CN109999185A - 一种用于修复损伤的组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于修复损伤的组合物及其制备方法,属于软骨组织损伤修复领域,旨在提供一种促进损伤修复愈合的组合物,其技术方案要点如下,包括骨髓间充质干细胞、KGN‑PRP凝胶和凝血酶,其制备方法是,S1.取富血小板血浆凝胶加入卡托吉宁小分子,搅拌混合均匀得到混合物;S2.向S1中加入骨髓间充质干细胞并混合均匀;S3.向S2中加入凝血酶。本发明将富血小板血浆凝胶混合骨髓间质干细胞和KGN联合使用,发挥了KGN和PRP之间的协同作用,有效缩短损伤修复的时间,提高损伤的修复程度,且该药物组合物制备方法简单,制备成本低。

Description

一种用于修复损伤的组合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及软骨组织损伤修复技术领域,特别涉及一种用于促进半月板损伤修复的药物组合物及其制备方法。
背景技术
由创伤和各种疾病引起的关节软骨缺损在临床上十分常见,我国随着人口老龄化,患病人数与日俱增,但是关节软骨的自我修复作用非常有限,因此关节软骨损伤的修复重建一直是人们渴望解决的难题,关节软骨修复及相关研究显得尤为重要。改善和提高软骨组织的愈合能力,无论对于临床工作者还是基础研究工作者来说,都是长期面临的一项挑战。就目前研究而言,仍然未见一种比较简便可靠的用于修复软骨组织损伤的组合物。
发明内容
本发明的目的是提供一种简便可靠的用于软骨组织修复损伤的药物组合物,具有高效促进软骨组织损伤的修复再生功能;本发明的第二个目的是提供一种简便可靠的用于修复软骨组织损伤的药物组合物的制备方法,具有同样的效果。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的:
一种用于修复损伤的组合物,包括骨髓间充质干细胞、KGN-PRP凝胶和凝血酶。其中,
进一步的,KGN-PRP凝胶是由卡托吉宁小分子和富血小板血浆凝胶复合制成。富血小板血浆凝胶是静脉采集的全血经两次离心法分离制备的血小板浓缩液,卡托吉宁小分子为市售。
进一步的,组合物中还包含b族维生素溶液。b族维生素溶液的加入能够促进半月板损伤的修复和愈合。
进一步的,b族维生素溶液每毫升含维生素B1 0.3毫克,维生素B2 0.06毫克,维生素B6 0.09毫克。其中维生素B1能够促进细胞的再生,维生素B2能够诱导骨髓间质干细胞向软骨细胞分化,且凝血酶激活血小板可以产生众多生长因子能够有效提高软骨组织的愈合速度,与维生素B6配合使用,将维生素B6作为辅酶,可以促进细胞的有丝分裂,加速创伤愈合。
进一步的,组合物中还包含他汀。他汀是治疗冠心病等心脑血管疾病的常规药物,在本发明的组合物中,他汀的存在能够协同KGN对PRP产生诱导效果,促进PRP产生更多的血管样细胞,提高KGN与PRP之间的协同作用的效率,从而有效提高损伤的修复速率。
进一步的,他汀是辛伐他汀、洛伐他汀或普伐他汀中的任意一种。
进一步的,凝血酶的活力是10000 U/ml。
进一步的,一种用于修复损伤的组合物的制备方法,包括如下制备步骤:
S1.取1~10富血小板血浆凝胶加入1~5卡托吉宁小分子,搅拌混合均匀,得到混合容物;
S2.向S1中加入5 ×105个骨髓间充质干细胞并混合均匀;
S3.向S2中加入1~5凝血酶,混合均匀。最后加入凝血酶是由于凝血酶加入过早会影响卡托吉宁小分子与富血小板血浆凝胶的充分融合。
进一步的,在S1中加入0.1~0.5b族维生素溶液。
进一步的,在S2中加入0.1~0.5毫克他汀。
进一步的,一种用于修复损伤的组合物的用途,组合物用于促进软骨组织损伤的修复。
进一步的,一种用于修复损伤的组合物的用途,组合物用于促进软骨组织损伤的修复;组合物中还包括维生素b溶液。
进一步的,一种用于修复损伤的组合物的用途,组合物用于促进软骨组织损伤的修复;组合物中还包括维生素b溶液和他汀。他汀的能够协同KGN对PRP产生诱导效果,促进PRP产生更多的血管样细胞,提高KGN与PRP之间的协同作用的效率,从而有效提高软骨组织损伤的修复速率。
进一步的,一种用于修复损伤的组合物的用途,药物组合物用于促进半月板损伤的修复。半月板是一种具有特殊复杂性结构和组成的组织,在胚胎发育期,整个半月板组织内分布有大量的血管,但随着年纪增长,血管逐渐萎缩,在半月板无血管区的损伤,由于缺乏血管分布,其自身愈合能力极其有限,本发明的组合物中,利用KGN对PRP产生诱导作用,使PRP向血管样细胞分化,弥补了半月板由于缺乏血管分布,无法自身愈合的缺陷,从而提高PRP对骨髓间质干细胞的诱导效果;配合KGN小分子对骨髓间质干细胞的诱导分化,产生了KGN和PRP的协同作用,进一步提高半月板损伤修复愈合能力。
进一步的,一种用于修复损伤的组合物的用途,药物组合物用于促进半月板损伤的修复;组合物中还包括维生素b溶液,b族维生素溶液的加入能够促进半月板损伤的修复和愈合。
进一步的,一种用于修复损伤的组合物的用途,药物组合物用于促进半月板损伤的修复;组合物中还包括维生素b溶液和他汀。他汀的能够协同KGN对PRP产生诱导效果,促进PRP产生更多的血管样细胞,针对半月板白区缺乏血管的情况,提高KGN与PRP之间的协同作用的效率,从而有效提高软骨组织损伤的修复速率。
综上所述,本发明具有以下有益效果:
小分子药物kartogenin(KGN)即卡托吉宁小分子可促进人类间充质干细胞像软骨样细胞分化,本发明将富血小板血浆凝胶(PRP)混合骨髓间质干细胞(BMSCs)和KGN联合使用,发挥了KGN和PRP之间的协同作用,有效缩短软骨组织损伤修复的时间,提高软骨组织损伤修复程度,且该组合物制备方法简单,制备成本低。
附图说明
图1是体外实验中KGN浓度与基因表达之间的关系图;
图2是体内实验中半月板上制造的损伤模型;
图3是体内实验中对照组1的半月板修复结果;
图4是体内实验中实施例1的半月板修复结果;
图5是体内实验中实施例3的半月板修复结果。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
本发明中,富血小板血浆凝胶采用静脉全血经两步分离法制得;骨髓间质干细胞经新西兰兔耳软骨破碎分离制得;卡托吉宁小分子、凝血酶、他汀和维生素b溶液为市售。
实施例1:一种用于修复损伤的药物组合物及其制备方法
一种用于修复损伤的药物组合物,包括骨髓间充质干细胞和KGN-PRP凝胶。
一种用于修复损伤的药物组合物的制备方法,包括如下制备步骤:
S1.取10富血小板血浆凝胶加入5卡托吉宁小分子,搅拌混合均匀,得到混合物;
S2.向S1中加入5 ×105个骨髓间充质干细胞并混合均匀;
S3.向S2中加入凝血酶,混合均匀。
实施例2:一种用于修复损伤的药物组合物及其制备方法
一种用于修复损伤的药物组合物,包括骨髓间充质干细胞、KGN-PRP凝胶、凝血酶和b族维生素溶液。
其中,b族维生素溶液每毫升含维生素B1 0.3毫克,维生素B2 0.06毫克,维生素B60.09毫克;凝血酶的活性是10000U/ml。
一种用于修复损伤的药物组合物的制备方法,包括如下步骤:
S1.取10富血小板血浆凝胶加入5卡托吉宁小分子,搅拌混合均匀,得到混合物,向其中加入0.5b族维生素溶液;
S2.向S1中加入5 ×105个骨髓间充质干细胞并混合均匀;
S3.向S2中加入5凝血酶,混合均匀。
实施例3. 一种用于修复损伤的药物组合物及其制备方法
一种用于修复损伤的药物组合物,包括骨髓间充质干细胞、KGN-PRP凝胶、凝血酶、b族维生素溶液和他汀。其中,b族维生素溶液每毫升含维生素B1 0.3毫克,维生素B2 0.06毫克,维生素B6 0.09毫克;凝血酶的活性是10000U/ml,他汀是辛伐他汀。
一种用于修复损伤的药物组合物的制备方法,包括如下步骤:
S1.取10富血小板血浆凝胶加入5卡托吉宁小分子,搅拌混合均匀,得到混合容物,向其中加入0.5b族维生素溶液;
S2.向S1中加入5 ×105个骨髓间充质干细胞并混合均匀;
S3.向S2中加入0.5mg辛伐他汀和5凝血酶,混合均匀。
将本发明的药物组合物用于修复半月板的损伤,其技术效果验证如下。
技术效果验证分为体内实验和体外实验。
体外实验
骨髓间充质干细胞(BMSCs)分别取自5只不同的新西兰白兔股骨(6个月,雌性)与不同浓度的卡托吉宁小分子(KGN)培养2周。RT -PCR定量测定细胞胶原蛋白II、聚集蛋白聚糖、Sox-9基因。组织学染色用来检测类软骨组织的再生,实验结果如附图1所示,KGN有促进骨髓间充质干细胞增殖及诱导分化的作用,BMSCs添加KGN时,软骨相关的基因(Sox-9 、Collagen II)的高表达与KGN剂量有很大相关性,组织染色(番红O, 阿辛蓝染色)也证明了KGN具有诱导BMSCs向软骨细胞的分化的能力。
体内实验
将6只身体状况相同的新西兰白兔被分为3组,使用1mm直径的活检钻在实验动物的半月板上制造3个孔洞,形成损伤模型,如附图2所示。将实施例1和3得到的组合物采用关节腔注射,对照组1采用510000 U/ml凝血酶+10 PRP凝胶+5生理盐水添加BMSCs(5 ×105)个关节腔注射。手术后6周处死实验动物收集标本,肉眼观察和组织染色来判断半月板修复情况。结果见附图3-5。
由结果可知,使用BMSCs复合KGN可更加快速的促进损伤的半月板修复愈合,在对照组1的损伤半月板上我们仍然可以观察到仍有3个孔洞没有修复;实施例1中产生了部分软骨组织,已有1个孔洞完成了修复,而实施例3中观察到有更加明显的类软骨组织形成,3个孔洞已经全部修复。综上所述,本发明提供的方案中,KGN和PRP之间的协同作用,能够提高半月板损伤修复愈合能力,他汀和b族维生素的加入能够大幅提高半月板损伤的愈合能力。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释,其并不是对本发明的限制,本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改,但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种用于修复损伤的组合物,其特征在于,包括骨髓间充质干细胞、KGN-PRP凝胶和凝血酶。
2.根据权利要求1所述的一种用于修复损伤的组合物,其特征在于,所述组合物中还包含b族维生素溶液。
3.根据权利要求2所述的一种用于修复损伤的组合物,其特征在于,所述b族维生素溶液每毫升含维生素B1 0.3毫克,维生素B2 0.06毫克,维生素B6 0.09毫克。
4.根据权利要求2所述的一种用于修复损伤的组合物,其特征在于,所述组合物中还包含他汀。
5.根据权利要求4所述的一种用于修复损伤的组合物,其特征在于,所述他汀是辛伐他汀、洛伐他汀或普伐他汀中的任意一种。
6.一种用于修复损伤的组合物的制备方法,其特征在于,包括如下制备步骤:
S1.取1~10富血小板血浆凝胶加入1~5卡托吉宁小分子,搅拌混合均匀得到混合物;
S2.向S1中加入5 ×105个骨髓间充质干细胞并混合均匀;
S3.向S2中加入1~5凝血酶。
7.根据权利要求6所述的一种用于修复损伤的组合物的制备方法,其特征在于,在所述S1中加入0.1~0.5b族维生素溶液。
8.根据权利要求7所述的一种用于修复损伤的组合物的制备方法,其特征在于,在所述S2中加入0.1~0.5毫克他汀。
9.根据权利要求1所述的一种用于修复损伤的组合物的用途,其特征在于,所述组合物用于促进软骨组织损伤的修复。
10.根据权利要求1所述的一种用于修复损伤的组合物的用途,其特征在于,所述组合物用于促进半月板损伤的修复。
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