CN110036912A - 一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法 - Google Patents

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Abstract

本发明公开了一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，提出了以下步骤：S1，根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，S2，将S1中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，S3，将S1中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，S4，用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入S3中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，S5，将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码，瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。本培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养，在国内外得到广泛应用，在组织培养中，由于无机盐的数量比较低，更适合木本植物的组织培养。

Description

一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法
技术领域
本发明涉及黑老虎培育技术领域，尤其涉及一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法。
背景技术
培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。因此，在组织培养的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成，无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的；磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势，钙、钠、镁的需要则较少，培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供，微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
现有技术中，由于市场对黑老虎的需求量日益增高，同时黑老虎的产量一直是比较固定的，所以我们有必要自作一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基，来增加其生长的进度和抗病的能力以满足人们的需求。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，包括以下步骤：
S1，根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。
S2，将S1中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。
S3，将S1中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，搅拌均匀，配成培养基。
S4，用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入S3中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到5.8。
S5，将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶(或试管)中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码，瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。
所述培养基的成分比较复杂，为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉，可以准备一份配制培养基的成分单，将培养基的全部成分和用量填写清楚，配制时，按表列内容顺序，按项按量称取，避免出现差错。
所述配制植物生长素时，先按要求浓度称好药品，置于小烧杯或容量瓶中，用1～2毫升0.1N(克当量浓度)氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度，配制细胞分裂素时，应先用少量0.5或1N的盐酸溶解，然后加蒸馏水至所需量，以上各种所述混合液(母液)或单独配制药品，均放入冰箱中保存，以免变质、长霉，至于蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，随称随用。
为了避免每次配制的所述培养基都要对几十种化学药品进行称量，应将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
所述培养基配制完毕后，进行立即灭菌，培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内，在汽相120℃条件下，灭菌20分钟，也能够采用间歇灭菌法进行灭菌，即将培养基煮沸10分钟，24小时后再煮沸20分钟，如此连续灭菌三次，即可达到完全灭菌的目的，经过灭菌的培养基应置于10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基，在4～5℃低温下保存要更好些，含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的一周内使用完，其它培养基最多也不应超过一个月，在多数情况下，应在消毒后两周内用完。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1.本培养基具有较高的无机盐浓度，对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利，由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存、消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响离子间的平衡，固体培养基可用来诱导愈伤组织，或用于胚、茎段、茎尖及花药培养，它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功，这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要，因此，一般情况下，无须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分，与其它培养基的基本成分相比，培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的明显特点。
2.培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养，在国内外得到广泛应用，在组织培养中，本培养基由于无机盐的数量比较低，更适合木本植物的组织培养。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1：一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。
S2，将S1中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。
S3，将S1中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，搅拌均匀，配成培养基。
S4，用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入S3中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到5.8。
S5，将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶(或试管)中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码，瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。
其中S1中将用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，同时培养基的成分比较复杂，为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉，可以准备一份配制培养基的成分单，将培养基的全部成分和用量填写清楚，配制时，按表列内容顺序，按项按量称取，避免出现差错。
实施例2：一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。
S2，将S1中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。
S3，将S1中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，搅拌均匀，配成培养基。
S4，用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入S3中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到5.8。
S5，将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶(或试管)中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码，瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。
其中S4中用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入S3中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到5.8，当然为了避免每次配制的所述培养基都要对几十种化学药品进行称量，应将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
实施例3：一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。
S2，将S1中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。
S3，将S1中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，搅拌均匀，配成培养基。
S4，用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入S3中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到5.8。
S5，将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶(或试管)中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码，瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。
其中S5将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶(或试管)中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码，瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5，同时经过灭菌的培养基应置于10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基，在4～5℃低温下保存要更好些，含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的一周内使用完，其它培养基最多也不应超过一个月，在多数情况下，应在消毒后两周内用完。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。
S2，将S1中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。
S3，将S1中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，搅拌均匀，配成培养基。
S4，用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入S3中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到5.8。
S5，将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶(或试管)中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码。瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。
2.根据权利要求1所述的一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，所述培养基的成分比较复杂，为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉，可以准备一份配制培养基的成分单，将培养基的全部成分和用量填写清楚，配制时，按表列内容顺序，按项按量称取，避免出现差错。
3.根据权利要求1所述的一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，所述配制植物生长素时，先按要求浓度称好药品，置于小烧杯或容量瓶中，用1～2毫升0.1N(克当量浓度)氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度。配制细胞分裂素时，应先用少量0.5或1N的盐酸溶解，然后加蒸馏水至所需量，以上各种所述混合液(母液)或单独配制药品，均放入冰箱中保存，以免变质、长霉，至于蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，随称随用。
4.根据权利要求1所述的一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，为了避免每次配制的所述培养基都要对几十种化学药品进行称量，应将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
5.根据权利要求1所述的一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，所述培养基配制完毕后，进行立即灭菌，培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内，在汽相120℃条件下，灭菌20分钟，也能够采用间歇灭菌法进行灭菌，即将培养基煮沸10分钟，24小时后再煮沸20分钟，如此连续灭菌三次，即可达到完全灭菌的目的，经过灭菌的培养基应置于10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基，在4～5℃低温下保存要更好些，含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的一周内使用完，其它培养基最多也不应超过一个月。在多数情况下，应在消毒后两周内用完。
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