CN110051706A - 猪苓提取物的制备方法及其在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的药物/保健品方面的应用 - Google Patents

猪苓提取物的制备方法及其在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的药物/保健品方面的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种猪苓提取物的制备方法及其在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的药物/保健品方面的应用。本发明的有益效果在于：1、本发明所述猪苓提取物的制备工艺简洁高效，价格便宜，成本低；2、本发明采用乙醇、水或者乙醇和水的混合溶剂作为溶剂提取猪苓，不存在有机溶剂污染或残留的问题，安全环保；3、本发明猪苓提取物具有显著的降尿酸作用，不同于只能作为保健品的食用菌提取物的作用，该猪苓提取物具有几乎与现有药物等同的降尿酸作用，从而使其的药物化可以成为现实；4、本发明的猪苓提取物猪苓提取物对肝、肾无毒性，为改善目前痛风病药物副作用大的现象提供了新的方向。

Description

猪苓提取物的制备方法及其在制备治疗/预防高尿酸相关疾 病的药物/保健品方面的应用
技术领域
本发明涉及一种食用菌提取物的制备方法及其在治疗/预防高尿酸相关疾病的药物/保健品方面的应用，尤其涉及一种猪苓提取物的制备方法及其在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的药物/保健品方面的应用。
背景技术
尿酸是嘌呤代谢分解的最终产物。由于某些原因产生尿酸过多或由于肾脏排泄尿酸减少都可引起血中尿酸含量增高。高尿酸相关疾病是体内尿酸的产生增加，肾尿酸的排泄减少，使得体内尿酸浓度高于血液溶解能力(>360μmol/L)的一类疾病。随着现代生活习惯和饮食结构的改变，高尿酸相关疾病的发病率升高。血中尿酸过多对人体危害巨大。例如，尿酸以晶体形式在关节中沉积，并导致反复发作导致痛风和尿酸性肾结石。此外，这些沉积结晶引起软组织、关节和骨组织反复发炎性剧烈疼痛，严重降低患者生活质量。
高尿酸相关疾病的治疗需要降低体内血尿酸浓度。目前，主要是从尿酸生成抑制或者促进尿酸排泄两方面来治疗或预防高尿酸相关疾病。首先，从促进尿酸排泄方面，在肾单位的细胞上的特定转运蛋白(如肾尿酸转运蛋白URAT1)是高尿酸血症的重要靶点。阿片类药物，如丙磺舒，磺吡酮和苯溴马隆均是直接作用于肾小管靶点的药物，它们通过与一种或多种转运蛋白相互作用来抑制尿酸盐重吸收，增加尿酸的肾排泄，但是由于过敏反应等不良副作用而使其使用受限。其次，从抑制尿酸生成方面，黄嘌呤氧化酶(XOD)是另一个重要的靶标，主要分布在肝脏和肠道，并在嘌呤代谢途径中将次黄嘌呤和黄嘌呤氧化成尿酸。现抑制XOD的降尿酸药物可分为嘌呤和非嘌呤类。别嘌呤醇是最常用的临床XOD嘌呤类抑制剂，但由于它可引起史蒂文斯—约翰逊综合征和肾毒性等毒副作用而备受争议。非布索坦是一种非嘌呤XOD抑制剂，因其会导致心血管并发症，食品和药物管理局(FDA)也要补充该药物的警示性声明。
因此，迫切需要开发有效和安全的新型降尿酸药物。
食用菌提取物作为一种治疗药物候选物，由于其可能的副作用较小的优点而受到广泛关注，但是食用菌提取物作为药物候选物，通常存在治疗效果较差以及提取率太低而无法工业化的问题。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种有效的可以实用化的食用菌提取物用于治疗/预防高尿酸相关疾病。
本发明通过以下方案达到上述目的：
第一方面，提供一种猪苓提取物的制备方法，包括：
(1)将猪苓子实体粉碎；
(2)在0-100℃的水浴中用1-40L/(100g猪苓)的乙醇萃取0.5-6小时，过滤分离滤渣和滤液，重复三次；
(3)将步骤(2)所得的滤液合并后浓缩至25-35mL/(100g猪苓)，冻干得到猪苓醇提物；
(4)在0-100℃的水浴中用水作为溶剂萃取醇提后的猪苓残渣0.5-6小时，过滤分离滤渣和滤液，重复三次；
(5)将步骤(4)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g猪苓)，冻干得到猪苓水提物。
优选的，所述步骤(2)中的提取温度为60℃。
优选的，所述步骤(4)中的提取温度为85℃。
在一个优选的实施例中，猪苓提取物的制备方法，包括：
(1)将干燥的猪苓子实体粉碎；
(2)在60℃的水浴中用2L/(100g猪苓)猪苓的乙醇萃取3小时，减压过滤分离滤渣和滤液，重复三次；
(3)将步骤(2)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g猪苓)，冻干得到猪苓醇提物；
(4)在85℃的水浴中用水作为溶剂萃取醇提后的猪苓残渣3小时，减压过滤分离滤渣和滤液，重复三次；
(5)将步骤(4)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g猪苓)，冻干得到猪苓水提物。
优选的，所述步骤(2)的萃取为超声提取。
优选的，所述步骤(4)的萃取为超声提取。
经过上述提取方法和参数，猪苓醇提物和猪苓水提物的提取率能达到5％左右，可以实现产业化使用。
本发明制备猪苓提取物的方法简洁、安全、有效且能有效控制成本。制备方法使用资源丰富、价格便宜、环境友好的乙醇、水或者乙醇和水混合物作为溶剂，达到降低生产成本、避免有机溶剂污染的目的。
在第二方面，本发明提供一种上述制备方法制备得到的猪苓提取物，包括猪苓醇提物和猪苓水提物。
在第三方面，本发明提供一种红猪苓提取物在治疗/预防高尿酸相关疾病方面的应用。
在第四方面，本发明提供一种猪苓提取物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的药物/保健品方面的应用。
在第五方面，本发明提供一种治疗/预防高尿酸相关疾病的药物，包括猪苓提取物及辅料。
优选的，所述辅料包括可药用的载体。
发明人发现，猪苓醇提物和猪苓水提物在较高的浓度下，不仅出乎意料地降尿酸效果降低，而且还表现出没有肝肾毒性。
在上述应用和药物中，猪苓醇提物的优选浓度为20-180mg/kg，更优选为50-150mg/kg，例如100mg/kg。
在上述优选的浓度范围内，猪苓醇提物的降尿酸效果明显，并且没有肝、肾毒性，甚至具有肝功能修复效果。
在上述应用和药物中，猪苓水提物的优选浓度为20-180mg/kg，更优选为50-150mg/kg，例如100mg/kg。
在上述优选的浓度范围内，猪苓水提物的降尿酸效果明显，并且没有肝、肾毒性。
在上述应用和药物中，高尿酸相关疾病包括但不限于高尿酸血症、高尿酸血症肾炎、高尿酸血症高血压、高尿酸血症心脏病、痛风肾结石、痛风。
利用以上方法制得的猪苓提取物进行小鼠体内降尿酸试验，结果表明用猪苓提取物连续灌胃7天，可将高尿酸小鼠的血液尿酸浓度降低到低于正常小鼠尿酸水平，通过药理实验验证OAT3、OCT2、GLUT9和URAT1可能为其降尿酸靶点。
因此，进一步地，本发明还提供一种猪苓提取物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病而没有肝肾毒性的药物/保健品方面的应用。
进一步地，本发明还提供一种猪苓水提物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病而没有肝肾毒性的药物/保健品方面的应用。
进一步地，本发明还提供一种猪苓醇提物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病而没有肝肾毒性的药物/保健品方面的应用。
因此，进一步地，本发明还提供一种猪苓提取物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病并具有肝功能修复效果的药物/保健品方面的应用。
进一步地，本发明还提供一种猪苓水提物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病并具有肝功能修复效果的药物/保健品方面的应用。
进一步地，本发明还提供一种猪苓醇提物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病并具有肝功能修复效果的药物/保健品方面的应用。
本发明的有益效果在于：
1、本发明所述猪苓提取物的制备工艺简洁高效，价格便宜，成本低；
2、本发明采用乙醇、水或者乙醇和水的混合溶剂作为溶剂提取猪苓，不存在有机溶剂污染或残留的问题，安全环保；
3、本发明猪苓提取物具有显著的降尿酸作用，不同于只能作为保健品的食用菌提取物的作用，该猪苓提取物具有几乎与现有药物等同的降尿酸作用，从而使其的药物化可以成为现实；
4、本发明的猪苓提取物猪苓提取物对肝、肾无毒性，为改善目前痛风病药物副作用大的现象提供了新的方向。
附图说明
图1为各组小鼠血清尿酸水平。
图2为各组小鼠尿液尿酸水平。
图3为各组小鼠血清尿素氮水平。
图4为各组小鼠血清肌酐水平。
图5为各组小鼠血清ALT(丙氨酸氨基转移酶)活性水平。
图6为各组小鼠血清AST(天门冬氨酸氨基转移酶)活性水平。
图7为各组小鼠血清ALP(碱性磷酸酶)活性水平。
图8为各组小鼠体重增长情况。
图9为各组小鼠肝脏系数。
图10为各组小鼠肾系数。
图11为各组小鼠脾系数。
图12为各组小鼠胸腺系数。
图13为应用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)检测小鼠肾离子转运基因ABCG2的表达情况。
图14为应用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)检测小鼠肾离子转运基因OAT1的表达情况。
图15为应用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)检测小鼠肾离子转运基因OAT3的表达情况。
图16为应用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)检测小鼠肾离子转运基因OCT2的表达情况。
图17为应用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)检测小鼠肾离子转运基因GLUT9的表达情况。
图18为应用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)检测小鼠肾离子转运基因URAT1的表达情况。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1：猪苓乙醇提取物的制备
取猪苓子实体100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，并加入2L乙醇，将混合物在65℃下水浴提取3小时后使用400目滤网过滤。提取实验重复三次，将所得滤液合并后减压蒸馏浓缩并冻干得到猪苓乙醇提取物(PUE)2.33g，产率为2.33％。
实施例2：猪苓水提取物的制备
在85℃的水浴中用2L水作为溶剂萃取醇提后的猪苓残渣3小时，后减压过滤分离滤渣和滤液，提取实验重复三次，将所得滤液合并后减压蒸馏浓缩并冻干得到水提取物(PUW)2.95g，产率为2.95％。
试验例1
猪苓提取物降尿酸药理实验
(1)取100只雄性SPF昆明小鼠(20±2g)，随机分为10组：正常对照组，高尿酸血症模型组，别嘌呤醇和苯溴马隆对照以及高、中、低剂量的猪苓醇提物(PUE)实验组和高、中、低剂量的猪苓水提物(PUW)实验组给药组。除正常对照组腹腔注射和灌胃蒸馏水外，其他组按照300mg/kg/d的剂量腹腔注射氧嗪酸钾盐，同时灌胃500mg/kg/d剂量的次黄嘌呤造模。造模前一个小时禁食不禁水，造模后1小时，用别嘌呤醇(5mg/kg)和苯溴马隆(7.8mg/kg)灌胃给药予别嘌呤醇和苯溴马隆对照的小鼠。对于药物组，低、中、高剂量的猪苓醇提物实验组(PUE)分别以50，100，200mg/kg浓度的实施例1制得的猪苓醇提取物按100mg/kg/d的剂量进行灌胃给药；低、中、高剂量的猪苓水提物实验组(PUW)分别以50，100，200mg/kg浓度的实施例2制得的猪苓水提取物按100mg/kg/d的剂量进行灌胃给药，正常对照组和高尿酸血症模型对照组则灌胃相同体积的纯水，连续7天，并在第1、3、5、7天对小鼠称重记录。
(2)第7天灌胃给药1小时后，处死取血和尿液使用离心机在3500r/min速度下离心10min所得的血液样本分离得到血清存于-20℃。摘除小鼠脏器官，包括肝脏、脾脏、肾脏。并用生理盐水溶液洗涤。然后用普通过滤器吸干，称重。
(3)取(2)中所得血清和尿液分别测定血清尿酸水平，尿液尿酸水平，血清尿素氮和肌酐含量和ALT、AST和ALP活性水平。
(4)通过RT-PUR分析(4)所得的肾组织，检测小鼠主要的肾脏转运蛋白，包括URAT1(尿酸转运蛋白1)、GLUT9(葡萄糖转运蛋白9)、ABCG2(ATP结合转运蛋白G超家族成员2)、OAT1(有机阴离子转运蛋白1)、OAT3(有机阴离子转运蛋白3)和OCT2(有机阳离子转运蛋白2)的基因表达情况。
(5)统计分析使用专业数据处理程序SPSS(Release 17.0，SPSS Inc.，2008)进行。所有数据表示为平均值±标准误差(S.D.)，并通过单因素方差分析(ANOVA)进行分析，并通过双尾Student's t检验比较组平均值。差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)的用以下符号表示：与正常组对照有差异：*P<0.05，**P<0.01；与氧嗪酸钾和次黄嘌呤诱导的高尿酸血症模型组对照有差异，#P<0.05，##P<0.01；与别嘌呤醇组对照有差异，△P<0.05，△△P<0.01。
血尿酸是评价降尿酸效果的直接指标，结果如图1所示。氧嗪酸钾和次黄嘌呤联合给药导致高尿酸血症模型组血清尿酸水平升高，与正常小鼠(71μmol/L)相比，高尿酸血症小鼠显著升高至526μmol/L(P<0.01)，说明造模成功。降尿酸阳性药别嘌呤醇(297mol/L，P<0.01)和苯溴马隆(258μmol/L，P<0.01)对照组的血尿酸水平下降也证实了高尿酸血症造模的成功。重要的是，在50、100和200mg/kg剂量的PUE给药组中，高尿酸血小鼠的血尿酸水平分别下降到299、173和348μmol/L(P<0.05)。此外，PUW在50、100和200mg/kg的给药剂量使得高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平降低至269、204和202μmol/L(P<0.01)。PUE和PUW都在这个模型中表现出优于阳性药对照的降血尿酸作用。值得注意的是，高剂量(200mg/kg)的PUE反而带来了降尿酸效果的显著降低，而高剂量的PUW(200mg/kg)没有带来降尿酸效果的增加。
由于尿酸通过肾脏排泄，与血尿酸水平直接相关，本例为阐明用PUE和PUW治疗的血尿酸水平降低可能是由于肾尿酸排泄的增强，测定它们对尿尿酸水平的影响，结果如图2所示。与正常组(1.10mmol/L)相比，在模型组(7.02mmol/L，P<0.01)中观察到尿酸水平的显著上升，通过别嘌呤醇给药(4.19mmol/L，P<0.05)会抑制尿酸的排除。7.8mg/kg的苯溴马隆和50、100和200mg/mL的PUE尿尿酸含量的为5.90、8.05、7.99和9.10mmol/L，PUE显示出良好的促尿酸排泄作用。而50、100和200mg/kg剂量的PUW的尿酸表达分别为4.42、5.61和4.57mmol/L，与模型组无差异(P>0.05)。这说明，PUW可能不是通过促进尿酸排泄达到降尿酸效果，而PUE的剂量对于排泄尿酸的效果影响不大。
为研究PUE和PUW对肾功能的影响，我们还测定高尿酸血症小鼠肾功能参数。尿素氮是肾功能主要指标之一。尿素氮是人体蛋白质代谢的主要终末产物，主要由肾小球(肾脏的重要组成部分)滤过排出体外。在肾功能损害早期，血尿素氮可在正常范围。当肾小球滤过率下降到正常的50％以下时，血尿素氮的浓度才迅速升高。因此，血尿素氮水平反映了肾功能的状况：血尿素氮的水平越高，肾功能的损伤程度越严重。结果如图3所示，由于氧嗪酸钾与次黄嘌呤组合给药的部分替代氧嗪酸钾纯给药模型的肾损伤作用，高尿酸模型组(3.72mmol/L)比正常小鼠(2.31mmol/L，P>0.05)的BUN水平更高。别嘌呤醇组(9.84mmol/L，P<0.01)、苯溴马隆组(5.24mmol/L，P>0.05)、200mg/ml PUE(4.83mmol/L，P>0.05)、100mg/ml PUW(4.29mmol/L，P>0.05)和200mg/ml PUW(6.22mmol/L，P<0.01)的BUN比模型组更高，表明别嘌呤醇和苯溴马隆使高尿酸血症小鼠的肾功能受损。与别嘌呤醇组相比，用低、中剂量PUE给药的血清尿素氮含量分别为3.60和3.18mmol/L，与正常组小鼠没有较大差异(P>0.05)；低中剂量PUW给药组血清尿素氮含量为3.79mmol/L，与模型组无差异(P>0.05)。这说明，低中剂量的PUE和PUW都没有表现出肾功能毒性，而高剂量的PUE和PUW表现出了与苯溴马隆相当的肾功能毒性，但是仍然显著优于别嘌呤醇的肾功能毒性。
肌酐，是含氮有机代谢物的代谢终产物，由肾小球滤过，随尿液排出。但肾功能受损失，肌酐含量上升。因此肌酐值成为评价肾功能的主要指标之一。如图4所示，氧嗪酸钾和次黄嘌呤的给药能使正常小鼠的血清肌酸酐水平(34.8μmol/L)升高至(40.9μmol/L，P>0.05)。与高尿酸血症模型组相比，剂量分别为50和100mg/kg的PUW和PUE给药组的血清肌酸酐水平分别为34.0、27.3、46.6、38.9和43.0μmol/L，对高尿酸小鼠的肌酐水平有降低或有不显著的升高(P>0.05)作用。而别嘌呤醇、苯溴马隆和高剂量的PUE和PUW使小鼠血清肌酐水平升至62.8、54.0、56.5μmol/L(P<0.01)，说明对肾脏造成较强损伤。这说明，低中剂量的PUE和PUW都没有表现出肾功能损伤，而高剂量的PUE和PUW表现出了肾功能损伤，优于苯溴马隆的肾功能损伤，以及显著优于别嘌呤醇的肾功能损伤。
ALT、AST和ALP活性通常在临床上作为肝细胞损伤诊断评估指标，以确定肝脏健康。
各组小鼠的血清ALT活性水平如图5所示，造模给药没有引起ALT活性的显著增加(P>0.05)。与高尿酸血症对照相比，别嘌呤醇引起ALT活性显著上升(P<0.01)。与别嘌呤醇对照相比，PUE给药组对ALT活性具有一定的抑制作用(P>0.05)且低剂量更优。PUW组具有一定的增强ALT活性的作用，高剂量组表现尤为明显(P<0.01)。
各组小鼠的血清AST活性水平如图6，所示造模给药没有引起AST活性的显著增加(P>0.05)。与高尿酸血症对照相比，别嘌呤醇引起AST活性显著上升(P<0.01)。与别嘌呤醇对照相比，猪苓给药组AST水平上升程度较轻，而且低剂量的PUE和PUW能轻微抑制AST(P>0.05)。
各组小鼠的血清ALP活性水平如图7所示，造模给药抑制了ALP活性(P>0.05)。与高尿酸血症对照相比，别嘌呤醇引起ALP活性上升(P<0.05)。50和100mg/mL剂量给药组对AST活性具有一定的抑制作用(P>0.05)。而高剂量组会导致ALP具有一定的上升(P>0.05)
上述结果说明，低剂量和中剂量的PUE组没有肝毒性，甚至表现出了肝恢复的效果，低剂量和中剂量的PUW也没有表现肝毒性。而高剂量的PUE和PUW表现出了肝毒性。这说明，需要控制PUE和PUW的剂量。
各组小鼠体重变化如图8所示，与模型组小鼠相比，本研究中使用的所有剂量的PUE和PUW均未影响体重(P>0.05)。而别嘌呤醇组的体重自第三天以来，一直呈显著下降的趋势(P<0.01)。
内脏器官重量变化是一个敏感的指标，在毒理学实验中，给药组和为给药组之间的器官系数通常被用来评估药物的毒性大小。各组小鼠的肝脏系数如图9所示，模型组与所有治疗组肝脏系数均无差异，说明别嘌呤醇、苯溴马隆、PUE和PUW对肝指数影响不大。
各组小鼠的肾脏系数如图10所示，造模给药使得正常小鼠(1.22％)的肾脏指数显著上升(1.81％，P<0.01)。别嘌呤醇组(1.73％)和苯溴马隆组(1.94％)的肾脏系数明显高于正常组(P<0.01)。不同剂量的PUE和PUW肾脏系数分别为1.74％、1.69％、1.85％、1.68％、1.62％和1.80％，均与模型组小鼠的肾脏指数差异不大(P>0.05)，表明PUE和PUW对肾功能无保护作用。
各组小鼠的脾脏系数如图11所示，模型组的脾系数(0.55％)略高于正常组(0.52％，P>0.05)。别嘌呤醇组(0.42％，P<0.01)和苯溴马隆组(0.44％，P<0.05)的脾脏系数明显低于模型组。PUE和PUW的低、中、高剂量的脾脏系数显示为0.51％、0.51％、0.51％、0.53％、0.56％和0.54％，与正常组无显著性差异(P>0.05)，PUE和PUW没有表现出脾脏毒性。
各组小鼠的胸腺系数如图12所示，与正常组相比，模型组(0.37％，P<0.05)、别嘌呤醇组(0.34％，P<0.01)和苯溴马隆组(0.36％，P<0.05)的胸腺系数均明显低于正常组(0.42％)。50、100和200mg/ml PUE和100PUW给药组的胸腺系数分别为0.42％、0.40％、0.38％、0.43％、0.41％和0.37％，与正常无显著性差异(P>0.05)，PUE和PUW没有表现出胸腺毒性。
小鼠主要肾离子转运蛋白的基因表达情况如图13-图18所示。肾离子转运蛋白的mRNA的显著改变。高剂量高尿酸血症诱导剂对正常小鼠的ABCG2、OAT1、OAT3和OCT2 mRNA(P<0.01)表达有明显的抑制作用。与高尿酸血症对照相比，PUE和PUW改善了OAT3和OCT2的mRNA表达，PUW能够提升OAT1的mRNA表达。另一方面，造模剂使GLUT9和URAT1 mRNA略微升高(P<0.01)，苯溴马隆、PUE和PUW能够显著抑制GLUT9和URAT1(P<0.05)。但PUE和PUW并不能上调ABCG2，且PUE对OAT1也无上调作用。
上述结果说明，本发明猪苓的乙醇(PUE)和水(PUW)提取物使高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平显著降低，接近正常组水平。PUE和PUW显示对OAT3、OCT2、GLUT9和URAT1而不是ABCG2蛋白的抑制作用。PUW也有可能通过提高OAT1的蛋白表达量达到降尿酸的作用。另外，高剂量猪苓提取物对肝、肾会有一定影响，因此需要控制给药剂量。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种猪苓提取物的制备方法，其特征在于，包括：
(1)将猪苓子实体粉碎；
(2)在0-100℃的水浴中用1-40L/(100g猪苓)的乙醇萃取0.5-6小时，过滤分离滤渣和滤液，重复三次；
(3)将步骤(2)所得的滤液合并后浓缩至25-35mL/(100g猪苓)，冻干得到猪苓醇提物；
(4)在0-100℃的水浴中用水作为溶剂萃取醇提后的猪苓残渣0.5-6小时，过滤分离滤渣和滤液，重复三次；
(5)将步骤(4)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g猪苓)，冻干得到猪苓水提物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的提取温度为60℃；和/或，所述步骤(4)中的提取温度为85℃。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括：
(1)将干燥的猪苓子实体粉碎；
(2)在60℃的水浴中用2L/(100g猪苓)的乙醇萃取3小时，减压过滤分离滤渣和滤液，重复三次；
(3)将步骤(2)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g猪苓)，冻干得到猪苓醇提物；
(4)在85℃的水浴中用水作为溶剂萃取醇提后的猪苓残渣3小时，减压过滤分离滤渣和滤液，重复三次；
(5)将步骤(4)所得的滤液合并后减压蒸馏浓缩至25-35mL/(100g猪苓)，冻干得到猪苓水提物。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的萃取为超声提取；和/或，所述步骤(4)的萃取为超声提取。
5.一种权利要求1至4中任一所述的制备方法制备得到的猪苓提取物，其特征在于，包括猪苓醇提物和猪苓水提物。
6.一种权利要求5所述的猪苓提取物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病的药物/保健品方面的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，猪苓醇提物的浓度为20-180mg/kg，优选为50-150mg/kg；和/或，猪苓水提物的浓度为20-180mg/kg，优选为50-150mg/kg。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，一种猪苓提取物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病而没有肝肾毒性的药物/保健品方面的应用。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，本发明还提供一种猪苓提取物在制备治疗/预防高尿酸相关疾病并具有肝功能修复效果的药物/保健品方面的应用。
10.一种治疗/预防高尿酸相关疾病的药物，其特征在于，包括权利要求5所述的猪苓提取物及辅料。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110946761A (zh) * 2019-12-17 2020-04-03 东阿阿胶股份有限公司 一种猪苓汤基准物质的制备方法和定性检测方法
CN114288337A (zh) * 2022-01-14 2022-04-08 江苏农牧科技职业学院 一种用于防治雏鹅痛风的中药组合物及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010108709A (ko) * 2000-05-31 2001-12-08 이용규 저령버섯으로 부터 약리학적 활성다당체(베타-글루칸)분획 추출
CN1683001A (zh) * 2005-03-14 2005-10-19 庹元斌 一种治疗痛风的中药制剂

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010108709A (ko) * 2000-05-31 2001-12-08 이용규 저령버섯으로 부터 약리학적 활성다당체(베타-글루칸)분획 추출
CN1683001A (zh) * 2005-03-14 2005-10-19 庹元斌 一种治疗痛风的中药制剂

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
殷党跃: "猪苓多糖分离纯化及其生物活性初探", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 *
王弘等: "猪苓药材的质量评价标准研究 ", 《中草药》 *
褚梦真等: "祛湿类单味中药对尿酸代谢的研究", 《中国中药杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110946761A (zh) * 2019-12-17 2020-04-03 东阿阿胶股份有限公司 一种猪苓汤基准物质的制备方法和定性检测方法
CN114288337A (zh) * 2022-01-14 2022-04-08 江苏农牧科技职业学院 一种用于防治雏鹅痛风的中药组合物及其制备方法

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