CN109999179A - 低剂量白介素2用于制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供低剂量白介素2用于制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用，经研究发现，长期给予低剂量人重组IL‑2后，评价小鼠认知功能的各项指标均明显改善，获得了较好的实际治疗效果；且低剂量IL‑2降低了高剂量使用的不良反应，在本发明的实验过程中，未发现一例死亡或状态欠佳的情况。因此，本发明为临床治疗中度和重度阿尔茨海默病提供一种安全有效的新药白介素2，具有成分明确、远期治疗效果好、治疗费用低廉、用药依从性高，无成瘾性及依赖性，无明显的毒副作用等优势，显著减轻病人的经济负担，取得良好的治疗目的，因此具有广阔的医学应用前景。

Description

低剂量白介素2用于制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其涉及低剂量白介素2用于制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是慢性进行性中枢神经系统变性病变所导致的痴呆，是最常见的老年性痴呆，以缓慢发展记忆障碍、定向障碍、语言功能障碍等不同程度的认知功能障碍及人格异常等神经精神症状为特征。AD的发病随年龄的增长而增高，65岁以上患病率为5％-10％；85岁以上为20％-50％。随着世界人口的老龄化，AD的发病率呈不断上升趋势，目前该病已成为危及老年人生命的第四大病因(仅次于心脏病、肿瘤和中风)。AD已成为世界各国面临的最为严峻的卫生和社会经济问题之一。

AD起病缓慢或隐匿，病人及家人常说不清何时起病。多见于70岁以上(男性平均73岁，女性为75岁)老人，少数病人在躯体疾病、骨折或精神受到刺激后症状迅速明朗化。其临床主要表现为认知功能下降、精神症状和行为障碍、日常生活能力的逐渐下降。根据认知能力和身体机能的恶化程度分成三个时期。第一阶段(1～3年)为轻度痴呆期。表现为记忆减退，对近事遗忘突出；判断能力下降，病人不能对事件进行分析、思考、判断，难以处理复杂的问题；工作或家务劳动漫不经心，不能独立进行购物、经济事务等，社交困难；尽管仍能做些已熟悉的日常工作，但对新的事物却表现出茫然难解，情感淡漠，偶尔激惹，常有多疑；出现时间定向障碍，对所处的场所和人物能做出定向，对所处地理位置定向困难，复杂结构的视空间能力差；言语词汇少，命名困难。第二阶段(2～10年)为中度痴呆期。表现为远近记忆严重受损，简单结构的视空间能力下降，时间、地点定向障碍；在处理问题、辨别事物的相似点和差异点方面有严重损害；不能独立进行室外活动，在穿衣、个人卫生以及保持个人仪表方面需要帮助；计算不能；出现各种神经症状，可见失语、失用和失认；情感由淡漠变为急躁不安，常走动不停，可见尿失禁。第三阶段(8～12年)为重度痴呆期。患者已经完全依赖照护者，严重记忆力丧失，仅存片段的记忆；日常生活不能自理，大小便失禁，呈现缄默、肢体僵直，查体可见锥体束征阳性，有强握、摸索和吸吮等原始反射；最终昏迷，一般死于感染等并发症。

积极研发防治AD的有效药物是当前老年疾病研究领域的一项迫切任务，也是老年医学所面临的最为严峻的问题之一。目前关于AD的药物治疗主要包括胆碱酯酶抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂、神经保护剂、胆碱能加强剂、脑代谢复活剂、钙通道阻滞剂、抗自由基药物、改善脑血流和脑循环药物等，西药副作用较大，中药治疗均缺乏针对性和疗效均不确切，限制了这些药物的临床应用。并且重要的是，发明人发现，由于AD是多因素导致的复杂性疾病，发病机制还未完全阐明，以上治疗药物多是根据某种可能的发病机制及病理变化来改善AD患者的症状和延缓病情进展，在临床上对于轻、中度患者能起到一定的短期疗效，但远期疗效并不理想，对于重度患者的治疗药物更是匮乏。而由于AD患病隐匿，大部分患者早期较难发现，到患者发现或临床确诊为该病时已经是中晚期阶段，因此，如何提供一种不存在使用安全性问题，并能有效治疗中晚期阿尔茨海默病的药物成为亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明提供低剂量白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2；简称白介素2)用于制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用，经研究发现，高剂量IL-2在抗肿瘤及抗病毒方面疗效显著，但是高剂量下临床上会出现发热、皮疹等症状，同时会引起毛细血管渗漏综合征导致的低血压、休克、肾功能不全等严重的不良反应，限制了其的临床应用。然而，低剂量的IL-2极少出现这些副作用，在独立的临床试验中发现，低剂量的IL-2可以安全的使用几个月甚至一年，具有很好的安全性。发明人在研究中首次发现，低剂量IL-2对于阿尔茨海默病尤其针对中度及重度阿尔兹海默症患者具有良好的治疗效果，具有良好的实际应用之价值。

在本发明的第一个方面，本发明提供低剂量白介素2用于制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。

所述阿尔茨海默病为中度和/或重度阿尔茨海默病。

在本发明的第二个方面，本发明还提供了低剂量白介素2作为有效成分在制备缓解认知功能异常/或损伤、以及空间学习障碍药物中的应用。

在本发明的第三个方面，本发明提供了一种用于治疗中度和/或重度阿尔茨海默病的药物组合物，其以低剂量白介素2为有效成分。

本发明的有益效果为：

本发明提供了低剂量白介素2用于制备治疗阿尔茨海默病尤其是中度和重度阿尔茨海默病药物中的应用，经研究发现，在小鼠疾病模型中，长期给予低剂量人重组IL-2后，评价小鼠认知功能的各项指标均明显改善，获得了较好的实际治疗效果；且低剂量IL-2降低了高剂量使用的不良反应，在本发明的实验过程中，未发现一例死亡或状态欠佳的情况。

本发明为临床治疗中度和重度阿尔茨海默病提供一种安全有效的新药白介素2，具有成分明确、远期治疗效果好、治疗费用低廉、用药依从性高，无成瘾性及依赖性，无明显的毒副作用等优势，显著减轻病人的经济负担，取得良好的治疗目的，因此具有广阔的医学应用前景，为今后中度和重度阿尔茨海默病的临床治疗提供了新的用药选择与临床诊疗方案，因此具有良好的实际应用之价值。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1为实施例1低剂量IL-2对中度患病AD模型小鼠空间学习记忆能力的影响。N＝10。*，P<0.05,**，P<0.01；#,P<0.05,##，P<0.01。

图2为实施例1中低剂量IL-2对重度患病AD模型小鼠空间学习记忆能力的影响。N＝10。*，P<0.05,**，P<0.01；#,P<0.05,##，P<0.01。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

如前所述，发明人发现，由于AD是多因素导致的复杂性疾病，发病机制还未完全阐明，以上治疗药物多是根据某种可能的发病机制及病理变化来改善AD患者的症状和延缓病情进展，在临床上对于轻、中度患者能起到一定的短期疗效，但远期疗效并不理想，对于重度患者的治疗药物更是匮乏。

有鉴于此，本发明的一个典型具体实施方式中，提供低剂量白介素2用于制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用；

所述白介素2的有效剂量为不高于3万IU/天(优选为3万IU/天)；

本发明的又一具体实施方式中，使用单位制剂的白介素2，所述单位制剂为满足一次给药所需有效成分的制剂，常见的单位制剂如一单位(片)片剂、一单位(针)针剂等，其中作为有效成分的白介素-2含量为一次给药所需的量。

本发明中所述的治疗中度和重度阿尔茨海默病的药物的活性成分IL-2可以是任何能够在体内发挥功能的IL-2，可以是目前临床上已经使用的IL-2药物，也可以是利用IL-2作为有效成分而自制的药剂。

本发明的又一具体实施方式中，所述白介素2为重组人IL-2(rhIL-2)冻干粉或注射液，冻干粉溶于灭菌的生理盐水，制剂形式是水溶液，其已经在临床上使用多年，方便使用。

所述阿尔茨海默病为中度和/或重度阿尔茨海默病。

本发明的又一具体实施方式中，本发明还提供了低剂量白介素2作为有效成分在制备缓解认知功能异常/或损伤、以及空间学习障碍药物中的应用。

所述白介素2的有效剂量为不高于3万IU/天(优选为3万IU/天)；

本发明的又一具体实施方式中，本发明提供了一种用于治疗中度和/或重度阿尔茨海默病的药物组合物，其以低剂量白介素2为有效成分。

本发明的又一具体实施方式中，白介素2作为药物活性成分，可制成药学上可接受的药物制剂。

本发明的又一具体实施方式中，所述药物制剂选自由适用于粘膜的制剂、注射制剂和吸入制剂组成的组(优选为注射制剂)。

在上述用于治疗阿尔茨海默病的药物组合物中，还可以包含药学上可接受的辅料，所述辅料为稀释剂、赋形剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、表面活化剂、稳定剂中的至少一种。

本发明的又一具体实施方式中，所述辅料包括但不限于甘露醇、十二万基硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、人血白蛋白。

以及，上述组合物也可以制备成药学上可接受的药物制剂。

本发明中，“治疗中度和/或重度阿尔茨海默病”表现为缓解病患认知功能异常/或损伤、以及空间学习障碍症状。

为了进一步阐明本发明，下面以具体实施例对本发明作详细说明，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1

本实施例选用AD模型小鼠-APPswe/PS1dE9小鼠(本文简称为APP/PS1小鼠)为研究对象，APP/PS1小鼠存在认知功能损伤所致的行为学改变，并随年龄的增长愈加严重，能够模拟人类AD患者的病理改变和行为学异常，是AD发病机制和药物筛选研究常用的动物模型。根据已有文献报道，此小鼠3月龄之前，尚未表现出认知功能异常，为AD发病的早期阶段即轻度患病；4-7月龄时，开始出现认知功能异常，为AD发病的中期阶段即中度患病；在8月龄时即可出现明显的空间学习障碍和认知功能损伤，8月龄之后可视为AD发病的晚期阶段即重度患病。因此，本实施例别选用年龄为6月龄和9月龄的APP/PS1小鼠和同年龄的C57BL/6小鼠作为对照，给予小鼠低剂量人重组IL-2处理后，利用研究认知行为的Morris水迷宫实验，研究低剂量IL-2对中度和重度AD的治疗作用。

1.1实验动物

APP/PS1小鼠和C57/BL6小鼠，均为雄性，6月龄和9月龄，由北京维通利华实验动物中心提供。实验动物饲养条件为SPF级，温度:23+1℃，湿度:40～70％，光照：12小时明暗交替。饲喂无菌普通鼠粮，自由饮水。

1.2药物配置方法及给药方式

本实施例中的纯化重组人白介素2为白色冻干粉，溶解于生理盐水中，溶解后成透明液体，无肉眼可见不溶物。6月龄和9月龄的雄性APP/PS1小鼠和野生型C57BL/6小鼠，每组各10只。利用30000IU的IL-2或等体积的生理盐水分别腹腔注射不同组的小鼠，首次处理时连续10天给药，之后每隔三周连续给药5天，直至小鼠长到12月龄。具体分组情况如下：

表1.实验中小鼠分组情况

1.3实验仪器

Morris水迷宫装置水池直径120cm，水池深50cm。实验时将水池以四个等距离点均分为四个象限区，在第四象限位于池壁和圆心中间，放置有机玻璃站台。平台位于水面下0.8cm,，水深高21cm。水迷宫内的水温用加热棒保持恒温22-24℃。在四周幕布上贴有醒目的规则几何图形，与背景形成强烈反差，作为小鼠寻找平台的远距离线索；水迷宫内壁不设标记物。利用Supermaze 3.0动物行为分析系统跟踪小鼠的活动。

1.4实验方法

Morris水迷宫是检测动物空间学习和记忆能力的常用装置。待小鼠长至12月龄后，对小鼠进行Morris水迷宫实验，测试程序包括：(1)定位航行实验：用于测量动物在水迷宫中的学习和记忆能力。每天进行1次，连续训练5天。(2)空间探索实验：第5天下午撤去平台，任选一个入水点，将小鼠面向池壁放入水池中，摄像系统自动记录小鼠60秒内进出原平台区的次数及在原平台所在第四象限游泳时间和路程作为评价小鼠学习记忆成绩的指标。

1.4.1定位航行实验

每只小鼠训练4次/天，每次训练时间间隔15-20分钟。测试时每次以半随机方式选择入水点，实验者将小鼠以手托起令其面向池壁，轻轻放入水中。每次训练中，小鼠60秒内能寻找到平台，平台上停留时间超过2秒作为找到平台成功标志，把小鼠从入水到找到隐蔽平台成功所用时间记为潜伏期(Escape latency)。若小鼠60秒内未能找到平台，则由实验者用手将其引导至平台，潜伏期记为60秒。小鼠登上平台后，让其平台上停留10秒，以让其根据4个象限的参照物进行空间学习和记忆，并减少小鼠紧张。计算每天潜伏期平均值，以评价动物空间记忆的获得能力。在实验进行中，实验者固定为二个人，并未将小鼠分组情况告知实验者，以减少人为因素对结果的影响。

1.4.2空间探索实验

撤去平台，每只小鼠测试1次，时间为60秒。选择目标象限的对侧象限将小鼠面向池壁边缘轻放入水中，自由游泳60秒，记录小鼠穿越原平台位置的次数、原平台象限游程比率及时间比率(即动物原平台象限的游程及时间占总游程及总时间的比率)来评价动物的空间记忆能力。

1.4.3统计学分析

数据统计学分析利用SPSS19.0软件，结果以均值±标准误差(Mean±S.E.)表示。水迷宫隐蔽平台实验中，逃避潜伏期数据分析采用two-way ANOVA的统计方法，其他数据组间差异分析采用独立样本双侧T-检验统计方法，以P<0.05为差异显著性，P<0.01为极其显著性。

1.5实验结果

1.5.1低剂量IL-2对中度患病AD模型小鼠空间学习记忆能力的影响

结果如附图1所示，与野生型C57/BL6小鼠比较，APP/PS1小鼠在Morris水迷宫中穿越原平台位置次数(Number of crossing the platform)、第四象限游泳时间(Time inthe target quadrant)和路程(Path Length in the target quadrant)均显著减少(P<0.05)，逃避潜伏期(Escape Latency)明显增加(P<0.05)。从6月龄(即中度患病时)给予低剂量IL-2治疗到12月龄后，APP/PS1小鼠在Morris水迷宫中穿越原平台位置次数、第四象限游泳时间和路程均较给予生理盐水组显著增多(P<0.05)，而逃避潜伏期显著性减少(P<0.05)。

1.5.2低剂量IL-2对重度患病AD模型小鼠空间学习记忆能力的影响

结果如附图2所示，与野生型C57/BL6小鼠比较，APP/PS1小鼠在Morris水迷宫中穿越原平台位置次数、第四象限游泳时间和路程均显著减少(P<0.05)。从9月龄(即重度患病时)给予低剂量IL-2治疗到12月龄后，APP/PS1小鼠在Morris水迷宫中第四象限游泳时间和路程均较给予生理盐水组显著增多(P<0.05)，而逃避潜伏期有减少趋势，但无显著性差异(P>0.05)。

研究结果表明，与同年龄的野生型C57/BL6小鼠相比，12月龄的APP/PS1小鼠学习记忆能力明显降低。从6月龄(即中度患病时)给予低剂量IL-2治疗到12月龄后，APP/PS1小鼠受损的学习记忆能力得到明显的改善；而从9月龄(即中度患病时)给予低剂量IL-2治疗到12月龄后，APP/PS1小鼠受损的学习记忆能力也得到一定程度有效的改善。因此，低剂量IL-2具有治疗中度和重度阿尔茨海默病的作用。

应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.低剂量白介素2用于制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。

2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述白介素2的有效剂量为不高于3万IU/天(优选为3万IU/天)。

3.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述阿尔茨海默病为中度和/或重度阿尔茨海默病。

4.低剂量白介素2作为有效成分在制备缓解认知功能异常/或损伤药物中的应用。

5.低剂量白介素2作为有效成分在制备缓解空间学习障碍药物中的应用。

6.如权利要求4或5所述应用，其特征在于，所述白介素2的有效剂量为不高于3万IU/天(优选为3万IU/天)。

7.一种用于治疗中度和/或重度阿尔茨海默病的药物组合物，其特征在于，以低剂量白介素2为有效成分；

优选的，所述白介素2的有效剂量为不高于3万IU/天(优选为3万IU/天)。

8.如权利要求7所述药物组合物，其特征在于，白介素2作为药物活性成分，制成药学上可接受的药物制剂；

所述药物制剂选自由适用于粘膜的制剂、注射制剂和吸入制剂组成的组(优选为注射制剂)。

9.如权利要求8所述药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含药学上可接受的辅料，所述辅料为稀释剂、赋形剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、表面活化剂、稳定剂中的至少一种。

10.如权利要求9所述药物组合物，其特征在于，所述辅料包括但不限于甘露醇、十二万基硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、人血白蛋白。