CN110089380A - 一种利用烤烟间作板蓝根控制烟田土壤病毒的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利用烤烟间作板蓝根控制烟田土壤病毒的方法。本发明通过建立板蓝根和烤烟间作制度，利用板蓝根和烤烟的有益化感作用有效减少病、虫害，不仅可以有效改善土壤理化性质、调节土壤肥力，还可以弱化连作障碍，在不破坏农田生态环境和现有种植功能前提下，能同时、高效杀灭烟田土壤中的TMV、CMV和PVY病毒，显著降低烟草TMV、CMV和PVY病害的发病率及危害程度，增加了烟田系统的多样性，使生态系统更加稳定，抗逆性更强，同时提高了烤烟的产量和品质。该方法操作简单，经济实惠，管理技术要求不高，不破坏土壤理化性质，无二次污染，绿色、环保，具有强大的推广应用前景。

Description

一种利用烤烟间作板蓝根控制烟田土壤病毒的方法
技术领域
本发明属于烟草栽培技术领域。具体地，涉及一种利用烤烟间作板蓝根控制烟田土壤病毒的方法。
背景技术
近年来，烟草病毒病的发生呈上升趋势，严重影响烟叶的品质和产量。使烟农收入减少，降低其种植烟草的积极性。烟田土壤携带病毒是烟草病毒病传播的主要途径之一。农业上常用的化学制剂消毒法容易造成土壤盐碱化，加重土壤板结。生产上开发绿色、环保的带毒土壤修复技术具有重要意义。
在人类生产活动中，农田土壤经常受到各种有毒有害物质的污染，如：农药污染、原油污染、病原微生物污染等，不仅对生态环境产生危害，也对人类健康造成威胁。在不同类型的土壤污染中，病原病毒对农田土壤的污染已成为农业发展的一大障碍。
人们对土壤中携带病毒的研究由来已久。1980年，人们在土壤和废水中发现了多种人类的致病性病毒，并且确定土壤和废水是人类的致病性病毒的主要传染源(林长胜，1980)。1995年，研究人员探索了棉铃虫核型多角体病毒(Heliothis armigera nuclearpolyhedrosis virus，HaNPv)在土壤中的滞留情况及土壤pH对HaNPv生物活性的影响(张忠信，1995)。2006年，赵炳梓(2006)以MS2和-174为指示病毒，研究了病毒在土壤中迁移的主要影响因子。王秋英等(2007)探究了土壤对病毒的吸附行为及其在环境中的净化作用，发现红黏土对病毒的吸附能力最强，而沙质潮土最弱。2016年，有人报道黄瓜绿斑驳花叶病毒感病植株残体和病地土壤能传播该病毒，并且具有较强的感病性，容易引起后茬作物的感病和发病(蔡美艳等，2016)。
烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaicvirus，CMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y，PVY)是侵染烟草的主要病毒。它们引发的病毒病每年导致烟草产业巨大的经济损失，使烟农收入减少，严重降低其种植烟草的积极性。烟株在田间发生病毒病的主要原因主要有土壤带毒传毒、昆虫传毒、苗期带毒等。其中，土壤传毒是烟草病毒传播的主要途径之一。造成CMV、PVY土壤非介体传播的原因主要是CMV、PVY在烟草病根中的存活期比较长，而且它们极易通过根系的伤口侵入烟株，田间移苗时会使根系产生许多微伤口，土壤病残体中的病毒便会趁机侵入烟苗根部。农业上常用的土壤消毒方法是在土壤中施入石灰和硫酸铜混合物。这种方法一定程度上可达到抑制土壤中病原物的目的，但是同时也会破坏土壤结构、导致耕地土壤酸化、加重土壤板结，最终丧失农业耕种价值，谈不上对土壤的修复。开发针对TMV、CMV和PVY的烟田土壤绿色修复技术对于减少病毒初侵染源、有效防控病毒病、土地资源保护和可持续发展具有重要的现实意义。
化感作用(allelopathy)是指一种植物或微生物通过自身合成产生并释放到周围环境中的化学物质对其他植物或微生物产生直接或间接的排斥和促进作用。具有化感作用的物质为化感物质(allelochemicals)。这一作用广泛存在于自然界中。将有益的化感作用应用到农田土壤有害微生物的防控是一种非常绿色、环保的好思路。通过建立合理的轮作、间作、套作或混种制度，植物的有益化感作用将减少病、虫害，有效改善土壤理化性质，调节土壤肥力，提高作物的产量和质量(张晓珂，2004)，还可以弱化连作障碍(Pal MS，2006)。韭菜和香蕉间作可以很好地杀灭蕉田土壤里的香蕉枯萎病菌(Fusarium oxsporiumf.sp.cubense,FOC)。有研究表明：大麦、芹菜、韭菜、红薯、旱稻与烟草间作对黑胫病有一定的防效(布云虹，2016)。但研究表明，化感作用的形成是一个复杂的过程，作物间种存在生物多样性、生境多样性、遗传多样性的特点，不同间作作物与烟草的相互作用不同、抗病性不同，不同群落构建、不同生境等对土壤有害微生物的影响也不同，同时在很大程度上影响烟草的生长，并不是将所有作物品种与烤烟品种进行任意间作，均可达到更高的产量和品质等较好的综合效果。如何探索构建合理的烟草轮作、间作、套作或混种制度，有效减少病、虫害和改善土壤理化性质，提高烟草的产量和质量，仍极具挑战。
实时荧光定量PCR(realtime fluoresce quantitative polymerase chainreaction，q-PCR)(如果检测对象是RNA病毒，则为RT-qPCR)是一种以常规PCR技术为基础发展的一种新的核酸定量检测技术。该技术在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法(李安等，2009)。与常规PCR相比，该技术最大的优势在于其可以对样品进行定量分析，而且它特异性更强、灵敏度更高、省时方便、自动化程度高、高通量。此外，该技术实验操作全程除了实验准备阶段，完全是闭管操作，自动化程度高，大大降低了污染的概率(汤云霞，2012)，而且在反应完成后，只需要相关仪器分析数据即可，不需要再进行电泳检测等步骤，可以有效地防止污染和假阳性，同时做到了边扩增边检测。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，提供一种利用烤烟间作板蓝根控制烟田土壤病毒的方法。该方法无需添加药剂，无环境污染问题，可有效防治烤烟土传病害的发生；适合现代化、规模化烤烟生产，有效改善土壤理化性质，调节土壤肥力，还可以弱化连作障碍；同时本发明的种植方法能同时、高效杀灭TMV、CMV和PVY病毒，促进烤烟健壮生长，提高烤烟产量和品质。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
一种利用烤烟间作板蓝根控制烟田土壤病毒的方法，将烤烟与板蓝根间作种植。
本发明的烤烟栽培方法利用板蓝根与烤烟进行间作种植以防控烤烟土传病害，是一种全新的生物防治方法。
板蓝根(Isatis tinctoriaL.)是十字花科二年生草本植物，含有黑芥子苷、靛玉红、B-谷甾醇、腺苷、棕榈酸和各种氨基酸，具有清热解毒、消肿利咽、凉血等多种作用，主要用于预防和治疗流行性腮腺炎、流行性感冒、咽喉肿痛等病症，对植物细菌、霉菌和病毒的长生繁殖同样具有较强的抑制作用，阻止了烟田土壤中的TMV、CMV和PVY病毒的传播，可起到隔离屏障作用，而且比化学防治效果好，不会出现耐药性。同时板蓝根抗旱耐寒，适应性强，对自然环境和土壤适应性强，要求不严，可以在山区、丘陵和平地上播种，在我国各地都可以栽培，其种植的温度、水分要求与烟草差别不大，在烟田里可以正常生长。烤烟对于种植环境要求较为严格，是一个比较喜欢温暖的植物，烟叶采收时整体株高为1.5～1.8m，板蓝根成株高为60～80cm，相互不影响，板蓝根与烤烟间作有利于保持烤烟的健康生长，提高其抗病能力。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，将烤烟成行种植，每相邻两行烤烟之间种植至少一行板蓝根。
更进一步地，在本发明较佳的实施例中，将烤烟成行种植，每相邻两行烤烟之间种植1～2行板蓝根。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，相邻两行烤烟的间距为0.8～1.5m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距为0.3～0.8m。
更进一步地，在本发明较佳的实施例中，相邻两行烤烟的间距为1.0～1.3m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距为0.5～0.8m。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为0.3～0.8m，每行所述板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为20～50cm。
更进一步地，在本发明较佳的实施例中，每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为0.3～0.5m，每行所述板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为20～30cm。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述板蓝根的品种选自菘蓝(Isatistinctoria L.)和/或马蓝(Baphicacanthus cusia(Nees)Brem.)。
在本发明的实施例中，对烤烟的品种没有特殊要求，可以选自K326、云烟87或粤烟97等常规烤烟品种中的一种或几种。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，烟田土壤的含水量保持在60％～80％。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，烤烟追肥管理按照常规方法进行：土壤追肥(硝酸钾、硫酸钾)加上叶面施肥；板蓝根追肥管理：以腐熟的农家肥为主。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述烤烟的栽培密度控制在1000～1200株/亩。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明通过板蓝根和烤烟的有益化感作用有效减少病、虫害，有效改善土壤理化性质，调节土壤肥力之外，还可以弱化连作障碍，在不破坏农田生态环境和现有种植功能前提下，能同时、高效杀灭烟田土壤中的TMV、CMV和PVY病毒，显著降低烟草TMV、CMV和PVY病害的发病率及危害程度，增加了烟田系统的多样性，使生态系统更加稳定，抗逆性更强，从根源上杀灭烟田土壤TMV、CMV和PVY病毒，同时提高了烤烟的产量和品质，进而提高了烟叶的经济效益。
(2)本发明首次将烤烟-板蓝根间作技术应用于烟田带毒土壤的绿色修复，是一种非常绿色、环保的农田土壤有害微生物防控思路。该方法操作简单，经济实惠，管理技术要求不高，不破坏土壤理化性质，无二次污染，在实际生产中很有应用价值，具有强大的推广应用前景，可以作为一种新型的带毒土壤修复方法在烟草行业推广。
附图说明
图1为pMD-TMV重组阳性质粒的扩增曲线；其中曲线1-6：分别为1.42×107-1.42×102copies/μL的重组阳性质粒DNA，曲线7：ddH2O。
图2为pMD-TMV重组阳性质粒的标准曲线(R2＝0.999，E＝106.1％)。
图3为pMD-TMV重组阳性质粒的溶解曲线。
图4为pMD-CMV重组阳性质粒的扩增曲线；其中曲线1-6：分别为1.31×108-1.31×103copies/μL的重组阳性质粒DNA，曲线7：ddH2O。
图5为pMD-CMV重组阳性质粒的标准曲线(R2＝0.986，E＝107.9％)。
图6为pMD-CMV重组阳性质粒的溶解曲线。
图7为pMD-PVY重组阳性质粒的扩增曲线；其中曲线1-6：分别为1.1×108-1.1×103copies/μL的重组阳性质粒DNA，曲线7：ddH2O。
图8为pMD-PVY重组阳性质粒的标准曲线(R2＝0.986，E＝108.2％)。
图9为pMD-PVY重组阳性质粒的溶解曲线。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，其中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的简单修改或替换，均属于本发明的范围；若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
本发明其中一实施例利用烤烟间作板蓝根控制烟田土壤病毒的方法，将烤烟与板蓝根间作种植。
传统的烤烟(烟草)土壤病毒的防治方法主要有农业防治、化学防治和生物防治。农业防治即通过合理灌溉、合理施肥及合理修剪等栽培措施提高烟草的抗病性，减轻病害的发生。国内研究学者开展的有关该病害的化学防治主要集中于室内及田间化学药剂的筛选、药剂防治时期等。而烟田土壤病毒的生物防治的研究仍主要集中于有益微生物的筛选等方面，进展缓慢，需要寻找新的防治方案。
在一个具体示例中，将烤烟成行种植，每相邻两行烤烟之间种植至少一行板蓝根。如此，能够较好地阻止烤烟土壤病毒的传播，形成良好的隔离屏障。可以理解，间作种植的具体方式不限于此，可根据地形的需要进行调整。优选地，每相邻两行烤烟之间种植1～2行板蓝根。
在一个具体示例中，相邻两行烤烟的间距为0.8～1.5m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距为0.3～0.8m。优选地，相邻两行烤烟的间距为1.0～1.3m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距为0.5～0.8m，通过间距的优化使烤烟的生长更好。
在一个具体示例中，每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为0.3～0.8m，每行所述板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为20～50cm。优选地，每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为0.3～0.5m，每行所述板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为20～30cm。如此，既能够较好的阻止烟田土壤病毒的传播，同时也可避免板蓝根和烤烟出现严重的养分竞争，板蓝根和烤烟的生长状况均较好。
在一个具体示例中，板蓝根的品种选自菘蓝(Isatis tinctoria L.)和/或马蓝(Baphicacanthus cusia(Nees)Brem.)中任一种。
在一个具体示例中，烤烟的品种选自翠碧一号、K326、云烟87或粤烟97等常规烤烟品种中的一种或几种。
在一个具体示例中，烟田土壤的含水量保持在60％～80％。在烤烟和板蓝根的生长过程中，需要保证合适的水分，水分过多过少都不利于烤烟和板蓝根的生长。
在一个具体示例中，烤烟追肥分为土壤追肥(硝酸钾、硫酸钾)加上叶面施肥；板蓝根追肥以腐熟的农家肥为主。如此，培育出来的烤烟可以更健壮。
在一个具体示例中，烤烟的栽培密度控制在1000～1200株/亩。这种密度可以使烤烟进行充分的光合作用，充分利用土地资源，提高烤烟的产量和品质。
以下为具体实施例。
实施例1 一种利用烤烟间作板蓝根控制烟田土壤病毒的方法
将烟草与板蓝根间作，种植于病毒病高发的田块中。使用实时荧光定量PCR(realtime fluoresce quantitative polymerase chain reaction，q-PCR)技术对烟株中TMV、CMV、PVY的含量进行检测。与对照组(非间作，烟草单作)相比，分析板蓝根根系分泌物对烟田土壤中病毒的杀灭效果。
1、实验材料
普通烟草(烤烟)品种K326由本实验室提供。板蓝根的品种为菘蓝(Isatistinctoria L.)，十字花科植物。购自绿永种苗有限公司，选取材料的标准参考《中药大辞典》(江苏新医学院编，1975)。将健康烤烟种子和板蓝根种子分别播种于健康基质中(经检测，不带病毒)。定期浇水，待其发芽成苗(经检测，不带病毒)。
2、实验方法
在华南农业大学增城教学基地选取常年种植烤烟的田块进行实验。这些田块都是病毒病高发区(经过检测，都含有高浓度的TMV、CMV、PVY)。选取6块上述田块，每块1亩。分别编号为1、2、3、4、5、6。其中1-3号田块为烤烟单作区(CK)。4-6号田块为烤烟间作板蓝根(处理区)。
每年2月底将烤烟及板蓝根幼苗移栽至田间。将烤烟成行种植，每相邻两行烤烟之间种植两行板蓝根。相邻两行烤烟的间距(行距)为1.0m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距(株距)为0.5m。每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为0.3m，每行板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为30cm。烟株生长期间不施用任何农药，其余操作等同田间烟叶生产。
6月中旬分别于两种田里，按照20株/1块田的比例随机抽取取烟株叶片，利用q-PCR检测其TMV、CMV、PVY的含量，取其平均值，进行对比分析。并统计每个田块TMV、CMV、PVY的发病率及病情指数及亩产烟叶量。
实验连续进行两年。
3、检测方法
A、实时荧光定量PCR(realtime fluoresce quantitative polymerase chainreaction，q-PCR)
(1)总RNA抽提及引物设计
用试剂盒法抽提植物样品的总RNA。植物叶片RNA提取试剂盒(TaKaRa MiniBestPlant RNA E-traction Kit)、Premi-E-TaqTM II kit(TaKaRa)试剂盒、实时荧光定量试剂盒One StepPrimeScipt RT-PCR Kit(Perfect Real Time)均购于TaRaKa公司。
引物设计见表1，于上海生工生物工程有限公司合成。
表1 RT-qPCR使用的引物
(2)TMV、CMV、PVY RT--qPCR质粒标准品标准曲线的建立
1)将已制备的TMV、CMV、PVY的重组阳性质粒DNA标准品(本实验室提供)，用绝对定量稀释液Easy Dilution以10倍浓度梯度连续稀释5次作为扩增模板，配制反应体系，设置反应程序，进行实时荧光定量PCR反应，同时以RNase Free dH2O为模板设置清水对照，每个标准品和清水对照分别做3次平行重复。根据起始模板拷贝数的对数值和反应的循环数(即Ct值)的线性关系，构建检测TMV、CMV和PVY的扩增曲线、标准曲线、熔解曲线(图1至图9)。所用试剂均购于TaRaKa公司。
2)目标基因扩增
用以上三对引物分别对目标序列进行扩增，一步法RT-qPCR反应体系如下：
3)其反应程序为：42℃，5min→95℃，10s；
95℃，5s→62℃，30s共40个循环(60℃收集荧光信号)；
95℃，15s→60℃，30s→95℃，15s(熔解曲线：第二个95℃收集荧光信号)。
(3)RT--qPCR结果的判读
样品的Ct值<35时为阳性结果，样品的Ct值≥35或未扩增，则判断结果为阴性。
在使用绝对定量的方法检测样品时，将待测样品的Ct值代入标准曲线方程，求得-值即为待测样品的起始拷贝数。为了保证检测结果的一致性，每次使用绝对定量方法测定样品时都必须绘制标准曲线，将待测样品和标准品同时放入荧光定量PCR仪中进行反应，反应结束后根据标准曲线方程计算待测样品的拷贝数(习凤妮，2014)。
从扩增结果图(图1至图9)可以看出，TMV、CMV和PVY扩增结果的线性都非常好，线性系数均大于0.98，扩增系数为1.06～1.08，在0.8～1.2之间，说明设计的引物探针以及扩增体系，可以很好的扩增目标基因，各个扩增之间没有干扰。
B、病情指数(disease index)及相对防治效果统计
病情指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100。
其中，烟草病毒病分级及调查方法(GBT23222-2008)如下：
烟草普通花叶病毒病(TMV)、黄瓜花叶病毒病(CMV)、马铃薯Y病毒病(PVY)以株为单位分级调查。
0级：全株无病。
l级：心叶脉明或轻微花叶，病株无明显矮化。
3级：三分之一叶片花叶但不变形，或病株矮化为正常株高的四分之三以上。
5级：三分之一至二分之一叶片花叶，或少数或变形或主侧脉坏死，或植株矮化为正常的三分之二至四分之三。
7级：二分之一至三分之二叶片花叶，或变形或主侧脉坏死，或植株矮化为正常的二分之一至三分之二。
9级：全株叶片花叶，严重变形或坏死，病株矮化为正常株高的二分之一以上。
C、烟叶产量统计
每年6月底，收取每株烟的有效烟叶，统计其总产量。
4、统计结果
A、CK区和处理区(烤烟-板蓝根间作)烟株带毒量的RT--qPCR检测结果见表2。
表2 烟株带毒量的RT--qPCR检测结果
从实验结果来看，CK对照区(烤烟单作)田块中烟株TMV、CMV、PVY的带毒量分别是处理区(烤烟-板蓝根间作)田块中烟株带毒量的571.10倍、635.94倍、1125.87倍。说明烤烟-板蓝根间作可以高效杀灭烟田土壤中的TMV、CMV、PVY，本发明是一种高效绿色环保的带毒土壤修复技术。
B、CK区和处理区(烤烟-板蓝根间作)烟株病情指数统计见表3。
CK区(烤烟单作区)作3次平行重复分别记作CK-1、CK-2、CK-3；烟草-板蓝根间区作3次平行重复分别记作烟草-板蓝根间作-1、烟草-板蓝根间作-2、烟草-板蓝根间作-3。
表3 CK区和处理区(烤烟-板蓝根间作)烟株田间带毒率及病情指数统计表
从表3可知，三次平行重复，处理区(烤烟-板蓝根间作)田块中烟株TMV、CMV、PVY的带毒率均远远低于CK区(烤烟单作)田块中烟株的带毒率，同时处理区(烤烟-板蓝根间作)田块中烟株TMV、CMV、PVY的病情指数也显著低于CK区(烤烟单作)田块中烟株的病情指数，说明烤烟-板蓝根间作能显著降低烟草的发病率及危害程度，增加了烟田系统的多样性，使生态系统更加稳定，抗逆性更强，从根源上杀灭烟田土壤TMV、CMV和PVY病毒，降低了烟草中烟草花叶病、黄瓜花叶病和马铃薯Y病的传播、危害，进而提高了烟叶的经济效益。
C、CK区和处理区(烤烟-板蓝根间作)烟叶产量统计结果见表4。
CK区(烤烟单作区)作3次平行重复分别记作CK-1、CK-2、CK-3；烟草-板蓝根间区作3次平行重复分别记作烟草-板蓝根间作-1、烟草-板蓝根间作-2、烟草-板蓝根间作-3。
表4 CK区和处理区(烤烟-板蓝根间作)烟叶总产量统计表(kg/亩)
综合上述实验结果可知，与对照烟草单作相比，烟草-板蓝根间作可以有效降低烟草在田间的TMV、CMV、PVY带毒率和病情指数，大幅提高烟叶的亩产总量。
对比例1烤烟-韭菜间作
在华南农业大学增城教学基地选取常年种植烤烟的田块进行实验。这些田块都是病毒病高发区(经过检测，都含有高浓度的TMV、CMV、PVY)。选取6块上述田块，每块1亩。分别编号为1、2、3、4、5、6。其中1-3号田块为烤烟单作区(CK)；4-6号田块为烤烟间作韭菜(处理区)。
将烤烟成行种植，每相邻两行烤烟之间种植两行韭菜。相邻两行烤烟的间距(行距)为1.0m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距(株距)为0.5m。每行韭菜与相邻一行烤烟的间距为0.3m，每行韭菜中相邻两株韭菜的间距为30cm。烟株生长期间不施用任何农药，其余操作等同田间烟叶生产。每年2月底将烤烟及韭菜幼苗移栽至田间。6月中旬分别于两种田里，按照20株/1块田的比例随机抽取取烟株叶片，利用q-PCR检测其TMV、CMV、PVY的含量，取其平均值，进行对比分析。每年6月底统计每个田块TMV、CMV、PVY的发病率及病情指数及亩产烟叶量。
1、实验方法
与实施例1中烤烟-板蓝根间作相关实验相同。
2、实验结果
A、CK区和处理区(烤烟-韭菜)烟株带毒量的RT--qPCR检测结果见表5。
表5 烟株带毒量的RT--qPCR检测结果
由表5可知，CK对照区(烤烟单作)田块中烟株TMV、CMV、PVY的带毒量与处理区(烤烟-韭菜)田块中烟株带毒量无显著差别。说明烤烟-韭菜间作不能有效杀灭烟田土壤中的TMV、CMV、PVY。
B、CK区和处理区烟株病情指数及相对防治效果统计见表6。
CK区(烤烟单作区)作3次平行重复分别记作CK-1、CK-2、CK-3；烟草-韭菜间区作3次平行重复分别记作烟草-韭菜间作-1、烟草-韭菜间作-2、烟草-韭菜间作-3。
表6 CK区和处理区(烤烟-韭菜)烟株田间带毒率及病情指数统计表
由表6可知，与CK对照区(烤烟单作)田块中烟株TMV、CMV、PVY的带毒率和病情指数相比，处理区(烤烟-韭菜间作)田块中烟株TMV、CMV、PVY的带毒率和病情指数无显著差别。说明烤烟-韭菜间作不能有效控制烟田土壤中的TMV、CMV、PVY的病害。
C、CK区和处理区(烤烟-韭菜)烟叶产量统计结果见表7。
CK区(烤烟单作区)作3次平行重复分别记作CK-1、CK-2、CK-3；烟草-韭菜间区作3次平行重复分别记作烟草-韭菜间作-1、烟草-韭菜间作-2、烟草-韭菜间作-3。
表7 CK区和处理区(烤烟-韭菜)烟叶总产量统计表(kg/亩)
从上统计结果可以看出，与对照烟草单作相比，烟草-韭菜间作的TMV、CMV、PVY带毒率和病情指数无显著差别，烟草-韭菜间作不能有效降低烟草在田间的TMV、CMV、PVY的带毒率和病情指数，无法有效提高烟叶的亩产总量。说明并不是将所有作物品种与烤烟进行任意间作，均可达到更好的防控效果和获得更高的产量和品质。
实施例2
将烤烟及板蓝根幼苗移栽至田间。烤烟的品种为翠碧一号。板蓝根的品种为马蓝(Baphicacanthus cusia(Nees)Brem.)。将烤烟成行种植，每相邻两行烤烟之间种植两行板蓝根。相邻两行烤烟的间距(行距)为1.3m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距(株距)为0.8m。每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为1.6m，每行板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为30cm。烤烟的栽培密度控制在1000株/亩。烟株生长期间不施用任何农药，烟田土壤的含水量保持在60％，烤烟追肥分为土壤追肥(硝酸钾、硫酸钾)加上叶面施肥；板蓝根追肥以腐熟的农家肥为主。其余操作等同田间烟叶生产。
本实施例在不破坏农田生态环境和现有种植功能前提下，能同步、有效杀灭烟田土壤中的TMV、CMV和PVY病毒，显著降低烟草TMV、CMV和PVY病害的发病率及危害程度，提高烤烟的产量和品质。
实施例3
将烤烟成行种植，每相邻两行烤烟之间种植两行板蓝根。烤烟的品种为粤烟97。板蓝根的品种为马蓝(Baphicacanthus cusia(Nees)Brem.)。相邻两行烤烟的间距(行距)为0.8m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距(株距)为0.3m。每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为0.3m，每行板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为50cm。烤烟的栽培密度控制在1200株/亩。烟株生长期间不施用任何农药，烟田土壤的含水量保持在60％，烤烟追肥分为土壤追肥(硝酸钾、硫酸钾)加上叶面施肥；板蓝根追肥以腐熟的农家肥为主。其余操作等同田间烟叶生产。
本实施例在不破坏农田生态环境和现有种植功能前提下，能同步、有效杀灭烟田土壤中的TMV、CMV和PVY病毒，显著降低烟草TMV、CMV和PVY病害的发病率及危害程度，提高烤烟的产量和品质。
实施例4
将烤烟成行种植，烤烟的品种为K326。板蓝根的品种为菘蓝(Isatis tinctoriaL.)。每相邻两行烤烟之间种植一行板蓝根。相邻两行烤烟的间距(行距)为1.5m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距(株距)为0.8m。每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为0.8m，每行板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为20cm。烟株生长期间不施用任何农药，烟田土壤的含水量保持在65％，烤烟追肥分为土壤追肥(硝酸钾、硫酸钾)加上叶面施肥；板蓝根追肥以腐熟的农家肥为主。其余操作等同田间烟叶生产。
本实施例在不破坏农田生态环境和现有种植功能前提下，能同步、有效杀灭烟田土壤中的TMV、CMV和PVY病毒，显著降低烟草TMV、CMV和PVY病害的发病率及危害程度，提高烤烟的产量和品质。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种利用烤烟间作板蓝根控制烟田土壤病毒的方法，其特征在于，将烤烟与板蓝根间作种植。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将烤烟成行种植，每相邻两行烤烟之间种植至少一行板蓝根。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将烤烟成行种植，每相邻两行烤烟之间种植1～2行板蓝根。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，相邻两行烤烟的间距为0.8～1.5m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距为0.3～0.8m。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，相邻两行烤烟的间距为1.0～1.3m，每行烤烟中相邻两株烤烟的间距为0.5～0.8m。
6.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为0.3～0.8m，每行所述板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为20～50cm。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，每行板蓝根与相邻的一行烤烟的间距为0.3～0.5m，每行所述板蓝根中相邻两株板蓝根的间距为20～30cm。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述板蓝根的品种选自菘蓝(Isatistinctoria L.)和/或马蓝(Baphicacanthus cusia(Nees)Brem.)。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，烟田土壤的含水量保持在60％～80％。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烤烟的栽培密度控制在1000～1200株/亩。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115136862A (zh) * 2022-06-21 2022-10-04 山东农业大学 一种烤烟与菘蓝间作防治烟蚜提高烤烟品质的栽培方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104160865A (zh) * 2014-08-22 2014-11-26 云南中烟工业有限责任公司 一种田间套种板蓝根改善烤烟品质的方法
CN108782087A (zh) * 2018-06-27 2018-11-13 富源县金地魔芋种业有限公司 一种魔芋与板蓝根间作的栽培方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104160865A (zh) * 2014-08-22 2014-11-26 云南中烟工业有限责任公司 一种田间套种板蓝根改善烤烟品质的方法
CN108782087A (zh) * 2018-06-27 2018-11-13 富源县金地魔芋种业有限公司 一种魔芋与板蓝根间作的栽培方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周超英: "《西瓜、甜瓜病虫害及其防治》", 31 January 2012, 上海科学技术出版社 *
汪代斌等: "烟草花叶病发生规律及生物源抗病毒研究进展", 《湖北农业科学》 *
王启燕等: "抗TMV感染物质——板蓝根", 《华北农学报》 *
高文远: "《中药生物工程》", 31 January 2014, 上海科学技术出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115136862A (zh) * 2022-06-21 2022-10-04 山东农业大学 一种烤烟与菘蓝间作防治烟蚜提高烤烟品质的栽培方法
CN115136862B (zh) * 2022-06-21 2024-03-26 山东农业大学 一种烤烟与菘蓝间作防治烟蚜提高烤烟品质的栽培方法

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