CN110074316A - 具有代替抗生素和降解afb1的功能性制剂制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明功能性制剂由地衣芽孢杆菌菌液干燥后与水苏糖、罗伊氏乳杆菌菌粉合理搭配而成。本发明功能性制剂能够代替抗生素添加剂，并具有高效降解黄曲霉毒素B1的作用，降解率达85%～98%，可将毒素控制在20μg/kg以下。本制剂与其单一组分或任意两组分结合相比降解率提高50%～200%。本制剂可以防止动物摄入含量超标的黄曲霉毒素B1引起病变，还可以保护动物肠道的健康，促进肠道有益微生物的生长，抑制有害微生物的繁殖，改善动物肠道微环境，并增强动物食欲，促进动物健康生长。本发明功能性制剂在降解饲料中的黄曲霉毒素B1和代替抗生素添加方面具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及微生态领域，具体涉及到水苏糖、罗伊氏乳杆菌的菌粉、地衣芽孢杆菌的菌液干燥物按照一定的百分比搭配而成的功能性制剂，此功能性制剂既能高效的解除饲料中的黄曲霉毒素B1，又能够代替抗生素起到对动物健康保护的作用。
背景技术
黄曲霉毒素B1主要经动物肠道吸收，肠道作为黄曲霉毒素B1毒性作用的靶器官会受到危害，例如用AFB1浓度含量为0.02mg/kg的日粮饲喂肉鸡3周，会降低小肠密度，使小肠吸收面积降低（Yunus等，2011）。用含有0.6 mg/kg AFB1的日粮饲喂肉鸡3周，对肠道组织病理学检测发现肉鸡肠道绒毛萎缩脱落，绒毛高度显著降低，肠损伤严重（Yin等，2016）。含量超标的黄曲霉毒素B1会导致动物产生肠炎等肠道疾病，研究表明，黄曲霉毒素B1会造成肠粘膜形态学损伤，抑制肠上皮细胞的增值。在不少畜禽养殖业养殖企业中，为了获得更高的经济效益，在饲料中添加各种抗生素用于减少养殖动物的疾病，促进动物生长，但在动物饲料中添加抗生素会对人类产生巨大危害，例如，动物体内残余的抗生素会经过食物链被人体摄入，抗生素的滥用会引起更顽固的病菌的出现进而危害人类健康安全，例如出现具有高耐药性的细菌，普通的抗生素可能会对这类细菌无效。抗生素的过量使用会使动物体内出现耐药抗药菌种，人类食用了这类动物产品也会产生耐药性，后果不堪设想。
将益生菌及其产物添加到饲料中可以调整肠道中的菌群，帮助肠道有益菌的生长，降低病原菌的繁殖，增强对致病因子的抵抗力，改善肠道健康，进而提高动物自身的免疫功能，可以达到与添加抗生素相似的保护效果。申请号CN201711232593.4公开了一种基于减少抗生素的含有复合有益微生物的饲料，其中包含由嗜酸乳杆菌制成的微生物酵素。专利CN101965912A公开了一种替代抗生素的微生物饲料添加剂及其制备方法，主要由枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌、黑曲霉菌、米曲霉菌等组成，这种饲料添加剂能提高动物非特异免疫力，增强机体抗应激能力，激活动物生长潜能，全面提高生产性能。公开号CN101836688A公开了一种不含抗生素的微生物发酵饲料的制备方法，涉及到添加乳酸菌发酵剂，包含酵母菌、异常毕赤酵母菌和乳酸片球菌，可以提升动物免疫力，并具有提高肉料比，无药物残留，改善肉质的作用。这些发明表现出了微生物饲料添加剂替代抗生素的作用。公开号CN201610799968.4公开了地衣芽孢杆菌酶制剂去除生物材料中的黄曲霉毒素B1，主要利用地衣芽孢杆菌胞内酶解毒。本发明研究的重点在于通过将水苏糖与罗伊氏乳杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌液干燥物结合，制备出一种代替抗生素并高效降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂。本发明功能性制剂中，水苏糖能够在地衣芽孢杆菌和罗伊式乳杆菌的保护下安全进入动物肠道，在肠道中选择性的被有益菌如双歧杆菌等益生菌利用，产生大量的有机酸，降低肠道pH值，从而降低肠道有害菌大肠杆菌和沙门氏菌、梭菌等的含量，有效改善肠道菌群组成，保护动物健康，还能被罗伊式乳杆菌和地衣芽孢杆菌所利用，从而有助于其更高效的发挥作用；罗伊式乳杆菌对饲料中的黄曲霉毒素B1起到脱除作用，其生产的罗伊式素同样可以抑制有害菌如大肠杆菌、沙门氏菌等的生长，保护肠道的微生态平衡，罗伊氏乳杆菌可以增加肠道中丁酸的含量，可以合成各种氨基酸和维生素，有效改善动物的生长性能，提高动物机体免疫力，起着代替抗生素保护动物健康的作用；地衣芽孢杆菌菌液干燥物起到高效降解黄曲霉毒素B1的作用，首先其能够利用少量水舒糖保持高活性，并且其能够降解饲料中残余的黄曲霉毒素，具有调节肠道健康，防止动物产生腹泻的作用，也起到代替抗生素抑制肠道疾病的功效。本发明功能性制剂能够起到代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的双重作用，在高效降解黄曲霉毒素B1的基础上，本发明功能性制剂安全、高效无污染，并且能够保护动物肠道健康，提高动物对营养物质的吸收，增强动物体免疫功能，对动物体的健康生长发育起到保护作用。
发明内容
本发明提供一种具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂制备方法。
本发明所涉及的罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）为罗伊氏乳杆菌CICC6226购自于中国工业微生物菌种保藏中心，地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为地衣芽孢杆菌CGMCC 1.519购自与中国普通微生物菌种保藏管理中心，水苏糖购买于试剂公司，饲料购买于农场。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂的制备方法，其主要方法为将；水苏糖、罗伊氏乳杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌液干燥物按照不同的比例合理搭配而成。
进一步，在制备功能性制剂时，水苏糖、罗伊氏乳杆菌固体菌粉、地衣芽孢杆菌菌液干燥物分别按照10%～70%的质量比混合而成，之和为100%。
具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂的制备方法包括以下步骤：
将罗伊氏乳杆菌、地衣芽孢杆菌分别接种在合适的发酵培养基中扩大培养，离心冷冻干燥获取罗伊氏乳杆菌菌粉，喷雾干燥获取地衣芽孢杆菌菌液干燥物，并将水苏糖、罗伊氏乳杆菌菌粉和地衣芽孢杆菌的菌液干燥物分别按照质量比10%～70%，之和为100%混合均匀，从而得到具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂。
在解除饲料中的黄曲霉毒素B1时，黄曲霉毒素B1在饲料中的初始含量均超过100μg/kg，根据黄曲霉毒素B1在饲料中存在含量的高低，将功能性制剂按照质量百分比为0.05%～2%的添加量加入到发霉饲料中。本发明功能性制剂能够将饲料中的黄曲霉毒素B1含量降解到国标安全限20μg/kg以内，降解率达85%～98%。
本发明功能性制剂与其组成成分中的任意一种或两种组合物在解除黄曲霉毒素B1的效率上相比，效率提高了50%～200%。
本发明功能性制剂的主要成分之一水苏糖，水苏糖起到改善动物肠道菌群组成、提高动物生产性能和提高动物机体免疫力的作用，还能维持罗伊氏乳杆菌和地衣芽孢杆菌活性的功能。
本发明功能性制剂的主要成分之一罗伊式乳杆菌菌粉，罗伊式乳杆菌菌粉起到吸附黄曲霉毒素B1，并具有抑制病原菌、改善肠道环境、调节肠道菌群，代替抗生素发挥作用。
本发明功能性制剂的主要成分之一地衣芽孢杆菌菌液干燥物，地衣芽孢杆菌菌液干燥物主要起到降解黄曲霉毒素B1的作用，并且其生产的多种生物酶能够提高动物免疫力，有着代替抗生素的作用。
利用国标法（编号：GB/T 36858-2018）检测黄曲霉毒素B1的含量。
具有代替抗生素的功能性制剂在代替抗生素及降解饲料中黄曲霉毒素B1应用。
本发明一种具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂制备方法，其能够高效的解除饲料中的黄曲霉毒素B1，在避免黄曲霉毒素B1对动物造成伤害的同时还具备代替抗生素保护动物健康的重要功能。本功能性制剂由水苏糖、罗伊氏乳杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌液干燥物分别按照质量比10%～70%，之和为100%混合而成。首先罗伊式乳杆菌菌粉能够吸附饲料中的黄曲霉毒素B1，并且其能够耐受胃酸环境，能够保护本制剂安全抵达动物肠道发挥作用，罗伊式乳杆菌能够在动物肠道长期生存，并具有较强的黏附能力，具有竞争性抑制致病菌附着的能力，可以增加肠道内有益菌数量，其还能产生安全的光谱抗菌物质罗伊氏菌素，对致病菌具有抑制作用，从而代替抗生素的功能，安全高效的使动物预防病害。其次功能性制剂中的水苏糖来源于天然的植物，在我们合理的搭配组合下水苏糖能显著改善动物肠道菌群平衡，增强动物体免疫力，提高动物肠道中双歧杆菌的生长能力，促进肠道对营养物质的吸收，提高动物的消化能力，所以同样在一定程度上起到代替抗生素的作用，还能为罗伊式乳杆菌和地衣芽孢杆菌提供一部分能源使其更高效的发挥解毒和代抗效果。再次，功能性制剂中的重要组成部分地衣芽孢杆菌菌液干燥物，其主要起到降解黄曲霉毒素B1的作用，并且其还能够防止动物发生腹泻疾病，对调节肠道健康环境起到关键的作用。本发明功能性制剂即具有代替抗生素保护动物健康的功效，又避免了抗生素滥用造成的负面影响，在高效降解饲料中的黄曲霉毒素B1的同时，能够稳定、安全的在动物体内发挥其有益的作用，不仅能够抑制体内病原菌的繁殖避免疾病发生，还能够提高动物的机体免疫功能，还能够促进动物生长发育。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体的实施方式进一步详细描述。以下实施例是用来进一步说明本发明的内容，而不限制本发明的保护范围。对于本发明所涉及的相关内容及所做的修改，均属于本发明保护范围。
实施例1
将罗伊氏乳杆菌、地衣芽孢杆菌分别进行活化，并分别接种到各自合适的液体发酵培养基中恒温培养，其中罗伊氏乳杆菌进行厌氧发酵，地衣芽孢杆菌进行有氧发酵。发酵结束后离心冷冻干燥获得罗伊氏乳杆菌的菌体，并通过喷雾干燥获得地衣芽孢杆菌的菌液干燥物。并按照水苏糖、罗伊氏乳杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌液干燥物分别按照质量比（10%、40%、50%）混合均匀，从而得到一种具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂，备用。
添加适量的无菌水将功能性制剂进行稀释处理，并将黄曲霉毒素B1超标的饲料与功能性制剂用搅拌器充分均匀混合，功能性制剂按照质量百分比为0.05%的添加量加入到饲料中。将添加过功能性制剂的饲料放入30℃恒温处理18小时后，检测饲料中残余黄曲霉毒素B1的含量，结果表明，黄曲霉毒素B1被高效降解了95%，功能性制剂使黄曲霉毒素B1含量控制在安全限20μg/kg以内。
实施例2
将罗伊氏乳杆菌、地衣芽孢杆菌分别进行活化，并分别接种到各自合适的液体发酵培养基中恒温培养，其中罗伊氏乳杆菌进行厌氧发酵，地衣芽孢杆菌进行有氧发酵。发酵结束后离心干燥获得罗伊氏乳杆菌的菌体，并通过喷雾干燥获得地衣芽孢杆菌的菌液干燥物，并按照水苏糖、罗伊氏乳杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌液干燥物分别按照质量比（20%、50%、30%）混合均匀，从而得到一种具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂，备用。
添加适量的无菌水将功能性制剂进行稀释处理，并将黄曲霉毒素B1超标的饲料与功能性制剂用搅拌器充分均匀混合，功能性制剂的有效成分按照质量百分比为0.15%的添加量加入到发霉饲料中。将添加过功能性制剂的饲料放入30℃恒温处理18小时后，检测饲料中残余黄曲霉毒素B1的含量。相同处理条件下，用地衣芽孢杆菌菌液干燥物代替功能性制剂进行实验，结果表明，功能性制剂可将黄曲霉毒素B1高效降解，降解率为97%，地衣芽孢杆菌菌液干燥物降解率为45%，相对其提高了115.6%，功能性制剂使黄曲霉毒素B1含量控制在安全限20μg/kg以内。
实施例3
将罗伊氏乳杆菌、地衣芽孢杆菌分别进行活化，并分别接种到各自合适的液体发酵培养基中恒温培养，其中罗伊氏乳杆菌进行厌氧发酵，地衣芽孢杆菌进行有氧发酵。发酵结束后离心干燥获得罗伊氏乳杆菌的菌体，并通过喷雾干燥获得地衣芽孢杆菌的菌液干燥物，并按照水苏糖、罗伊氏乳杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌液干燥物分别按照质量比（20%、40%、40%）混合均匀，从而得到一种具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂，备用，以罗伊氏乳杆菌菌粉、地衣芽孢杆菌菌液干燥物分别按照60%：40%的比例混合，得到二者的混合物。
添加适量的无菌水将功能性制剂进行稀释处理，并将黄曲霉毒素B1超标的饲料与功能性制剂用搅拌器充分均匀混合，功能性制剂的有效成分按照质量百分比为0.1%的添加量加入到发霉饲料中。将添加过功能性制剂的饲料放入30℃恒温处理18小时后，检测饲料中残余黄曲霉毒素B1的含量。相同处理条件下，用步骤27所述的混合物代替功能性制剂进行实验，实验结果表明，功能性制剂可将黄曲霉毒素B1高效降解，降解率为98%，而混合物的降解率仅为55%，相对其提高了78.2%，功能性制剂使黄曲霉毒素B1含量控制在安全限20μg/kg以内。
Claims (5)
1.一种具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂制备方法，其特征在于，由地衣芽孢杆菌CGMCC 1.519的菌液干燥后与水苏糖、罗伊氏乳杆菌CICC 6226的菌粉按照不同的比例合理搭配而成。
2.如权利要求1所述的一种具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂，其特征在于制备功能性制剂时，地衣芽孢杆菌菌液干燥物与水苏糖、罗伊氏乳杆菌菌粉分别按照质量比10%～70%，之和为100%混合而成。
3.如权利1～2所述的一种具有代替抗生素和降解黄曲霉毒素B1的功能性制剂的应用，其特征在于：功能性制剂在代替抗生素及降解饲料中黄曲霉毒素B1的应用。
4.如权利要求1～3所述的功能性制剂，根据黄曲霉毒素B1在饲料中存在含量的高低，将功能性制剂按照质量百分比为0.05%～2%的添加量加入到发霉饲料中。
5.如权利要求1～4所述的功能性制剂，与其组成成分中的任意一种或两种组合物在解除黄曲霉毒素B1的效率上相比，效率提高了50%～200%。
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Non-Patent Citations (1)
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| 曾东等: "植物乳杆菌F22对黄曲霉毒素B_1的吸附特性", 《食品科学》 * |
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