CN110177565A - 胆囊收缩素2受体靶向近红外成像及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了化合物，其中CCK2R靶向配体通过接头连接到成像剂。所述化合物可用于癌症的检测、诊断、成像和治疗。

Description

胆囊收缩素2受体靶向近红外成像及其用途
相关申请
本专利申请要求2016年9月9日提交的第62/385,338号美国临时专利申请的优先权权益。前述申请的内容在此通过引用以其整体并入本发明的公开内容。
技术领域
本发明涉及检测、诊断、成像和治疗受试者的癌症的方法。
发明背景
胆囊收缩素B受体(也称为CCK2R、CCKBR和胃泌素受体)是一种跨膜G蛋白偶联受体。CCK2R主要在(i)大脑和中枢神经系统，以及(ii)胃肠道粘膜，包括壁细胞和ECL细胞中表达。据报道，它在哺乳动物大脑皮层中的表达最为丰富，在那里其与记忆/学习和对应激的反应的调节有关。在消化道中，已经在GI组织以及外分泌和内分泌胰腺中检测到了它的存在。相互矛盾的报道表明，该受体与CCK1R—一种与CCK2R有50％同源性的G蛋白偶联受体也一起在外周组织如脂肪细胞中表达。CCK2R的天然配体是胃泌素和胆囊收缩素肽。
已经发现许多不同类型的人肿瘤以高密度或以高频率过表达或异位表达CCK2R，这些肿瘤包括甲状腺髓样癌、胰岛素瘤、小细胞肺癌、支气管和回肠类癌、GIST肿瘤和结肠癌、肝细胞癌和胰腺癌。CCK2R信号传导的失调可能有助于肿瘤形成或生长的一种方式与胃泌素通过受体的信号传导有关。胃泌素是一种肽激素，其在结合CCK2R后刺激胃壁细胞分泌胃酸(HCI)。已经报道了胃泌素是癌细胞凋亡的抑制剂，可能是通过其诱导丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PKB/Akt活化的能力10。几项报道已经显示，抑制CCK2R受体和胃泌素自分泌环诱导细胞凋亡并在体内抑制癌细胞系的增殖。
已经报道，在肿瘤组织中发现的CCK2受体包括正常蛋白质，以及组成型活性的CCK2R受体剪接变体(CCK2i4svR)，其具有不适当保留的第四内含子，导致在受体的第三个细胞内环结构域中添加69个氨基酸，已知该结构域对信号传导很重要。
靶向CCK2R的细胞毒剂可能用于阻断肿瘤中受体的不受控制的激活。有益的是，由于CCK2R在正常脑组织中表达，血脑屏障将阻断可能影响大脑中受体的正常活动的极性化合物。因此，在CCK2R及其剪接变体通过肿瘤在脑外表达的情况下，该肿瘤将是CCK2R和CCK2i4svR特异性细胞毒剂靶向的唯一组织。
已经开发出CCK2R特异性拮抗剂，并且已经报道了广泛的结构-活性关系。体外和体内研究均表明，在选择性CCK2R拮抗剂存在下，胃泌素的生长增强作用可以被消除。一种这样的拮抗剂是Z-360—一种口服活性的CCK2R拮抗剂(Zeria Pharmaceuticals Co.，Ltd.，Tokyo，Japan)，其Ki＝0.47nmol/L，相对于CCK1R的选择性比率＝672。临床前研究已经表明，与单独使用任一种药剂相比，Z-360与化疗剂吉西他滨一起口服给予显著抑制皮下PANC-1肿瘤生长(27.1％抑制)，并且与载体相比，显著提高生存率。该拮抗剂与吉西他滨的联合治疗目前处于胰腺癌治疗的II期人临床试验中。
选择性靶向CCK2R的其它药剂的开发将拓宽可用于治疗其中表达CCK2R的肿瘤的治疗药物武器库。这些药剂也可用于受试者的癌症的诊断和成像。
发明简要概述
本发明涉及一小组高度相关的配体，其选择性地靶向并结合CCK2R和剪接变体CCK2i4svR。所述配体与NIR成像剂连接，并且这些化合物用于表达CCK2R和剪接变体CCK2i4svR的肿瘤的治疗、诊断和成像。
因此，本发明涉及包含与活性部分(active moiety)连接的靶向配体的化合物。所述靶向配体是选择性结合至CCK2R和/或CCK2i4svR的化合物。活性部分是NIR成像剂。所述靶向配体和活性部分通过如本文所述的接头连接。
在某些实施方案中，本发明的化合物具有以下形式：B-L-Z
其中B是CCK2R和/或CCK2i4svR靶向分子；
L是间隔基团；并且
Z是NIR染料。
在一些实施方案中，CCK2R和/或CCK2i4svR靶向分子选自小分子、配体、抑制剂、激动剂或其衍生物。在一些实施方案中，CCK2R和/或CCK2i4svR靶向化合物是配体。在一些实施方案中，CCK2靶向化合物是：
n＝0、1、2……；m＝0、1、2……
或者
n＝0、1、2……；m＝0、1、2……
或者
或者
或者
或者
在一些实施方案中，L选自：酸性(带负电的)氨基酸，例如天冬氨酸和谷氨酸及其衍生物；碱性(带正电的)氨基酸，例如精氨酸、组氨酸和赖氨酸及其衍生物。在一些实施方案中，Y具有正电荷。在其它实施方案中，Y具有负电荷。在其它实施方案中，Y具有谷氨酸。
在一些实施方案中，Z选自近红外染料，包括但不限于IR800、Alexa Flour 647、SP0169、SP0189或SP0196。SP196显示为以下物质：
其中，R1独立地选自O、S、N、CH2和C，R2独立地选自CH2和CH2CH2，并且R3、R4和R5各自独立地选自H、Na、K和NH4。SP196包括其中R1和R2各自为CH2，并且R3、R4和R5各自为H。
在一些实施方案中，所述CCK2靶向化合物是：
在一些实施方案中，B是Z-360，L是γ(γ)-谷氨酸-l-酪氨酸，Z是SP169。
在一些实施方案中，本发明的化合物具有约500nm至约900nm的吸收和发射最大值。在一些实施方案中，本发明的化合物具有约600nm至800nm的吸收和发射最大值。
在一些实施方案中，使本发明的化合物在组织细胞中分布后发荧光。在一些实施方案中，通过使化合物经受近红外波长的激发光，使本发明的化合物发荧光。在一些实施方案中，本发明的化合物对CCK2R或CCK2i4svR具有结合亲和力，该结合亲和力等于或好于Z-360的结合亲和力。
在某些实施方案中，将本发明的化合物给予有需要的受试者，并且在一些实施方案中，所给予的组合物除所述化合物外，还包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本发明的一些实施方案提供了表达CCK2R和/或CCK2i4svR的生物组织的光学成像方法，所述方法包括：
(a)使生物组织与包含CCK2R和/或CCK2i4svR靶向NIR染料化合物的组合物接触，
(b)留出时间使所述组合物中的化合物分布在生物靶点内；
(c)用所述化合物可吸收的波长的激发光照射组织；和
(d)检测所述化合物发出的光信号。
在一些实施方案中，这些方法用于检测与高CCK2R或CCK2i4svR或两者的表达相关的疾病。在一些实施方案中，还包括根据(d)中发射的信号构建图像的步骤。在一些实施方案中，本发明提供了上述方法，其中步骤(a)包括信号特性可区分的两种或更多种荧光化合物与组织接触，并且任选地，所述组织在受试者中。在一些实施方案中，本发明提供内窥镜、导管、断层摄影系统、手持式光学成像系统、手术护目镜或术中显微镜用于照射和/或检测方法步骤的用途。
在一些实施方案中，本发明的组合物和方法用于治疗癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自胰腺癌、胃肠癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、神经胶质瘤、类癌或甲状腺癌、肺癌、膀胱癌、肝癌、肾癌、肉瘤、乳腺癌、脑癌、睾丸癌或黑色素瘤。
在一些实施方案中，本发明的CCK2R和/或CCK2i4svR靶向NIR染料化合物用于表达CCK2R和/或CCK2i4svR的细胞的成像。在某些实施方案中，这些细胞选自胰腺癌细胞、胃肠癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、前列腺癌细胞、神经胶质瘤细胞、类癌细胞或甲状腺癌细胞、肺癌细胞、膀胱癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、肉瘤细胞、乳腺癌细胞、脑癌细胞、睾丸癌细胞或黑色素瘤细胞。
本发明还提供了靶向生物样品中的细胞类型的方法，包括：(a)使生物样品与CCK2R和/或CCK2i4svR靶向NIR染料化合物接触一段时间，并且是在允许所述化合物与至少一种靶细胞类型的细胞的结合的条件下；和(b)以光学方法检测生物样品中存在或不存在该化合物，其中在检测步骤(b)中，该化合物的存在表明靶细胞类型存在于生物样品中。在一些实施方案中，本发明提供了用于表达CCK2R和/或CCK2i4svR的细胞的光学检测的方法，包括给予本发明的CCK2R和/或CCK2i4svR靶向NIR染料化合物，并使所述化合物经受激发光源并检测来自所述化合物的荧光。在一些实施方案中，激发光源是近红外波长光。在一些实施方案中，激发光波长在约600至1000纳米范围内。在一些实施方案中，激发光波长在约670至850纳米范围内。
在某些实施方案中，本发明提供了对受试者进行图像引导的手术的方法，包括：
a)在足以使化合物在给定手术部位积聚的条件下和时间内给予包含CCK2R和/或CCK2i4svR靶向NIR染料化合物的组合物；
b)用红外光照射所述化合物以使化合物可视化；和
c)对红外光激发后发荧光的区域进行手术切除。
在本发明的一些实施方案中，红外光波长在约600至1000纳米范围内。在一些实施方案中，本发明的方法使用的红外光波长在约670至850纳米范围内。
本发明的一些实施方案提供了诊断受试者的疾病的方法，包括：
a)向需要诊断的受试者给予一定量的CCK2R和/或CCK2i4svR靶向NIR染料化合物一段时间，并且是在允许所述化合物与至少一种表达CCK2R或CCK2i4svR或两者的细胞结合的条件下；
b)测量来自生物样品中存在的化合物的信号；
c)将b)中测量的信号与至少一个对照数据组进行比较，其中所述至少一个对照数据组包含来自权利要求1所述的化合物的信号，所述化合物与不包含靶细胞类型的生物样品接触；和
d)提供疾病诊断，其中步骤c)中的比较表明疾病的存在。
本发明的一些实施方案提供了包含CCK2R和/或CCK2i4svR靶向NIR染料化合物的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒用于表达CCK2R的细胞的成像。在一些实施方案中，表达CCK2R和/或CCK2i4svR的细胞是肿瘤细胞。在一些实施方案中，表达CCK2R和/或CCK2i4svR的细胞是非前列腺癌细胞。在某些实施方案中，表达CCK2R和/或CCK2i4svR的细胞是胰腺肿瘤细胞或胃肠肿瘤细胞，或甲状腺肿瘤细胞。在某些实施方案中，表达CCK2R和/或CCK2i4svR的细胞是癌细胞。在一些实施方案中，本发明用于检测转移性疾病。在一些实施方案中，本发明的化合物用于改善手术切除和/或改善预后。在一些实施方案中，本发明的方法提供比非NIR复合荧光染料更清洁的手术切缘。在一些实施方案中，本发明的CCK2R和/或CCK2i4svR靶向NIR染料化合物具有改善的肿瘤背景比。
在所提供的方法的另一个实施方案中，表达CCK2R和/或CCK2i4svR的癌细胞是肿瘤。在所提供的方法的又一个实施方案中，表达CCK2R和/或CCK2i4svR的癌症是肿瘤。
在一些实施方案中，本发明的公开内容涉及复合至近红外(NIR)染料的CCK2R和/或CCK2i4svR靶向化合物及用于其治疗和诊断用途的方法。更具体地，本发明的公开内容提供了用于诊断和治疗与表达CCK2R或CCK2i4svR或两者的细胞相关的疾病，如胰腺癌、胃肠癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、神经胶质瘤癌、类癌或甲状腺癌、肺癌、膀胱癌、肝癌、肾癌、肉瘤、乳腺癌、脑癌、睾丸癌或黑色素瘤，以及相关疾病的化合物和方法。本发明的公开内容进一步描述了制备和使用所述化合物的方法和组合物、掺入所述化合物的方法以及掺入所述化合物的试剂盒。已经发现CCK2R和/或CCK2i4svR靶向化合物，例如通过接头(L)与NIR染料复合的PS230(a，b)、PS231、PS232和Z-360可用于胰腺癌、胃肠癌、甲状腺癌和涉及表达或过表达CCK2R或CCK2i4svR或两者的致病细胞群的相关疾病的成像、诊断和/或治疗。因此，已经发现，包括具有预定长度和/或预定直径的接头和/或沿其长度的预选官能团的某些化合物可以用于治疗、成像和/或诊断这些疾病。
在一个说明性实施方案中，所述接头L可以是可释放的或不可释放的接头。在一方面，接头L的长度为至少一个氨基酸或4个原子。在一个变型中，接头L的长度为至少约10个原子。
在供选择的方面，接头L的长度为至少约5埃。
在另一个实施方案中，本文描述了药物组合物，其中所述药物组合物以有效治疗疾病和疾病状态、诊断疾病或疾病状态、和/或成像组织和/或细胞的量包含本文所述化合物，所述组织和/或细胞与表达或过表达CCK2R或CCK2i4svR或两者的致病细胞群相关。要说明的是，药物组合物还包含一种或多种载体、稀释剂和/或赋形剂。
在另一个实施方案中，本文描述了用于治疗疾病和疾病状态、诊断疾病或疾病状态、和/或成像组织和/或细胞的方法，所述组织和/或细胞与表达或过表达CCK2R或CCK2i4svR或两者的致病细胞群相关。这样的方法包括以有效治疗疾病和疾病状态、诊断疾病或疾病状态、和/或成像组织和/或细胞的量给予本文所述化合物和/或含有本文所述化合物的药物组合物的步骤，所述组织和/或细胞与表达或过表达CCK2R或CCK2i4svR或两者的致病细胞群相关。
前面已经相当宽泛地概述了本发明的特征和技术优点，以便更好地理解接下来的对本发明的详细描述。本文将描述本发明的另外的特征和优点，其构成了本发明权利要求的主题。本领域技术人员应该理解，本文公开的任何构思和具体实施方案可以容易地用作修改或设计用于实现本发明相同目的的其它结构的基础。本领域技术人员还应该认识到，这样的等同构造不脱离所附权利要求中所述的本发明的精神和范围。当结合附图考虑时，由以下描述将更好地理解被认为是本发明特征的新颖特征，均是关于其组织和操作方法，以及其它目的和优点。然而，应当清楚地理解，提供任何描述、图、实例等仅仅是为了说明和描述的目的，而绝不是要限定对本发明的限制。
附图简述
图1描绘了CCK2R靶向NIR化合物40和41的化学结构。
图2A图示了在调节化合物40的阈值后全身荧光图像在白光图像上的叠加。向携带HEK-CCK2R肿瘤异种移植物的小鼠注射10nmol化合物1，并在注射后2h用IVIS成像仪成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。成像后，收集选定的组织，并用IVIS成像仪对组织成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。
图2B显示了图2A的离体组织生物分布分析。
图2C描绘了调节化合物41的阈值后全身荧光图像在白光图像上的叠加。向携带HEK-CCK2R肿瘤异种移植物的小鼠注射10nmol化合物2，并在注射后2h用IVIS成像仪成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。成像后，收集选定的组织，并用IVIS成像仪对组织成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。
图2D图示了图2C的离体组织生物分布分析。
图3显示了CCK2R靶向NIR化合物21、42-44的化学结构。
图4描绘了CCK2R-NIR化合物21、42-44与CCK2R的结合亲和力。CCK2R阳性的HEK-CCK2R癌细胞在37℃下孵育1小时，化合物的浓度增加。然后除去培养基，用新鲜培养基清洗三次，并用PBS置换。使用荧光计测定细胞结合荧光。
图5A图示了对化合物21的分析，调整阈值后全身荧光图像在白光图像上的叠加。向携带HEK-CCK2R肿瘤异种移植物的小鼠注射10nmol化合物21，并在注射后2h用IVIS成像仪成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。成像后，收集选定的组织，并用IVIS成像仪对组织成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。
图5B显示了图5A的离体组织生物分布分析。
图6A描绘了对化合物42的分析：调整阈值后全身荧光图像在白光图像上的叠加。向携带HEK-CCK2R肿瘤异种移植物的小鼠注射10nmol化合物42，并在注射后2h用IVIS成像仪成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。成像后，收集选定的组织，并用IVIS成像仪对组织成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。
图6B图示了图6A的离体组织生物分布分析。
图7A示出了对化合物43的分析：调整阈值后全身荧光图像在白光图像上的叠加。向携带HEK-CCK2R肿瘤异种移植物的小鼠注射10nmol化合物43，并在注射后2h用IVIS成像仪成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。成像后，收集选定的组织，并用IVIS成像仪对组织成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。
图7B描绘了图7A的离体组织生物分布分析。
图8A图示了对化合物44的分析：调整阈值后全身荧光图像在白光图像上的叠加。向携带HEK-CCK2R肿瘤异种移植物的小鼠注射10nmol化合物44，并在注射后2h用IVIS成像仪成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。成像后，收集选定的组织，并用IVIS成像仪对组织成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。
图8B显示了化合物44的离体组织生物分布分析。
图9描绘了注射CCK2R靶向NIR染料化合物21、40-44的小鼠的肿瘤中荧光的头对头比较。肿瘤荧光图像在白光图像上的叠加。向携带HEK-CCK2R肿瘤异种移植物的小鼠注射10nmol的所需化合物，并在注射后2h用IVIS成像仪成像。成像后，收集肿瘤组织，并用IVIS成像仪成像(ex＝745nm，em＝ICG，曝光时间＝1s)。
图10示出了CCK2R靶向NIR化合物45-49的化学结构。
图11显示CCK2R-NIR化合物45-48与CCK2R的结合亲和力。将CCK2R阳性的HEK-CCK2R癌细胞在37℃下孵育1小时，化合物的浓度增加。然后除去培养基，用新鲜培养基清洗三次，并用PBS置换。使用荧光计测定细胞结合荧光。
图12描绘了化合物21(OTL81)的化学结构、激发和发射光谱。
图13图示了化合物3与CCK2R的结合亲和力。将CCK2R阳性的HEK-CCK2R癌细胞在37℃下孵育1小时，化合物21的浓度增加。然后除去培养基，用新鲜培养基清洗三次，并用PBS置换。使用荧光计测定细胞结合荧光。
图14A显示了来自肺腺癌患者的切除的健康邻近肺组织，其不表达CCK2R。
图14B描绘了染色的切除的肺腺癌样本，说明强CCK2R表达。
图14C通过落射荧光显微镜说明了化合物21与表达CCK2R的HEK细胞的结合。
图14D通过落射荧光显微镜说明了化合物21与表达CCK2R的HEK细胞的结合。
图14E通过对携带HEK-CCK2R肿瘤的裸鼠的全身成像描绘了化合物21的体内功效和特异性。
图14F描绘了在全身成像后解剖的图14E的小鼠离体组织生物分布。
发明详述
Ⅰ.定义
除非另有注明，否则根据常规用法使用技术术语。分子生物学中常见术语的定义可见于例如Benjamin Lewin，Genes VII，由Oxford University Press于2000年出版(ISBN019879276X)；Kendrew等(编著)；The Blackcyclopedia of Molecular Biology，由Blackwell Publishers于1994年出版(ISBN 0632021829)；和Robert A.Meyers(编著)，Molecular Biology and Biotechnology：a Comprehensive Desk Reference，由Wiley，John&Sons，Inc.于1995年出版(ISBN 0471186341)；和其它类似的技术文献。
如本文所用的，“一(a)”或“一(an)”可以表示一个或多个。如本文所用的，当与词语“包括”一起使用时，词语“一(a)”或“一(an)”可以表示一个或多于一个。如本文所用的，“另一个”可以表示至少第二个或更多个。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语包括复数，并且复数术语包括单数。
如本文所用的，“约”是指数值，包括例如整数、分数和百分数，无论是否明确指出。术语“约”通常是指本领域普通技术人员将认为等同于所述值(例如，具有相同的功能或结果)的数值范围(例如，所述值的+/-5-10％)。在某些情况下，术语“约”可以包括四舍五入到最近有效数字的数值。
除非通过上下文另外指明，否则每次提及CCK2R都是指CCK2R和CCK2i4svR两者。
Ⅱ.化合物
本发明基于以下发现：有用的成像剂(活性部分)可以通过接头与选择性地结合CCK2R和剪接变体CCK2i4svR的靶向配体复合。通过不懈的努力，本发明人开发了接头并鉴定了靶向配体上的位置，活性部分可以连接该位置而不会干扰靶向配体选择性结合CCK2R和/或CCK2i4svR的能力。因此，本发明人开发了包含与活性部分连接的靶向配体的化合物，其中靶向配体是选择性结合至CCK2R和/或CCK2i4svR的2,3,4,5-四氢-1H-1,4-苯并二氮卓化合物，并且活性部分是治疗剂或成像剂。
特别地，本发明涉及包含以下的化合物
B-L-Z
其中B是靶向配体，L是接头，Z是NIR成像部分，
这些化合物靶向并结合CCK2R或CCK2i4svR或两者。
化合物通过靶向配体靶向表达或过表达CCK2R或CCK2i4svR的细胞。一旦递送，化合物就与受体结合。在某些实施方案中，化合物保留在细胞表面上足以检测、成像和/或诊断的一段时间。在其它实施方案中，化合物通过内源性细胞机制，如内吞作用内化到细胞中，用于随后的检测、成像和/或诊断或治疗。一旦内化，化合物就可保持完整或被分解、降解或以其它方式改变，以允许释放形成化合物的活性部分。应当理解，在检测、成像和/或诊断构型中，活性部分可保持连接在化合物上或在化合物内化到靶细胞中之前或之后释放。
在某些方面，本发明包括具有约5nM或更低的结合常数Kd的化合物。在另一个实施方案中，本文所述的化合物相对于正常组织，如血液、肺、肝、脾、十二指肠、皮肤、肌肉、膀胱和前列腺，表现出对表达CCK2R或过表达CCK2R细胞或组织的选择性，至少3倍的选择性，或至少5倍的选择性。在一个变型中，本文所述的化合物相对于正常组织表现出对表达CCK2R或过表达CCK2R的细胞或组织的选择性，具有至少10倍的选择性。应当理解，成像观察到的选择性表示在治疗疾病状态中可以观察到的选择性，其响应于表达或过表达CCK2R的细胞或细胞群的选择性或特异性消除。
在一些实施方案中，所述化合物具有下式
B-L-Z
其中B是选自以下的配体：
其中当n为0时，m为1或当n为1时，m为0，
其中L是接头，并且
其中Z是成像剂
或其药学上可接受的盐，或其含同位素的化合物。
在另一个实施方案中，L是氨基酸或氨基酸衍生物。在又一个实施方案中，所述氨基酸或氨基酸衍生物选自天然存在的氨基酸或天然存在的氨基酸衍生物。
在一些实施方案中，L是谷氨酸或γ-氨基丁酸。
在另一个实施方案中，L选自以下：
在又一个实施方案中，L是聚乙二醇(PEG)、PEG2或5-氨基戊酸。
在一些实施方案中，Z由下式表示：
其中，R1独立地选自O、S、N和C，
R2独立地选自CH2和CH2CH2，并且R3、R4和R5各自独立地选自H、Na、K和NH4。
在另一个实施方案中，Z在可见光谱中具有吸收和发射最大值。在又一个实施方案中，Z具有约680nm至约800nm的吸收和发射最大值。
在一些实施方案中，使化合物在组织细胞中分布后发荧光。在另一个实施方案中，通过使化合物经受近红外波长的激发光使化合物发荧光。在又一个实施方案中，所述化合物对靶向肿瘤细胞具有高选择性。
一个实施方案公开了具有选自以下的式的化合物：
其中，R1独立地选自O、S、N和C，
R2独立地选自CH2和CH2CH2，并且R3、R4和R5各自独立地选自H、Na、K和NH4，
或其药学上可接受的盐，或其含同位素的化合物。
几个实施方案公开了用于检测受试者的肿瘤的方法，包括以下步骤：选择疑似患有肿瘤的受试者，向所述受试者给予下式化合物
B-L-Z
其中B是选自以下的配体：
其中当n为0时，m为1或当n为1时，m为0，
其中L是接头，并且
其中Z是成像剂
或其药学上可接受的盐或其含同位素的化合物，用所述化合物可吸收波长的激发光照射组织；以及检测由受试者的组织或细胞中的化合物发出的光信号。
所公开的一些实施方案包括用于治疗患有癌症的受试者的方法，包括以下步骤：选择患有癌症的受试者以及向受试者给予至少一种先前公开的化合物，其中所述化合物对受试者的组织或细胞产生治疗效果。
在一些实施方案中，所述受试者是动物或人。
在另一个实施方案中，所述方法包括至少一种先前公开的化合物，所述方法还包括药学上可接受的稀释剂或载体。
在一些实施方案中，所述组织或细胞是恶性的并且与选自以下的癌症相关：肾癌、甲状腺髓样癌、胰岛素瘤、小细胞肺癌、支气管癌和回肠类癌、GIST肿瘤和结肠癌、肝细胞癌和胰腺癌。在另一个实施方案中，所述癌症是肾癌。在又一个实施方案中，所述癌症是GIST癌症。并且在又一个实施方案中，所述癌症是胃癌。
在一些实施方案中，所述癌症选自肾癌、甲状腺髓样癌、胰岛素瘤、小细胞肺癌、支气管癌和回肠类癌、GIST肿瘤和结肠癌、肝细胞癌和胰腺癌。在另一个实施方案中，所述癌症是肾癌。在又一个实施方案中，所述癌症是GIST癌症。并且在又一个实施方案中，所述癌症是胃癌。
在一些实施方案中，组织或细胞过表达胆囊收缩素B受体，或者具有与胆囊收缩素B受体的表达或过表达相关的疾病。在又一个实施方案中，细胞是表达CCK2受体的细胞，其选自恶性细胞、炎性细胞和微生物细胞。
在一些实施方案中，所述激发光是近红外波长光。在另一个实施方案中，所述激发光波长在约600至约1000纳米范围内。在又一个实施方案中，所述激发光波长在约670至约850纳米范围内。
在一些实施方案中，在给予所述组合物之前、之后或同时切除组织或细胞中的至少一种。
在一些实施方案中，所述癌症在受试者中被可视化。
所公开的一些实施方案包括组合物，其包含至少一种先前公开的化合物和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
所公开的一些实施方案包括试剂盒，其包含至少一种先前公开的化合物。在一些实施方案中，所述试剂盒用于表达CCK2受体的细胞的成像。在另一个实施方案中，所述细胞是肿瘤细胞或癌细胞。在又一个实施方案中，所述肿瘤或癌选自肾癌、甲状腺髓样癌、胰岛素瘤、小细胞肺癌、支气管癌和回肠类癌、GIST肿瘤和结肠癌、肝细胞癌和胰腺癌。
在一些实施方案中，所述试剂盒还包含所述化合物的衍生物。
在本发明的另一方面，本发明的公开内容提供合成CCK2受体靶向NIR染料缀合物(conjugate)的方法。
在一个实施方案中，本发明的公开内容提供了用于合成具有下式的D-CCK2配体(11)的中间体的方法，
在第二实施方案中，本发明的公开内容提供了用于合成具有下式的D-CCK2配体(11)的中间体的方法，
在第三实施方案中，本发明的公开内容提供了用于合成具有下式的D-CCK2配体19的方法，
在第四实施方案中，本发明的公开内容提供了用于合成具有下式的D-CCK2配体-接头-NIR染料21(OTL81)的方法，
在第五实施方案中，本发明的公开内容提供了用于合成具有下式的D-CCK2配体-接头-NIR染料29的方法，
在第六实施方案中，本发明的公开内容提供了用于合成具有下式的D-CCK2配体-接头-NIR染料34的方法，
在第七实施方案中，本发明的公开内容提供了用于合成具有下式的D-CCK2配体-接头-NIR染料39的方法，
在本发明的另一方面，本发明的公开内容提供了合成具有下式的N1-环己基苯-1,2-二胺(5)的方法，
向圆底烧瓶装入苯-1,2-二胺(100mg，0.92mmol)、乙酸(1.23mL)、PtO2(6.3mg，0.0276mmol)，然后加入环己酮(19.26μL，0.184mmol)。将反应混合物在氢气氛H2气球压力下在室温下搅拌16小时。通过硅藻土床过滤并用DCM洗涤。蒸发溶剂并使用二氧化硅柱色谱法纯化得到所需产物，收率71％。
在本发明的另一方面，本发明的公开内容提供了合成具有下式的(R)-(1-((2-(环己基氨基)苯基)氨基)-3-羟基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7)的方法，
向圆底烧瓶装入(叔丁氧基羰基)-D-丝氨酸(108.2mg，0.525mmol)、HATU(200mg，0.525mmol)、DIPEA(0.184Ml，1.05mmol)和DMF(3.25ml)，并搅拌5分钟，然后加入N1-环己基苯-1,2-二胺(100mg，0.525mmol)。继续搅拌1小时。将反应混合物用水稀释，并使用EtOAc(3×20mL)萃取并用盐水洗涤。蒸发溶剂，并使用二氧化硅柱色谱法纯化粗产物，用EtOAc/己烷洗脱得到所需产物，收率92％。
在本发明的另一方面，本发明的公开内容提供了合成具有下式的(R)-3-氨基-5-环己基-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b][1,4]二氮卓-2-酮(11)的方法，
(R)-3-氨基-5-环己基-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b][1,4]二氮卓-2-酮使用与(S)-3-氨基-5-环己基-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-1,3,4,5-四氢-2H-苯并[b][1,4]二氮卓-2-酮的过程相似的过程制备。
在本发明的另一方面，本发明的公开内容提供了合成具有下式的(R)-3-(3-(5-环己基-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1，4]二氮卓-3-基)脲基)苯甲酸(19)的方法，
(R)-3-(3-(5-环己基-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1，4]二氮卓-3-基)脲基)苯甲酸的合成是使用与(S)-3-(3-(5-环己基-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1，4]二氮卓-3-基)脲基)苯甲酸的合成过程相似的合成过程从(R)-3-氨基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸开始实现的。
在本发明的另一方面，本发明的公开内容提供了合成具有下式的4-(2-((E)-2-((E)-2-(4-((S)-2-羧基-2-((R)-4-羧基-4-(3-(3-((R)-5-环己基-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-3-基)脲基)苯甲酰胺基)丁酰胺基)乙基)苯氧基)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)吲哚啉-2-亚基)亚乙基)环己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-5-磺基-3H-吲哚-1-鎓-1-基)丁烷-1-磺酸酯(21)的方法，
4-(2-((E)-2-((E)-2-(4-((S)-2-羧基-2-((R)-4-羧基-4-(3-(3-((R)-5-环己基-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-3-基)脲基)苯甲酰胺基)丁酰胺基)乙基)苯氧基)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)吲哚啉-2-亚基)亚乙基)环己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-5-磺基-3H-吲哚-1-鎓-1-基)丁烷-1-磺酸酯使用与4-(2-((E)-2-((E)-2-(4-((S)-2-羧基-2-((R)-4-羧基-4-(3-(3-((S)-5-环己基-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮卓-3-基)脲基)苯甲酰胺基)丁酰胺基)乙基)苯氧基)-3-(2-((E)-3,3-二甲基-5-磺基-1-(4-磺基丁基)吲哚啉-2-亚基)亚乙基)环己-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-5-磺基-3H-吲哚-1-鎓-1-基)丁烷-1-磺酸酯的方案相似的方案制备。
公开的其余的CCK2受体靶向NIR缀合物按照类似的合成方案和合成过程合成。
III.检测、诊断和成像方法
本发明还包括在多种应用中，如在癌症的检测、诊断和成像方法中使用所述化合物的方法。例如，一方面，本发明涉及检测受试者的肿瘤的方法，包括向疑似患有肿瘤的受试者给予本文所定义的化合物，并检测受试者中的化合物，其中所述化合物的活性部分Z是光学成像剂。在相关方面，本发明包括用于诊断受试者的癌症的方法，包括向疑似患有癌症的受试者给予本文定义的化合物，并检测受试者中的化合物，其中所述化合物的活性部分Z是成像剂。在另一相关方面，本发明包括用于对受试者的癌症成像的方法，包括向疑似患有癌症或患有癌症的受试者给予本文定义的化合物，并检测受试者中的化合物，其中所述化合物的活性部分Z是成像剂。
IV.药物制剂
使用所述化合物的本发明方法可以在一种或多种体外、体内和离体应用中实施。当体内和离体使用时，所述化合物可以制备成包含所述化合物和一种或多种药学上可接受的载体和/或稀释剂的药物组合物。技术人员将理解，包含药物组合物的具体要素将取决于包括化合物中靶向配体和活性部分的特性(identity)、待检测或治疗的癌症或肿瘤的特性、癌症或肿瘤在受试者中的位置、检测成像剂的可用手段，以及用于向受试者给予化合物的方法的因素。
本发明的药物组合物可以配制成，例如，用于口服、舌下、鼻内、眼内、直肠、透皮、粘膜、肺部、局部或肠胃外给予。肠胃外给予方式包括但不限于皮内、皮下(s.c.，s.q.，sub-Q，Hypo)、肌肉内(i.m.)、静脉内(i.v.)、腹膜内(i.p.)、动脉内、髓内、心内、关节内(关节)、滑膜内(关节液区)、颅内、脊柱内和鞘内(脊髓液)。用于药物组合物的肠胃外注射或输注的任何已知装置可用于实现这种给予。
肠胃外剂型的实例包括化合物在等渗盐水、5％葡萄糖或其它众所周知的药学上可接受的液体载体如液体醇、二醇、酯和酰胺中的水溶液。根据本发明的肠胃外剂型可以是包含一定剂量化合物的可重构冻干物的形式。在本实施方案的一个方面，化合物可以配制成延长或延迟释放制剂，如第4713249、5266333和5417982号美国专利中描述的可生物降解的碳水化合物基质，其中每一篇的公开内容都过引用的方式整体并入本文，供选择地可以使用缓释泵(例如，渗透泵)。
在本发明的一个方面，至少一种另外的治疗因子可以与本发明的化合物和方法组合或作为本发明的化合物和方法的佐剂给予受试者，以增强化合物介导的致病细胞群的消除，或者可以使用多于一种的治疗因子。在一个实例中，所述治疗因子可选自化疗剂、或能够补充所给予的本发明化合物的功效的另一种治疗因子。在另一个实例中，本身有例如细胞毒性的化疗剂可以起到增强肿瘤渗透性的作用，也适合用作另外的治疗因子。
所述治疗因子可以在化合物之前、之后或同时给予受试者，并且所述治疗因子可以作为包含所述化合物的相同组合物的一部分或作为与所述化合物不同的组合物的一部分给予。含有治疗有效剂量的治疗因子的任何这样的治疗组合物均可用于本发明。
VI.给予受试者
A.检测、诊断和成像方法
本文所述的检测、诊断和成像方法中使用的化合物的量还将取决于多种因素，包括靶向配体的特性、成像剂的特性、待检测的癌症或肿瘤的特性、癌症或肿瘤在受试者中的位置、用于检测成像剂的可用的手段、以及用于向受试者给予化合物的方法。
技术人员将理解，检测、诊断和成像的方法中的每一种都可以使用一种类型的化合物或多于一种，如两种、三种、四种或更多种类型的化合物来实施。当使用两种或更多种类型的化合物时，所述方法可以通过向受试者同时或顺序给予两种或多种类型的化合物来实施，根据所实施的方法，时间间隔为5、10、15、20、25、30或更多分钟。举例说明，例如，可以给予受试者在共同给药方案中具有不同靶向配体但具有相同活性部分的化合物。在其它实施方案中，可以给予受试者包含与不同活性部分连接的相同靶向配体的化合物，或包含与不同活性部分连接的不同靶向配体的化合物。
当用于检测、诊断和成像方法时，优选将化合物肠胃外，例如皮内、皮下、肌肉内、腹膜内、静脉内或鞘内给予受试者。然而，技术人员将理解，在一些情况下，给予可以是口服、舌下、鼻内、眼内、直肠、透皮、粘膜、肺或局部的。
除了检测所述化合物之外，技术人员将理解，可以将检测到的信号量与其它值，如与来自已知没有肿瘤或癌症的受试者的对照值，或者来自同一受试者的较早日期获得的值比较。因此，本发明的每种方法可供选择地包括测量受试者中化合物的量，而不是简单地检测它，并且任选地进一步将测量的量与对照值或在同一受试者中较早时间获得的值比较。
用于检测化合物的手段基于多种因素变化，这些因素包括成像剂的特性，无论所述方法是在体外、体内还是离体实施，以及当在体内实施时，受试者中被可视化的位置。
VII.实施例
通用方法：HEK-CCK2细胞(用CCK2受体转染的人胚胎肾细胞)是来自MarkHellmich博士(University of Texas Medical Branch,Galveston,TX)的慷慨赠送，其长成单层，使用Dulbecco改进Eagles培养基(GIBCO)(Gibco，NY)10％热灭活的胎牛血清(Atlanta Biological，GA)和1％青霉素链霉素(Gibco，NY)，在5％二氧化碳：95％湿空气的气氛中于37℃下至少6次传代，然后用于测定。
无胸腺雌性裸(nu/nu)小鼠(5周龄，18-20g)购自Envigo(Indianapolis，IN)并维持正常的啮齿动物饮食(Teklad，WI)。以5只/笼将动物饲养在带栅栏(barrier)、无病原体的有遮盖的架(cloaked rack)中。根据需要给予高压蒸汽处理的自来水和食物。在研究期间，以标准的12小时光亮-黑暗循环将动物饲养在无菌环境中。通过耳朵打孔逐一识别小鼠。所有动物程序均经Purdue Animal Care and Use Committee批准。根据国家和国际动物人道待遇指南进行动物护理和研究。
体外结合和特异性：将过表达CCK2的HEK细胞接种到T75烧瓶中并使其在48小时内形成单层。胰蛋白酶消化后，将释放细胞转移到离心管(1×106个细胞/管)中并离心。在存在或不存在100倍过量配体—高亲和力CCK2受体拮抗剂的情况下，用含有升高浓度的所需CCK2R-配体-NIR染料化合物的新鲜培养基置换培养基，并在37℃孵育1小时。用新鲜培养基(2×1.0mL)和PBS(1×1.0mL)冲洗后，将细胞重悬于PBS(1.0mL)中，并使用荧光计(Cary，Agilent)分析细胞结合荧光(100000个细胞/样品)。使用GraphPad Prism 4以细胞结合荧光百分比相对测试物品的对数浓度的图来计算相对结合亲和力。
全身成像：在肩上用HEK-CCK2细胞(5.0×106/小鼠，在GIBCO培养基中的50％高浓度基质胶中)皮下接种6周龄雌性nu/nu小鼠。使用卡尺每2天在垂直方向上测量肿瘤的生长(按照相同的时间表监测体重)，并且肿瘤的体积计算为0.5×L×W2(L＝最长轴，并且W＝垂直于L的轴，以毫米计)。一旦肿瘤体积达到400mm3，给动物(5只小鼠/组)静脉注射含10nmol所需的CCK2R-配体-NIR染料化合物的磷酸盐缓冲盐水(100μL)。对于全身成像和生物分布研究，在给予感兴趣的化合物2小时后通过CO2窒息对动物实施安乐死。
然后使用具有Living Image 4.0软件的Caliper IVIS Lumina II ImagingStation(PerkinElmer Inc，MA)进行全身成像(完整肿瘤)实验。
成像设置：-灯级：中等；激发：745nm；发射：ICG(830nm)；落射照射(epiillumination)；合并(binning)：4(M)，FOV＝12.5；f-stop＝2；采集时间＝1秒。对于时间依赖性研究，使用异氟醚在麻醉下对动物进行成像。然后使用具有Living Image 4.0软件的Caliper IVIS Lumina II Imaging Station进行全身成像(完整肿瘤)实验(PerkinElmerInc，MA)。
组织生物分布：在全身成像后，对动物进行解剖，像前面一样使用IVIS成像器分析选择的组织(心脏、肺、肝脏、脾脏、肾脏、胃、小肠、大肠、肌肉、皮肤和肿瘤)的荧光活性。成像设置：-灯级：中等；激发：745nm；发射：ICG；落射照射；合并：4(M)，FOV＝12.5；f-stop＝2；采集时间＝1秒。
实施例1：具有单个氨基酸间隔基团的CCK2R靶向NIR化合物的临床前评估
体内研究的结论：化合物40和41之间的差异是化合物41在酪氨酸和脲部分之间具有另外的苄基残基。与化合物40相比，化合物41表现出更高的特异性、更高的积聚、快速的皮肤清除，表明化合物41中的另外的苄基残基在最终化合物的受体结合、特异性和药代动力学性质方面起作用。
实施例2：具有短氨基酸间隔基团的CCK2R靶向NIR化合物的临床前评估
体外研究：
表1：CCK2R-NIR化合物2-6与CCK2R阳性的HEK-CCK2R癌细胞的结合亲和力。
化合物 K<sub>D</sub>(nM)
(21) 0.67
(42) 1.74
(43) 0.81
(44) 2.6
体外研究的结论：体外结合亲和力数据显示：化合物21和43对CCK2R具有非常高的亲和力，而与化合物21和43相比，化合物42和44对CCK2R具有相对较弱的亲和力。全身成像和生物分布数据表明，所有化合物都积聚在CCK2R阳性的肿瘤中。然而，化合物21和41在肿瘤中具有非常高的荧光强度，表明这些化合物对CCK2R的高效力。化合物肿瘤摄取的头对头比较表明化合物21在所有四种肿瘤中具有最高的肿瘤摄取，表明它将是用于CCK2R阳性的癌症的图像引导手术的良好临床候选物。
实施例3：具有手性修饰的短氨基酸间隔基团的CCK2R靶向NIR化合物的临床前评估
体外研究：
表2：CCK2R-NIR化合物45-49与CCK2R阳性的HEK-CCK2R癌细胞的结合亲和力。
化合物 K<sub>D</sub>(nM)
(45) 2.3
(46) 34.03
(47) 14.74
(48) 0.90
(49) 13.90
体外研究的结论：体外结合亲和力数据显示：化合物10对CCK2R具有非常高的亲和力，而化合物8、9和11对CCK2R具有相对弱的亲和力。这可能是由于配体从D-异构体到L-异构体的手性变化。然而，与化合物21相比，化合物10对CCK2R的亲和力较低。因此，决定围绕化合物21进行先导优化。
实施例4：化合物21的扩展临床前评估
结论：化合物21在776nm处被激发并在796nm处发射(图12)，表明20nm斯托克斯(Stokes)位移，具有很好的NIR特性。由研究得到的解离常数(KD)3计算为1nM(图13)，表明对CCK2受体的非常高的亲和力。观察到化合物3有效地标记HEK-CCK2细胞(图14c和d)。IHC能力分析表明超过60％的样本具有中等至强的CCK2R表达水平，而健康的肺不表达CCK2R(图14a-b)。此外，携带HEK-CCK2R肿瘤异种移植物的小鼠的全身成像(图14c)和它们的离体组织生物分布(图14f)表明，化合物21仅在CCK2R阳性的肿瘤中被摄取而在其它组织中没有积聚，表明非常高的肿瘤-背景比。
虽然已经参考本发明的某些特定实施方案描述了本发明，但是本领域技术人员将理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种修改。所附权利要求的范围不限于所描述的特定实施方案。
参考
本说明书中提及的所有专利和出版物都表明本发明所属领域的技术人员的技术水平。每篇引用的专利和出版物通过引用整体并入本文。

Claims (47)

1.具有下式的化合物、或其药学上可接受的盐、或其含同位素的化合物，
B-L-Z
其中B是选自以下的配体
其中当n为0时，m为1或当n为1时，m为0，
其中L是接头，并且
其中Z是成像剂。
2.权利要求1所述的化合物，其中L是氨基酸或氨基酸衍生物。
3.权利要求2所述的化合物，其中所述氨基酸或氨基酸衍生物选自天然存在的氨基酸或天然存在的氨基酸衍生物。
4.权利要求1所述的化合物，其中L是谷氨酸或γ-氨基丁酸。
5.权利要求1所述的化合物，其中L选自以下：
6.权利要求1所述的化合物，其中L是聚乙二醇(PEG)、PEG2或5-氨基戊酸。
7.权利要求1所述的化合物，其中Z由下式表示：
其中，R1独立地选自O、S、N和C，
R2独立地选自CH2和CH2CH2，并且
R3、R4和R5各自独立地选自H、Na、K和NH4。
8.权利要求1所述的化合物，其中Z在可见光谱中具有吸收和发射最大值。
9.权利要求1所述的化合物，其中Z具有约680nm至约800nm的吸收和发射最大值。
10.权利要求1所述的化合物，其中使所述化合物在组织细胞中分布后发荧光。
11.权利要求1所述的化合物，其中通过使所述化合物经受近红外波长的激发光使化合物发荧光。
12.权利要求1所述的化合物，其中所述化合物对靶向肿瘤细胞具有高选择性。
13.具有选自以下的式的化合物、或其药学上可接受的盐，或其含同位素的化合物：
其中，R1独立地选自O、S、N和C，
R2独立地选自CH2和CH2CH2，并且
R3、R4和R5各自独立地选自H、Na、K和NH4。
14.一种检测受试者的肿瘤的方法，包括以下步骤：选择疑似患有肿瘤的受试者，给予所述受试者权利要求1所述的化合物，用所述化合物可吸收波长的激发光照射组织；以及检测由受试者的组织或细胞中的所述化合物发出的光信号。
15.权利要求14所述的方法，其中所述受试者是动物或人。
16.权利要求14所述的方法，其中权利要求1所述的化合物还包含药学上可接受的稀释剂或载体。
17.权利要求14所述的方法，其中所述组织或细胞是恶性的并且与选自以下的癌症相关：肾癌、甲状腺髓样癌、胰岛素瘤、小细胞肺癌、支气管和回肠类癌、GIST肿瘤和结肠癌、肝细胞癌和胰腺癌。
18.权利要求17所述的方法，其中所述癌症是肾癌。
19.权利要求17所述的方法，其中所述癌症是GIST癌症。
20.权利要求17所述的方法，其中所述癌症是胃癌。
21.权利要求14所述的方法，其中所述组织或细胞过表达胆囊收缩素B受体或具有与胆囊收缩素B受体的表达或过表达相关的疾病。
22.权利要求14所述的方法，其中所述细胞是表达CCK2受体的细胞，其选自恶性细胞、炎性细胞和微生物细胞。
23.权利要求14所述的方法，其中激发光是近红外波长光。
24.权利要求23所述的方法，其中所述激发光波长在约600至约1000纳米范围内。
25.权利要求24所述的方法，其中所述激发光波长在约670纳米至约850纳米范围内。
26.权利要求14所述的方法，其中在给予所述化合物之前、之后或同时切除组织或细胞中的至少一种。
27.权利要求14所述的方法，其中癌症在受试者中可视化。
28.一种治疗患有癌症的受试者的方法，包括选择患有癌症的受试者和向受试者给予权利要求1所述的化合物的步骤，其中权利要求1所述的化合物对受试者的组织或细胞产生治疗效果。
29.权利要求28所述的方法，其中权利要求1所述的化合物还包含药学上可接受的稀释剂或载体。
30.权利要求28所述的方法，其中所述癌症选自肾癌、甲状腺髓样癌、胰岛素瘤、小细胞肺癌、支气管和回肠类癌、GIST肿瘤和结肠癌、肝细胞癌和胰腺癌。
31.权利要求30所述的方法，其中所述癌症是肾癌。
32.权利要求30所述的方法，其中所述癌症是GIST癌症。
33.权利要求30所述的方法，其中所述癌症是胃癌。
34.权利要求28所述的方法，其中所述受试者是动物或人。
35.权利要求28所述的方法，其中所述组织或细胞过表达胆囊收缩素B受体或具有与胆囊收缩素B受体的表达或过表达相关的疾病。
36.权利要求28所述的方法，其中所述细胞是表达CCK2受体的细胞，其选自恶性细胞、炎性细胞和微生物细胞。
37.权利要求28所述的方法，其中激发光是近红外波长光。
38.权利要求37所述的方法，其中所述激发光波长在约600至约1000纳米范围内。
39.权利要求38所述的方法，其中所述激发光波长在约670纳米至约850纳米范围内。
40.权利要求28所述的方法，其中在给予所述组合物之前、之后或同时切除癌症。
41.权利要求28所述的方法，其中借助于所述化合物使癌症可视化。
42.一种组合物，其包含权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
43.一种试剂盒，其包含权利要求1所述的化合物。
44.权利要求43所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于表达CCK2受体的细胞的成像。
45.权利要求44所述的试剂盒，其中所述细胞是肿瘤细胞或癌细胞。
46.权利要求45所述的试剂盒，其中所述肿瘤或癌选自肾癌、甲状腺髓样癌、胰岛素瘤、小细胞肺癌、支气管和回肠类癌、GIST肿瘤和结肠癌、肝细胞癌和胰腺癌。
47.权利要求43所述的试剂盒，还包含所述化合物的衍生物。
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