CN110054613B - 取代的氨基喹唑啉类化合物及其药物组合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种取代的氨基喹唑啉类化合物及药物组合物及其用途，所述的氨基喹唑啉类化合物如式(I)所示化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体。本发明化合物和组合物可用于治疗和/或预防ErbB家族酪氨酸激酶介导的疾病。

Description

取代的氨基喹唑啉类化合物及其药物组合物及其用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种取代的氨基喹唑啉类化合物及包含该化合物的药物组合物及其用途。更具体而言，本发明涉及某些氘取代的1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮，这些氘取代的化合物及其组合物可用于治疗和/或预防ErbB家族酪氨酸激酶(例如EGFR(ErbB-1)、Her2/c-neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4)激酶)介导的相关疾病，且这些氘取代的化合物具有更优良的药代动力学性质。
背景技术
蛋白激酶代表了一大类在对细胞功能保持控制和各种细胞病变的调控中起重要作用的蛋白质。蛋白酪氨酸激酶可以归类于生长因子受体(如VEGFR、EGFR、PDGFR、FGFR和erbB2)或非受体(如c-src和bcr-abl)激酶。受体类型的酪氨酸激酶又可分为20中不同的亚型；而非受体类型的酪氨酸解密也有很多种亚型。受体酪氨酸激酶是一大类酵素，能使生长因子跨越细胞膜保持细胞外结合区域，跨膜区和细胞内部分作为具有激酶的功能，磷酸化作用于一个具体蛋白酪氨酸残基，从而影响细胞增殖。变体的或不恰当的蛋白激酶活性能导致病情的恶化。
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是一种受体型酪氨酸激酶，具有4种受体亚型，即EGFR(ErbB-1)、HER2/c-neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4)。正常的EGFR激活的信号通路能够调节细胞的增殖、成血管、生长、迁移和粘附，在器官发生过程或成体的细胞与细胞间的相互作用中起着重要作用。许多分子能够导致EGFR激酶活性的持续激活，不断的触发大量的下游信号转导通路，包括K-ras激活。因此EGFR家族与成瘤密切相关。EGFR的过表达或突变在头颈癌、卵巢癌、膀胱癌、宫颈癌、食道癌、胃癌、乳腺癌、内膜癌、结肠癌、肺癌和脑瘤等多种癌症中都能检测到，通常预示这不良的预后。另外，Her2被认为是一种较强的肿瘤蛋白，其突变也在多种肿瘤中可见，尤其是乳腺癌、肺癌和结肠癌等。
Poziotinib(又名HM-78136，化学名称为1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮，其具有以下结构式)是韩国韩美制药公司(Hanmi pharmaceutical,Inc)研发的一种新型口服喹唑啉广谱-ErbB抑制剂，能不可逆地阻断ErbB家族酪氨酸激酶受体(包括EGFR、Her2和Her4)的信号通路，从而抑制过度表达这些受体的肿瘤细胞的增殖。该药物目前正在肺癌、乳腺癌、胃癌和头颈癌患者中进行研究。临床前的数据表明：相比第一代至第三代EGFR抑制剂(例如Gefitinib、Erlotinib或Osimertinib)，Poziotinib可有效的抑制EGFR和Her2外显子20插入突变(EGFR and Her2exon 20 insertion mutants,即EGFR and Her2 Ex20Ins mutants)，同时，Poziotinib对EGFR Ex20Ins突变的抑制作用明显优于其对典型的EGFR T790M突变的抑制作用。Poziotinib的II期临床研究结果显示可有效抑制EGFR Ex20Ins突变，远超预期疗效达64％。
Figure BDA0002066152100000021
已知较差的吸收、分布、代谢和/或排泄(ADME)性质是导致许多候选药物临床试验失败的主要原因。当前上市的许多药物也由于较差的ADME性质限制了它们的应用范围。药物的快速代谢会导致许多本来可以高效治疗疾病的药物由于过快的从体内代谢清除掉而难以成药。频繁或高剂量服药虽然有可能解决药物快速清除的问题，但该方法会带来诸如病人依从性差、高剂量服药引起的副作用及治疗成本上升等问题。另外，快速代谢的药物也可能会使患者暴露于不良的毒性或反应性代谢物中。
虽然Poziotinib作为广谱ErbB抑制剂能有效治疗ErbB家族酪氨酸激酶受体介导的癌症，但是该领域仍存在严重的临床未满足需求，而且发现具有治疗由EGFR(ErbB-1)、Her2/c-neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4)野生型和突变体激酶介导疾病且具有很好的口服生物利用度且有成药性的新型化合物还是具有挑战性的工作。因此，本领域仍需开发对适用作治疗剂的ErbB家族酪氨酸激酶介导疾病具有选择性抑制活性和/或更好地药效学/药代动力学的化合物，本发明提供了这样的化合物。
发明内容
针对以上技术问题，本发明公开了一种新型的氘取代的氨基喹唑啉类化合物及其组合物和用途，其具有更好地EGFR/ErbB1、Her-2/ErbB2、Her-3/ErbB3或Her-4/ErbB4激酶抑制活性，以及对于选自T790M突变、L858R突变、del19突变、C797S突变或Ex20Ins突变中的一个或多个具有的更高的抑制活性和选择性，同时具有更低的副作用、更好地药代动力学性能，可用于治疗ErbB家族酪氨酸激酶介导的疾病。
如本文所用，术语“本发明化合物”指式(I)所示的化合物。该术语还包括及式(I)化合物的药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、多晶型、立体异构体或同位素变体。
对此，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一方面，提供了式(I)化合物：
Figure BDA0002066152100000031
其中，
Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7和Y8各自独立地选自氢、氘、卤素或三氟甲基；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自氢或氘；
X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D；
附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子；
或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、多晶型、立体异构体或同位素变体。
在另一方面，本发明提供了含有本发明化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在具体实施方案中，本发明化合物以有效量提供在所述药物组合物中。在具体实施方案中，本发明化合物以治疗有效量提供。在具体实施方案中，本发明化合物以预防有效量提供。在具体实施方案中，所述的药物组合物还含有另外的治疗药物，所述的另外的治疗药物选自细胞信号转导抑制剂、有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢药、抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗激素药和抗雄激素。
在另一方面，本发明提供了一种如上所述的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：将药学上可接受的赋形剂与本发明化合物进行混合，从而形成药物组合物。
在另一方面，本发明还涉及提供一种在受试者中治疗和/或预防ErbB家族酪氨酸激酶介导的疾病的方法。该方法包括向该受试者给药治疗有效量的本发明化合物或药物组合物。在具体实施方案中，ErbB家族酪氨酸激酶选自EGFR、Her2、Her3或Her4激酶的野生型和突变体中的一个或多个激酶。在具体实施方案中，EGFR突变体选自T790M突变、L858R突变、del19突变、C797S突变或Ex20Ins突变中的一个或多个。在具体实施方案中，Her2突变体选自Ex20Ins突变。在具体实施方案中，所述的增殖性疾病是转移癌、表皮癌、结肠癌、胃腺癌、膀胱癌、乳癌、肾癌、肝癌、肺癌、甲状腺癌、脑瘤、颈癌、前列腺癌、胰腺癌、中枢神经系统的癌症、恶性胶质瘤、骨髓增生病、动脉粥样硬化或肺纤维化。在具体实施方案中，口服、皮下、静脉内或肌肉内给药所述化合物。在具体实施方案中，长期给药所述化合物。
由随后的具体实施方式、实施例和权利要求，本发明的其它目的和优点将对于本领域技术人员显而易见。
定义
本文中，如无特别说明，“氘代”指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代；氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。术语“一个或多个氘代的”与“一次或多次氘代”可互换使用。
本文中，如无特别说明，“非氘代的化合物”是指含氘原子比例不高于天然氘同位素含量(0.015％)的化合物。
术语“药学上可接受的盐”是指，在可靠的医学判断范围内，适合与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激性、变态反应等等，并且与合理的益处/危险比例相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域是众所周知的。例如，Berge等人在J.PharmaceuticalSciences(1977)66:1-19中详细描述的药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适无机和有机酸和碱的盐。
本发明化合物可以是无定形或结晶形式。此外，本发明化合物可以以一种或多种结晶形式存在。因此，本发明在其范围内包括本发明化合物的所有无定形或结晶形式。术语“晶型”是指化学药物分子的不同排列方式，一般表现为药物原料在固体状态下的存在形式。一种药物可以多种晶型物质状态存在，同一种药物的不同晶型，在体内的溶解和吸收可能不同，从而会对制剂的溶出和释放产生影响。
术语“晶型”是指化学药物分子的不同排列方式，一般表现为药物原料在固体状态下的存在形式。一种药物可以多种晶型物质状态存在，同一种药物的不同晶型，在体内的溶解和吸收可能不同，从而会对制剂的溶出和释放产生影响。
如本文所用，术语“受试者”包括但不限于：人(即，任何年龄组的男性或女性，例如，儿科受试者(例如，婴儿、儿童、青少年)或成人受试者(例如，年轻的成人、中年的成人或年长的成人))和/或非人的动物，例如，哺乳动物，例如，灵长类(例如，食蟹猴、恒河猴)、牛、猪、马、绵羊、山羊、啮齿动物、猫和/或狗。在一些实施方案中，受试者是人。在另一些实施方案中，受试者是非人动物。
“疾病”、“障碍”和“病症”在本文中可以互换地使用。
除非另作说明，否则，本文使用的术语“治疗”包括受试者患有具体疾病、障碍或病症时所发生的作用，它降低疾病、障碍或病症的严重程度，或延迟或减缓疾病、障碍或病症的发展(“治疗性治疗”)，还包括受试者开始患有具体疾病、障碍或疾病之前发生的作用(“预防性治疗”)。
通常，化合物的“有效量”是指足以引起目标生物反应的数量。正如本领域普通技术人员所理解的那样，本发明化合物的有效量可以根据下列因素而改变：例如，生物学目标、化合物的药物动力学、所治疗的疾病、给药模式以及受试者的年龄健康情况和症状。有效量包括治疗和预防性治疗有效量。
除非另作说明，否则，本文使用的化合物的“治疗有效量”是在治疗疾病、障碍或病症的过程中足以提供治疗有益处的数量，或使与疾病、障碍或病症有关的一或多种症状延迟或最小化。化合物的治疗有效量是指单独使用或与其他疗法联用的治疗剂的数量，它在治疗疾病、障碍或病症的过程中提供治疗益处。术语“治疗有效量”可以包括改善总体治疗、降低或避免疾病或病症的症状或病因、或增强其他治疗剂的治疗效能的数量。
除非另作说明，否则，本文使用的化合物的“预防有效量”是足以预防疾病、障碍或病症的数量，或足以预防与疾病、障碍或病症有关的一或多种症状的数量，或防止疾病、障碍或病症复发的数量。化合物的预防有效量是指单独使用或与其它药剂联用的治疗剂的数量，它在预防疾病、障碍或病症的过程中提供预防益处。术语“预防有效量”可以包括改善总体预防的数量，或增强其它预防药剂的预防效能的数量。
“组合”以及相关术语是指同时或依次给药本发明的治疗剂。例如，本发明化合物可以与另一治疗剂以分开的单位剂型同时或依次给药，或与另一治疗剂一起呈单一单位剂型同时给药。
具体实施方式
化合物
本发明提供式(I)化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体：
Figure BDA0002066152100000061
其中，
Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7和Y8各自独立地选自氢、氘、卤素或三氟甲基；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自氢或氘；
X独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D；
附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
作为本发明的具体实施方案，氘在氘代位置中的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量0.015％，较佳地大于30％，更佳地大于50％，更佳地大于75％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。
具体地说，在本发明中Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和X，各氘代位置中氘同位素含量至少是5％，较佳地大于10％，更佳地大于15％，更佳地大于20％，更佳地大于25％，更佳地大于30％，更佳地大于35％，更佳地大于40％，更佳地大于45％，更佳地大于50％，更佳地大于55％，更佳地大于60％，更佳地大于65％，更佳地大于70％，更佳地大于75％，更佳地大于80％，更佳地大于85％，更佳地大于90％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。
作为本发明的具体实施方案，式(I)化合物至少含有一个氘原子，更佳地一个氘原子，更佳地二个氘原子，更佳地三个氘原子，更佳地四个氘原子，更佳地五个氘原子，更佳地六个氘原子，更佳地七个氘原子，更佳地八个氘原子，更佳地九个氘原子，更佳地十个氘原子，更佳地十一个氘原子，更佳地十二个氘原子，更佳地十三个氘原子，更佳地十四个氘原子，更佳地十五个氘原子，更佳地十六个氘原子，更佳地十七个氘原子，更佳地十八个氘原子，更佳地十九个氘原子，更佳地二十个氘原子。
在具体实施方案中，“Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7和Y8各自独立地选自氢、氘、卤素或三氟甲基”的技术方案包括Y1选自氢、氘、卤素或三氟甲基，Y2选自氢、氘、卤素或三氟甲基，Y3选自氢、氘、卤素或三氟甲基，以此类推，直至Y8选自氢、氘、卤素或三氟甲基的技术方案。更具体地，包括Y1为氢、Y1为氘、Y1为卤素(F、Cl、Br或I)或Y1为三氟甲基，Y2为氢、Y2为氘、Y2为卤素(F、Cl、Br或I)或Y2为三氟甲基，Y3为氢、Y3为氘、Y3为卤素(F、Cl、Br或I)或Y3为三氟甲基，以此类推，直至Y8为氢、Y8为氘、Y8为卤素(F、Cl、Br或I)或Y8为三氟甲基的技术方案。
在另一具体实施方案中，“R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自氢或氘”的技术方案包括R1选自氢或氘，R2选自氢或氘，R3选自氢或氘，以此类推，直至R9选自氢或氘的技术方案。更具体地，包括R1为氢、R1为氘，R2为氢、R2为氘，R3为氢、R3为氘，以此类推，直至R9为氢、R9为氘的技术方案。
在另一具体实施方案中，“X独立地选自CH3、CD3、CHD2或CH2D”的技术方案包括X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D的技术方案。更具体地，包括X为CH3、X为CD3、X为CHD2或X为CH2D的技术方案。
在另一个具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，Y1-Y8各自独立地选自氢或氘，且X和R1-R9如上所定义，附加条件是所述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，Y1-Y8各自独立地选自氢或氘，且X选自CD3或CH3，R1-R9如上所定义，附加条件是所述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，Y3-Y8同时为氢，且Y1和Y2各自独立地选自氢或氘，X和R1-R9如上所定义，附加条件是所述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，Y3-Y8同时为氢，且Y1和Y2各自独立地选自氢或氘，R1-R9如上所定义，X选自CD3或CH3，附加条件是所述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，R2-R5是相同的。
在另一具体实施方案中，R6-R9是相同的。
在另一具体实施方案中，R2-R9是相同的。
在另一具体实施方案中，R1是氢。
在另一具体实施方案中，R1是氘。
在另一具体实施方案中，X是CD3。
在优选的实施方案中，X是CH3。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，Y2是氘，Y1和R1-R9各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R6-R9是氢，Y1、Y2和R1-R5各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，Y2是氘，R6-R9是氢，Y1和R1-R5各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R2-R5是氘，Y1、Y2、R1和R6-R9各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R2-R5和Y2是氘，Y1、R1和R6-R9各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R2-R5是氘，R6-R9是氢，Y1、Y2和R1各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R2-R5和Y2是氘，R6-R9是氢，R1选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R1是氘，Y1、Y2和R2-R9各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R1是氘，Y2是氘，Y1和R2-R9各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R1是氘，R6-R9是氢，Y1、Y2和R2-R5各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R1-R5是氘，Y1、Y2和R6-R9各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R1是氘，Y2是氘，R6-R9是氢，Y1和R2-R5各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R1-R5是氘，Y2是氘，Y1和R6-R9各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R1-R5是氘，R6-R9是氢，Y1和Y2各自独立地选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，R1-R5是氘，Y2是氘，R6-R9是氢，Y1选自氢或氘，X选自CH3、CD3、CHD2或CH2D。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，Y1、Y2和R1-R9各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，Y2是氘，Y1和R1-R9各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R6-R9是氢，Y1、Y2和R1-R5各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，Y2是氘，R6-R9是氢，Y1和R1-R5各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R2-R5是氘，Y1、Y2、R1和R6-R9各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R2-R5是氘，Y2是氘，Y1、R1和R6-R9各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R2-R5是氘，R6-R9是氢，Y1、Y2和R1各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，Y2是氘，R2-R5是氘，R6-R9是氢，Y1和R1各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R1是氘，Y1、Y2和R2-R9各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R1是氘，Y2是氘，Y1和R2-R9各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R1是氘，R6-R9是氢，Y1、Y2和R2-R5各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，Y2是氘，R1是氘，R6-R9是氢，Y1和R2-R5各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R1-R5是氘，Y1、Y2和R6-R9各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R1-R5是氘，Y2是氘，Y1和R6-R9各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，R1-R5是氘，R6-R9是氢，Y1和Y2各自独立地选自氢或氘。
在另一具体实施方案中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、晶型、立体异构体或同位素变体，其中，X是CD3，Y2是氘，R1-R5是氘，R6-R9是氢，Y2选自氢或氘。
作为本发明的具体实施方案，所述化合物为如下任一结构，或其药学上可接受的盐，但不限于下列结构：
Figure BDA0002066152100000111
Figure BDA0002066152100000121
Figure BDA0002066152100000131
本发明化合物可包括一个或多个不对称中心，且因此可以存在多种立体异构体形式，例如，对映异构体和/或非对映异构体形式。例如，本发明化合物可为单独的对映异构体、非对映异构体或几何异构体(例如顺式和反式异构体)，或者可为立体异构体的混合物的形式，包括外消旋体混合物和富含一种或多种立体异构体的混合物。异构体可通过本领域技术人员已知的方法从混合物中分离，所述方法包括：手性高压液相色谱法(HPLC)以及手性盐的形成和结晶；或者优选的异构体可通过不对称合成来制备。
本领域技术人员将理解，有机化合物可以与溶剂形成复合物，其在该溶剂中发生反应或从该溶剂中沉淀或结晶出来。这些复合物称为“溶剂合物”。当溶剂是水时，复合物称为“水合物”。本发明涵盖了本发明化合物的所有溶剂合物。
术语“溶剂合物”是指通常由溶剂分解反应形成的与溶剂相结合的化合物或其盐的形式。这个物理缔合可包括氢键键合。常规溶剂包括包括水、甲醇、乙醇、乙酸、DMSO、THF、乙醚等。本文所述的化合物可制备成，例如，结晶形式，且可被溶剂化。合适的溶剂合物包括药学上可接受的溶剂合物且进一步包括化学计量的溶剂合物和非化学计量的溶剂合物。在一些情况下，所述溶剂合物将能够分离，例如，当一或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。“溶剂合物”包括溶液状态的溶剂合物和可分离的溶剂合物。代表性的溶剂合物包括水合物、乙醇合物和甲醇合物。
术语“水合物”是指与水相结合的化合物。通常，包含在化合物的水合物中的水分子数与该水合物中该化合物分子数的比率确定。因此，化合物的水合物可用例如通式R·xH2O代表，其中R是该化合物，和x是大于0的数。给定化合物可形成超过一种水合物类型，包括，例如，单水合物(x为1)、低级水合物(x是大于0且小于1的数，例如，半水合物(R·0.5H2O))和多水合物(x为大于1的数，例如，二水合物(R·2H2O)和六水合物(R·6H2O))。
本发明化合物可以是无定形或结晶形式(多晶型)。此外，本发明化合物可以以一种或多种结晶形式存在。因此，本发明在其范围内包括本发明化合物的所有无定形或结晶形式。术语“多晶型物”是指特定晶体堆积排列的化合物的结晶形式(或其盐、水合物或溶剂合物)。所有的多晶型物具有相同的元素组成。不同的结晶形式通常具有不同的X射线衍射图、红外光谱、熔点、密度、硬度、晶体形状、光电性质、稳定性和溶解度。重结晶溶剂、结晶速率、贮存温度和其他因素可导致一种结晶形式占优。化合物的各种多晶型物可在不同的条件下通过结晶制备。
本发明还包括同位素标记的化合物，它们等同于式(I)所述的那些，但一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界常见的原子质量或质量数的原子所代替。可以引入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别例如2H、3H、13C、11C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物、其前体药物和所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐都属于本发明的范围。某些同位素标记的本发明化合物、例如引入放射性同位素(例如3H和14C)的那些可用于药物和/或底物组织分布测定。氚、即3H和碳-14、即14C同位素是特别优选的，因为它们容易制备和检测。进而，被更重的同位素取代，例如氘、即2H，由于代谢稳定性更高可以提供治疗上的益处，例如延长体内半衰期或减少剂量需求，因而在有些情况下可能是优选的。同位素标记的本发明式(I)化合物及其前体药物一般可以这样制备，在进行下述流程和/或实施例与制备例所公开的工艺时，用容易得到的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂。
此外，前药也包括在本发明的上下文内。本文所用的术语“前药”是指在体内通过例如在血液中水解转变成其具有医学效应的活性形式的化合物。药学上可接受的前药描述于T.Higuchi和V.Stella，Prodrugs as Novel Delivery Systems，A.C.S.SymposiumSeries的Vol.14，Edward B.Roche，ed.，Bioreversible Carriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987，以及D.Fleisher、S.Ramon和H.Barbra“Improved oral drug delivery：solubility limitations overcomeby the use of prodrugs”，Advanced Drug Delivery Reviews(1996)19(2)115-130，每篇引入本文作为参考。
前药为任何共价键合的本发明化合物，当将这种前药给予患者时，其在体内释放母体化合物。通常通过修饰官能团来制备前药，修饰是以使得该修饰可以通过常规操作或在体内裂解产生母体化合物的方式进行的。前药包括，例如，其中羟基、氨基或巯基与任意基团键合的本发明化合物，当将其给予患者时，可以裂解形成羟基、氨基或巯基。因此，前药的代表性实例包括(但不限于)式(I)化合物的羟基、巯基和氨基官能团的乙酸酯/酰胺、甲酸酯/酰胺和苯甲酸酯/酰胺衍生物。另外，在羧酸(-COOH)的情况下，可以使用酯，例如甲酯、乙酯等。酯本身可以是有活性的和/或可以在人体体内条件下水解。合适的药学上可接受的体内可水解的酯基包括容易在人体中分解而释放母体酸或其盐的那些基团。
合成
本发明化合物(包括其盐)可使用已知有机合成技术来制备，且可按照多种可能合成途径中的任一种(诸如下文方案中的那些)来合成。用于制备本发明化合物的反应可在合适的溶剂中进行，有机合成领域的技术人员可容易地选择溶剂。合适的溶剂可在进行反应的温度(例如，在溶剂结冻温度至溶剂沸点温度范围内的温度)下与起始物质(反应物)、中间体或产物实质上不反应。既定反应可在一种溶剂或一种以上溶剂的混合物中进行。技术人员可依据具体反应步骤来选择用于具体反应步骤的溶剂。
本发明化合物的制备可涉及不同化学基团的保护和去除保护。本领域技术人员可容易地判定是否需要保护和去除保护以及适当保护基的选择。保护基的化学性质可参见例如Wuts和Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，第4版，John Wiley&Sons：New Jersey，(2006)，其通过引用整体并入本文中。
可按照本领域已知任何合适的方法来监测反应。例如，可通过光谱手段(诸如核磁共振(NMR)光谱法(例如1H或13C)、红外(IR)光谱法、分光光度法(例如，UV-可见光)、质谱(MS))或通过色谱方法(诸如高效液相色谱法(HPLC)或薄层色谱法(TLC))来监测产物形成。
下面的通用制备路线可用于合成本发明式(I)结构的化合物。合成路线如下所示：
Figure BDA0002066152100000151
药物组合物、制剂和试剂盒
在另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含本发明化合物(还称为“活性组分”)和药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含有效量的活性组分。在一些实施方案中，所述药物组合物包含治疗有效量的活性组分。在一些实施方案中，所述药物组合物包含预防有效量的活性组分。
用于本发明的药学上可接受的赋形剂是指不会破坏一起配制的化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒剂。可以用于本发明组合物中的药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂包括但不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(如人类血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白)、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇以及羊毛脂。
本发明还包括试剂盒(例如，药物包装)。所提供的试剂盒可以包括本发明化合物、其它治疗剂，以及含有本发明化合物、其它治疗剂的第一和第二容器(例如，小瓶、安瓿瓶、瓶、注射器和/或可分散包装或其它合适的容器)。在一些实施方案中，提供的试剂盒还可以任选包括第三容器，其含有用于稀释或悬浮本发明化合物和/或其它治疗剂的药用赋形剂。在一些实施方案中，提供在第一容器和第二容器中的本发明化合物和其它治疗剂组合形成一个单位剂型。
本发明提供的药物组合物可以通过许多途径给药，包括但不限于：口服给药、肠胃外给药、吸入给药、局部给药、直肠给药、鼻腔给药、口腔给药、阴道给药、通过植入剂给药或其它给药方式。例如，本文使用的肠胃外给药包括皮下给药、皮内给药、静脉内给药、肌肉内给药、关节内给药、动脉内给药、滑膜腔内给药、胸骨内给药、脑脊髓膜内给药、病灶内给药、和颅内的注射或输液技术。
通常，给予有效量的本文所提供的化合物。按照有关情况，包括所治疗的病症、选择的给药途径、实际给予的化合物、个体患者的年龄、体重和响应、患者症状的严重程度，等等，可以由医生确定实际上给予的化合物的量。
当用于预防本发明所述病症时，给予处于形成所述病症危险之中的受试者本文所提供的化合物，典型地基于医生的建议并在医生监督下给药，剂量水平如上所述。处于形成具体病症的危险之中的受试者，通常包括具有所述病症的家族史的受试者，或通过遗传试验或筛选确定尤其对形成所述病症敏感的那些受试者。
还可以长期给予本文所提供的药物组合物(“长期给药”)。长期给药是指在长时间内给予化合物或其药物组合物，例如，3个月、6个月、1年、2年、3年、5年等等，或者可无限期地持续给药，例如，受试者的余生。在一些实施方案中，长期给药意欲在长时间内在血液中提供所述化合物的恒定水平，例如，在治疗窗内。
可以使用各种给药方法，进一步递送本发明的药物组合物。例如，在一些实施方案中，可以推注给药药物组合物，例如，为了使化合物在血液中的浓度快速提高至有效水平。推注剂量取决于活性组分的目标全身性水平，例如，肌内或皮下的推注剂量使活性组分缓慢释放，而直接递送至静脉的推注(例如，通过IV静脉滴注)能够更加快速地递送，使得活性组分在血液中的浓度快速升高至有效水平。在其它实施方案中，可以以持续输液形式给予药物组合物，例如，通过IV静脉滴注，从而在受试者身体中提供稳态浓度的活性组分。此外，在其它实施方案中，可以首先给予推注剂量的药物组合物，而后持续输液。
口服组合物可以采用散装液体溶液或混悬剂或散装粉剂形式。然而，更通常，为了便于精确地剂量给药，以单位剂量形式提供所述组合物。术语“单位剂型”是指适合作为人类患者及其它哺乳动物的单元剂量的物理离散单位，每个单位包含预定数量的、适于产生所需要的治疗效果的活性物质与合适药学赋形剂。典型的单位剂量形式包括液体组合物的预装填的、预先测量的安瓿或注射器，或者在固体组合物情况下的丸剂、片剂、胶囊剂等。在这种组合物中，所述化合物通常为较少的组分(约0.1至约50重量％，或优选约1至约40重量％)，剩余部分为对于形成所需给药形式有用的各种载体或赋形剂以及加工助剂。
对于口服剂量，代表性的方案是，每天一个至五个口服剂量，尤其是两个至四个口服剂量，典型地是三个口服剂量。使用这些剂量给药模式，每个剂量提供大约0.01至大约20mg/kg的本发明化合物，优选的剂量各自提供大约0.1至大约10mg/kg，尤其是大约1至大约5mg/kg。
为了提供与使用注射剂量类似的血液水平，或比使用注射剂量更低的血液水平，通常选择透皮剂量，数量为大约0.01至大约20％重量，优选大约0.1至大约20％重量，优选大约0.1至大约10％重量，且更优选大约0.5至大约15％重量。
从大约1至大约120小时，尤其是24至96小时，注射剂量水平在大约0.1mg/kg/小时至至少10mg/kg/小时的范围。为了获得足够的稳定状态水平，还可以给予大约0.1mg/kg至大约10mg/kg或更多的预载推注。对于40至80kg的人类患者来说，最大总剂量不能超过大约2g/天。
适于口服给药的液体形式可包括合适的水性或非水载体以及缓冲剂、悬浮剂和分散剂、着色剂、调味剂，等等。固体形式可包括，例如，任何下列组份，或具有类似性质的化合物：粘合剂，例如，微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如，淀粉或乳糖，崩解剂，例如，褐藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如，硬脂酸镁；助流剂，例如，胶体二氧化硅；甜味剂，例如，蔗糖或糖精；或调味剂，例如，薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂。
可注射的组合物典型地基于可注射用的无菌盐水或磷酸盐缓冲盐水，或本领域中已知的其它可注射的赋形剂。如前所述，在这种组合物中，活性化合物典型地为较少的组分，经常为约0.05至10％重量，剩余部分为可注射的赋形剂等。
典型地将透皮组合物配制为含有活性组分的局部软膏剂或乳膏剂。当配制为软膏剂时，活性组分典型地与石蜡或可与水混溶的软膏基质组合。或者，活性组分可与例如水包油型乳膏基质一起配制为乳膏剂。这种透皮制剂是本领域中公知的，且通常包括用于提升活性组分或制剂的稳定的皮肤渗透的其它组份。所有这种已知的透皮制剂和组份包括在本发明提供的范围内。
本发明化合物还可通过经皮装置给予。因此，经皮给药可使用贮存器(reservoir)或多孔膜类型、或者多种固体基质的贴剂实现。
用于口服给予、注射或局部给予的组合物的上述组份仅仅是代表性的。其它材料以及加工技术等阐述于Remington's Pharmaceutical Sciences,17th edition,1985,Mack Publishing Company,Easton,Pennsylvania的第8部分中，本文以引用的方式引入该文献。
本发明化合物还可以以持续释放形式给予，或从持续释放给药系统中给予。代表性的持续释放材料的描述可在Remington's Pharmaceutical Sciences中找到。
本发明还涉及本发明化合物的药学上可接受的制剂。在一个实施方案中，所述制剂包含水。在另一个实施方案中，所述制剂包含环糊精衍生物。最常见的环糊精为分别由6、7和8个α-1,4-连接的葡萄糖单元组成的α-、β-和γ-环糊精，其在连接的糖部分上任选包括一个或多个取代基，其包括但不限于：甲基化的、羟基烷基化的、酰化的和磺烷基醚取代。在一些实施方案中，所述环糊精为磺烷基醚β-环糊精，例如，磺丁基醚β-环糊精，也称作Captisol。参见，例如，U.S.5,376,645。在一些实施方案中，所述制剂包括六丙基-β-环糊精(例如，在水中，10-50％)。
适应症
本发明化合物可用于治疗人类或非人类ErbB家族酪氨酸激酶介导的增殖性疾病。在具体的实施方案中，所述的ErbB家族酪氨酸激酶选自EGFR/ErbB1、Her-2/ErbB2、Her-3/ErbB3或Her-4/ErbB4。
本发明化合物是EGFR的野生型或至少一种突变体的抑制剂并且因此适用于治疗与一种或一种以上EGFR野生型或突变体(例如缺失突变、活化突变、抗性突变或其组合，具体实例包括T790M突变、L858R突变、del19突变、C797S、L858R/T790M双突变、del19/T790M双突变、L858R/T790M/C797S三突变、del19/T790M/C797S三突变、Ex20Ins突变)的活性相关的一种或一种以上病症。因此，在具体实施方案中，本发明提供一种治疗EGFR野生型或突变型介导的病症的方法，其包含向有需要的患者给药本发明化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂合物、水合物、晶型、前药或同位素衍生物，或给药本发明所述的药物组合物的步骤。
本发明化合物是Her2的野生型或至少一种突变体的抑制剂并且因此适用于治疗与一种或一种以上Her2野生型或突变体(例如缺失突变、活化突变、抗性突变或其组合，具体实例包括Ex20Ins突变)的活性相关的一种或一种以上病症。因此，在具体实施方案中，本发明提供一种治疗Her2野生型或突变型介导的病症的方法，其包含向有需要的患者给药本发明化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂合物、水合物、晶型、前药或同位素衍生物，或给药本发明所述的药物组合物的步骤。
大约10-15％的非小细胞肺癌是由于EGFR突变导致的。目前已批准的EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR TKIs)例如吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)和阿法替尼(afatinib)，可以治疗有经典突变(例如del19突变、L858R突变)的非小细胞肺癌；相比化疗，接受这些EGFR TKIs治疗的70％的病人都有更长的无进展生存期(PFS)和更好的生活质量。但是，将近10～20％的EGFR突变的非小细胞肺癌肿瘤有EGFR Ex20Ins突变(EGFRexon20 insertion mutation)，同时EGFR Ex20Ins突变也是现有EGFR TKIs产生耐药的原因。然而，历史临床数据表明，已批准的EGFR TKIs对EGFR Ex20Ins突变的响应率只有8.7-11％，无进展生存期(PFS)只有2.4-2.7个月。此外，3％的在非小细胞肺癌是由Her2突变导致的，而90％的Her2突变是Ex20Ins。目前，由于缺乏有效靶向药物，带有EGFR和Her2Ex20Ins突变的病人被排除在临床实验之外，这表明亟需新的靶向药物来治疗这些病人。
通过激酶和细胞的增殖试验，我们评价了本发明化合物抗EGFR和Her2 Ex20Ins突变的活性。我们选用了EGFR D770_N771insSVD(InsSVD)和HER2 A775_G776insYVMA(InsYVMA)激酶和Ba/F3细胞来进行增殖试验，其中EGFR D770_N771insSVD是EGFR Ex20Ins突变中最常见的突变，HER2 A775_G776insYVMA约占Her2 Ex20Ins突变的50-80％，是其最主要的突变。试验结果表明：本发明化合物能有效抑制EGFR和Her2 Ex20Ins突变，可用于治疗带有EGFR和Her2 Ex20Ins突变的疾病。
本发明的化合物将应用于，但绝不限于，使用本发明的化合物或组合物的有效量对患者给药来预防或治疗患者增殖性疾病。这样的疾病包括癌症，尤其是转移癌，非小细胞肺癌、乳腺癌、头颈癌及表皮癌。
本发明的化合物将应用于瘤的治疗包括癌症和转移癌，进一步包括但并不限于，癌症如表皮癌，膀胱癌，乳腺癌，结肠癌，肾癌，肝癌，肺癌(包括小细胞肺癌)，食道癌，胆囊癌，卵巢癌，胰腺癌，胃癌，宫颈癌，甲状腺癌，前列腺癌，和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴系统造血肿瘤(包括白血病，急性淋巴囊肿性白血病，急性成淋巴细胞性白血病，B细胞淋巴瘤，T细胞淋巴瘤，何杰金(氏)淋巴瘤，非何杰金(氏)淋巴瘤，多毛细胞白血病和伯基特淋巴瘤)；骨髓系统造血肿瘤(包括急慢性骨髓性粒细胞性白血病，骨髓增生异常综合症，和前髓细胞白血病)；间充质细胞起源的肿瘤(包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤，和其他肉瘤，如软组织和软骨)；中枢末梢神经系统瘤(包
括星形细胞瘤，成神经细胞瘤，神经胶质瘤，和神经鞘瘤)；和其他肿瘤(包括黑素瘤，精原细胞瘤，畸胎癌，骨肉瘤，xenoderoma pigmentosum，keratoctanthoma，甲状腺滤泡瘤和卡波济(氏)肉瘤)。
本发明的化合物还可用于治疗眼科病症例如角膜移植排斥，眼的新生血管形成，视网膜新生血管形成包括损伤或感染后的新生血管形成；糖尿病性视网膜病；晶状体后纤维组织增生症，和新生血管性青光眼；视网膜缺血；玻璃体出血；溃疡性疾病如胃溃疡；病理学的但非恶性状况如血管瘤，包括婴儿血管内皮细胞瘤，鼻咽和无血管性骨坏死的血管纤维瘤；雌性生殖系统紊乱如子宫内膜异位。这些化合物同样也用于治疗水肿和脉管通透性过高的状况。
本发明的化合物可以用于处理与糖尿病相关的情况如糖尿病性视网膜病和微血管病。本发明的化合物同样用于癌症患者血流量减少的情况。本发明的化合物对患者肿瘤转移减少也有有益效果。
本发明的化合物除了对人类治疗有益以外，还可应用于兽医治疗宠物、引进品种的动物和农场的动物，包括哺乳动物，啮齿类动物等等。另外一些动物的实例包括马、狗和猫。在此，本发明的化合物包括其药学上可接受的衍生物。
联合疗法
本发明的化合物可以以仅有的药学试剂或结合一个或多个其他附加治疗(药学的)剂来给药，其中联合用药引起可接受的不良反应，这对于高增生性疾病如癌症的治疗具有特殊的意义。在这种情况下，本发明的化合物可以结合已知的细胞毒素剂，单个转导抑制剂或其他抗癌试剂，以及它们的混合物和组合。像本发明所使用的，附加治疗剂正常给药治疗特殊的疾病，就是已知的“合适地治疗疾病”。本发明所使用的“附加治疗剂”包括化学治疗药物或其他抗增殖的药物可以结合本发明的化合物治疗增殖性疾病或癌症。
化学治疗药物或其他抗增殖药物包括组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂，包括但并不限于，SAHA，MS-275，MGO103，以及那些以下专利所描述的化合物：WO 2006/010264,WO03/024448,WO 2004/069823,US 2006/0058298,US 2005/0288282,WO00/71703,WO01/38322,WO 01/70675,WO 03/006652,WO 2004/035525,WO2005/030705,WO 2005/092899,和脱甲基化试剂包括，但并不限于，5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-dC)、阿扎胞苷(Vidaza)、地西他滨(Decitabine)和以下文献所描述的化合物：US 6,268137,US5,578,716,US5,919,772,US 6,054,439,US 6,184,211,US 6,020,318,US6,066,625,US 6,506,735,US 6,221,849,US 6,953,783,US 11/393,380。
另外一些实施例是，化学治疗药物或其他抗增殖药物可以结合本发明的化合物治疗增殖性疾病和癌症。已知的化学治疗药物包括，但并不限于，其他疗法或抗癌剂可以联合本发明的抗癌剂与包括外科，放射疗法(少许例子如γ辐射，中子束放射疗法，电子束放射疗法，质子疗法，近距离放射疗法和系统放射性同位素疗法)，内分泌疗法，紫杉烷类(紫杉醇，多西紫杉醇等等)，铂的衍生物，生物反应调节剂(干扰素，白细胞间素，肿瘤坏死因子(TNF)，TRAIL受体靶向作用和媒介物)，过热和冷冻疗法，稀释任何不良反应的试剂(如止吐药)，和其他认可的化学治疗药物，包括但并不限于，烷化药物(氮芥，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，苯丙氨酸氮芥，异环磷酰胺)，抗代谢
物(甲氨蝶呤，培美曲塞(Pemetrexed)等等)，嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(6-巯嘌呤(6-Mercaptopurine)，5-氟尿嘧啶，Cytarabile，吉西他滨(Gemcitabine))，纺锤体抑制剂(长春碱，长春新碱，长春瑞滨，紫杉醇)，鬼臼毒素(依托泊苷，伊立替康(Irinotecan)，托泊替康(Topotecan))，抗生素(多柔比星(Doxorubicin)，博莱霉素(Bleomycin)，丝裂霉素(Mitomycin))，亚硝基脲(卡莫司汀(Carmustine)，洛莫司汀(Lomustine))，无机离子(顺铂，卡铂)，细胞分裂周期抑制剂(KSP通过有丝分裂驱动蛋白抑制剂，CENP-E和CDK抑制剂)，酵素(天门冬酰胺酶)，荷尔蒙(它莫昔芬(Tamoxifen)，亮丙瑞林(Leuprolide)，氟他胺(Flutamide)，甲地孕酮(Megestrol))，格列卫(Gleevec)，阿霉素(Adriamycin)，地塞米松(Dexamethasone)，和环磷酰胺。抗血管生成因子(阿瓦斯丁(Avastin)及其他)，激酶抑制剂(伊马替尼(Imatinib)，舒尼替尼(Sutent)，索拉非尼(Nexavar)，西妥昔单抗(Erbitux)，赫赛汀(Herceptin)，它赛瓦(Tarceva)，易瑞沙(Iressa)及其他)。药物
抑制或激活癌症的途径如mTOR，HIF(缺氧诱导因子)途径及其他。癌症治疗较广泛的论坛见http://www.nci.nih.gov，FAD认可的肿瘤学药物清单见http://www.fda.gov/cder/cancer/druglist-rame.htm，和默克手册，第十八版.2006，所有的内容都是结合了参考文献。
另外一些实施例是，本发明的化合物可以结合细胞毒素抗癌剂。这样的抗癌剂可以在第十三版默克索引(2001)里找到。这些抗癌剂包括，但绝不限于，门冬酰胺酶(Asparaginase)，博来霉素(Bleomycin)，卡铂，卡莫司汀(Carmustine)，苯丁酸氮芥(Chlorambucil)，顺铂，L-天冬酰胺酶(Colaspase)，环磷酰胺，阿糖胞苷(Cytarabine)，达卡巴嗪(Dacarbazine)，放线菌素D(Dactinomycin)，柔红霉素(Daunorubicin)，阿霉素(多柔比星)，表柔比星(Epirubicin)，依托泊苷(Etoposide)，5-氟脲嘧啶，六甲基三聚氰胺，羟基脲，异环磷酰胺，伊立替康，亚叶酸，环己亚硝脲，氮芥，6-巯基嘌呤，美司钠(Mesna)，甲氨蝶呤(Methotrexate)，丝裂霉素C(Mitomycin C)，米托蒽醌(Mitoxantrone)，泼尼松龙(Prednisolone)，泼尼松(Prednisone)，丙卡巴肼(Procarbazine)，雷洛昔芬(Raloxifen)，链唑霉素(Streptozocin)，他莫昔芬(Tamoxifen)，硫鸟嘌呤(Thioguanine)，托泊替康，长春碱，长春新碱，长春地辛。
与本发明的化合物联合用药的其他合适的细胞毒类药物包括，但并不限于，这些公认地应用于肿瘤性疾病治疗的化合物，如以下文献中所描述的：Goodman and Gilman′sThe Pharmacological Basis of Therapeutics(Ninth Edition,1996,McGraw-Hill.)；这些抗癌剂包括，但绝不限于，氨鲁米特(Aminoglutethimide)，L-门冬酰胺酶，硫唑嘌呤，5-氮杂胞苷，克拉屈滨(Cladribine)，白消安(Busulfan)，己烯雌酚，2′，2′-二氟去氧胞二磷胆碱，多西紫杉醇，赤羟基壬烷基腺嘌呤(Erythrohydroxynonyladenine)，乙炔雌二醇，5-氟尿嘧啶脱氧核苷，5-氟脱氧尿苷单磷酸，磷酸氟达拉滨(Fludarabine phosphate)，氟甲睾酮(Fluoxymesterone)，氟他胺(Flutamide)，己酸羟孕酮，伊达比星(Idarubicin)，干扰素，醋酸甲羟孕酮，醋酸甲地孕酮，美法仑(Melphalan)，米托坦(Mitotane)，紫杉醇，喷司他丁(Pentostatin)，N-磷酸乙酰基-L-天冬氨酸(PALA)，普卡霉素(Plicamycin)，甲基环己亚硝脲(Semustine)，替尼泊苷(Teniposide)，丙酸睾丸酮，塞替派(Thiotepa)，三甲基三聚氰胺，尿核苷和长春瑞滨。
其他合适的与本发明的化合物联合应用的细胞毒素类抗癌剂包括新发现的细胞毒素物质，其中包括，但并不限于，奥沙利铂(Oxaliplatin)，吉西他滨(Gemcitabine)，卡培他滨(Capecitabine)，大环内酯类抗肿瘤药及其天然或合成的衍生物，替莫唑胺(Temozolomide)，托西莫单抗(Bexxar)，Trabedectin，和驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂Eg5。
另外一些实施例是，本发明的化合物可以结合其他信号转导抑制剂。有趣的是信号转导抑制剂把EGFR家族作为目标，如EGFR，HER-2和HER-4和它们各自的配体。这样的试剂包括，但绝不限于，抗体疗法如赫赛汀(曲妥单抗)，西妥昔单抗(Erbitux)，和帕妥珠单抗(Pertuzumab)。这样的疗法也包括，但绝不限于，小分子激酶抑制剂如易瑞沙(Gefitinib)，它赛瓦(Erlotinib)，Tykerb(Lapatinib)，CANERTINIB(CI1033)，AEE788。
另外一些实施例是，本发明的化合物结合其他信号转导抑制剂靶向作用于分裂激酶领域家族的受体激酶(VEGFR,FGFR,PDGFR,flt-3,c-kit,c-fins,等等)，和它们各自的配体。这样的试剂包括，但并不限于，抗体如贝伐单抗(Avastin)。这样的试剂包括，但绝不限于，小分子抑制剂如Gleevec/Imanitib,Sprycel(Dasatinib),Tasigna/Nilotinib,Nexavar(Vandetanib),Vatalanib(PTK787/ZK222584),Telatinib/BAY-57-9352,BMS-690514,BMS-540215,Axitinib/AG-013736,ZD-6474,KRN-951,CP-547,632,CP-673,451,CHIR-258,MLN-518。
另外一些实施例是，本发明的化合物可以结合组蛋白脱乙酰基酶抑制剂。这样的试剂包括，但绝不限于，辛二酰苯胺氧肟酸(SAHA)，LAQ-824,LBH-589,MS-275,FR-901228和MGCDOI03。
另外一些实施例是，本发明的化合物可以结合其他抗癌剂如蛋白酶体抑制剂和m-TOR抑制剂。这些包括，但绝不限于，硼替佐米和CCI-779。本发明的化合物还可以结合其他抗癌剂如拓扑异构酶抑制剂，包括但绝不限于喜树碱。
那些附加治疗剂可以与包含本发明的化合物的组合物分开给药，作为多给药方案的一部分。或者，那些治疗剂可以是单剂型的一部分，与本发明的化合物混合在一起形成单个组合物。如果给药作为多给药方案的一部分，两个活性剂可以同时连续地或在一段时间内互相传递，从而得到目标试剂活性。
实施例
下面结合具体实施例，作进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。
通常，在制备流程中，各反应通常在惰性溶剂中，在室温至回流温度(如0℃～100℃，优选0℃～80℃)下进行。反应时间通常为0.1-60小时，优选地为0.5-24小时。
本文所用的缩写具有以下含义：
Figure BDA0002066152100000231
Figure BDA0002066152100000241
实施例1 4-(对甲苯磺酰氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯-3,3,5,5-d4(中间体A-1)的制 备。
Figure BDA0002066152100000242
采用以下路线进行合成：
Figure BDA0002066152100000243
步骤1 化合物2的合成
将TBU加入到化合物1(10g,50.2mmol)的氘代氯仿(100mL)，反应液在室温下搅拌24hrs。反应液用1M的稀盐酸中和，再用二氯甲烷萃取，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液得到10.02g黄色固体，直接用于下一步。
步骤2 化合物3的合成
冰浴下，将硼氢化钠(200mg)分批加入到化合物2(2.0g)的无水甲醇(10mL)中，升至室温下反应4hrs。加入饱和的氯化铵溶液淬灭反应，减压除去甲醇。用乙酸乙酯(50mL x3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩滤液得到2.5g油状物直接用于下一步反应。
步骤3 中间体A-1的合成
在冰浴下，将TsCl加入到化合物3，DMAP(50mg)和TEA(2.60mL)的无水二氯甲烷(30mL)溶液中，升至温室下反应过夜。反应液用饱和的食盐水(20mL)，饱和碳酸钠溶液(10mL)和水(20mL)萃取洗涤，有机层再用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩，浓缩液柱层析纯化(石油醚/甲乙酸乙酯＝10％)得到3g白色固体，收率：83.2％。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.81(d,J＝8.0Hz,2H),7.36(d,J＝8.1Hz,2H),4.67(s,1H),3.60(d,J＝13.7Hz,2H),3.25(d,J＝13.7Hz,2H),1.45(s,9H).
实施例2 4-(对甲苯磺酰氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯-4-d(中间体A-2)的制备。
Figure BDA0002066152100000251
采用以下路线进行合成：
Figure BDA0002066152100000252
步骤1 化合物4的合成
冰浴下，将氘代硼氢化钠(300mg)分批加入到化合物1(2.0g)的氘代甲醇(15mL)中，升至室温下反应4hrs。加入饱和的氯化铵溶液淬灭反应，减压除去氘代甲醇。用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩滤液得到油状物直接用于下一步反应。
步骤2 中间体化合物A-2的合成
在冰浴下，将TsCl加入到上述化合物4，DMAP(75mg)和TEA(3.75mL)的无水二氯甲烷(45mL)溶液中，升至温室反应过夜。反应液用饱和的食盐水(20mL)，饱和碳酸钠溶液(10mL)和水(20mL)萃取洗涤，有机层再用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩，浓缩液柱层析纯化(石油醚/甲乙酸乙酯＝10％)得到2.29g白色固体，收率：83.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(d,J＝8.3Hz,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),3.64-3.52(m,2H),3.31-3.19(m,2H),2.46(s,3H),1.82-1.73(m,2H),1.72-1.63(m,2H),1.44(s,9H).
实施例3 4-(对甲苯磺酰氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯-3,3,4,5,5-d5(中间体A-3)的 制备。
Figure BDA0002066152100000261
采用以下路线进行合成：
Figure BDA0002066152100000262
步骤1 化合物5的合成
冰浴下，将氘代硼氢化钠(300mg)分批加入到化合物2(3.0g)的氘代甲醇(15mL)中，升至室温反应4hrs。加入饱和的氯化铵溶液淬灭反应，减压除去甲醇。用乙酸乙酯(50mLx 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩滤液得到3.1g油状物直接用于下一步反应。
步骤2 中间体A-3的合成
在冰浴下，将TsCl(3.52g)加入到上述化合物5(3.1g)，DMAP(62mg)和TEA(3.23mL)的无水二氯甲烷(40mL)溶液中，升至温室反应过夜。反应液用饱和的食盐水(20mL)，饱和碳酸钠溶液(10mL)和水(20mL)萃取洗涤，有机层再用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩，浓缩液柱层析纯化(石油醚/甲乙酸乙酯＝10％)得到2.8g白色固体，两步收率：51.85％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.79(d,J＝8.3Hz,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),3.58(M,2H),3.24(M,2H),2.45(s,3H),1.43(s,9H).
实施例4 4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-醇(中间体B-1)的 制备。
Figure BDA0002066152100000271
采用以下路线进行合成：
Figure BDA0002066152100000272
步骤1 化合物7的合成
在75℃下，将三氯氧磷(5mL)在20min内滴加到化合物6(5g)和DIPEA(4.13ml)的甲苯(45ml)溶液中，滴加完毕后，反应液在当前温度下搅拌3hrs。反应完毕后直接投入下一步。
步骤2 化合物8的合成
将3,4-二氯-2-氟苯胺(3.84g)的甲苯(25mL)溶液缓慢滴加到上一步反应液中，滴加完毕后，反应继续搅拌2hrs。冷却至室温，固体过滤，用甲苯(30mL)洗涤，固体再用异丙醇(100mL)搅拌打浆2hrs。固体过滤，用异丙醇(30mL)洗涤固体。固体真空下干燥得到6.8g，收率：80.40％。LC-MS(APCI):m/z＝397.2(M+1)+。
步骤3 中间体化合物B-1的合成
在10℃下将氨水(4.6mL)加入到化合物8(1g)的甲醇(10mL)中，室温下搅拌3hrs。固体过滤，用H2O(20mL)和甲醇(20mL)的混合液洗涤固体。真空下50℃下干燥过夜到得到灰白色固体(790mg)，收率：88.38％。LC-MS(APCI):m/z＝354.1(M+1)+。
实施例5 1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基) 哌啶-1-基-3,3,5,5-d4)丙-2-烯-1-酮(化合物I-1)的制备。
Figure BDA0002066152100000273
采用以下路线进行合成：
Figure BDA0002066152100000281
步骤1 化合物9的合成
将碳酸钾(830mg)加入到中间体化合物B-1(706mg)和中间体化合物A-1(1.43g)的DMF(7mL)溶液中，氮气保护下，反应液在70℃下反应过夜。反应液冷却至室温，加水(20mL)稀释反应液，用乙酸乙酯萃取(50mL x 3)，合并有机层，用饱和食盐水(30mL x 3)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝2％)得到1.00g黄白色固体，产率：92.65％。LC-MS(APCI):m/z＝541.1M+1)+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.64(s,1H),8.39(s,1H),7.85(s,1H),7.63–7.54(m,2H),7.24(s,1H),4.69(s,J＝3.4Hz,1H),3.95(s,3H),3.77–3.58(m,J＝13.4Hz,2H),3.30–3.16(m,2H),1.41(s,9H).
步骤2 化合物10的合成
将浓盐酸(1.6mL)缓慢加入到化合物9(1.0g)的丙酮(10ml)溶液中，反应液在室温下搅拌反应5hrs。固体过滤，用丙酮(2mL)洗涤固体。固体在真空下30℃下干燥过夜得到白色固体(620mg)，收率：65.28％。LC-MS(APCI):m/z＝441.1M+1)+。
步骤3 化合物I-1的合成
在-20℃下，将丙烯酰氯(0.47mL,0.618mmol/mL)缓慢滴加到化合物10(150mg)和TEA(0.75mL)的无水二氯甲烷(30mL)溶液中，滴加完毕后，在-20℃继续搅拌1hrs。加水(20mL)稀释反应液，用二氯甲烷萃取(30mL x 3)，合并有机层，用饱和食盐水(30mL x 1)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，浓缩液柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝5％)得到110mg白色固体，产率：74.74％。纯度：99.14％(HPLC)；LC-MS(APCI):m/z＝495.2(M+1)+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.65(s,1H),8.38(s,1H),7.86(s,1H),7.70–7.50(m,2H),7.23(s,1H),6.83(dd,J＝16.6,10.5Hz,1H),6.10(dd,J＝16.6,1.8Hz,1H),5.67(dd,J＝10.4,1.8Hz,1H),4.75(s,1H),3.93(s,3H),3.90–3.79(m,2H),3.53–3.41(m,2H).
实施例6 1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基) 哌啶-1-基-4-d)丙-2-烯-1-酮(化合物I-2)的制备。
Figure BDA0002066152100000291
根据实施例5中所述的合成方法，用中间体化合物A-2替代步骤1中的中间体化合物A-1来进行制备，得到90mg的白色固体化合物I-2，产率为58.41％，纯度为98.41％(HPLC)，LC-MS(APCI):m/z＝492.2(M+1)+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.66(s,1H),8.38(s,1H),7.87(s,1H),7.69–7.48(m,2H),7.23(s,1H),6.83(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.10(dd,J＝16.7,2.2Hz,1H),5.67(dd,J＝10.4,2.2Hz,1H),3.93(s,3H),3.91–3.77(m,2H),3.58–3.41(m,2H),2.11–1.95(m,2H),1.77–1.59(m,2H).
实施例7 1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基) 哌啶-1-基-3,3,4,5,5-d5)丙-2-烯-1-酮(化合物I-3)的制备。
Figure BDA0002066152100000292
根据实施例5中所述的合成方法，用中间体化合物A-3替代步骤1中的中间体化合物A-1来进行制备，得到62mg的白色固体化合物I-3，产率为36.78％，纯度为99.01％(HPLC)，LC-MS(APCI):m/z＝496.2(M+1)+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.65(s,1H),8.38(s,1H),7.86(s,1H),7.68–7.46(m,2H),7.23(s,1H),6.83(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.10(dd,J＝16.7,2.4Hz,1H),5.67(dd,J＝10.5,2.4Hz,1H),3.93(s,3H),3.90–3.79(m,2H),3.53–3.40(m,2H).
实施例8 4-((3,4-二氯-2-氟苯基-6-d)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-醇(中间体B- 2)的制备
Figure BDA0002066152100000301
采用以下路线进行合成：
Figure BDA0002066152100000302
步骤1 化合物11的合成
将DCl(0.84mL,12M,)加入到3,4-二氯-2-氟苯胺(1.8g)的D2O(25mL)溶液中，反应在微波下180℃下搅拌反应60min。冷却至室温，用饱和的碳酸氢钠溶液调pH为碱性，二氯甲烷(50mL x 3)，有机层用饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到棕色固体1.8g。LC-MS(APCI):m/z＝181.1(M+1)+ 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.11(d,J＝1.7Hz,1H),5.61(s,2H).
步骤2 中间体B-2的合成
根据实施例4中所述的合成方法，用化合物11替代步骤2中的3,4-二氯-2-氟苯胺来进行制备。LC-MS(APCI):m/z＝355.1(M+1)+，1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.77(s,1H),9.56(s,1H),8.36(s,1H),7.65(s,1H),7.56(d,J＝1.3Hz,1H),7.23(s,1H),3.98(s,3H).
实施例9 1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基-6-d)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧 基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(化合物I-4)的制备
Figure BDA0002066152100000303
根据实施例5中所述的合成方法，用中间体化合物B-2替代步骤1中的中间体化合物B-1，用N-Boc-4-(4-甲苯磺酰氧基)哌啶替代A-1来进行制备，得到130mg的白色固体化合物I-4，产率为51.92％，纯度为99.15％(HPLC)，LC-MS(APCI):m/z＝496.2(M+1)+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.67(s,1H),8.40(s,1H),7.89(s,1H),7.58(s,1H),7.25(s,1H),6.85(dd,J＝16.7,10.4Hz,1H),6.12(dd,J＝16.7,1.8Hz,1H),5.69(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),4.86–4.69(m,1H),3.95(s,3H),3.93–3.82(m,2H),3.56–3.43(m,2H),2.13–1.93(m,2H),1.81–1.61(m,2H).
实施例10 1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基-6-d)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基) 氧基)哌啶-1-基-4-d)丙-2-烯-1-酮(化合物I-5)的制备
Figure BDA0002066152100000311
根据实施例5中所述的合成方法，用中间体化合物B-2替代步骤1中的中间体化合物B-1，用A-2替代A-1来进行制备，得到150mg的白色固体化合物I-5，产率为51.91％，纯度为98.72％(HPLC)，LC-MS(APCI):m/z＝496.2(M+1)+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ9.66(s,1H),8.40(s,1H),7.89(s,1H),7.58(s,1H),7.25(s,1H),6.85(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.12(dd,J＝16.7,1.9Hz,1H),5.69(dd,J＝10.5,1.9Hz,1H),3.95(s,3H),3.93–3.81(m,2H),3.59–3.42(m,2H),2.12–1.94(m,2H),1.81–1.59(m,2H).
实施例11 4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-(甲氧基-d3)喹唑啉-6-醇(中间体 B-3)的制备
Figure BDA0002066152100000312
采用以下路线进行合成：
Figure BDA0002066152100000321
步骤1 化合物14的合成
室温下将三苯基磷(26g)和CD3OD(7.8mL)分别加入到3,4-二甲氧基苯甲酸甲酯(化合物13，15g)的无水四氢呋喃(90mL)溶液中。氮气保护下，室温搅拌，然后将偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD，20mL)缓慢滴加到上述反应体系中，反应在室温下搅拌反应3hrs。减压除去THF，加水稀释，用乙酸乙酯(150mL x 3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，浓缩液加入到石油醚(400mL)中，打浆搅拌过夜，固体过滤，用石油醚洗涤，滤液减压浓缩得到白色固体17.8g。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.69(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.55(d,J＝2.0Hz,1H),6.89(d,J＝8.4Hz,0H),3.94(s,3H),3.90(s,3H).
步骤2 化合物15的合成
冰浴下将硝酸(20mL,70％)缓慢滴加到化合物14(17.8g)的乙酸(60mL)溶液中，反应在室温下搅拌过夜。将反应液加入到冰水(120mL)中，搅拌30min。固体过夜，用冰水洗涤，固体在65℃下真空干燥得到黄色固体17.8g，两步收率：88.52％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.47(s,1H),7.10(s,1H),4.00(s,3H),3.93(s,3H).
步骤3 化合物16的合成
将10％Pd/C(1.2g)加入到化合物15(5.5g)的甲醇(100mL)溶液中，反应在氢气下反应3hrs。硅藻土过滤，滤液减压浓缩，浓缩液柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝25％)得到4.4黄色固体，1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ7.13(s,1H),6.45(s,2H),6.36(s,1H),3.75(s,3H),3.64(s,3H).
步骤4 化合物17的合成
化合物16(2.6g，12.14mmol)的甲酰胺(26mL)的溶液在回流下搅拌反应12hrs。冷却至室温，加水稀释，固体过滤，固体在65℃下真空干燥。LC-MS(APCI):m/z＝210.2(M+1)+:1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.08(s,1H),7.99(s,1H),7.44(s,1H),7.13(s,1H),3.87(s,3H).
步骤5 化合物18的合成
将化合物17(2.3g)和L-Methionine(1.80g)加入到甲基磺酸(60mL)中，反应在回流下搅拌反应4hrs。冷却至室温，往体系中加入碎冰，缓慢用NaOH(40％)水溶液调pH为7。固体过滤，用甲醇重结晶，滤液减压浓缩得到白色固体1.7g。LC-MS(APCI):m/z＝196.1(M+1)+。
步骤6 化合物19的合成
室温下将催化量的DMAP加入到化合物18(1.70g，8.71mmol)和吡啶(1.70mL)的醋酸酐(12mL)中，体系升温至100℃，氮气保护下反应6hrs。冷却至室温，往体系中加入碎冰。固体过滤，用冷水洗涤，固体在65℃下真空干燥得到黄色固体1.20g，收率：58.08％。LC-MS(APCI):m/z＝238.0(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.19(s,1H),8.07(s,1H),7.74(s,1H),7.27(s,1H),3.91(s,3H),2.29(s,3H).
步骤7 化合物20的合成
在75℃下，将三氯氧磷(1.08mL)在20min内滴加到化合物19(1.1g)和DIPEA(4.130.95mL)的甲苯(10ml)溶液中，滴加完毕后，反应液在当前温度下搅拌3hrs。反应完毕后直接投入下一步。
将3,4-二氯-2-氟苯胺(960mg)的甲苯(5mL)缓慢滴加到上述反应液中，滴加完毕后，反应继续搅拌2hrs。反应冷却至室温，固体过滤，用甲苯(6mL)洗涤，固体再用异丙醇(20mL)搅拌打浆2hrs。固体过滤，用异丙醇(5mL)洗涤固体。固体真空下干燥。LC-MS(APCI):m/z＝399.2(M+1)+。
步骤8中间体化合物B-3的合成
在10℃下将氨水(4.5mL)加入到上述所得化合物20的甲醇(9mL)中，反应在室温下搅拌3hrs。固体过滤，用H2O(5mL)和甲醇(5mL)的混合液洗涤固体。真空下50℃下干燥过夜到得到灰白色固体(620mg)，三步收率：36.3％。LC-MS(APCI):m/z＝357.1(M+1)+。
实施例12 1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-(甲氧基-d3)喹唑啉-6-基) 氧基)哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮(化合物I-6)的制备。
Figure BDA0002066152100000341
根据实施例5中所述的合成方法，用中间体化合物B-3替代步骤1中的中间体化合物B-1，用4-(甲苯-4-磺酰氧)哌啶-1-羧酸叔丁酯来替代步骤1中的中间体化合物A-1进行制备，得到135mg的白色固体化合物I-6，产率为64.30％，纯度为96.41％(HPLC)，LC-MS(APCI):m/z＝494.2(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ9.64(s,1H),8.39(s,1H),7.88(s,1H),7.65–7.54(m,2H),7.24(s,1H),6.84(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.11(dd,J＝16.7,2.4Hz,1H),5.68(dd,J＝10.5,2.4Hz,1H),4.87–4.69(m,1H),3.93–3.80(m,2H),3.55–3.40(m,J＝31.1Hz,2H),2.09–1.97(m,2H),1.75–1.64(m,2H)。
实施例13 1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-(甲氧基-d3)喹唑啉-6-基) 氧基)哌啶-1-基-4-d)丙-2-烯-1-酮(化合物I-7)的制备。
Figure BDA0002066152100000342
根据实施例5中所述的合成方法，用中间体化合物B-3替代步骤1中的中间体化合物B-1，中间体化合物A-2来替代步骤1中的中间体化合物A-1进行制备，得到60mg白色固体，产率为48.89％，纯度为98.69％(HPLC)，LC-MS(APCI):m/z＝495.2(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ9.63(s,1H),8.39(s,1H),7.88(s,1H),7.68–7.54(m,2H),7.24(s,1H),6.84(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.11(dd,J＝16.7,2.4Hz,1H),5.68(dd,J＝10.5,2.4Hz,1H),3.96–3.79(m,2H),3.57–3.39(m,2H),2.12–1.92(m,2H),1.78–1.59(m,2H).
实施例14 1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-(甲氧基-d3)喹唑啉-6-基) 氧基)哌啶-1-基-3,3,4,5,5-d5)丙-2-烯-1-酮(化合物I-8)的制备。
Figure BDA0002066152100000351
根据实施例5中所述的合成方法，用中间体化合物B-3替代步骤1中的中间体化合物B-1，中间体化合物A-3来替代步骤1中的中间体化合物A-1进行制备，得到72mg白色固体化合物I-8，产率为42.81％，纯度为99.51％(HPLC)。LC-MS(APCI):m/z＝499.2(M+1)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.63(s,1H),8.39(s,1H),7.87(s,1H),7.66–7.50(m,2H),7.23(s,1H),6.84(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.11(dd,J＝16.7,2.2Hz,1H),5.68(dd,J＝10.4,2.2Hz,1H),3.96–3.76(m,2H),3.60–3.39(m,2H).
实施例15 1-(4-((4-((3,4-二氯-2-氟苯基)氨基)-7-(甲氧基-d3)喹唑啉-6-基) 氧基)哌啶-1-基-3,3,5,5-d4)丙-2-烯-1-酮(化合物I-9)的制备。
Figure BDA0002066152100000352
根据实施例5中所述的合成方法，用中间体化合物B-3替代步骤1中的中间体化合物B-1进行制备，得到50mg白色固体化合物I-9，产率为34.29％，纯度为99.07％(HPLC)。LC-MS(APCI):m/z＝498.2(M+1)+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.67(s,1H),8.40(s,1H),7.89(s,1H),7.73–7.52(m,2H),7.25(s,1H),6.86(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.12(dd,J＝16.7,2.2Hz,1H),5.69(dd,J＝10.5,2.1Hz,1H),4.77(s,1H),3.98–3.81(m,2H),3.56–3.42(m,2H).
生物活性测试。
(1)激酶抑制作用
使用ADP-GloTM Kinase Assay kit(Promega，V9102)试剂盒，测定待测物对EGFR(D770_N771insNPG)(Signalchem，E-10-132GG)和HER2(A775_G776insYVMA)(Signalchem，E27-13BG)的抑制活性。
用DMSO(MP，196055)分别将化合物按3倍浓度梯度稀释，各12个剂量。化合物的起始浓度为0.1mM。384孔板(Perkin Elmer，6007290)每孔加入100nl化合物稀释液与5μLEGFR(D770_N771insNPG)或HER2(A775_G776insYVMA)，双复孔。25℃孵育15分钟后，加入5μL底物启动反应，25℃孵育60分钟。体系中最终反应浓度为：0.5nM EGFR或10nM HER2,10μMATP,0.03mg/mL Poly(4:1 Glu,Tyr)Peptide,HEPES 50mM,EGTA 1mM,MgCl2 10mM,Brij350.01％。待测化合物浓度:1,0.33,0.11,0.037,0.0123,0.004,0.0014,0.00047,0.00015,0.00005,0.000017,0nM。然后加入10μL ADP Glo reagent，25℃继续孵育40分钟。再加入20μL检测试剂，25℃孵育40分钟后，通过Envision酶标仪(Perkin Elmer 2104)检测，测定在各浓度化合物存在下的酶活力，并计算不同浓度的化合物对酶活力的抑制活性。之后根据四参数方程，根据Graphpad 5.0软件对不同浓度化合物下酶活力的抑制活性进行拟合，计算出IC50值。
在上述激酶抑制实验中测试了本发明化合物，发现与非氘代的母型化合物Pozoitinib相比，本发明化合物对EGFR D770_N771insNPG和HER2 A775_G776insYVMA激酶具有相当甚者更强的抑制作用，表明本发明化合物对EGFR和HER2的外显子20插入突变具有更强效的活性。代表性的实施例化合物的结果归纳于下表1中。
表1：
Figure BDA0002066152100000361
Figure BDA0002066152100000371
(2)细胞毒性测试
取肺癌细胞NCI-H1975(购自美国标准生物品收藏中心(ATCC))、Ba/F3EGFR-D770_N771insSVD及Ba/F3 ERBB2-A775_G776insYVMA对数生长期细胞，用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。将细胞接种到96孔板中，37℃、5％CO2培养过夜。配制10倍药物溶液，最高浓度为10μM，9个浓度，3倍稀释。96孔板中每孔加入10μL药物溶液，三个复孔，继续培养72小时。每孔加入等体积的CTG溶液，定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解，室温放置20分钟稳定冷光信号后，在SpectraMax多标记微孔板检测仪(MD，2104-0010A)上读取冷光值。使用GraphPad Prism 5.0软件分析数据，利用非线性S曲线回归来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
在上述激酶抑制实验中测试了本发明化合物，发现与非氘代的母型化合物Pozoitinib相比，本发明化合物对NCI-H1975、Ba/F3 EGFR-D770_N771insSVD和Ba/F3ERBB2-A775_G776insYVMA具有更强的抑制作用，表明本发明化合物对EGFR T790M突变、EGFR和HER2的外显子20插入突变具有强效的活性。代表性的实施例化合物的结果归纳于下表2中。
表2
Figure BDA0002066152100000372
(3)代谢稳定性评价
微粒体实验：人肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；大鼠肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；小鼠肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；辅酶(NADPH/NADH)：1mM，Sigma LifeScience；氯化镁：5mM，100mM磷酸盐缓冲剂(pH为7.4)。
储备液的配制：精密称取一定量的实施例化合物和对照品化合物的粉末，并用DMSO分别溶解至5mM。
磷酸盐缓冲液(100mM，pH7.4)的配制：取预先配好的150mL的0.5M磷酸二氢钾和700mL的0.5M磷酸氢二钾溶液混合，再用0.5M磷酸氢二钾溶液调节混合液pH值至7.4，使用前用超纯水稀释5倍，加入氯化镁，得到磷酸盐缓冲液(100mM)，其中含100mM磷酸钾，3.3mM氯化镁，pH为7.4。
配制NADPH再生系统溶液(含有6.5mM NADP，16.5mM G-6-P，3U/mL G-6-P D，3.3mM氯化镁)，使用前置于湿冰上。
配制终止液：含有50ng/mL盐酸普萘洛尔和200ng/mL甲苯磺丁脲(内标)的乙腈溶液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL人肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL SD大鼠肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL小鼠肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。
样品的孵育：用含70％乙腈的水溶液将相应化合物的储备液分别稀释至0.25mM，作为工作液，备用。分别取398μL的人肝微粒体或者大鼠肝微粒体或者小鼠肝微粒体稀释液加入96孔孵育板中(N＝2)，分别加入2μL 0.25mM的的工作液中，混匀。
代谢稳定性的测定：在96孔深孔板的每孔中加入300μL预冷的终止液，并置于冰上，作为终止板。将96孔孵育板和NADPH再生系统置于37℃水浴箱中，100转/分钟震荡，预孵5min。从孵育板每孔取出80μL孵育液加入终止板，混匀，补充20μL NADPH再生系统溶液，作为0min样品。再向孵育板每孔加入80μL的NADPH再生系统溶液，启动反应，开始计时。相应化合物的反应浓度为1μM，蛋白浓度为0.5mg/mL。分别于反应10、30、90min时，各取100μL反应液，加入终止板中，涡旋3min终止反应。将终止板于5000×g，4℃条件下离心10min。取100μL上清液至预先加入100μL蒸馏水的96孔板中，混匀，采用LC-MS/MS进行样品分析。
数据分析：通过LC-MS/MS系统检测相应化合物及内标的峰面积，计算化合物与内标峰面积比值。通过化合物剩余量的百分率的自然对数与时间作图测得斜率，并根据以下公式计算t1/2和CLint，其中V/M即等于1/蛋白浓度。
Figure BDA0002066152100000391
对本发明化合物及其没有氘代的化合物同时测验比较，评价其在人和大鼠肝微粒体的代谢稳定性。采用未经氘代的化合物Poziotinib作为对照品。在人、大鼠和小鼠肝微粒体实验中，通过与未经氘代的化合物Poziotinib对照，本发明化合物可以明显改善代谢稳定性。代表性实施例化合物的结果归纳于下表3中。
表3：
Figure BDA0002066152100000392
(4)大鼠药代动力学实验
6只雄性Sprague-Dawley大鼠，7-8周龄，体重约210g，分成2组，每组3只，经静脉或口服单个剂量的化合物(口服10mg/kg)，比较其药代动力学差异。
大鼠采用标准饲料饲养，给予水。试验前16小时开始禁食。药物用PEG400和二甲亚砜溶解。眼眶采血，采血的时间点为给药后0.083小时，0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时和24小时。
大鼠吸入乙醚后短暂麻醉，眼眶采集300μL血样于试管。试管内有30μL 1％肝素盐溶液。使用前，试管于60℃烘干过夜。在最后一个时间点血样采集完成之后，大鼠乙醚麻醉后处死。
血样采集后，立即温和地颠倒试管至少5次，保证混合充分后放置于冰上。血样在4℃5000rpm离心5分钟，将血浆与红细胞分离。用移液器吸出100μL血浆到干净的塑料离心管中，标明化合物的名称和时间点。血浆在进行分析前保存在-80℃。用LC-MS/MS测定血浆中本发明化合物的浓度。药代动力学参数基于每只动物在不同时间点的血药浓度进计算。
实验表明，本发明化合物在动物体内具有更好的药代动力学性质，因此具有更好的药效学和治疗效果。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (11)

1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002647955540000011
其中，
Y1、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8、R6、R7、R8和R9为氢；
Y2为氢；
R1、R2、R3、R4和R5各自独立地选自氢或氘；
X选自CD3。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R2、R3、R4、R5是氘。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R1是氘。
4.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R1是氘。
5.化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物可选自：
Figure FDA0002647955540000012
Figure FDA0002647955540000021
6.一种药物组合物，其含有药学上可接受的赋形剂和权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其还包含其它治疗药物，其中所述其它治疗药物选自细胞信号转导抑制剂、有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢药、抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗激素药。
8.权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求6或7的药物组合物在制备用于治疗和/或预防ErbB家族酪氨酸激酶介导的疾病的药物中的用途。
9.根据权利要求8的用途，其中所述的ErbB家族酪氨酸激酶选自EGFR、Her2、Her3或Her4激酶的野生型和突变体中的一个或多个激酶。
10.根据权利要求9的用途，其中，所述的EGFR和Her2突变体选自Ex20Ins突变。
11.根据权利要求8的用途，其中所述的疾病是转移癌、表皮癌、结肠癌、胃腺癌、膀胱癌、乳癌、肾癌、肝癌、肺癌、甲状腺癌、脑瘤、颈癌、前列腺癌、胰腺癌、中枢神经系统的癌症、恶性胶质瘤、骨髓增生病、动脉粥样硬化或肺纤维化。
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