CN110156909A - 利用深山含笑叶提取多糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明申请属于多糖提取技术领域，具体公开了一种利用深山含笑叶提取多糖的方法，(1)取新鲜深山含笑成熟叶清洗烘干后粉碎；(2)称取步骤(1)中的粉末用石油醚回流提取，充分脱脂，粉末风干；(3)将步骤(2)所得粉末用乙醇溶液中回流提取，脱去醇溶性单糖得到深山含笑叶粉末；(4)取步骤(3)所得的深山含笑叶粉末进行多糖提取；(5)测定吸光度；测得产率在5.41‑6.01％。本发明主要用于提取多糖，解决了现有技术中从深山含笑中提取多糖受条件限制使得应用范围减小的问题。

Description

利用深山含笑叶提取多糖的方法

技术领域

本发明属于多糖提取技术领域，具体公开了一种利用深山含笑叶提取多糖的方法。

背景技术

深山含笑，木兰科含笑属植物，常绿大乔木，高度可达20m。深山含笑生长快，天然更新能力强。深山含笑作为优良园林栽培树种，常被应用于公园绿地、庭院绿地中。其叶、果实、花富含大量芳香物质和多糖，具药用价值，材质优异，在林业建设中具备广阔运用前景。深山含笑叶片于每年春天新旧叶交替，不能充分实现其经济价值。

植物多糖是一种含酮基或醛基的多羟基聚合物。依据植物器官的差异，植物多糖分为3种类型：花果实、茎叶类、块根茎类多糖。多糖的活性作用与其构造密切相关，受多种因素的影响，多糖还与许多疾病病理历程以及衰老过程密切相关。探究多糖先导药物并加以改造、合成已成为糖生物学的热点。经研究发现，植物多糖具很多特有的药理作用，包括抗氧化活性、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗衰老、保护骨关节炎软骨、抗辐射、免疫调节等。植物多糖的应用研究也很丰富，目前，植物多糖已应用于保健品、化妆品等领域，随着科学研究的进一步发展，植物多糖在这些领域不可替代的优势已经逐渐显现。

植物多糖的提取方法十分多样，相关报道繁多，影响提取过程的因素众多。不同方法联合得到最佳提取多糖工艺，已得到科学界研究的青睐。多糖提取方法需在对原料做一定预处理的基础上根据其原料及存在形式的特点进行设计。植物多糖的提取工艺包括热水浸提法、酸提法、碱提法、超临界萃取法、酶提取法、超声辅助提取法、微波提取法、内部沸腾法和亚临界提取法以及超高压提取法。目前，植物多糖提取方法在国内外运用较为广泛的是最易于操作的热水浸提醇沉法。采用热水对原材料进行浸泡后，加入一定浓度的乙醇，将多糖溶液中的氢键毁坏，使多糖沉淀析出，这种方法即为热水浸提醇沉法。酶法提取，则条件相对温和，即利用酶的选择性、催化活性，于较为温和的条件下破坏植物细胞壁结构，使细胞内成分溶解和释放，从而达到提取目的。该提取方法快速高效、条件温和、易控制，但局限于有些酶价格高，条件苛刻，使得应用范围较小。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用深山含笑叶提取多糖的方法，以解决现有技术中从深山含笑中提取多糖受条件限制使得应用范围减小的问题。

为了达到上述目的，本发明的技术方案为：利用深山含笑叶提取多糖的方法，包括以下步骤：

(1)取新鲜深山含笑成熟叶，蒸馏水清洗去除叶片表面附着物，置于100℃烘箱中杀青15min，烘干至恒重，所有样品粉碎得粉末，过40目筛后干燥贮存；

(2)称取步骤(1)中的粉末用滤纸和纱布包裹，置于索氏提取器，加入石油醚回流提取，充分脱脂，粉末风干，密封保存待用；

(3)将步骤(2)所得粉末置于索氏提取器，乙醇溶液中回流提取，脱去醇溶性单糖，风干得到深山含笑叶粉末，密封保存待用；

(4)取步骤(3)所得的深山含笑叶粉末进行热水浸提法、果胶酶提法或纤维素酶提法提取多糖；将粉末置于不同条件下进行提取；所得提取液离心取上清液，加入80％乙醇，4℃进行醇沉处理；离心去除乙醇，风干得到含糖残余物；将风干的含糖残余物加入热水复溶，剧烈振荡使其充分溶解；复溶液利用TCA—木瓜蛋白酶联用法脱去杂蛋白，室温10000r/min，离心10min后弃上清，沉淀干燥得深山含笑叶多糖；

(5)取步骤(4)中的山含笑叶多糖1mL置于具塞试管中，加入质量分数为5％苯酚试剂1.0mL、浓硫酸5.0mL；振荡器摇匀，沸水浴显色25min，冷却至室温，以试样空白为参比，在490nm处测定吸光度；计算多糖得率在5.4-6.01％。

进一步，步骤(1)中在60℃条件烘干至恒重。使用上述温度烘干不易破坏深山含笑叶中的多糖成份。

进一步，步骤(2)中加入石油醚，于85℃下回流提取3h。使用上述温度和时间能尽可能的将深山含笑叶中脂类物质去除。

进一步，步骤(3)中使用质量分数为80％乙醇溶液，于95℃下回流提取3h。使用上述温度和时间，能充分去除深山含笑叶中的醇溶性单糖和低聚糖。

进一步，步骤(4)中第一次离心在室温下使用10000r/min转速离心。可以避免多糖在低温下析出。

进一步，步骤(4)中将风干的含糖残余物加入3倍体积的热水复溶，剧烈振荡5min使其充分溶解。使用上述比例的热水能较好的溶解多糖物质，同时得到较高浓度多糖为后续研究提供条件。

本技术方案的工作原理及有益效果在于：

(1)本发明酶法提取深山含笑叶多糖效率高，条件温和易控制，可以较好保持多糖生物活性；

(2)本发明中使用的酶价格低，提取温度较低，降低了提取多糖的成本，易于工业化生产；

(3)本发明提取的深山含笑叶多糖得率较高，为开发深山含笑叶多糖在食品和化妆品领域的应用提供了技术基础。

具体实施方式

下面通过具体实施方式进一步详细说明：

实施例1，利用热水浸提法提取深山含笑叶多糖的方法，包括以下步骤：

(1)取新鲜深山含笑成熟叶，蒸馏水清洗去除叶片表面附着物，置于100℃烘箱中杀青15min，转至60℃烘干至恒重。所有样品粉碎，过40目筛后干燥贮存。

(2)称取15g粉末用滤纸和纱布包裹，置于索氏提取器，加入100ml石油醚，于85℃下回流提取3h，充分脱脂。粉末风干，密封保存待用。

(3)将步骤(2)所得粉末置于索氏提取器，加入80％乙醇溶液100mL，于95℃下回流提取3h，脱去醇溶性单糖和低聚糖。风干密封保存待用。

(4)取步骤(3)所得的深山含笑叶粉末0.2g进行热水浸提法提取多糖。将粉末置于温度100℃、料液比1:40(g/ml)、时间120min为最佳浸提条件下提取。所得提取液10000r/min离心10min。取上清液，加入80％乙醇(分析纯)进行醇沉处理(静置过夜)。离心，弃去乙醇，风干。将风干的含糖残余物加入3倍体积的热水复溶，剧烈振荡5min使其充分溶解。复溶液利用TCA—木瓜蛋白酶联用法脱去杂蛋白，10000r/min，离心10min，弃沉淀，上清干燥得深山含笑叶多糖。

(5)取步骤(4)中的山含笑叶多糖1mL置于具塞试管中，加入质量分数为5％苯酚试剂1.0mL、浓硫酸5.0mL。振荡器摇匀，沸水浴显色25min，冷却至室温，以试样空白为参比，在490nm处测定吸光度。

(6)采用热水浸提法提取深山含笑叶多糖，得率可达到5.61％。

实施例2，利用果胶酶提法提取深山含笑叶多糖的方法，包括以下步骤：

(1)取新鲜深山含笑成熟叶，蒸馏水清洗去除叶片表面附着物，置于100℃烘箱中杀青15min，转至60℃烘干至恒重。所有样品粉碎，过40目筛后干燥贮存。

(2)称取15g粉末用滤纸和纱布包裹，置于索氏提取器，加入100ml石油醚，于85℃下回流提取3h，充分脱脂。粉末风干，密封保存待用。

(3)将步骤(2)所得粉末置于索氏提取器，加入80％乙醇溶液100mL，于95℃下回流提取3h，脱去醇溶性单糖和低聚糖。风干密封保存待用。

(4)取步骤(3)所得的深山含笑叶粉末0.2g进行果胶酶提法提取多糖。将粉末置于果胶酶用量为4000U/g、酶解温度为50℃、酶解时间为60min、提取液pH值为4.0条件下提取。所得提取液10000r/min离心10min。取上清液，加入80％乙醇(分析纯)进行醇沉处理(静置过夜)。离心除去乙醇，风干。将风干的含糖残余物加入3倍体积的热水复溶，剧烈振荡5min使其充分溶解。复溶液利用TCA—木瓜蛋白酶联用法脱去杂蛋白，10000r/min，离心10min，弃沉淀，上清干燥得深山含笑叶多糖。

(5)取步骤(4)中的山含笑叶多糖1mL置于具塞试管中，加入质量分数为5％苯酚试剂1.0mL、浓硫酸5.0mL。振荡器摇匀，沸水浴显色25min，冷却至室温，以试样空白为参比，在490nm处测定吸光度。

(6)采用果胶酶提法提取深山含笑叶多糖，得率可达到5.41％。

实施例3，利用纤维素酶提法提取深山含笑叶多糖的方法，包括以下步骤：

(1)取新鲜深山含笑成熟叶，蒸馏水清洗去除叶片表面附着物，置于100℃烘箱中杀青15min，转至60℃烘干至恒重。所有样品粉碎，过40目筛后干燥贮存。

(2)称取15g粉末用滤纸和纱布包裹，置于索氏提取器，加入100ml石油醚，于85℃下回流提取3h，充分脱脂。粉末风干，密封保存待用。

(3)将步骤(2)所得粉末置于索氏提取器，加入80％乙醇溶液100mL，于95℃下回流提取3h，脱去醇溶性单糖和低聚糖。风干密封保存待用。

(4)取步骤(3)所得的深山含笑叶粉末0.2g进行纤维素酶提法提取多糖。将粉末置于纤维素酶用量为12000U/g、温度为50℃、时间为90min、提取液pH值为5.0条件下提取。所得提取液10000r/min离心10min。取上清液，加入80％乙醇(分析纯)进行醇沉处理(静置过夜)。离心，弃去乙醇，风干。将风干的含糖残余物加入3倍体积的热水复溶，剧烈振荡5min使其充分溶解。复溶液利用TCA—木瓜蛋白酶联用法脱去杂蛋白，10000r/min，离心10min，弃沉淀，上清液干燥得深山含笑叶多糖。

(5)取步骤(4)中的山含笑叶多糖1mL置于具塞试管中，加入质量分数为5％苯酚试剂1.0mL、浓硫酸5.0mL。振荡器摇匀，沸水浴显色25min，冷却至室温，以试样空白为参比，在490nm处测定吸光度。

(6)采用纤维素酶提法提取深山含笑叶多糖，得率可达到6.01％。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。

Claims (6)

1.利用深山含笑叶提取多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取新鲜深山含笑成熟叶，蒸馏水清洗去除叶片表面附着物，置于100℃烘箱中杀青15min，烘干至恒重，所有样品粉碎得粉末，过40目筛后干燥贮存；

(2)称取步骤(1)中的粉末用滤纸和纱布包裹，置于索氏提取器，加入石油醚回流提取，充分脱脂，粉末风干，密封保存待用；

(3)将步骤(2)所得粉末置于索氏提取器，用乙醇溶液回流提取，脱去醇溶性单糖，风干得到深山含笑叶粉末，密封保存待用；

(4)取步骤(3)所得的深山含笑叶粉末进行热水浸提法、果胶酶提法或纤维素酶提法提取多糖；将粉末置于不同条件下进行提取；所得提取液离心取上清液，加入80％乙醇，置于4℃醇沉处理；离心去除乙醇，风干得到含糖残余物；将风干的含糖残余物加入热水复溶，剧烈振荡使其充分溶解；复溶液利用TCA—木瓜蛋白酶联用法脱去杂蛋白，置于4℃，10000r/min，离心10min后弃上清，沉淀干燥得深山含笑叶多糖；

(5)取步骤(4)中的山含笑叶多糖1mL置于具塞试管中，加入质量分数为5％苯酚试剂1.0mL、浓硫酸5.0mL；振荡器摇匀，沸水浴显色25min，冷却至室温，以试样空白为参比，在490nm处测定吸光度；计算多糖得率在5.4-6.01％。

2.根据权利要求1所述的利用深山含笑叶提取多糖的方法，其特征在于，步骤(1)中在80℃条件烘干至恒重。

3.根据权利要求1所述的利用深山含笑叶提取多糖的方法，其特征在于，步骤(2)中加入石油醚，于85℃下回流提取3h。

4.根据权利要求1所述的利用深山含笑叶提取多糖的方法，其特征在于，步骤(3)中使用质量分数为80％乙醇溶液，于95℃下回流提取3h。

5.根据权利要求1所述的利用深山含笑叶提取多糖的方法，其特征在于，步骤(4)中第一次离心在室温条件下使用10000r/min转速离心。

6.根据权利要求5所述的利用深山含笑叶提取多糖的方法，其特征在于，步骤(4)中将风干的含糖残余物加入3倍体积的热水复溶，剧烈振荡5min使其充分溶解。