CN110087639A - 阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子用以递送疫苗的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种以阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子作为递送疫苗载体的用途，该阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子是以磷酸氢钙(calcium hydrogenphosphate；CHP)修饰表面，在本发明中，以此磷酸氢钙修饰的陶瓷聚合物微粒子所制备的蛋白质疫苗，显现出较低的毒性，并可延长抗原的停留时间和增强免疫反应。

Description

阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子用以递送疫苗的 用途
技术领域
本发明为医疗防疫领域，涉及蛋白质疫苗，具体涉及一种陶瓷聚合物微粒子及其作为蛋白质疫苗的抗原载体的用途。
背景技术
接种疫苗的安全性成为当前越来越受关注的议题，因此，采用新技术制备更安全且更有效的疫苗用于预防新型传染病乃当务之急。对于人体来说蛋白质疫苗是一类安全性优良的疫苗，但是蛋白质疫苗使用时需要额外的佐剂或者通过新的免疫途径来弥补其免疫力低于其他种类疫苗的缺点，并仍需克服其缺乏诱导CD8 T淋巴细胞免疫反应的问题，同时仍需持续开发具有安全性、有效性及足够的免疫原性的蛋白质疫苗。
聚乳酸-甘醇酸共聚物 (poly lactic-co-glycolic acid, PLGA) 为聚乳酸(poly lactic acid, PLA)和聚乙醇酸 (poly glycolic acid, PGA)的共聚物，其用于药物递送的设计及成效已被明确定义，由于其具有长期的临床使用经验、良好的降解特性和持续给药的可能性，聚乳酸-甘醇酸共聚物在各种适用于生物的可降解聚合物中最受青睐，近期的文献亦揭示聚乳酸-甘醇酸共聚物的降解可以用于以期望的剂量持续释放药物而无需进行外科手术，然而，用于制备聚乳酸-甘醇酸共聚物的阳离子表面活性剂仍存在生物毒性的问题。
美国专利公开案US 2004/0013742 A1揭示了一种用于成骨细胞或骨髓基质细胞生长的生物可降解陶瓷，其具备骨传导和骨诱导性质，该新型陶瓷包含以六亚甲基二异氰酸酯 (hexamethylene diisocyanate, HMDI)修饰的磷酸氢钙 (calciumhydrogenphosphate, CaHPO4)，六亚甲基二异氰酸酯系通过共价键被接枝到磷酸氢钙上，因而使磷酸氢钙的表面带有正电荷，且其生物毒性低于已知用于药物递送带正电荷的CTAB-PLGA。
在先前的研究中，我们使用修饰磷酸氢钙的生物陶瓷作为载体，将骨碎补 (Gu-Sui-Bu)运送到骨细胞培养系统中，并评估骨碎补固着于磷酸氢钙 (Gu-Sui-Bu-immobilized modified calcium hydrogenphosphate, GI-MCHP) 作用于骨细胞的活性(Biomaterials 24 (2003) 873-882)，据此，本发明进一步探讨其在疫苗制剂中的相关应用。
发明内容
基于上述目的，本发明提供一种阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物，用于作为蛋白质疫苗中的抗原载体。
本发明涉及一种蛋白质疫苗组成物，包含蛋白质或胜肽抗原，以及阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子，所述陶瓷聚合物微粒子用于将所述的蛋白质或该胜肽抗原吸附于其阳离子表面。
在一实施例中，该阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子是经表面修饰的磷酸氢钙(calcium hydrogenphosphate, MCHP)修饰微粒子。
在一实施例中，该磷酸氢钙修饰微粒子的粒径介于0.1至10 微米。
在一实施例中，该磷酸氢钙修饰微粒子的表面电位介于+1至+50 毫伏，较佳者，为介于+1至+40 毫伏。
在一实施例中，该阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子的抗原吸附率(antigen adsorption rate)为每毫克该阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子吸附0.1至100 微克该蛋白质或该胜肽抗原。
在一实施例中，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一肿瘤抗原。
在另一实施例中，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一病毒抗原；在本文中，「胜肽」(peptide)及「多胜肽」(polypeptide)为相互通用的名词。
在一实施例中，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一登革热病毒次单元；在另一实施例中，该蛋白质或该胜肽抗原包含登革热病毒套膜结构域III (ED3)胜肽，较佳者，为第二型登革热 (dengue-2)的登革热病毒套膜结构域III (ED3)胜肽。
在一实施例中，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一细菌抗原；
在另一实施例中，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一真菌抗原。
在另一方面，本发明涉及一种以表面修饰磷酸氢钙(modified calciumhydrogenphosphate； MCHP)微粒子作为抗原载体用以制备蛋白质疫苗的用途。
附图说明
图1为以表面修饰磷酸氢钙微粒子制备次单位疫苗的示意图。
图2为说明表面修饰磷酸氢钙微粒子制备的蛋白疫苗于活体外的蛋白质吸附特性；磷酸氢钙-卵清白蛋白疫苗为以0.1 mol/L的氢氧化钠 (NaOH)及2 %质量分数的十二烷基硫酸钠 (Sodium dodecyl sulfate, SDS)处理以冲提所吸附的卵清白蛋白，并以蛋白质定量套组 (micro-BCA kit)进行卵清白蛋白定量；卵清白蛋白定量图分别显示吸附于聚乳酸-甘醇酸共聚物 (PLGA(+))或磷酸氢钙的卵清白蛋白，其定量后的平均值及标准偏差。
图3为说明控制表面修饰磷酸氢钙制备的蛋白疫苗于活体内的释放动态；BALB/c小鼠为分别以皮下注射2组样本，分别为荧光染剂 (Alexa Fluor® 647)标记的溶解态卵清白蛋白，或荧光染剂 (Alexa Fluor® 647)标记的磷酸氢钙-卵清白蛋白疫苗，并透过活体影像系统 (IVIS)监测荧光衰退，图3A及图3B 分别显示平均荧光强度及活体影像。
图4为说明磷酸氢钙浓度优化以强化蛋白疫苗的免疫原性 (immunogenicity)；C57BL/6小鼠 (n=4)分别以皮下注射4组样本，分别为(1) 0.5 微克之卵清白蛋白、(2) 10毫克磷酸氢钙- 0.5 微克卵清白蛋白疫苗、(3) 1 毫克磷酸氢钙- 0.5 微克卵清白蛋白疫苗及(4) 0.25毫克磷酸氢钙- 0.5 微克卵清白蛋白疫苗；图4A为显示以酶联免疫斑点法(ELISPOT)分析对卵清白蛋白具专一性的T淋巴细胞反应；图4B为显示以酵素结合免疫吸附分析法 (ELISA)分析对卵清白蛋白具专一性的免疫球蛋白 (IgG)效价；分析结果为将分别从三只小鼠所获得的数值计算过后，以平均值及标准偏差呈现，并以two-way ANOVA进行统计分析，p值小于0.05者表示具显著性差异。
图5为说明表面修饰磷酸氢钙制备的蛋白疫苗确实诱发增强免疫原性及毒杀型T淋巴细胞反应；C57BL/6小鼠系分别以皮下注射2组样本以进行评估，分别为溶解的卵清白蛋白，或磷酸氢钙-卵清白蛋白疫苗；图5A为显示以酶联免疫斑点法 (ELISPOT)分析对卵清白蛋白具专一性的产生干扰素-γ (interferon-γ; IFN-γ)的T淋巴细胞反应；图5B为显示以酵素结合免疫吸附分析法 (ELISA)分析对卵清白蛋白具专一性的免疫球蛋白 (IgG)产量；分析结果为取各小鼠所获得的数值并以Student’s test进行统计分析，p值小于0.05者表示具显著性差异。
图6为说明表面修饰磷酸氢钙制备的第二型登革热 (dengue-2)次单元疫苗确实增强专一性T淋巴细胞反应；图6A及图6B为分别显示产生干扰素-γ及产生介白素-4(interleukin-4; IL-4)的T淋巴细胞反应，其为将BALB/c小鼠 (n=4) 以皮下注射3组样本，分别为(1)磷酸缓冲溶液 (PBS)、(2) 10 微克已溶解的第二型登革热病毒 (D2)套膜结构域III (ED3)重组蛋白或 (3) 磷酸氢钙制备-二型登革热病毒套膜结构域III (MCHP-D2)抗原疫苗，并以酶联免疫斑点法进行分析；实验结果系以two-way ANOVA进行统计分析，p值小于0.05者系表示具显著性差异。
图7为说明表面修饰磷酸氢钙制备的第二型登革热 (dengue-2)次单元疫苗确实增强抗体反应；实验以酵素结合免疫吸附分析法分析对第二型登革热病毒 (D2)具有专一性的免疫球蛋白 (IgG)效价，实验结果以one-way ANOVA进行统计分析。
图8为说明表面修饰磷酸氢钙制备的第二型登革热 (dengue-2)次单元疫苗确实增强病毒清除率；实验于最后一次免疫接种四周后以第二型登革热病毒攻毒，而后取得病毒血症(viremia)的血液以溶斑试验 (plaque assay)定量登革热病毒；实验结果系以two-way ANOVA进行统计分析。
具体实施方式
为了阐明本发明的的特点，以下结合图式以说明本发明的较佳实施例，而非用以限制本发明的技术，在不脱离本发明新颖概念的精神和范围的情况下，其中的变化和修改均被包含于本发明的范围内。
实施例1
以表面修饰磷酸氢钙 (MCHP)制备登革热蛋白疫苗
表面修饰磷酸氢钙之微粒子经秤重后转移到1.5 毫升 (ml)微量管中，以冰磷酸缓冲溶液 (PBS)冲洗后再重新悬浮于冰磷酸缓冲溶液中，每一剂量为0.25 - 10毫克(mg) 表面修饰磷酸氢钙微粒子悬浮于 200 微升冰磷酸缓冲溶液中，接着再取1 - 10微克 (μg)第二型登革热病毒套膜结构域III (D2-ED3)重组蛋白加入前述表面修饰磷酸氢钙微粒子悬浮液中，在4℃下以垂直旋转的方式隔夜混合以进行蛋白质吸附，经蛋白质吸附过程后，即获得磷酸氢钙-第二型登革热病毒套膜结构域III (D2-ED3)蛋白疫苗；于本实施例中，较佳者，为以10 微克第二型登革热病毒套膜结构域III重组蛋白及10毫克表面修饰磷酸氢钙微粒子于200 微升磷酸缓冲溶液中制备得到的登革热蛋白疫苗。
图1为显示以表面修饰磷酸氢钙 (MCHP)微粒子递送疫苗的示意图；简言之，具备生物可降解性的阳离子型陶瓷聚合物微粒子与次单元抗原反应后即可形成磷酸氢钙蛋白疫苗 (例如：卵清白蛋白；OVA)，由于表面修饰磷酸氢钙微粒子的粒径仅介于0.5 - 5微米，因此磷酸氢钙制备的疫苗将优先被巨噬细胞或树突细胞 (dendritic cells; DC)吞噬并活化CD80 / 86的表现，在经蛋白裂解及交叉呈现 (cross-presentation)后，胜肽将被呈现给具专一性的T淋巴细胞并诱发适应性免疫反应 (adaptive immune response)。
实施例2
磷酸氢钙蛋白疫苗于活体外的蛋白质吸附特性 (protein adsorption)以及于活体内的控制释放
（1）蛋白吸附率测试
实验取10 毫克阳离子型聚乳酸-甘醇酸共聚物微粒子或10 毫克磷酸氢钙微粒子，在4℃下分别于300 微升磷酸缓冲溶液中与100 微克卵清白蛋白 (ovalbumin ; OVA)隔夜旋转混合，而后去除未吸附的卵清白蛋白，再以300 微升磷酸缓冲溶液清洗微粒子，接着将微粒子沉降后，以100 微升冲提缓冲液 (包含0.1 mol/L NaOH 及 1%质量分数SDS)置于旋转器上隔夜冲提，以获得吸附在微粒子的卵清白蛋白，接着，经离心后以BCA protein assay定量上清液中卵清白蛋白的浓度。
图2为显示卵清白蛋白定量后的平均值及标准偏差，所述的卵清白蛋白分别吸附于聚乳酸-甘醇酸共聚物微粒子 (PLGA(+))或磷酸氢钙微粒子，由结果可以得知，聚乳酸-甘醇酸共聚物微粒子及磷酸氢钙微粒子的蛋白质吸附率几乎相同，其蛋白质吸附率分别为每毫克聚乳酸-甘醇酸共聚物微粒子吸附2.81±0.71 微克卵清白蛋白，以及每毫克磷酸氢钙微粒子吸附2.47±0.41微克卵清白蛋白。
（2）疫苗于活体内的释放动态
实验分为2组，每组包含3只BALB/c小鼠，分别以皮下注射不同样本，其中一组是以50微克荧光染剂 (Alexa Fluor® 647)标记的卵清白蛋白并溶于200 微升磷酸缓冲溶液中，另一组则是荧光染剂 (Alexa Fluor® 647)标记的磷酸氢钙-卵清白蛋白疫苗并溶于200微升磷酸缓冲溶液中，接着以活体影像系统拍摄活体影像并计算荧光强度，将标计荧光染剂的卵清白蛋白定量后，在图3A显示每一区域的荧光强度，在图3B以纵向编排影像显示荧光衰减程度。
由图3A及图3B的结果指出，在注射样本48小时后，磷酸氢钙-卵清白蛋白疫苗的蛋白量仍维持95%，相反地，未吸附磷酸氢钙的溶解态卵清白蛋白，其蛋白量在注射样本48小时内已急剧下降至18%，且在注射样本72小时后已无法侦测到荧光讯号。由这些结果可以得知，利用表面修饰磷酸氢钙所制备的蛋白疫苗，能够延长抗原在被免疫动物体内的时间，并可控制抗原的释放。
实施例3
优化表面修饰磷酸氢钙微粒子的使用剂量以增强疫苗的免疫原性
实验将C57BL/6小鼠分别以皮下注射4组不同样本，分别为(1) 0.5 微克卵清白蛋白、(2) 10 毫克磷酸氢钙-0.5 微克卵清白蛋白疫苗、(3) 1 毫克磷酸氢钙-0.5 微克卵清白蛋白疫苗及(4) 0.25毫克磷酸氢钙-0.5 微克卵清白蛋白疫苗，样本均溶于200 微升磷酸缓冲溶液中，并于小鼠注射样本两周后接种相同的疫苗，在接种疫苗一周后牺牲小鼠并取得脾脏细胞，接着以酶联免疫斑点法 (ELISPOT)分析脾脏细胞中对卵清白蛋白具专一性的T淋巴细胞反应，并分别分析专一性T淋巴细胞产生干扰素-γ及介白素-4的产量，对干扰素-γ及介白素-4具专一性的斑点形成细胞 (spot-forming cells; SFC)数量为扣除培养基背景值后计算而获得，分析结果为计算分别从三只小鼠所获得的数值后，以平均值及标准偏差呈现，并以two-way ANOVA进行统计分析，p值小于0.05者表示具显著性差异。
结果如图4A所示，相较于10 毫克表面修饰磷酸氢钙微粒子制备的卵清白蛋白疫苗，以0.25 毫克及1 毫克表面修饰磷酸氢钙微粒子制备的卵清白蛋白疫苗具有较佳的增强免疫原性的效果。
此外，由磷酸氢钙-卵清白蛋白疫苗所诱导的抗体反应系透过分析对卵清白蛋白具专一性的免疫球蛋白 (IgG)效价来评估，实验以酵素结合免疫吸附分析法 (ELISA)分析，且分析结果为以分别从三只小鼠所获得的数值的平均值及标准偏差呈现，并以two-wayANOVA进行统计分析，p值小于0.05者系表示具显著性差异；结果如图4B所示，相较于以10毫克表面修饰磷酸氢钙微粒子制备的卵清白蛋白疫苗，以0.25 毫克及1 毫克表面修饰磷酸氢钙微粒子制备的卵清白蛋白疫苗可诱发产生较高效价的免疫球蛋白；由上述结果可以得知，以0.25 毫克至1 毫克表面修饰磷酸氢钙微粒子制备蛋白疫苗，可达到增强疫苗免疫原性的效果，较佳者，为以1 毫克表面修饰磷酸氢钙微粒子与0.5 微克卵清白蛋白混合制备得到的磷酸氢钙卵清白蛋白疫苗。
实施例4
表面修饰磷酸氢钙微粒子制备的蛋白疫苗可增强免疫原性及毒杀型T淋巴细胞反应
（1）磷酸氢钙蛋白疫苗诱发T淋巴细胞反应
实验将C57BL/6小鼠以皮下注射2组不同样本以进行评估，分别为0.5 微克已溶解的卵清白蛋白，或磷酸氢钙-卵清白蛋白疫苗，样本均溶于200 微升磷酸缓冲溶液中，并于小鼠注射样本两周后接种相同的疫苗，在接种疫苗一周后牺牲小鼠并取得脾脏细胞，接着以酶联免疫斑点法 (ELISPOT)分析脾脏细胞中产生干扰素-γ的专一性T淋巴细胞反应，其为扣除培养基的背景值后，分别分析对卵清白蛋白具专一性、对CD-8的OT-1胜肽具专一性或对CD-4的OT-2胜肽具专一性的斑点形成细胞数量，分析结果为以分别从三只小鼠所获得的数值的平均值及标准偏差呈现，并以two-way ANOVA进行统计分析，p值小于0.05者表示具显著性差异。
结果如图5A所示，表面修饰磷酸氢钙微粒子制备的蛋白疫苗诱发干扰素-γ反应的效果显著优于卵清白蛋白，此外，注射磷酸氢钙-卵清白蛋白疫苗的组别亦可测得对CD-8的OT-1胜肽具专一性的毒杀型T淋巴细胞反应，而注射卵清白蛋白之组别则未观察到T淋巴细胞反应。
（2）磷酸氢钙蛋白疫苗诱发抗体反应
实验为将C57BL/6小鼠以皮下注射2组不同样本以进行评估，分别为0.5 微克已溶解的卵清白蛋白，或磷酸氢钙卵清白蛋白疫苗，样本均溶于200 微升磷酸缓冲溶液中，并于小鼠注射样本间隔两周后接种相同的疫苗两次，在小鼠接受免疫六周后取其血清，接着以酵素结合免疫吸附分析法 (ELISA)分析对卵清白蛋白具专一性的免疫球蛋白 (IgG)效价，分析结果为取各小鼠所获得的数值并以Student’s test进行统计分析，p值小于0.05者表示具显著性差异。
结果如图5B所示，由磷酸氢钙蛋白疫苗所诱发的免疫球蛋白产量显著高于卵清白蛋白，且其所诱发的免疫球蛋白产量为卵清白蛋白诱发的免疫球蛋白产量的十倍。
实施例5
表面修饰磷酸氢钙微粒子制备的第二型登革热 (dengue-2)次单元疫苗增强具抗原专一性的T淋巴细胞反应
磷酸氢钙-登革热蛋白疫苗诱发T淋巴细胞反应
实验以皮下注射的方式给予BALB/c小鼠 (n=4)样本，并分为3组不同的样本，分别为(1)磷酸缓冲溶液 (PBS)、(2) 10 微克已溶解的第二型登革热病毒 (D2)套膜结构域III(ED3)重组蛋白或 (3) 磷酸氢钙-第二型登革热病毒套膜结构域III (MCHP-D2)抗原疫苗，样本均溶于磷酸缓冲溶液中，并于注射样本两周后接种相同疫苗两次，在最后一次接种的一周后牺牲小鼠并取得脾脏细胞，接着以酶联免疫斑点法 (ELISPOT)分析产生干扰素-γ及产生介白素-4 (interleukin-4; IL-4)的T淋巴细胞反应，其为扣除培养基的背景值后，分别分析对第一型至第四型登革热病毒套模结构域III (ED3)胜肽混合物或含有CD8毒杀性T细胞可辨识的登革热抗原第2-6号胜肽具专一性的斑点形成细胞数量，实验结果为显示每个小鼠取得数值后计算所得的平均值及标准偏差，并以two-way ANOVA进行统计分析，p值小于0.05者表示具显著性差异。
结果由图6A及图6B指出，磷酸氢钙-第二型登革热病毒套膜结构域III(D2 ED3)抗原疫苗显著诱发对第二型登革热抗原具专一性的干扰素-γ及介白素-4的T淋巴细胞反应，且其诱发的效果显著高于登革热病毒套模结构域III重组蛋白，而无法测得对其他血清型的登革热抗原具专一性的T淋巴细胞反应，此外，结果亦显示磷酸氢钙-第二型登革热病毒套膜结构域III(D2 ED3)抗原疫苗可诱发对CD-8的登革热抗原D2-6具专一性的毒杀型T细胞反应。
实施例6
表面修饰磷酸氢钙微粒子制备的第二型登革热 (dengue-2)次单元疫苗增强抗体反应以及病毒清除率
（1）磷酸氢钙-登革热蛋白疫苗诱发抗体反应
实验以实施例3所述的方法对BALB/c小鼠 (n=4或8)进行免疫接种，在接种六周后取得小鼠的血清，并以酵素结合免疫吸附分析法 (ELISA)分析血清中对登革热病毒抗原D2 ED3具专一性的免疫球蛋白的效价，实验结果以每一只小鼠的血清所测得的免疫球蛋白效价的平均值及标准偏差来显示，并以one-way ANOVA进行统计分析，p值小于0.05者表示具显著性差异。
（2）受磷酸氢钙登革热蛋白疫苗免疫接种的小鼠，以第二型登革热病毒攻毒后形成的病毒血症 (viremia)
实验以实施例3所述的方法对BALB/c小鼠 (n=4)进行免疫接种，并于最后一次免疫后以第二型登革热病毒攻毒，其预先以第二型登革热病毒感染K562细胞，再取5 x 107个感染后细胞进行腹腔内接种，而后于不同时间点取得小鼠的血浆，再以荧光集落分析法(fluorescent focus assay)量测每毫升血浆中所包含的集落形成单位 (focus formingunits; Ffu)以评估病毒血症形成的情形，实验结果以平均值及标准偏差显示。
结果如图8所示，以磷酸氢钙-第二型登革热病毒套膜结构域III(D2 ED3)抗原疫苗进行免疫接种的小鼠，在攻毒之后其体内形成的病毒血症低于登革热病毒D2 ED3重组蛋白的组别及控制组，此结果证实了，在小鼠模式中，磷酸氢钙登革热蛋白疫苗确实可提供较佳的保护效果以对抗登革热病毒感染。
综合上述，本发明所提供的陶瓷聚合物微粒子，由于其表面带有阳离子，使得蛋白质抗原得以有效地吸附于其表面，进一步而言，本发明的实施例为以表面修饰磷酸氢钙的陶瓷聚合物微粒子作为抗原载体，能够控制抗原的释放，并能在接受免疫接种的动物体内维持并持续释放长达六个月，即由磷酸氢钙修饰之的陶瓷聚合物微粒子而达到延长抗原在动物体内的滞留时间，从而能够延长抗体产生的时程，并有效诱导毒杀型T淋巴反应，因此，本发明所提供的以表面修饰磷酸氢钙之的陶瓷聚合物微粒子所制备的蛋白疫苗，适用于长期疫苗 (long-term vaccines)以及抗肿瘤疫苗的开发。

Claims (12)

1.一种蛋白质疫苗组成物，其特征在于，包含：
蛋白质或胜肽抗原；以及阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子，用以将该蛋白质或该胜肽抗原吸附于其阳离子表面。
2.如权利要求1所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子为经表面修饰的磷酸氢钙修饰微粒子。
3.如权利要求2所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该磷酸氢钙修饰微粒子的粒径介于0.1至10 微米。
4.如权利要求2所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该磷酸氢钙修饰微粒子的表面电位介于+1至+40 毫伏。
5.如权利要求1所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子的抗原吸附率为每毫克该阳离子型生物可降解性陶瓷聚合物微粒子吸附0.1至100 微克该蛋白质或该胜肽抗原。
6.如权利要求1所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一肿瘤抗原。
7.如权利要求1所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一病毒抗原。
8.如权利要求1所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一登革热病毒次单元。
9.如权利要求8所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该蛋白质或该胜肽抗原包含登革热病毒套膜结构域III胜肽。
10.如权利要求1所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一细菌抗原。
11.如权利要求1所述的蛋白质疫苗组成物，其特征在于，该蛋白质或该胜肽抗原包含至少一真菌抗原。
12.一种以表面修饰的磷酸氢钙微粒子作为抗原载体制备蛋白质疫苗的用途。
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