CN110004168A - 用于筛选lag-3抑制剂的报告基因方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于筛选LAG‑3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG‑3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG‑3抑制剂。本发明的用于筛选LAG‑3抑制剂的报告基因方法，当细胞给予大分子蛋白，抗体或小分子化合物处理时，通过检测免疫相关信号通路反应元件的报告基因的表达来筛选LAG‑3的大分子或小分子抑制剂，当大分子或小分子与细胞表面表达的LAG‑3结合时，会激活免疫相关信号通路反应元件，导致报告基因表达和活性的增加，具有很好的商业前景。

Description

用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法
技术领域
本发明涉及一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法。
背景技术
目前，在免疫检查点抑制剂药物研发领域，LAG-3已经成为国内外药物研发的最热靶点之一。国内有多家外资和本土药企正在开发LAG-3的抑制剂。然而现阶段，国内外生物制药行业尚无生化水平直接筛选LAG-3抑制剂的均相方法，一是由于MHCII蛋白结构复杂(由多个不同亚型单体组合成的复合蛋白)，结合LAG-3的结构域也不明确，二是由于均相方法的开发难度，需要实验多种标签蛋白及荧光能量的供体受体。在筛选蛋白相互作用的抑制剂时，经常通过FACS和ELISA的方法。FACS单个细胞过柱，通量很低。ELISA作为传统的方法，存在一些难以克服的缺点，如：1)实验步骤多，耗时长。需要经过多次洗板，加样，显色等，至少需要一天的时间；2)无法达到高通量，难以解决药物筛选样品多的难题；3)包被的蛋白有可能会屏蔽一些蛋白位点，致使漏掉阳性，即得到假阴性结果；4)由于步骤较多容易引起实验误差，导致结果重复性差，不稳定。
发明内容
本发明的一个目的在于提出一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法。
本发明的一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。
本发明的用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，当细胞给予大分子蛋白，抗体或小分子化合物处理时，通过检测免疫相关信号通路反应元件的报告基因的表达来筛选LAG-3的大分子或小分子抑制剂，当大分子或小分子与细胞表面表达的LAG-3结合时，会激活免疫相关信号通路反应元件，导致报告基因表达和活性的增加，具有很好的商业前景。
另外，本发明上述的用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，还可以具有如下附加的技术特征：
进一步地，所述稳定细胞系所用母细胞至少为Jukart,HEK293,CHO中的一种。
进一步地，所述免疫相关信号通路反应元件的报告基因为NFAT结合序列或IL2启动子，并在其序列下游连接有荧光素酶，荧光蛋白，碱性磷酸酶或β-半乳糖苷酶。
本发明的另一个目的在于提出所述的用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法得到的表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系。
本发明的再一个目的在于提出所述的报告基因方法在筛选LAG-3抑制剂中的应用。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
实施例1
实施例1提出了一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。
实施例2
实施例2提出了一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。所述稳定细胞系所用母细胞为Jukart。
实施例3
实施例3提出了一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。所述稳定细胞系所用母细胞为HEK293。
实施例4
实施例4提出了一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。所述稳定细胞系所用母细胞为CHO。
实施例5
实施例5提出了一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。所述稳定细胞系所用母细胞为Jukart。所述免疫相关信号通路反应元件的报告基因为NFAT结合序列，并在其序列下游连接有荧光素酶。
实施例6
实施例6提出了一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。所述稳定细胞系所用母细胞为HEK293。所述免疫相关信号通路反应元件的报告基因为IL2启动子，并在其序列下游连接有荧光蛋白。
实施例7
实施例7提出了一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。所述稳定细胞系所用母细胞为CHO。所述免疫相关信号通路反应元件的报告基因为NFAT结合序列，并在其序列下游连接有碱性磷酸酶。
实施例8
实施例8提出了一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。所述稳定细胞系所用母细胞为HEK293。所述免疫相关信号通路反应元件的报告基因为IL2启动子，并在其序列下游连接有β-半乳糖苷酶。
综上，本发明的用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，当细胞给予大分子蛋白，抗体或小分子化合物处理时，通过检测免疫相关信号通路反应元件的报告基因的表达来筛选LAG-3的大分子或小分子抑制剂，当大分子或小分子与细胞表面表达的LAG-3结合时，会激活免疫相关信号通路反应元件，导致报告基因表达和活性的增加，具有很好的临床效果和很好的商业前景。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (5)

1.一种用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，其特征在于，包括如下步骤：构建表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系，同时建立报告基因的检测方法用于筛选LAG-3抑制剂。
2.根据权利要求1所述的用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，其特征在于，所述稳定细胞系所用母细胞至少为Jukart,HEK293,CHO中的一种。
3.根据权利要求1或2所述的用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法，其特征在于，所述免疫相关信号通路反应元件的报告基因为NFAT结合序列或IL2启动子，并在其序列下游连接有荧光素酶，荧光蛋白，碱性磷酸酶或β-半乳糖苷酶。
4.权利要求1-3任一项所述的用于筛选LAG-3抑制剂的报告基因方法得到的表达LAG-3以及带有免疫相关信号通路反应元件的报告基因的稳定细胞系。
5.权利要求1-3任一项所述的报告基因方法在筛选LAG-3抑制剂中的应用。
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