CN109975059A - 一种肠道寄生虫虫卵的收集方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种肠道寄生虫虫卵的收集方法，属于医学检测技术领域。所述收集方法，包括以下步骤：将新鲜粪便进行化学固定，释放虫卵，去除杂质，得到寄生虫虫卵悬浮液；将所述寄生虫虫卵悬浮液经负压抽滤弃去废液，寄生虫虫卵截留在滤膜上；将截留有寄生虫虫卵的滤膜的一面贴近载玻片，采用正压处理将寄生虫虫卵转移至载玻片上。本发明进一步采用装置辅助收集更加方便快捷，且耗时短，回收率高。本发明提供的收集方法能有效避免样本中肠道寄生虫虫卵因操作不当而发生漏检。

Description

一种肠道寄生虫虫卵的收集方法

技术领域

本发明属于医学检测技术领域，具体涉及一种肠道寄生虫虫卵的收集方法。

背景技术

寄生虫对人体的危害，主要包括其作为病原引起寄生虫病及作为疾病的传播媒介两方面。寄生虫病对人体健康和畜牧家禽业生产的危害均十分严重。在占世界总人口77％的广大发展中国家、特别在热带和亚热带地区，寄生虫病依然广泛流行、威胁着儿童和成人的健康甚至生命。

医学上检测肠道寄生虫的方法是检测病患的粪便中是否含有寄生虫的虫卵，若在粪便中检测到寄生虫虫卵，则该病患一定感染了寄生虫。常规检测粪便虫卵的方法有直接涂片法和浓集法。直接涂片法常用于检查虫卵、滋养体和包囊。为了避免遗漏，一般需连续检查三张涂片，该方法虽然操作简单迅速，但阳性率低，视野中杂质多，虫卵或原虫少时不易查到。浓集法常用于用较多的粪便样本，将粪便中的虫卵或包囊集聚在一个小范围内，便于检出，但是粪便中的虫卵或包囊收集方法较直接涂片法操作复杂，耗时长，且背景较高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种肠道寄生虫虫卵的收集方法，所述方法具有操作简便、成片后显微镜下背景干净，虫卵清晰可见的特点。

本发明提供的一种肠道寄生虫虫卵的收集方法，包括以下步骤：

1)将新鲜粪便进行化学固定，释放虫卵，去除杂质，得到寄生虫虫卵悬浮液；

2)将步骤1)中所述寄生虫虫卵悬浮液经负压抽滤弃去废液，寄生虫虫卵截留在滤膜上；

3)将截留有寄生虫虫卵的滤膜的一面贴近载玻片，采用正压处理将寄生虫虫卵转移至载玻片上。

优选的，所述负压抽滤采用寄生虫虫卵收集装置进行；

所述寄生虫虫卵收集装置包括过滤膜筒和压力控制装置；

所述压力控制装置包括筒体和上盖；所述上盖与筒体的上端密封连接；所述上盖设置有两个通孔，其中一个通孔连接有第一管道，另一个通孔连接有第二管道；所述第一管道的终端可拆卸的与压力泵连接；所述第二管道的终端设置有压力检测器；所述筒体的外周面下端设置凹槽，在所述凹槽处安装有密封圈；

所述过滤膜筒的一端安装有滤膜，所述过滤膜筒的另一端通过密封圈与所述筒体的下端可拆卸的密封连接。

优选的，采用寄生虫虫卵收集装置进行负压抽滤时，设置压力检测器的负压阈值为-0.01～-0.05Mpa，当达到所述负压阈值时，结束负压抽滤。

优选的，采用所述寄生虫虫卵收集装置负压抽滤后弃去废液的方法是将所述第一管道与压力泵的连接断开，将所述寄生虫虫卵收集装置倾斜，将废水通过所述第一管道排出。

优选的，步骤3)中采用所述寄生虫虫卵收集装置进行正压处理时，将所述第一管道的终端与压力泵连接，所述压力泵的压力值设定为0.001～0.02Mpa。

优选的，所述滤膜的孔径为18～24μm。

优选的，采用所述寄生虫虫卵收集装置进行收集寄生虫虫卵时，每次处理新鲜粪便的质量为3～5g。

优选的，化学固定用溶液为体积浓度为5％的甲醛溶液。

优选的，释放虫卵的方法是将含有粪便混合液进行振荡30～60min。

优选的，去除杂质的方法为用医用纱布过滤粪便混合液。

本发明提供的一种肠道寄生虫虫卵的收集方法，将新鲜粪便进行化学固定，释放虫卵，去除杂质，得到寄生虫虫卵悬浮液；将所述寄生虫虫卵悬浮液经负压抽滤弃去废液，寄生虫虫卵截留在滤膜上；将截留有寄生虫虫卵的滤膜的一面置于载玻片上方，采用正压处理将寄生虫虫卵转移至载玻片上。本发明操作简便，耗时短，而且可以降低背景杂质，从而提高检测结果的准确性。因此，本发明提供的收集方法避免样本中肠道寄生虫虫卵因操作不当而发生漏检。

同时本发明提供的收集方法，对不同来源的样本均适用，而且对收集的寄生虫虫卵的种类没有限制，能够收集各种各样肠道寄生虫虫卵。采用本发明提供的收集方法在检测过程中成片的背景中无粪便颗粒，背景干净；制备的阳性标本的成片中虫卵数量多，易于观察诊断，避免因成片中虫卵数量少而造成漏诊、误诊。

进一步的，本发明提供的收集方法进一步限定了采用寄生虫虫卵收集装置进行操作，所述寄生虫虫卵收集装置方便快捷，限定了负压抽滤和正压处理的压力范围，使操作更加标准化。

附图说明

图1为本发明中过滤膜筒的正视图，其中1为过滤膜筒，2为滤膜；

图2为本发明中盛装寄生虫虫卵的样本瓶的示意图；

图3为采用寄生虫虫卵收集装置进行负压抽滤收集虫卵示意图，其中3为第一管道，4为第二管道，5为压力检测器；

图4为采用寄生虫虫卵收集装置进行废水排放示意图；

图5为采用寄生虫虫卵收集装置利用正压转移虫卵至载玻片示意图；

图6为本发明提供的收集方法制成的虫卵载玻片示意图。

具体实施方式

本发明提供的一种肠道寄生虫虫卵的收集方法，包括以下步骤：

1)将新鲜粪便进行化学固定，释放虫卵，去除杂质，得到寄生虫虫卵悬浮液；

2)将步骤1)中所述寄生虫虫卵悬浮液经负压抽滤弃去废液，寄生虫虫卵截留在滤膜上；

3)将截留有寄生虫虫卵的滤膜的一面贴近载玻片，采用正压处理将寄生虫虫卵转移至载玻片上。

本发明将新鲜粪便进行化学固定，释放虫卵，去除杂质，得到寄生虫虫卵悬浮液。

在本发明中，所述化学固定用溶液优选为体积浓度为5％的甲醛溶液。所述化学固定可维持虫卵的形态，使其能在一段时间保持形态不变，便于后续镜检时准确辨认。所述新鲜粪便和化学固定用溶液的体积比优选为3～5g：10～50ml，更优选为4g：20ml。

在本发明中，释放虫卵的方法优选是将含有粪便混合液进行振荡5～10min。所述振荡有利于粪便充分溶解与固液液中，使寄生虫虫卵从粪便中释放。本发明对所述新鲜粪便的种类没有限制，采用目标动物的新鲜粪便即可。所述肠道寄生虫的种类没有特殊限制，对常见的有原虫类和蠕虫类(包括蛔虫、钩虫、蛲虫、绦虫、鞭虫、阿米巴、贾第虫、滴虫等)寄生虫均适用。

在本发明中，去除杂质的方法优选为用医用纱布过滤粪便混合液。所述过滤时医用纱布优选一层纱布即可。使用医用纱布，医用纱布清洁无菌，避免因操作问题引入新的虫卵，利于保证后续检测的准确性。

得到寄生虫虫卵悬浮液后，本发明将所述寄生虫虫卵悬浮液经负压抽滤弃去废液，寄生虫虫卵截留在滤膜上。

在本发明中，负压抽滤的方法采用本领域所熟知的负压抽滤的方法即可。为了使操作更加方便快捷，所述负压抽滤优选采用寄生虫虫卵收集装置进行；所述寄生虫虫卵收集装置包括过滤膜筒和压力控制装置；所述压力控制装置包括筒体和上盖；所述上盖与筒体的上端密封连接；所述上盖设置有两个通孔，其中一个通孔连接有第一管道，另一个通孔连接有第二管道；所述第一管道的终端可拆卸的与压力泵连接；所述第二管道的终端设置有压力检测器；所述筒体的外周面下端设置凹槽，在所述凹槽处安装有密封圈；所述过滤膜筒的一端安装有滤膜，所述过滤膜筒的另一端通过密封圈与所述筒体的下端可拆卸的密封连接。所述过滤膜筒的直径优选为20～30mm，更优选为25mm。所述过滤膜筒的长度优选为40～80cm，更优选为55mm。所述第一管道的直径优选为1～8mm，更优选为3mm。所述筒体的直径优选为20～30mm，更优选为24mm。

在本发明中，采用寄生虫虫卵收集装置进行负压抽滤时，设置压力检测器的负压阈值优选为-0.01～-0.05Mpa，当达到所述负压阈值时，结束负压抽滤。负压抽滤时将过滤膜筒安装滤膜的一端伸入至装有滤液的样品瓶中，经压力泵抽吸在过滤膜筒内产生负压，样品瓶内的一部分溶液会经过滤膜滤孔进入到过滤膜筒内，同时会有虫卵贴附在过滤膜表面并堵塞过滤膜孔，当过滤膜表面过滤孔被虫卵堵塞到一定程度时，过滤膜筒内的负压值将会触发设定的负压阈值，提示虫卵收集完成，结束虫卵的收集过程。所述滤膜的孔径优选为18～24μm，更优选为20μm。采用所述寄生虫虫卵收集装置进行收集寄生虫虫卵时，每次处理新鲜粪便的质量为3～5g，更优选为4g。

负压抽滤后，本发明将截留有寄生虫虫卵的滤膜的一面贴近载玻片，采用正压处理将寄生虫虫卵转移至载玻片上。

在本发明中，将截留有寄生虫虫卵的滤膜的一面贴近载玻片的方法是优选将截留有寄生虫虫卵的滤膜的一面与载玻片置于相对垂直的位置。所述载玻片优选经过化学处理，具有吸附能力。所述载玻片优选采用申请号为200810047281.0的发明专利的技术方案制备。

在本发明中，采用所述寄生虫虫卵收集装置负压抽滤后弃去废液的方法优选是将所述第一管道与压力泵的连接断开，将所述寄生虫虫卵收集装置倾斜，将废水通过所述第一管道排出。采用所述寄生虫虫卵收集装置进行正压处理时，优选将所述第一管道的终端与压力泵连接，所述压力泵的压力值设定为0.001～0.02Mpa，更优选为0.01～0.15Mpa。所述压力值的大小根据滤膜上寄生虫虫卵脱落情况进行调整。堵塞在过滤膜膜孔处的寄生虫虫卵会因过滤膜筒内压强升高而脱离过滤膜，被载玻片吸附，完成虫卵转移至载玻片的过程。

下面结合实施例对本发明提供的一种肠道寄生虫虫卵的收集方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

样本收集：收集3g宠物狗的新鲜粪便置于样本保存液，维持虫卵的形态，使其能在一段时间保持形态不变。

释放虫卵：将含有新鲜粪便的样本保存液振荡8min，使粪便解离，得到振荡液。

过滤：使用一层医用纱布过滤振荡液，收集滤液。

负压收集虫卵：将过滤膜筒的一端安装有孔径20μm滤膜，另一端通过密封圈与压力控制装置密封连接，所述压力控制装置的盖体上连通两通道，第一通道与压力泵相连，工作时可产生正压或负压，定为通道A，第二通道与压力检测器相连，通过设定一个负压阈值(负压范围值为-0.01～-0.05Mpa)，来判断收集虫卵的过程是否结束，定为通道B。负压抽滤时将安装在压力控制装置上的过滤膜筒安装滤膜一端伸入至装有滤液的样品瓶中，经压力泵抽吸在过滤膜筒内产生负压，样品瓶内的一部分溶液会经过滤膜滤孔进入到过滤膜筒内，同时会有虫卵贴附在过滤膜表面并堵塞过滤膜孔，当过滤膜表面过滤孔被虫卵堵塞到一定程度时，过滤膜筒内的负压值将会触发设定的负压阈值，提示虫卵收集完成，结束虫卵的收集过程。

去过滤膜筒内的废液：虫卵收集过程结束后，将带有过滤膜筒的压力控制装置翻转倾斜，过滤膜筒内的废液将会经由通道A进入收集废液的废液桶，避免污染操作环境。

设定正压(正压为≤0.02Mpa)转移虫卵至载玻片上：将装载有过滤膜筒的压力控制装置紧贴载玻片(经过化学处理，具有吸附能力，载玻片采用申请人孝感宏翔生物医械技术有限公司，申请号：200810047281.0专利公开的载玻片即可)，经与通道A相连的压力泵产生正压，使过滤膜筒内的压强升高。堵塞在过滤膜膜孔处的虫卵将会因过滤膜筒内压强升高的原因脱离过滤膜而被载玻片吸附，完成虫卵转移至载玻片的过程。

将载玻片上置于显微镜下观察，镜下显示背景干净，无大片杂质，虫卵无杂质遮蔽，清晰可见。

对比例1

取洁净载玻片一张，在玻片中央滴1～2滴生理盐水。

用小木棒挑取实施例1中黄豆大小的粪便少许，在载玻片的生理盐水中涂匀成粪膜，加盖玻片、镜检。

实验结果

显微镜下发现不同视野里有虫卵若干，以及大量未消化的食物残渣，植物纤维等。生理盐水直接涂片法是一种检查蠕虫虫卵和原虫滋养体的方法。优点是简便、易行、快速、适合于虫卵量大的粪便检查；缺点是对虫卵含量低的粪便检出率低。因此在实际工作中，为了提高镜检的检出率，需多检几片(一般相同的粪便标本连续做三张涂片)。

实施例2

样本收集：收集4g养殖场鸡的新鲜粪便置于样本保存液，维持虫卵的形态，使其能在一段时间保持形态不变。

释放虫卵：将含有新鲜粪便的样本保存液振荡5min，使粪便解离，得到振荡液。

过滤：使用一层医用纱布过滤振荡液，收集滤液。

负压收集虫卵：将过滤膜筒的一端安装有孔径20μm滤膜，另一端通过密封圈与压力控制装置密封连接，所述压力控制装置的盖体上连通两通道，第一通道与压力泵相连，工作时可产生正压或负压，定为通道A，第二通道与压力检测器相连，通过设定一个负压阈值(负压范围值为-0.01～-0.05Mpa)，来判断收集虫卵的过程是否结束，定为通道B。负压抽滤时将安装在压力控制装置上的过滤膜筒安装滤膜一端伸入至装有滤液的样品瓶中，经压力泵抽吸在过滤膜筒内产生负压，样品瓶内的一部分溶液会经过滤膜滤孔进入到过滤膜筒内，同时会有虫卵贴附在过滤膜表面并堵塞过滤膜孔，当过滤膜表面过滤孔被虫卵堵塞到一定程度时，过滤膜筒内的负压值将会触发设定的负压阈值，提示虫卵收集完成，结束虫卵的收集过程。

去过滤膜筒内的废液：虫卵收集过程结束后，将带有过滤膜筒的压力控制装置翻转倾斜，过滤膜筒内的废液将会经由通道A进入收集废液的废液桶，避免污染操作环境。

设定正压(正压为≤0.02Mpa)转移虫卵至载玻片上：将装载有过滤膜筒的压力控制装置紧贴载玻片(经过化学处理，具有吸附能力，载玻片采用申请人孝感宏翔生物医械技术有限公司，申请号：200810047281.0专利公开的载玻片即可)，经与通道A相连的压力泵产生正压，使过滤膜筒内的压强升高。堵塞在过滤膜膜孔处的虫卵将会因过滤膜筒内压强升高的原因脱离过滤膜而被载玻片吸附，完成虫卵转移至载玻片的过程。

将载玻片上置于显微镜下观察，镜下显示背景干净，无大片杂质，虫卵无杂质遮蔽，清晰可见。

对比例2

取洁净载玻片一张，在玻片中央滴1～2滴生理盐水。

用小木棒挑取实施例2中黄豆大小的粪便少许，在载玻片的生理盐水中涂匀成粪膜，加盖玻片、镜检。

显微镜下发现不同视野里有虫卵若干，以及大量未消化的食物残渣，植物纤维等。

实施例3

样本收集：收集5g 5岁小孩的新鲜粪便置于样本保存液，维持虫卵的形态，使其能在一段时间保持形态不变。

释放虫卵：将含有新鲜粪便的样本保存液振荡10min，使粪便解离，得到振荡液。

过滤：使用一层医用纱布过滤振荡液，收集滤液。

负压收集虫卵：将过滤膜筒的一端安装有孔径20μm滤膜，另一端通过密封圈与压力控制装置密封连接，所述压力控制装置的盖体上连通两通道，第一通道与压力泵相连，工作时可产生正压或负压，定为通道A，第二通道与压力检测器相连，通过设定一个负压阈值(负压范围值为-0.01～-0.05Mpa)，来判断收集虫卵的过程是否结束，定为通道B。负压抽滤时将安装在压力控制装置上的过滤膜筒安装滤膜一端伸入至装有滤液的样品瓶中，经压力泵抽吸在过滤膜筒内产生负压，样品瓶内的一部分溶液会经过滤膜滤孔进入到过滤膜筒内，同时会有虫卵贴附在过滤膜表面并堵塞过滤膜孔，当过滤膜表面过滤孔被虫卵堵塞到一定程度时，过滤膜筒内的负压值将会触发设定的负压阈值，提示虫卵收集完成，结束虫卵的收集过程。

去过滤膜筒内的废液：虫卵收集过程结束后，将带有过滤膜筒的压力控制装置翻转倾斜，过滤膜筒内的废液将会经由通道A进入收集废液的废液桶，避免污染操作环境。

设定正压(正压为≤0.02Mpa)转移虫卵至载玻片上：将装载有过滤膜筒的压力控制装置紧贴载玻片(经过化学处理，具有吸附能力，载玻片采用申请人孝感宏翔生物医械技术有限公司，申请号：200810047281.0专利公开的载玻片即可)，经与通道A相连的压力泵产生正压，使过滤膜筒内的压强升高。堵塞在过滤膜膜孔处的虫卵将会因过滤膜筒内压强升高的原因脱离过滤膜而被载玻片吸附，完成虫卵转移至载玻片的过程。

将载玻片上置于显微镜下观察，镜下显示背景干净，无大片杂质，虫卵无杂质遮蔽，清晰可见。

对比例3

取洁净载玻片一张，在玻片中央滴1～2滴生理盐水。

用小木棒挑取实施例3中黄豆大小的粪便少许，在载玻片的生理盐水中涂匀成粪膜，加盖玻片、镜检。

显微镜下发现不同视野里有虫卵若干，以及大量未消化的食物残渣，植物纤维等。

由上述实施例可知，本发明提供的方法通过过滤掉大的杂质，正负压收集虫卵时过滤小的杂质来提高观察背景的清晰度，相较于传统的收集虫卵的方法，本发明实通过改善背景来提高检测虫卵的准确性，且操作简便，重复性好。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种肠道寄生虫虫卵的收集方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将新鲜粪便进行化学固定，释放虫卵，去除杂质，得到寄生虫虫卵悬浮液；

2)将步骤1)中所述寄生虫虫卵悬浮液经负压抽滤弃去废液，寄生虫虫卵截留在滤膜上；

3)将截留有寄生虫虫卵的滤膜的一面贴近载玻片，采用正压处理将寄生虫虫卵转移至载玻片上。

2.根据权利要求1所述的收集方法，其特征在于，所述负压抽滤采用寄生虫虫卵收集装置进行；

所述寄生虫虫卵收集装置包括过滤膜筒和压力控制装置；

所述压力控制装置包括筒体和上盖；所述上盖与筒体的上端密封连接；所述上盖设置有两个通孔，其中一个通孔连接有第一管道，另一个通孔连接有第二管道；所述第一管道的终端可拆卸的与压力泵连接；所述第二管道的终端设置有压力检测器；所述筒体的外周面下端设置凹槽，在所述凹槽处安装有密封圈；

所述过滤膜筒的一端安装有滤膜，所述过滤膜筒的另一端通过密封圈与所述筒体的下端可拆卸的密封连接。

3.根据权利要求2所述的收集方法，其特征在于，采用寄生虫虫卵收集装置进行负压抽滤时，设置压力检测器的负压阈值为-0.01～-0.05Mpa，当达到所述负压阈值时，结束负压抽滤。

4.根据权利要求2所述的收集方法，其特征在于，采用所述寄生虫虫卵收集装置负压抽滤后弃去废液的方法是将所述第一管道与压力泵的连接断开，将所述寄生虫虫卵收集装置倾斜，将废水通过所述第一管道排出。

5.根据权利要求2所述的收集方法，其特征在于，步骤3)中采用所述寄生虫虫卵收集装置进行正压处理时，将所述第一管道的终端与压力泵连接，所述压力泵的压力值设定为0.001～0.02Mpa。

6.根据权利要求1或2所述的收集方法，其特征在于，所述滤膜的孔径为18～24μm。

7.根据权利要求2～5任意一项所述的收集方法，其特征在于，采用所述寄生虫虫卵收集装置进行收集寄生虫虫卵时，每次处理新鲜粪便的质量为3～5g。

8.根据权利要求1～5任意一项所述的收集方法，其特征在于，化学固定用溶液为体积浓度为5％的甲醛溶液。

9.根据权利要求1～5任意一项所述的收集方法，其特征在于，释放虫卵的方法是将含有粪便混合液进行振荡5～10min。

10.根据权利要求1～5任意一项所述的收集方法，其特征在于，去除杂质的方法为用医用纱布过滤粪便混合液。