CN110054577B - 一类含脲和硫脲结构的化合物、合成方法及其应用 - Google Patents

一类含脲和硫脲结构的化合物、合成方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一类具有式I结构的脲和硫脲结构的有机小分子化合物与合成方法及其应用。体外抗肿瘤活性试验证明具有较好的抗肿瘤生物活性，是潜在的抗肿瘤小分子药物。本发明产物可以作为模板有机小分子合成多样性小分子化合物库。此类化合物合成步骤包括：第一步，苯肼的合成；第二步，异氰酸酯、异硫氰酸酯的合成；第三步，第一步和第二步产物反应合成脲或硫脲。

Description

一类含脲和硫脲结构的化合物、合成方法及其应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体设计涉及有机小分子化合物合成，尤其涉及一种新型的具有脲和硫脲结构的有机小分子化合物与合成方法及其应用。
背景技术
恶性肿瘤是目前人类疾病中最难治愈的可致死性疾病之一，也是发病率最高的疾病之一，而且发病率逐年增加，给人类社会和家庭带来了沉重的经济负担和健康压力。
Ras蛋白突变是肿瘤发生发展过程中最常见的分子机制之一，迄今为止，人类癌症中大概30％与Ras基因突变有关，且多数发生在胰腺癌、结肠癌和肺癌细胞，因此Ras基因突变所导致的恶性肿瘤已成为最难救治癌症。基于Ras蛋白的重要作用，其成为靶向治疗Ras突变所致恶性肿瘤的最佳靶点。但Ras蛋白是一种较小的球蛋白，蛋白表面多平坦而缺乏有效的小分子配体结合腔，目前为止，仍没有临床可用的靶向Ras蛋白的抗肿瘤药物，大多认为该蛋白“无药可成”。
随着近些年来结构生物学和药物化学的不断发展，在此类研究中也取得了新的突破，特别是关于R-as蛋白结构的解析。
本发明通过基于受体蛋白结构的药物分子设计方法设计出系列具有潜在活性的药物分子结构，并且优化出一条简单有效的合成路线，通过CCK-8法证明该系列化合物具较好的抗肿瘤活性，是潜在的抗肿瘤活性小分子药物。
发明内容
本发明基于靶点结构的药物分子设计方法设计合成了系列小分子化合物，旨在为恶性肿瘤靶向治疗提供有效的潜在小分子化合物。
本发明化合物结构通式：
Figure BDA0002048382680000011
其中，n＝0、1；X为O、S；R1选自：C1-C8烷基、芳香基、取代芳香基、奎宁
基、异奎宁基、吲哚基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、呋喃基、四氢
吡喃基；R2选自：芳香基。
优选：
其中，n＝0、1；X为O、S；R1选自：C1-C6烷基、苯基、取代苯基、奎宁基、萘基、异奎宁基、吲哚基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、呋喃基、四氢吡喃基；R2选自：苯基、取代苯基。
进一步优选：
其中，n＝0、1；X为O、S；R1选自：苯基、(2-甲基)苯基、(3-甲基)苯基、 (4-甲基)苯基、2-氯代苯基、3-氯代苯基、4-氯代苯基、(2,3-二甲基)苯基、 (2,4-二甲基)苯基、(3,5-二甲基)苯基、(2-三氟甲基)苯基、(3-三氟甲基) 苯基、(4-三氟甲基)苯基、1-萘基、(3,5-二甲基)苯基、2-萘基、2-奎宁基、3- 奎宁基、4-奎宁基、5-奎宁基、6-奎宁基、7-奎宁基、8-奎宁基、1-异奎宁基、3- 异奎宁基、4-异奎宁基、5-异奎宁基、6-异奎宁基、7-异奎宁基、8-异奎宁基、 2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基、7-吲哚基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、4-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、2-吡啶基、3-吡啶基、4- 吡啶基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-四氢吡喃基、3-四氢吡喃基、4-四氢吡喃基、(4- 叔丁基)苯基、(4-羟基)苯基、环丙基、(2-甲基)环丙基或(4-环丙基)苯基；
R2选自：苯基、(2,6-二硝基-4三氟甲基)苯基、(2,4,6-三硝基)苯基、(2,4,6- 三三氟甲基)苯基、(2-硝基-4-三氟甲基)苯基、(2-三氟甲基)苯基、(3-三氟甲基)苯基、(4-三氟甲基)苯基、(2,4-二硝基)苯基、(2,4-三氟甲基)苯基、 (4-氰基)苯基、(3-硝基)苯基、(3-三氟甲基)苯基、(3-氰基)苯基、金刚烷基、(4-苯基)苯基、(4-苯氧基)苯基、2-氟代苯基、3-氟代苯基、4-氟代苯基、 2-氯代苯基、3-氯代苯基、4-氯代苯基、2-溴代苯基、3-溴代苯基、4-溴代苯基、 2-碘代苯基、3-碘代苯基、4-碘代苯基、(4-叔丁基)苯基、(4-甲氧苯基)苯基、 (4-烯丙基)苯基或(4-炔基)苯基。
更进一步，优选自以下具体化合物：
Figure BDA0002048382680000031
合成路线：
通式I化合物，包含如下4种骨架的系列衍生物：
Figure BDA0002048382680000032
(一)骨架1化合物合成方法：
Figure BDA0002048382680000041
其中，R1、R2的定义如本申请发明内容——化合物通式结构部分所述。
(二)骨架2化合物的合成方法：
Figure BDA0002048382680000042
其中，R1、R2的定义如本申请发明内容——化合物通式结构部分所述。
(三)骨架3化合物的合成方法：
Figure BDA0002048382680000043
其中，R1、R2的定义如本申请发明内容——化合物通式结构部分所述。
(四)骨架4化合物的合成方法：
Figure BDA0002048382680000044
其中，R1、R2的定义如本申请发明内容——化合物通式结构部分所述。
相关专业名词缩写解释：
二硫化碳(CS2)、三乙胺(TEA)、二碳酸二叔丁基酯(Boc2O)、一水合肼(NH2NH2·H2O)、三光气(BTC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)。
附图说明
图1：化合物T05与蛋白分子对接效果图；
图2：化合物T15与蛋白分子对接效果图；
图3：化合物T18与蛋白分子对接效果图；
图4：化合物T03的1H-NMR谱；
图5：化合物T05的1H-NMR谱；
图6：化合物T07的1H-NMR谱；
图7：化合物T11的1H-NMR谱；
图8：化合物T12的1H-NMR谱；
图9：化合物T15的1H-NMR谱；
图10：化合物T18的1H-NMR谱。
具体实施方式
实施例1骨架1化合物的合成
氮气保护下取化合物A溶解于四氢呋喃(THF)中，磁力搅拌下依次加入二硫化碳(CS2)和三乙胺(TEA)，室温下继续搅拌1-2小时，薄层板(TLC) 检测，化合物A基本消耗完。然后将反应混合液至于冰浴下搅拌5分钟，随即加入催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，再滴加二碳酸二叔丁基酯(Boc2O)，冰浴下继续搅拌5分钟，然后恢复室搅拌1-2小时，反应完毕，将反应溶剂等减压旋干，得到产物B，并未做进一步纯化处理，化合物B粗产率约为85％(化合物A、CS2、三乙胺、Boc2O和DMAP摩尔比为1:10:1.05:1:0.01)。
氮气保护下去化合物C溶解于无水甲醇(MeOH)中，磁力搅拌下少量多次加入甲醇钠(MeONa)，继续在室温下搅拌1-2小时，混合液很快变为黄色，然后逐渐变为红色，薄层板(TLC)检测化合物消耗完毕，此时反应结束，反应液用二氯甲烷萃取、蒸馏水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，即得化合物D(化合物C和MeONa的摩尔比为1:1)，产率约为95％。氮气保护下取化合物D溶解于无水乙醇(EtOH)，室温搅拌下滴加入一水合肼(NH2NH2·H2O)，室温下继续搅拌5-6小时，反应液逐渐变为墨蓝色，待化合物D消耗完，反应结束，将反应混合液减压旋干，这层析分离(洗脱液石油醚与乙酸乙酯比例为1:4)，即得化合物E(化合物D与NH2NH2·H2O摩尔比为1:1.2)。
氮气保护下取化合物E溶解于无水乙腈中，室温搅拌下加入三乙胺(TEA)，再缓慢加入化合物B，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，待化合物B消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物F，即骨架1化合物(化合物B、三乙胺与化合物E摩尔比为1:1.1:1.1)。
实施例2骨架2化合物的合成
化合物B的合成同上，
氮气保护下取化合物G溶解于二氯甲烷中，室温搅拌下加入三乙胺(TEA)，再缓慢加入化合物B，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，待化合物B消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物H，即骨架2化合物(化合物B、三乙胺与化合物G摩尔比为1:1.1:1.1)。
实施例3骨架3化合物的合成
化合物E的合成如前所述。
氮气保护下取三光气(BTC)溶解于无水二氧六环内，于冰浴下磁力搅拌5 分钟，加入催化量的三乙胺(TEA)，搅拌15分钟，在冰浴下搅拌缓慢滴加入化合物A，并继续在冰浴条件下搅拌1小时，恢复室温，然后50-60℃回流2-3小时，反应混合液减压旋干，柱层析分离(洗脱液石油醚和乙酸乙酯比例为5:1)，即得产物I(化合物A、BTC和三乙胺的摩尔比为1:1.5:0.05)。
氮气保护下取化合物E溶解于无水乙腈中，室温搅拌下加入三乙胺(TEA)，再缓慢加入化合物I，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，待化合物I消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物J，即骨架3化合物(化合物I、三乙胺与化合物E摩尔比为1:1.1:1.1)。
实施例4骨架4化合物的合成
氮气保护下取化合物G溶解于二氯甲烷中，室温搅拌下加入三乙胺(TEA)，再缓慢加入化合物I，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，待化合物I消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物K，即骨架4化合物 (化合物I、三乙胺与化合物G摩尔比为1:1.1:1.1)。
实施例5化合物T01的合成
氮气保护下取1g 2-甲基苯胺溶解于30ml四氢呋喃(THF)中，磁力搅拌下依次加入7.6g二硫化碳(CS2)和1.06g三乙胺(TEA)，室温下继续搅拌1-2小时，薄层板(TLC)检测，2-甲基苯胺消耗完。然后将反应混合液至于冰浴下搅拌5分钟，随即加入12mg催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，再滴加2.18g 二碳酸二叔丁基酯(Boc2O)，冰浴下继续搅拌5分钟，然后恢复室温搅拌1-2 小时，反应完毕，将反应溶剂等减压旋干，得到产物2-甲基苯异硫氰酸酯1.52g，并未做进一步纯化处理，2-甲基苯异硫氰酸酯粗产率为85％(2-甲基苯胺、CS2、三乙胺、Boc2O和DMAP摩尔比为1:10:1.05:1:0.01)。
氮气保护下取2.7g 4-氯-3,5-二硝基三氟甲苯溶解于35ml无水甲醇(MeOH) 中，磁力搅拌下少量多次加入540mg甲醇钠(MeONa)，继续在室温下搅拌1-2 小时，混合液很.快变为黄色，然后逐渐变为红色，薄层板(TLC)检测4-氯-3,5- 二硝基三氟甲苯消耗完，此时反应结束，反应液用二氯甲烷萃取、蒸馏水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，即得2.53g 3,5-二硝基-4-甲氧基三氟甲苯(4-氯-3,5-二硝基三氟甲苯和MeONa的摩尔比为1:1)，产率为95％。氮气保护下取2.53g 3,5-二硝基-4-甲氧基三氟甲苯溶解于30ml无水乙醇(EtOH)，室温搅拌下滴加入一水合肼(NH2NH2·H2O)570mg，室温下继续搅拌5-6小时，反应液逐渐变为墨蓝色，待3,5-二硝基-4-甲氧基三氟甲苯消耗完，反应结束，将反应混合液减压旋干，这层析分离(洗脱液石油醚与乙酸乙酯比例为1:4)，即得 2.12g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼(3,5-二硝基-4-甲氧基三氟甲苯与NH2NH2·H2O 摩尔比为1:1.2)，产率为84％。
氮气保护下取2.93g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼溶解于35ml无水乙腈中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.49g 2-甲基苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，2-甲基苯异硫氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物3.7g T01(2-甲基苯异硫氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼摩尔比为1:1.1:1.1)，产率为90％。化合物T01 的1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.67(s,1H),8.39(s,2H),7.71(s,1H),7.37(d,J＝ 2.8Hz,3H),7.20(s,2H),2.30(s,3H).ESI-MS(m/s):416.06[M+H]+。
实施例6化合物T02的合成
氮气保护下取1g 4-甲基苯胺溶解于30ml四氢呋喃(THF)中，磁力搅拌下依次加入7.6g二硫化碳(CS2)和1.06g三乙胺(TEA)，室温下继续搅拌1-2小时，薄层板(TLC)检测，4-甲基苯胺消耗完。然后将反应混合液至于冰浴下搅拌5分钟，随即加入12mg催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，再滴加2.18g 二碳酸二叔丁基酯(Boc2O)，冰浴下继续搅拌5分钟，然后恢复室温搅拌1-2 小时，反应完毕，将反应溶剂等减压旋干，得到产物4-甲基苯异硫氰酸酯1.61g，并未做进一步纯化处理，4-甲基苯异硫氰酸酯粗产率为85％(4-甲基苯胺、CS2、三乙胺、Boc2O和DMAP摩尔比为1:10:1.05:1:0.01)。
4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼的合成同实施例5。
氮气保护下取2.93g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼溶解于35ml无水乙腈中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.49g 4-甲基苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，4-甲基苯异硫氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物3.7g T02(4-甲基苯异硫氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼摩尔比为1:1.1:1.1)，产率为90％。化合物T02 的1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.67(s,1H),8.42(s,2H),7.90(s,1H),7.33(t,J＝ 7.2Hz,3H),7.12(d,J＝8.2Hz,2H),2.42(d,J＝8.3Hz,3H).ESI-MS(m/s):416.06[M+H]+。
实施例7化合物T03的合成
氮气保护下取1.27g 3-氯代苯胺溶解于30ml四氢呋喃(THF)中，磁力搅拌下依次加入7.6g二硫化碳(CS2)和1.06g三乙胺(TEA)，室温下继续搅拌1-2 小时，薄层板(TLC)检测，3-氯代苯胺消耗完。然后将反应混合液至于冰浴下搅拌5分钟，随即加入12mg催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，再滴加2.18g 二碳酸二叔丁基酯(Boc2O)，冰浴下继续搅拌5分钟，然后恢复室温搅拌1-2 小时，反应完毕，将反应溶剂等减压旋干，得到产物3-氯代苯异硫氰酸酯1.56g，并未做进一步纯化处理，3-氯代苯异硫氰酸酯粗产率为83％(3-氯代苯胺、CS2、三乙胺、Boc2O和DMAP摩尔比为1:10:1.05:1:0.01)。
4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼的合成同实施例5。
氮气保护下取2.93g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼溶解于35ml无水乙腈中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.41g 3-氯代苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，3-氯代苯异硫氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物3.8g T03(3-氯代苯异硫氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼摩尔比为1:1.1:1.1)，产率为89％。化合物T03 的1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.70(s,1H),8.42(s,2H),8.05(s,1H),7.55–7.30 (m,4H),7.21(d,J＝7.7Hz,1H).ESI-MS(m/s):436.01[M+H]+.
实施例8化合物T04的合成
氮气保护下取1.27g 2-氯代苯胺溶解于30ml四氢呋喃(THF)中，磁力搅拌下依次加入7.6g二硫化碳(CS2)和1.06g三乙胺(TEA)，室温下继续搅拌1-2 小时，薄层板(TLC)检测，2-氯代苯胺消耗完。然后将反应混合液至于冰浴下搅拌5分钟，随即加入12mg催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，再滴加2.18g 二碳酸二叔丁基酯(Boc2O)，冰浴下继续搅拌5分钟，然后恢复室温搅拌1-2 小时，反应完毕，将反应溶剂等减压旋干，得到产物2-氯代苯异硫氰酸酯1.55g，并未做进一步纯化处理，2-氯代苯异硫氰酸酯粗产率为83％(2-氯代苯胺、CS2、三乙胺、Boc2O和DMAP摩尔比为1:10:1.05:1:0.01)。
4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼的合成同实施例5。
氮气保护下取2.93g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼溶解于35ml无水乙腈中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.41g 2-氯代苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，2-氯代苯异硫氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物3.9g T04(2-氯代苯异硫氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼摩尔比为1:1.1:1.1)，产率为90％。化合物T04 的1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.93–9.62(m,1H),8.64–8.21(m,2H),7.97(s, 1H),7.62–7.32(m,5H).ESI-MS(m/s):436.01[M+H]+。
实施例9化合物T05的合成
氮气保护下取1.61g 4-三氟甲基苯胺溶解于30ml四氢呋喃(THF)中，磁力搅拌下依次加入7.6g二硫化碳(CS2)和1.06g三乙胺(TEA)，室温下继续搅拌 1-2小时，薄层板(TLC)检测，4-三氟甲基苯胺消耗完。然后将反应混合液至于冰浴下搅拌5分钟，随即加入12mg催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，再滴加2.18g二碳酸二叔丁基酯(Boc2O)，冰浴下继续搅拌5分钟，然后恢复室温搅拌1-2小时，反应完毕，将反应溶剂等减压旋干，得到产物4-三氟甲基苯异硫氰酸酯1.6g，并未做进一步纯化处理，4-三氟甲基苯异硫氰酸酯粗产率为87％(4- 三氟甲基苯胺、CS2、三乙胺、Boc2O和DMAP摩尔比为1:10:1.05:1:0.01)。
4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼的合成同实施例5。
氮气保护下取2.93g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼溶解于35ml无水乙腈中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入2g 4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，4-三氟甲基苯异硫氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物4.36g T05(4-三氟甲基苯异硫氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼摩尔比为1:1.1:1.1)，产率为93％。化合物T05的1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.69(s,1H),8.41(s,2H),8.21(s,1H), 7.75(d,J＝8.4Hz,2H),7.58(s,1H),7.47(d,J＝8.3Hz,2H).ESI-MS(m/s): 470.04[M+H]+。
实施例10化合物T06的合成
氮气保护下取1.43g 1-萘胺溶解于30ml四氢呋喃(THF)中，磁力搅拌下依次加入7.6g二硫化碳(CS2)和1.06g三乙胺(TEA)，室温下继续搅拌1-2小时，薄层板(TLC)检测，1-萘胺消耗完。然后将反应混合液至于冰浴下搅拌5分钟，随即加入12mg催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，再滴加2.18g二碳酸二叔丁基酯(Boc2O)，冰浴下继续搅拌5分钟，然后恢复室温搅拌1-2小时，反应完毕，将反应溶剂等减压旋干，得到产物1-萘异硫氰酸酯1.25g，并未做进一步纯化处理，1-萘异硫氰酸酯粗产率为81％(1-萘胺、CS2、三乙胺、Boc2O和DMAP摩尔比为1:10:1.05:1:0.01)。
4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼的合成同实施例5。
氮气保护下取2.93g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼溶解于35ml无水乙腈中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.85g 1-萘异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，1-萘异硫氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物3.7g T06(1-萘异硫氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼摩尔比为1:1.1:1.1)，产率为86％。化合物T06的1HNMR(300 MHz,CDCl3)δ9.67(s,1H),8.38(s,2H),8.05–7.85(m,4H),7.75–7.53(m,3H), 7.45(d,J＝7.2Hz,1H).ESI-MS(m/s):452.06[M+H]+。
实施例11化合物T07的合成
氮气保护下取1.21g 3,5-二甲基苯胺溶解于30ml四氢呋喃(THF)中，磁力搅拌下依次加入7.6g二硫化碳(CS2)和1.06g三乙胺(TEA)，室温下继续搅拌 1-2小时，薄层板(TLC)检测，3,5-二甲基苯胺消耗完。然后将反应混合液至于冰浴下搅拌5分钟，随即加入12mg催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，再滴加2.18g二碳酸二叔丁基酯(Boc2O)，冰浴下继续搅拌5分钟，然后恢复室温搅拌1-2小时，反应完毕，将反应溶剂等减压旋干，得到产物3,5-二甲基苯异硫氰酸酯1.15g，并未做进一步纯化处理，3,5-二甲基苯异硫氰酸酯粗产率为86％(3,5- 二甲基苯胺、CS2、三乙胺、Boc2O和DMAP摩尔比为1:10:1.05:1:0.01)。
4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼的合成同实施例5。
氮气保护下取2.93g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼溶解于35ml无水乙腈中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.63g 3,5-二甲基苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，3,5-二甲基苯异硫氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物3.99g T07(3,5-二甲基苯异硫氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼摩尔比为1:1.1:1.1)，产率为93％。化合物 T07的1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.70(s,1H),8.43(s,2H),7.85(s,1H),7.37(s, 1H),7.07(s,1H),6.82(s,2H),2.42(s,5H).ESI-MS(m/s):430.08[M+H]+.
实施例12化合物T08的合成
氮气保护下取4.46g三光气(BTC)溶解于40ml无水二氧六环内，于冰浴下磁力搅拌5分钟，加入催化量的51mg三乙胺(TEA)，搅拌15分钟，在冰浴下搅拌缓慢滴加入1.41g 4-甲基-3-氯代苯胺，并继续在冰浴条件下搅拌1小时，恢复室温，然后50-60℃回流2-3小时，反应混合液减压旋干，柱层析分离(洗脱液石油醚和乙酸乙酯比例为5:1)，即得产物1.53g 4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯(4- 甲基-3-氯代苯胺、BTC和三乙胺的摩尔比为1:1.5:0.05)，产率约为91％。
4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼的合成同实施例5。
氮气保护下取2.93g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼溶解于35ml无水乙腈中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.67g 4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，待4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物4.12g TO8(4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为 95％。化合物T08的1H NMR(300MHz,DMSO)δ9.80(s,1H),9.01(s,1H),8.51(d, J＝22.1Hz,3H),7.65(d,J＝19.6Hz,1H),7.23(s,3H),2.25(s,4H).ESI-MS(m/s): 434.05[M+H]+。
实施例13化合物T09的合成
氮气保护下取4.46g三光气(BTC)溶解于40ml无水二氧六环内，于冰浴下磁力搅拌5分钟，加入催化量的51mg三乙胺(TEA)，搅拌15分钟，在冰浴下搅拌缓慢滴加入1.61g 4-三氟甲基苯胺，并继续在冰浴条件下搅拌1小时，恢复室温，然后50-60℃回流2-3小时，反应混合液减压旋干，柱层析分离(洗脱液石油醚和乙酸乙酯比例为5:1)，即得产物1.77g 4-三氟甲基苯异氰酸酯(4-三氟甲基苯胺、BTC和三乙胺的摩尔比为1:1.5:0.05)，产率约为95％。
4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼的合成同实施例5。
氮气保护下取2.93g 4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼溶解于35ml无水乙腈中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.87g 4-三氟甲基苯异氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕色，待4-三氟甲基苯异氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得目标产物4.3g TO9(4-三氟甲基苯异氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基-2,6-二硝基苯肼摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为94％。化合物T09的1H NMR(300MHz,DMSO)δ9.83(s,1H),9.33(s,1H),8.58(s,1H),8.56 (s,2H),7.64(d,J＝2.4Hz,5H).ESI-MS(m/s):454.06[M+H]+。
实施例14化合物T10的合成
4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯的合成同实施例12。
氮气保护下取1.49g 2,4,6-三甲基苯胺溶解于30ml二氯甲烷中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.67g 4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得2.79g目标产物T10(4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯、三乙胺与2,4,6-三甲基苯胺摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为92％。化合物T10 的1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.78(s,1H),7.69(d,J＝1.8Hz,1H),7.66(s,1H), 7.27–7.12(m,2H),6.88(s,2H),2.24(d,J＝4.4Hz,6H),2.15(s,6H). ESI-MS(m/s):329.07[M+H]+。
实施例15化合物T11的合成
4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯的合成同实施例12。
氮气保护下取1.77g 4-三氟甲基苯胺溶解于30ml二氯甲烷中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.67g 4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得3.16g目标产物T11(4-甲基-3-氯代苯异氰酸酯、三乙胺与4-三氟甲基苯胺摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为96％。化合物T111H NMR(300MHz,DMSO)δ9.15(s,1H),8.91(s,1H),7.69(t,J＝2.2Hz,1H),7.64(s, 4H),7.22(dt,J＝8.3,5.2Hz,2H),2.26(s,4H).ESI-MS(m/s):329.07[M+H]+。
实施例16化合物T12的合成
4-三氟甲基苯异氰酸酯的合成同实施例13。
氮气保护下取1.49g 2,4,6-三甲基苯胺溶解于30ml二氯甲烷中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.87g 4-三氟甲基苯异氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，4-三氟甲基苯异氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得2.9g目标产物T12(4-三氟甲基苯异氰酸酯、三乙胺与2,4,6-三甲基苯胺摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为90％。化合物T12的1HNMR (300MHz,DMSO)δ9.15(s,1H),7.78(s,1H),7.63(q,J＝8.9Hz,5H),6.90(s,2H), 2.24(s,4H),2.16(s,7H).ESI-MS(m/s):323.14[M+H]+。
实施例17化合物T13的合成
4-三氟甲基苯异氰酸酯的合成同实施例13。
氮气保护下取1.77g 4-三氟甲基苯胺溶解于30ml二氯甲烷中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入1.87g 4-三氟甲基苯异氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，4-三氟甲基苯异氰酸酯消耗完，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得3.3g目标产物T13(4-三氟甲基苯异氰酸酯、三乙胺与 4-三氟甲基苯胺摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为94％。化合物T13的1H NMR(300 MHz,DMSO)δ9.26(s,2H),7.72–7.63(m,8H).ESI-MS(m/s):349.08[M+H]+。
实施例18化合物T14的合成
4-三氟甲基苯异硫氰酸酯的合成同实施例9。
氮气保护下取1.49g 2,4,6-三甲基苯胺溶解于30ml二氯甲烷中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，待化合物4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得3.04g目标产物T14(4-三氟甲基苯异硫氰酸酯、三乙胺与化合物G摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为90％。化合物T14的1HNMR(300 MHz,CDCl3)δ7.70(s,1H),7.58(q,J＝8.4Hz,4H),7.10(s,1H),6.99(d,J＝13.4 Hz,2H),2.31(d,J＝6.5Hz,9H).ESI-MS(m/s):339.11[M+H]+。
实施例19化合物T15的合成
4-三氟甲基苯异硫氰酸酯的合成同实施例9。
氮气保护下取1.77g 4-三氟甲基苯胺溶解于30ml二氯甲烷中，室温搅拌下加入1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，待化合物4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得3.42g目标产物T15(4-三氟甲基苯异硫氰酸酯、三乙胺与化合物G摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为94％。化合物T15的1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.15(s,1H),7.70(d,J＝8.5Hz,3H),7.56(d,J＝8.4Hz,3H). ESI-MS(m/s):365.06[M+H]+。
实施例20化合物T16的合成
4-三氟甲基苯异硫氰酸酯的合成同实施例9。
氮气保护下取1.86g 4-苯基苯胺溶解于30ml二氯甲烷中，室温搅拌下加入 1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，待化合物4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得3.3g目标产物T16(4-三氟甲基苯异硫氰酸酯、三乙胺与化合物G摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为89％。化合物T16的1H NMR(300MHz, DMSO)δ10.25(s,1H),7.79(d,J＝8.6Hz,1H),7.66(ddd,J＝19.9,12.2,6.8Hz, 4H),7.47(dd,J＝10.3,4.8Hz,1H),7.39–7.32(m,1H).ESI-MS(m/s):373.10[M+H]+。
实施例21化合物T17的合成
4-三氟甲基苯异硫氰酸酯的合成同实施例9。
氮气保护下取1.66g金刚烷胺溶解于30ml二氯甲烷中，室温搅拌下加入1.1g 三乙胺(TEA)，再缓慢加入4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7 小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，待化合物4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得3.05g目标产物T17(4-三氟甲基苯异硫氰酸酯、三乙胺与化合物G摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为86％。化合物T17的1H NMR(300MHz, DMSO)δ9.63(s,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,2H),7.62(d,J＝8.7Hz,2H),7.57(s,1H), 2.25(d,J＝2.5Hz,6H),2.07(s,3H),1.65(s,6H).ESI-MS(m/s):355.14[M+H]+。
实施例22化合物T18的合成
4-三氟甲基苯异硫氰酸酯的合成同实施例9。
氮气保护下取2g 4-苯氧基苯胺溶解于30ml二氯甲烷中，室温搅拌下加入 1.1g三乙胺(TEA)，再缓慢加入4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，并继续在室温下搅拌5-7小时，反应混合液逐渐变为棕黄色，待化合物4-三氟甲基苯异硫氰酸酯，反应结束，反应液用蒸馏水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干，用二氯甲烷和石油醚重结晶，即得3.35g目标产物T18(4-三氟甲基苯异硫氰酸酯、三乙胺与化合物G摩尔比为1:1.1:1.1)，产率约为90％。化合物T18的1H NMR(300 MHz,DMSO)δ9.09(s,1H),8.82(s,1H),7.65(q,J＝9.1Hz,5H),7.49(t,J＝6.2Hz, 2H),7.38(dd,J＝11.2,4.7Hz,2H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),6.99(dd,J＝11.6,6.5Hz,5H).ESI-MS(m/s):373.12[M+H]+。
实施例23分子对接实验
从蛋白晶体数据库PDB中下载K-RasG12D-GppNHp蛋白复合物(PDB ID code 4DSO)，利用分子对接软件Autodock Vina将小分子配体T05,T15,T18分别与该蛋白进行分子对接，然后用图形处理软件Pymol将对接结果进行处理，如说明书附图1、图2、图3所示。
分子对接结果表明，小分子化合物T05,T15,T18均可有效结合于由Lys5, Glu37,Asp54,Leu56,Met67,Gln70,Tyr71和Thr74构成的结合位点。对于配体 T05(如图1)，分子中的硝基与Gln70形成氢键；1’位氮上的氢和Glu37形成氢键；2,6-二硝基-三氟甲基苯基通过疏水作用有效结合于Lys5,Asp54, Leu56,Thr74构成的疏水腔；三氟甲基苯基则与Met67,Gln70和Tyr71构成的疏水腔通过疏水作用相互结合。
对于配体T15(如图2)，分子内其中一个三氟甲基苯基通过疏水作用有效结合于Lys5,Asp54,Leu56,Thr74构成的疏水腔；同时氮上的氢可以与37位谷氨酸形成氢键；另一侧的三氟甲基苯基则与Met67,Gln70和Tyr71构成的疏水腔通过疏水作用相互结合。
对于配体T18(如图3)，分子内苯氧基通过疏水作用有效结合于Lys5,Asp54,Leu56,Thr74构成的疏水腔；硫原子与Gln70形成氢键；三氟甲基苯基则与Met67, Gln70和Tyr71构成的疏水腔通过疏水作用相互结合。由此可见，小分子配体T05, T15,T18等分子可与K-Ras蛋白产生较强的相互作用，靶向K-Ras蛋白。
实施例24体外抗非小细胞肺癌细胞A549活性试验；
化合物T01-T18为例，体外抗肿瘤活性具体实施方法如下。
1.实验细胞：非小细胞肺癌细胞A549；实验药物：阳性药(索拉非尼)、脲和硫脲类结构系列药物(18个，化合物T01-T18)。
2.药物配制：20mM储液：称取药物0.01g，加DMSO溶解，加入量如下：索拉非尼，1.076mL；T01,1.204mL；T02,1.204mL；T03,1.148mL；T04,1.148mL； T05,1.066mL；T06,1.108mL；T07,1.165Ml；T08,1.153mL；T09,1.103mL；T10, 1.651mL；T11,1.521mL；T12,1.551mL；T13,1.436ml；T14,1.478mL；T15, 1.372ml；T16,1.343mL；T17,1.412mL；T18,1.287mL。
3.按每种药物所需浓度×2倍进行稀释(150μM、50μM、10μM、2μM、 0.4μM)：20mM储液，(10μL+10μL DMSO)得10mM；(20μL+180μL DMEM) 得1mM；(150μL+850μL DMEM)得150μM；(300μL+600μL DMEM)得50μM； (200μL+800μL DMEM)得10μM；(200μL+800μL DMEM)得2μM；(100 μL+400μL DMEM)得0.4μM。
4.实验步骤：
本实验方法采用的是CCK-8法测定小分子抑制剂的体外抗肿瘤活性。细胞计数，每孔100μL铺96孔板(8000/孔，3个平行孔)，贴壁培养24h后，加药物100μL处理，培养48h后，CCK-8测细胞活力。
取96孔板每孔加入浓度为8×104/mL的细胞悬液100μL，即8000个细胞/孔，置于37℃、5％C02培养箱内。24小时后，去除上层培养液，分别加入受试化合物样品液和对照品液，100μL/孔，37℃作用48小时。每孔加入10mg/mL的CCK-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)溶液 10μL，作用2小时后用酶标仪测570nm OD值，计算半数抑制浓度IC50。
注：由于药物本身存在颜色，对检测存在影响，需扣除本底。
抑制率＝(空白对照孔OD值-给药孔OD值)/空白对照孔OD值x100％。根据各个浓度的IC％值，用GraphPad软件进行非线性回归，计算各化合物抑制50％细胞生长的浓度，即IC50。
Figure BDA0002048382680000171
Figure BDA0002048382680000181
结果显示，本发明化合物对非小细胞肺癌细胞A549具有明显的抗肿瘤活性。
实施例25体外抗人结肠癌细胞HCT116活性试验；
化合物T01-T18为例，体外抗肿瘤活性具体实施方法如下。
1.实验细胞：人结肠癌细胞HCT116；实验药物：阳性药(索拉非尼)、脲和硫脲类结构系列药物(18个，化合物T01-T18)。
2.药物配制：20mM储液：称取药物0.01g，加DMSO溶解，加入量如下：索拉非尼，1.076mL；T01,1.204mL；T02,1.204mL；T03,1.148mL；T04,1.148mL； T05,1.066mL；T06,1.108mL；T07,1.165Ml；T08,1.153mL；T09,1.103mL；T10, 1.651mL；T11,1.521mL；T12,1.551mL；T13,1.436ml；T14,1.478mL；T15, 1.372ml；T16,1.343mL；T17,1.412mL；T18,1.287mL。
3.按每种药物所需浓度×2倍进行稀释(150μM、50μM、10μM、2μM、0.4μM)：20mM储液，(10μL+10μL DMSO)得10mM；(20μL+180μL DMEM) 得1mM；(150μL+850μL DMEM)得150μM；(300μL+600μL DMEM)得50μM； (200μL+800μL DMEM)得10μM；(200μL+800μL DMEM)得2μM；(100 μL+400μL DMEM)得0.4μM。
4.实验步骤：
本实验方法采用的是CCK-8法测定小分子抑制剂的体外抗肿瘤活性。细胞计数，每孔100μL铺96孔板(8000/孔，3个平行孔)，贴壁培养24h后，加药物100μL处理，培养48h后，CCK-8测细胞活力。
取96孔板每孔加入浓度为8×104/mL的细胞悬液100μL，即8000个细胞/孔，置于37℃、5％C02培养箱内。24小时后，去除上层培养液，分别加入受试化合物样品液和对照品液，100μL/孔，37℃作用48小时。每孔加入10mg/mL的CCK-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)溶液 10μL，作用2小时后用酶标仪测570nm OD值，计算半数抑制浓度IC50。
注：由于药物本身存在颜色，对检测存在影响，需扣除本底。
抑制率＝(空白对照孔OD值—给药孔OD值)/空白对照孔OD值×100％。根据各个浓度的IC％值，用GraphPad软件进行非线性回归，计算各化合物抑制 50％细胞生长的浓度，即IC50。
Figure BDA0002048382680000191
Figure BDA0002048382680000201
结果显示，本发明化合物对人结肠癌细胞HCT116具有明显的抗肿瘤活性。
实施例26体外抗人胰腺癌细胞PNAC-1活性试验；
化合物T01-T18为例，体外抗肿瘤活性具体实施方法如下。
1.实验细胞：人胰腺癌细胞PNAC-1；实验药物：阳性药(索拉非尼)、脲和硫脲类结构系列药物(18个，化合物T01-T18)。
2.药物配制：20mM储液：称取药物0.01g，加DMSO溶解，加入量如下：索拉非尼，1.076mL；T01,1.204mL；T02,1.204mL；T03,1.148mL；T04,1.148mL； T05,1.066mL；T06,1.108mL；T07,1.165Ml；T08,1.153mL；T09,1.103mL；T10, 1.651mL；T11,1.521mL；T12,1.551mL；T13,1.436ml；T14,1.478mL；T15, 1.372ml；T16,1.343mL；T17,1.412mL；T18,1.287mL。
3.按每种药物所需浓度×2倍进行稀释(150μM、50μM、10μM、2μM、 0.4μM)：20mM储液，(10μL+10μL DMSO)得10mM；(20μL+180μL DMEM) 得1mM；(150μL+850μL DMEM)得150μM；(300μL+600μL DMEM)得50μM； (200μL+800μL DMEM)得10μM；(200μL+800μL DMEM)得2μM；(100 μL+400μL DMEM)得0.4μM。
4.实验步骤：
本实验方法采用的是CCK-8法测定小分子抑制剂的体外抗肿瘤活性。细胞计数，每孔100μL铺96孔板(8000/孔，3个平行孔)，贴壁培养24h后，加药物100μL处理，培养48h后，CCK-8测细胞活力。
取96孔板每孔加入浓度为8×104/mL的细胞悬液100μL，即8000个细胞/孔，置于37℃、5％C02培养箱内。24小时后，去除上层培养液，分别加入受试化合物样品液和对照品液，100μL/孔，37℃作用48小时。每孔加入10mg/mL的CCK-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)溶液 10μL，作用2小时后用酶标仪测570nm OD值，计算半数抑制浓度IC50。
注：由于药物本身存在颜色，对检测存在影响，需扣除本底。
抑制率＝(空白对照孔OD值-给药孔OD值)/空白对照孔OD值x100％。根据各个浓度的IC％值，用GraphPad软件进行非线性回归，计算各化合物抑制50％细胞生长的浓度，即IC50。
Figure BDA0002048382680000211
结果显示，本发明化合物对人胰腺癌细胞PANC-1具有明显的抗肿瘤活性。

Claims (7)

1.下列化合物及其药学上可用的盐，选自：
Figure RE-799799DEST_PATH_IMAGE001
Figure RE-275648DEST_PATH_IMAGE002
Figure RE-579591DEST_PATH_IMAGE003
Figure RE-464501DEST_PATH_IMAGE004
Figure RE-904710DEST_PATH_IMAGE005
。
2.权利要求1所述化合物及其药学上可用的盐的制备方法：
Figure RE-974297DEST_PATH_IMAGE006
其中，R1选自3-氯代苯基、（4-三氟甲基）苯基、（3,5二甲基）苯基；
R2 为（2,6-二硝基-4-三氟甲基）苯基。
3.权利要求1所述化合物及其药学上可用的盐的制备方法：
Figure RE-740435DEST_PATH_IMAGE007
其中， R1为（4-三氟甲基）苯基；
R2 为 (2,4,6-三甲基)苯基。
4.权利要求1所述化合物及其药学上可用的盐的制备方法：
Figure RE-678304DEST_PATH_IMAGE008
其中，R1 为（4-三氟甲基）苯基；
R2为 (2,4,6-三甲基)苯基。
5.一种组合物，其特征在于，包含权利要求1所述化合物或其药学上可用的盐，以及药学上可接受的载体。
6.权利要求1所述化合物及其药学上可用的盐在制备作用于Ras蛋白靶点的药物中的应用。
7.权利要求1所述化合物及其药学上可用的盐在制备抗肿瘤药物的应用。
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