CN110051854A - 腺苷单磷酸amp复合物及其在制备肿瘤靶向纳米递药系统中的应用 - Google Patents

腺苷单磷酸amp复合物及其在制备肿瘤靶向纳米递药系统中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属药学领域，涉及AMP复合物及其在制备肿瘤靶向纳米递药系统中的应用。本发明制备了腺苷单磷酸(Adenosine monophosphate，AMP)修饰的药物和高分子载体材料及其在用于构建肿瘤影像和靶向治疗的递药系统中的应用，经试验结果显示，AMP复合物能够跨越脑毛细血管内皮细胞并被肿瘤组织特异性摄取，具有良好的脑内递送与肿瘤靶向和影像功能；AMP修饰高分子载体材料所构建的纳米递药系统如脂质体、聚合物胶束、聚合物圆盘、纳米粒等可跨越血‑脑屏障入脑并靶向肿瘤，显著提高抗肿瘤药效。本发明的AMP修饰的药物和纳米递药系统对脑肿瘤靶向效果优势显著，在肿瘤的靶向诊断与治疗中具备良好的应用前景。

Description

腺苷单磷酸AMP复合物及其在制备肿瘤靶向纳米递药系统中 的应用
技术领域
本发明属药学领域，涉及AMP复合物及其在制备肿瘤靶向纳米递药系统中的应用。具体涉及可介导腺苷A1受体跨血-脑屏障并靶向肿瘤的腺苷单磷酸(AMP)修饰的药物复合物和修饰的纳米递药系统，所构建的纳米递药系统包括脂质体、聚合物胶束、聚合物圆盘、纳米粒等可用于脑肿瘤或外周肿瘤的诊断和靶向治疗。
背景技术
现有技术公开了血-脑屏障(BBB)是脑毛细血管所独具的特征性结构，能够对透过周围血管的物质起到屏障作用，从而维持脑组织内环境稳定，起到保护脑组织的作用。BBB同时也可以限制药物从血液向脑转运，使得几乎所有大分子和约98％的小分子药物难以入脑，成为治疗脑部疾病的障碍。例如，由于脑部肿瘤生长初期BBB完整，即使到了中后期，脑肿瘤细胞向外浸润处始终存在BBB，导致临床治疗脑部肿瘤的药物很少，目前一线药物仅有替莫唑胺。所以，构建跨BBB的脑内递药系统以增加药物在脑内的传递效率成为治疗脑部疾病的关键所在。
有研究公开了BBB上存在腺苷A1受体，它调节BBB的渗透性，Margaret S.Bynoe报道腺苷A1受体的激活可以增强大分子物质入脑，敲除A1受体的小鼠在A1受体激动剂的作用下，不能增强大分子物质入脑；同时，腺苷A1受体在若干肿瘤细胞中过量表达。
基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供新的AMP复合物及其在制备肿瘤靶向纳米递药系统中的应用，本发明利用A1受体激动剂腺苷单磷酸(AMP)修饰药物、高分子载体材料及构建其纳米递药系统并对药物进行包载，使药物可以跨BBB以及靶向肿瘤细胞，实现对脑部肿瘤和外周肿瘤靶向诊治的效果。
发明内容
本发明的目的是基于现有技术的研究基础，提供新的AMP复合物及其在制备肿瘤靶向纳米递药系统中的应用，本发明利用A1受体激动剂腺苷单磷酸(AMP)修饰药物、高分子载体材料及构建其纳米递药系统并对药物进行包载，使药物可以跨BBB以及靶向肿瘤细胞，实现对脑部肿瘤和外周肿瘤靶向诊治的效果。
本发明中尤其涉及AMP修饰的诊断和治疗药物复合物、修饰的高分子载体材料及其所构建的纳米递药系统，实现药物对脑部肿瘤和外周肿瘤的靶向诊疗。
本发明中，利用AMP分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含氨基或羧基的影像物质，如荧光素Fluorescein，近红外染料Cy7、IR820、DiR，磁共振影像剂Gd-DTPA，放射影像剂99mTc-DTPA，反应形成复合物；
本发明的实施例中，利用腺苷单磷酸通过分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含有氨基或羧基基团的影像物质反应，获得AMP-X复合物；其中X是荧光物质Fluorescein，近红外染料Cy7、IR820、DiR，磁共振影像剂Gd-DTPA，放射影像剂99mTc-DTPA，可用作脑部肿瘤或外周肿瘤的影像诊断和示踪；
本发明中的AMP修饰药物，包括通过AMP分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含氨基或羧基的抗肿瘤药物形成磷酰胺键或酰胺键，涉及紫杉醇、多烯紫杉醇、喜树碱、羟基喜树碱、9-硝基喜树碱、长春新碱、阿霉素、表阿霉素、小白菊内酯等或通过固相合成直接缩合形成磷酰胺键涉及p53激活肽、抗菌肽、多肽毒素等多肽药物的AMP-药物复合物；
本发明的实施例中，利用腺苷单磷酸通过分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含有氨基或羧基基团的治疗药物连接，获得AMP-Y复合物；其中Y是阿霉素等蒽环类抗肿瘤药物、紫杉醇等紫杉烷类抗肿瘤药物、9-硝基喜树碱等喜树碱类抗肿瘤药物、长春新碱等长春碱类抗肿瘤药物、硼替佐米等佐米类抗肿瘤药物、小白菊内酯等内酯类抗肿瘤药物、p53激活肽等多肽类抗肿瘤药物，可用作脑部肿瘤或外周肿瘤的靶向治疗；
本发明中，利用AMP分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，修饰到含氨基或羧基的聚乙二醇-磷脂、聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)、聚乙二醇-乳酸羟基乙酸共聚物(PEG-PLGA)、聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)等高分子载体材料上，可用于AMP修饰的聚合物脂质体、聚合物胶束、聚合物圆盘、纳米粒等纳米递药系统的构建；
本发明的实施例中，利用腺苷单磷酸通过分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含有氨基或羧基基团的聚乙二醇-Z复合物连接，获得AMP-聚乙二醇-Z复合物，其中Z是磷脂、聚乳酸(PLA)、乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)；
本发明所述的AMP-聚乙二醇-磷脂复合物，可用于脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统、聚合物圆盘递药系统的制备；
本发明所述的AMP-聚乙二醇-聚乳酸复合物、AMP-聚乙二醇-乳酸羟基乙酸共聚物复合物、AMP-聚乙二醇-聚己内酯复合物，可用于聚合物胶束递药系统、纳米粒递药系统的制备；
本发明所述的脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统、聚合物圆盘递药系统和纳米粒递药系统，可用于包载诊断药物；所包载药物是FAM、近红外染料Cy5.5、IR820、DiR、DiD，磁共振影像剂Gd-DTPA，可用于脑部肿瘤或外周肿瘤的影像诊断和示踪；
本发明所述的脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统、聚合物圆盘递药系统和纳米粒递药系统，可用于包载抗肿瘤药物；所包载抗肿瘤药物是阿霉素等蒽环类抗肿瘤药物、紫杉醇等紫杉烷类抗肿瘤药物、9-硝基喜树碱等喜树碱类抗肿瘤药物、长春新碱等长春碱类抗肿瘤药物、硼替佐米等佐米类抗肿瘤药物、小白菊内酯等内酯类抗肿瘤药物、p53激活肽和蜂毒肽、蝎毒肽等多肽类抗肿瘤药物，可用作脑部肿瘤或外周肿瘤的靶向治疗。
本发明中，构建的AMP修饰的纳米递药系统可包载紫杉醇、多烯紫杉醇、阿霉素、表阿霉素、喜树碱、羟基喜树碱、9-硝基喜树碱、长春新碱、硼替唑米、卡非佐米、小白菊内酯、p53激活肽、蜂毒肽，蝎毒肽等抗肿瘤药物；或包载影像物质，如FAM、近红外染料Cy5.5、IR820、DiR、DiD、磁共振影像剂Gd-DTPA等。
本发明中，所述的AMP修饰的药物复合物、修饰的高分子载体材料及其构建的纳米递药系统，可用于制备靶向诊断和治疗脑部肿瘤或外周肿瘤的制剂。
本发明中，通过下述方法和步骤制备AMP修饰的药物复合物、修饰的高分子载体材料及其构建的纳米递药系统，
1)合成AMP-FAM
利用AMP分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与氨基或羧基反应，生成AMP-FAM；
2)合成AMP-DTPA-Gd、AMP-DTPA-99mTc
通过AMP分子中磷酸根经二胺化合物衍生化后与羧基或酸酐的反应合成AMP-DTPA和AMP-DTPA，螯合Gd或99mTc得AMP-DTPA-Gd或AMP-DTPA-99mTc；
3)合成.AMP-药物复合物
通过AMP分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含氨基或羧基的药物反应，生成AMP-药物复合物；
4)合成AMP-高分子载体材料
利用AMP分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含氨基或羧基的高分子载体材料反应，生成AMP-高分子载体材料，基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(Maldi-Tof-MS)及1H-NMR表征其结构；
5)构建与表征AMP修饰的纳米递药系统
一定量的AMP修饰的高分子材料和一定量必要的组分以及药物，采用适宜的方法制备相应的AMP修饰脂质体、聚合物胶束、聚合物圆盘、聚合物纳米粒等纳米递药系统；冷冻电镜观察纳米递药系统的形貌，激光散射粒度仪表征纳米递药系统粒径和粒径分布；
6)腺苷受体检测
采用Western-Blot的方法考察脑毛细血管内皮细胞(bEnd.3)及脑胶质瘤细胞(U87)的腺苷受体表达量；
7)评价AMP修饰的纳米递药系统跨越BBB能力
采用构建的了体外BBB模型，考察评价AMP修饰的纳米递药系统跨体外BBB的能力；通过正常小鼠尾静脉注射包载荧光物质的AMP修饰的纳米递药系统，考察其跨BBB入脑的能力；
8)评价AMP修饰的纳米递药系统肿瘤靶向性
考察AMP修饰的纳米递药系统被U87细胞摄取的能力；通过荷U87原位瘤模型裸鼠尾静脉注射包载荧光物质的AMP修饰的纳米递药系统，考察其在各时间点的肿瘤内分布；
9)评价AMP修饰的纳米递药系统体内外抗肿瘤效果
MTT法考察包载肿瘤治疗药物的AMP修饰纳米递药系统对U87细胞的生长抑制效果；
通过荷U87原位瘤模型裸鼠尾静脉注射包载肿瘤治疗药物的AMP修饰纳米递药系统，以中位生存期为指标评价体内抗肿瘤效果。
本发明提供了AMP修饰的药物复合物和纳米递药系统用于肿瘤诊疗的物质基础，试验结果表明：AMP修饰的药物和纳米递药系统具有良好的跨BBB能力以及肿瘤靶向能力，显示出更强的抗肿瘤效果。
附图说明
图1、AMP-PEG3400-DSPE的合成示意图谱。
图2、AMP-PEG3400-DSPE的Maldi-Tof-MS图谱表征，其中，
A，NH2-PEG3400-DSPE测定的分子量为4128，B，AMP-PEG3400-DSPE测定的分子量为4490，比NH2-PEG3400-DSPE的分子量有所增加，且增加的分子量与理论值相符合。
图3、AMP-PEG3400-DSPE的1H-NMR图谱表征，其中，
AMP-PEG3400-DSPE与NH2-PEG3400-DSPE相比，8.64ppm(嘌呤环上的H-2)处、8.09ppm(嘌呤环上的H-8)处及5.97ppm(戊糖环上的H-1)处出现吸收峰，而其它处的吸收峰基本保持不变，表明AMP成功连接到NH2-PEG3400-DSPE上。
图4、AMP-Disks/3D(DiO+DiI+DiD)的荧光谱表征，其中，
包载DiO、DiI及DiD的纳米圆盘以DiO的激发光(488nm)进行激发，当圆盘结构完整是，A，AMP-Disks/3D可发出650-800nm的荧光，B，当圆盘结构被破坏时(5％Triton X-100破乳)，相同激发下650-800nm处荧光消失，结果表明通过FRET效应，既可表征纳米圆盘在递送过程中的完整性，又可使发射波长红移，增加荧光的体内穿透性以及降低背景干扰。
图5、AMP-Disks/3D的形貌表征，其中，
A，AMP-Disks/3D及B，Disks/3D的冷冻电镜检测，细长棒状为纳米圆盘侧面，圆形为纳米圆盘正面，证明样品的确为圆盘状结构，纳米圆盘的正面直径约为55nm，分布较均匀，与表1粒径测定结果相一致。
图6、U87细胞及bEnd.3细胞腺苷A1受体表达量分析，
Western-blot结果显示，U87及bEnd.3的A1受体高表达。
图7、AMP-Disks/3D跨体外BBB转运，其中，
37℃条件下体外BBB模型中的跨膜效率显示，AMP-Disks/3D在各时间点下室转运量均高于Disks/3D，在3h时，AMP-Disks/3D的下室转运量为2.58‰，显著高于Disks/3D组的1.59‰，加入腺苷A1受体抑制剂(8-CPT)，转运量明显降低，表明AMP-Disks通过腺苷A1受体介导的跨膜转运。
图8、AMP-Disks/3D的胶质瘤细胞摄取，其中，
图A为AMP-Disks被U87细胞的摄取的流式细胞结果，可见，Disks/3D组阳性细胞的比例为25.48％；AMP-Disks/3D组的阳性细胞比例为40.14％，加入8-CPT后，该比例降低为29.97％，表明AMP可以介导圆盘靶向U87细胞且被A1受体抑制剂所抑制；
图B为共聚焦显微镜拍照结果，与Disks/3D相比，AMP-Disks能更好地被U87细胞摄取，此结果与流式结果一致。
图9、AMP-Disks/3D跨越体内BBB，其中，
图A显示ICR小鼠尾静脉注射纳米圆盘6h后的脑离体荧光成像结果，与Disks/3D相比，AMP-Disks/3D在脑内的荧光量显著增多；
图B显示CD31抗体血管染色结果，AMP-Disks/3D可跨越BBB进入脑组织，Disks/3D未观察到，表明AMP修饰的纳米递药系统可以更好地跨BBB入脑。
图10、AMP-Disks/3D的体内脑胶质瘤靶向性，其中，
图A显示U87原位脑胶质瘤(12天)的裸鼠尾静脉注射圆盘12h后的脑离体荧光成像结果，AMP-Disks/3D与Disks/3D相比，脑胶质瘤中的荧光量显著增多，表明AMP可有效介导纳米圆盘靶向脑胶质瘤；
图B显示脑组织切片结果，AMP-Disks/3D组观测到脑胶质瘤中与肿瘤周边血管中的荧光信号，证明AMP-Disks对脑胶质瘤的良好靶向性；
图C显示各组织分布结果，AMP-Disks/3D组在正常组织中的分布与Disks/3D组相差不显著，脑胶质瘤中的累积量有明显的增强，表明AMP介导的脑胶质瘤靶向特异性好。
图11、AMP-Disks/Melittin的形貌表征，其中，
A，AMP-Disks/Melittin及B，Disks/Melittin的冷冻电镜检测显示，细长棒状为纳米圆盘侧面，圆形为纳米圆盘正面，证明样品的为圆盘状结构，载Melittin圆盘的正面直径约为60nm，分布较均匀，与粒径测定结果一致。
图12、AMP-Disks/Melittin对胶质瘤细胞的药效，其中显示，
检测空白载体对U87细胞的毒性结果，Disks及AMP-Disks对U87细胞均没有明显毒性，说明载体是生物相容性的、安全的；载Melittin圆盘明显抑制了U87细胞的生长，Disks/Melittin和AMP-Disks/Melittin对U87细胞的IC50值分别为6.31μM和4.17μΜ，可见AMP有效增强载Melittin圆盘的抗胶质瘤细胞药效。
图13、AMP-Disks/Melittin抗原位脑胶质瘤药效，
结果显示，PBS对照组小鼠中位生存期为25天，Disks/Melittin组小鼠中位生存期为27天，而AMP-Disks/Melittin的中位生存期为31天，比Disks/Melittin组小鼠中位生存期延长了200％，表明AMP修饰可有效增强载Melittin圆盘抗脑胶质瘤药效。
具体实施方式
通过下述实施例将有助于进一步理解本发明，但本发明不局限于如下描述范围。
实施例1
AMP-FAM、AMP-药物复合物、AMP-PEG3400-DSPE的合成与表征
AMP-FAM的合成：
AMP先与己二胺进行反应生成AMP氨基衍生物：将744g AMP与928g 1,6-己二胺加水溶解，HCl调节pH至6.5。之后缓慢加入EDC，室温反应90min。Dowex 50WX8-200阳离子交换树脂对反应产物进行纯化，冷冻干燥得AMP氨基衍生物；
AMP氨基衍生物与FAM溶于DMF，加入与AMP氨基衍生物等当量的EDC及DIPEA，室温搅拌反应，HPLC监测，待反应完全后停止反应，采用制备液相进行纯化，用乙腈/水(含0.1％TFA)体系洗脱，冷冻干燥得AMP-FAM纯品；
制备AMP-DTPA-Gd及AMP-DTPA-99mTc：
如上AMP氨基衍生物与DTPA酸酐溶于DMF，加入少量DIPEA，室温搅拌反应，HPLC监测，待反应完全后停止反应，采用制备液相进行纯化，用乙腈/水(含0.1％TFA)体系洗脱。冷冻干燥得AMP-DTPA，螯合Gd或99mTc后得AMP-DTPA-Gd或AMP-DTPA-99mTc；
制备AMP-药物复合物：
以AMP-阿霉素复合物的制备作为AMP连接含氨基类药物的实施例，通过AMP中的磷酸根与阿霉素中葡萄糖胺上的氨基进行反应，将AMP和阿霉素溶于水中，调节pH至6.5，加入一定量的EDC及DIPEA，室温搅拌反应，HPLC监测，待反应完全后停止反应，采用制备液相进行纯化，用乙腈/水(含0.1％TFA)体系洗脱。冷冻干燥得AMP-阿霉素复合物；
以AMP-吲哚美辛复合物的制备作为AMP连接含羧基类药物的实施例，通过AMP二胺衍生物中的氨基与吲哚美辛中的羧基进行反应，将AMP二胺衍生物和吲哚美辛溶于水中，调节pH至6.5，加入一定量的EDC及DIPEA，室温搅拌反应，HPLC监测，待反应完全后停止反应，采用制备液相进行纯化，用乙腈/水(含0.1％TFA)体系洗脱。冷冻干燥得AMP-吲哚美辛复合物；
AMP-PEG3400-DSPE的合成与表征：
通过AMP中磷酸根与含氨基的高分子材料反应生成AMP-PEG3400-DSPE，合成路线如图1所示，将AMP与NH2-PEG3400-DSPE按摩尔比4∶1的比例溶于DMSO中，与AMP等当量的EDC、DIPEA也溶于DMSO，将上述反应原材料混合，室温下搅拌反应，过夜，反应液用水透析72h(截留分子量为2kDa)，冷冻干燥得AMP-PEG3400-DSPE。基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(Maldi-Tof-MS)与1H-NMR对产物进行表征，结果如图2、图3所示。
实施例2纳米圆盘的制备与表征
制备空白纳米圆盘：
采用薄膜水化法制备，纳米圆盘(Disks)膜材处方为POPC∶Chol∶mPEG2000-DSPE＝35∶40∶25(mol/mol)；AMP修饰的纳米圆盘(AMP-Disks)膜材处方为POPC∶Chol∶mPEG2000-DSPE∶AMP-PEG3400-DSPE＝35∶40∶23∶2(mol/mol)，将膜材溶于三氯甲烷，40℃旋转蒸发除去有机溶剂，使膜材在瓶壁形成薄膜，置于真空干燥箱内，挥净有机溶剂。24h后，加入PBS，37℃水浴摇床振荡1h，探头超声45min，0.22μm滤膜过滤，得Disks和AMP-Disks。
制备载DiO、DiI和DiD纳米圆盘：
采用乙腈溶解DiO、DiI及DiD，与上述圆盘膜材一起成膜，后续步骤与空白圆盘的制备相同，得载DiO、DiI和DiD纳米圆盘(Disks/3D)和AMP-Disks/3D)；
纳米圆盘的表征：
采用激光粒度散射仪测定纳米圆盘的粒径及其分布和Zeta电位；采用低温透射电镜(Cryo-EM)拍摄纳米圆盘形态，结果如图4、图5与表1所示。
表1圆盘/3D的粒径及电位
实施例3腺苷受体检测
采用裂解液(1％Triton X-100，NaCl 150mmol/L，Tris-HCl(pH 7.4，50mmol/L)，0.5％SDS)对U87及bEnd.3细胞进行裂解。将需要裂解的样品置于冰上，按照200μl/孔(6孔板)的比例加入裂解液。裂解约10min，将裂解后的混合液转移至1.5ml EP管中。按照裂解液∶甲醇∶氯仿的比例＝1∶1∶0.25加入甲醇及氯仿，混合均匀。离心5min，弃除上清，再加入与裂解液等体积的甲醇，混合均匀，离心5min，弃上清，得蛋白沉淀。晾干10min左右，加入上样缓冲液重悬蛋白，煮沸10min，制得样品，Western-Blot检测腺苷A1受体，结果如图6所示。
实施例4 AMP-Disks/3D跨越BBB评价
AMP-Disks/3D跨越体外BBB评价：
将脑毛细血管内皮细胞bEnd.3铺至24孔板中的transwell小室(0.33cm2，孔径1μm)中，待其铺满，即得体外BBB模型构建。将AMP-Disks/3D、Disks/3D分别分散于新鲜培养基中，加入上室，下室更换为PBS溶液，不同时间点取下室溶液进行荧光检测，同时补加新鲜PBS，结果如图7所示；
AMP-Disks/3D跨越体内BBB评价：
将Disks/3D及AMP-Disks/3D以尾静脉注射的方式注入ICR小鼠体内，一定时间后将小鼠麻醉，采用生理盐水和多聚甲醛进行心脏灌流及固定后取脑组织，用活体成像系统(IVIS Spectrum)观察脑组织中的荧光分布，同时对脑组织进行切片分析，结果如图9所示。
实施例5 AMP-Disks/3D胶质瘤靶向性评价
AMP-Disks/3D被U87细胞的摄取能力：
取对数生长期的U87细胞消化并计数，以每孔2×104cells接种于24孔板，培养24h后，将一定浓度的Disks/3D与AMP-Disks/3D加入新鲜培养基中，替换原细胞培养基，培养一定时间后进行流式细胞检测与激光共聚焦(DAPI：激发波长405nm，发射波长410-450nm；纳米圆盘：激发波长488nm，发射波长650-750nm)拍照，结果如图8所示；
AMP-Disks/3D体内脑胶质瘤靶向性评价：
取对数生长期的U87细胞，消化并计数，用PBS缓冲液重悬细胞，每只裸鼠接种6×105个细胞(分散于5μLPBS缓冲液中)。将裸鼠用7％水合氯醛麻醉，脑立体定位仪固定，采用微量注射器将细胞接种于纹状体部位(前囟向前0.6mm，向右1.8mm，纵深3mm)，肿瘤细胞接种20天后，进行实验，
将Disks/3D及AMP-Disks/3D以尾静脉注射的方式注入U87原位脑胶质瘤裸鼠体内，一定时间后将裸鼠麻醉，采用生理盐水和多聚甲醛进行心脏灌流及固定后取脑组织及正常器官，用活体成像系统观察脑组织及正常器官中的荧光分布，同时对脑组织进行切片分析，结果如图10所示。
实施例6载Melittin圆盘抗脑胶质瘤药效评价
载Melittin圆盘的制备与表征：
将Melittin溶于PBS，配制10mg/mL Melittin母液，以1∶10体积比加入空白纳米圆盘悬液中，室温下孵育过夜，以PBS为洗脱液过Sephadex G50凝胶柱纯化，得载Melittin纳米圆盘(AMP-Disks/Melittin或Disks/Melittin)。采用激光粒度散射仪测定圆盘的粒径及其分布和Zeta电位，结果如表2所示；采用冷冻电镜观察载Melittin圆盘的形貌，结果如图11所示；
表2圆盘/Melittin的粒径及电位
AMP-Disks/Melittin的体外药效学考察：
取对数生长期的U87细胞，消化并计数，以每孔5000个接种于96孔板中留出三孔加入不含细胞的培养液作为空白孔，置于细胞培养箱。24h后，分别加入倍比稀释的Disks、AMP-Disks、Disks/Melittin和AMP-Disks/Melittin样品，Melittin浓度为0.03～17.56μM，空白圆盘样品的载体材料浓度与载药样品的载体材料浓度相同，每个浓度均设三复孔，留出三孔加入不含样品的培养液作为对照孔；将96孔板置于细胞培养箱中孵育72h，每孔加入20μL 5mg/mL的MTT溶液，继续孵育4h后，弃去孔内培液，每孔加入150μL DMSO，低速振荡20min使孔底部蓝紫色结晶充分溶解，酶标仪测定各孔在490nm波长下的吸光度，按下式计算各孔细胞存活率，
用GraphPad Prism软件将存活率对药物浓度对数值作图，计算半数抑制浓度，结果如图12所示；
AMP-Disks/Melittin的抗U87原位胶质瘤药效考察：
取U87原位脑胶质瘤模型鼠30只，分为3组，每组10只：PBS对照组、AMP-Disks/Melittin和Disks/Melittin，Melittin单次给药剂量为5mg/kg。在肿瘤细胞接种后第8天开始尾静脉注射给药，每两天给药一次，共给药5次，每天观察裸鼠状态，记录裸鼠生存时间，绘制生存曲线，结果如图13所示。

Claims (10)

1.一种腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，利用腺苷单磷酸通过分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含有氨基或羧基基团的影像物质反应，获得AMP-X复合物；或，
利用腺苷单磷酸通过分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含有氨基或羧基基团的治疗药物连接，获得AMP-Y复合物；或，
利用腺苷单磷酸通过分子中磷酸根或经二胺化合物衍生化后，与含有氨基或羧基基团的聚乙二醇-Z复合物连接，获得AMP-聚乙二醇-Z复合物。
2.按权利要求1所述的腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，所述的AMP-X复合物，其中X是荧光物质Fluorescein，近红外染料Cy7、IR820、DiR，磁共振影像剂Gd-DTPA，放射影像剂99mTc-DTPA，可用作脑部肿瘤或外周肿瘤的影像诊断和示踪。
3.按权利要求1所述的腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，所述的AMP-Y复合物中，Y是阿霉素蒽环类抗肿瘤药物、紫杉醇紫杉烷类抗肿瘤药物、9-硝基喜树碱喜树碱类抗肿瘤药物、长春新碱长春碱类抗肿瘤药物、硼替佐米佐米类抗肿瘤药物、小白菊内酯内酯类抗肿瘤药物或p53激活肽多肽类抗肿瘤药物，可用作脑部肿瘤或外周肿瘤的靶向治疗。
4.按权利要求1所述的腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，所述的AMP-聚乙二醇-Z复合物中，Z是磷脂、聚乳酸(PLA)、乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)或聚己内酯(PCL)。
5.按权利要求4所述的腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，所述的AMP-聚乙二醇-磷脂复合物在用于制备脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统或聚合物圆盘递药系统中的用途。
6.按权利要求4所述的腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，所述的AMP-聚乙二醇-聚乳酸复合物、AMP-聚乙二醇-乳酸羟基乙酸共聚物复合物或AMP-聚乙二醇-聚己内酯复合物在用于制备聚合物胶束递药系统或纳米粒递药系统中的用途。
7.按权利要求5或6所述的腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，所述的脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统、聚合物圆盘递药系统或纳米粒递药系统，可用于包载诊断药物。
8.按权利要求7所述的腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，所述的递药系统所包载诊断药物是FAM、近红外染料Cy5.5、IR820、DiR、DiD或磁共振影像剂Gd-DTPA，用于脑部肿瘤或外周肿瘤的影像诊断和示踪。
9.按权利要求7所述的腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，所述的脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统、聚合物圆盘递药系统或纳米粒递药系统，用于包载抗肿瘤药物。
10.按权利要求9所述的腺苷单磷酸(AMP)复合物，其特征是，所述的递药系统所包载抗肿瘤药物是阿霉素蒽环类抗肿瘤药物、紫杉醇紫杉烷类抗肿瘤药物、9-硝基喜树碱喜树碱类抗肿瘤药物、长春新碱长春碱类抗肿瘤药物、硼替佐米佐米类抗肿瘤药物、小白菊内酯内酯类抗肿瘤药物、p53激活肽和蜂毒肽、蝎毒肽多肽类抗肿瘤药物，用作脑部肿瘤或外周肿瘤的靶向治疗。
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