CN109966193A - 一种改善皮肤功能的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种改善皮肤功能的组合物，其包括以下重量份的原料：芍药1‑10份、甘草1‑10份、白蔹1‑10份。还公开了一种化妆品，所述化妆品包括所述的改善皮肤功能的组合物。还公开了一种所述的改善皮肤功能的组合物的制备方法，其包括以下步骤：(1)按配方比例称取各原料，常规粉碎，加入5‑15倍于原料重量的水，80‑100℃提取2‑3次，每次时间0.5‑2.5小时；(2)将步骤(1)的提取液合并后过滤并离心，得到上清液；(3)将步骤(2)中上清液浓缩，得到浓缩液。还公开了所述改善皮肤功能的组合物在制备抗皮肤衰老或美白祛斑的化妆品上的用途。本发明的组合物具有保湿、抗衰老、改善肤色和细腻肌肤的效果。

Description

一种改善皮肤功能的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于化妆品领域，具体涉及一种改善皮肤功能的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

爱美之心人皆有之，防止容颜衰老，保持皮肤细腻、光洁、白皙、红润，一直都是人们追求的目标。

皮肤经受许多内在和外在因素的侵害，内在因素主要有遗传基因、自由基对细胞的损伤等，外在因素主要有紫外线辐射、环境污染等，这些内在和外在的因素都会导致皮肤老化，如皮肤松垂、皱纹形成、毛孔粗大、肤色暗沉、色素沉着等。目前，对于皮肤衰老的治疗主要两个方面：外科手术和药物疗法。已经应用的活性成分有维甲酸、抗氧化剂、细胞因子等。市场上针对皮肤抗衰老的化妆品层出不穷，但大部分仍然存在疗效差、不良反应多，使用不方便、价格昂贵等问题，不能广泛应用。

中国数千年的中医药理论与实践，在美容护肤方面有其独特的发展和应用。植物来源的中药，有很多具有多重功效且协同作用非常理想的活性成分，使它们可以多个角度、多种途径发挥其功用，达到抗皮肤衰老和祛斑美白的目的。

发明内容

本发明解决的技术问题是针对市场上皮肤抗衰老的化妆品存在的疗效差、不良反应多，使用不方便、价格昂贵且不能广泛应用的问题，提供一种能有效减缓皮肤衰老、具有美白祛斑功能的中药组合物。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案之一为：一种改善皮肤功能的组合物，其包括以下重量份的原料：芍药1-10份、甘草1-10份、白蔹1-10份。

优选地，所述改善皮肤功能的组合物还包括以下重量份的原料：桑根皮1-5份、葛根1-5份、丹参1-5份和防风1-5份中的一种或多种。

更优选地，所述的改善皮肤功能的组合物由以下重量份的原料组成：芍药1-10份、甘草1-10份、白蔹1-10份，以及桑根皮1-5份、葛根1-5份、丹参1-5份和防风1-5份中的一种或多种。

进一步更优选地，所述的改善皮肤功能的组合物，其由以下重量份的原料组成：芍药6份、甘草6份、白蔹3份、桑根皮3份、葛根1份、丹参1份和防风1份；芍药1份、甘草9份、白蔹3份、桑根皮1份和防风5份；或芍药1份、甘草1份、白蔹1份、桑根皮5份、葛根5份和丹参5份。

在上述组合物中，对各原料的来源、性味、归经、功效及有关的研究描述如下：

芍药：为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。味苦、酸，性微寒。归肝、脾经。功效养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳。《神农本草经》列为中品，记载：“治邪气腹痛，除血痹，破坚积，寒热，疝瘕，止痛，利小便，益气。”《本草纲目》记载：“止下痢腹痛后重。”白芍是临床较为常用的大宗药材，含芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷等，国内外多项体内外研究表明，芍药苷是一种有效的抗氧化剂，其抗组织细胞氧化应激损伤的机制，主要通过抑制氧化亢进、增强抗氧化能力、改善线粒体功能、抑制钙离子超载、抗凋亡等多途径、多靶点发挥作用，具有独特的抗氧化应激优势[包钰婷，郭在培，王小雪，等。芍药苷抗氧化应激机制研究进展。中国麻风皮肤病杂志，2017，33（6）：374-377]。

甘草：为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎。味甘，性平。归心、肺、脾、胃经。功效补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。《神农本草经》列为上品，记载：“主五脏六府寒热邪气；坚筋骨，长肌肉，倍力；金疮肿；解毒。久服轻身延年。”《本草纲目》记载：“解小儿胎毒惊痫，降火止痛。”甘草是中医临床各科中最常用的中药之一，具有广泛的药理作用。甘草提取物及其黄酮类化合物、甘草酸等对变态反应性皮肤病、皮肤肿瘤、病毒性皮肤病、色素沉着等均有药理活性[张明发，沈雅琴，张艳霞。甘草及其有效成分的皮肤药理和临床应用。药物评价研究，2013，36（2）：146-156]。

白蔹：为葡萄科植物白蔹Ampelopsis japonica(Thunb.)makino的干燥块根。味苦，性微寒。归心、胃经。功效清热解毒，消痈散结，敛疮生肌。《神农本草经》列为下品，记载：“治痈肿，疽，疮，散结气，止痛，除热，目中赤，小儿惊痫，温疟，女子阴中肿痛，带下赤白。”《本草纲目》记载：“解狼毒。”白蔹作为一味传统中药，国内外学者先后分离得到了黄酮类、甾醇类、蒽醌类、酚酸类及其糖苷、三萜类、木脂素类等多种化学成分。具有抗菌、抗肿瘤、调节免疫活性、敛疮生肌促进溃疡面愈合等作用[陈爱军，刘运美，蔡凤桃，等。白蔹研究进展。中国民族民间医药，2014，（13）：10-11]。

桑根皮（桑白皮）：为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮。味甘，性寒。归肺经。功效泻肺平喘，利水消肿。《神农本草经》列为中品，记载：“治伤中，五劳六极，羸瘦，崩中，脉绝，补虚益气。”《本草纲目》记载：“泻肺，利大小肠，降气散血。”桑根皮主要含有黄酮类化合物、香豆素类及多糖类等。桑白皮水提物具有良好的抑制酪氨酸酶的活性，其安全性已被大众认可，以其开发美白化妆品具有很好的市场前景。桑皮苷、白藜芦醇、氧化白藜芦醇这3种桑树二苯乙烯类物质在韩国已经应用于美白护肤品中 [吴娅楠，黄增辉，徐立。桑树美白活性的研究进展。蚕学通讯，2013，33（2）：7-14 ]。

葛根：为豆科植物野葛Pueraria lobate(Willd.)Ohwi的干燥根。味甘、辛，性凉。归脾、胃肺经。功效解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络，解酒毒。《神农本草经》列为中品，记载：“主消渴，身大热，呕吐，诸痹，起阴气，解诸毒。”《本草纲目》记载：“散郁火。”葛根含有20多种异黄酮成分，三萜类及其他活性成分。葛根用于抗衰老化妆品, 有使面部光润, 除粉刺祛皱纹之功效, 其机理主要与葛根异黄酮类具有抗氧化、增强机体免疫力有关。葛根的异黄酮成分对人类皮肤黑色素的发生与形成具有抑制作用。所以葛根被国际化妆品界誉为是又一种源于绿色植物的皮肤脱色组分, 并被化妆品科技领先的日本用于祛斑化妆品[徐进，张卫明，马世宏，等。葛根在化妆品中的应用初探。中国野生植物资源，2000，19（3）：11-13]。

丹参：为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza的干燥根和根茎。味苦，性微寒。归心、肝经。功效活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈。《神农本草经》列为上品，记载：“治心腹邪气，肠鸣幽幽如走水，寒热积聚，破癥除瘕，止烦满，益气。”《本草纲目》记载：“活血，通心包络，治疝痛。”丹参中含有多种有效成分，丹参的多种成分中丹参酮和丹酚酸活性最强，具有抗炎、抗氧化、抗雄性激素、改善微循环、调节免疫等多种功效，在皮肤科的运用均有良好疗效[李墨灵，张泽曦，杜天乐，等。丹参在皮肤科中的应用。中国美容医学，2015，24（1）：79-82]。

防风：为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricate (Turcz.) Schischk.的干燥根。味辛、甘，性微温。归膀胱、肝、脾经。功效祛风解表，胜湿止痛，止痉。《神农本草经》列为上品，记载：“治大风，头眩痛，恶风，风邪，目盲无所见，风行周身，骨节疼痹，烦满。久服轻身。”《本草纲目》记载：“防者，御也。其功疗风最要。”防风作为我国的传统中药，药用历史悠久，临床疗效确切，是非常有价值的药用资源。目前已经鉴定出防风的化学成分达120 种以上，在解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗惊厥等方面显示出积极的作用，并在感冒、头痛、消化系统疾病、呼吸系统疾病、皮肤病等临床治疗方面有着显著的疗效，防风蕴藏巨大的药用价值[刘双利，姜程曦，赵岩，等。防风化学成分及其药理作用研究进展。中草药，2017，48（10）：2146-2152]。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案之一为：一种化妆品，其包括所述的改善皮肤功能的组合物。

优选地，所述化妆品还包括化妆品学上可接受的试剂或载体；更优选地，所述组合物在所述化妆品中的重量百分比为10-50%；进一步优选地，所述组合物在所述化妆品中的重量百分比为20%。

本发明的组合物可以处于便于保存的液体状态或固体状态，可以根据本领域中已知的方法添加到化妆品中，制备相应的面膜、凝胶、凝露、膏霜、乳液、粉底、化妆水、清洁剂或其他已知的化妆品。

化妆品学上可接受的有益试剂或载体，包括但不限于美白剂、保湿剂、增稠剂、乳化剂、抗氧化剂、防腐剂、精油等，其中美白剂包括但不限于烟酰胺、熊果苷、光甘草定等；保湿剂包括但不限于甘油、丙二醇、己二醇、D-泛醇、透明质酸钠、透明质酸、尿囊素等；增稠剂包括但不限于黄原胶、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、PVM/MA癸二烯交联聚合物等；乳化剂包括但不限于山梨糖醇的酯类、失水山梨糖醇酐的酯类等；抗氧化剂包括但不限于抗坏血酸及其衍生物、生育酚及其衍生物等；防腐剂包括但不限于苯氧乙醇、甲基异噻唑啉酮、双咪唑烷基脲、尼泊金酯类等；精油包括但不限于玫瑰油、薄荷油、薰衣草油、月见草油等；按常规工艺制成任何类型的化妆品，包括但不限于凝露、面膜、凝胶、膏霜、乳液、粉底、化妆水、清洁剂或其他已知的化妆品。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案之一为：所述的改善皮肤功能的组合物的制备方法，其包括以下步骤：(1) 按配方比例称取各原料，常规粉碎，加入5-15倍于药材重量的水，80-100℃提取2-3次，每次时间0.5-2.5小时；(2) 将步骤(1)的提取液合并后过滤并离心，得到上清液，所述过滤是用50-80目筛过滤，所述离心为10000-15000转/分钟；(3) 将步骤(2)中上清液浓缩，得到浓缩液；优选地，步骤(2)所述过滤为用60目筛过滤，所述离心为14000转/分钟。

优选地，所述步骤(2) 的上清液进一步采用陶瓷膜分离法进行再过滤，得滤过液，和/或；步骤(3)中所述的浓缩为减压、薄膜蒸发或采用反渗透(RO)膜分离法浓缩。

优选地，所述的改善皮肤功能的组合物的制备方法，其进一步包括如下步骤(4)：将步骤(3)的浓缩液，喷雾干燥，得到固体粉末。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案之一为：所述的改善皮肤功能的组合物在制备抗衰老、改善肤色和细腻肌肤的化妆品上的用途。

本发明有益效果：

(1) 以传统中医理论和现代医学研究相结合，组方设计合理，配伍严谨；组合物的原料，安全可靠，价廉易得。

(2) 能够减缓皮肤衰老，对皮肤表层和内部保湿，紧致毛孔，改善黯淡，提亮肤色，让肌肤变得柔滑细腻，红润光泽而有弹性。

(3) 本发明组合物的制备方法以传统工艺和现代先进分离技术相结合，体现了传统配方的特色，极大地保留了原料中的各种活性物质。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作详细说明，但不构成对本发明的任何限制。

实施例1 组合物1的制备

1. 称取芍药9kg、甘草9kg、白蔹5kg，用锤片式粉碎机（型号WFJ-15，江阴市康和机械制造有限公司）粉碎过5目筛，备用。

2. 将粉碎物料加入多功能动态提取罐（型号TT-500，济宁金百特生物机械有限公司），90±5℃提取二次。第一次15倍原料量的水，时间1.5小时；第二次10倍原料量的水，时间1.0小时，60目筛过滤，粗滤液合并，管式离心机连续高速离心（转速10000转/分钟），离心上清液减压浓缩（- 0.06Mpa～- 0.08Mpa，70±5℃），浓缩液Brix值（日本ATAGO糖度计）12.3%，采用巴氏灭菌后，灌入无菌袋，备用。用纯水稀释浓缩液，定容配制成浓度50mg/L，即1 L纯水中含50mg组合物。

实施例2 组合物2的制备

1. 称取芍药9kg、甘草1kg、白蔹1kg、桑白皮5kg，用锤片式粉碎机粉碎过5目筛，备用。

2. 将粉碎物料加入多功能动态提取罐，95±5℃提取二次。第一次10倍原料量的水，时间1.0小时；第二次5倍原料量的水，时间0.5小时；60目筛过滤，粗滤液合并，管式离心机连续高速离心（转速10000转/分钟），离心上清液减压浓缩（- 0.06Mpa～- 0.08Mpa，70±5℃），浓缩液Brix值12.7%，采用巴氏灭菌后，灌入无菌袋，备用。用纯水稀释浓缩液，定容配制成浓度50mg/L，即1 L纯水中含50mg组合物。

实施例3 组合物3的制备

1. 称取芍药6kg、甘草6kg、白蔹3kg、桑白皮3kg、葛根1kg、丹参1kg、防风1kg，用锤片式粉碎机粉碎过5目筛，备用。

2. 将粉碎物料加入多功能动态提取罐，90±5℃提取二次。第一次12倍原料量的水，时间1.0小时；第二次8倍原料量的水，时间0.5小时；60目筛过滤，粗滤液合并，管式连续高速离心（转速14000转/分钟），离心上清液用陶瓷膜（膜孔径0.2µm，透过液流速60L/hr）进行微滤，收集截留液，截留液采用反渗透膜（截留分子量100，透过液流速90L/hr）浓缩，浓缩液Brix值13.9%，采用巴氏灭菌后，灌入无菌袋，备用。用纯水稀释浓缩液，定容配制成浓度50mg/L，即1 L纯水中含有50mg组合物。

实施例4 组合物4的制备

1. 称取芍药1kg、甘草9kg、白蔹3kg、桑白皮1kg、防风5kg，用锤片式粉碎机粉碎过5目筛，备用。

2. 将粉碎物料加入多功能动态提取罐，80±5℃提取三次。第一次15倍原料量的水，时间1.5小时；第二次10倍原料量的水，时间1.0小时；第三次5倍原料量的水，时间0.5小时；60目筛过滤，粗滤液合并，管式连续高速离心（转速14000转/分钟），离心上清液用陶瓷膜（膜孔径0.2µm，透过液流速60L/hr）进行微滤，收集截留液，截留液采用反渗透膜（截留分子量100，透过液流速90L/hr）浓缩，浓缩液Brix值13.5%，采用巴氏灭菌后，灌入无菌袋，备用。用纯水稀释浓缩液，定容配制成浓度50mg/L，即1 L纯水中含有50mg组合物。

实施例5 组合物5的制备

1. 称取芍药1kg、甘草1kg、白蔹1kg、桑白皮5kg、葛根5kg、丹参5kg、，用锤片式粉碎机粉碎过5目筛，备用。

2. 将粉碎物料加入多功能动态提取罐，90±5℃提取三次。第一次12倍原料量的水，时间1.0小时；第二次8倍原料量的水，时间0.5小时；第三次6倍原料量的水，时间0.5小时；60目筛过滤，粗滤液合并，管式连续高速离心（转速14000转/分钟），离心上清液用陶瓷膜（膜孔径0.2µm，透过液流速60L/hr）进行微滤，收集截留液，截留液采用反渗透膜（截留分子量100，透过液流速90L/hr）浓缩，浓缩液Brix值13.1%，采用巴氏灭菌后，灌入无菌袋，备用。用纯水稀释浓缩液，定容配制成浓度50mg/L，即1 L纯水中含有50mg组合物。

实施例6：多效修护凝露的制备

1. 在生产容器中，将卡波姆溶解于部分水（65℃）中，缓慢搅拌至完全溶解，冷却至30℃。

2. 将实施例3制得的浓缩液与甘油、丙二醇、烟酰胺、己二醇、对羟基苯乙酮、透明质酸钠、透明质酸、尿囊素和黄原胶等投入到生产容器中，在30℃下真空缓慢搅拌至形成澄清液体，冷却至室温，加入三乙醇胺调节PH，加入剩余的水，缓慢搅拌至形成均匀顺滑的凝露。凝露配方中的成分及比例见表1

表1 凝露配方中的成分及比例

序号	原料中文名称	比例%
			1	实施例3制得的浓缩液	20
2	甘油	5
			3	丙二醇	5
4	烟酰胺	5
			5	己二醇	0.6
6	对羟基苯乙酮	0.6
			7	卡波姆	0.4
8	三乙醇胺	0.5
			9	尿囊素	0.2
10	中等分子量透明质酸钠	0.15
			11	黄原胶	0.1
12	小分子量透明质酸	0.05

对比例1 组合物a的制备

1. 称取芍药9kg、甘草9kg，用锤片式粉碎机粉碎过5目筛，备用。

2. 将粉碎物料加入多功能动态提取罐，90±5℃提取二次。第一次15倍原料量的水，时间1.5小时；第二次10倍原料量的水，时间1.0小时，60目筛过滤，粗滤液合并，管式离心机连续高速离心（转速10000转/分钟），离心上清液减压浓缩（- 0.06Mpa～- 0.08Mpa，70±5℃），浓缩液Brix值12.3%，采用巴氏灭菌后，灌入无菌袋，备用。用纯水稀释浓缩液，定容配制成浓度50mg/L，即1 L纯水中含50mg组合物。

对比例2 组合物b的制备

1. 称取芍药9kg、白蔹5kg，用锤片式粉碎机粉碎过5目筛，备用。

2. 将粉碎物料加入多功能动态提取罐，90±5℃提取二次，第一次12倍原料量的水，时间1.0小时，第二次8倍原料量的水，时间0.5小时，60目筛过滤，粗滤液合并，管式离心机连续高速离心（转速10000转/分钟），离心上清液减压浓缩（- 0.06Mpa～- 0.08Mpa，70±5℃），浓缩液Brix值12.2%，采用巴氏灭菌后，灌入无菌袋，备用。用纯水稀释浓缩液，定容配制成浓度50mg/L，即1 L纯水中含50mg组合物。

对比例3 组合物c的制备

1. 称取甘草9kg、白蔹5kg，用锤片式粉碎机粉碎过5目筛，备用。

2. 将粉碎物料加入多功能动态提取罐，90±5℃提取二次，第一次12倍原料量的水，时间1.0小时，第二次8倍原料量的水，时间0.5小时，60目筛过滤，粗滤液合并，管式离心机连续高速离心（转速10000转/分钟），离心上清液减压浓缩（- 0.06Mpa～- 0.08Mpa，70±5℃），浓缩液Brix值12.5%，采用巴氏灭菌后，灌入无菌袋，备用。用纯水稀释浓缩液，定容配制成浓度50mg/L，即1 L纯水中含50mg组合物。

对比例4 组合物d的制备

1. 称取白芍9kg、甘草9kg、白及5kg，用锤片粉碎机粉碎过10目筛，备用。

2. 将粉碎物料加入多功能动态提取罐，90±5℃提取三次。第一次12倍原料量的水，时间1.0小时；第二次8倍原料量的水，时间0.5小时；第三次6倍原料量的水，时间0.5小时；60目筛过滤，粗滤液合并，管式离心机连续高速离心（转速14000转/分钟），离心上清液用陶瓷膜（膜孔径0.2µm，透过液流速60L/hr）进行微滤，收集截留液，截留液采用反渗透膜（截留分子量100，透过液流速90L/hr）浓缩，浓缩液Brix值12.6%，采用巴氏灭菌后，灌入无菌袋，备用。用纯水稀释浓缩液，定容配制成浓度50mg/L，即1 L纯水中含50mg组合物。

以上实施例和对比例的配方对比见表2。

表2 各组合物所示的成分及比例

成分

实施例1

实施例2

实施例3

实施例4

实施例5

对比例1

对比例2

对比例3

对比例4

芍药

9份

9份

6份

1份

1份

9份

9份

—

9份

甘草

9份

1份

6份

9份

1份

9份

—

9份

9份

白蔹

5份

1份

3份

3份

1份

—

5份

5份

—

桑白皮

—

5份

3份

1份

5份

—

—

—

—

葛根

—

—

1份

—

5份

—

—

—

—

丹参

—

—

1份

—

5份

—

—

—

—

防风

—

—

1份

5份

—

—

—

—

—

白及

—

—

—

—

—

—

—

—

5份

效果实施例1

皮肤真皮中最重要的细胞成分是成纤维细胞(human dermal fibroblasts，HDFs)，其数量减少、形态改变、分泌合成功能减弱或衰退与皮肤衰老密切相关。人二倍体成纤维细胞在体外培养的寿命是有限的，随着体外培养所传代数增加，细胞的增殖能力逐渐丧失，因此，目前，成纤维细胞体外增殖能力已经广泛应用于抗衰老研究。

人皮肤成纤维细胞增殖试验：以5000个/孔将成纤维细胞（美国ATCC，上海联迈生物工程有限公司）接种入96孔板中，在孔板中加入组合物或空白对照，37℃培养72hr。每组做5个复孔。MTT法于酶标仪（Varioskan Flash 全波长多功能酶标仪）570nm处测定吸光度，计算细胞增殖率，计算公式如下（式中A 为组合物组的吸光度；B为空白对照组的平均吸光度）：细胞增殖率=(A/B-1)×100%。采用SPSS19.0 软件进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差表示，样品间差异比较用t检验。试验结果见表3。

表3 人皮肤成纤维细胞增殖试验结果

	吸光度（ ±SD）	细胞增殖率（%）	P值
				空白对照组	0.902±0.038	—
组合物1	1.152±0.053	27.72±5.83**	0.0038
				组合物2	1.128±0.045	25.06±4.98**	0.0080
组合物3	1.192±0.054	32.15±6.04**	0.0006
				组合物4	1.148±0.046	27.27±5.10**	0.0025
组合物5	1.172±0.056	29.93±6.24**	0.0019
				组合物a	1.014±0.051	12.41±5.68
组合物b	0.990±0.056	9.76±6.22
				组合物c	0.988±0.065	9.53±7.24
组合物d	1.050±0.021	16.41±2.35

注：细胞增殖率与组合物d比较，**P<0.01

如结果所示，本发明实施例1-5制备的组合物1-5和对比例1-4制备的组合物a-d均可以促进人皮肤成纤维细胞增殖，且本发明实施例1-5得到的组合物1-5效果极为显著。特别是，本发明组合物1-5与对比例4得到的组合物d（对比例1-4中增殖效果最好的）相比，差异具有极显著性，显示本发明的组合物取得了预料不到的技术效果。

效果实施例2

皮肤的颜色主要由皮肤色素含量及分布决定，黑色素是最主要的决定因素。黑色素的合成主要在黑色素细胞内进行, 酪氨酸经酪氨酸酶催化羟化为多巴并进而形成多巴醌,并经DHI氧化酶和DHICA氧化酶的作用, 生成真黑素, 所以酪氨酸酶是黑素生成的起始限速酶。目前，对黑色素B16细胞酪氨酸酶活性的影响，是体外细胞生物学筛选美白成分的经典方法。

B16小鼠黑色素瘤细胞内酪氨酸酶活性的测定：以5000个/孔将B16细胞（美国ATCC，上海复祥生物科技有限公司）接种入96孔板中，在孔板中加入组合物或空白对照，37℃培养48hr。每组做5个复孔。以左旋多巴为底物，于酶标仪490nm处测定吸光度，计算酪氨酸酶活性抑制率，计算公式如下（式中A 为组合物组的吸光度；B为空白对照组的平均吸光度）：酪氨酸酶活性抑制率=(1-A/B)×100%。采用SPSS19.0 软件进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差表示，样品间差异比较用t检验。试验结果见表3。

表4 B16细胞内酪氨酸酶活性测定的结果

	吸光度（±SD）	酪氨酸酶活性抑制率（%）	P值
				空白对照组	0.716±0.051	—
组合物1	0.336±0.042	53.07±5.89**	0.00037
				组合物2	0.346±0.038	51.68±5.37**	0.00040
组合物3	0.298±0.052	58.38±7.22**	0.00019
				组合物4	0.352±0.036	50.84±4.98**	0.00038
组合物5	0.314±0.048	56.14±6.74**	0.00026
				组合物a	0.528±0.029	26.26±4.0
组合物b	0.532±0.041	25.70±5.79
				组合物c	0.550±0.027	23.18±3.82
组合物d	0.458±0.019	36.03±2.69

注：酪氨酸酶活性抑制率与组合物d比较，**P<0.01

如结果所示，本发明实施例1-5制备的组合物1-5和对比例1-4制备的组合物a-d均可以抑制酪氨酸酶活性，且本发明实施例1-5得到的组合物1-5效果极为显著。特别是，本发明组合物1-5与组合物d（对比例1-4中抑制效果最好的)相比，差异具有极显著性，显示本发明的组合物取得了预料不到的技术效果。

效果实施例3：组合物延缓皮肤衰老的临床研究

1. 受试者纳入标准：按自愿原则选择年龄30-60岁的健康女性30名，试验期间不使用任何对结果有影响的化妆品、药物和保健品。

2. 受试者排除标准：怀孕或哺乳期妇女；户外或野外工作者；在测试区多毛、有炎症或疤痕者；患有或曾经患有皮肤癌症者；患有痤疮、异位性皮炎、湿疹、银屑病或其他慢性皮肤疾病者；最近三个月曾参加使用维甲酸、果酸、水杨酸或维生素C的临床研究（包括药物和化妆品）；最近六个月内使用过激光治疗、化学剥脱或脱色剂治疗者；有研究者认为的其它原因而不符合要求者。

3. 研究方法

⑴受试物：使用实施例6多效修护凝露。

⑵使用方法：受试者在洁肤爽肤后，在面部均匀涂抹多效修护凝露，每天早上和晚上涂抹凝露各1次，每次0.5g。

⑶临床仪器检测及评价：共观察8周，随访5次，分别为第0周、第1周、第2周、第4周和第8周，应用皮肤非创伤性检测仪器对同一靶部位进行测量。皮肤黑素和血红蛋白测定仪（德国CK公司）测定MI值和EI值，其测量范围是0-1000，测定数值越高，说明皮肤中黑素和血红蛋白含量越高。皮肤弹性测量仪（德国CK公司）测定皮肤弹性指标R2值和R5值，R2是指无负压时皮肤的回弹量与有负压时的最大拉伸量之比，比值越接近1，说明皮肤弹性越好；R5是指在皮肤测试的第一次循环中，皮肤恢复过程的弹性部分与加负压过程的弹性部分之比，比值越接近1，说明皮肤弹性越好。采用SPSS19.0 软件进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差表示，各数据组间的差异比较用t检验。试验结果见表5。

表5 使用前后各指标结果统计（±SD）

	第0周	第1周	第2周	第4周	第8周
						MI值	486.1±8.9	482.5±9.0	480.1±8.77*	477.1±8.9**	476.3±8.85**
EI值	592.3±15.7	593.3±16.2	596.5±14.6	598.3±14.9	599.1±14.4
						R2值	0.66±0.11	0.68±0.10	0.70±0.10	0.71±0.10*	0.72±0.10*
R5值	0.51±0.08	0.53±0.08	0.55±0.08*	0.56±0.08*	0.58±0.08**

注：各指标与第0周基础值比较，*P<0.05，**P<0.01。

在本次研究中，涂抹实施例6多效修护凝露后，在第1、2、4、8周后，皮肤部位MI值均呈现降低的趋势，使用第2周后，皮肤部位MI值与第0周基础值比较有显著性差异（P<0.05）；使用第4、8周后，皮肤部位MI值与第0周基础值比较有极显著性差异（P<0.01）。综合分析皮肤黑素MI值可知，受试者连续使用实施例6多效修护凝露后，可使皮肤整体黑素水平降低。涂抹实施例6多效修护凝露，在第1、2、4、8周后，皮肤部位EI值均呈现升高的趋势，但与第0周基础值比较均无显著性差异。涂抹实施例6多效修护凝露后，皮肤弹性值R2和R5均有逐渐升高的趋势，使用第4、8周后，R2值与第0周基础值比较有显著性差异（P<0.05）；使用第2、4周后，R5值与第0周基础值比较有显著性差异（P<0.05），使用第8周后，R5值与第0周基础值比较有极显著性差异（P<0.01）。综合分析皮肤弹性值可知，受试者连续使用实施例6多效修护凝露后，可增加皮肤弹性。

效果实施例4：组合物安全性评价-人体斑贴试验

1. 试验依据：《化妆品安全技术规范》（2015年版）

2. 试验方法和结果：按受试者入选标准选择受试人员，人数为30例。选用合格斑贴材料，将实施例6多效修护凝露用滤纸浸润后放入斑试器内，对照孔为空白对照（不置任何物质）。将实施例6多效修护凝露均匀加入斑试器的小室内，将加有实施例6多效修护凝露的斑试器用无刺激胶带贴敷于志愿者背部，用手掌轻压使之均匀贴敷于皮肤上，斑试器持续停留在皮肤24hr。去除斑贴器间隔30min, 待压痕消失后观察皮肤反应。斑贴试验后24hr 和48hr分别观察一次。人体斑贴试验可知，参加此次试验的30名受试者中29人为0级反应，1人为1级反应（可疑反应，仅有微弱红斑），说明实施例6的多效修护凝露未对人体皮肤引起不良反应。

最后需要说明的是：上述实施例仅仅是为清楚的说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种改善皮肤功能的组合物，其特征在于，其包括以下重量份的原料：芍药1-10份、甘草1-10份、白蔹1-10份。

2.根据权利要求1所述的改善皮肤功能的组合物，其特征在于，还包括以下重量份的原料：桑根皮1-5份、葛根1-5份、丹参1-5份和防风1-5份中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的改善皮肤功能的组合物，其特征在于，其由以下重量份的原料组成：芍药1-10份、甘草1-10份、白蔹1-10份，以及桑根皮1-5份、葛根1-5份、丹参1-5份和防风1-5份中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的改善皮肤功能的组合物，其特征在于，其由以下重量份的原料组成：芍药6份、甘草6份、白蔹3份、桑根皮3份、葛根1份、丹参1份和防风1份；芍药1份、甘草9份、白蔹3份、桑根皮1份和防风5份；或芍药1份、甘草1份、白蔹1份、桑根皮5份、葛根5份和丹参5份。

5.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包括如权利要求3或4所述的改善皮肤功能的组合物。

6.如权利要求5所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品还包括化妆品学上可接受的试剂或载体；优选地，所述组合物在所述化妆品中的重量百分比为10-50%；更优选地，所述组合物在所述化妆品中的重量百分比为20%。

7.一种如权利要求1~4中任一项所述的改善皮肤功能的组合物的制备方法，其包括以下步骤：(1) 按配方比例称取各原料，常规粉碎，加入5-15倍于原料重量的水，80-100℃提取2-3次，每次时间0.5-2.5小时；(2) 将步骤(1)的提取液合并后过滤并离心，得到上清液，所述过滤是用50-80目筛过滤，所述离心为10000-15000转/分钟；(3) 将步骤(2)中上清液浓缩，得到浓缩液；优选地，步骤(2)所述过滤为用60目筛过滤，所述离心为14000转/分钟。

8.如权利要求7所述的改善皮肤功能的组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的上清液进一步采用陶瓷膜分离法进行再过滤，得滤过液，和/或；所述步骤(3)中所述的浓缩为减压、薄膜蒸发或采用反渗透(RO)膜分离法浓缩。

9.如权利要求7或8所述改善皮肤功能的组合物的制备方法，其进一步包括如下步骤(4)：将步骤(3)的浓缩液，喷雾干燥，得到固体粉末。

10.权利要求1~4中任一项所述的改善皮肤功能的组合物在制备抗衰老、改善肤色和细腻肌肤的化妆品上的用途。