgta酶与催化剂的分离：催化剂与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶反应后生成的溶液会通过滤膜以及筛板的配合漏出反应柱载体，此时反应柱载体中仅剩cgta酶与催化剂的混合溶液，向反应柱载体内加入分离液以及辅助酶，震荡后催化剂及辅助酶反应后会漏出反应柱载体，从而使得反应柱载体中仅剩cgta酶分子颗粒，实现了对cgta酶的纯化。
S5、cgta酶的活性检测，取1.5ml的cgta酶溶液并加入愈创木酚作为cgta酶的底物，两者进行振荡混合，倒入里心机重的离心管内，离心10min,通过检测离心后产物在470nm吸光度的变化，测定cgta酶的活性。
S6、cgta酶的储存，将制备得到的cgta酶保存在药剂盒内，加入酶蛋白溶液、缓冲液、-SH保护剂以及抑制剂，并对药剂盒进行封口，放置在温度25摄氏度的条件下保存。
cgta酶主要用于神经节苷脂类寡糖的体外酶法合成中。
实施例3
参照图1，一种高水溶性的cgta酶的制备方法，包括如下步骤：
S1、反应物酶的获取：反应物采用一种β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶，并将β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶涂抹在反应柱载体上，反应柱载体具体为聚丙烯酰胺，同时将反应柱载体放置在培养皿中；
S2、反应催化剂的选择：采用CjCgtA作为该反应的催化剂；
S3、反应的发生，反应的具体操作步骤如下：
M1、在S1中的反应柱载体的底部粘接分布着多个均匀筛孔的滤膜，在反应柱载体的底部卡设圆形筛板，从而通过筛板将滤膜进行固定；
M2、将S2中准备的催化剂缓慢的倒入反应柱载体的上端，使得催化剂溶液在重力的作用下进入反应柱载体的内部，实现与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶充分的接触；
M3、将培养皿进行水浴加热，温度控制在24摄氏度，反应液的PH控制在8.5之间，静置4小时，同时每小时利用PH检测计对反应液的PH进行检测；
S4、cgta酶与催化剂的分离：催化剂与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶反应后生成的溶液会通过滤膜以及筛板的配合漏出反应柱载体，此时反应柱载体中仅剩cgta酶与催化剂的混合溶液，向反应柱载体内加入分离液以及辅助酶，震荡后催化剂及辅助酶反应后会漏出反应柱载体，从而使得反应柱载体中仅剩cgta酶分子颗粒，实现了对cgta酶的纯化。
S5、cgta酶的活性检测，取2ml的cgta酶溶液并加入愈创木酚作为cgta酶的底物，两者进行振荡混合，倒入里心机重的离心管内，离心10min,通过检测离心后产物在470nm吸光度的变化，测定cgta酶的活性。
S6、cgta酶的储存，将制备得到的cgta酶保存在药剂盒内，加入酶蛋白溶液、缓冲液、-SH保护剂以及抑制剂，并对药剂盒进行封口，放置在温度27摄氏度的条件下保存。
cgta酶主要用于神经节苷脂类寡糖的体外酶法合成中。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种高水溶性的cgta酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、反应物酶的获取；
S2、反应催化剂的选择：采用CjCgtA作为该反应的催化剂；
S3、反应的发生，反应的具体操作步骤如下：
M1、在S1中的反应柱载体的底部粘接分布着多个均匀筛孔的滤膜，在反应柱载体的底部卡设圆形筛板，从而通过筛板将滤膜进行固定；
M2、将S2中准备的催化剂缓慢的倒入反应柱载体的上端，使得催化剂溶液在重力的作用下进入反应柱载体的内部，实现与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶充分的接触；
M3、将培养皿进行水浴加热，温度控制在22-24摄氏度，反应液的PH控制在7.5-8.5之间，静置3-4小时，同时每小时利用PH检测计对反应液的PH进行检测；
S4、cgta酶与催化剂的分离；
S5、cgta酶的活性检测；
S6、cgta酶的储存。
2.根据权利要求1所述的一种高水溶性的cgta酶的制备方法，其特征在于，所述S1反应物酶的获取的具体步骤为：反应物采用一种β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶，并将β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶涂抹在反应柱载体上，同时将反应柱载体放置在培养皿中。
3.根据权利要求1所述的一种高水溶性的cgta酶的制备方法，其特征在于，所述S4中的cgta酶与催化剂的分离具体包括：催化剂与β-1-4-N乙酰半乳糖氨基转移酶反应后生成的溶液会通过滤膜以及筛板的配合漏出反应柱载体，此时反应柱载体中仅剩cgta酶与催化剂的混合溶液，向反应柱载体内加入分离液以及辅助酶，震荡后催化剂及辅助酶反应后会漏出反应柱载体，从而使得反应柱载体中仅剩cgta酶分子颗粒。
4.根据权利要求1所述的一种高水溶性的cgta酶的制备方法，其特征在于，所述S5中cgta酶的活性检测具体为：取1-2ml的cgta酶溶液并加入愈创木酚作为cgta酶的底物，两者进行振荡混合，倒入里心机重的离心管内，离心10min,通过检测离心后产物在470nm吸光度的变化，测定cgta酶的活性。
5.根据权利要求1所述的一种高水溶性的cgta酶的制备方法，其特征在于，所述S6中cgta酶的储存集体为：将制备得到的cgta酶保存在药剂盒内，加入酶蛋白溶液、缓冲液、-SH保护剂以及抑制剂，并对药剂盒进行封口，放置在温度24-27摄氏度的条件下保存。
6.根据权利要求1所述的一种高水溶性的cgta酶的制备方法，其特征在于，所述反应柱载体具体为聚丙烯酰胺。
7.根据权利要求1所述的一种高水溶性的cgta酶的制备方法，其特征在于，所述cgta酶主要用于神经节苷脂类寡糖的体外酶法合成中。
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